CN101322750A - 管花肉苁蓉提取物的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及管花肉苁蓉提取物，公开了将管花肉苁蓉提取物或含有管花肉苁蓉提取物的制剂用于促进皮肤弹力微纤维生成、恢复皮肤弹力纤维的伸展和回复功能的新用途。并进一步指出可将管花肉苁蓉提取物作为具有改善皮肤弹力纤维状态的原料或添加剂使用。试验表明，含有管花肉苁蓉提取物的制剂对人体没有任何毒副作用，也没有不良的过敏反应。本发明的揭示，为期望解决皮肤弹力纤维相关问题的人群带来了福音。

Description

管花肉苁蓉提取物的新用途

技术领域

本发明涉及一种植物提取物的应用，特别涉及管花肉苁蓉提取物的新用途。

背景技术

随着人们生活水平提高，社会上各年龄组的女性越来越关注皮肤健康，皮肤细嫩、白壁无瑕是女性永运的追求和向往。肉苁蓉是著名补肾中药，具有益精气、抗衰老的作用，在我国作为药食两用中药已有二千余年的历史。

日本学者近年来发现苯乙醇甙类作为植物的活性成分，离体培养实验证实苯乙醇甙类促进M细胞活动，形成胶元纤维网。(Tanimoto S et all.Yakugaku Zasshi 2006 Mar.126(3)：173-7.Sudo H et all Chem Pharm Bull(Tokyo).1999 Sep.47(9)：1341-3 related)

近年来科学家发现肉苁蓉的提取物含有苯乙醇甙类，产于新疆南部的管花肉苁蓉是肉苁蓉种属中的一种，提取物中苯乙醇甙类含量高于其它种属肉苁蓉。其有望用于皮肤类制剂，起到改善皮肤健康，驻颜美容作用。

中国发明专利(申请号：200610117216.1)记载了一种化妆品组合物，含有有效量的管花肉苁蓉提取物，并指出该化妆品具有抗皱嫩肤作用，然而皱纹是一个综合的表象，至少目前的研究表明皱纹与皮肤细胞水分的流失、锁水功能的下降、弹力纤维的减少、胶原蛋白的流失等等均有密切的关系。同样道理，抗皱嫩肤也是一个综合的表象，补充水份、提高皮肤锁水功能、补充胶原蛋白、减少自由基等途径均可获得抗皱的目的。而在该专利中，并未具体揭示管花肉苁蓉具体改善了皮肤细胞哪方面的机能。

发明内容

本发明的目的是公开管花肉苁蓉(Cistanche Tubulosa(Schrenk)Wight)提取物的新用途。

皮肤细胞中的弹力纤维是由弹力蛋白和弹力微纤维所组成，弹力蛋白位于纤维中心部位，周围为弹力微纤维所包绕，这种组织学上的特点使弹力蛋白分子能够相互滑动，使皮肤伸展、回复，富有弹性，这和弹力微纤维的功能是密切相关的。弹力微纤维的变性、退化和减少是形成皱纹的主要原因之一。而弹力纤维数量的增加，功能的恢复对于皮肤的抗皱，受伤或受损皮肤的恢复均具有重要的意义。

发明人针对管花肉苁蓉提取物的功效进行了深入的研究，在RT-PCR实验中发现，管花肉苁蓉提取物可将WI-38细胞(人类二倍体成纤维细胞)的弹力微纤维的基因表达上调，在1％浓度时，弹力微纤维的平均灰度值为对照组的323.25％。据此认为，管花肉苁蓉提取物具有促进弹力微纤维生成，进而促进皮肤弹力纤维生成及皮肤弹力纤维功能恢复的作用。

就此，一方面，本发明公开了管花肉苁蓉提取物或含有管花肉苁蓉提取物的制剂用于促进皮肤弹力微纤维生成、恢复皮肤弹力纤维的伸展和回复功能的新用途。

本发明所指的管花肉苁蓉提取物，富含苯乙醇甙类物质，优选的是含有质量百分比至少为2％的麦角甾甙(acteoside)和4％的松果菊甙(echinacoside)，以提取物的重量为基准。麦角甾甙和松果菊甙作为提取物中主要的活性成分，其含量自然是越高越好，但由于实际应用时，考虑到商业成本等因素，不可能做无限的精提来提高这两种主要活性成分的含量，所以只要麦角甾甙的重量含量达到2-80％，松果菊甙的含量达到4-80％就可以达到很好的效果。最优选的是麦角甾甙和松果菊甙的重量含量比大于2∶1。

上述的管花肉苁蓉提取物富含苯乙醇甙类物质还可含有其它次要成分：麦角甾甙异构体、2’-乙酰基麦角甾甙和管花肉苁蓉甙A、B、C，每种的含量均低于4％，以提取物的重量为基准。麦角甾甙和松果菊甙的检测方法是根据2005年版中国药典一部90页中的含量测定法-高效液相色谱法测定得出。

苯乙醇甙类化合物的结构通式为：

名称       R1   R2    R3    R4     R5   R6    R7

麦角甾甙   H    RHa   Cf    H      H    OH    OH

松果菊甙   H    RHa   Cf    Glc    H    OH    OH

2’-乙酰基麦角甾甙  Ac    RHa   Cf    H     H     OH    OH

麦角甾甙异构体      H     RHa   H     Cf    H     OH    OH

管花肉苁蓉甙A       H     RHa   Cf    Glc   H     H     OH

管花肉苁蓉甙B       H     RHa   Cm    Glc   H     OH    OH

管花肉苁蓉甙C       H     RHa   Cf    Glc   OH    OH    OH

管花肉苁蓉提取物可由各种常规中药提取物的制备方式获得，如水提或醇提，优选是从管花肉苁蓉的干燥茎部提取得到，包括但不限于下述方法：

a、把管花肉苁蓉的干燥茎部粉碎；

b、以水或乙醇浸泡，50-100℃下回流提取；

c、取步骤b得到的提取物的上清液，减压、浓缩；

d、将步骤c所得离心液置于装有SEPABEADA系列大孔树脂的柱中；

e、用10-60％的乙醇或去离子水吸附和洗脱；

f、收集洗脱液，经减压、真空干燥、粉碎和过筛，得到富含苯乙醇甙类提取物。

上述制备管花肉苁蓉提取物的方法主要是经过粗提和精提两过程：

粗提是通过水或乙醇浸泡、煮沸、过滤、冷却、沉淀，离心后取得离心液为粗制剂。步骤b)的提取次数优选为2～4次，提取的温度优选为70～90℃。

精提是把离心液注入装有大孔树脂的柱中，据于不同梯级浓度的乙醇和去离子水其极性不同，产生吸附、洗脱等作用，所得洗脱液为精制剂。再经减压、真空干燥、粉碎和过筛等过程，得到富含苯乙醇甙类提取物。

第二方面，与前述用途相对应，本发明公开了将管花肉苁蓉提取物用于制备改善皮肤弹力纤维状态的制剂。即可将管花肉苁蓉提取物作为具有改善皮肤弹力纤维状态功能的的原料或添加剂来制备相关制剂。

上述改善皮肤弹力纤维状态的制剂包括：具有促进皮肤弹力微纤维生成、恢复皮肤弹力纤维的伸展和回复功能的制剂。

上述制剂包括固体、半固体或液体制剂；包括但不限于试剂、药物或化妆品，如具有改善皮肤弹力纤维状态功能的化妆品、治疗弹力纤维受损相关疾病(如烧伤、烫伤所导致的皮肤受损)的药物。在作为药物或化妆品时，上述改善皮肤弹力纤维状态的制剂优选外用制剂。

上述含有改善皮肤弹力纤维状态的外用制剂含有有效量的管花肉苁蓉提取物和皮肤病理学上可接受的辅料。也可进一步添加其它皮肤病理学上可接受的功能性添加剂。

上述皮肤病理学上可接受的辅料，其适合应用于皮肤角质蛋白组织，与本发明所述的活性成分(管花肉苁蓉提取物)及其它的添加剂能互相兼容，并且对皮肤来说没有毒性和损伤。外用制剂的辅料安全有效的含量范围是10％～99.99％，优选的含量为20％～99.9％，最优选的为40％～98％，均以外用制剂的重量为计。

这种辅料有多种类型，如乳液。这里所说的乳液包括但不限于水包油、油包水、水/油/水(W/O/W)的复合乳剂和水/油/硅树脂(W/O/S)的复合乳剂等。

首选的辅料是水包油、油包水和硅树脂包水的乳液。由于水的溶解度和物质本身的可分散性，活性成分要么会分散在水里要么分散在油或硅树脂里，这对于一般的技术人员来说是已知的。

如上所述，本发明所说的乳液通常含有油脂。这种油脂可以是从动物、植物或石油里面提取的，也可以是人工合成的。较佳的乳液里面应该还含有保湿剂，如甘油、丙二醇、丁二醇或山梨醇，以乳液的重量为计。乳液里乳化剂的含量为0.01～10％，优选的为0.1％～5％。乳化剂可以是非离子、阴离子或阳离子乳化剂。可用的乳化剂在1973年8月公开的美国专利us3,755,560和McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers，North AmericanEdition，pages 317-324(1986)里有介绍。

乳液里还可添加消泡剂用来减少泡沫。消泡剂包括高分子量的硅树脂和其它已知的用作消除泡沫的物质。

硅树脂包水的乳液含有硅树脂相和分散的水相。用在乳液里的有机聚硅醚可以是挥发性的、不挥发性的或两种的混合物。所述的“不挥发性”的是指在常温条件下，硅树脂为液态，并且在低于一个大气压的时候，硅树脂的闪点高于100℃。所述的“挥发性”硅树脂是指前面所说的之外的其它硅树脂。可用的有机聚硅醚可以在挥发性和粘度特性大范围里面进行选择。例如较佳的有机聚硅醚有聚烷基硅醚、聚环烷基硅醚和聚烷基芳基硅醚。

上述的聚烷基硅醚的粘度范围可以在0.5～1,000,000CST(25℃)，可以用如下的化学结构通式表示：R₃SiO(R₂SiO)_xSiR₃，这里的R是指1～30个碳原子的烷基(优选为甲基和乙基，最优选为乙基)，X是指0～10,000的整数(实际使用时可以根据需要的分子量进行选择)。商业上可用的聚烷基硅醚有聚二甲基硅醚，例如通用电气公司和道康宁公司的系列产品Vicasil.RTM。道康宁公司的RTM.200就非常好。液态RTM.200粘度为0.65CST，沸点为100℃。道康宁RTM.225的粘度为10CST，沸点超过200℃，液态道康宁.RTM.200粘度分别为50，350，and 12,500CST，沸点都超过200℃。可用的聚二甲基硅醚包含在如下化学通式所表示的物质：(CH₃)₃SiO[(CH₃)₂SiO]_x[CH₃RSiO]_ySi(CH₃)₃，其中R是指含有2～30个碳原子的直链或支链的烷基，X和Y分别是1～10,000,000的整数，可根据需要的分子量进行选择。例如下述的聚二甲基硅醚中烷基被取代的例子：十六烷基聚二甲基硅醚和十二烷基聚二甲基硅醚。

适合用在辅料中的聚环烷基硅醚包括如下化学通式结构的化合物：[SiR₂-O]_n，其中R是指烷基(优选为甲基或乙基，最优选为甲基)，N是指3～8的整数，较佳的是3～7的整数，更佳的为4～6的整数。当R代表甲基时，便是聚环甲基硅醚，商业上可得到的聚环甲基硅醚有道康宁公司产品，如液态的.RTM.244，其粘度为2.5CST，沸点为172℃，是聚四环甲基硅醚(n＝4)。液态道康宁的RTM.344的粘度为2.5CST，沸点为178℃，是聚五环甲基硅醚(n＝5)。道康宁的液态RTM.245的粘度为4.2CST，沸点为205℃，是聚四环甲基硅醚和聚五环甲基硅醚(n＝4、5)的混合物。道康宁的液态RTM.345的粘度为4.5CST，沸点为217℃，是聚四环甲基硅醚、聚五环甲基硅醚和聚六环甲基硅醚(n＝4、5、6)的混合物。

类似的物质还有硅质顺滑剂(trimethylsiloxysilicate)，也是一种聚合物，其化学结构通式为：[(CH₂)₃SiO_1/2]_x[SiO₂]_y，其中X是指1～500的任一整数，Y是指1～500的任一整数。商业上可得到的硅质顺滑剂有含聚二甲基硅醚(dimethicone)的混合物和道康宁.RTM.593。

Dimethiconols也可以添加到外用制剂中，Dimethiconols的化学结构通式如下：R₃SiO(R2SiO)_xSiR₂OH和HOR₂SiO[R₂SiO]_xSiR₂OH，其中R是指烷基(优选甲基或乙基，最优选为甲基)，X是指0～500的任一整数，可以根据所需的分离量进行选择。商业上能获得的dimethiconols有含聚二甲基硅醚(dimethicone)的混合物和聚环甲基硅醚(cyclomethicone)(例如道康宁.RTM.1401，1402和1403)

聚烷基芳基硅醚也可以添加到化妆品混合物中，粘度在15～65CST(25℃时)的聚甲基苯基硅醚效果特别好。

这里所指的可用有机聚硅醚可以是下述的任一种或其混合物：聚烷基硅醚、烷基可被取代的聚二甲基硅醚、聚环甲基硅醚、硅质顺滑剂(trimethylsiloxysilicate)、dimethiconols和聚烷基芳基硅醚。优选的是聚二甲基硅醚。

外用制剂里还可添加一种或多种非硅树脂油类。这种非硅树脂油类的熔点应在25℃或25℃以下。例如在化学工艺中已知的油包水乳液：矿物油、植物油、合成油脂或半合成油脂等。

水相分散(硅树脂包水乳液)

本发明所述的外用制剂含有10～90％的分散水相，优选的含量是20％～85％，最优选为30％～80％。分散相也叫做连续或非连续相。前述的分散水相是指水被分散成小液滴悬浮在硅树脂相并被硅树脂包围。

水相可以是水、水溶液、一种或多种可溶于水或可分散性于水的组合成分。这样的成分包括稠化剂、酸、基质(bases)、盐、螯合掩蔽剂、橡胶(gums)、可溶于水或可分散的乙醇和多羟基化合物、buffers、防腐剂、遮光剂、颜料等。

本发明所述的外用制剂一般含有25％～90％的水在分散水相(以混合物的重量计)，优选的含有40％～80％重量的水，最优选的含有60％～80％的水。

分散水相用的乳化剂

本发明所述的硅树脂包水的乳液一般含有乳化剂。通常整个混合物含有重量百分比0.1％～10％乳化剂，优选的含有0.5％～7.5％的乳化剂，最优选的含有1％～5％的乳化剂(以整个混合物的重量计)。乳化剂的作用是将水分散并悬浮在硅树脂内的水相里。

有很多种乳化剂都可以用来形成硅树脂包水的乳液。已知的常用的乳化剂都可以在本发明里使用。所选的乳化剂应与本发明的化妆品混合物的活性成分无论在化学反应上还是身体上都要相兼容，并且具有需要的分散特性。可用的乳化剂有硅树脂乳化剂、无硅乳化剂或两种的混合物。这些都是制备护肤品工艺中常用的乳化剂。较好的乳化剂的HLB(亲水亲油平衡)值最少小于14，优选的为2～14，最优选的为4～14。HLB值不在这个范围的乳化剂可以与其它的乳化剂一起使用，调节其HLB值使之落入这个范围，这样就可达到同样的效果。

首选用硅树脂乳化剂，本发明里所指的各种硅树脂乳化剂都是可用的。这些硅树脂乳化剂是典型的修饰的有机聚硅醚，也就是本领域的技术人员所熟知的硅树脂表面活性剂。有用的硅树脂乳化剂包括二甲基硅醚共聚物。这些修饰的聚二甲基硅醚包括聚醚支链，如：聚环氧乙烷链、聚环氧丙烷链以及它们的混合物、环氧乙烷和环氧丙烷的聚醚。其它的例子还有烷基取代的二甲基硅醚共聚物，例如C2-C30支链。其它有用的二甲基硅醚共聚物包括各种阳离子的、阴离子的、两性的、两性离子的结构。

这里有用的硅树脂表面活性剂不仅仅限于二甲基硅醚共聚物。

作为乳化剂的二甲基硅醚共聚物和硅树脂表面活性剂包括但不限于聚二甲基硅醚聚环氧乙烷共聚物、聚二甲基硅醚聚环氧丙烷共聚物、聚二甲基硅醚聚环氧乙烷聚环氧丙烷共聚物、聚二甲基硅醚聚环氧乙烷环氧丙烷共聚物、聚二甲基硅醚甜菜碱共聚物、聚二甲基硅醚羧酸酯共聚物、聚二甲基硅醚季铵盐共聚物；以及前述的C2-C30直链、支链、环烷基结构的共聚物。商业上可获得的聚二甲基硅醚多羟基醇共聚物道康宁公司有售，商品名为道康宁.RTM.190，193，Q2-5220，2501Wax，2-5324fluid，和3225C(后一种产品是与聚环烷基硅醚的混合物)。十六烷基聚二甲基硅醚多羟基醇共聚物在商业上得到的是与聚异硬脂酸甘油-4酯和月桂酸己酯一起的混合物，其商品名是ABIL.RTM.WE-09(Goldschmidt公司提供)。十六烷基聚二甲基硅醚多羟基醇共聚物在商业上得到的是与月桂酸己酯和聚油酸甘油-3酯一起的混合物，其商品名是ABIL.RTM.WS-08(Goldschmidt公司提供)。其它但不限于下述的聚二甲基硅醚多羟基醇共聚物还包括：十二烷基聚二甲基硅醚多羟基醇共聚物、聚二甲基硅醚乙酸多羟基醇酯共聚物、聚二甲基硅醚己二酸多羟基醇酯共聚物、聚二甲基硅醚胺基多羟基醇共聚物、聚二甲基硅醚山萮酸多羟基醇共聚物、聚二甲基硅醚多羟基丁基醚共聚物、聚二甲基硅醚羟基硬脂酸多羟基醇酯共聚物、聚二甲基硅醚异硬脂酸多羟基醇酯共聚物、聚二甲基硅醚月桂酸多羟基醇酯共聚物、聚二甲基硅醚多羟基甲基醚共聚物、聚二甲基硅醚磷酸多羟基醇酯共聚物、聚二甲基硅醚硬脂酸多羟基醇酯共聚物。参考International Cosmetic Ingredient Dictionary，Fifth Edition，1993。

这里所用的聚二甲基硅醚多羟基醇共聚物乳化剂在如下列举的文献中均有描述：如：in U.S.Pat.No.4,960,764，to Figueroa，Jr.et al.，issued Oct.2，1990；EuropeanPatent No.EP 330,369，to SanoGueira，published Aug.30，1989；G.H.Dahms，et al.，″New Formulation Possibilities Offered by Silicone Copolyols，″Cosmetics&Toiletries，vol.110，pp.91-100，March 1995；M.E.Carlotti et al.，″Optimizationof W/O-S Emulsions And Study Of The Quantitative Relationships Between EsterStructure And Emulsions Properties，″J.Dispersion Science And Technology，13(3)，315-336(1992)；P.Hameyer，″Comparative Technological Investigations of Organicand Organo Silicone Emulsifiers in Cosmetic Water-in-Oil Emulsions Preparations，″HAPPI 28(4)，pp.88-128(1991)；J.Smid-Korbar et al.，″Efficiency and usabilityof Silicone surfactants in Emulsions，″Provisional Communication，InternationalJournal of Cosmetic Science，12，135-139(1990)；and D.G.Krzysik et al.，″A NewSilicone Emulsifier For Water-in-Oil Systems，″Drug and Cosmetic Industry，vol.146(4)pp.28-81(April 1990).

这里所说的非硅树脂乳化剂可以是非离子和阴离子的乳化剂，如聚糖酯、聚烷氧基糖酯、C1-C30脂肪酸C1-C30脂肪醇酯、烷氧基取代的C1-C30脂肪酸C1-C30脂肪醇酯、C1-C30脂肪醇烷氧基醚、C1-C30脂肪酸聚甘油酯、C1-C30脂肪酸多羟基醇酯、C1-C30脂肪醇多羟基醇醚、烷基磷酸酯、聚环烷氧基磷酸酯、脂肪酰胺、酰基乳酸酯、皂，以及上述乳化剂的混合物。其它可用的乳化剂在如下文献中均有介绍：McCutcheon’s，Detergents andEmulsifiers，North American Edition(1986)，published by Allured PublishingCorporation；U.S.Pat.No.5,011,681 to Ciotti et al.，issued Apr.30，1991；U.S.Pat.No.4,421,769 to Dixon et al.，issued Dec.20，1983；and U.S.Pat.No.3,755,560to Dickert et al.，issued Aug.28，1973。

这里所说的非硅树脂乳化剂包括但不限于：聚乙二醇20单月桂酸山梨醇酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂酸-20、Ceteareth-20、聚丙二醇-2(PPG-2)二硬脂酸甲基葡萄糖酯、Ceteth-10、聚山梨醇酯80、磷酸十六烷基酯、磷酸十六烷基磷酸钾、二乙醇胺十六烷基磷酸酯、聚山梨醇酯60、硬脂酸甘油酯、PEG-100硬脂酸酯、聚氧乙烯20三油酸山梨醇酯(聚山梨醇酯85)、单月桂酸山梨醇酯、聚氧乙烯4十二烷醇硬脂酸钠、聚甘油-4异硬脂酸酯、月桂酸己酯、硬脂酸-20、ceteareth-20、聚丙二醇-2(PPG-2)二硬脂酸甲基葡萄糖酯、ceteth-10、二乙醇胺十六烷基磷酸酯、硬脂酸甘油酯、PEG-100硬脂酸以及它们的混合物。

水包油乳液：

所说的辅料还可以是水包油乳液，水包油乳液含有连续的水相和分散的且不溶于水的油相。可用的水包油乳液的具体例子参考文献U.S.Pat.No.5,073,371，to Turner，D.J.et al.，issued Dec.17，1991和U.S.Pat.No.5,073,372，to Turner，D.J.etal.，issued Dec.17，1991。后面将详细介绍含有赋形剂、亲水性表面活性剂和水的水包油乳液。

(1)赋形剂

水包油的乳液里含有的赋形剂能使乳液形成透明的水晶状凝胶网络结构。不要被理论知识所禁锢，赋形剂一般被认为在具有流变学特性的混合物里起到稳定的作用，其实它还具有乳化剂和表面活性剂的功能。本发明所述的乳液中，赋形剂的重量含量是0.5％～20％，优选的含量范围是1％～10％，最优选的含量范围是1％～5％，以乳液的总重量计。

本发明所说的赋形剂首选包括硬脂酸、棕榈酸、十八烷醇、十六烷醇、苯甲醇、硬脂酸和1～21位乙撑氧基的十六烷醇聚乙二醇醚及其混合物。本发明所述的其它赋形剂可以从下述的种类或其混合物中任选：十八烷醇、十六烷醇、乙撑氧十六烷醇-2聚乙二醇醚、乙撑氧十六烷醇-21聚乙二醇醚。所述的赋形剂甚至可以是如下的一种或其混合物：硬脂酸，棕榈酸，十八烷醇，十六(烷)基alcohol，苯甲醇，硬脂酸-2，硬脂酸-21。

(2)亲水表面活性剂

首选的水包油乳液至少含有一种亲水表面活性剂，这种亲水表面活性剂能将不溶于水的物质分散在水相，表面活性剂的亲水性最低要求是能将不溶于水的物质充分分散在水里。表面活性剂的含量占整个乳液重量的0.05％～10％，优选的含量范围是1％～6％，最优选为1％～5％。

首选的亲水表面活性剂是非离子的表面活性剂。这里所说的非离子表面活性剂是指能被概括为长链的醇的缩聚物等，例如C8-30醇、糖或淀粉的共聚物，也就算配糖类。这些化合物可用如下通式表示：(S)n--O-R，其中S是指半糖，例如葡萄糖、果糖、甘露糖和半乳糖；N是1～1000的整数；R是C8-30的烷基。所列举的长链醇的烷基可以选自：葵醇、十六烷基醇、十八烷醇、十二烷醇、肉豆蔻醇、油醇等。这里所说的较佳的表面活性剂是当S为半葡萄糖，R为C8-20烷基，n为1～9的整数所表示的化合物。这些在商业上可以得到的表面活性剂有：葵聚配糖(Henkel公司销售的APG 325 CS)和十二烷醇聚配糖(Henkel公司销售的APG 600CS)。

其它适合的非离子表面活性剂有：环氧烷与脂肪酸的缩聚物(环氧烷脂肪酸酯)。这类物质有共同的通式结构：RCO(X)n OH，其中R是C10-30烷基，X是OCH₂CH₂--(来自于乙烯基乙二醇或乙二酸)或--OCH₂ CHCH₃--(来自于丙二醇或丙二酸)，n是6～200的整数。其它的非离子表面活性剂是环氧烷烃与2mol的脂肪酸的缩聚物(也就是环氧烷脂肪酸酯)。这些物质都有共同的通式：RCO(X)n OOCR，其中R是指C10-30烷基，X是指--OCH₂CH₂--(来自于乙烯基乙二醇或乙二酸)或--OCH₂CHCH₃--(来自于丙二醇或丙二酸)，n是6～100的整数。其它的非离子表面活性剂有：环氧烷与脂肪醇的缩聚物(环氧烷脂肪醇醚)。这类物质有共同的通式结构：R(X)nOR’，其中R是指C10-30烷基，X是指--OCH₂CH₂--来自于乙烯基乙二醇或乙二酸)或--OCH₂ CHCH₃--(来自于丙二醇或丙二酸)，n是6～100的整数，R’是H或C10-30的烷基。还有其它的非离子的表面活性剂，是环氧烷烃与脂肪酸和脂肪醇的缩聚物这里所说的聚环氧烷部分是酯化的脂肪酸和脂肪醇的醚)。这些物质有共同的通式：RCO(X)_nOR’，其中R和R’是指C10-30的烷基，X是--OCH₂ CH₂(来自于乙烯基乙二醇或乙二酸)或--OCH₂ CHCH₃--(来自于丙二醇或丙二酸)，n是指6～100的整数。包括但不限于下述的非离子表面活性剂：ceteth-6、ceteth-10、ceteth-12、ceteareth-6、ceteareth-10、ceteareth-12、硬脂酸-6、硬脂酸-10、硬脂酸-12、硬脂酸-21、PEG-6硬脂酸、PEG-10硬脂酸、PEG-100硬脂酸、PEG-12硬脂酸、PEG-20甘油基硬脂酸、PEG-80甘油酯、PEG-10甘油基硬脂酸、PEG-30甘油基cocoate、PEG-80甘油基cocoate、PEG-200甘油酯、PEG-8二月桂酸酯、PEG-10二硬脂酸，或其混合物。

在非离子表面活性剂中首选的是：硬脂酸-21、ceteareth-20、ceteareth-12、蔗糖cocoate、硬脂酸-100、PEG-100硬脂酸或其混合物。

这里所指的其它合适的非离子表面活性剂包括：糖酯、聚酯、烷氧基化糖酯和烷氧基化聚酯、C1-C30的脂肪醇酯脂肪酸酯、烷氧基化系列C1-C30的脂肪醇酯脂肪酸酯、烷氧基化C1-C30的脂肪醇醚、聚C1-C30的脂肪酸甘油酯、C1-C30的多羟基酯、C1-C30的多羟基醚、烷基磷酸盐、聚乙二醇脂肪族醚磷酸盐、脂肪酸氨基化合物、acyl lactylates和其混合物。包括但不限于这些乳化剂：聚乙二醇20聚山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂酸-20、Ceteareth-20、PPG-2甲基葡萄糖二硬脂酸醚、Ceteth-10、聚山梨醇酯80、十六烷基磷酸盐、十六烷基磷酸钾、二乙醇胺十六烷基磷酸盐、聚山梨酯60、硬脂酸甘油酯、聚山梨酯85、聚山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯4月桂醚硬脂酸钠、聚异硬脂酸甘油酯、PPG-2聚甲基葡萄糖二硬脂酸醚、PEG-100硬脂酸及其混合物。

这里所指的另一种乳化剂是脂肪酸酯即山梨聚糖脂肪酸酯或山梨醇脂肪酸酯和蔗糖脂肪酸酯的混合物，其中的脂肪酸含C8-C24，优选C10-C20。优选的脂肪酸酯乳化剂是山梨聚糖C16-C20脂肪酸酯或山梨醇C16-C20脂肪酸酯与蔗糖C10-C16脂肪酸酯的混合物，尤其是山梨聚糖硬脂酸酯和蔗糖椰子酸酯。这些都可以从ICI(英国化学工业公司)买到，商品名Arlatone 2121。

其它合适的表面活性剂包括为本领域技术人员所熟知的多种阳离子的，阴离子的，两性离子的和两性表面活性剂，例如下面的四篇文献有完整的介绍：McCutcheon’s，Detergents and Emulsifiers，North American Edition(1986)，published by AlluredPublishing Corporation；U.S.Pat.No.5,011,681 to Ciotti et al.，issued Apr.30，1991；U.S.Pat.No.4,421,769 to Dixon et al.，issued Dec.20，1983；and U.S.Pat.No.3,755,560 to Dickert et al.，issued Aug.28，1973。这里所指的亲水表面活性剂可以是单个表面活性剂或者任何合适的表面活性剂的混合物。选择恰当的表面活性剂要根据组分的pH和其它因素决定。

这里所指的阳离子表面活性剂是二烷基季铵盐化合物，例如文献U.S.Pat.Nos.5,151,209；5,151,210；5,120,532；4,387,090；3,155,591；3,929,678；3,959,461；McCutcheon’s，Detergents&Emulsifiers，(North American edition 1979)M.C.Publishing Co.；and Schwartz，et al.，Surface Active Agents，Their Chemistry andTechnology，New York：Interscience Publishers，1949有所介绍。其它阳离子表面活性剂还包括胺-酰胺。这些阳离子表面活性剂包括但不限于硬脂酰胺丙基PG-二甲基氯化铵磷酸酯、山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基乙基二甲基硫酸乙酯铵、硬脂酰胺丙基二甲基(肉豆蔻醇乙酸酯)氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基鲸腊硬脂基对甲苯磺酸铵、硬脂酰胺丙基二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基乳酸铵以及它们的混合物；优选的是山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵。

季铵盐阳离子表面活性剂包括但不限于：十六烷基氯化铵、十六烷基溴化铵、十二烷基氯化铵、十二烷基溴化铵、硬脂基氯化铵、硬脂基溴化铵、十六烷基二甲基氯化铵、十六烷基二甲基溴化铵、十二烷基二甲基氯化铵、十二烷基二甲基溴化铵、硬脂基二甲基氯化铵、硬脂基二甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、十二烷基二甲基氯化铵、硬脂基二甲基十六烷二牛油脂基二甲基氯化铵、二(十六烷基)氯化铵、二(十六烷基)溴化铵、二(十二烷基)氯化铵、二(十二烷基)溴化铵、二硬脂基氯化铵、二硬脂基溴化铵、二(十六烷基)二甲基氯化铵、二(十六烷基)二甲基溴化铵、二(十二烷基)甲基氯化铵、二(十二烷基)甲基溴化铵、二硬脂基甲基氯化铵、二硬脂基甲基溴化铵，及其混合物。另外的季铵盐还包括：来自于牛油酸或椰油酸的C12～30的碳链。这里所说的牛油脂基是来自于牛油酸(通常指氢化的牛油酸)的烷基，这些通常是C16～18的碳链。这里所说的椰油脂基是指来自于椰油酸烷基，这些通常是C12～14的碳链。这些来自于牛油脂基和椰油脂基的季铵盐包括：二牛油脂基二甲基氯化铵、二牛油脂基二甲基硫酸甲酯铵、二(氢化牛油脂基)二甲基氯化铵、二(氢化牛油脂基)二甲基乙酸铵、二牛油脂基二丙基磷酸铵、二牛油脂基二甲基硝酸铵、二椰油脂基二甲基氯化铵、二椰油脂基二甲基溴化铵、牛油脂基氯化铵、椰油脂基氯化铵、硬脂酰胺丙基PG-二甲基氯化铵磷酸酯、硬脂酰胺丙基乙基二甲基硫酸乙酯铵、硬脂酰胺丙基二甲基(肉豆蔻醇乙酸酯)氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基鲸腊硬脂基对甲苯磺酸铵、硬脂酰胺丙基二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基乳酸铵，以及它们的混合物。季铵盐化合物其中的一个例子是：二牛油脂基乙氧基二甲基氯化铵。

首选的阳离子表面活性剂是山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、二(十二烷基)二甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、肉豆蔻基二甲基氯化铵、二棕榈基二甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基PG-二甲基氯化铵磷酸酯、硬脂酰胺丙基乙基二甲基硫酸乙酯铵、硬脂酰胺丙基二甲基(肉豆蔻醇乙酸酯)氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基鲸腊硬脂基对甲苯磺酸铵、硬脂酰胺丙基二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基乳酸铵以及它们的混合物。

还有更多的阳离子表面活性剂可用，如：山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、二(十二烷基)二甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、二肉豆蔻基二甲基氯化铵、二棕榈基二甲基氯化铵、以及它们的混合物。

首选的阳离子表面活性剂和赋形剂是山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵和/或苯甲醇，特别是当这种化合物含有离子和/或高极性溶剂的时候，该添加剂的含量应该进行优化，以合适的比例来维持和提高混合物的物理和化学稳定性。这种化合物尤其可以用来负载遮光剂，例如氧化锌和桂皮酸盐(OMC)。

各种各样的阴离子表面活性剂在这里也是可用的。在下述的参考文献中有总结：U.S.Pat.No.3,929,678，to Laughlin et al.，issued Dec.30，1975。包括但不限于下面所列举的阴离子表面活性剂：alkoyl isethionates、烷基和烷基醚硫酸盐。alkoylisethionates的典型通式是：RCO-OCH₂CH₂SO₃M其中R是烷基或C10～30的烯基；M是可溶于水的阳离子，如铵、钠、钾和三乙醇胺。这些羟乙基硫酸盐包括但不限于下述的alkoylisethionates：椰油脂基羟乙基硫酸铵、椰油脂基羟乙基硫酸钠、月桂酰基羟乙基硫酸钠、硬脂酰基羟乙基硫酸钠及其它们的混合物。

烷基和烷基醚硫酸盐代表性的有如下通式：ROSO₃M和RO(C₂H₄O)_xSO₃M，其中R是C10～30的烷基或烯基；x是1～10的整数；M是溶于水的阳离子，如：铵、钠、钾和三乙醇胺。

这里所述的其它合适的阴离子表面活性剂是皂化脂肪酸(碱金属盐，例如钠盐或钾盐)，代表性的有8～24个碳原子的皂化脂肪酸，优选为10～20个碳原子的皂化脂肪酸。皂里用的脂肪酸可以取自于天然的植物或动物甘油酯油获得(棕榈油、椰子油、大豆油、蓖麻油、牛油、猪油等)。这里所说的脂肪酸也可以是人工合成的。这些皂化物在U.S.Pat.No.4,557,853里有更详细的描述。

这里所说的两性和两性离子表面活性剂也是可用的。本发明所说的化妆品混合物里用的两性和两性离子表面活性剂是脂肪族的二级衍生物和叔胺，这里的脂肪族是指直链或支链的脂肪族，这里被取代的脂肪族(脂肪族衍生物)之一是指含有8～22(优选为8～18)个碳原子和水溶性的阴离子基团，例如：羧基、磺酸盐、硫酸盐、磷酸盐或磷酸酯。具体的化合物如：醋酸铵盐、亚氨基二烷基酯和烷基酯铵盐，它们可以用下述的通式表示：RN[CH₂)mCO₂M]₂和RNH(CH2)_mCO₂M，其中m是1～4的整数，R是C8～22的烷基或烯基，M是H、碱金属、碱土金属铵盐或烷醇铵盐。该化合物还包括咪唑啉和铵的衍生物。较佳的两性表面活性剂的离子包括：3-十二烷基-氨基丙酸钠、3-十二烷基氨基丙烷磺酸钠、N-烷基taurines，这些在文献U.S.Pat.No.2,658,072中有公开，通过葵胺和异硫代硫酸盐反应得到。其它的两性表面活性剂包括磷酸盐，如椰油酰胺PG-dimonium chloride磷酸盐(商业上可获得的是Mona公司提供的Monaquat PTC)。

本发明所说的其它适用的两性表面活性剂包括甜菜碱。这些甜菜碱包括多烷基甜菜碱，如椰油基二甲基羧甲基甜菜碱、十二烷基二甲基羧甲基甜菜碱、十二烷基二甲基α-羧乙基甜菜碱、十六烷基二甲基羧甲基甜菜碱、十六烷基二甲基甜菜碱(Lonza公司提供的(Lonzaine 16SP.)、十二烷基双(2-羟乙基)羧基甲基甜菜碱、硬脂基双(2-羟丙基)羧基甲基甜菜碱、油基二甲基γ-羧丙基甜菜碱、十二烷基双(2-羟丙基)α-羧乙基甜菜碱、椰油基二甲基磺丙基甜菜碱、硬脂基二甲基磺丙基甜菜碱、十二烷基二甲基磺乙基甜菜碱、十二烷基双(2-羟乙基)磺丙基甜菜碱、酰胺甜菜碱、磺酰胺甜菜碱(RCONH(CH₂)₃与甜菜碱的N原子相连)、油基甜菜碱(Henkel公司提供的两性Velvetex OLB-50)和椰油酰胺丙基甜菜碱(Henkel公司提供的Velvetex BK-35和BA-35)。

其它适用的两性和两性离子表面活性剂包括磺内酰胺和羟基磺内酰胺，例如：椰油酰胺丙基羟基磺内酰胺(Rhone-Poulenc提供的Mirataine CBS)、烷氧基肌氨酸盐(分子式为RCON(CH₃)CH₂CO₂M，其中R是10到20个碳原子的链烷基或链烯基，M是水溶性阳离子如铵、钠、钾和三烷氧基胺(如三乙醇胺)，尤其是月桂酰基肌氨酸钠)

(3)水

首选的水包油乳液中水的重量含量是10％到98％，优选20％到95％，更优选30％到90％。

疏水相分散于水相中。疏水相中包含有本领域技术人员熟知的不溶或微溶于水的物质，包括但不限于硅树脂即水包硅树脂乳液和油脂如前面所述的乳液。

本发明所述的外用制剂还可以含有其它典型成分，如皮肤病理学可接受的润肤剂，包括但不限于露和霜。润肤剂的含量首选1％到50％，这里所指的润肤剂是防止或缓解皮肤干燥的物质。有多种润肤剂可以使用，如文献Sagarin，Cosmetics，Science and Technology2nd Edition，Vol.1，pp.32-43(1972)介绍了多种可用的润肤剂。首选的润肤剂是甘油，用量从0.001到30％，优选0.01到20％，更优选0.1到10％，例如5％

本发明所指的露和霜通常包括一个溶液载体系统和一个或多个润肤剂。露和霜通常包含1％到50％优选1％到20％的润肤剂，50％到90％优选60％到80％的水，VB3和前面所述的皮肤护理活性物质。霜通常比露粘稠。

本发明所说的油膏包含动物或植物油脂或半固体烃，可吸收的油膏可吸收来自于乳液或水溶性载体(例如水溶液载体)的水。油膏可能还含有如文献Sagarin，Cosmetics，Science and Technology，2nd Edition，Vol.1，pp.72-73(1972)所述的增稠剂，或润肤剂。例如一种油膏包含2％到10％的润肤剂，0.1％到2％的增稠剂，VB3和前面所述的皮肤护理活性物质。

本发明所述的基础性辅料成分还包括选自滑石粉或云母的粉末、着色剂、植物提取物或添加的溶剂。这里所说的“基础性”是指液体、半液体、半固体或固体，包括但不限于露、霜、凝胶、糊、饼以及类似的剂型。它们通常用于大面积的皮肤如脸上以显示特殊的效果，典型的应用是作为彩妆的粉底，如口红、腮红、化妆粉等，用来掩盖皮肤的缺陷、展现皮肤的光滑。本发明所述的基础性成分包括皮肤病理学可接受的载体和常用的成分如油、着色剂、色素、润肤剂、香料、腊、稳定剂等，在下列文献中有所描述：PCT Application，WO 96/33689，to Canter，et al.，published on Oct.31，1996 and U.K.Patent，GB2274585，issued on Aug.3，1994。

本发明所说的外用制剂还可添加有皮肤护理活性物质，可以包含一个或多个皮肤护理活性物质。

首选的与人角质组织接触的组分应该适合用于角质组织，也就是它们与角质组织接触不会产生毒性、不适、不稳定性、过敏反应以及其它医学上讲的不良反应。The CTFA CosmeticIngredient Handbook，Second Edition(1992)描述了多种经常用于皮肤护理业的化妆品和药品的组分，它们也适用于本发明。这些组分分为研磨剂、吸收剂、美观成分如香料、色素、着色剂、精油、皮肤敏感剂、收敛剂等(如丁香精油、薄荷醇、樟脑、桉油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅萃取液)、抗痤疮剂、抗结块剂、抗沫剂、抗菌剂(碘丙基丁基氨基甲酸酯)、抗氧化剂、粘接剂、生物添加剂、缓冲剂、填充剂、螯合剂、化学添加剂、着色剂、收敛剂、杀虫剂、变性剂、药用收敛剂、外用镇痛剂、成膜剂(如聚合物，用来形成薄膜和直接染色，例如二十碳烯和乙烯吡咯烷酮的共聚物)、乳浊剂、pH调节剂、推进剂、减重剂、螯合剂、皮肤漂白和发光剂(如对苯二酚、曲酸、Vc、Vc磷酸镁、Vc葡糖胺、Vc甘糖)、皮肤调节剂(如单独的和混杂的保湿剂)、皮肤舒缓剂或修复剂(如泛醇即VB5和泛醇衍生物如乙基泛醇、芦荟浓缩物、泛酸和泛酸衍生物、尿囊素、甜没药醇、甘草酸二钾)、皮肤处理剂、增稠剂、维生素等等。

嫩肤活性物：

本发明所述的安全有效的嫩肤活性物的重量含量首选0.1％～10％，优选0.2％～5％，更优选0.5％～4％。本发明所用的嫩肤活性物有益皮肤的外观，如能改善皮肤的纹理(如使皮肤光滑)。这里所指的嫩肤活性物包含含巯基的化合物和两性离子表面活性剂，如文献U.S.Pat.No.5,681,852，to Bissett所描述的。另一种嫩肤活性物包含水杨酸和两性离子表面活性剂，如文献U.S.Pat.No.5,652,228 to Bissett所描述。这里所指的用着嫩肤活性物的两性离子表面活性剂首选十六烷基甜菜碱。

抗痤疮剂：

本发明中还含有安全有效剂量的一种或多种抗痤疮剂。可用的抗痤疮剂有间苯二酚、硫磺、水杨酸、过氧化苯甲酰、红霉素、锌等，文献U.S.Pat.No.5,607,980，issued toMcAtee et al，on Mar.4，1997.有详细的描述。

除皱剂/抗萎缩剂：

本发明还含有安全有效剂量的一种或多种除皱剂或抗萎缩剂。可用的除皱剂或抗萎缩剂包括硫代D-或L-氨基酸及其衍生物和盐(如N-乙酰衍生物，更进一步的例子是N-乙酰-L-半胱氨酸)、硫醇如乙硫醇、羟基酸(如α-羟基酸(乳酸、羟基乙酸)或β羟基酸(水杨酸和水杨酸衍生物如辛酰基水杨酸)、植酸、硫辛酸、溶血磷脂酸、皮肤脱落剂(如苯酚等)、VB₃类和维生素A酸类(能改善皮肤角质组织的外观，特别是能调节角质组织的环境)。

a)VB₃类：

本发明所说的制剂中可以含有安全有效剂量的VB₃类化合物。VB₃类化合物可以用于调节皮肤环境，如同时待审的U.S.application Ser.No.08/834,010，filed Apr.11，1997(相应的international publication WO 97/39733A1，published Oct.30，1997)里有所描述。本发明所述的组分中VB₃类化合物的重量含量首选从0.01％到50％，优选0.1％到10％，更优选到0.5％到10％，更优选1％到5％，更优选2％到5％。

前面所述的VB₃类化合物包括烟酸酯(包括非血管舒张型的烟酸酯，如VE烟酸酯)、烟酰氨基酸、羧酸烟醇酯、烟酸N-氧化物和烟酰胺N-氧化物。

可用的VB3类化合物是本领域技术人员所熟知的，也可以从商业上购买到，如the SigmaChemical Company(St.Louis，Mo.)；ICN Biomedicals，Inc.(Irvin，Calif.)andAldrich Chemical Company(Milwaukee，Wis.).公司。

维生素类化合物可以是纯的化合物，也可以是用物理或化学方法从天然产物(如植物)中提取得到的。

b)类维生素A化合物

本发明所述的制剂中还可以含有类维生素A类化合物，这里所指的类维生素A类化合物包括所有天然或者合成的维生素A或类似维生素A的化合物，它们是维生素A的同分异构体或立体异构体，拥有对皮肤相似的的生理活性。类维生素A化合物首选维生素A、维生素A酯(如维生素A的C2-C22烷基酯、棕榈酸维生素A、乙酸维生素A、丙酸维生素A)、视黄醛或视黄酸(包括全反式视黄酸或1，3-顺式视黄酸)，优选视黄酸。这些化合物是本领域技术人员所熟知的，也可以从商业上购买到，如Sigma Chemical Company(St.Louis，Mo.)，and Boerhinger Mannheim(Indianapolis，Ind.)。这里所指的其它的类维生素A化合物在文献U.S.Pat.No.4,677,120，issued Jun.30，1987 to Parish et al.；U.S.Pat.No.4,885,311，issued Dec.5，1989 to Parish et al.；U.S.Pat.No.5,049,584，issuedSep.17，1991 to Purcell et al.；U.S.Pat.No.5,124,356，issued Jun.23，1992 toPurcell et al.；and U.S.Pat.No.Reissue 34，075，issued Sep.22，1992 to Purcell有所描述。其它的类维生素A化合物还包括视黄酸VE酯(顺-或反-视黄酸VE酯)、阿达帕林(即6-[3-(1-金刚烷剂)-4-甲氧苯基]-2-萘甲酸)、他扎罗汀(即6-[2-(4，4-二甲基二氢苯并噻喃-6-基)-乙炔基]烟酸乙酯)。优选的类维生素A化合物是维生素A、棕榈酸维生素A、乙酸维生素A、丙酸维生素A、视黄醛和它们的混合物。

维生素类化合物可以是纯的化合物，也可以是用物理或化学方法从天然产物(如植物)中提取得到的，首选纯的化合物。

本发明所述的外用制剂还以含有安全有效剂量的类维生素A化合物，它们可以安全有效地调节角质组织的环境，尤其可以调节皮肤的外观和触摸感，更可以调节皮肤的老化。它们的含量从0.005％到约2％，优选0.01％到2％。维生素A的含量首选0.01％到0.15％，维生素A酯的含量首选0.01％到2％(如1％)，视黄酸的含量首选0.01％到0.25％，棕榈酸维生素A、阿达帕林、他扎罗汀的含量约从0.01％到2％。

当本发明中的组分同时含有类维生素A和VB₃化合物时，类维生素A化合物的含量如前面所述，VB₃化合物的含量首选0.1％到10％，优选2％到5％。

(c)羟基酸

本发明所述的制剂还可以含有安全有效剂量的羟基酸，首选水杨酸和水杨酸衍生物。水杨酸的含量首选从0.01％到50％，优选0.1％到20％，更优选0.1％到10％，更优选0.5％到5％，更优选0.5％到2％。

肽

肽，包括但不限于二肽，三肽，四肽，五肽和他们的衍生物，本发明所述的制剂可以含有安全有效量的肽，这里的肽是指天然的肽或合成肽，也可以使用含有肽的天然物质或商业途径可获得的合成物质。

可以使用的二肽包括肌肽(beta-ala-his)，可以使用的三肽，包括gly-his-lys，arg-lys-arg，his-gly-gly。优选的是三肽及其衍生物包括palmitoyl-gly-his-lys，可以购买生物缩甘酸CL.RTM(可以从法国Sederma公司购买100ppm的palmitoyl-gly-his-lys)使用。Peptide CK(arg-lys-arg)；Peptide CK+(ac-arg-lys-arg-NH.sub.2)和其his-gly-gly铜盐，Peptide CK(arg-lys-arg)；Peptide CK+(ac-arg-lys-arg-NH.sub.2)和其his-gly-gly铜盐。即Sigma(圣路易斯和密苏里)销售的lamin。可以使用的四肽包括Peptide E，arg-ser-arg-lys(SEQ ID NO：1)。可以使用的五肽包括lys-thr-thr-lys-ser。优选的商业途径可得的五肽衍生物是Matrixyl.RTM，其中含有100ppm palmitoyl-lys-thr-thr-lys-ser(SEQ ID NO：2，可以通过商业途径从法国Sederma公司获得。).

优选地是，肽选自palmitoyl-lys-thr-thr-lys-ser，palmitoyl-gly-his-lys，beta-ala-his和他们的衍生物，及他们的组合，更优选地是，肽选自palmitoyl-lys-thr-thr-lys-ser，palmitoyl-gly-his-lys，和其衍生物及他们的组合，再优选地是，肽选自palmitoyl-lys-thr-thr-lys-se和其衍生物。

本外用制剂中加入肽时，肽的优选含量为混合物重量的0.0000001％-0.1％，更优选的重量含量是0.000100％-0.1％，再进一步优选地含量是0.00001％-0.01％，若肽是肌肽.RTM，本发明所述的外用制剂中的肌肽.RTM.的重量含量为0.1％-5％，在其他含有Matrixyl.RTM.，和/或Biopeptide CL.RTM的肽混合物的实施例中，Matrixyl.RTM.和/或Biopeptide CL.RTM的在本发明所述的外用制剂中的重量含量为0.1％to about 10％。

抗氧化剂/自由基清除剂

本发明所述的制剂还可以包括安全有效量的抗氧化剂/自由基清除剂，抗氧化剂/自由基清除剂特别用于防止可引起皮肤角质层组织收缩或纹理改变的紫外线辐射，并防止环境中可以引起皮肤损害的其他物质。

安全有效量的抗氧化剂/自由基清除剂可以加入到本发明所述的制剂中，优选重量含量为大约0.1％-大约10％，更优选的含量是大约1％-大约5％。

抗氧化剂/自由基清除剂如抗坏血酸(维生素C)及其盐，脂肪酸中的抗坏血酸酯，抗坏血酸衍生物(如抗坏血酸磷酸酯镁盐，抗坏血酸磷酸酯钠，抗坏血酸山梨酸酯)，生育酚(维生素E)，tocopherol sorbate，生育酚醋酸酯，其他生育酚酯，丁羟基安息香酯及其他盐，6-羟基-2，5，7，8-四甲基克罗曼铬镍合金基-2-羧基酸(6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)(商业途径可得，商标名为Trolox.sup.R)，五倍子酸及其烷基酯，特别是丙基五倍子酸酯，尿酸及其盐和烷基酯，山梨酸及其盐，硫辛酸，胺(如硫辛酸，胺(N，N-二乙羟基胺，胺基胍)，硫氢基化合物(如谷胱甘肽)，含有两个羟基的反丁烯二酸及其盐，lycine pidolate，arginine pilolate，去甲二氢愈创木酸，生物类黄酮，姜黄色素，赖氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，超氧化岐化酶，水飞蓟素，茶提取物，葡萄皮/种子提取物，黑色素和迷迭香提取物可以使用。优选地是，抗氧化剂/自由基清除剂选自维生素E山梨酸钾和其他生育酚酯，更优选地是维生素E山梨酸钾，例如，维生素E山梨酸钾的典型化合物和可应用于本发明所述的制剂的技术，在1989年7月11日授予Donald L.Bissett，Rodney D.Bush and Ranjit的美国4,847,071专利中有所描述。

螯合剂

本发明的制剂中还可以含有安全有效量的螯合剂，这里所述的螯合剂是指可以通过形成一种联合体以除去体系中的金属离子来防止金属离子参与或催化化学反应的活性剂。对于保护皮肤防止紫外辐射以避免紫外辐射引起皮肤组织过分紧缩或改变，防止其他环境中的其他物质引起皮肤损害来说，加入螯合剂特别有效。

本发明的外用制剂中加入安全有效量的螯合剂，在本发明的外用制剂中的优选重量含量为大约0.1％-大约10％，更优选的是1％-5％，可使用的螯合剂的实例在1996年1月30日授予Bissett等的5487884号美国专利中披露，本发明的外用制剂优选的螯合剂是国际公布第91/16035，Bush等.，Oct.31，1995公布，国际公布第91/16034Bush et al.，Oct.31，1995公布的糠偶酰二肟，furilmonoxime，及他们衍生物。

类黄酮

本发明的外用制剂可以任意含有类黄酮类化合物，类黄酮在美国5,686,082号和5,686,367号专利及其一并提及的参考中广泛披露，本发明的外用制剂可用的黄烷酮类物质为选自非取代黄烷酮、单取代基的黄烷酮及他们的混合物，查耳酮类物质选自非取代查耳酮、单取代基查耳酮，双取代基查耳酮，三取代查耳酮及他们的混合物，黄酮选自非取代黄酮、单取代基黄酮，双取代基黄酮及他们的混合物，一种或多种异黄酮，香豆素类物质选自非取代香豆素、单取代基香豆素、双取代基香豆素及他们的混合物，色酮类选自非取代色酮、单取代基色酮，双取代基色酮及他们的混合物，一种或多种紫苜蓿酚，一种或多种克罗曼铬镍基合金，一种或多种克罗曼铬镍基合金异构体(如，顺/反异构体)，及他们的混合物，这里所述的取代的含义是指类黄酮类物质上的一个或多个氢原子分别被羟基、C₁-C₈烷基、C₁-C₄烷氧基、0-配糖及其相似物或者这些取代基的混合物取代。

可使用的类黄酮物质包括但不限于非取代黄烷酮，一羟基黄烷酮(如2’-羟基黄烷酮，6-羟基黄烷酮，7-羟基黄烷酮等)，单烷氧基黄烷酮(如5-甲氧基黄烷酮，6-甲氧基黄烷酮，7-甲氧基黄烷酮，4’-甲氧基黄烷酮等)；非取代查耳酮(特别是非取代反-查耳酮，单羟基查耳酮(如2’-羟基查耳酮，4’-羟基查耳酮等)，双羟基查耳酮(如2’，4-二羟基查耳酮，2’，4’-二羟基查耳酮，2，2’-二羟基查耳酮，2’，3-二羟基查耳酮，2’，5’-二羟基查耳酮等)，三羟基查耳酮(如2’，3’，4’-三羟基查耳酮，4，2’，4’-三羟基查耳酮，2，2’，4’-三羟基查耳酮等)；非取代黄酮；7，2’-二羟基黄酮；3’，4’-二羟基萘黄酮；4’-羟基黄酮；5，6-苯基黄酮，和7，8-苯基黄酮，非取代异黄酮，二取代基玉米蛋白(7，4’-二羟基异黄酮)，5，7-二羟基-4’-甲氧基异黄酮，大豆异黄酮(从大豆中提取的混合物)，非取代香豆素，4-羟基香豆素，7-羟基香豆素，6-羟基-4-甲基香豆素，非取代色酮，3-甲酸基色酮，3-甲酸基-6-异丙基色酮，非取代双羟香豆素，非取代克罗曼铬镍基合金，非取代克罗曼铬镍基合金及其他们的混合物。

优选使用非取代黄烷酮，甲氧基黄烷酮，非取代查耳酮，2’，4-二羟基查耳酮及他们的混合物，更优选地是，使用非取代黄烷酮，非取代查耳酮(特别是反式异构体)和他们的混合物。

以上物质可以是合成物或从天然原料(如植物)中提取的物质，天然原料物质更进一步衍生(如从天然原料中提取物衍生的醚或酯)。此处使用的类黄酮类物质可以从大量的商业途径获得，如Indofine化学公司(密尔沃基，威斯康星)，Steraloids公司(威尔顿，新罕布什尔州)和Aldrich化学公司(密尔沃基，威斯康星州)。也可以使用上述类黄酮化合物的混合物。

此处所述的类黄酮化合物，在本发明中的优选浓度是大约0.01％-大约20％，更优选地是大约0.1％-大约10％，更进一步优选的是从0.5％-5％。

抗炎剂

本发明外用制剂中还可以加入安全有效量的抗炎剂，在本发明的外用制剂中的优选含量是大约0.1％-大约10％，更优选地是0.5％-5％，抗炎剂有助于本发明物质增加皮肤外观，如本类物质可使皮肤的音色更均一，由于抗炎剂物质多种多样，添加抗炎剂数量取决于的量取决于具体使用的是何种抗炎剂。

类固醇类抗炎剂包括但不限于皮质类固醇如氢化可的松，羟基去炎松，α-甲基地塞米松，地塞米松磷酸酯，氯地米松二丙酸酯，氯倍他索戊酸酯，地耐德，desoxymethasone，去氧皮质酮醋酸酯，地塞米松，二氯松，双氟拉松，双乙酸盐，二氟可龙戊酸盐，fluadrenolone，氟氯萘德，氟氢可的松，特戊酸氟美松，肤轻松丙酮化合物，醋酸肤轻松，flucortine butylesters，氟可龙，氟泼尼龙，氟氢缩松，氯氟松，氢化可的松醋酸酯，氢化可的松丁酸酯，甲基强的松龙，去炎松丙酮酯，可的松，可托多松，flucetonide，氟氢可的松，difluorosone diacetate，fluradrenolone，氟氢可的松，diflurosonediacetate，fluradrenolone acetonide，甲羟松，amcinafel，安息菲特，倍他米松及其平衡酯，氯泼尼松，氯泼尼松醋酸酯，clocortelone，clescinolone，二氯松，diflurprednate，氟氯奈德，氟尼缩松，氟米龙，氟培龙，氟泼尼龙，氢化可的松戊酸酯，氢化可的松环戊丙酸雌二酯，氢可松胺酯，甲基强的松，帕拉米松，脱氢皮质醇，强的松，氯地米松二丙酸酯，去炎松以及他们的混合物也可以使用。优选使用的抗炎剂是氢化可的松。

本发明的外用制剂中使用的第二类抗炎剂包括非类固醇类抗炎剂，此类化合物种类为本领域熟练技术人员所熟知，非类固醇抗炎剂的化学结构，合成方法，副作用等可以从标准教科书中得到详细资料，包括抗炎和抗风湿病药物，K.D.Rainsford，Vol.I-III，CRCPress，Boca Raton，(1985)和《抗炎剂化学及药理学》，1，R.A.Scherrer等，学术出版社，纽约(1974)。

本发明的外用制剂中使用的特药非类固醇抗炎剂包括但不限于，1)昔康类，如吡罗昔康，伊索昔康，替诺昔康，舒多昔康和CP-14，304；2)水杨酸盐，如阿司匹林，双水杨酸，扑炎痛，三柳酸镁胆碱，痛热宁，阿司匹林，二氟尼柳，芬多沙；3)醋酸衍生物，如双氯酚酸，酚氯酸，消炎痛，舒林酸，脱美汀，伊索克酸，乙基二氢苯并呋喃乙酸，二氢氧二苯并硫杂，叠氮吲酸，阿西美辛，酚替酸，氯苯酰二甲基吡咯乙酸，环氯唑仑，奥昔平酸，，联苯乙酸和酮咯酸，4)灭酸盐类，如甲灭酸，甲氯芬那酸，氯芬那酸，尼氟灭酸，和托芬那酸，5)丙酸衍生物，如异丁苯丙酸，甲氧萘丙酸，苯洛芬，氟比洛芬，苯酮苯丙酸，苯氧苯丙酸，苯酮酸，吲哚洛芬，吡洛芬，卡洛芬，丙嗪，普拉洛芬，咪洛芬，硫恶洛芬，舒洛芬，阿名洛芬和异塞酮布洛芬，及6)吡唑，如苯基丁氮酮，羟基保泰松，非泼拉酮，阿扎丙宗和三甲保泰松。

这些非类固醇类抗炎剂的混合物或者皮肤病学上可接受的他们盐和酯也可以使用，例如，依托非那酯，这是一种氟芬那酸衍生物，特别适合局部应用。非类固醇类抗炎剂中，优选地是异丁苯丙酸，甲氧萘丙酸，氟芬那酸，依托非那酯，阿司匹林，甲灭酸，甲氯芬那酸，吡罗昔康和联苯乙酸。更优选地是异丁苯丙酸，甲氧萘丙酸，苯酮苯宾丙酸，依托非那酯，阿司匹林，氟芬那酸。

最后，本发明外用制剂中也可以使用所述的天然抗炎剂，这些抗炎剂可以使用合适的物理或化学分离方法从天然原料(如植物，真菌类，微生物副产品)中提取，或通过合成方法制备。例如，蜡大戟蜡，红没药醇(如α红没药醇)，真芦荟，植物甾酮(如植物甾醇类)，Manjistha(从可用于制成红色颜料的植物属尤其是茜草中提取的物质，)，和熏香(从没药属植物尤其是穆库尔没药中提取的物质)，可乐树提取物，甘菊提取物，红色三叶草提取物，柳珊瑚提取物。

可以使用的附属抗炎剂包括欧亚甘草属(植物种类光果甘草)，包括甘草酸，甘草酸及其衍生物(如盐或酯)，所述的盐包括金属盐和铵盐，可用的酯包括C₂-C.₂₄饱和或不饱和的酸酯，优选C₁₀-C.₂₄，更优选C₁₆-C₂₄，前述的特别例子包括甘草浸液油提取物，甘草和甘草酸，甘草酸钾，甘草酸二钾，，1-β-甘草酸，十八烷基甘草酸酯，和3-十八烷基-甘草酸和disodium 3-succinyloxy-beta-glycyrrhetinate，优选的是十八烷基甘草酸酯。

抗脂肪剂

本发明的外用制剂可以包含安全有效量的抗脂肪剂，可用的包括但不限于黄嘌呤化合物(如咖啡因，茶碱，可可碱，氨茶碱)

局部麻醉剂

本发明外用制剂混合物还可以包含安全有效量的局部麻醉剂，局部麻醉剂药包括苯坐卡因，利多卡因，丁派卡因，盐酸氯普鲁卡因，二丁卡因，依替卡因，马比佛卡因，丁卡因，达克罗宁，海克卡因，普鲁卡因，可卡因，克他命，丙吗卡因，苯酚，和他们的药学上可接收的盐。

使皮肤变成褐色的活性物质

本发明外用制剂混合物还可以包含使皮肤变成褐色的活性物质，以人造使皮肤变成褐色的活性物质二羟基丙酮表示，合成物中中的二羟基丙酮重量含量优选地是大约0.1％-大约20％，更优选地含量是2％-7％，更进一步优选地含量是3％-6％。

二羟基丙酮被称为的DHA，或1，3-二羟基-2-丙酮，是一种白色水晶粉，这个物质可以使用化学式C₃H₆O₃化学结构式表示。此化合物可以以单晶体和二聚物混合物的形式存在，二聚物在固体水晶体中占主要地位。加热或熔化时，二聚物形式会转变为单晶体，这种从二聚物向单晶体的转变也存在于水溶液中。二羟基丙酮在酸性溶液中更稳定。参看TheMerck Index，第十版，entry 3167，p.463(1983)，and《二羟基丙酮用于化妆品》E.Merck Technical Bulletin，03-304 110，319897，180 588。

皮肤增亮剂

本发明外用制剂混合物还可以含有皮肤增亮剂，使用时，皮肤增亮剂在本发明的外用制剂中的优选重量含量为大约0.1％-10％，更优选地重量含量是大约0.2％-5％，进一步优选含量是大约0.5％-2％。可以使用的增亮剂是本领域中常用的增亮剂，包括，清酒曲酸，熊果苷，维生素C及其衍生物(如抗坏血酸磷酸酯镁盐，抗坏血酸磷酸酯钠盐或抗坏血酸葡萄糖苷)和提取物(如桑树提取物，胎盘提取物)，此处使用的皮肤增亮剂还包括PCT公布第95/34280，以Hillebrand命名的相对应的U.S.95/07432，申请日为1995.612的PCT专利申请，以及相关的未决的以Kvalnes，Mitchell A.DeLongBarton J.Bradbury，Curtis B.Motley，and John D.Carter，corresponding名义申请的08/390,152号专利，与1995年9月8号公布的95/23780PCT公布相对应。

皮肤润滑及皮肤修复活性物质

本发明外用制剂混合物还可以包含有皮肤润滑及皮肤修复活性物，可以使用的皮肤润滑及皮肤修复活性物质包括泛酰酸衍生物(包括泛酰醇，泛醇，乙烷基泛酰醇)，真芦荟，尿囊素，红没药醇和甘草酸二钾。本发明化合物中可以加入安全有效量的皮肤润滑及皮肤修复活性物，在化合物中的重量含量优选地是大约0.1％-30％，更优选地是大约0.5％-20％，更进一步优选地是0.5％-10％。

抗菌剂和抗真菌活性物

本发明中的外用制剂混合物还可以含有抗菌和抗真菌活性物，这类物质可以破坏微生物、抑制微生物的生长，阻止微生物的病原体活动。加入的抗菌和抗真菌活性物安全有效量优选重量含量是0.001％-大约10％，更优选地是大约0.01％-5％，更进一步优选含量是大约0.05％-2％。

抗菌和抗真菌活性物质包括B-内酰胺药物，对苯二酚药物，环丙沙星，诺氟沙星，四环素，抗生素，氨基羟丁基卡那霉素A，2，4，4’-三氯-2’-羟基-联苯酯，3，4，4’-trichlorobanilide，苯氧基乙醇，苯氧基丙醇，苯氧异丙醇，强力霉素，卷曲霉素，双氯苯双胍己烷，氯四环素，土霉素，氯林可霉素，乙胺丁醇，二溴己脒羟乙磺酸盐，灭滴灵，戊双脒，庆大霉素，卡那徽素，林可霉素，甲烯土霉素，六亚甲基四胺，二甲胺四环素，新霉素，二甲胺四环素，巴龙霉素，链霉素，托普霉素，咪康唑，四环素氢氯化物，红霉素，红霉素锌，依托红霉素，硬脂酸红霉素，氨基羟丁基卡那霉素A硫酸盐，强力霉素氢氯化物，卷曲霉素硫酸盐，双氯苯双胍己烷葡糖酸盐，双氯苯双胍己烷氢氯化物，氯四环素氢氯化物，土霉素氢氯化物，氯林可霉素氢氯化物，乙胺丁醇氢氯化物，灭滴灵氢氯化物，戊吗酮，庆大霉素硫酸盐，卡那徽素硫酸盐，盐酸林肯霉素，甲烯土霉素氢氯化物，六亚甲基四胺马尿酸盐，六亚甲基四胺扁桃酸盐，二甲胺四环素氢氯化物，新霉素硫酸盐，乙基西梭霉素硫酸盐，巴龙霉素硫酸盐，链霉素硫酸盐，托普霉素硫酸盐，盐酸咪康唑，酮康唑，amanfadine hydrochloride，amanfadine sulfate，吡啶酮乙醇胺盐，对氯间甲苯酚，制霉菌素，托萘酯，羟基吡啶硫酮锌，克霉唑。

优选使用的活性物质选自水杨酸，苯甲酰过氯化物，3-羟基安息香酸，乙二酸，乳酸，4-羟基安息香酸，乙酰基水杨酸，2-丁酸，2-戊酸，2-羟基己油酸，顺式维生素A酸，反式维生素A酸，维生素A，植酸，N-乙酰基-L-半胱氨酸，硫辛酸，壬二酸，花生四烯酸，苯甲酰过氯化物，四环素，异丁苯丙酸，甲氧萘丙酸，氢化可的松，对乙酰氨基酚，雷琐酚，苯氧乙醇，肌醇六磷酸，苯氧异丙醇，2，4，4’-三氯-2’-羟基联苯酯，3，4，4’-三氯异氰酸苯酯，吡啶酮乙醇胺盐，利多卡因氢氯化物，克霉唑，咪康唑，酮康唑，新霉素，中的一种或多种。

遮光活性物质

暴露在紫外光线下会引起角质层组织收缩和肌理改变，因此，本发明的外用制剂可以任意含有遮光活性物质，这里所述的“遮光活性物质”包括遮光剂和物理防晒霜，可以使用的遮光活性物可以是有机的，也可以是无机的。

这里使用的无机遮光活性物质包括以下金属氧化物：二氧化钛，平均粒径为大约15纳米-100纳米；氧化锌，平均粒径为15纳米-150纳米，氧化锆，平均粒径大约15纳米-150纳米，氧化铁，平均粒径大约15纳米-500纳米，及以上物质的混合物。使用时，无机遮光剂的在化合物中的重量含量优选地是大约0.1％-大约20％，优选地是大约0.5％-大约10％，更优选地是1％-5％。

多种常用的有机遮光剂都可以在本发明中使用，《化妆品科技》(1972)第189页第八章伞菌碱及其他，披露了大量可用的活性物。特效的可用的活性物包括，例如，p-氨基苯甲酸及其盐和衍生物(乙烷基，异丁基，甘油酯；3-二甲氨基苯甲酸)，氨基苯甲酸盐(如O-氨基-安息香酸盐，甲基，薄荷基，苯基，苯甲基，苯乙基，里哪基，松油基和环己烯基酯)，水杨酸盐(戊基，苯基，辛基，苯甲基，薄荷基，甘油基，二丙二醇酯)，苯乙烯酸衍生物(薄荷基和苯甲基酯，a-苯基肉桂腈，丁基肉桂酰丙酮酸酯)，二羟基苯乙烯酸衍生物(伞形酮，甲基伞形酮，甲基乙酰-伞形酮)三羟基苯乙烯酸衍生物(七叶苷原，甲基七叶苷原，瑞香，配糖物，七叶灵和瑞香苷)；碳氢化合物(联苯基丁二烯，1，2-二苯乙烯，二亚苄基丙酮和亚苄基乙酰苯，萘酚磺酸盐(2-萘酚-3，6-磺酸和2-萘酚-6，8-磺酸的钠盐)，双羟基萘酚酸及其盐，o-和p-羟基联苯双磺酸盐，香豆素衍生物(7-羟基，7-甲基，7-苯基)，二唑衍生物((2-乙酰基-3-溴吲哚，苯基苯并唑，methylnaphthoxazole，各种芳基间氮(杂)硫茚)，奎宁盐(硫酸氢盐，硫酸盐，氯化物，油酸盐和丹宁酸盐)，喹啉衍生物(8-偏苯三酚盐，2-苯基喹啉)，羟基或甲氧基取代苯甲酮，尿酸和色氨酸，丹宁酸及其衍生醚(六乙烷基酯)，(butyl carbotol)，(6-丙基，胡椒基)，对苯二酚，苯甲酮(苯酚，磺异苯酮，二羟苯酮，苯醯间苯二酚，，2，2’，4，4’-四羟基苯甲酮，2，2’-二羟基-4，4’-二甲氧基苯甲酮，辛苯酮，4-异丙基联苯甲烷，丁基甲氧基联苯甲烷，依托立林，奥克立宁；[3-(4’-异丙基联苯甲烷，丁基甲氧基联苯甲烷，依托立林，奥克立宁，[3-(4’-methylbenzylidene bornan-2-one)，对苯二亚甲基二樟脑磺酸和4-异丙基-二苯甲酰基甲烷。

其中，优选地是，2-乙烷基己基-p-甲氧基肉桂酸(即商业途径可获得的PARSOLMCX)，4，4’-t-丁基联苯甲酰甲烷(即商业途径可获得的PARSOL 1789)，2-羟基-4-甲氧基苯甲酮，乙烷基-4-(二(羟基-丙基)氨基安息香酸盐，2-乙烷己基-4-甲氧基苯甲酮，甲氧基-4-(双(羟基-丙基)氨基安息香酸盐，2-乙烷己基-2-氰基-3，3联苯丙烯酸酯，2-乙烷己基-水杨酸盐，甘油基-p-氨基安息香酸盐，3，3，5-三-甲基环己基水杨酸盐，甲基氨基苯甲酸盐，p-二甲基-氨基安息香酸或氨基安息香酸盐，2-乙烷己基-p-二甲基-氨基-安息香酸盐，2-苯基苯并咪唑-5-磺酸，2-(p-二甲基氨基苯基)-5-sulfonicbenzoxazoic acid，奥克立宁，或者这些物质的混合物。

更优选的有机遮光剂是2-乙烷己基-p-甲氧基肉桂酸，丁基甲氧基联苯甲酰-甲烷，2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮，2-苯基苯并咪唑-5-磺酸，辛基二甲基-p-氨基安息香酸，奥克立宁或者他们的混合物。

对本发明外用制剂中尤其有用的遮光活性物是在1990年6月26日授予Sabatell的4937370号美国专利，和1991年3月12日授予Sabatelli&Spirnak的4,999,186号美国专利中披露的遮光活性物质。这两分专利中的遮光剂在单个分子上，具有两种不同的载色体，具有不同的紫外线辐射吸收范围，在主要的紫外辐射光波范围内，其中一种载色体吸收主要的辐射，另一个载色体在紫外辐射范围内强烈吸收。

这一类遮光剂中优选的物质是：4-N，N-(2-乙烷己基)甲基-氨基安息香酸酯；2，4-二羟基苯甲酮，N，N-二-(2-乙烷己基)-4-氨基安息香酸酯，4-羟基联苯甲酰甲烷酯，4-N，N-(2-乙烷己基)甲基安息香酸和4-羟基联苯甲酰甲烷酯，4-N，N-(2-乙烷己基)甲基安息香酸2-羟基-4-(2-羟基乙氧基)苯甲酮酯，4-N，N-(2-乙烷己基)-甲基氨基安息香酸4-(2-羟基乙氧基)联苯甲酰甲烷酯，N，N-二-(2-乙烷己基)-4-氨基安息香酸2-羟基-4-(2-羟基乙氧基苯甲酮酯，和N，N-二-(2-乙烷己基)-4-氨基安息香酸4-(2-羟基乙氧基)联苯甲酰酯和他们的混合物。

特别优选的遮光活性物质包括4，4’-t-丁基甲氧基联苯甲酰甲烷，2-乙烷己基-p-甲氧基肉桂酸，苯基苯并咪唑磺酸和奥克立宁。

可以使用的安全有效量的遮光活性物质在本发明的外用制剂中的重量含量为大约1％-大约20％，更代表性的是2％-10％，精确的含量需根据选自的遮光剂及欲达到的遮光效果来决定。

微粒物质

本发明的外用制剂中还可以含有微粒物质，优选地是金属氧化物，这些微粒可以是涂附的也可以不涂附的，带电的或不带电的。授予ha等的5,997,887号美国专利及与此相关的参考文件披露了带电微粒物质。本发明可以使用的微粒包括，氯氧化铋，氧化铁，云母，硫酸钡和二氧化钛处理过的云母，硅石，尼龙，聚乙烯，滑石粉，苯乙烯，聚丙烯，乙烯酸丙烯酸共聚物，绢云母，二氧化钛，氯氧化铋，氧化铁，氧化铝，硅树脂，硫酸钡，碳酸钙，醋酸纤维，聚甲基丙烯酸甲酯，以及他们的混合物。

无机微粒物质如TiO₂，ZnO，或ZrO₂可以从大量的商业途径获得，例如含有可用的微粒物质可以从美国化妆品(TRONOX TiO₂系列，SAT-T CR837，a rutile TiO2)获得。优选地是，微粒物质在化合物中的重量含量为大约0.01％-大约2％，更优选地是0.05％-大约1.5％，再进一步优选地是0.1％-1％。

改良剂

本发明所说的外用制剂混合物中还可以含有选自保湿剂、增水剂或皮肤调节剂中的皮肤改良剂。有大量的此类物质可以应用在本发明中，每种物质的重量含量都可以是大约0.01％-大约20％，更优选地是大约0.1％-大约10％，再进一步优选地是大约0.5％-大约7％。此类物质包括但不限于，胍，尿素，羟基乙酸和乙醇酸盐(如铵和四烷基铵)，水杨酸，乳酸，乳酸盐(如铵和四烷基铵)，各种形式的芦荟制品(如芦荟胶)，多羟基醇如山梨醇，甘露醇，木糖醇，赤藻糖醇，甘油，己三醇，丁三醇，丙二醇，丁二醇，己二醇及其类似物，聚乙二醇，糖(如蜜二糖)和淀粉，糖和淀粉衍生物(如烷氧基葡萄糖，海藻糖，氨基葡糖，透明质酸，乳酰胺单乙醇胺，乙酰胺单乙醇胺，泛酰醇，尿囊素及他们得混合物，1990年12月11日授予Orr等的4,976,953号美国专利中描述的丙氧基甘油也可以使用。

还可以使用C₁-C₃₀单酯糖和聚酯糖及近似物质，这些酯来源于糖或多羟基的一部分中的一个或多个羧基酸，关于这些酯的详细描述请见在1977年1月25日授予Jandacek的2,831,854，和4,005,196号美国专利，1977年1月25日授予Jandacek的4,005,195号美国专利，1994年4月26日授予Letton等的5,306,516号美国专利，1994年4月26日授予Letton等的5,305,514，号美国专利，1989年1月10日授予Jandacek等的4,797,300号美国专利，1976年6月15日授予Rizzi等的3,963,699号美国专利，1985年5月21日授予Volpenhein的4,518,772号美国专利，1985年5月21日授予Volpenhein的4,517,360号美国专利。

优选地是，改良剂选自尿素，胍，蔗糖聚酯，泛酰醇，右旋泛醇，尿囊素，和他们的混合物。

赋形剂

本发明的外用制剂混合物，尤其是其乳状液，可以含有赋形剂，在本发明的外用制剂中使用的优选赋形剂是水包油乳状液。非理论所限制的那样，可以相信赋形剂有助于增加本发明的流变性以提高稳定性。例如，赋形剂可以有助于液体水晶凝胶网状结构的形成，赋形剂还可以做为乳化剂或表面活性剂，本发明中一种或多种赋形剂的优选重量含量是大约0.1％-大约20％，更优选地是大约0.1％-10％，再进一步优选地是大约0.5％-大约9％。

优选地改良剂是具有1-8的亲水亲油平衡并且熔点至少为45℃。可用的赋形剂选自C₁₄-C₃₀饱和脂肪醇，含有1-5摩尔乙二醇的C₁₆-C₃₀的饱和脂肪醇，C₁₆-C₃₀的饱和二醇，C₁₆-C₃₀的单甘油醚，C₁₆-C₃₀的饱和脂肪酸，C₁₄-C₃₀的含有羟基或不含羟基的饱和脂肪酸，含有1-5摩尔乙烯氧化二醇的C₁₄-C₃₀的饱和含乙氧基的脂肪酸、胺或醇，至少含有甘油-酸酯40％的C₁₄-C₃₀的饱和甘油单酯，含有1-3个烷基集团和2-3个甘油单位的C₁₄-C₃₀饱和甘油酯，C₁₄-C₃₀甘油单醚，C₁₄-C₃₀山梨糖单/双酯，含有1-5摩尔乙氧基的C₁₄-C₃₀饱和乙氧基山梨糖单、双酯，C₁₄-C₃₀饱和甲基糖酯，C₁₄-C₃₀饱和蔗糖单/双酯，含有1-5摩尔乙氧基的C₁₄-_C30乙氧基甲基糖酯，含有平均1-2葡糖单位的C₁₄-C₃₀饱和聚糖物，或者他们的混合物，熔点至少为45℃。

本发明的外用制剂中的优选赋形剂选自硬脂酸，棕榈酸，硬脂醇，十六烷基醇，山嵛醇，硬脂酸，棕榈酸，含有平均1-5个乙烯氧化单位的聚乙二醇十八烷基醚，含有平均1-5个乙烯氧化物的聚乙二醇十六烷基醚，及他们的混合物，其中，更优选的赋形剂选自十八烷基醇，十六烷基醇，山嵛醇，平均具有两个乙烯氧化单位的聚乙二醇十八烷基醇醚(steareth-2)，平均具有两个乙烯氧化单位的聚乙烯乙二醇十六烷基醇，及他们的混合物，再进一步优选的赋形剂选自硬脂酸，棕榈酸，十八烷基醇，十六烷基醇，山嵛醇，平均具有两个乙烯氧化单位的聚乙烯乙二醇十八烷基醇醚。

增稠剂(包括增浓和凝胶剂)

本发明所说的外用制剂混合物还可以含有一种或多种增稠剂，优选的重量含量为大约0.1％-大约5％，更优选的含量是0.1％-4％，再进一步优选的含量是大约0.25％-大约3％。

增稠剂包括但不限于列举的以下物质。

a)羧基酸聚合物

这些聚合物是含有一个或多个单体的交联化合物，这些单体包括丙烯酸，取代丙烯酸，丙烯酸盐、酯和取代丙烯酸的盐、酯，交联化合物包含来源于多元醇的碳碳双键。本发明可用的这些聚合物在以下专利中有详细说明，1992年2月11日授予Haffey等的.5,087,445号美国专利，1985年4月5日授予Huang等的4,509,949，号美国专利，1957年7月2日授予Brown的2,798,053号美国专利，以及在《CTFA国际化妆品成份字典》1991年第4版第12和80页。

这里使用的可以从商业途径获得羧基酸聚合体包括carbomers，这是丙烯酸与蔗糖和季戊四醇的醚的烯丙基交联获得的均聚物。即B.F.Goodrich公司出售的Carbopol.RTM.900系列(如Carbopol.RTM.954)。另外，其他可用的羧基酸聚合物包括C₁₀-C₃₀烷基丙烯酸与丙烯酸、甲基丙烯酸、或者他们的短链(如C₁-C₄醇)酯中的一个或多个单体的聚合物，其中，交联剂是烯丙基蔗糖或pentaerytritol，这些共聚物被称为丙烯酸脂与C₁₀-C₃₀烷基丙烯酸盐的交联物，即可以从商业途径获得的B.F.Goodrich.公司的Carbopol.RTM.1342，Carbopol.RTM.1382，Pemulen TR-1，and Pemulen TR-2，换句话说，本发明使用羧基酸聚合物增稠剂选自carbomers，丙烯酸盐和C₁₀-C₃₀烷基丙烯酸盐的交联物，以及他们的混合物。

b)交联聚丙烯酸酯聚合物

本发明的外用制剂还可以任意含有交联的聚丙烯酸酯聚合物做为增稠剂或胶凝剂，其可以是阳离子或非离子聚合物，优选地是阳离子聚合物。可以使用的交联聚丙烯酸酯聚合物和交联阳离子聚合丙烯酸聚合物在以下专利中进行了说明：1992年3月31日授予Hawe等的5,100,660号美国专利，1989年7月18日授予Heard的4,849,484号美国专利，1989年5月30日授予Farrar等的4,835,206号美国专利，1986年12月9日授予Glover等的4,628,078号美国专利，1986年7月8日授予Flesher等的4,599,379号美国专利，1987年7月15日公布的228,868号欧洲专利。

c)聚丙烯酰胺聚合物

本发明中的外用制剂混合物还可以选择含有聚丙烯酰胺聚合物尤其是非离子聚丙烯酰胺聚合物包括有支链取代基的或无支链的聚合物。这些聚丙烯酰胺聚合物中更优选的是非离子型聚合物即以CTFA法命名的聚丙烯酰胺和异链烷烃和月桂醇聚醚-7，可通过商业途径从Seppic公司(Fairfield，N.J.)购买的商标名为Sepigel 305产品。

这里可以使用的其他聚丙烯酰胺聚合物包括multi-block共聚物，这些共聚物由丙烯酰胺和取代丙烯酰胺与丙烯酸和取代丙烯酸共聚获得的共聚物。商业途径可以获得的multi-block copolymers实例包括Lipo Chemicals，Inc.，(Patterson，N.J.)公司的HypanSR150H，SS500V，SS500W，SSSA100H

d)多糖

本发明的外用制剂中可以使用多种多糖，多糖是指含有重复糖(如糖类)单位做为骨架的胶凝剂。多糖凝胶剂不限于以下所列举的例子中的选自纤维素，羧丙基醋酸纤维，纤维素醋酸盐、丙酸盐、羧酸盐，羟乙基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，甲基羟乙基纤维素，微晶纤维素，纤维素硫酸钠，及他们的混合物。其中，也可是使用烷基取代基纤维素。这些聚合物中，纤维素聚合物的羟基是烷基氢氧化(优选乙羟基或丙羟基)以形成羟烷基纤维素以进一步通过醚链生成C10-C30直链或支链烷基集团，这些聚合物中代表性的物质是C10-C30直链或支链醇与羟烷基纤维素醚。这里可以使用的烷基集团选自十八烷基，异十八烷基，十二烷醇，十四烷基，十六烷基，异十六烷基，椰子烷基(cocoyl)(如从椰子油醇中获得的烷基集团)，棕榈基，油烯基，亚麻油酰基，次亚麻油酰基，蓖麻油基山嵛醇，及他们的混合物。其中，烷基羟烷基纤维素醚中优选的物质以CTFA命名是鲸蜡基羟乙基纤维素，这是十六醇与羟乙基纤维素生成的醚，AqualonCorporation(Wilmington，Del.).出售商标为Natrosol.RTM.CS Plus的这种物质。

其他可用的聚糖包括scleroglucans，scleroglucans为一种每三个单位由(1-3)连接的葡萄糖单位与(1-6)连接的葡萄糖单位。

e)树胶

本发明的外用制剂可以使用的增浓剂和凝胶剂主要是从天然资源获得的物质，胶凝剂树脂包括但不限于阿拉伯树胶，琼脂，褐藻胶，褐藻胶酸，藻酸铵，胶淀粉，藻酸钙，角叉胶钙，肉碱，角叉胶，糊精，白明胶，结冷胶，瓜尔胶，瓜儿胶羟丙基三甲基氯化铵，锂蒙脱石，透明质酸，水合硅石，羟丙基脱乙酰甲壳质，羟丙基瓜儿胶，刺梧桐树胶，海藻胶，刺槐豆胶，纳托胶，藻酸钾，角叉菜酸钾，丙二醇藻酸酯，小菌核胶，羟甲基糖苷钠，角叉菜酸钠，黄芪胶，黄原胶，及他们的混合物。

本发明的外用制剂优选的增稠剂化合物选自羧基酸聚合物，交联聚丙烯酸酯聚合物，聚丙烯酰胺聚合物，及他们的混合物更优选地是选自羧基酸聚合物，聚丙烯酰胺聚合物及他们的混合物。

结合上述不同的载体(辅料)可制成面膜、乳液、面霜和软膏等各种剂型化妆品和用于皮肤药物制剂，在改善皮肤弹力纤维状态的同时，还可具有使皮肤柔软、滋润、光滑、增白和祛斑等综合功能。

外用制剂组合物的制备：

本发明的皮肤护理外用制剂可以使用本领域常用的方法制备，包括通过加热或不加热，冷却，使用抽真空器及近似的方法中的一步或几步将各成分混合为同样的状态即可。

调节皮肤状态的方法

本发明中的外用制剂混合物用于调节哺乳动物皮肤，优选的使用方法是通过可涂敷产品如皮肤凝胶或皮肤面霜，稍差的方法是通过冲洗或可擦去产品如清洁剂，泡沫清洁剂，冷冻面霜清洁剂。

调节哺乳动物皮肤状况的包括将本发明安全有效量的化合物用于角质层组织，使用量、使用的频率和使用的时间根据皮肤护理活性物质的水平和/或具体使用的本发明的外用制剂的成份及想要达到的调节效果来决定，如根据角质层目前的损害及预期的损害程度确定。

优选的是长期将本发明的外用制剂用于皮肤，长期使用的含义是指，在使用者的生存期内的一段期间内连续使用，优选地是在一周内连续使用，更优选地是至少一个月，进一步优选地是至少大约三个月，再进一步优选地是大约六个月，更进一步优选地是至少一年内持续使用。当较长期间内(如5，10或20年)使用获得有益效果时，更优选的是持续使用贯穿使用者一生。典型地在上述期间内地使用频率是每天一次，其使用频率也可以在每周一次至每天三次或更多之间变化。

本发明的外用制剂混合物的使用数量范围以改善皮肤外观或感到有益为准。本外用制剂每次使用的使用量每平方厘米0.1毫克-10毫克，显著有效的使用量是每平方厘米大约1毫克-2毫克。

调节哺乳动物皮肤组织状况优选通过以下形式的使用，皮肤洗剂、面霜、凝胶体、泡沫剂、药膏、面贴、乳状液、喷雾、改良剂、滋补品、化妆品、唇膏、粉底、指甲上光剂、须后水及其近似物，优选地是可留在皮肤上的提供预防、治疗或其他益处(如可保留化合物)。使用本发明的外用制剂时，优选地是将化合物在皮肤上保留至少15分钟，更优选的是至少30分钟，进一步优选地是至少1小时，更进一步优选地是至少几个小时-12小时。面部、头发和/指甲的任何外露部分均可以使用本发明的外用制剂如脸部、嘴唇、眼下部位、眼睑、头皮、脖子、眉毛、躯干、胳膊、脚、手指甲、脚趾甲、头发、睫毛、眉毛等，可以使用手指或其他器具(如垫、棉球、涂笔、喷雾器具及类似物)使用本化合物。

另一个方法就是保证在将皮肤暴露于植物提取物和护理活性物质后，通过无纺布将本发明外用制剂使用在面部等部位。本方法尤其适用于需要加强处理的问题区域(如面部crows feet区域，额线，眼下部分，及类似区域)，无纺布可以是封闭的，半封闭的或非封闭的，也可以是胶粘的或非胶粘的。本发明外用制剂可以包含在无纺布中，也可以在使用无纺布之前使用。无纺布也可以含有附加活性物质例如能够引起发热反应物质，这些物质如授予Wu等5,821,250，5,981,547，和5,972,957号美国专利，优选地是，无纺布在皮肤上保留至少5分钟，更优选地是保留至少10分钟，进一步优选地是保留15分钟，再进一步优选地是保留至少20分钟，更再进一步优选地是在夜里做为夜晚疗法。

本发明的有益效果：本发明揭示了管花肉苁蓉提取物促进皮肤弹力纤维或弹力微纤维生长的新用途，并进一步指出其可作为具有改善皮肤弹力纤维状态的原料或添加剂使用。将管花肉苁蓉提取物作为主要的活性物质，再与其它辅料和添加剂一起混合，可制成各种除改善皮肤弹力纤维状态外，还可多方面改善皮肤功能的皮肤护理外用制剂。经过一二阶段的动物毒理性试验表明对人体没有任何毒副作用。经过三阶段的临床试验，也没有不良的过敏反应等。本发明的揭示，为期望解决皮肤弹力纤维相关问题的人群带来了福音。

附图说明

图1管花肉苁蓉提取物对WI-38细胞GAPD的表达的影响

1：DNA Marker(250bp)；2：正常；3：0.5％管花肉苁蓉提取物处理6h；4：0.5％管花肉苁蓉提取物处理24h；5：0.5％管花肉苁蓉提取物处理30h；6：1％管花肉苁蓉提取物处理6h；7：1％管花肉苁蓉提取物处理24h；8：1％管花肉苁蓉提取物处理30h

图2管花肉苁蓉提取物对WI-38细胞Fibrillin基因表达的影响

1：DNA Marker(250bp)；2：正常；3：0.5％管花肉苁蓉提取物处理6h；4：0.5％管花肉苁蓉提取物处理24h；5：0.5％管花肉苁蓉提取物处理30h；6：1％管花肉苁蓉提取物处理6h；7：1％管花肉苁蓉提取物处理24h；8：1％管花肉苁蓉提取物处理30h

图3管花肉苁蓉提取物对Fibrillin相对表达量的影响

1.正常；2.0.5％管花肉苁蓉提取物处理6h；3.0.5％管花肉苁蓉提取物处理24h；4.0.5％管花肉苁蓉提取物处理30h；5.1％管花肉苁蓉提取物处理6h；6.1％管花肉苁蓉提取物处理24h；7.1％管花肉苁蓉提取物处理30h

具体实施方式

以下列举具体实例进一步阐述本发明，应理解实例并非用于限制本发明的范围。

实施例1管花肉苁蓉提取物的制备

1、肉苁蓉10公斤，粉碎为粗粉，加8倍量50％乙醇，加热至50℃以上提取2小时，提取液过100目筛，药渣加6倍量50％乙醇加热提取2次，提取液过100目筛；合并提取液，在真空度≥0.08Mpa条件下，浓缩至比重1.10，冷却沉淀12小时，取上清液经离心后得离心液，注入SEPABEADS树脂柱内，加2倍量20％乙醇洗脱，收集洗脱液，再用2倍量30％乙醇洗脱，此过程再重复一次，合并3次乙醇洗脱液，经减压、浓缩得含苯乙醇甙类提取物710克。

以高效液相色谱法测定麦角甾甙和松果菊甙的含量测定：

固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，以乙腈-甲醇-1％醋酸溶液(10∶15∶75)为流动相，检测波长为334nm。精密称取麦角甾甙和松果菊甙对照品适量，分别加流动相制成每1ml含麦角甾甙0.10mg和松果菊甙0.14mg的溶液。

供试品溶液制备：取提取物0.5克，置50ml棕色量瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，浸泡0.5小时，超声处理(功率230W，频率35kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，离心，静置，取上清液置棕色瓶中，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液2-10μl与供试品溶液10-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定麦角甾甙和松果菊甙的色谱峰的峰面积，用峰面积计算即得，麦角甾甙的含量经计算为9.6％，松果菊甙含量为5.2％。

2、肉苁蓉10公斤，粉碎为粗粉，加8倍量50％乙醇，加热提取2小时，提取液过100目筛，药渣加6倍量50％乙醇加热提取2次，提取液过100目筛；合并提取液，在真空度≥0.08Mpa条件下，浓缩至比重1.10，冷却沉淀12小时，取上清液经离心后得离心液，注入SEPABEADS树脂柱内，加2倍量20％乙醇洗脱，收集洗脱液，再用2倍量30％乙醇洗脱，此过程再重复二次，合并4次乙醇洗脱液，经减压、浓缩得含苯乙醇甙类提取物490克。按上法测定麦角甾甙的含量经计算为21.3％，松果菊甙含量为9.2％。

3、肉苁蓉10公斤，粉碎为粗粉，加8倍量50％乙醇，加热提取2小时，提取液过100目筛，药渣加6倍量50％乙醇加热提取3次，提取液过100目筛；合并提取液，在真空度≥0.08Mpa条件下，浓缩至比重1.10，冷却沉淀12小时，取上清液经离心后得离心液，注入SEPABEADS树脂柱内，加2倍量30％乙醇洗脱，收集洗脱液，再用2倍量40％乙醇洗脱，此过程再重复3次，合并5次乙醇洗脱液，经减压、浓缩得含苯乙醇甙类提取物160克。按上法测定麦角甾甙的含量经计算为65.3％，松果菊甙含量为22.2％。

用水提取时，麦角甾甙和松果菊甙的质量百分比含量会有变化，用水提取时，松果菊甙的重量百分比会比用醇提时偏高。

实施例2毒性实验

1、急性毒性(经口LD₅₀)试验：

目的：观察受试样品一次经口给予动物引起的不良反应和死亡情况并确定半数致死剂量。

检测依据：GB15193.3-994

1.1材料和方法：

1.1.1样品名称：管花肉苁蓉提取物。

1.1.2样品性状：为深咖啡色粉末。

1.1.3受试样品配制：称取样品10000mg，研磨后加蒸馏水至20ml，充分混匀后配制称均匀混悬液，作为受试样品。

1.1.4受试动物：

昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重：18～22克，由复旦大学试验动物部提供。

合格证号：02-22-1。饲养室温度：18～22℃，相对湿度：40～70％。动物室合格证号：02-28。小鼠饲料由苏杭试验动物科技发展公司提供，合格证号：苏E饲生字(2002)006。

1.1.5仪器设备：电子称AC-3A90401582，天平BP3100S-91006909

1.1.6试验方法：

1.1.6.1动物禁食(不禁水)16小时后，按体重要求选用雌、雄小鼠各10只，分放与两鼠笼内，同性别小鼠之间体重之差不超过3g。

1.1.6.2将受试样品采用一次经口灌胃方式对动物染毒，小鼠逐只称重，灌胃容量按0.4ml/20g体重计。

1.1.6.3染毒后，观察动物的一般状态、体重变化、中毒症状和死亡情况等。观察期为一周。

1.1.6.4试验末再次对动物称重。对死亡动物及到期处死动物进行尸体解剖，肉眼观察大体病理改变情况。

1.1.6.5试验全过程及观察内容均做详细记录。

1.2结果：表雌雄小鼠急性经口毒性试验结果

1.2.1主要症状表现：试验期间各组动物活动正常，毛色光泽度好，未见任何中毒症状和死亡。

1.2.2半数致死量，雌性小鼠：LD₅₀＞10000mg/kg。

雄性小鼠：LD₅₀＞10000mg/kg。

1.3结论：根据急性毒性半数致死量分级，属实际无毒级物质。

2、微核试验：

目的：利用体内试验方法，检测受试动物是否诱发小鼠骨髓染色体畸变。

检测依据：GB-15193.5-1994

2.1样品性状：管花肉苁蓉提取物，为深咖啡色粉末。

2.2受试样品配制：称取样品5000、2500、1250mg，研磨后加蒸馏水至20ml，充分混匀后为受试样品。

2.3受试动物：

来源：由复旦大学试验动物部提供。种属与品系：昆明种小鼠。

性别：雌性和雄性。体重：25～30克，合格证号：02-22-1。

2.4试验条件：室温：18～22℃，相对湿度：40～70％。

2.5试验方法：

2.5.1将动物随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别作为样品三个剂量组及蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组。

2.5.2采用30小时两次灌胃法，动物称重，将配制的不同浓度样品按0.4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃。

2.5.3于第二次灌胃后6小时，颈椎脱臼处死动物，取股骨骨髓加小牛血清混匀，常规涂片、固定，Giemasa染色制片。

2.5.4镜检观察：每鼠计数1000个嗜多染色红细胞的微核数，计算微核发生率，并进行统计分析。

2.6结果：

表动物骨髓嗜多染色红细胞微核发生率

^*与阴性对照组相比(经卡方检验)

2.7结论：经统计学分析，样品管花肉苁蓉提取物骨髓嗜多染色红细胞微核试验结果为阴性。

3、精子畸形试验：

目的：通过检测确认受试物对精子生成发育的影响，及在体内对生殖细胞的遗传毒性。

检测依据：GB15193.7-1994

3.1样品性状：管花肉苁蓉提取物，为深咖啡色粉末。

3.2样品的处理及配制：称取样品5000、2500、1250mg，研磨后加蒸馏水至20ml，充分混匀后为受试样品。

3.3受试动物：

来源：由复旦大学试验动物部提供。种属与品系：清洁级小鼠。

性别：雄性。体重：25～30克，合格证号：02-22-1。

3.4试验条件：室温：18～22℃，相对湿度：40～70％。

3.5试验方法：

3.5.1将动物随机分为5组，每组5只，分别作为样品三个剂量组及蒸馏水阴性对照组核环磷酰胺阳性对照组。

3.5.2动物称重后，将配制的不同浓度样品按0.4ml/20kg体重，分别对各动物组灌胃。每日一次，连续5天。

3.5.3于首次给样后第35天，颈椎脱臼处死动物，取二侧副睾放入生理盐水中，剪碎，四层过滤，取滤液涂片，固定，2％伊红染色制片。

3.5.4镜检观察，每鼠计数1000个精子的畸形数，计算精子畸形发生率，并进行统计分析。

3.6结果：

表动物精子畸形发生率

^*与阴性对照组相比(经卡方检验)

3.7结论：经统计学分析，样品管花肉苁蓉提取物精子畸形试验结果为阴性。

4、Ames试验：

目的：检测受试物的诱变性，从而预测其遗传危害和潜在至癌作用的可能性。

检测依据：GB15193.4-1994

4.1样品性状：样品管花肉苁蓉提取物，为深咖啡色粉末。

4.2溶剂：无菌蒸馏水。

4.3样品处理及配制：称取样品4000mg，加蒸馏水至20ml，混匀，得200mg/ml的溶液，吸取上述受试液3，1，0.3，0.1mL分别加无菌蒸馏水至10ml，得60mg/ml、20mg/ml、6mg/ml、2mg/ml溶液。

4.4测试剂量：0.2mg/

0.2mg/皿、0.6mg/皿、2mg/皿、6mg/皿、20mg/皿。

4.5实验环境条件：温度：18--22℃，相对湿度：50-70％

4.6仪器设备：电热恒温培养箱PYX-DHS 193

电热恒温水槽DK-600

电子天平AE1631010002

4.7测试菌株：TA97、TA98、TA100、TA102。由美国加利福尼亚大学生物化学系提供，生物学性状符合菌株要求。测试用菌液浓度1-2×10⁹/ml。

4.8大鼠肝S₉的诱导和制备：

选健康成年SD大鼠，体重150g左右，将多氯联苯溶于玉米油中，浓度为200mg/ml，按500mg/kg(体重)无菌操作一次腹腔注射，5d后断头处死动物，取出肝脏称重后，用新鲜冰冷的0.15mol/L氯化钾溶液连续冲洗肝脏数次，每克肝(湿重)加0.15mol/L氯化钾溶液3ml，连同烧杯移入冰浴中，用消毒剪刀剪碎肝脏，用组织匀浆器(2000r/min，1min)制成肝匀浆，随后将制成的肝匀浆在低温(0-4℃)高速离心机以9000g离心10min，吸取上清液即为S₉组分，将S₉组分分装于无菌冻存管，放入液氮保存，以上操作需注意无菌和局部冷环境。S₉制成后经无菌、蛋白含量测定和间接诱变剂生物活性鉴定。鉴定结果：无菌试验合格、蛋白质含量为33mg/ml、S₉生物活性符合标准要求。试验时每平皿加入0.5mlS₉混合液(含S₉50μl)。

4.9溶剂对照：无菌蒸馏水。

4.10阳性对照：-S₉：TA97阿的平(500μg/皿)、TA98对硝基喹啉(200μg/皿)TA100、TA102、MMS(1μl/皿)。

+S₉：TA97、TA98、TA1002-氨基芴(10μg/皿)，TA1021，8-二羟基嗯醌(50μl/皿)。

以上阳性对照除阿的平用无菌蒸馏水作溶剂外，其余均用二甲基亚砜(DMSA)作溶剂。4.11测试方法：按GB15193-94标准平板掺入法：45℃顶层琼脂2ml，依次加入菌液0.1ml、受试物0.1ml、活化需加S9混合液0.5ml，充分混匀后迅速道入底层培养基上，37℃培养48小时，观察结果。每次试验重复一次。

4.12第一次试验测试结果：

4.13第二次试验测试结果：

4.14结论：本试验条件下，样品管花肉苁蓉提取物Ames试验结果为阴性。

5、30天喂养试验：

目的：通过检测，进一步了解受试样品的毒性作用，并可初步估计最大无作用剂量。

检测依据：GB15193.7-1994

5.1样品名称：管花肉苁蓉提取物

5.2样品性状：深咖啡色粉末

5.3剂量设计：样品人体推荐剂量为每日1080mg/60kg。本试验设低、中、高三个剂量，即180、900、1800mg/kg，相当于人体推荐剂量的10倍，50倍，100倍，另设空白对照组。

5.4样品的处理即配制：

根据本试验剂量设计要求及动物饲料摄入情况(约10g/100gBW/日)，分别将样品18、90、180g掺入10kg饲料内，拌匀，经饲料机制成颗粒饲料，即成低、中、高三种不同样品含量的饲料，分别给三组动物喂饲。空白对照组给予不含样品的同种动物饲料。

5.5试验动物及环境：

5.5.1SD大白鼠80只，雌雄各半，体重60～80克，由复旦大学试验动物部提供，合格证号：02-22-2。

5.5.2试验动物饲养温度：18～22℃，相对湿度：40～70％，动物室合格证号：02-28。动物饲料由苏杭试验动物科技发展公司提供，合格证号：苏E饲生字(2002)006。

5.6仪器设备：全自动生化仪  AL800        (日本岛津)          15R325

             血液分析仪    CD3700       美国Cell-DYN公司    15R325

             台式离心机    Mikro22      (HETTTCH公司)       1105

             电子天平      Bp3100s      (沙多利斯公司)      91006823

             电子天平      JA1003       (上海天平厂)        300

             电子称        ACS-3型      (上海太和衡器厂)    1050480

             电子称        ACS-3型      (上海太和衡器厂)    90401570

5.7试验方法：

5.7.1将动物随机分为四组，每组20只，雌雄各半，分别作为样品三个剂量组及空白对照组，单笼喂养，自由饮食，连续喂养30天。

5.7.2试验开始及试验后每周称量一次动物体重，并记录饲料摄入量。

5.7.3连续喂养30天后，逐只称重，取鼠血进行血液学、生化学检查，处死，大体解剖肉眼观察有无明显病变，取肝、肾、脾、性器官等脏器进行称重。计算脏体比，并对肝、肾、脾、胃肠、性器官进行组织病理学检查。

结果：

5.8.1生长情况及事物利用率：

各组试验动物体重增长情况(X±SD)单位：g

各试验组动物食物利用率(X±SD)

由以上两表可见，样品各试验组大鼠生长情况基本良好。

肾

肾孟部乳头改变(例)       0    0

移形上皮细胞改变(例)     0    0

大体解剖肉眼观察结果，各剂量组动物脏器未发现明显病变，因此仅选高剂量组及对照组作组织学检查。

脾脏

^*大体解剖肉眼观察结果，各剂量组动物脏器未发现明显病变，因此仅选高剂量组及对照组作组织学检查。

胃肠

^*大体解剖肉眼观察结果，各剂量组动物脏器未发现明显病变，因此仅选高剂量组及对照组作组织学检查。

睾丸

^*大体解剖肉眼观察结果，各剂量组动物脏器未发现明显病变，因此仅选高剂量组及对照组作组织学检查。

卵巢

^*大体解剖肉眼观察结果，各剂量组动物脏器未发现明显病变，因此仅选高剂量组及对照组作组织学检查。

样品管花肉苁蓉提取物按GB15193-1994有关规定进行安全性毒理学评价试验，结果如下【(沪预研(2003)检字第5970B号样品编号委毒(2003)0034)】：

1、急性毒性试验：样品对雌雄小鼠的急性经口LD₅₀均大于10000mg/kg，以急性毒性半数致死量毒性分级，属实际无毒级物质。

2、微核试验结果：阴性。

3、精子畸形试验结果：阴性。

4、Ames试验结果：阴性。

5、30天喂养试验：试验动物生长情况良好，血液学检查，生化学检查，主要脏体比及组织学检查结果与对照组相比，均无明显差异。

实施例3刺激性实验

1)、豚鼠6只，体重250±10g，雌雄各半。给药前24小时在豚鼠脊柱两侧去毛，为8×5cm²，24小时后扦查确保无皮肤损伤。

采用同体左右侧自身对比，左侧去毛区涂受试品(含有2％本发明所述的富含苯乙醇甙类管花肉苁蓉提取物和其它的化妆品用辅料)1g，右侧涂1g赋形剂为对照，用薄膜加纱布、胶布固定。每只豚鼠分笼饲养，给受试品24小时后，温水洗去残留受试品，除受试品后1、24、48、72小时肉眼观察和病理组织检查，并记录涂抹部位有否红斑和水肿等情况，作出评分，记录各日的评分值及恢复情况，列表示各组受试品及赋形剂的平均分值以估价对完整皮肤的刺激性强度(表1)。

表1

2)、豚鼠6只，体重250±10g，雌雄各半。给药前24小时在豚鼠脊柱两侧去毛，为8×5cm²，用手术刀以”#”将去毛消毒皮肤划破，以渗血为度，两侧皮肤破损程度基本一致。采用同体左右侧自身对比，左侧去毛区涂受试品(含有2％本发明所述的富含苯乙醇甙类管花肉苁蓉提取物和其它的化妆品用辅料)1g，右侧涂1g赋形剂为对照，用薄膜加纱布、胶布固定。每只豚鼠分笼饲养，给受试品24小时后，温水洗去残留受试品，除受试品后1、24、48、72小时肉眼观察和病理组织检查，并记录涂抹部位有否红斑和水肿等情况，作出评分，记录各日的评分值及恢复情况，列表示各组受试品及赋形剂的平均分值以估价对破损皮肤的刺激性强度(表2)。

表2

实施例4毛细血管通透性实验

小鼠42只，随机分设二组，本皮肤护理混合物组和市售祛斑霜。用脱毛剂将小鼠腹部去毛36小时后，用本皮肤护理混合物(含有2％本发明所述的富含苯乙醇甙类管花肉苁蓉提取物和其它化妆品用辅料)组和市售祛斑霜(含熊果苷为主要活性成分)0.25g/10g在腹部涂药二次，每次间隔20分钟，然后在腹部皮内注射组织胺溶液0.02ml，在每只小鼠注射1-2个部位，1-2分钟内尾静脉注射1％依文思蓝溶液0.2ml，15分钟后，颈椎脱臼处死，剖开腹部皮肤，用卡尺测量蓝染面积。

表3

品名	动物数	蓝染面积(mm2)
			本皮肤护理混合物	21	87.3±8.2
市售祛斑霜	21	56.2±4.9

实施例5管花肉苁蓉提取物影响WI-38生长的实验

一：实验方法与处理

1.细胞处理

将WI-38细胞(人类二倍体成纤维细胞)传代接种于两个6孔板中，当细胞融合至60-70％时，用管花肉苁蓉提取物进行处理。

处理浓度(W％)为：将管花肉苁蓉提取物溶于二甲基丙砜(Diemet；hy Sulphoxide)，管花肉苁蓉提取物浓度为1％和0.5％；

处理时间为：6h，24h，30h。

10％(w％)管花肉苁蓉提取物的配制：

2.RT-PCR

设计目标片段引物如下，扩增片段为370bp：

fibrillin F  5′CAGAGCAACCGAGGATTT  3′

fibrillin R  5′ACTCACCACCAGCACAGG  3′

内标GAPDH引物如下，扩增片段为210bp：

GAPDH-F  5′AACGGATTTGGTCGTATTG  3′

GAPDH-R  5′GGAAGATGGTGATGGGATT  3′

采用常规条件进行RT-PCR。

二：实验结果

1.管花肉苁蓉提取物对WI-38生长的影响

形态学观察表明管花肉苁蓉提取物对WI-38细胞的生长没有毒副作用，处理后细胞生长良好。

2.管花肉苁蓉提取物对WI-38细胞Fibrillin基因表达的影响(结果见图1和图2)

三：实验结果分析

利用C-IMAGING system软件进行灰度分析，采用Fibrillin/GAPDH比值表示Fibrillin的相对表达量。从结果可知0.5％和1％的管花肉苁蓉提取物均能促使Fibrillin的表达上调。

表1管花肉苁蓉提取物对Fibrillin相对表达量的影响

组别	GAPDH平均灰度值	Fibrillin平均灰度值	Fibrillin/GAPDH比值
				正常	22.05103	10.84944	0.492015
0.5％，6h	20.69878	54.22319	2.619632
				0.5％，24h	21.40247	60.62971	2.832837
0.5％，30h	22.34772	66.00372	2.953489
				1％，6h	19.77743	37.39822	1.890955
1％，24h	21.37897	63.38736	2.964939
				1％，30h	20.65489	66.76646	3.232478

实施例6人体使用报告

使用对象：

在60名18-65岁女性，观察以管花肉苁蓉提取物为活性成分(重量含量为2％)所制成的皮肤护理混合物祛斑、增白效应。用于位于面部的黑斑、色斑、老年斑、黄褐斑、雀斑、日晒斑、蝴蝶斑和妊娠斑等。

使用方法：在面部和左侧手背皮肤上均匀地擦一薄层皮肤护理混合物，不限时保留，每日2-4次，为时2-4周。

效应判断：

明显改善：各种因素引起的皮肤色素增加所形成的色斑几近消失或仅隐约可见，左手背皮肤比右侧明显白皙细腻，光滑有弹性。

改善：各种色斑变浅，消退30％以上，左手背皮肤比右侧较白而细。

无效：色斑无变化，两侧手背皮肤色泽一致。

结果：明显改善：16例、改善：35例、无效：9例。有效率85％。

结果表明，本发明的花妆品按照正常的用量和常规的涂抹方法，在2～4周内即显示85％的有效率，具有明显的效果。

实施例7外用制剂的制备

下述的皮肤护理混合物包含有管花肉苁蓉植物的提取物。其制备方法同一般的化妆品制备方法。其中实施例1～6中管花肉苁蓉提取物中麦角甾甙和松果菊甙的重量百分比分别为：9.6％和7.2％、27.1％和11.0％、71.3％和8.2％、37.9％和23.5％、8.7％和5.2％、75.1％和12.2％。

表5

组成成分	1	2	3	4	5	6
							管花肉苁蓉提取物重量分数	2.0	1.0	0.5	1.0	2.0	2.0
去离子水	71.65	65.45	63.7	61.25	61.0	58.34
							黄原胶	0.3	0	0	0	0	0
甘油	5.0	0	0	12.0	12.0	12.0
							丙二醇	3.0	0	0	0	0	0
EDTA-二钠	0.2	0	0	0.2	0.2	0.2
							卡巴浦尔#934	0.3	0.2	0.2	0	0	0
棕榈酸异丙酯	2.4	0	2.0	0	0	0
							异鲸蜡醇	1.5	3.0	3.0	0.55	0.6	0.55
棕榈酸乙基己基酯	4.0	0	0	0	0	0
							对羟基苯甲酸甲酯	0.4	0.3	0.3	0.2	0.3	0.2
生育酚乙酸酯	0.1	0	0.1	0	0	0
							维生素A棕榈酸酯	0.1	0	0.1	0	0	0
矿脂	2.0	6.0	5.0	0	0	0
							硬脂酸甘油酯	0.5	1.5	1.0	0	0	0
硬脂醇(20-40)	2.7	1.25	2.0	0	0	0
							三羟乙基胺	0.3	0.2	0.2	0	0	0
环聚二甲基硅氧烷D5	2.0	3.0	2.0	0	0	0
							环聚二甲基硅氧烷混合物	1.0	1.0	2.0	0	0	0

杰尔马	0.5	0	0	0	0	0
							D&C Yellow 10	0.05	0.05	0.05	0	0	0
乙醛基纤维素	0	0.3	0.3	0	0	0
							白矿油	0	14.3	15.0	0	0	0
肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯	0	2.0	2.0	0	0	0
							丁基化羟基甲苯	0	0.05	0.06	0	0	0
咪唑烷基脲	0	0.3	0.5	0	0	0
							杏仁油	0	0.1	0	0	0	0
氢氧化钾45％	0	0	0	2.42	2.5	2.4
							硬脂酸	0	0	0	18.0	15.0	18.0
硅氧烷流体SF-96	0	0	0	2.0	2.0	2.0
							4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己基酯	0	0	0	1.25	1.25	1.25
苯甲醇	0	0	0	0.5	0.5	0.5
							欧亚甘草提取物PT-40	0	0	0	0.1	0.1	0
丁二醇	0	0	0	0.5	0.5	0.5
							染料	0	0	0	0.065	0.05	0.06
抗坏血酸葡萄糖苷	0	0	0	0	2.0	0
							二氧化钛						1.0
二氧化锌						1.0

通过以上试验例可知，本发明的化妆品组合物制剂具有去斑、美白和嫩肤的作用，与市售的同类产品相比，其效果要好很多倍，并且对人体和皮肤没有任何毒副作用。

Claims (16)

1.管花肉苁蓉提取物或含有管花肉苁蓉提取物的制剂用于促进皮肤弹力微纤维生成，或促进皮肤弹力纤维的伸展和回复功能的恢复。

2.如权利要求1所述管花肉苁蓉提取物或含有管花肉苁蓉提取物的制剂的用途，其特征在于，所述管花肉苁蓉提取物含苯乙醇甙类物质，以提取物的重量为基准，含有质量百分比至少为2％的麦角甾甙和至少为4％的松果菊甙。

3.如权利要求2所述管花肉苁蓉提取物或含有管花肉苁蓉提取物的制剂的用途，其特征在于，所述管花肉苁蓉提取物中，以提取物的重量为基准，含有质量百分比为2-80％的麦角甾甙和质量百分比为4-80％的松果菊甙。

4.如权利要求2或3所述管花肉苁蓉提取物或含有管花肉苁蓉提取物的制剂的用途，其特征在于，所述麦角甾甙和松果菊甙的重量含量比大于2∶1。

5.管花肉苁蓉提取物用于制备改善皮肤弹力纤维状态的制剂。

6.如权利要求5所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述改善皮肤弹力纤维状态的制剂为促进皮肤弹力微纤维生成，或促进皮肤弹力纤维的伸展和回复功能恢复的制剂。

7.如权利要求5或6所述管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述管花肉苁蓉提取物含苯乙醇甙类物质，以提取物的重量为基准，含有质量百分比至少为2％的麦角甾甙和至少为4％的松果菊甙。

8.如权利要求7所述管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述管花肉苁蓉提取物中，以提取物的重量为基准，含有质量百分比为2-80％的麦角甾甙和质量百分比为4-80％的松果菊甙。

9.如权利要求8所述管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述麦角甾甙和松果菊甙的重量含量比大于2∶1。

10.如权利要求5所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述制剂为外用制剂。

11.如权利要求10所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述外用制剂为具有改善皮肤弹力纤维状态功能的化妆品或治疗弹力纤维受损相关疾病的药物。

12.如权利要求11所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述具有改善皮肤弹力纤维状态功能的化妆品为面膜、乳液、面霜、软膏或洗液的形式。

13.如权利要求10所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述外用制剂含有有效量的管花肉苁蓉提取物和皮肤病理学上可接受的辅料。

14.如权利要求13所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述外用制剂中，管花肉苁蓉提取物的质量百分比为0.1～10％。

15.如权利要求13所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述外用制剂还含有一个或多个皮肤护理活性物质。

16.如权利要求15所述的管花肉苁蓉提取物的用途，其特征在于，所述皮肤护理活性物质选自嫩肤活性物、抗痤疮剂、除皱剂、抗氧化剂、螯合剂、类黄酮、抗炎剂、抗脂肪剂、局部麻醉剂、使皮肤变成褐色的活性物质、皮肤增亮剂、皮肤润滑剂、皮肤修复活性物质、抗菌剂、抗真菌活性物、遮光活性物质或改良剂中的一种或多种。

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