CN101319218A - 一种抗稻飞虱基因rph1及其编码产物与应用 - Google Patents

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CN101319218A CNA2008100627296A CN200810062729A CN101319218A CN 101319218 A CN101319218 A CN 101319218A CN A2008100627296 A CNA2008100627296 A CN A2008100627296A CN 200810062729 A CN200810062729 A CN 200810062729A CN 101319218 A CN101319218 A CN 101319218A
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leu
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娄永根
周国鑫
齐金峰
任楠
毛碧增
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Abstract

本发明公开了一种抗稻飞虱基因RPH1及其编码产物与应用，该抗稻飞虱基因RPH1具有SEQ ID No.1的DNA序列。用于反义抑制的载体是将RPH1的cDNA全长或片段以反义方式连接到CaMV35S启动子或其他启动子下得到的表达载体；用于RNAi技术的载体是将RPH1的cDNA全长或片段以正、反方向连接在内含子两端，得到重组片段，再连接到CaMV35S启动子或其他启动子下得到的表达载体；用于过量表达的载体是将RPH1的cDNA全长连接到CaMV35S启动子或其他启动子下游得到的表达载体。生物测定结果表明，转化体水稻对稻飞虱的抗性产生明显变化。本发明将在作物育种，特别是在水稻抗虫育种中得到广泛应用。

Description

一种抗稻飞虱基因RPH1及其编码产物与应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别地，涉及一种抗稻飞虱基因RPH1及其编码产物与应用。
背景技术
随着全球人口的增加和耕地面积的减少，人们对粮食单产的要求越来越高。虫害造成的粮食损失一般约占粮食总产量的10-30％，重灾年份则颗粒无收，因此如何减少虫害以增加粮食总产量，是人们面临的迫切问题。培育抗性品种是减少害虫危害的一个重要措施。
稻飞虱属于同翅目飞虱科，主要包括褐飞虱Nilaparvata lugens(
Figure A20081006272900031
)、白背飞虱Sogatella furcifera等，是我国水稻上的最重要害虫之一。近几年来，则为稻飞虱主要种类之一的褐飞虱，更是年年大暴发，对我国水稻粮食生产造成了严重危害。据浙江省农业厅调查统计，2005年浙江省第5代褐飞虱发生量每667m2达30万头以上的有66.7万hm2，占水稻总种植面积的86％；每667m2在100万头以上的有33.3万hm2，占42％；最高田块的发生量达到每667m21000万头以上；绝收的面积达5333hm2，造成直接水稻产量损失120万吨。造成褐飞虱近几年来特大爆发的一个重要原因，是目前生产上缺乏抗稻飞虱的水稻品种。因此，发掘抗稻飞虱基因，培育抗稻飞虱品种，将是控制稻飞虱危害的一个重要方面。
至今，国内外已在水稻抗稻飞虱基因鉴定与定位等方面取得了很大成绩。至今已命名了13个抗褐飞虱的主基因，并对其中的8个进行了染色体定位；此外，也鉴定和定位了10多个抗褐飞虱的数量形状基因座(QTL)。对抗白背飞虱的主基因已命名了6个，并对其中的2个进行了定位；同时，也有10多个抗白背飞虱的数量形状基因座被鉴定和定位。然而，至今为止，国内外尚没有克隆到水稻的抗稻飞虱基因。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种抗稻飞虱基因RPH1及其编码产物与应用。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种抗稻飞虱基因RPH1，它具有SEQ ID No.1的DNA序列。
一种权利要求1所述抗稻飞虱基因RPH1的编码蛋白，它包含SEQ ID No.2的氨基酸序列的蛋白质，或者是将SEQ ID No.2的氨基酸残基序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或者添加且具有与SEQ ID No.2的氨基酸残基序列相同活性的由SEQ ID No.2衍生的蛋白质。
一种权利要求1所述抗稻飞虱基因RPH1在转基因植物中的应用。
一种权利要求1所述抗稻飞虱基因RPH1在作物育种中的应用。
本发明的有益效果是，本发明利用SSH方法和基因芯片技术分析了水稻在害虫为害后的差异表达基因，结合RT-PCR和RACE技术分离获得了RPH1基因；以RPH1基因片段合成同位素探针，应用Northern杂交方法分析了RPH1基因在飞虱为害后的表达情况；利用水稻基因组数据库对RPH1基因进行了染色体定位，并通过将RPH1蛋白与绿色荧光蛋白GFP融合结合激光共聚焦技术对RPH1蛋白进行了亚细胞定位，发现RPH1蛋白在叶绿体内表达。利用基因沉默和过量表达技术分析了RPH1基因的生物学功能，发现RPH1基因在水稻对稻飞虱的抗性中发挥着重要作用。该基因的分离克隆，对于作物的抗虫育种，尤其对水稻的抗稻飞虱育种将起到重要的促进作用。
附图说明
图1是RPH1基因特异PCR扩增产物凝胶电泳图；
图2是pMD-19-RPH1酶切鉴定凝胶电泳图；
图3是水稻受稻飞虱为害后RPH1基因的表达情况电泳图；
图4是RPH1基因在水稻染色体上的定位图；
图5是RPH1基因编码蛋白的亚细胞定位图；
图6是以RPH1全长构建的过量表达质粒图谱；
图7是反义抑制基因RPH1水稻的抗稻飞虱测定图。
具体实施方式
本发明利用差减杂交技术SSH，结合基因芯片检测技术，分析了水稻在害虫为害后所诱导的差异表达基因。从SSH克隆库中分析获得RPH1基因片段，以此片段设计正向和反向引物，分别进行3’-RACE和5’-RACE RP-PCR获得了该基因的5’端和3’端基因PCR片段，并直接测序拼接。根据基因测序拼接获得DNA序列，在5’端和3’端非编码区重新设计一对引物RPH1-F1和RPH1-R1，提取害虫为害的水稻叶片mRNA并反转录成cDNA，以此cDNA为模板并以RPH1-FA和RPH1-R1为引物进行常规PCR反应，获得RPH1全基因序列并连接到pMD-T克隆载体测序验证。Northern杂交结果证明RPH1在害虫早期就开始诱导表达，并且持续相当长的时间。对RPH1基因序列生物信息学分析发现，在RPH1编码蛋白的N端含有叶绿体信号肽，预示该基因可能定位于水稻叶绿体，在叶绿体中发挥功能。我们在RPH1基因后连接绿色荧光蛋白GFP基因，构成一个RPH1/GFP融合蛋白，对RPH1蛋白进行了亚细胞定位。同时，构建了RPH1的反义和过量表达载体，以电击法转化农杆菌获得RPH1的两个工程菌。以本实验建立的水稻愈伤遗传转化体系，获得了RPH1反义、RNAi和正义转基因水稻植株。通过生物测定，证明了RPH1是水稻的一个重要抗飞虱基因。对该基因的分离和克隆以及生物学功能的分析，对于作物的抗虫育种，尤其对水稻的抗稻飞虱育种将起到重要的促进作用。
实现本发明的具体技术步骤如下：
1.水稻RPH1基因的分离和序列分析
利用基因芯片技术和SSH技术分析了水稻在害虫为害后的差异表达基因，获得害虫为害诱导的特异表达基因克隆库，并筛选到单克隆L-Y200G2211。测序分析发现此克隆并没有覆盖该基因的完整编码区。
为了获得该片段的完整编码区序列，我们用3’-RACE和5’-RACE技术扩增该片段的3’末端和5’末端片段。根据TaKaRa Race试剂盒方法，以害虫为害水稻叶片mRNA为模板合成cDNA双链。以该片段正向引物F1与3’RACE锚定引物P3配对，反向引物R1与5’RACE锚定引物P5配对作常规PCR分别获得5’RACE PCR片段和3’RACE PCR片段，PCR片段经PCR片段回收试剂盒纯化后，测序得到L-Y200G2211的5’末端和3’末端序列信息。
以L-Y200G2211的5’末端和3’末端序列信息在5’端和3’端非编码区重新设计一对引物RPH1-F1和RPH1-R1，并以上面合成的cDNA双链为模板，PCR扩增后连接入pMD-19T克隆载体，挑取4个克隆送上海生物工程公司测序，每个分别测通2次。测序结果，用生物信息专业DNA拼接软件Conting 3.1拼接获得RPH1基因DNA序列，见序列表SEQ ID No.1表示的序列。根据该序列的开放阅读框(ORF)，推算出该基因编码蛋白的氨基酸序列，如SEQ ID No.2所示。
2.RPH1基因在害虫为害后的表达谱分析
取水稻经飞虱为害0，1.5，3，6，12，24，48，72h的茎杆，用Trizol法提取其总RNA，分别将10μg各时间点RNA经1％甲醛电泳分离后，通过毛细管上吸的方法转到尼龙膜上，经紫外交联固定RNA在膜上。以RPH1基因片段合成同位素探针，对膜进行杂交分析。Northern杂交结果证明RPH1在害虫为害早期就开始诱导表达，并且持续相当长的时间(如图3所示)。
3.对RPH1基因进行染色体定位和编码蛋白亚细胞定位
对RPH1进行生物信息学分析发现，RPH1定位于水稻第8染色体上(图4)，同时发现含有叶绿体定位信号肽。我们将RPH1+GFP基因放在35S CaMV强启动子后，构建了RPH1/GFP融合表达质粒，并导入农杆菌中，经注射侵染方法将含RPH1/GFP融合表达质粒农杆菌注入烟草叶片中，经24-72h后用激光共聚焦显微镜扫描观察。结果显示，叶绿体自发红色荧光同GFP绿色荧光完全重合，说明RPH1蛋白定位于叶绿体上(如图5所示)。
4.利用反义、RNAi和过量表达技术分析其生物学功能
分别构建含CaMV35S组成型启动子的反义、RNAi和过量表达RPH1基因表达载体(图6)。反义载体构建是将RPH1的cDNA全长或片段以PCR扩增或内切酶酶学操作亚克隆方法，反方向连接到CaMV35S启动子或其他启动子下游，再在其后添加一段NOS终止子序列，之后将构建好的这个融合序列整体克隆载体中切下，亚克隆到pCAMBIA1301或其他表达载体上。RNAi载体是将RPH1的cDNA全长或片段以正、反方向连接在内含子两端，得到重组片段，重组片段连接入pMD-18为基础的克隆载体，设计PCR引物以此重组克隆载体为模板，扩增出正向序列-内含子-反向序列片段，再连接到pCAMBIA1301表达在的CaMV35S启动子或其他启动子和NOS终止子之间。过量表达载体构建是将RPH1基因编码链全序列，以平末端方式连接到pCAMBIA1301-35S表达载体的CaMV35S启动子或其他启动子和NOS终止子之间。
构建的表达载体以电击法转化农杆菌，获得含有表达载体的工程农杆菌，以本实验成熟的农杆菌转基因方法侵染水稻愈伤，愈伤经抗性筛选后获得整合了目的基因的愈伤组织，再经分化培养基和生根培养基中培养，获得RPH1基因反义、RNAi和过量表达转基因品系。
对水稻植株进行观察未发现植株生理缺陷，能获得正常世代。稻飞虱分别
为害转基因水稻和非转基因水稻，发现转基因水稻长势明显优于非转基因水稻，在16天非转基因水稻基本枯死，而转基因水稻仅外面的叶片枯黄(图7)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明范围。
实施例1、RPH1cDNA片段的获得
1)水稻茎杆RNA的提取、质量检测及总cDNA第一链合成；
2)从总cDNA第一连中以聚合酶链式反应(PCR)合成RPH1 cDNA片段
上游引物：5’-ATAATACCCATACCATGTTGCG-3’
下游引物：5’-ATAAAGATTTGGGAGTGACATA-3’
PCR扩增条件：94℃×4min→(94℃×30sec→58℃×1min→72℃×3min)×35循环→72℃×10min，得到特异PCR扩增产物见附图1。
3)pMD-19-RPH1克隆载体构建及基因碱基解析
PCR产物通过T克隆入Takara公司pMD-19载体获得pMD-19-RPH1载体，并通过CaCl2法转入TG1大肠杆菌。pMD-19-RPH1经EcoRI和PstI酶切鉴定(如图2)后，将含pMD-19-RPH1载体的TG1菌液送上海生物工程有限公司测序。用软件Chromas和Contig对测序进行拼接获得序列表中的序列SEQ ID No.1。将此cDNA的基因命名为RPH1。
实施例2、RPH1基因表达谱分析-Northern杂交
将各种材料的总RNA荧光法定量后，取10μg各个样品在1.0％的琼脂糖凝胶上75V电压电泳60min，在GENE凝胶成像仪成像后，浸泡于0.05M的NaOH中25min，用DEPC处理的ddH20淋洗3-4次，放入10倍体积的20×SSC中，温和摇动45min。
用向上毛细管转移法，使RNA吸附在带正电的尼龙膜上，经UV交联仪交联后，80℃烘烤120min固定。
探针标记：按Prime-a-Gene Labeling Syntem(Promega)试剂盒说明书进行。RPH1基因DNA模板25ng，经95-100℃水浴变性5min，立即放冰上冷却，按表1要求加入相应的试剂，加入同位素的操作需在有机屏挡板后进行。25℃反应60min后，95-100℃变性5min，冰上放置5min，备用。
表1探针标记反应体系
  组分  体积(μl)   终浓度
  模板DNA  10   500ng/ml
  5×buffer  10   1×
  dNTP  2   20uM
  BSA  2   400ug/ml
  [α-32P]d CTP  2.5   333nM
  DNA Polymerase  1   100U/ml
  H2O  22.5
  Tatol  50
预杂交和杂交：杂交膜在0.25M磷酸缓冲液(pH7.2)缓冲液中润湿，放入杂交管，加入10ml的预杂交液(0.5M pH7.2磷酸缓冲液；0.5M pH8.0 EDTA；20％SDS；0.1g BSA)，在杂交炉中62-65℃预杂交1-4小时。加入RPH1同位素探针，65℃杂交12-18小时。倒去杂交液，杂交膜在Wash solutionI(1×SSPE，0.5％SDS(W/V))室温洗脱2次，每次5min；在Wash solution II(0.2×SSPE，0.1％SDS(W/V))65℃洗2次，每次15min。杂交膜用吸水纸吸干后，用保鲜膜包裹，平整放入磷屏。压屏2小时后在台风扫描仪成像。
实施例3、利用过量表达技术研究RPH1基因生物学功能
1)设计正向和反向引物，PCR扩增出第118到第2890的长2763个碱基的DNA片段。
2)以DNA亚克隆方法将2763bp RPH1的DNA片段正向插入到CaMV35S启动子和3’NOS终止子之间，获得RPH1基因过量表达载体。
3)将RPH1基因过量表达载体，以电击法转入农杆菌EHA105，获得农杆菌工程细胞系。以农杆菌转染法侵染水稻愈伤组织，共侵染水稻愈伤在含有潮霉素的NBDS培养基上培养，第1次筛选20天。当新的抗性愈伤长出后，将抗性愈伤从母体上剥离，转入新的筛选培养基NBDS2，一个抗性愈伤即为一个株系。抗性愈伤经继代扩繁后，在预分化培养基MS-PG上，26-28℃、避光，培养7-10天；然后，转入分化培养基MS-RG，16h光照、26-28℃培养2-3周，愈伤先转绿后分化出T0代植株。
4)T0代转基因植株获得的T1代种子，经含潮霉素的培养基筛选，去除未含有RPH1的植株，并单株种植。收获T2代种子，对每个单株的种子进行鉴定。获得转RPH1基因的纯合品系，用于后面的生物学功能分析。
5)转基因品系和非转基因水稻都进行害虫为害试验，比较害虫的生长情况和植株的生存情况，分析RPH1的功能。
序列表
<110>浙江大学
<120>一种抗稻飞虱基因RPH1及其编码产物与应用
<160>2
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>3007
<212>DNA
<213>水稻
<400>1
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tgttttaacc aatatgtcac tcccaaatct ttattgattt ttatcatgtt tgaaaagata    3000
aaaaaaa                                                              3007
<210>2
<211>923
<212>PRT
<213>水稻
<400>2
Met Leu Arg Pro Gln Leu Asn Pro Ser Ser His Thr Thr Thr Thr Ser
1               5                   10                  15
Ser Ser Ser Ser Thr Gln Leu Phe Ala Ser Ser Ser Cys Ile Ala Ser
            20                  25                  30
Leu Arg Arg Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Val Val Ala Ala Ala Arg
        35                  40                  45
Arg Thr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Arg Val Val Val Val Cys Ala Ser
    50                  55                  60
Ser Ser Ala Thr Ala Ser Arg Gly Asp Ser Ser Ser Asp Met Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Ala Val Arg Val Lys Ala Val Ala Thr Ile Lys Val Thr Val
                85                  90                  95
Gly Glu Leu Ile Asn Arg Ser Ile Asp Ile Arg Asp Leu Ile Gly Arg
            100                 105                 110
Ser Leu Ser Leu Glu Leu Val Ser Ser Glu Leu Asp Ala Lys Thr Gly
        115                 120                 125
Lys Glu Lys Ala Thr Val Arg Ser Tyr Ala His Asn Val Asp Asp Asp
    130                 135                 140
Asp His Ser Val Val Thr Tyr Glu Ala Asp Phe Asp Val Pro Ser Gly
145                 150                 155                 160
Phe Gly Pro Ile Gly Ala Ile Ile Val Thr Asn Glu Leu Arg Gln Glu
                165                 170                 175
Met Phe Leu Glu Asp Ile Asn Leu Thr Ala Ser Asp Gly Ala Gly Asn
            180                 185                 190
Ser Thr Val Leu Pro Ile Arg Cys Asn Ser Trp Val Gln Pro Lys Ser
        195                 200                 205
Val Gly Asp Glu Gly Thr Pro Ser Lys Arg Ile Phe Phe Ala Asn Lys
   210                 215                 220
Thr Tyr Leu Pro Gly Gln Thr Pro Ala Gly Leu Arg Ser Tyr Arg Lys
225                 230                 235                 240
Asn Asp Leu Gln Gln Lys Arg Gly Asp Gly Thr Gly Glu Arg Glu Ala
                245                 250                 255
Asp Asp Arg Val Tyr Asp Tyr Asp Val Tyr Asn Asp Leu Gly Asn Pro
            260                 265                 270
Asp Ser Asn Gly Asp Leu Ala Arg Pro Val Leu Gly Gly Asn Lys Gln
        275                 280                 285
Phe Pro Tyr Pro Arg Arg Cys Arg Thr Gly Arg Pro Pro Ser Lys Lys
    290                 295                 300
Asp Pro Lys Ser Glu Thr Arg Lys Gly Asn Val Tyr Val Pro Arg Asp
305                 310                 315                 320
Glu Glu Phe Ser Pro Glu Lys Glu Asp Tyr Phe Leu Arg Lys Thr Val
                325                 330                 335
Gly Ser Val Leu Gln Ala Ala Val Pro Ala Ala Gln Ser Cys Ser Ser
            340                 345                 350
Asp Lys Leu Lys Trp Asn Leu Pro Phe Pro Ser Phe Phe Val Ile Asp
        355                 360                 365
Lys Leu Phe Glu Asp Gly Val Glu Leu Pro Gly Val Asp Lys Leu Asn
    370                 375                 380
Phe Leu Glu Ser Val Val Pro Arg Leu Leu Glu His Leu Arg Asp Thr
385                 390                 395                 400
Pro Ala Glu Lys Ile Leu Arg Phe Glu Thr Pro Ala Asn Ile Gln Lys
                405                 410                 415
Asp Lys Phe Ala Trp Leu Arg Asp Glu Glu Phe Ala Arg Glu Thr Leu
            420                 425                 430
Ala Gly Ile Asn Pro Tyr Ala Ile Glu Leu Val Arg Glu Phe Pro Leu
        435                 440                 445
Lys Ser Lys Leu Asp Pro Ala Val Tyr Gly Pro Ala Glu Ser Ala Ile
    450                 455                 460
Thr Ala Asp Leu Leu Glu Glu Gln Met Arg Arg Val Met Thr Val Glu
465                 470                 475                 480
Glu Ala Ile Asn Gln Lys Arg Leu Phe Met Leu Asp Phe His Asp Leu
                485                 490                 495
Phe Leu Pro Tyr Val His Lys Ile Arg Ser Leu Asp His Thr Thr Met
            500                 505                 510
Tyr Gly Ser Arg Thr Val Phe Phe Leu Thr Asp Asp Gly Thr Leu Gln
        515                 520                 525
Leu Leu Ala Ile Glu Leu Thr Arg Pro Ala Ser Leu Ser Gln Pro Gln
    530                 535                 540
Trp Arg Gln Val Phe Thr Pro Ser Thr Asp Ala Thr Met Ser Trp Leu
545                 550                 555                 560
Trp Arg Met Ala Lys Ala His Val Arg Ala His Asp Ala Gly His His
                565                 570                 575
Glu Leu Ile Thr His Trp Leu Arg Thr His Cys Ala Val Glu Pro Tyr
            580                 585                 590
Ile Ile Ala Ala Asn Arg Gln Leu Ser Glu Met His Pro Ile Tyr Gln
        595                 600                 605
Leu Leu Arg Pro His Phe Arg Tyr Thr Met Arg Ile Asn Ala Arg Ala
    610                 615                 620
Ala Arg Val Ile Ser Ala Gly Gly Ile Ile Glu Arg Ser Phe Ser Pro
625                 630                 635                 640
Gln Lys Tyr Ser Met Glu Leu Ser Ser Val Ala Tyr Asp Lys Leu Trp
                645                 650                 655
Arg Phe Asp Thr Glu Ala Leu Pro Ala Asp Leu Val Arg Arg Gly Met
            660                 665                 670
Ala Glu Glu Asp Pro Thr Ala Glu Gln Gly Leu Lys Leu Ala Ile Glu
        675                 680                 685
Asp Tyr Pro Phe Ala Asn Asp Gly Leu Leu Ile Trp Asp Ala Ile Lys
    690                 695                 700
Thr Trp Val Gln Ala Tyr Val Ala Arg Phe Tyr Pro Asp Ala Asp Ser
705                 710                 715                 720
Val Ala Gly Asp Glu Glu Leu Gln Ala Phe Trp Thr Glu Val Arg Thr
                725                 730                 735
Lys Gly His Gly Asp Lys Lys Asp Ala Pro Trp Trp Pro Lys Leu Asp
            740                 745                 750
Ser Pro Glu Ser Leu Ala His Thr Leu Thr Asn Ile Val Trp Val Ala
        755                 760                 765
Ala Ala His His Ala Ala Val Asn Phe Gly Gln Tyr Asp Phe Gly Gly
    770                 775                 780
Tyr Phe Pro Asn Arg Pro Ser Ile Ala Arg Thr Val Met Pro Val Glu
785                 790                 795                 800
Glu Pro Val Asp Gly Ala Ala Met Glu Arg Phe Leu Asp Asn Pro Asp
                805                 810                 815
Gln Ala Leu Arg Glu Cys Phe Pro Ser Gln Val Gln Ala Thr Val Val
            820                 825                 830
Met Ala Val Leu Asp Val Leu Ser Ser His Ser Thr Asp Glu Glu Tyr
        835                 840                 845
Leu Gly Gly Glu Gln Thr Arg Pro Gly Thr Ala Thr Arg Arg Leu Gln
    850                 855                 860
Ala Ala Tyr Asp Gly Phe Ala Ala Arg Leu Lys Glu Ile Glu Gly Val
865                 870                 875                 880
Ile Asp Gly Arg Asn Lys Asp Arg Lys Leu Lys Asn Arg Cys Gly Ala
                885                 890                 895
Gly Ile Leu Pro Tyr Gln Leu Met Lys Pro Phe Ser Asp Ser Gly Val
            900                 905                 910
Thr Gly Met Gly Ile Pro Asn Ser Thr Ser Ile
        915                 920

Claims (4)

1、一种抗稻飞虱基因RPH1，其特征在于，它具有SEQ ID No.1的DNA序列。
2、一种权利要求1所述抗稻飞虱基因RPH1的编码蛋白，其特征在于，它包含SEQ ID No.2的氨基酸序列的蛋白质，或者是将SEQ ID No.2的氨基酸残基序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或者添加且具有与SEQ ID No.2的氨基酸残基序列相同活性的由SEQ ID No.2衍生的蛋白质。
3、一种权利要求1所述抗稻飞虱基因RPH1在转基因植物中的应用。
4、一种权利要求1所述抗稻飞虱基因RPH1在作物育种中的应用。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101967486A (zh) * 2010-07-02 2011-02-09 浙江大学 一种抗虫基因OsRG1及其编码产物与应用
CN101792761B (zh) * 2009-10-23 2013-06-19 武汉大学 一种诱导增强型组织特异性启动子及其应用
CN103820460A (zh) * 2014-01-28 2014-05-28 浙江大学 一种褐飞虱基因Nl1860及其编码产物与应用
CN109206494A (zh) * 2018-10-29 2019-01-15 中国农业大学 ZmRPH1基因在调控植物株高及抗倒伏能力中的应用
CN112391391A (zh) * 2020-11-19 2021-02-23 中国计量大学 抗虫基因及其用途

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101792761B (zh) * 2009-10-23 2013-06-19 武汉大学 一种诱导增强型组织特异性启动子及其应用
CN101967486A (zh) * 2010-07-02 2011-02-09 浙江大学 一种抗虫基因OsRG1及其编码产物与应用
CN101967486B (zh) * 2010-07-02 2012-11-14 浙江大学 一种抗虫基因OsRG1及其编码产物与应用
CN103820460A (zh) * 2014-01-28 2014-05-28 浙江大学 一种褐飞虱基因Nl1860及其编码产物与应用
CN103820460B (zh) * 2014-01-28 2016-01-20 浙江大学 一种褐飞虱基因Nl1860及其编码产物与应用
CN109206494A (zh) * 2018-10-29 2019-01-15 中国农业大学 ZmRPH1基因在调控植物株高及抗倒伏能力中的应用
CN112391391A (zh) * 2020-11-19 2021-02-23 中国计量大学 抗虫基因及其用途

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