CN101300488A - 复合物的形成方法和分离方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的是提供短时间高反应效率地在分析物或其类似物与可与所述分析物或其类似物形成复合物的物质(复合物形成物)之间形成复合物的方法，快速、简单、高精度地分离形成的复合物和未参与复合物形成的复合物形成物或未参与所述复合物形成的类似物的方法，以及高灵敏度地测量样品中的分析物的方法。

Description

复合物的形成方法和分离方法
发明背景
技术领域
本发明涉及一种在样品内的分析物或其类似物与可和所述分析物或其类似物形成复合物的物质(在下文中，缩写为复合物形成物或CFS)之间形成复合物的方法，一种分离所形成的复合物、未参与所述复合物形成的CFS或类似物的方法，还涉及一种基于分离的复合物量、或未参与复合物形成的CFS或类似物量来测量样品内分析物的方法。
背景技术
分析样品中的分析物通常需要将多种溶液，例如样品和各种试剂溶液(例如，含有分析物抗体的试剂溶液，含有标记物的试剂溶液等)等混合，并使样品中的分析物和试剂溶液中的反应物(分析物抗体或标记物等)反应。
在使用微流装置的微全分析系统(μ-TAS)中，其中该技术近来一直在发展且人们已经对其进行了各种研究，人们已经知道了将这些多种溶液预先混合并在毛细管(通道)外反应，然后将该混合溶液引入毛细管(通道)的方法，或将多种溶液同时引入混合毛细管(通道)中进行混合并反应的方法(专利文献1)。
然而，在前一方法中，要求以微升(μl)量级对样品或试剂溶液进行预先混合，这样就丧失了μ-TAS的价值，也就是说丧失了以纳升(nl)或皮升(pl)量级进行样品或试剂溶液微分析的可能性。另外，在后一方法中，引入时在毛细管中产生的层流会使多种溶液难以混合，而导致需要取决于分子扩散，这就会引起如下问题：当将多种不同分子量或粘度的溶液混合到一起时，由于待混合溶液的扩散系数不同，或粘度比不同而导致完成这些溶液的混合时间的变化改变了要引入通道的多种溶液的体积比，这就导致混合比例的变化要取决于待混合溶液的种类，从而使得不可能按照恒定的混合比来进行混合。
另外，在Bao，J.M，Regnier，F.E，J.Chromatogr.1992，608，217-224(非专利文献1)或JP-A-10-512371(专利文献2)中公开的方法可以作为上述方法以外的方法。
在这些方法中，在分析用毛细管中，含有具有较高电泳迁移率分子的溶液与含有具有较低电泳迁移率分子的溶液逆流设置，通过施加电场使电泳迁移率较高的分子追上电泳迁移率较低的分子，从而在这些分子之间发生反应。这些方法与常规的取决于分子扩散的混合方法相比，可以使分子在短时间内均匀混合。
但是，这些方法的反应效率并不令人满意，需要能确保足够反应效率的对策来以高敏感度对样品中的分析物进行检测，例如，增加要加入进行反应的分子浓度或通过电泳减缓分子移动速率而延长反应时间。
专利文献1：JP-A-2005-31070
专利文献2：JP-A-10-512371
非专利文献1：Bao，J.M，Regnier，F.E，J.Chromatogr.1992，608，217-224
发明内容
本发明要解决的问题
本发明涉及短时间高反应效率地在所述分析物或其类似物，和所述CFS之间形成复合物的方法，快速、简单且高精度地分离所形成的复合物、未参与所述复合物形成的CFS或类似物的方法，还涉及高灵敏度地测量样品中分析物的方法。
解决问题的方式
本发明由以下框架组成：
1.形成复合物的方法，其包括以下步骤：
第(1)步，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种CFS的溶液置于毛细管内，通过对所述毛细管施加电压，就在所述分析物或所述其类似物和该CFS间形成复合物，而不用将这些溶液预先混合；和
第(2)步，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，而让所述分析物或所述其类似物与CFS接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或所述其类似物和该CFS间形成复合物。
2.分离复合物的方法，其包括以下步骤：
第(1)步，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种CFS的溶液置于毛细管内，通过对所述毛细管施加电压，就在所述分析物或所述其类似物和该CFS间形成复合物，而不用将这些溶液预先混合；
第(2)步，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或所述其类似物与该CFS接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或所述其类似物和该CFS间形成复合物；和
第(3)步，通过进一步的电移动分离所述复合物、未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物。
3.测量分析物的方法，其包括以下步骤：
第(1)步，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种CFS的溶液置于毛细管内，通过对所述毛细管施加电压，就在所述分析物或所述其类似物和该CFS间形成复合物，而不用将这些溶液预先混合；
第(2)步，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或所述其类似物与该CFS接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或所述其类似物和该CFS间形成复合物；
第(3)步，通过进一步的电移动分离所述复合物、未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物；和
第(4)步，测量所分离的复合物的量、或未参与所述复合物形成的CFS或类似物的量，从而基于该结果来确定所述分析物的量。
即，本发明人发现通过将含有分析物或其类似物的溶液和含有CFS的溶液置于通道中，不需要预先将这些溶液混合，通过对该毛细管施加电压，利用不同的电泳迁移率而将所述分析物或其类似物和/CFS电泳富集的同时就可以在所述分析物和类似物，与CFS之间形成复合物，通过仅用从纳升(nl)到皮升(pl)量级的超少量的样品和所述溶液，而不需要考虑由于样品和所述溶液的粘度差异而导致的混合比例变化，就可以在短时间内以高反应效率形成所述复合物，从而实现本发明。
发明效果
根据本发明的方法，溶液中的分析物或其类似物与溶液中的CFS之间的反应可以在短时间内以高反应效率进行。这样，就可以快速、简单且高精度地分离出带有CFS的复合物和未参与复合物形成的CFS或类似物，而且，可以基于分离的复合物量或未参与复合物形成的CFS或类似物量，而实现样品中分析物的高灵敏度测量。
附图说明
图1示出在实施例1中制备DNA标记抗体[与250bp DNA片段结合的抗-AFP抗体WA1 Fab′片段(反应改良CFS)]的制备流程。
图2示出实施例1制备的毛细管芯片的设置。
图3示出实施例1中引入毛细管的电泳样品和试剂溶液的设置关系。
图4示出实施例1所得的AFP浓度和峰面积之间关系(线性)。
图5示出实施例1所得在用AFP浓度为0pM和100pM的电泳样品情况下的电泳色谱。
图6示出实施例2制备的毛细管芯片的设置。
图7示出实施例2中引入毛细管的电泳样品、第一测试样品和第二试剂溶液的设置关系。
图8示出实施例2所得的AFP浓度和峰面积之间的关系(线性)。
图9示出实施例2所得的在低AFP浓度区域(使用AFP浓度为0nM、0.8nM、4nM和20nM的电泳样品所得的结果)中AFP浓度和峰面积之间的关系(线性)。
发明的最佳实施方式
1.形成本发明复合物的方法
本发明的方法的特征在于(a)将含有分析物或其类似物的溶液，和含有CFS的溶液引入并置于毛细管的各独立区域内，而不用通过预先在毛细管外混合来形成复合物，然后(b)在将这些溶液于毛细管内均匀混合之前，通过对所述通道施加电压，而电泳富集所述分析物或其类似物和/或CFS来让它们接触的同时，在所述分析物或其类似物和CFS间形成复合物。
形成本发明复合物的方法特别包括以下步骤(1)和步骤(2)：
第(1)步(引入步骤)，将(a)含有分析物或其类似物的溶液置于毛细管中，并将(b)含有至少一种CFS的溶液和所述分析物或所述其类似物一同置于毛细管中，通过对所述毛细管施加电压，从而在所述分析物或所述其类似物和CFS间形成复合物，而不用预先将这些溶液混合；和
第(2)步(富集反应步骤)，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或所述其类似物与CFS接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或所述其类似物和CFS之间形成复合物。
1-1.引入步骤[步骤(1)]
本发明的步骤(1)是一步将含有分析物或其类似物的溶液，和含有至少一种CFS的溶液引入并置于毛细管中，通过对毛细管施加电压，即进行后面描述的本发明步骤(2)，从而在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外混合这些溶液。
这里，“通过对毛细管施加电压，而在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物”是指通过让分析物或其类似物与CFS接触，使得在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物，而不是通过(不依赖于)分子扩散和通过利用下述现象，当将含有电泳迁移率较高(电泳速度快)的物质的溶液设在含有电泳迁移率较低(电泳速度慢)的物质的溶液上游并进行电泳时，溶液中较高电泳迁移率的物质(电泳速度快)会追上较低电泳迁移率的物质(电泳速度慢)。
也就是说，本发明的目的在于通过对毛细管施加电压，而使毛细管中的(1)分析物或其类似物，或在分析物或其类似物和某个CFS间形成复合物，与(2)至少一种CFSs(注意：CFS与上述定义的不同)之间形成复合物。换句话说，本发明不仅包括仅在毛细管中分析物或其类似物，与所有CFS之间形成复合物的情况，还包括下述情况比如当使用2种或以上CFS时，预先在毛细管外，或在不施加电压的毛细管内，在分析物或其类似物，与2种或以上CFSs中的部分CFS之间形成复合物(中间体复合物)，然后通过对毛细管施加电压，而让所述中间体复合物与其余的至少一种CFS在毛细管内接触，从而在预先形成的中间体复合物与其余的至少一种CFS间形成复合物。
例如，当使用2种CFS时，自然包括的情况是(1)通过对毛细管施加电压，在毛细管内，在分析物或其类似物与一种CFS之间形成复合物(中间体复合物)，和在所述中间体复合物与其余的一种CFS之间形成复合物，还包括的情况是(2)预先在毛细管外，或在不施加电压的毛细管内，在分析物或其类似物，与一种CFS之间形成中间体复合物，然后通过对毛细管施加电压，在毛细管内，在所述中间体复合物与其余的一种CFS之间形成复合物。另外，例如，当使用3种CFS时，自然包括的情况是(1)通过对毛细管施加电压，在毛细管内，在分析物或其类似物与一种CFS(CFS-1)之间形成复合物(中间体复合物1)，在所述中间体复合物1与其余一种CFS(CFS-2)之间形成中间体复合物2，在所述中间体复合物2与其余一种CFS(CFS-3)之间形成复合物，还包括的情况是(2)预先在毛细管外，或在不施加电压的毛细管内，在分析物或其类似物，与CFS-1之间形成中间体复合物1，然后通过对毛细管施加电压，在毛细管内，在所述中间体复合物1与CFS-2之间形成中间体复合物2，同时在所述中间体复合物2与CFS-3之间形成复合物；或(3)预先在毛细管外，或在不施加电压的毛细管内，在分析物或其类似物与CFS-1之间形成中间体复合物1，在所述中间体复合物1与CFS-2之间形成中间体复合物2，然后通过对毛细管施加电压，在毛细管内，在所述中间体复合物2与CFS-3之间形成复合物。(就此而论，可以按照同样的想法考虑使用4种或以上CFS的情况。)
因此，在本发明中，“不预先混合溶液”是指不预先将含有分析物或其类似物的溶液，和含有至少一种CFS的溶液混合，但并没必要排除任何地预先将含有分析物或其类似物的溶液，与含有至少一种CFS的溶液混合(换句话说，并不是指绝对不能将有些含有分析物的样品和含有所有CFS的溶液，如果需要，连同包括含有类似物的溶液一起混合)。
在本发明中，将施加电压时，分析物或其类似物与至少一种CFS之间最终形成的复合物的移动方向定义为“下游”，与其相对的方向定义为“上游”(以下相同)。
另外，在本发明中，“(分析物或其类似物、CFS等进行电泳)的电泳速度慢”或“(分析物或其类似物、CFS等进行电泳)的电泳迁移率低”不仅是指比至少一种其他物质的电泳速度(电泳迁移率低)慢，还指运动方向与至少一种其他物质的方向相反。
含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液的设置顺序没有特别的限定，只要可以通过对毛细管施加电压，而在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物即可。
在表1-1至表1-5中，显示了含有分析物或其类似物的溶液和含有CFS的溶液的设置顺序和分析物或其类似物和CFS的电泳迁移率(电泳速度)之间的关系，但是本发明并不限于此。
在这一点上，在表1-1至表1-5中，显示了使用1～3种CFS的情况，在使用4种或以上CFS时的情况下，可以按照与表1-1至表1-5中相同的思路进行合适的设置。
在表1-1至表1-5中，Ana代表分析物或其类似物，CFS-1代表CFS-1，CFS-2代表CFS-2，且CFS-3代表CFS-3。另外，在表1-1至表1-5中，毛细管内的设置顺序A是设置在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液间最上游边界的溶液区域，B是设置在区域A下游的溶液区域，C是设置在区域B下游的溶液区域，且D是设置在区域C下游的溶液区域。在这一点上，在所述毛细管中的设置顺序(A至D)仅仅是含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液间的顺序，而且这种设置自然可以允许让除所述溶液之外的溶液等设置于排在最下游区的所述溶液的更下游处，或设置于排在最上游区的所述溶液的更上游处。
表1-1
Figure A20068004066200111
Figure A20068004066200121
表1-2
Figure A20068004066200131
Figure A20068004066200141
表1-3
Figure A20068004066200142
Figure A20068004066200161
表1-4
Figure A20068004066200181
表1-5
Figure A20068004066200191
Figure A20068004066200201
在表1-1～表1-5中，“在之前形成”指前一复合物大体上地在后一复合物形成之前形成，但不排除部分的前一复合物和后一复合物同时或按相反顺序形成，例如下述情况下。
(1)通过将各区域(含有分析物或其类似物的溶液的区域，含有CFS的溶液的区域)相邻安置，并通过在各区域之间液液界面附近产生的分子扩散，部分的前一复合物与后一复合物同时或按相反的顺序形成。
(2)由于分析物或其类似物和至少一种CFS的电泳速度的关系，部分的前一复合物与后一复合物同时或按相反的顺序形成。
(3)由于分析物或其类似物和至少一种CFS中的至少一种CFS以与其他物质相反的方向移动，部分的前一复合物与后一复合物同时或按相反的顺序形成。
在这些情况中，含有分析物或其类似物的溶液和含有CFS的溶液适合以表1-1～表1-5中相同的思路来设置。
另外，在表1-1～表1-5的情况中，当使用2种或以上CFS时，这样的情况显示，所有的CFSs(CFS-1～CFS-3)都会与分析物或其类似物结合，即2种或以上的CFS的全部结合位点仅呈现给分析物或其类似物[结合形式(1)：三明治复合物，其中Ana被CFS-1和CFS-2夹在中间]。其他情况还可以理解为：一种情况为，例如，2种CFSs(CFS-1和CFS-2)中的CFS-1与分析物或其类似物结合，CFS-2结合到分析物或其类似物与CFS-1形成的复合物产生的新位点上，换句话说，2种或以上CFS中的至少一种CFSs(例如，CFS A)的结合位点仅出现在分析物或其类似物上，而其它至少一种CFSs(例如，CFS B)的结合位点是出现在分析物或其类似物与CFSA间形成的复合物产生的新位点[结合形式(2)]；或一种情况为，例如，2种CFSs(CFS-1和CFS-2)中的CFS-1与分析物或其类似物结合，而CFS-2结合到与分析物或其类似物结合的CFS-1上，换句话说，2种或以上CFS中的至少一种CFS(例如，CFS A)的结合位点仅在分析物或其类似物上，而其它至少一种CFS(例如，CFS B)的结合位点仅出现在CFS A上，[结合形式(3)]；当夹在Ana和CFS-2间的CFS-1三明治复合物是按照结合形式(1)形成时[使用了表1-1～表1-5中2种CFS的分析物或其类似物可以读作CFS-1，表1-1～表1-5中的CFS-1也可以读作分析物或其类似物]。另外，在上述结合形式(2)和(3)中使用3种或以上CFS的情况下，或在适当地组合上述结合形式(1)～(3)的情况下，含有分析物或其类似物的溶液和含有CFS的溶液可以按照在表1-1～表1-5和上述相同的思路来进行设置。
在这一点上，在利用分析物的类似物的竞争性方法进行本发明时，也可以采用以下的设置方式；让样品中的分析物(也就是说，含有分析物的样品)和类似物[例如，用标记物标记的类似物(标记性类似物)，和与反应改良物质结合的类似物(反应改良类似物)]同时存在于相同的溶液中，并作为一种溶液区域(也就是说，含有包括分析物的样品和类似物的溶液区域)引入并设置在毛细管中；将含有分析物的样品，和含有类似物的溶液(例如，标记性类似物或反应改良类似物)引入并设置在毛细管中作为各自独立的区域(溶液)；或将含有样品中的分析物(也就是说，含有分析物的样品)和至少一种CFS的溶液，和含有类似物的溶液(例如，标记性类似物或反应改良类似物)引入并设置在毛细管中作为各自独立的区域(溶液)。
在这一点上，在上述的竞争性方法中，在毛细管中设置(1)含有包括分析物的样品和标记性类似物的溶液(含有分析物和类似物的溶液)，和含有至少一种CFSs(CFS，反应改良CFS及其组合)的溶液；或(2)含有分析物的样品(含有分析物或其类似物的溶液)，和含有标记性类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液(CFS，反应改良CFS及其组合)；或(3)含有包括分析物的样品和至少一种CFSs(CFS，反应改良CFS及其组合)的溶液，和含有标记性类似物的溶液；从而通过对通道施加电压，而在所述分析物和CFS间形成复合物A，在所述标记性类似物和CFS间形成复合物B，这些溶液的设置顺序可以按照上述说明的含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液的设置顺序，通过考虑分析物、标记性类似物和CFS的电泳迁移率来确定。另外，在毛细管中设置(1)含有包括分析物的样品和反应改良类似物的溶液(含有分析物和类似物的溶液)，和含有至少一种CFS的溶液，所述CFS具有能与分析物或其类似物形成复合物的能力，并用标记物标记(以下简称为标记性结合物或标记性CFS)；或(2)含有分析物的样品(含有分析物或类似物的溶液)，和含有反应改良类似物的溶液和含有至少一种标记性CFS的溶液；或(3)含有包括分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液，和含有反应改良类似物的溶液；从而通过对毛细管施加电压而在所述分析物和标记性CFS间形成复合物A，在所述反应改良类似物和标记性CFS之间形成复合物B，这些溶液的设置顺序可以按照上述说明的含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液的设置顺序，通过考虑分析物、反应改良类似物和标记性CFS的电泳迁移率来确定。
另外，含有分析物或其类似物的溶液，和含有至少一种CFS的溶液没有必要相邻，且可以在这些溶液之间插入液体如水、生理盐水、各种缓冲液、有机溶剂等。在这一点上，这样的缓冲液可以是不会抑制在分析物或其类似物和至少一种CFS之间形成复合物的任何溶液，包括本领域通常使用的缓冲液，例如，Tris缓冲液、Good′s缓冲液、TE缓冲液、TAE缓冲液、TBE缓冲液、TBS缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液等。
在这一点上，将含有分析物及其类似物的溶液、和含有至少一种CFS的溶液，如果需要还加上液体，形成并设置在毛细管中作为各自独立的区域。换句话说，在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液之间，且如果需要，在含有分析物或其类似物与所述液体之间或在含有至少一种CFS的溶液与所述液体之间形成液液界面，并在设置这些溶液和必要的液体时保持该界面。
在步骤(1)中，作为将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液引入毛细管的方法，可以使用任何方法，只要能在毛细管中分别形成含有分析物或其类似物的溶液区域，和含有至少一种CFS的溶液区域，而形成上述设置，换句话说，可以使用任何方法，只要能在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液之间，且如果需要，在含有分析物或其类似物的溶液与液体之间或在含有至少一种CFS的溶液与液体之间，形成液液界面，而且可以使用用于引入的已知方法。所述用于引入的已知方法包括，例如通过对毛细管施加电压，将这些溶液(和液体)电动地引入毛细管的方法；将这些溶液(和液体)引入毛细管，从而增加和/或降低毛细管内部压力的方法；利用毛细作用将这些溶液(和液体)引入毛细管的方法等。
另外，作为将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液引入和置于毛细管内的方法，可以使用用于引入和设置的已知方法。这样的用于引入和设置的已知方法包括，例如，第(1)种方法，首先利用上面描述的引入方法，将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液中的一种溶液从毛细管末端引入到毛细管内，然后类似地利用上面描述的引入方法，将一种剩余溶液从毛细管末端引入到毛细管内，重复该步骤直到所有溶液均置于毛细管内；第(2)种方法，首先将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液中的一种溶液滴到储液池(孔)中，并利用上面描述的引入方法将内容物引入毛细管中，然后将该储液池(孔)中的溶液用剩余溶液中的一种溶液替换，并利用上面描述的引入方法将内容物引入毛细管中，重复该步骤直到所有溶液均置于毛细管内；第(3)种方法，将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液分别滴到多个储液池(孔)中，利用上述的引入方法将它们分别引入到同一毛细管内，以便让所有溶液都置于毛细管内；等等。在这一点上，将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液引入毛细管的方法，和将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液引入和置于毛细管内的方法并不限于上述方法。
另外，用于将下述的：含有分析物的样品；含有含分析物的样品和标记性类似物或反应改良类似物的溶液(含有分析物和类似物的溶液)；含有分析物和至少一种CFSs(例如，CFS、标记性CFS、反应改良CFS及其组合)的溶液；含有标记性类似物的溶液；或含有反应改良类似物的溶液引入毛细管的方法与上述的用于将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液引入毛细管的方法相同。
1-2.富集反应步骤[步骤(2)]
本发明的步骤(2)是不通过(取决于)分子扩散，让所述分析物或其类似物和CFS接触，同时电泳富集所述分析物或其类似物和/或CFS，从而在所述分析物或其类似物和CFS之间形成复合物的步骤。
“在溶液(含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液)均匀混合之前”是指“在通过本发明步骤(1)将置于毛细管内的含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液，如果需要还包括液体，的各个区域(液液界面)在分子上均匀混合之前”。
在这一点上，在本发明中，“界面”是指含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液接触的边界，或如果必要是指含有分析物或其类似物的溶液与液体接触的边界或含有至少一种CFS的溶液与液体接触的边界，且由于从实际角度看存在扩散，所述界面并不需要指完全地不混合。
另外，在利用分析物的类似物的竞争性方法中，当使用标记性类似物时，上述术语是指“在通过分子扩散，将通过步骤(1)而置于毛细管内的下述区域(液液界面)充分混合之前”：(1)含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(含有分析物和类似物的溶液)和含有至少一种CFSs(CFS，反应改良CFS及其组合)的溶液，且如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)；(2)含有分析物的样品，含有标记性类似物的溶液和含有至少一种CFSs(CFS，反应改良CFS及其组合)的溶液，且如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)；或(3)含有含分析物的样品和至少一种CFSs(CFS，反应改良CFS及其组合)的溶液和含有标记性类似物的溶液，且如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)。
在利用分析物的类似物的竞争性方法中，当使用反应改良类似物时，上述术语是指“在通过分子扩散将下述区域(液液界面)充分混合之前”：(1)含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(含有分析物和类似物的溶液)和含有至少一种标记性CFS的溶液，且如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)；(2)含有分析物的样品，含有反应改良类似物的溶液和含有至少一种标记性CFS的溶液，且如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)；或(3)含有含分析物的样品和至少一种CFSs(CFS、标记性CFS及其组合)的溶液和含有反应改良类似物的溶液，且如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)。
在这一点上，“界面”与上述含义相同。
在步骤(2)中，“通过对毛细管施加电压来富集分析物或其类似物、和/或至少一种CFS”是指在对毛细管施加电压时，分析物或其类似物和至少一种CFS中的至少一种就会以带状(楔状)聚集到一起。换句话说，就是在对毛细管施加电压时，所述物质就会聚集到一起，这样就会形成在该处，该物质浓度高于步骤(1)设置区域内的该物质浓度，也就是说在对毛细管施加电压时，分析物或其类似物和/或CFS就会聚集到一起，其会形成在该处，分析物或类似物的浓度和/或CFS的浓度高于步骤(1)设置的溶液区域(例如，含有分析物或其类似物的溶液区域，含有CFS的溶液区域)内的分析物或类似物的浓度和/或CFS的浓度。
在这一点上，作为本发明的富集水平(程度)，在对毛细管施加电压时，在所述物质聚集处(带状)的分析物或其类似物和/或至少一种CFS的浓度，相对通过步骤(1)设置的区域内的分析物或其类似物和/或至少一种CFS的浓度是，下限通常不低于1.5倍，优选不低于5倍，更优选不低于10倍，且进一步优选不低于25倍，上限没有特别限定，但通常不高于107倍，优选不高于106倍且更优选不高于105倍。
另外，在本发明中，“将所述分析物或其类似物与CFS接触”是指，如上所述，分析物或其类似物和CFS进行接触不是通过(不取决于)分子扩散而是利用在分析物或其类似物和至少一种CFSs中电泳迁移率较高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率较低(电泳速度慢)的物质这一现象，该现象是利用了在将含有电泳迁移率较高(电泳速度快)的物质的溶液设在含有电泳迁移率较低(电泳速度慢)的物质的溶液上游的条件下进行电泳时，溶液中电泳迁移率较高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率较低(电泳速度慢)的物质的事实。
也就是说，在本发明的步骤(2)中，溶液中的分析物或其类似物，和溶液中的CFS是通过电泳移动(迁移)而接触，而没有通过(取决于)置于毛细管内的含有分析物及其类似物的溶液和含有至少一种CFSs的溶液，且如果必要还包括液体静置时产生的分子扩散而混合，或也没有通过在毛细管内的其物理混合。
如上所述，本发明的步骤(2)，在通过分子扩散而将含有分析物或其类似物的溶液和含有CFSs的溶液，且如果必要还和液体一起，均匀混合之前，且进一步在没有将它们在毛细管内物理地均匀混合之前，换句话说，保持这些相邻溶液之间的液液界面，且如果必要保持液体和溶液之间的液液界面，通过将溶液中的分析物或其类似物和溶液中的CFS电泳迁移，而在电泳富集分析物或其类似物和/或CFS的同时让它们接触，在所述分析物或其类似物和CFS之间形成复合物。
在本发明中，“通过对毛细管施加电压，而让所述分析物或其类似物与CFS接触，同时富集所述分析物或其类似物和/或至少一种CFS”是指以下两种情况：第(1)种情况，上述的分析物或其类似物和/或CFS的富集，和分析物或其类似物与CFS的接触同时进行；或第(2)种情况，在基本完成上述的分析物或其类似物和/或CFS的富集之后，再让分析物或其类似物和CFS接触。因此，该术语包括除了在基本上完成分析物或其类似物和CFS间接触之后，让分析物或其类似物和/或CFS富集的情况之外的情况。
换句话说，本发明的步骤(2)可以通过在下述条件下，对所述毛细管施加电压而进行，所述条件是在将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFSs的溶液均匀混合之前，通过如上所述的对所述毛细管施加电压，让所述分析物或其类似物和CFS接触，同时如上所述的富集所述分析物或其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或其类似物和CFS之间形成复合物。
具体地说，所述条件是在富集毛细管内物质的所谓电泳富集法中使用的条件。
电泳富集方法包括，例如，利用毛细管内电泳迁移率差异的方法例如(1)场放大样品堆集法(FASS)[US-A-2003-0057092 A1；Weiss，D.J.，Saunders，K.，Lunte，C.E.Electrophoresis 2001，22，59-65；Britz-McKibbin，P.，Bebault，G.M.，Chen，D.D.Y.Anal Chem.2000，72，1729-1735；Ross，D.，Locascio，L.E.Anal Chem.2002，71，5137-5145等]；(2)场放大进样法(FASI)[Chien，R.L等J.Chromatogr.1991，559，141-148等]；(3)等速电泳(ITP)[Everaerts，F.M.，Geurts，M.Mikkers，F.E.P.，Verheggen，T.P.E.M JChromatogr.1976，119，129-155；Mikkers，F.E.P.，Everaerts，F.M.，Peek，J.A.F.J.Chromatogr.1979，168，293-315；Mikkers，F.E.P.，Everaerts，F.M.，Peek，J.A.F.J.Chromatogr.1979，168，317-332；Hirokawa，T，Okamoto，H.Ikuta，N.，和Gas，B.，Analytical Sciences 2001，Vol.17 Supplement il85等]；(4)等电聚焦方法(IF)[WehrT等，Am.Biotechnol.Lab.1990，8，22；Kilar F.等，Electrophoresis 1989，10，23-29等]；(5)大体积样品堆积法(LVSS)[Siri，N.等，J.Chormatogr.B，(2003)，793，151-157等]；(6)pH界面方法(pH-介导性堆集)[P.Britz-McKibbin等，2000，Anal.Chem.，72，1242，P.Britz-McKibbin等，2002，Anal.Chem.，74，3736]；(7)扫描法(Sweepingmethod)(富集胶束电动色谱)[J.P.Quirino等，1998，Science，282，465，J.P.Quirino等，1999，Anal.Chem.，71，1638，Y.Sera等，2001，Electrophoresis，22，3509]；等，但并不限于此。
在上述的电泳富集法中，优选如ITP、FASS，特别优选ITP。
在这一点上，ITP的理论基础是，当目标物质夹在含有电泳速度比目标物质快的先导离子的电泳介质(先导缓冲液)，和含有电泳速度比目标物质慢的拖尾离子的电泳介质(拖尾缓冲液)之间进行电泳时，可以富集目标物质。
因此，在通过ITP进行本发明的步骤(2)时，至少含有电泳速度比分析物或其类似物和/或至少一种CFSs快的先导离子的电泳介质(先导缓冲液)，和含有电泳速度比分析物或其类似物和/或至少一种CFS慢的拖尾离子的电泳介质(拖尾缓冲液)是必需的，而且这些组分也包括在本发明的“富集分析物或其类似物和/或至少一种CFSs的条件”中。
在这一点上，先导缓冲液是设置在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液中的位于毛细管最下游溶液的进一步下游侧，拖尾缓冲液是设置在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液中的位于毛细管最上游溶液的进一步上游侧。
在上述说明中，作为先导离子，可以使用任何电泳速度比分析物或其类似物和/或至少一种CFSs快的离子，而且可以适当地选自本领域的常用离子。所述离子包括例如，Cl-等。另外，先导离子的使用浓度也可以适当地选自本领域常用的范围。使用浓度通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM。
而且，使用的包括所述先导离子的先导缓冲液可以适当地选自本领域的常用缓冲液，例如包括Good′s缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸缓冲液、组氨酸缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液等。其使用浓度和pH可以适当地选自本领域常用的使用浓度和pH，使用浓度如通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM，pH通常为2～12，优选4～10且更优选6～9。
在上述说明中，作为拖尾离子，可以使用任何电泳速度比分析物或其类似物和/或至少一种CFSs慢的离子，而且可以适当地选自本领域的常用离子。所述离子包括例如，Good′s缓冲液如HEPES、TAPS、MES、MOPS等，氨基酸如甘氨酸、苏氨酸等。另外，拖尾离子的使用浓度也可以适当地选自本领域的常用范围。使用浓度如通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM。
而且，使用的包括所述拖尾离子的拖尾缓冲液可以适当地选自本领域的常用缓冲液，例如包括Good′s缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸缓冲液、组氨酸缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液等。其使用浓度和pH可以适当地选自本领域常用的使用浓度和pH，使用浓度通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM，pH通常为2～12，优选4～10且更优选6～9。
在这一点上，上述条件(先导离子、先导缓冲液、拖尾离子、拖尾缓冲液等)，其他试剂、操作方法、其他条件等都可以根据上述参考中的描述来进行选择。
FASS、FASI和LVSS的理论基础是，当目标物质到达含有目标物质的介质，和比目标物质所在介质的电导率高的介质之间的界面时，目标物质的电泳迁移率就会降低，而且该目标物质就会富集。
因此，当通过FASS、LVSS或FASI进行本发明的步骤(2)时，要求在含有分析物或其类似物的溶液，和含有至少一种CFSs的溶液中，至少有一种溶液的电导率高于其余的至少一种溶液；或要求单独使用电导率高于含有分析物或其类似物的溶液和/或含有至少一种CFSs的溶液的电泳介质(高电导率电泳介质)，而且这些组分也包括在本发明的“富集分析物或其类似物和/或至少一种CFSs的条件”中。
在这一点上，高电导率电泳介质设置在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFSs的溶液中的位于毛细管最下游溶液的进一步下游侧。
另外，高电导率电泳介质可以是任何介质，只要其盐浓度比含有分析物或其类似物的溶液，和/或含有至少一种CFSs的溶液高，而且可以适当地选自本领域的常用介质。所述高电导率电泳介质，包括例如，含NaCl、KCl等的电泳介质。电泳介质包括例如，Good’s缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸缓冲液、组氨酸缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液等。其使用浓度和pH可以适当地选自本领域常用的使用浓度和pH，使用浓度通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM，pH通常为2～12，优选4～10且更优选6～9。
在这一点上，上述条件(高电导率电泳介质等)、其他试剂、操作方法、其他条件等可以适当地根据上述参考中的描述来进行选择。
IF的理论基础是，通过用各种等电点的两性物质溶液填充毛细管(通道)，然后通过施加电压而在毛细管(通道)中形成pH梯度，当目标物质到达相应等电点的pH区域时，目标物质就会富集。
因此，当利用IF进行本发明的步骤(2)时，至少要求可以在毛细管中形成pH梯度的电泳介质，而且该物质也包括在本发明的“让分析物或其类似物和/或至少一种CFSs富集的条件”中。
在上述说明中，作为可在毛细管中形成pH梯度的电泳介质，任何通过适当地从本领域常用的介质中进行选择，通过施加电压而在毛细管内形成pH梯度的电泳介质都是可以使用的。所述的可在毛细管中形成pH梯度的电泳介质可以包括例如，含有可在毛细管中形成pH梯度的物质的电泳介质，如两性电介质。所述电泳介质包括例如，Good’s缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸缓冲液、组氨酸缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液等。其使用浓度和pH可以适当地选自本领域的常用使用浓度和pH，使用浓度通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM。
在这一点上，上述条件(含有可在毛细管中形成pH梯度的物质的电泳介质等)、其他试剂、操作方法、其他条件等可以根据上述参考中的描述来进行选择。
pH界面法是通过在碱性电泳介质中形成酸性或弱酸性样品区(区域)，而在样品和碱性电泳介质间的界面处进行样品内的目标物质富集的方法。
因此，当通过pH界面法进行本发明的步骤(2)时，至少要求电泳介质比含有样品的溶液的pH更偏碱性，且该组分也包括在本发明的“让分析物或其类似物和/或至少一种CFSs富集的条件”中。
在上述说明中，作为具有碱性pH的电泳介质，任何通过适当地从本领域的常用电泳介质中进行选择，通过施加电压而可在毛细管内的含有样品的溶液和所述电泳介质之间形成pH不同的界面的电泳介质都是可以使用的。这样的电泳介质包括例如，Good’s缓冲液如HEPES、TAPS、MES、MOPS等，硼酸缓冲液，磷酸缓冲液，组氨酸缓冲液，咪唑缓冲液，甘氨酸缓冲液等。其使用浓度和pH可以适当地选自本领域的常用使用浓度和pH，使用浓度通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM，pH通常为7～11，优选7～10且更优选7～9。
在这一点上，上述条件(具有碱性pH的电泳介质等)其他试剂、操作方法、其他条件等都可以根据上述参考中的描述来进行选择。
扫描法是基于以下原理：
即，含有形成胶束的带电物质的电泳介质设置在包括目标物质的溶液区域的上游。通过施加电压，所形成的胶束会追上目标物质，并与目标物质形成胶束复合物。当该胶束复合物到达目标物质所在介质和电导率高于目标物质所在介质的介质之间的界面时，目标物质的电泳速度会降低，而使目标物质富集。
因此，当通过扫描法来进行本发明的步骤(2)时，要求在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFSs的溶液中，至少有一种溶液的电导率要高于该溶液的其它至少一种溶液；或要求单独使用电导率高于含有分析物或其类似物的溶液和/或含有至少一种CFSs的溶液的电泳介质(高电导率电泳介质)；而且要求电泳介质包括能形成胶束的电泳速度要高于分析物或其类似物和/或至少一种CFS的带电物质，并且具有的电导率低于具有较高电导率的溶液(或电泳介质)；且这些组分也可以包括在本发明的“让分析物或其类似物和/或至少一种CFSs富集的条件”中。
在这一点上，高电导率电泳介质设置在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFSs的溶液中的位于毛细管最下游溶液的进一步下游侧，且含有形成胶束的带电物质的电泳介质设置在含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液中的位于毛细管最上游溶液的进一步上游侧。
在上述说明中，可以使用任何带电物质作为形成胶束的带电物质，只要该带电物质的电泳速度比分析物或其类似物和/或至少一种CFSs的电泳速度快，而且可以适当地从本领域的常用带电物质中进行选择。所述带电物质包括例如，表面活性剂如SDS等。另外，所述带电物质的使用浓度可以适当地选自本领域的常用范围，而且用量要超过临界的胶束浓度，更具体地说，所述带电物质的使用浓度通常为例如1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM。
使用的电泳介质也可以适当地选自本领域的常用带电物质，例如Good’s缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸缓冲液、组氨酸缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液等。其使用浓度和pH可以适当地选自本领域的常用使用浓度和pH，且使用浓度通常为1μM～10M，优选100μM～1M，且更优选1mM～500mM，pH通常为2～12，优选4～10且更优选6～9。
在这一点上，上述条件[形成胶束的带电物质、电泳介质等]、其他试剂、操作方法、其他条件等可以适当地根据上述参考中的描述进行选择。
步骤(2)中施加的电压可以在能让分析物或其类似物和/或CFS足以富集，且在分析物或其类似物和CFS间足以形成复合物的范围内，而且可以适当地选自本领域的常用范围。更具体地说，施加的电压从而使电场强度在以下范围内：下限通常不低于5V/cm，优选不低于10V/cm，更优选不低于50V/cm，进一步优选不低于500V/cm，且特别优选不低于1000V/cm，上限通常不高于10000V/cm，优选不高于5000V/cm，更优选不高于2000V/cm。
另外，其他反应条件(例如，pH、温度、时间等)优选在不抑制分析物或其类似物和/或CFS富集，和在分析物或其类似物和CFS间形成复合物的范围内。
具体地说，虽然由于取决于分析物或其类似物和CFS的性质，而不能简单地说明，但pH的下限通常不低于2，优选不低于5，pH的上限通常不高于10，且优选不高于9；温度的下限通常不低于0℃，优选不低于5℃，更优选不低于10℃，且温度的上限通常不高于50℃，优选不高于40℃，且更优选不高于30℃。反应时间取决于所用CFS与分析物或其类似物的键常数，且相对低的键常数需要相对较长的反应时间，相对高的键常数需要相对较短的反应时间。更具体地说，例如，下限通常不短于1分钟，优选不短于3分钟，更优选不短于5分钟；上限通常不长于24小时，优选不长于12小时，更优选不长于1小时，且进一步优选不长于30分钟。
1-3.毛细管(通道)
本发明所用的毛细管(通道)是本领域如毛细管电泳法，毛细管芯片电泳法等中的任意常用毛细管(通道)，而且并无特殊限制。
本发明所用的毛细管(通道)材料是本领域的任意常用材料，且并无特殊限制，只要它能通过让分析物或其类似物和至少一种CFSs接触，而在分析物或其类似物和至少一种CFSs间最终形成复合物。毛细管(通道)材料的实例为例如，硅石类化合物如玻璃、石英和硅，合成聚合物如环烯烃共聚物(COC)、环烯烃聚合物(COP)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基硅氧烷、聚氯乙烯、聚氨酯、聚苯乙烯、聚砜、聚碳酸酯、聚四氟乙烯等。另外，毛细管(通道)的内径和长度并无特别限定，只要其足以富集分析物或其类似物和/或CFS，并在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物即可。例如，内径通常为1～1000μm，优选1～200μm且更优选1～100μm，且长度通常为0.1mm～100cm，优选0.1mm～20cm且更优选0.1mm～10cm。
本发明的步骤(2)通常在上述毛细管用电泳介质填充的状态下进行。电泳介质包括用于电泳的缓冲液或含有填料的用于电泳的所述缓冲液等。在这一点上，电泳介质可以单独使用或两种或多种组合使用。另外，将电泳介质引入毛细管的方法，包括如上所述的将含有分析物或其类似物的溶液和含有至少一种CFSs的溶液引入毛细管的方法。下列的任意一种将电泳介质引入毛细管的时间都是可以采用的：(1)在将含有分析物或其类似物的溶液，和/或含有至少一种CFSs的溶液引入毛细管之前；(2)在将含有分析物或其类似物的溶液，和/或含有至少一种CFSs的溶液引入毛细管的同时；和(3)在将含有分析物或其类似物的溶液，和/或含有至少一种CFSs的溶液引入毛细管之后。
对于所述的用于电泳的缓冲液没有特别限定，只要是本领域常用的即可。用于电泳的缓冲液的实例是例如，在杂交法、免疫等领域常用的缓冲液等，如Tris缓冲液、磷酸缓冲液、佛罗那(Veronal)缓冲液、硼酸缓冲液、Good′s缓冲液、SSC缓冲液、TBE缓冲液、TAE缓冲液等。这些缓冲液的浓度通常为0.1mM～10M，优选1mM～5M，且更优选5mM～1M。另外，所述缓冲液的任何pH都可以使用，只要其不对物质分离有不良作用即可，且通常为2～13，优选4～11且更优选5～9。在这一点上，这些缓冲液可以单独使用或2种或以上组合使用。
毛细管中的填料(聚合物)并不特别限定，只要是本领域常用的即可。填料的实例为，例如，聚醚例如聚氧乙烯(聚乙二醇)、聚氧丙烯；聚烷撑亚胺例如聚乙烯亚胺；聚丙烯酸聚合物例如聚丙烯酸、聚丙烯酸酯和聚(丙烯酸甲酯)；聚酰胺类聚合物例如聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺；聚甲基丙烯酸类聚合物例如聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸酯和聚(甲基丙烯酸甲酯)；聚乙烯类聚合物例如聚醋酸乙烯酯、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯噁唑烷酮；水溶羟基聚合物例如支链淀粉、痂囊腔菌多糖、黄原胶、右旋糖苷和瓜尔胶；水溶纤维素化合物例如甲基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基纤维素；及其衍生物，和具有多种含这些聚合物的单体单元的共聚物等。在这一点上，这些填料可以单独使用，也可以两种或多种组合使用。
上述填料的分子量通常为500Da～6000kDa，优选1～1000kDa且更优选50～500kDa。
上述填料的使用浓度可以适当地选自本领域的常用范围，通常为0.01～40％(w/v)，优选0.01～20％(w/v)，且更优选0.1～10％(w/v)。
在这一点上，当将上述填料加入到缓冲液时，用于电泳的缓冲液的粘度通常为1～1000厘泊，优选1～200厘泊，且更优选1～10厘泊。
1-4.分析物、样品、类似物和含有分析物或类似物的溶液
(1)分析物
本发明的分析物包括，例如，核苷酸链(寡核苷酸链和多核苷酸链等)；染色体；肽链(C-肽和血管紧张素I等)，蛋白[血清降钙素原、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)、β2-微球蛋白、清蛋白、其分解产物、和血清蛋白如铁蛋白等]；酶[淀粉酶(胰腺型、唾液腺型和X-型等)、碱性磷酸酶(肝的、骨的、胎盘的和小肠的等)、酸性磷酸酶(PAP等)、γ-谷氨酰转移酶(肾的、胰腺的和肝的等)、脂肪酶(胰腺型和胃型等)、肌酸激酶(CK-I、CK-2和mCK等)、乳酸脱氢酶(LDH1～LDH5等)、谷氨酸草酰乙酸酯氨基移转酶(ASTm和ASTs等)、谷氨酸-丙酮酸酯氨基移转酶(ALTm和ALTs等)、胆碱酯酶(ChE1～ChE5等)、亮氨酸氨肽酶(C-LAP、AA和CAP等)、肾素、蛋白激酶和酪氨酸激酶等]；微生物如细菌(肺结核细菌、肺炎球菌生物体、白喉生物体、脑膜炎球菌、淋球菌、葡萄球菌、链球菌、肠细菌、大肠杆菌和幽门螺杆菌等)，病毒(风疹病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、ATL病毒、AIDS病毒、流感病毒、腺病毒、肠病毒、脊髓灰质炎病毒、EB病毒、HAV、HBV、HCV、HIV和HTLV等)，真菌(假丝酵母(Candida)和隐球酵母(Cryptococcus)等)，螺旋体(钩端螺旋体(leptospire)、梅毒螺旋体(Treponemapallidum)等)，衣原体和支原体；衍生自所述微生物的蛋白、肽或糖类抗原；各种抗原引起的支气管痉挛、过敏性鼻炎和特应性皮炎等(源自室内灰尘、螨如粉尘螨(Dermatophagoides farinae)和屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus))等，来自雪松、柏树、雀稗(Pasupalum thunbergii)、豚草、梯牧草(timothy)、黄花草、和黑麦等的花粉，如猫、狗或蟹等的动物，如米和蛋白等的食品，真菌、昆虫、木材、药物或化学物质等的过敏原)；脂质(脂蛋白等)；蛋白酶(胰蛋白酶、纤溶酶和丝氨酸蛋白酶等)；蛋白抗原肿瘤标志物(PSA，PGI和PGII等)；糖类抗原[AFP(L1～L3等)、hCG(hCG族等)、转铁蛋白、IgG、甲状腺球蛋白、衰变加速因子(DAF)、癌胚抗原(CEA、NCA、NCA-2和NFA等)、CA19-9、PIVKA-II、CA125、前列腺-特异性抗原、具有由癌细胞产生的特殊糖类(糖)链和ABO糖类抗原的糖类抗原肿瘤标志物等]；糖类(糖)链[包括在上述糖类抗原中的透明质酸，β-葡聚糖和糖类(糖)链等]；糖类(糖)链结合蛋白(透明质酸结合蛋白和β-葡聚糖结合蛋白等)；凝集素(伴刀豆球蛋白A、扁豆凝集素、菜豆凝集素、曼陀罗凝集素和麦芽凝集素等)；磷脂(心磷脂等)；脂多糖(内毒素等)；化学物质(激素，如PTH、T3、T4、TSH、胰岛素、LH、FSH和促乳素等，内分泌紊乱化学药品如三丁锡、壬基苯酚、4-辛基苯酚、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二环己酯、二苯甲酮、八氯苯乙烯和邻苯二甲酸二2-乙基己酯等)；受体(雌激素和TSH的受体等)；配体(雌激素和TSH等)；及其抗体等。
其中，本发明的方法可用于对具有不同糖类(糖)链、核苷酸链(寡核苷酸链和多核苷酸链)和肽链(包括多肽)结构的糖蛋白进行分析(定量测定)，特别适用于分析具有不同糖类(糖)链结构的糖蛋白。在这一点上，由于已知糖类(糖)链结构会在特定疾病(例如癌)中发生改变，而且据报道它在临床实验室(临床化学)中有用，因此可以利用本发明的方法来对具有不同糖类(糖)链结构的糖蛋白的临床实验室(临床化学)有效性进行重新评价。另外，把从野生型中将由于核苷酸链(寡核苷酸链或多核苷酸链)或肽链(包括多肽)等的微小突变或取代而产生的突变型分离出来，作为是分子生物学和分子临床实验室(临床化学)领域的重要分析目标，因此，通过利用本发明的方法来对这些突变型和/或野生型进行分析(定量测定)，可以增加发现临床实验室(临床化学)中的某些有价值因素等的可能性。
(2)含有分析物的样品
上述描述的本发明的含有分析物的样品实例包括：源自生物体的样品，包括体液如血清、血浆、髓液、滑液、淋巴液等、排泄物如尿、粪(feces)等、痰、脓物质、皮屑，环境样品如食品、饮料、自来水、海水、湖水和湿地水、河水、工业废水、半导体洗液、洗医学仪器的洗液等；及其通过溶解在水或本领域常用缓冲液中而再生的加工产品，所述缓冲液例如Tris缓冲液、磷酸缓冲液、佛罗那缓冲液、硼酸缓冲液、Good′s缓冲液等。在这一点上，本发明的相关样品包括通过化学合成得到的含上述分析物的样品。
(3)类似物(标记性类似物和反应改良类似物)
本发明所用的类似物是可与结合样品中用于分析靶分析物的CFS结合的物质。换句话说，类似物是具有与所述样品中分析物结合的CFS的结合位点一样结合位点的物质。
这样的物质包括，例如，与样品中的分析物(分析靶标)一样的物质；样品中的分析物的部分结构被修饰、改变、变性、除去等的物质(通常所说的类似物)；等。物质的实例为，例如，在样品中的分析物(分析靶标)上引入部分突变的重组蛋白；样品中的分析物(分析靶标)有部分修饰的肽序列的肽；样品中的分析物(分析靶标)有部分修饰的核苷酸序列的核苷酸链；等。在这一点上，样品中的分析物(分析靶标)的具体实例如上所述。
在这一点上，本发明所用的标记性类似物和反应改良类似物是与上述物质结合的标记物或反应改良物，且标记物和反应改良物的具体实例和优选的实施方式如下文所述。另外，使标记物或反应改良物与上述物质结合的方法可以是与使反应改良物和CFS之间发生结合的方法或用标记物来标记性CFS的方法相似的方法，下文将会进行描述。
类似物(标记性类似物或反应改良类似物)的使用量不能简单地说明，因为它取决于要用的类似物(标记性类似物或反应改良类似物)的种类，或CFS的种类或使用浓度等。
更具体地说，类似物(标记性类似物或反应改良类似物)可以包含在溶液(例如，含有分析物和类似物的溶液、含有类似物的溶液、含有类似物和CFS的溶液)中，这样，如上所述，溶液中类似物(标记性类似物或反应改良类似物)的使用量下限通常不低于10pM，优选不低于1nM且更优选不低于100nM，且上限通常不高于10μM，优选不高于1μM且更优选不高于500nM。
(4)含有分析物或类似物的溶液
如上所述，在本发明中“含有分析物或类似物的溶液”是指含有本发明的分析物(含有分析物的样品)或类似物(标记性类似物或反应改良类似物)的溶液。
这样的溶液包括(a)如上所述的含有分析物的样品，(b)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液(换句话说，含有在分析物和至少一种CFS之间的复合物的溶液)，(c)含有类似物的溶液(标记性类似物或反应改良类似物)，(d)含有含分析物的样品和类似物的溶液(标记性类似物或反应改良类似物)(换句话说，含有分析物和类似物的溶液)，(e)含有类似物(标记性类似物或反应改良类似物)和至少一种CFS的溶液(换句话说，含有在类似物和至少一种CFS之间的复合物的溶液)，(f)含有含分析物的样品、类似物(标记性类似物或反应改良类似物)和至少一种CFS的溶液等。
在这一点上，作为上述溶液(b)或(e)，当在本发明中使用2种或以上CFS时，特别包括含有由最终与分析物或其类似物结合的所有CFS中的一部分CFSs(所有CFS中的一部分)与分析物或其类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液，换句话说，含有由少于组成最终形成复合物的CFS的CFS与分析物或其类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液，所述最终形成的复合物在分析物或其类似物和2种或以上CFSs间。
也就是说，例如，当使用2种CFS时，它是含有由一种CFS与分析物或其类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液。例如，当使用3种CFS时，它是含有由一种CFS与分析物或其类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液，和含有由2种CFS与分析物或其类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液。(在此情况下，当使用4种或以上CFS时，按照此情况的思路考虑。)
更具体地说，例如，如下所述，当不与标记物和反应改良物结合的CFS与反应改良CFS组合作为CFS使用时，含有由分析物和所述CFS形成的复合物(中间体复合物)的溶液，和含有由分析物和反应改良CFS形成的复合物(中间体复合物)的溶液对应上述溶液(b)；当组合使用标记性CFS和反应改良CFS作为CFS时，含有由分析物和标记性CFS形成的复合物(中间体复合物)的溶液，和含有由分析物和反应改良CFS形成的复合物(中间体复合物)的溶液对应上述溶液(b)。另外，当不与标记物和反应改良物结合的CFS和标记性反应改良CFS组合使用作为CFS时，含有由分析物和所述CFS形成的复合物(中间体复合物)的溶液，和含有由分析物和标记性反应改良CFS形成的复合物(中间体复合物)的溶液对应上述溶液(b)。
在这一点上，在上述说明中，通常含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液一般是将含有上述的分析物的样品(不包括CFS)与如下所述的含有CFS的溶液适当混合而得到的反应溶液。
上述溶液(e)包括，更具体地说，例如，当使用标记性类似物或反应改良类似物时，且当使用2种或以上CFS时，与如上所述相似，含有由最终与标记性类似物或反应改良类似物结合的所有CFS中的一部分CFSs(所有CFS中的一部分)与标记性类似物或反应改良类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液，换句话说，含有由少于组成最终形成的复合物的CFS的CFS与标记性类似物或反应改良类似物形成的复合物(中间体复合物)的溶液，所述最终形成的复合物由标记性类似物或反应改良类似物与2种或以上CFS形成。在这一点上，在上述说明中，通常含有类似物的溶液(标记性类似物或反应改良类似物)一般是将含有标记性类似物或反应改良类似物的溶液与如下所述的含有CFS的溶液适当混合而得到的反应溶液。
另外，作为上述溶液(d)，例如，包括含有样品中的分析物，和用标记物标记的类似物(标记性类似物)或与反应改良物结合的类似物(反应改良类似物)的溶液。在这一点上，含有含分析物的样品和类似物的溶液通常是将含有分析物的样品(不包括CFS)与含有类似物的溶液适当混合而得到的混合溶液。
作为上述溶液(f)，更具体地说，例如，当使用标记性类似物或反应改良类似物，且当使用2种或以上CFS时，与如上所述相似，溶液包括由最终与分析物和/或标记性类似物(或反应改良类似物)结合的所有CFS中的一部分CFSs(所有CFS中的一部分)与分析物和/或标记性类似物(或反应改良类似物)形成的复合物(中间体复合物)，换句话说，含有由少于组成最终形成复合物的CFS的CFS与分析物和/或标记性类似物(或反应改良类似物)形成的复合物(中间体复合物)的溶液，所述最终形成的复合物由分析物和/或标记性类似物(或反应改良类似物)与2种或以上CFS形成。在这一点上，含有含分析物的样品、类似物(标记性类似物或反应改良类似物)和至少一种CFS的溶液通常是通过将含有含上述分析物的样品的溶液、含标记性类似物或反应改良类似物的溶液和含有至少一种CFS的溶液适当混合而得到的反应溶液。
在上述说明中，(a)含有分析物的样品如上所述。另外，作为溶液(b)～(F)，只要其不抑制在分析物与CFS之间形成复合物，和/或在类似物(标记性类似物或反应改良类似物)与CFS之间形成复合物，就可以使用任何溶液，例如，水、缓冲液等。
作为这样的缓冲液，一般包括通常在pH范围5～11时具有缓冲作用且为本领域所常用的缓冲液。缓冲液的实例包括Tris缓冲液、Good′s缓冲液、TE缓冲液、TAE缓冲液、TBE缓冲液、TBS缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液等，且其使用浓度通常为1mM～2M，且优选10mM～1M，且pH通常为5～11，优选5～10，更优选5.5～8.5，进一步优选6～8，且特别优选7左右。
1-5.CFS和含有CFS的溶液
在本发明中，“可与分析物或其类似物(CFS)形成复合物的物质”指具有能在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物的能力的物质，也就是说，通过与上述的分析物或其类似物结合，或通过其它CFS与分析物或其类似物结合而形成含有分析物或其类似物和CFS的复合物。
这样的CFS指通过相互作用与分析物或其类似物结合的物质，所述相互作用例如″抗原″-″抗体″反应、″糖类(糖)链″-″蛋白″反应、″糖类(糖)链″-″凝集素″反应、″酶″-″抑制剂″反应、″蛋白″-″肽链″反应或″染色体或核苷酸链″-″核苷酸链″反应等。当上述配对物质中一个为分析物或其类似物时，那另一个就为CFS。例如，当分析物或其类似物为″抗原″时，CFS为″抗体″，当分析物或其类似物为″抗体″时，CFS为″抗原″(其他配对同理)。
更具体地说，这样的物质包括，例如，核苷酸链(寡核苷酸链和多核苷酸链等)；染色体；肽链(C-肽和血管紧张素I等)，蛋白[血清降钙素原、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)、β2-微球蛋白、清蛋白、其分解产物、和血清蛋白(如铁蛋白等)]；酶[淀粉酶(胰腺型、唾液腺型和X-型等)、碱性磷酸酶(肝的、骨的、胎盘的和小肠的等)、酸性磷酸酶(PAP等)、γ-谷氨酰转移酶(肾的、胰腺的和肝的等)、脂肪酶(胰腺型和胃型等)、肌酸激酶(CK-I、CK-2和mCK等)、乳酸脱氢酶(LDH1～LDH5等)、谷氨酸草酰乙酸氨基移转酶(ASTm和ASTs等)、谷氨酸-丙酮酸氨基移转酶(ALTm和ALTs等)、胆碱酯酶(ChE1～ChE5等)、亮氨酸氨肽酶(C-LAP、AA和CAP等)、肾素、蛋白激酶和酪氨酸激酶等]；微生物如细菌(肺结核细菌、肺炎球菌生物体、白喉生物体、脑膜炎球菌、淋球菌、葡萄球菌、链球菌、肠细菌、大肠杆菌和幽门螺杆菌等)，病毒(风疹病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、ATL病毒、AIDS病毒、流感病毒、腺病毒、肠病毒、脊髓灰质炎病毒、EB病毒、HAV、HBV、HCV、HIV和HTLV等)，真菌(假丝酵母(Candida)和隐球酵母(Cryptococcus)等)，螺旋体(钩端螺旋体(leptospire)、梅毒螺旋体(Treponemapallidum)等)，衣原体和支原体；衍生自所述微生物的蛋白、肽或糖类抗原；各种抗原引起的支气管痉挛、过敏性鼻炎和特应性皮炎等(源自室内灰尘、螨如粉尘螨(Dermatophagoides farinae)和屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus))等，来自雪松、柏树、雀稗(Pasupalum thunbergii)、豚草、梯牧草(timothy)、黄花草、和黑麦等的花粉，如猫、狗或蟹等的动物，如米和蛋白等的食品，真菌、昆虫、木材、药物或化学物质等的过敏原)；脂质(脂蛋白等)；蛋白酶(胰蛋白酶、纤溶酶和丝氨酸蛋白酶等)；肿瘤标志物蛋白抗原(肿瘤标记物蛋白抗原？)(PSA，PGI和PGII等)；糖类抗原[AFP(L1～L3等)、hCG(hCG族等)、转铁蛋白、IgG、甲状腺球蛋白、衰变加速因子(DAF)、癌胚抗原(CEA、NCA、NCA-2和NFA等)、CA19-9、PIVKA-II、CA125、前列腺-特异性抗原、含有由癌细胞产生的特殊糖类(糖)链的糖类抗原肿瘤标志物和ABO糖类抗原等]；糖类(糖)链[透明质酸，β-葡聚糖和包括在上述糖类抗原中的糖类(糖)链等]；糖类(糖)链结合蛋白(透明质酸结合蛋白和β-葡聚糖结合蛋白等)；凝集素(伴刀豆球蛋白A、扁豆凝集素、菜豆凝集素、曼陀罗凝集素和麦芽凝集素等)；磷脂(心磷脂等)；脂多糖(内毒素等)；化学物质(激素如PTH、T3、T4、TSH、胰岛素、LH、FSH和促乳素等，内分泌紊乱化学药品如三丁锡、壬基苯酚、4-辛基苯酚、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二环己酯、二苯甲酮、八氯苯乙烯和邻苯二甲酸二2-乙基己酯等)；受体(雌激素和TSH的受体等)；配体(雌激素和TSH等)；及其抗体等。在这一点上，本发明所用的抗体包括分解产物，例如通过用蛋白水解酶(蛋白酶等)如木瓜酶或胃蛋白酶降解或通过化学降解而得到的Fab和F(ab′)2片段等。
上述CFS可以单独使用，也可以两种或多种组合使用。
在这一点上，当使用2种或以上CFS的组合时，每个CFS的结合位点没有特别的限定，只要2种或以上的CFS可以与分析物或其类似物形成复合物即可。结合这些CFS的结合位点包括，例如，与2个或以上CFSs结合的所有结合位点都存在于分析物或其类似物上[结合形式(1)]；让2个或以上CFS中的至少一种CFS(例如，CFS A)结合的结合位点仅存在于分析物或其类似物上，而与另一个至少一种CFS(例如，复合物结合物B)结合的结合位点存在于由在分析物或其类似物和CFS A间形成的复合物新生的位点上[结合形式(2)]；和与2个或以上CFS中的至少一种CFS(例如，CFS A)结合的结合位点仅存在于分析物或其类似物上，而与另一个至少一种CFS(例如，CFS B)结合的结合位点仅存在于CFS A上[结合形式(3)]。其中，优选分别与2个或以上CFS结合的结合位点是不同的。在这一点上，在结合形式(2)中，具有能特异性结合新生位点(CFS)的特性的物质有，例如，抗体、肽链和核苷酸链等，它能识别分析物或其类似物与CFS间的复合物，而且能与之结合。
作为上述的CFS，优选与分析物或其类似物通过″抗原″-″抗体″反应或″糖类(糖)链″-″蛋白″反应结合的CFS。具体地说，优选分析物或其类似物的抗体、或与分析物或其类似物结合的抗原、或与分析物或其类似物结合的蛋白，更优选分析物或其类似物的抗体、或与分析物或其类似物结合的蛋白。
上述CFS可以与标记物和/或能改变分析物或其类似物的电泳迁移率的物质(后面简称为反应改良物)结合，并会得到(1)具有与分析物或其类似物形成复合物和能改变分析物或其类似物的电泳迁移率的能力的CFS(后面简称为反应改良CFS)，(2)具有与分析物或其类似物形成复合物能力并用标记物标记的CFS(标记性CFS)，和(3)用标记物标记并具有能与分析物或其类似物形成复合物和能改变分析物或其类似物电泳迁移率的能力的CFS(标记性反应改良CFS)。
通过利用与反应改良物结合的CFS，可以改变CFS的电泳迁移率，而且可以随意地控制步骤(1)中的含有分析物或其类似物的溶液，和含有至少一种CFS的溶液的设置顺序，从而提高分析物或其类似物和/或CFS的富集和分析物或其类似物与CFS的反应效率(复合物形成反应)。
另外，通过利用与标记物结合的CFS，可以测量(检测)样品中的分析物。
(1)反应改良CFS
反应改良CFS是具有能在分析物或其类似物和物质间形成复合物，并能改变分析物或其类似物的电泳迁移率的能力的物质，换句话说，是具有能通过与分析物或其类似物形成复合物而使所述分析物或其类似物的相应电泳操作性质的行为(电泳迁移率)发生变化的能力的物质，并且能让分析物或其类似物和反应改良CFS间的复合物(或分析物或其类似物与除了反应改良CFS以外的CFS间的复合物)的电泳迁移率高于或低于分析物或其类似物本身(未与反应改良CFS结合的分析物或其类似物)的电泳迁移率(电泳迁移率快或慢)。
作为所述的反应改良CFS，上述CFS通常与下列的反应改良物结合：例如，无机金属氧化物如硅石和氧化铝等；金属如金、钛、铁和镍等；通过如硅烷偶联处理等操作而引入官能团的无机金属氧化物；生物体如各种微生物和真核细胞等；多糖如琼脂糖、纤维素和不溶葡聚糖等；合成聚合物如聚苯乙烯乳胶、苯乙烯-丁二烯共聚物、苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物、丙烯醛-乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物、苯乙烯-苯乙烯磺酸乳胶、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯、聚丙烯醛涂覆的颗粒、交联的聚丙烯腈、丙烯酸或丙烯酸酯类聚合物、丙烯腈-丁二烯共聚物、氯乙烯-丙烯酸酯共聚物和聚醋酸乙烯酯-丙烯酸酯共聚物等；生物分子如红血球、糖、核酸(多核苷酸如RNA、DNA)、蛋白、多肽和聚氨基酸(聚谷氨酸、聚天门冬酸、聚赖氨酸等)；脂类；等。
但是，例如，反应改良物结合分析物或其类似物可以通过化学结合法，如在反应改良物的表面引入官能团，然后通过该官能团与分析物或其类似物结合的方法；通过使反应改良物和分析物或其类似物键联结合的方法等来进行。在这一点上，在上述说明中，反应改良物是通过与CFS结合而具有能给所述CFS提供作上述反应改良CFS特性的物质。也就是说，反应改良物是具有能改变分析物或其类似物的电泳迁移率的性质能力的物质，换句话说，是具有通过在分析物或其类似物和CFS间形成复合物(或在分析物或其类似物，反应改良CFS和除了反应改良CFS之外的CFS中的复合物)，而借助CFS使所述分析物或其类似物的相应电泳操作行为(电泳迁移率)发生变化的能力的物质，这样就能使分析物或其类似物和反应改良CFS间的复合物的电泳迁移率高于或低于分析物或其类似物本身或补结合反应改良CFS和CFS的分析物或类似物间的复合物的电泳迁移率(电泳迁移率快或慢)。
其中，作为反应改良CFS，优选如上所述通过让核酸(核苷酸链)、蛋白、多肽或聚氨基酸与CFS结合而得到的反应改良CFS，更优选通过让核酸(核苷酸链)或聚氨基酸与CFS结合而得到的反应改良CFS。另外，作为反应改良物，优选包括抗体的物质作为CFS，具体地说，优选通过让作为反应改良物质的核酸(核苷酸链)、蛋白、多肽或聚氨基酸与作为CFS的抗体结合而得到的反应改良CFS，其它的就特别优选通过让核酸(核苷酸链)或聚氨基酸作为反应改良物质与作为CFS的抗体结合而得到的反应改良CFS。
可以使用本领域任何常用方法来让反应改良物与CFS结合，即，制备反应改良CFS，例如，在已知的EIA、RIA、FIA法中常用的已知标记法或杂交法本身(例如，Ikagaku Jikken Koza(医药化学实验指南)，vol.8，Yuichi Yamamura编辑，第一版，Nakayama Shoten Co.，Ltd.，1971；Zusetu(示例性说明)荧光抗体，Akira Kawao，第一版，Softscience Co.，Ltd.，1983；Emasy Immunoassay，Eiji Ishikawa，Tadashi Kawai，KiyoshiMiyai，第三版，Igaku-Shoin Ltd.，1987；分子克隆，实验指南，第二版，J.Sambroock，E.F.Fritsch，T.Maniatis，冷泉港实验室出版社；Handbook of Fluorescent Probeand Research Chemicals，第七版，第8章，Molecular Probe Inc.；WO2002/082083)；或利用抗生物素蛋白(链霉抗生物素蛋白)与生物素间反应的常规方法。
在这一点上，当使用反应改良CFS作为CFS时，优选组合使用(平行使用)上述的标记性CFS。但是，当反应改良CFS自身可通过任何方法而可测量(可检测)，或能用标记物来进行标记时，就不需要组合使用标记性CFS。
另外，当标记性CFS和反应改良CFS组合使用(平行使用)作为CFS时，只要在分析物或其类似物、标记性CFS和反应改良CFS这三种组分中能形成复合物，就不需要特别限制这三种组分的结合形式或标记性CFS和反应改良CFS的结合位点。这样的结合形式包括，例如，(1)通常所说的三明治复合物，其中分析物或其类似物夹在标记性CFS和反应改良CFS之间，(2)复合物，其中反应改良CFS或标记性CFS进一步在结合位点与分析物或其类似物和标记性CFS或反应改良CFS结合，和(3)复合物，其中反应改良CFS或标记性CFS进一步与已与分析物或其类似物结合的标记性CFS或反应改良CFS结合等。另外，所述结合部分包括，例如，(1)标记性CFS和反应改良CFS的所有结合位点都仅存在于分析物或其类似物上[结合形式(1)]，(2)标记性CFS或反应改良CFS中一个的结合位点仅存在于分析物或其类似物上，而另一个结合位点则在由于在分析物和任一所述标记性CFS和反应改良CFS间形成复合物而新产生的位点上[结合形式(2)]，(3)标记性CFS和反应改良CFS中的任一个结合位点仅存在于分析物或其类似物上，而另一个结合位点则仅存在于所述标记性CFS和反应改良CFS之一上[结合形式(3)]和(4)上述情况的组合。其中，标记性CFS的结合位点、和反应改良CFS的结合位点优选是不相同的。在这一点上，在上述说明(2)中，作为具有能在新生位点特异性结合特性的物质(标记性CFS和/或反应改良CFS)有，例如，抗体、肽链和核苷酸链等，其能识别在分析物或其类似物与标记性CFS和/或反应改良CFS间的复合物，并能与之结合。
(2)标记性CFS
上述CFS一般是通过任何方法就本身可测量(可检测)，或能用标记物标记的物质。通过利用具有这种性质的物质，就可以测量(检测)样品中的分析物。在这一点上，当分析物或其类似物本身是可通过任何方法(例如酶等)就可测量的，或分析物或其类似物可直接与标记物结合而无需使用(不通过)CFS时，就可以对样品中的分析物进行测量(检测)，即便所述CFS没有上述性质。这些本身就通过任何方法可检测的物质包括酶、染料、荧光物质、发光物质、具有UV区吸收的物质等。
其中，作为在本发明中使用的CFS，优选可与分析物或其类似物形成复合物，并用标记物标记(标记性CFS)的物质。
作为在本发明中使用的标记物，本领域如酶免疫测定(EIA)、放射免疫测定(RIA)、荧光免疫测定(FIA)、杂交法等使用标记物都可以采用。这样的标记物包括，例如，酶如碱性磷酸酶(ALP)、β-半乳糖苷酶(β-Gal)、过氧化物酶(POD)、微过氧化物酶、葡糖氧化酶(GOD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)、苹果酸脱氢酶和荧光素酶等；染料如考马斯亮蓝R250、和甲基橙等；放射性同位素如99mTc、131I、125I、14C、3H、32P和35S等；HiLyte型染料如HiLyte Fluor 488、HiLyte Fluor 555、HiLyte Fluor 647、HiLyteFluor 680和HiLyte Fluor 750等(所有都为HiLyte Bioscience，Inc.的商品名)；Alexa型染料如Alexa Fluor Dye 350、Alexa Fluor Dye 430、Alexa FluorDye 488、Alexa Fluor Dye 532、Alexa Fluor Dye 546、Alexa Fluor Dye 555、Alexa Fluor Dye 568、Alexa Fluor Dye 594、Alexa Fluor Dye 633、AlexaFluor Dye 647、Alexa Fluor Dye 660、Alexa Fluor Dye 680、Alexa Fluor Dye700和Alexa Fluor Dye 750等(所有都为Molecular Probes，Inc.的商品名)；CyDye型染料如Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5和Cy7等(所有都为AmershamBiosciences，Inc.的商品名)；荧光材料如荧光素、罗丹明、丹酰、荧光胺、香豆素、萘胺、或其衍生物、稀土荧光染料[稀土金属如钐(Sm)、铕(Eu)、铽(Tb)或镝(Dy)]和螯合物如4，4′-双(1″，1″，1″，2″，2″，3″，3″-七氟-4″，6″-己二酮-6″-基)氯代磺基-O-三联苯(BHHCT)、4，7-双(氯磺酰)-1，10-菲罗啉-2，9-二羧酸(BCPDA)、β-萘基三氟乙酸(β-NTA)等的组合]、嵌入剂染料[例如，吖啶染料，如吖啶橙等；乙锭化合物如溴化乙锭、乙锭均二聚物-1(EthD-1)、乙锭均二聚物-2(EthD-2)、溴化乙锭单叠氮化物(EMA)和二氢乙锭等；碘化合物如碘化丙锭、和碘化己锭(hexidium iodide)等；7-氨基放线菌素D(7-AAD)；花青素二聚型染料如POPO-1、BOBO-1、YOYO-1、TOTO-1、JOJO-1、POPO-3、LOLO-1、BOBO-3、YOYO-3、和TOTO-3等(所有都为Molecular Probes，Inc.的商品名)；SYTOX型染料如SYBR Gold、SYBRGreen I和SYBR Green II、SYTOX Green、SYTOX Blue、和SYTOX Orange等(所有都为Molecular Probes，Inc.的商品名)等]，与DNA双螺旋的小基团结合的物质[例如，4′，6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI：Molecular Probes，Inc.的商品名)、五水合(双-亚氨苄基)(Hoechst 33258：Molecular Probes，Inc.的商品名)、和三盐酸化物(Hoechst 33342：Molecular Probes，Inc.的商品名)等]；亚氨苄基型染料(Hoechst 34580：Molecular Probes，Inc.的商品名)等]，与腺嘌呤-胸腺嘧啶(A-T)序列特异性结合的物质[例如，吖啶染料如9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶(ACMA)和双(6-氯-2-甲氧基-9-吖啶基)精胺(吖啶均二聚物)等，羟芪巴脒等]；发光材料如荧光素、异鲁米那(isoluminal)、鲁米那(luminal)和双(2，4，6-三氟苯基)草酸酯等；具有紫外区吸收的物质如苯酚、萘酚、蒽、或其衍生物；具有自旋标记剂性质的物质，例如含有羟基的物质如4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-羟基、3-氨基-2，2，5，5-四甲基吡咯烷-1-羟基、和2，6-二叔丁基-α-(3，5-二叔丁基-4-氧代-2，5-环己-1-亚基)-p-甲苯基羟基等。
可以根据与上述用标记物标记性CFS的方法相似的方法，或WO2002/082083中描述的常用方法来用标记物对CFS进行标记。
(3)标记性反应改良CFS
此外，在本发明中，作为CFS，可以使用用标记物标记的、可与分析物或其类似物形成复合物、并能改变分析物的电泳迁移率的物质(标记性反应改良CFS)，也就是说，用标记物标记的反应改良CFS。在这一点上，标记物和反应改良CFS为如上所述，且可以根据与上述用标记物标记性CFS的方法相似的方法，或WO 2002/082083中描述的常用方法来用标记物对反应改良CFS进行标记。
(4)CFSs的组合
如上所述，在本发明中，比如使用下列的各种CFS。在这一点上，其自然可以适当地组合使用。
(a)未与标记物和反应改良物结合的CFS
(b)标记性CFS
(c)反应改良CFS
(d)标记性反应改良CFS
(e)未与标记物和反应改良物和反应改良CFS结合的CFS
(f)标记性CFS和反应改良CFS
(g)未与标记物，和反应改良物，和标记性反应改良CFS结合的CFS
(5)含有CFS的溶液
作为本发明的含有CFS的溶液，如上所述，只要不抑制在分析物或其类似物和所述CFS间形成复合物，任何溶液均可使用。这样的溶液包括，例如，水、缓冲液等。
作为这样的缓冲液，只要其通常在pH 5～11范围内具有缓冲作用而且不会抑制所述复合物形成反应的形成，任何缓冲液均可使用。缓冲液的实例为本领域常用的那些，例如Tris缓冲液、Good′s缓冲液、TE缓冲液、TAE缓冲液、TBE缓冲液、TBS缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液等。缓冲液的使用浓度通常为1mM～2M，优选10mM～1M，且pH通常为5～11，优选5～10，更优选5.5～8.5，进一步优选6～8，且特别优选为7左右。
如上所述，溶液中含有的CFS浓度，也就是说CFS的用量由于取决于所用CFS的种类而不能简单的说明，但通常优选CFS在反应溶液(含有分析物或其类似物和CFS的溶液)中的浓度为不低于(优选不低于2倍，更优选不低于5倍)CFS可与对应测量限度的所有分析物或其类似物结合的浓度。
另外，对浓度上限不作限制，但是，考虑到经济效益，通常为不高于1012倍(优选不高于109倍，更优选不高于106倍)的CFS可与对应测量限度的所有分析物或其类似物结合的浓度。
更具体地说，CFS可以包含在如上所述的溶液中，因此CFS在含有分析物或其类似物和CFS的溶液中的浓度下限通常不低于10pM，优选不低于1nM，且更优选不低于100nM，且上限通常不高于10μM，优选不高于1μM且更优选不高于500nM。
1-6.形成复合物的具体方法
下面具体地说明进行形成本发明复合物的方法的模式。
(a)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种CFS的溶液引入并设置在毛细管中，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物和CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述CFS电泳接触，同时富集所述分析物和/或至少一种CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物和CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和/或至少一种CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和/或至少一种CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和/或至少一种CFS集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度和/或至少一种CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)和含有至少一种CFS的溶液区域]中的分析物和/或至少一种CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述CFS电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物和CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(b)使用标记性CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种标记性CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种标记性CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物和标记性CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述标记性CFS电泳接触，同时富集所述分析物和/或至少一种所述标记性CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物和标记性CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种标记性CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和/或至少一种标记性CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和/或至少一种标记性CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和/或至少一种标记性CFS集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度和/或至少一种标记性CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)和含有至少一种标记性CFS的溶液区域]中的分析物和/或至少一种标记性CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述标记性CFS电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物和标记性CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(c)使用反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物和反应改良CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触，同时富集所述分析物和/或至少一种所述反应改良CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物和反应改良CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和/或至少一种反应改良CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和/或至少一种反应改良CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和/或至少一种反应改良CFS集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度和/或至少一种反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域]中的分析物和/或至少一种反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述反应改良物质电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物和反应改良CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(d)使用标记性反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物和标记性反应改良CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述标记性反应改良CFS电泳接触，同时富集所述分析物和/或至少一种标记性反应改良CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物和标记性反应改良CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和/或至少一种标记性反应改良CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和/或至少一种标记性反应改良CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和/或至少一种标记性反应改良CFS集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度和/或至少一种标记性反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)和含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液区域]中的分析物和/或至少一种标记性反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述标记性反应改良CFS电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物和标记性反应改良CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(e)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS和反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种CFS的溶液区域，和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物、CFS和反应改良CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压而让所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触，同时使选自所述分析物、至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种富集，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种CFS的溶液，和含有至少一种反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而使选自所述分析物、至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种富集”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，选自所述分析物、至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，选自分析物、至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种会集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度，至少一种CFS的浓度或至少一种反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)，含有至少一种CFS的溶液区域和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域]中的分析物、至少一种CFS或至少一种反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物，CFS和反应改良CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(f)使用标记性CFS和反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种标记性CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种标记性CFS的溶液区域，和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物、标记性CFS和反应改良CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述标记性CFS和反应改良CFS电泳接触，同时使选自所述分析物、至少一种标记性CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种富集，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物，标记性CFS和反应改良CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种标记性CFS的溶液，和含有至少一种反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而使选自所述分析物、至少一种标记性CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种富集”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，选自所述分析物、至少一种标记性CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，选自分析物、至少一种标记性CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种会集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度，至少一种标记性CFS的浓度或至少一种反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)，含有至少一种标记性CFS的溶液区域和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域]中的分析物、至少一种标记性CFS或至少一种反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述标记性CFS和反应改良CFS电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物，标记性CFS和反应改良CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(g)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS和标记性反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有分析物的溶液区域[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种CFS的溶液区域，和含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物、CFS和标记性反应改良CFS之间形成复合物，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述CFS和标记性反应改良CFS电泳接触，同时使选自所述分析物、至少一种CFS和至少一种标记性反应改良CFS中的至少一种富集，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物，CFS和标记性反应改良CFS之间形成复合物。
在上述的说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有分析物的溶液[例如(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和含有至少一种CFS的溶液，和含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而使选自所述分析物、至少一种CFS和至少一种标记性反应改良CFS中的至少一种富集”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，选自所述分析物、至少一种CFS和至少一种标记性反应改良CFS中的至少一种汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，选自分析物、至少一种CFS和至少一种标记性反应改良CFS中的至少一种会集中到一起，从而使得该部分的分析物浓度，至少一种CFS的浓度或至少一种标记性反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物的溶液区域(例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)，含有至少一种CFS的溶液区域和含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液区域]中的分析物、至少一种CFS或至少一种标记性反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物与所述CFS和标记性反应改良CFS电泳接触”是指，与上文含义相似，所述分析物，CFS和标记性反应改良CFS进行接触不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
形成本发明复合物的方法也可以用于通常所说的竞争性方法中。进行竞争性方法的过程如下：
(h)使用标记性类似物和CFS的情况
(1)(a)将含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物与CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物与CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述CFS电泳接触，并且所述标记性类似物与所述CFS电泳接触)，同时富集所述分析物和标记性类似物和/或至少一种CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物和CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物和CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和标记性类似物，和/或至少一种CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和标记性类似物和/或至少一种CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和标记性类似物和/或至少一种CFS会集中到一起，从而使得该部分的分析物和标记性类似物浓度，和/或CFS浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有CFS的溶液区域]中的分析物和标记性类似物，和/或至少一种CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物和标记性类似物与所述CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述CFS电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述分析物、标记性类似物和CFS进行接触(也就是说，所述分析物与CFS接触，标记性类似物与CFS接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(i)使用标记性类似物和反应改良CFS的情况
(1)(a)将含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物与反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物与反应改良CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物和标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触，并且所述标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触)，同时富集所述分析物和标记性类似物和/或至少一种反应改良CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物和反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物和反应改良CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和标记性类似物，和/或至少一种反应改良CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和标记性类似物和/或至少一种反应改良CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和标记性类似物和/或至少一种反应改良CFS会集中到一起，从而使得该部分的分析物和标记性类似物浓度，和/或反应改良CFS浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有反应改良CFS的溶液区域]中的分析物和标记性类似物，和/或至少一种反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物和标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述分析物、标记性类似物和反应改良CFS进行接触(也就是说，所述分析物与反应改良CFS接触，标记性类似物与反应改良CFS接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(j)使用标记性类似物、CFS和反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，含有至少一种CFS的溶液区域和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触，所述标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触)，同时使选自所述分析物和标记性类似物，和至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种富集，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种CFS的溶液，和含有至少一种反应改良CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而使选自所述分析物和标记性类似物，至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种富集”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，选自所述分析物和标记性类似物，和至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，选自分析物和标记性类似物，至少一种CFS和至少一种反应改良CFS中的至少一种会集中到一起，从而使得该部分的分析物和标记性类似物浓度，至少一种CFS的浓度或至少一种反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物和标记性类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，含有至少一种CFS的溶液区域，和含有至少一种反应改良CFS的溶液区域]中的分析物和标记性类似物，至少一种CFS或至少一种反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物和标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述分析物、标记性类似物，CFS和反应改良CFS进行接触(也就是说，所述分析物、CFS和反应改良CFS接触，所述标记性类似物、CFS和反应改良CFS接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(k)使用反应改良类似物和标记性CFS的方法。
(1)(a)将含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，和(b)含有至少一种标记性CFS的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种标记性CFS的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物和标记性CFS之间形成复合物A，在所述反应改良类似物和标记性CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物和反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述标记性CFS电泳接触，且所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触)，同时富集所述分析物和反应改良类似物和/或至少一种标记性CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物与标记性CFS之间的复合物A，在所述反应改良类似物与标记性CFS之间形成的复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，和含有至少一种标记性CFS的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述分析物和反应改良类似物和/或至少一种标记性CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述分析物和反应改良类似物和/或至少一种标记性CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，分析物和反应改良类似物和/或至少一种标记性CFS会集中到一起，从而使得该部分的分析物和反应改良类似物浓度，和/或至少一种标记性CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物和反应改良类似物的溶液区域(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，含有至少一种标记性CFS的溶液]中的分析物和反应改良类似物，和/或至少一种标记性CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物和反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述标记性CFS电泳接触，且所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述分析物、反应改良类似物，和标记性CFS进行接触(也就是说，所述分析物和标记性CFS接触，所述反应改良类似物与标记性CFS接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(l)使用标记性类似物和CFS的情况。
(1)(a)将含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液区域，和含有标记性类似物的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述标记性类似物和CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述标记性类似物和CFS电泳接触(也就是说，所述标记性类似物与所述未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的CFS电泳接触，同时富集所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述标记性类似物与CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液，和含有标记性类似物的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的CFS会集中到一起，从而使得该部分的标记性类似物浓度和/或未参与复合物形成的CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液区域，和含有至少一种标记性类似物的溶液区域]中的标记性类似物和/或未参与复合物A形成的CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述标记性类似物和CFS电泳接触(也就是说，所述标记性类似物与未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液中与所述分析物形成复合物的所述CFS电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述标记性类似物和CFS进行接触(也就是说，所述标记性类似物与未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液中与所述分析物形成复合物的所述CFS接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(m)使用标记性类似物和反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液区域，和含有标记性类似物的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述标记性类似物和反应改良CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述标记性类似物和所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述标记性类似物与未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述反应改良CFS电泳接触，同时富集所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的反应改良CFS，而不通过(不取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述标记性类似物与反应改良CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液，和含有标记性类似物的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的反应改良CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的反应改良CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，所述标记性类似物和/或所述未参与复合物A形成的反应改良CFS会集中到一起，从而使得该部分的标记性类似物浓度和/或未参与复合物形成的反应改良CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液区域，和含有至少一种标记性类似物的溶液区域]中的标记性类似物和/或未参与复合物A形成的反应改良CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述标记性类似物和所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述标记性类似物和所述未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的反应改良CFS电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述标记性类似物和反应改良CFS进行接触(也就是说，所述标记性类似物和所述未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的反应改良CFS接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(n)使用标记性类似物、CFS和反应改良CFS的情况。
(1)(a)将含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液，(b)含有标记性类似物的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时？？，分别形成含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液区域，含有标记性类似物的溶液区域和含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合。
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物和标记性类似物与CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述溶液(a)中的所述分析物和CFS(或反应改良CFS)间的复合物与所述溶液(c)中的所述反应改良CFS(或CFS)电泳接触，且所述标记性类似物与所述未参与在溶液(a)中与所述分析物和在所述溶液(c)中与所述反应改良CFS(CFS)形成所述复合物的CFS(或反应改良CFS)电泳接触)，同时使选自在所述分析物和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)间形成的复合物A，标记性类似物，和至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)中的至少一种富集，不取决于分子扩散且不进行物理混合，就在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液，含有标记性类似物的溶液和含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而使选自在所述分析物和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)间的所述复合物，所述标记性类似物，和至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)中的至少一种富集”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，选自在所述分析物和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)间的所述复合物，所述标记性类似物，和至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)中的至少一种汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，选自在所述分析物和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)间的复合物，标记性类似物，和至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的至少一种会集中到一起，从而使得该部分的所述分析物和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)间的复合物的浓度，标记性类似物浓度或至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液区域，和含有标记性类似物的溶液区域和含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液区域]中的在所述分析物和至少一种CFS(至少一种反应改良CFS)间的复合物，标记性类似物，或至少一种反应改良CFS(至少一种CFS)的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述分析物和标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述溶液(a)中的在所述分析物和CFS(或反应改良CFS)间形成的复合物与所述溶液(c)中的所述反应改良CFS(或CFS)电泳接触，所述标记性类似物与未参与在所述溶液(a)中与所述分析物和在所述溶液(c)中与所述反应改良CFS(或CFS)形成复合物的所述CFS(或反应改良CFS)电泳接触)”是指，与上文含义相似，所述分析物，标记性类似物，CFS和反应改良CFS进行接触(也就是说，溶液(a)中的在所述分析物和CFS(或反应改良CFS)间的所述复合物与溶液(c)中的所述反应改良CFS(或CFS)接触，且所述标记性类似物、和未参与在溶液(a)中与所述分析物和在所述溶液(c)中与所述反应改良CFS(CFS)形成所述复合物的所述CFS(或反应改良CFS)进行接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
(o)使用反应改良类似物和标记性CFS的情况。
(1)(a)将含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液，和(b)含有反应改良类似物的溶液引入并设置在毛细管内，从而在对所述毛细管施加电压时，分别形成含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液区域，和含有反应改良类似物的溶液区域(从而形成液液界面)，并在所述反应改良类似物与标记性CFS之间形成的复合物B，而不用预先在毛细管外将这些溶液混合
(2)然后，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述反应改良类似物与标记性CFS电泳接触(也就是说，所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触，该标记性CFS未参与在包含含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A))，同时富集所述反应改良类似物和/或未参与复合物A类似物形成的所述标记性CFS，不通过(取决于)分子扩散且不进行物理混合，就在所述反应改良类似物和标记性CFS之间形成复合物B。
在上述说明中，“在均匀混合这些溶液之前”指“在将通过步骤(1)排列在毛细管中的含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液的，和含有反应改良类似物的溶液的，如果必要还包括液体的各个区域(液液界面)通过分子扩散而均匀混合之前”。在这一点上，“界面”的含义与上文相同。
另外，在上述步骤(2)中，“通过对所述毛细管施加电压而富集所述反应改良类似物和/或未参与复合物A所述的标记性CFS”是指，与上文相似，在对毛细管施加电压时，反应改良类似物和/或未参与复合物A形成的标记性CFS汇集成带状(楔状)。换句话说，是指在对毛细管施加电压时，所述物质集中到一起，从而使得该部分的所述物质浓度高于设置在步骤(1)区域中的物质浓度，即指在对毛细管施加电压时，所述反应改良类似物和/或未参与复合物A形成的标记性CFS会集中到一起，从而使得该部分的反应改良类似物和/或未参与复合物A形成的标记性CFS的浓度高于设置在步骤(1)的溶液区域[例如，含有分析物和至少一种标记性CFS的溶液区域，和含有反应改良类似物的溶液区域]中的反应改良类似物和/或未参与复合物A形成的标记性CFS的浓度。
在上述步骤(2)中，“所述反应改良类似物与标记性CFS电泳接触(也就是说，所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触，所述标记性CFS未参与在包含含分析物和至少一种标记性CFS的所述溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)”是指，与上文含义相似，所述反应改良类似物和标记性CFS进行接触(也就是说，所述反应改良类似物和所述标记性CFS进行接触)，不通过(不取决于)分子扩散，而是利用当将含有电泳迁移率高(电泳速度快)的物质的溶液设置在含有电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质的溶液的上游并进行电泳时，溶液中的电泳迁移率高(电泳速度快)的物质会追上电泳迁移率低(电泳速度慢)的物质这一现象。
在上述方法(a)～(o)中，在待富集物质[例如，分析物、CFS、标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS、标记性类似物、反应改良类似物、分析物和CFS间形成的复合物、分析物和反应改良物间形成的复合物、分析物和标记性CFS间形成的复合物、标记性类似物和CFS间形成的复合物和反应改良类似物和CFS间形成的复合物，等]的浓度水平(程度)方面，在对毛细管施加电压时，在所述物质集中部分(带状)的物质[例如，分析物、CFS、标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS、标记性类似物、反应改良类似物、分析物和CFS间形成的复合物、分析物和反应改良物间形成的复合物、分析物和标记性CFS间形成的复合物、标记性类似物和CFS间形成的复合物和反应改良类似物和CFS间形成的复合物等]浓度，与在步骤(1)所设置的溶液区域中的物质[例如，分析物、CFS、标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS、标记性类似物、反应改良类似物、分析物和CFS间形成的复合物、分析物和反应改良物间形成的复合物、分析物和标记性CFS间形成的复合物、标记性类似物和CFS间形成的复合物和反应改良类似物和CFS间形成的复合物等]浓度相比，下限通常不低于1.5倍，优选不低于5倍，更优选不低于10倍，且进一步优选不低于25倍，不特别限定上限，但是通常不高于107倍，优选不高于106倍和更优选不高于105倍。
另外，在上述方法(a)～(o)中，″富集同时接触″，与上文含义相似，包括富集和接触同时进行的情况，和在富集基本完成之后进行接触两种情况，因此包括除在接触基本完成之后进行富集之外的所有情况。
在上述方法(a)～(o)中，与前述相似，步骤(2)可以在将通过步骤(1)设置在毛细管中的溶液在可富集、接触并形成复合物的条件下均匀混合之前，通过对所述毛细管施加电压而进行。
在上述方法(a)～(o)中，与前述相似，步骤(2)可以在将通过步骤(1)设置在毛细管中的溶液均匀混合前，在通过对所述毛细管施加电压而能富集、接触并形成复合物的条件下，来对所述毛细管施加电压而进行。
所述条件的具体实例，优选实施方案等如上所述，例如，上述步骤(2)可以根据上述富集方法，适宜的考虑所用分析物、CFS、标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS、标记性类似物、反应改良类似物、包括上述2种或多种物质的复合物的电泳迁移率，或包括这些物质的溶液的电导率而进行。
另外，在步骤(2)中施加的电压和其它反应条件(例如，pH、温度、时间等)等也可以在上述范围内适宜地确定，考虑分析物、CFS、标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS、标记性类似物、反应改良类似物、包括上述2种或多种物质的复合物，包括这些物质的溶液等。
2.本发明的分离方法
本发明的分离方法的特征在于，电分离出通过本发明上述形成复合物的方法而形成的在分析物或其类似物和至少一种CFS间的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物。
也就是说，特征在于，在本发明步骤(2)的毛细管中利用电泳移动(迁移)，使分析物或其类似物和CFS在溶液中相互接触，而使在溶液中的分析物或其类似物和CFS间形成的复合物，与未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物进一步电泳移动(迁移)并且分离。
本发明的分离方法可以根据已知的方法进行，不同在于，可以在已知通过电移动(迁移)，利用如毛细管分离物质的方法中，对在分析物或其类似物和至少一种CFS间形成的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物进行电分离，而且所用材料和试剂也可以是已知方法中所用的。
因此，本发明的分离方法包括下列步骤(1)～(3)：
第(1)步(引入步骤)，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种可与所述分析物或所述其类似物形成复合物的物质(CFS)的溶液设置在毛细管中，从而通过对所述毛细管施加电压就能在所述分析物或所述其类似物和CFS间形成复合物而不用预先将这些溶液混合；
第(2)步(富集反应步骤)，在这些溶液均匀混合之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或所述其类似物与CFS接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或所述其类似物和CFS之间形成复合物；和
第(3)步(分离步骤)，通过进一步的电移动(迁移)，分离出所述复合物和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物的类似物。
在这一点上，在分析物、类似物(标记性类似物、反应改良类似物等)、含有分析物或其类似物的溶液、含有分析物的样品、CFS(标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS等)、包括这些物质的溶液的上述描述，实施方案，具体实施例，优选实施例等中，引入步骤[步骤(I)]、富集反应步骤[步骤(2)]如上所述。
2-1.分离步骤[步骤(3)]
如上所述，在毛细管中，通过进一步的电移动(迁移)将通过本发明步骤(1)和(2)得到的在分析物或其类似物与CFS间的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物分离。
本发明的分离方法用于分离在分析物或其类似物与CFS间的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物，更具体地说，(1)用于通过进一步的电移动(迁移)，来分离在所述分析物和CFS间形成的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS；或(2)用于通过进一步的电移动(迁移)，来分离在所述类似物和CFS间形成的复合物，和未参与所述复合物形成的类似物或在所述分析物和未参与所述复合物形成的CFS间形成的复合物。
例如，在非竞争性方法(例如，后面描述的方法(a)～(g)等)中，使用本发明的分离方法时，且当使用包括标记物的CFS(标记性CFS或标记性反应改良CFS)时，能分离出至少未参与在分析物和CFS间形成复合物的含有标记物的CFS(游离的标记物)，和包括分析物的复合物就足够了。虽然从所述复合物分离出不含标记物的CFS不是必须的，但优选分离出所述复合物和所有的未参与复合物形成的CFS(游离CFS)。
另外，例如，当本发明的分离方法用于竞争性方法(例如，后面描述的方法(h)～(o)等)时，且当使用标记性类似物时，能分离出至少在标记性类似物与(所有)CFS间的(最终)复合物，和未参与所述复合物形成的标记性类似物(游离的标记性类似物)就足够了。分离在分析物和CFS间的复合物，和在标记性类似物和(所有)CFS间的复合物不是必需的。另外，当使用反应改良类似物时，能分离出至少在反应改良类似物和标记性CFS间的复合物，和在分析物和标记性CFS间的复合物就足够了。
本发明的步骤(3)可以采用能有效分离出在分析物或其类似物和CFS间的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物的方法来进行。作为这样的方法，可以使用已知的电泳方法和本领域的常用方法。
具体而言，可以使用基于各种原理(分离模式)的电泳方法。所述方法的实例为ITP、IF，如上所述；通常所说的毛细管区带电泳法(CZE)，根据其电荷强度以不同速度移动各个物质来分离目标物质，其中毛细管基本上仅由用于电泳的缓冲液填充，[参考文献：H.Hisamoto at al.，Chem.Commun.，(2001)，2662等]；通常所说的胶束电动力色谱(MEKC)，利用形成离子胶束的带电物质，通过与所述胶束的相互作用来分离目标物质，[参考文献：S.Terabe，Trends Anal.Chem.，(1989)，8，129等]；通常所说的毛细管凝胶电泳法(CGE)，通过利用诸如具有分子筛效应的聚合物的填料、通过分子电荷和分子尺寸诱导的与聚合物的相互作用来分离目标物质[参考文献：S.Hjerten，J.Chromatogr.，(1987)，397，409等]。
在这一点上，在本发明中，可以使用上述电泳方法中所用的试剂等。另外，可以根据上述参考文献等选择这些试剂、分离操作方法、条件等。
作为本发明步骤(3)中所用的电泳方法，可以使用任何与步骤(2)中的富集方法基于同样原理(分离模式)的电泳方法，或与步骤(2)中的富集方法基于不同原理(分离模式)的电泳方法。
在这一点上，当使用与步骤(2)基于同样原理(分离模式)的电泳方法不足以分离出分析物或其类似物与CFS间的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物时，需要使用与步骤(2)中的富集方法基于不同原理(分离模式)的电泳方法来进行本发明的步骤(3)。
在这种情况下，特别优选在步骤(2)中进行ITP、FASS等，然后在步骤(3)中进行CZE等。
如上所述，本发明的分离方法中，包括以下两种情况：(i)使所述分析物或其类似物和CFS接触，同时富集分析物或其类似物和/或至少一种CFS，以便通过步骤(2)而在分析物或其类似物和CFS间形成复合物(换句话说，通过对所述毛细管施加电压，使所述分析物或其类似物和CFS接触，在此条件下分析物或其类似物和/或至少一种CFS富集，从而在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物)，然后使用相同的分离模式而不改变施加的电压(换句话说，施加与步骤(2)中相同强度的电压)，通过进一步的电移动(迁移)而将所述复合物和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物分离；(ii)或让所述分析物或其类似物和CFS接触，同时富集分析物或其类似物和/或至少一种CFS，以便通过步骤(2)在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物(换句话说，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或其类似物和CFS接触，在此条件下让分析物或其类似物和/或至少一种CFS富集，而在分析物或其类似物和CFS之间形成复合物)，然后使用不同的分离模式和/或施加不同的电压(换句话说，采用不同于步骤(2)分离模式所用的条件和/或所施加的电压的强度)，通过进一步的电移动(迁移)而将所述复合物与未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物分离。
至于步骤(3)中所施加的电压，只要在分析物或其类似物与CFS间的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物能够充分分离，那就可以使用任何范围的电压，且其可适宜地选自本领域常用的范围。更具体地说，施加电压以便电场强度在常规范围内，下限不低于5V/cm，优选不低于10V/cm，更优选不低于50V/cm，进一步优选不低于500V/cm，特别优选不低于1000V/cm，上限一般不高于10000V/cm，优选不高于5000V/cm，更优选不高于2000V/cm。在这一点上，如上所述，步骤(3)中所施加的电压可以与步骤(2)中相同或不同。
另外，其他分离条件(例如，pH、温度、时间等)可以是任何范围，只要分析物或其类似物与CFS的复合物，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物能够充分分离，且其可适宜地选自本领域常用的已知方法。
具体而言，虽然因为分析物或其类似物和CFS的性质而不能简单地说明，但是pH下限通常为不低于2，优选不低于4，且更优选不低于5，上限不高于13，优选不高于11且更优选不高于9。温度的下限通常为不低于0℃，优选不低于5℃且更优选不低于10℃，上限通常为不高于90℃，优选不高于80℃，更优选不高于50℃，进而优选不高于40℃，且特别优选不高于30℃。另外，时间的下限通常为不短于1分钟，优选不短于2分钟且更优选不短于3分钟，上限不长于20分钟且更优选不长于10分钟。
如上所述，步骤(3)在毛细管中进行，且这样的毛细管包括与步骤(2)中所用相同的毛细管，毛细管的材料和内径均如上所述。
另外，本发明的步骤(3)通常在以下状态下进行：将电泳介质例如电泳用缓冲液或所述含填料的电泳用缓冲液装入毛细管(在上述分离区中)。在这一点上，电泳介质的使用浓度、pH、分子量、粘度、引入毛细管的方法、引入时间等都与上面说明的相同。
在这一点上，如上所述，当利用基于不同于步骤(2)富集方法的原理(分离模式)的电泳方法来进行本发明的步骤(3)时，步骤(2)所用的电泳介质和步骤(3)所用的电泳介质不要求是相同的，且可以合适地选择不同的电泳介质。
在这一点上，本发明的步骤(2)和(3)通常使用相同的毛细管(在同一毛细管中)。也就是说，本发明的分离方法所用的毛细管至少有一部分是能进行本发明的步骤(1)，一部分能进行本发明的步骤(2)，一部分能进行本发明的步骤(3)。这些部分可以独立地存在于毛细管中，或这些部分可以部分地或全部地呈重叠状态。换句话说，结果就是，本发明分离方法中所用的毛细管是一种能在毛细管中安排(a)含有分析物或其类似物的溶液，和(b)含有至少一种可与所述分析物或其类似物形成复合物的物质(CFS)，从而能通过对所述毛细管施加电压，而在所述分析物或其类似物和CFS之间形成复合物，而不用预先将这些溶液混合，并且能在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，而使所述分析物或其类似物与CFS接触，同时富集所述分析物或其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或其类似物和CFS之间形成复合物，并能进一步通过电移动(迁移)来分离所述复合物和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物的毛细管。
2-2.分离的具体方法
下面具体描述进行本发明分离方法的模式。
(a)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(a)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品，和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(a)的步骤(2)，让所述分析物与所述CFS电泳接触而在所述分析物与CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的CFS在毛细管的分离区域内分离。
(b)使用标记性CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(b)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品，和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种标记性CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(b)的步骤(2)，让所述分析物与所述标记性CFS电泳接触而在所述分析物与标记性CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的标记性CFS在毛细管的分离区域内分离。
(c)使用反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(c)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(c)的步骤(2)，让所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触而在所述分析物与所述反应改良CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的所述反应改良CFS在毛细管的分离区域内分离。
(d)使用标记性反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(d)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(d)的步骤(2)，让所述分析物与所述标记性反应改良CFS电泳接触而在所述分析物与标记性反应改良CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性反应改良CFS在毛细管的分离区域内分离。
(e)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS、和反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(e)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种CFS的溶液，和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(e)的步骤(2)，让所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触而在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和所述未参与所述复合物形成的CFS和任选地未参与所述复合物形成的反应改良CFS在毛细管的分离区域内分离。
(f)使用标记性CFS和反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(f)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种标记性CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(f)的步骤(2)，让所述分析物与所述标记性CFS和反应改良CFS电泳接触而在所述分析物，标记性CFS和反应改良CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性CFS和任选地未参与所述复合物形成的反应改良CFS在毛细管的分离区域内分离。
(g)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS，和标记性反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(g)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种CFS的溶液，和(c)含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(g)的步骤(2)，让所述分析物与所述CFS和标记性反应改良CFS电泳接触而在所述分析物，CFS和标记性反应改良CFS之间形成复合物，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性反应改良CFS和任选地未参与所述复合物形成的CFS在毛细管的分离区域内分离。
本发明的分离方法也可以用在通常所说的竞争性方法中。在竞争性方法中进行如下的步骤：
(h)使用标记性类似物和CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(h)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(h)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS电泳接触(也就是说，让所述分析物与所述CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述CFS电泳接触)而在所述分析物与CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物和CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物在毛细管的分离区域内分离。
(i)使用标记性类似物和反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(i)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(i)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，让所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触)而在所述分析物与反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物和反应改良CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物在毛细管的分离区域内分离。
(j)使用标记性类似物、CFS和反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(j)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(j)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，让所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触)而在所述分析物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物A，在所述标记性类似物，CFS和反应改良CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物在毛细管的分离区域内分离。
(k)使用反应改良类似物和标记性CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(k)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种标记性CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(k)的步骤(2)，让所述分析物和反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触(也就是说，让所述分析物与所述标记性CFS电泳接触，且所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触)而在所述分析物与标记性CFS之间形成复合物A，在所述反应改良类似物和标记性CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物B和所述复合物A在毛细管的分离区域内分离。
(l)使用标记性类似物和CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(l)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(l)的步骤(2)，让所述标记性类似物与CFS电泳接触(也就是说，让所述标记性类似物与在含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液中未参与与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述CFS电泳接触)而在所述标记性类似物和CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物在毛细管的分离区域内分离。
(m)使用标记性类似物和反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(m)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(m)的步骤(2)，让所述标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，让所述标记性类似物与在含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液中未参与与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述反应改良CFS电泳接触)而在所述标记性类似物和反应改良CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物在毛细管的分离区域内分离。
(n)使用标记性类似物、CFS和反应改良CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(n)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液，(b)含有标记性类似物的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(n)的步骤(2)，让所述分析物和所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，让所述溶液(a)中的在所述分析物和CFS(或反应改良CFS)之间的复合物，与在所述溶液(c)中的所述反应改良CFS(或CFS)电泳接触，且所述标记性类似物与未参与在所述溶液(a)中与所述分析物形成所述复合物的所述CFS(或反应改良CFS)和所述溶液(c)中的所述反应改良CFS(或CFS)电泳接触)，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物在毛细管的分离区域内分离。
(o)使用反应改良类似物和标记性CFS的情况。
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(o)的步骤(1)，将(a)含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液，和(b)含有反应改良类似物的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(o)的步骤(2)，让所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触(也就是说，让所述反应改良类似物与未参与在含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述标记性CFS电泳接触)而在所述反应改良类似物和标记性CFS之间形成复合物B，和
(3)通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物B和所述复合物A在毛细管的分离区域内分离。
3.本发明的测量方法
通过测量在分析物或其类似物与CFS间的复合物的量，和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物的量，这些都是通过本发明的分离方法分离出来的，利用对应如复合物中的标记物，或在未参与复合物形成的CFS或其类似物中的标记物的性质的方法，可以简单地、高灵敏度地在短时间内测得样品中的分析物的量。
因此，测量本发明特征的方法包括：
第(1)步(引入步骤)，将(a)含有分析物或其类似物的溶液，和(b)含有至少一种可与所述分析物或所述其类似物形成复合物的物质(CFS)的溶液置于毛细管中，以便通过对所述毛细管施加电压，就在所述分析物或所述其类似物和CFS间形成复合物而不用预先将这些溶液混合；
第(2)步(富集反应步骤)，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，将所述分析物或其类似物与CFS接触，同时富集所述分析物或其类似物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物或其类似物和CFS之间形成复合物；
第(3)步(分离步骤)，通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物分离；和
第(4)步(测量步骤)，测量分离的复合物的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量或未参与所述复合物形成的类似物的量，以便基于这个结果测出分析物的量。
在这一点上，在上述说明中，分析物、类似物(标记性类似物、反应改良类似物等)、含有分析物或其类似物的溶液、含有分析物的样品、CFS(标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS等)、包括这些的溶液、引入步骤[步骤(1)]、富集反应步骤[步骤(2)]、分离步骤[步骤(3)]的实施方式、具体实例、优选实例等如上所述。
本发明的测量方法可以用于测量在分析物或其类似物和CFS间的复合物的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量或未参与所述复合物形成的类似物的量，这些物质通过上述本发明的步骤(3)分离，可以用于基于这些结果来确定分析物的量，更具体地说，(1)用于测量通过本发明的步骤(3)分离的在分析物和CFS间的复合物的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量，并用于基于这些结果来确定分析物的量；或(2)用于测量分离的在类似物和CFS间的复合物的量，或未参与所述复合物形成的类似物的量，或在分析物和CFS间的复合物的量，并用于基于这些结果来确定分析物的量。
本发明的测量方法适合任何非竞争性方法或竞争性方法。
也就是说，当采用非竞争性方法进行本发明的测量方法时，例如，其可以按照如下步骤进行：
(1)通过本发明的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种CFS的溶液(CFS、标记性CFS、反应改良CFS、标记性反应改良CFS及其组合)置于毛细管中，以便通过对所述毛细管施加电压，而在所述分析物和CFS之间形成复合物[(分析物-CFS)复合物、(分析物-标记性CFS)复合物、(分析物-反应改良CFS)复合物、(分析物-标记性反应改良CFS)复合物、(CFS-分析物-反应改良CFS)复合物、(标记性CFS-分析物-反应改良CFS)复合物、(CFS-分析物-标记性反应改良CFS)复合物及其组合等]，而不用预先将这些溶液混合；
(2)通过本发明的步骤(2)，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物与所述CFS接触，同时富集所述分析物和/或至少一种CFS，从而在所述分析物和CFS间形成复合物；
(3)通过本发明的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)，使所述复合物和未参与所述复合物形成的CFS分离；和
(4)测量分离的复合物的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量，以便基于这个结果来测定分析物的量。
另外，当采用竞争性方法进行本发明的测量方法时，例如，其可以按照如下步骤进行：
(1)通过本发明的步骤(1)，将(i)(a)含有分析物的样品(或含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)，(b)含有用标记物标记的标记性类似物的溶液(或含有标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和(c)含有至少一种CFS(CFS、反应改良CFS及其组合)的溶液，或(ii)(a)含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品，标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，和(b)含有至少一种CFS的溶液(CFS、反应改良CFS及其组合)，或(iii)(a)含有含分析物的样品和至少一种CFS(CFS、反应改良CFS及其组合)的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液(或含有标记性类似物和至少一种CFS的溶液)置于毛细管中，以便通过对所述毛细管施加电压，从而形成在所述标记性类似物和CFS之间的复合物B[(标记性类似物-CFS)复合物、(标记性类似物-反应改良CFS)复合物、(CFS-标记性类似物-反应改良CFS)复合物、及其组合，等]，或形成在所述分析物和CFS之间的复合物A[(分析物-CFS)复合物、(分析物-反应改良CFS)复合物、(CFS-分析物-反应改良CFS)复合物、及其组合，等]和所述复合物B，而不用预先将这些溶液混合；
(2)通过本发明的步骤(2)，在均匀混合这些溶液之前，让(i)所述标记性类似物与所述CFS接触[也就是说，所述标记性类似物与未参与含所述分析物的复合物(复合物A)形成的CFS接触]或(ii)所述分析物和标记性类似物与所述CFS接触(也就是说，所述分析物与所述CFS接触且所述标记性类似物与所述CFS接触)，同时富集所述分析物、所述标记性类似物和至少一种CFS中的至少一种，从而形成在所述标记性类似物和CFS之间的复合物B，或形成在所述分析物和CFS之间的复合物A和复合物B；
(3)通过本发明的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)来分离所述复合物B，和未参与所述复合物B形成的标记性类似物；和
(4)测量分离的复合物B的量、或未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物的量，以便基于这个结果来确定样品中的分析物的量。
另外，当本发明的测量方法采用竞争性方法进行时，例如，其可以按照如下步骤进行：
(1)通过本发明的步骤(1)，将(i)(a)含有分析物的样品(或含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液)，(b)含有与反应改良物结合的类似物(反应改良类似物)的溶液(或含有反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，和(c)含有至少一种CFS(CFS、标记性CFS及其组合)的溶液，或(ii)(a)含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(或含有含分析物的样品，反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，和(b)含有至少一种CFS的溶液(CFS、标记性CFS及其组合)，或(iii)(a)含有分析物的样品和至少一种CFS(CFS、标记性CFS及其组合)的溶液，和(b)含有反应改良类似物的溶液(或含有反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)，置于毛细管中，以便通过对所述毛细管施加电压，而形成在所述反应改良类似物和标记性CFS之间的复合物B，或形成在所述分析物和标记性CFS之间的复合物A和所述复合物B，而不用预先将这些溶液混合；
(2)通过本发明的步骤(2)，在均匀混合这些溶液之前，让(i)所述反应改良类似物与所述标记性CFS接触[也就是说，所述反应改良类似物与未参与含所述分析物的复合物(复合物A)形成的标记性CFS接触]或(ii)所述分析物和反应改良类似物与所述标记性CFS接触(也就是说，所述分析物与所述标记性CFS接触且所述反应改良类似物与所述标记性CFS接触)，同时富集所述分析物、所述反应改良类似物和至少一种标记性CFS中的至少一种，以便形成在所述反应改良类似物和标记性CFS之间的复合物B，或形成在所述分析物和标记性CFS之间的复合物A和复合物B；
(3)通过本发明的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)来分离所述复合物B和复合物A；和
(4)测量分离的复合物B的量、或分离的复合物A的量，以便基于这个结果来确定样品中的分析物的量。
在这一点上，类似物(标记性类似物或反应改良类似物)是通过(i)与样品中的分析物(也就是说，含有分析物的样品)共存，以含有标记性类似物或反应改良类似物和分析物的溶液(含有分析物和类似物的溶液)形式而使用的；或(2)不与样品中的分析物(也就是说，含有分析物的样品)共存而独立于含有分析物的溶液，以含有类似物的溶液形式使用。
3-1.测量步骤[步骤(4)]
在本发明的步骤(4)中，复合物的量或未参与所述复合物形成的CFS的量或未参与所述复合物形成的类似物的量，它们是分离的，可以比如利用在所述复合物中的标记物，或在未参与所述复合物形成的CFS中的标记物，或在未参与所述复合物形成的类似物中的标记物的性质的所对应的方法，并且基于所述标记物的测量结果来进行测量。也就是说，在非竞争性方法中，在分析物和CFS间的复合物的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量，它们是分离的，可以比如利用在所述复合物中的标记物，或在未参与所述复合物形成的CFS中的标记物的性质所对应的方法，并且基于所述标记物的测量结果来进行测定。在竞争性方法中，复合物B的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物的量(或复合物B的量或复合物A的量)，它们是分离的，可以利用在所述复合物B中的标记物，或在未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物(或在复合物A中的标记物)的性质所对应的方法，并且基于所述标记物的测量结果来进行测定。
标记物的测量可以按照对应标记物种类的具体方法来进行。例如，当所述性质是酶活性时，标记物的测量可以按照一般的方法进行，例如EIA或杂交法[例如，在″Enzyme immunoassay method，protein，nucleic acid，enzyme，separate vol.，No.31，由T.Kitagawa，T.Nannbara，A.Tuji编著，51-63，KYORITSU SHUPPAN Co.，Ltd′.，1987年9月10日，中描述的方法等]；当所述性质为放射性时，标记物的测量可以通过采用合适的测量设备，如浸液型GM计数器，液闪计数器和孔型闪烁计数器，根据所述放射性物质发射的辐射强度，按照常规方法如RIA或杂交方法来进行[如MedicalChemistry Experimental Course，vol.8，U.Yamamura编著，1st Ed.，Nakayama Bookstore，1971年出版；Biochemistry Experimental Course 2，ATracer Experiment Method(part 2)，A.Takemura，H，Honjo，501-525，TOKYO KAGAKU DQJIN Co.，Ltd.出版，1977年2月25日]；当所述性质为荧光性时，标记物的测量可以按照常规方法(例如FIA或杂交法)使用测量设备(例如荧光分光计或激光共焦距扫描电镜)来进行[如″IllustrationExplanation，Fluorescent Antibody，A.Kawao，1st Ed，Softscience Co.，Ltd.，出版，1983″；″Medical Chemistry Experimental Course，vol.2，Chemistry ofnucleic acid III，M.Saneyoshi，299-318，TOKYO KAGAKU DOJIN Co.，Ltd.出版，1977年12月5日″中描述的方法]；当所述性质为发光性时，标记物的测量可以按照常规方法使用测量设备如光子计数器来进行[例如，在Enzyme immunoassay method，protein，nucleic acid，enzyme，separate vol.，No.31，T.Kitagawa，T.Nannbara，A.Tuji编著，252-263，KYORITSUSHUPPAN Co.，Ltd′.，1987年9月10日中描述的方法]；进而当所述性质为UV吸收性时，标记物的测量可以按照常规方法使用测量设备如分光计来进行；当所述性质是颜色现象(color phenomenon)时，标记物的测量可以按照常规方法使用测量设备如分光计或显微镜来进行；当所述性质为自旋时，标记物的测量可以按照常规方法使用电子自旋共振设备来进行[例如，在Enzyme immunoassay method，protein，nucleic acid，enzyme，separate vol.，No.31，T.Kitagawa，T.Nannbara，A.Tuji编著，264-271，KYORITSUSHUPPAN Co.，Ltd′.，1987年9月10日中描述的方法等]。
另外，基于测量到的复合物的量或未参与所述复合物形成的CFS的量或未参与所述复合物形成的类似物的量，也就是说在复合物中的标记物的量或在未参与所述复合物形成的CFS中的标记物的量或在未参与所述复合物形成的类似物中的标记物的量，来确定存在于样品中的分析物的量可以按照如下步骤进行：
在竞争性方法中，基于测量到的复合物的量或未参与所述复合物形成的CFS的量，也就是说上述获得的在复合物中的标记物的量、或在未参与所述复合物形成的CFS中的标记物的量，存在于样品中的分析物的量的可以通过绘制出显示分析物的量与在复合物中的标记物的量或在未参与所述复合物形成的CFS中的标记物的量之间关系的校准曲线，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品相似的方法而测量得到，并通过将由测量含分析物的样品而得到的标记物的量应用到所述校准曲线来确定。另外，在非竞争性方法中，基于复合物B的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物的量(或复合物B的量或复合物A的量)，也就是说上述获得的在复合物B中的标记物的量或在未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量(或在复合物A中的标记物的量)，在样品中的分析物的量可以通过绘制出显示分析物的量，与在复合物B中的标记物的量或在未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量(或在复合物A中的标记物的量)之间关系的校准曲线，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品相似的方法而测量得到，并通过将由测量含分析物的样品而得到的标记物的量应用到所述校准曲线来确定。
另外，通过向样品中加入已知浓度的可测物质作为内参，并通过将加入作为内参的所述物质的量，与未参与所述复合物形成的复合物的量，或CFS的量或未参与所述复合物形成的类似物的量[也就是说，在复合物中的标记物的量、或在未参与所述复合物形成的CFS中的标记物的量、或在复合物B中的标记物的量、或在未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量(或在复合物B中的标记物的量或在复合物A中的标记物的量)]进行比较，可以计算出样品中的分析物的相对量。另外，这样的计算可以在电泳设备中校正误差。而且，通过利用内参峰的迁移还可以校正目标峰的迁移。
所述可测物质(内参)包括例如，用上述标记物标记的肽、蛋白、核酸(DNA，RNA)、氨基酸、糖、糖链等；和荧光物质等。
另外，在本发明中，当酶用作标记物等时，所述酶的底物或其他耦合酶可以要求测量所述酶的活性。此时，例如，可以将这些底物或其他耦合酶置于毛细管中含有复合物或未参与所述复合物形成的CFS或未参与所述复合物形成的类似物的溶液[也就是说，在分析物和CFS或未参与所述复合物形成的CFS间的复合物，或复合物B或未参与所述复合物B形成的标记性类似物B(或复合物B或复合物A)]的下游侧，并且至少在进行本发明的步骤(4)之前，通过本发明的步骤(3)来进行分离。优选在本发明的步骤(1)中，将含有这些底物或其他耦合酶的溶液置于含有分析物或其类似物的溶液(区域)和含有至少一种CFS的溶液(区域)中最下游侧的溶液(区域)的进一步的下游侧，进而进行本发明的步骤(1)～(4)。
另外，当嵌入剂染料用作标记物时，在本发明的步骤(1)中，不需要将所述嵌入剂染料引入并置于包含含有分析物或其类似物的溶液、和含有至少一种CFS的溶液的毛细管中。而且，在本发明的步骤(2)中，不需要将所述嵌入剂染料与分析物或其类似物和CFS接触。只需要是至少本发明的步骤(3)是在存在所述嵌入剂染料的条件下进行的。在这种情况下，具体而言，可以将所述嵌入剂染料包含在本发明的步骤(3)所用的电泳介质和/或缓冲液中。在其它情况下，在本发明中，优选本发明的步骤(2)和步骤(3)都是在存在所述嵌入剂染料的条件下进行的。在此情况下，所述嵌入剂染料可以包含在本发明的步骤(2)和步骤(3)所用的电泳介质和/或缓冲液中。
3-2.使用带电聚合物
在本发明中，优选步骤(2)是在存在带电聚合物的条件下进行的。
也就是说，(i)在存在带电聚合物的条件下，通过使分析物或其类似物和CFS接触，而形成在所述分析物或其类似物和CFS之间的复合物，或(ii)在存在带电聚合物的条件下，通过使分析物、类似物(标记性类似物)和CFS接触，而形成在所述分析物和CFS之间的复合物A，和在所述标记性类似物和CFS之间的复合物B；或(iii)在存在带电聚合物的条件下，通过使分析物、反应改良类似物和标记性CFS接触，而形成在所述分析物和标记性CFS之间的复合物A和在所述反应改良类似物和标记性CFS之间的复合物B，从而减少了样品中(尤其是血清样品中)不利于分析的共存物质的影响。具体而言，例如，(i)在存在带电聚合物的条件下，通过使分析物和CFS接触，而形成在所述分析物和CFS之间的复合物[(分析物-CFS)复合物、(分析物-标记性CFS)复合物、(分析物-反应改良CFS)复合物、(分析物-标记性反应改良CFS)复合物、(CFS-分析物-反应改良CFS)复合物、(标记性CFS-分析物-反应改良CFS)复合物、(CFS-分析物-标记性反应改良CFS)复合物，及其组合等]，或(ii)在存在带电聚合物的条件下，通过使分析物、标记性类似物和CFS接触(也就是说，使所述分析物与CFS接触，所述标记性类似物和CFS接触)，而形成在所述分析物和所述CFS之间的复合物A[(分析物-CFS)复合物、(分析物-反应改良CFS)复合物、(CFS-分析物-反应改良CFS)复合物、及其组合等]，和在所述标记性类似物和CFS之间的复合物B[(标记性类似物-CFS)复合物、(标记性类似物-反应改良CFS)复合物、(CFS-标记性类似物-反应改良CFS)复合物、及其组合等]；或(iii)在存在带电聚合物的条件下，通过使分析物、反应改良类似物和标记性CFS接触(也就是说，使所述分析物与标记性CFS接触、所述反应改良类似物和标记性CFS接触)，而形成在所述分析物和标记性CFS之间的复合物A和在所述反应改良类似物和所述标记性CFS之间的复合物B。
作为本发明中所用的带电聚合物，使用与样品中共存物质电荷相反(正或负)的物质。另外，优选与所用CFS具有相同电荷的带电聚合物。
作为所述的带电聚合物，包括聚阴离子聚合物和聚阳离子聚合物。
聚阴离子聚合物包括，多糖例如肝素，硫酸肝素，硫酸软骨素，硫酸葡聚糖，聚钨酸，钨磷酸，透明质酸，硫酸皮肤素和硫酸聚茴香脑(polyanethole sulfate)等；多核苷酸例如DNA(质粒DNA、小牛胸腺DNA、鲑鱼精DNA、结合纤维素的DNA和合成DNA等)和RNA等；多肽例如聚氨基酸(聚天门冬胺酸、聚谷氨酸等)、合成多肽等；合成聚合物例如聚-dldC、聚乙烯硫酸酯、聚丙烯酸等；陶瓷例如玻璃粒、胶体玻璃(colloidalglass)、玻璃乳(glass milk)等；及其复合物等。
另外，聚阳离子聚合物包括多糖例如壳聚糖、其衍生物等；多肽例如多熔素、聚组氨酸、聚精氨酸、鱼精蛋白、组蛋白、鸟氨酸等；合成聚合物例如聚烯丙基胺、聚乙烯亚胺、聚乙烯胺等；多胺例如精胺、亚精胺等；阳离子脂肪、陶瓷、其复合物等。
其中，优选阴离子多糖，且特别优选硫酸肝素。
上述带电聚合物可以单独使用或两种或多种组合使用。
对于能获得存在于进行步骤(2)时的上述带电聚合物的方法没有特别的限制，只要最终可以在存在带电聚合物的条件下形成复合物即可。
这样的方法包括，例如，如上所述的能获得共存于电泳介质的带电聚合物填到毛细管内的方法；能获得共存于含有分析物或其类似物的溶液，和/或含有CFS的溶液中的带电聚合物的方法；等。
其中，带电聚合物优选共存于除了含有分析物的溶液(区域)以外的溶液(区域)中，更优选在置于与含有分析物的溶液(区域)相邻的上游侧或下游侧的至少一种溶液(区域)中。
由于取决于所用的带电聚合物的种类，因此上述带电聚合物的用量不能简单地说明，但是，例如，在要填入通道的电泳介质中的浓度的下限通常不低于0.01％(w/v)，优选不低于0.05％(w/v)，且更优选不低于0.5％(w/v)，上限通常不高于50％(w/v)，优选不高于10％(w/v)，且进一步优选不高于5％(w/v)，在其他溶液中特别优选约1％(w/v)。另外，在含有分析物或其类似物的溶液中或在含有CFS的溶液中的浓度的下限通常不低于0.001％(w/v)，优选不低于0.01％(w/v)，更优选不低于0.02％(w/v)，且进一步优选不低于0.025％(w/v)，上限通常不高于10％(w/v)，优选不高于5％(w/v)，更优选不高于1％(w/v)，且进一步优选不高于0.05％(w/v)。
3-3.测量的具体方法
下面具体说明本发明测量方法的模式。
(1)非竞争性方法
下面是非竞争性方法情况下使用的测量方法：
(a)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(a)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(a)的步骤(2)，让所述分析物与所述CFS电泳接触，而形成在所述分析物和CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(a)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)来分离所述复合物和未参与所述复合物形成的所述CFS，和
(4)通过对应CFS性质(种类)的方法来测量分离的复合物中的CFS的量或未参与所述复合物形成的CFS的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与CFS的量之间关系的校准曲线上而计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液和含有CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用上述含有内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。利用对应CFS性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的CFS的量或未参与所述复合物形成的CFS的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较而计算出样品中的分析物的量。
(b)使用标记性CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(b)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，和(b)含有至少一种标记性CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(b)的步骤(2)，让所述分析物与所述标记性CFS电泳接触，而形成在所述分析物和标记性CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(b)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性CFS，和
(4)通过对应标记性物质的性质(种类)的方法来测量分离的复合物中的标记物的量或包含在未参与所述复合物形成的标记性CFS中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上而计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液和含有标记性CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。利用对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或在未参与所述复合物形成的标记性CFS中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较而计算出样品中的分析物的量。
(c)使用反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(c)的步骤(1)，将(a)含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(c)的步骤(2)，让所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触，而形成在所述分析物和所述反应改良CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(c)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物和未参与所述复合物形成的所述反应改良CFS，和
(4)利用对应反应改良CFS性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的反应改良CFS的量或未参与所述复合物形成的反应改良CFS的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与反应改良CFS的量之间关系的校准曲线上，而计算样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液和含有反应改良CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。利用对应反应改良CFS性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的反应改良CFS的量或未参与所述复合物形成的反应改良CFS的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较而计算出样品中的分析物的量。
(d)使用标记性反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(d)的步骤(1)，(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]和(b)含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(d)的步骤(2)，让所述分析物与所述标记性反应改良CFS电泳接触，而形成在所述分析物和标记性反应改良CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(d)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性反应改良CFS，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或未参与所述复合物形成的标记性反应改良CFS中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液和含有标记性反应改良CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或未参与所述复合物形成的标记性反应改良CFS中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较而计算出样品中的分析物的量。
(e)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS，和反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(e)的步骤(1)，(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(e)的步骤(2)，让所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触，而形成在所述分析物，CFS和反应改良CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(e)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物和未参与所述复合物形成的所述CFS和任选的未参与所述复合物形成的反应改良CFS，和
(4)通过对应CFS或反应改良CFS的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的CFS的量或分离的复合物中的反应改良CFS的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量或未参与所述复合物形成的反应改良CFS的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与CFS的量或反应改良CFS的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液，含有CFS的溶液和含有反应改良CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应CFS或反应改良CFS性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的CFS的量或分离的复合物中的反应改良CFS的量，或未参与所述复合物形成的CFS的量或未参与所述复合物形成的反应改良CFS的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(f)使用标记性CFS和反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(f)的步骤(1)，(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种标记性CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(f)的步骤(2)，让所述分析物与所述标记性CFS和反应改良CFS电泳接触，而形成在所述分析物，标记性CFS和反应改良CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(f)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性CFS和任选地未参与所述复合物形成的反应改良CFS，和
(4)通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或未参与所述复合物形成的标记性CFS中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，而计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液，含有标记性CFS的溶液和含有反应改良CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或未参与所述复合物形成的标记性CFS中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(g)使用未与标记物和反应改良物结合的CFS，和标记性反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(g)的步骤(1)，(a)将含有分析物的溶液[例如，(i)含有分析物的样品，(ii)含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液]，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种标记性反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(g)的步骤(2)，让所述分析物与所述CFS和标记性反应改良CFS电泳接触，而形成在所述分析物，CFS和标记性反应改良CFS间的复合物，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(g)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物和未参与所述复合物形成的所述标记性反应改良CFS和任选地未参与所述复合物形成的CFS，和
(4)通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或未参与所述复合物形成的标记性反应改良CFS中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有分析物的溶液，含有CFS的溶液和含有标记性反应改良CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物中的标记物的量或未参与所述复合物形成的标记性反应改良CFS中标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(2)竞争性方法
下面是竞争性方法情况下的测量方法：
(h)使用标记性类似物和CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(h)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(h)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述CFS电泳接触)，而形成在所述分析物和CFS间的复合物A和所述标记性类似物和CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(h)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)或含有CFS的溶液，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(i)使用标记性类似物和反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(i)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(i)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述反应改良CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触)，而形成在所述分析物和反应改良CFS间的复合物A和所述标记性类似物和反应改良CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(i)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)或含有反应改良CFS的溶液，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(j)使用标记性类似物、CFS和反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(j)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，(b)含有至少一种CFS的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(j)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触，且所述标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触)，而形成在所述分析物、CFS和反应改良CFS间的复合物A和在所述标记性类似物、CFS和反应改良CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(j)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有含分析物的样品和标记性类似物的溶液(或含有含分析物的样品、标记性类似物和至少一种CFS的溶液)，含有CFS的溶液和含有反应改良CFS的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(k)使用反应改良类似物和标记性CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(k)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)和(b)含有至少一种标记性CFS的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(k)的步骤(2)，让所述分析物和反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触(也就是说，所述分析物与所述标记性CFS电泳接触，且所述反应改良类似物与所述标记性CFS电泳接触)，而形成在所述分析物和标记性CFS间的复合物A和在所述反应改良类似物和标记性CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(k)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和所述复合物A，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或分离的复合物A中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法而得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的含有含分析物的样品和反应改良类似物的溶液(或含有含分析物的样品、反应改良类似物和至少一种CFS的溶液)或含有标记性CFS的溶液，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或分离的复合物A中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(l)使用标记性类似物和CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(l)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(l)的步骤(2)，让所述标记性类似物与所述CFS电泳接触(也就是说，所述标记性类似物与未参与在所述含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述CFS电泳接触)，而形成在所述标记性类似物和CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(l)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的含有含分析物的样品和至少一种CFS的溶液或含有标记性类似物的溶液，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(m)使用标记性类似物和反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(m)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液，和(b)含有标记性类似物的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(m)的步骤(2)，让所述标记性类似物与所述反应改良CFS电泳接触(也就是说，所述标记性类似物与未参与在含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的所述溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述反应改良CFS电泳接触)，而形成在所述标记性类似物和反应改良CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(m)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和未参与所述复合物形成的所述标记性类似物，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的含有含分析物的样品和至少一种反应改良CFS的溶液或含有标记性类似物的溶液，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，计算出样品中的分析物的量。
(n)使用标记性类似物、CFS和反应改良CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(n)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液，(b)含有标记性类似物的溶液和(c)含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(n)的步骤(2)，让所述分析物和标记性类似物与所述CFS和反应改良CFS电泳接触(也就是说，在所述溶液(a)中的在所述分析物与CFS(或反应改良CFS)间的复合物与所述溶液(c)中的所述反应改良CFS(或CFS)电泳接触，且所述标记性类似物与未参与在所述溶液(a)中与所述分析物形成所述复合物的所述CFS(或反应改良CFS)和在所述溶液(c)中与所述反应改良CFS(或CFS)电泳接触，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(n)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和未参与所述复合物B形成的所述标记性类似物，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的选自含有含分析物的样品和至少一种CFS(或至少一种反应改良CFS)的溶液、含有标记性类似物的溶液，和含有至少一种反应改良CFS(或至少一种CFS)的溶液中的至少一种，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或未参与所述复合物B形成的标记性类似物中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
(o)使用反应改良类似物和标记性CFS的情况。
在此情况下，例如，可以进行下面的[方法A]或[方法B]。
[方法A]：
(1)按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(o)的步骤(1)，(a)将含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液，和(b)含有反应改良类似物的溶液引入并设置在毛细管内，
(2)然后，按照“1-6.形成复合物的具体方法”中的情况(o)的步骤(2)，让所述反应改良类似物与标记性CFS电泳接触(也就是说，所述反应改良类似物与未参与在含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的所述溶液中与所述分析物形成复合物(复合物A)的所述标记性CFS电泳接触)，而形成在所述反应改良类似物和标记性CFS之间的复合物B，
(3)按照“2-2.具体的分离方法”中的情况(o)的步骤(3)，通过进一步的电移动(迁移)分离出所述复合物B和复合物A，和
(4)通过对应标记物性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或分离的复合物A中的标记物的量，并将测量结果(测量值)应用到显示分析物的量与标记物的量之间关系的校准曲线上，而计算出样品中的分析物的量，所述校准曲线通过用与含有已知浓度的分析物的样品的相似方法得到。
[方法B]：
向在上述[方法A]的步骤(1)中的含有含分析物的样品和至少一种标记性CFS的溶液或含有反应改良类似物的溶液，加入已知浓度的可测物质作为内参，并使用含有该内参的溶液进行上述步骤(1)～(3)。通过对应标记物的性质(种类)的方法，测量出分离的复合物B中的标记物的量或分离的复合物A中的标记物的量，通过将测量结果(测量值)与加入作内参的所述物质的量相比较，而计算出样品中的分析物的量。
除了使用本发明的分离方法外，本发明的测量方法可以按照上述已知方法进行，且待用的试剂也可以按照已知的方法进行合适的选择。
4.本发明的试剂盒
本发明的试剂盒是用于进行本发明上述形成复合物的方法、分离的方法和测量方法的试剂盒。
所述试剂盒包括以下物品：
(1)至少(i)上述CFS、(ii)视需要的类似物，和(iii)在本发明上述形成复合物的方法、分离的方法和测量方法中使用的说明书；或
(2)(i)电泳装置，该装置包括具有至少可以进行本发明上述步骤(1)的部分和可以进行本发明上述步骤(2)的部分的毛细管(通道)，优选具有可以进行本发明上述步骤(1)的部分、可以进行本发明上述步骤(2)的部分和进一步的可以进行本发明上述步骤(3)的部分的毛细管(通道)，(ii)CFS，(iii)视需要的类似物，和(iv)在本发明上述形成复合物的方法、分离的方法和测量方法中使用的说明书。
在这一点上，所述″说明书″指所述试剂盒的手册(说明手册)、附带文件(付信)或小册子(活页)等，其通过文字或附图等对本发明方法的特征、原理、操作规程等进行了基本地描述。
这些组合物元件的优选实施方式和具体实例如上所述。
而且，本发明的试剂盒还可以含有除了上述试剂以外的试剂。所述试剂包括但不限于，例如，用于电泳分离的缓冲液、稀释剂、内参、校准剂(标准溶液)、对照、用于测定标记物(例如，酶、染料、发光物质、荧光物质等)的试剂(酶底物、耦合酶等)、用于检测器调焦的试剂等。
下面参考实施例和比较例来更加详细地解释本发明，但是，本发明并不限于此。
实施例
实施例1
[分析物(抗原)]
α-胎蛋白(AFP)(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.出品)
[反应改良CFS(DNA标记性抗体)
根据图1所示的过程，制备与DNA结合的抗-AFP抗体Fab′片段。
也就是说，先用常规方法纯化在5’端引入了NH2基团的250bp DNA片段。然后，通过常规方法，让引入到DNA片段中的NH2基团，和4-(p-马来酰亚胺苯基)丁酸硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-SMPB)连接体(具有琥珀酰亚胺基团和马来酰亚胺基团的连接体：Pierce Co.出品)的琥珀酰亚胺基团进行反应。然后，通过凝胶过滤处理，除去未反应的连接体，得到与连接体结合的250bp DNA片段。让所得的与连接体结合的250bp DNA片段，与预先用抗-AFP抗体WA1(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.出品)按照常规方法制备的抗-AFP抗体WA1 Fab′片段进行反应。所得的反应产物分别利用DEAE柱纯化，制备出与250bp DNA片段结合的抗-AFP抗体WA1Fab′片段(250bp DNA标记性抗体)
[标记性CFS(荧光标记抗体)]
将抗-AFP抗体WA2(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.出品)，其识别的AFP的表位与WA1抗体不同，用常规方法处理得到抗-AFP抗体WA2 Fab′片段。用常规方法将荧光物质Alexa 647(Molecular Probes Inc.出品)引入到所述片段的氨基，而制成Alexa647标记的抗-AFP抗体WA2Fab′片段(荧光标记抗体)。
[毛细管芯片]
按照″Technology and application of microchemistry chip″，T.Kitamori等人，2004年出版(Maruzen Co.，Ltd.)描述的方法来生产具有图2所示设置的毛细管芯片：
也就是说，在石英基底上的Si膜上形成光刻膜。用具有如图2所示的毛细管设计(设置)的掩模来使光刻胶曝光。通过溅射除去用显影除去光刻胶的部分上的Si，然后利用氟化氢溶液进行湿刻蚀，从而在石英基底上产生毛细管通道槽(毛细管)。在除去光刻胶和留在石英基底上的Si膜后，将所述石英基底和具有液储存孔的盖板用HF粘结技术粘结到一起，从而获得毛细管芯片。
在这一点上，在图2中，L1和L2表示用于引入先导缓冲液的孔，S表示用于引入电泳样品的孔，R1表示用于引入试剂溶液(含有250bp DNA标记性抗体的溶液)的孔，W1和W2分别表示排出孔。
[电泳]
(1)电泳样品
在0.5mL管中，将1μL具有预定浓度的AFP，1μL 2μM的荧光标记抗体和8μL含有50mM Cl-离子的先导缓冲液混合，从而获得10μL反应溶液。将反应溶液静置于冰上，进行约30分钟抗原-抗体反应，从而形成[荧光标记抗体-AFP]免疫复合物。在这一点上，AFP的终浓度为0pM、25pm、50pM或100pM，荧光标记抗体的终浓度为200nM。
将获得的含有免疫复合物的反应溶液作为电泳样品。
(2)试剂溶液(含有250bp DNA标记抗体的溶液)
用含有20nM 250bp DNA标记抗体的尾随缓冲液(含75mM HEPES)作为试剂溶液。
(3)电泳的过程
a)引入电泳样品和试剂溶液
用滴剂向图1所示的S孔(用于引入电泳样品的孔)中，滴入10μL电泳样品(含有[荧光标记抗体-AFP]免疫复合物的溶液)，用滴剂将10μL试剂溶液(含有DNA标记性抗体的溶液)滴入R1孔(用于引入试剂溶液的孔)中，并用滴剂将10μL先导缓冲液分别引入L1和L2孔中，并通过在W1(用于排出的孔)和W2(用于排出的孔)之间施加-5psi的压力100秒，将电泳样品、试剂溶液和先导缓冲液引入该通道。电泳样品和试剂溶液在毛细管中的设置关系示意性的显示在图3中。在这一点上，在图3中，阴影区域表示电泳样品的设置区域，网点区域表示试剂溶液的设置区域。
b)富集和反应
通过在R1孔和L1孔之间施加312V、625V或2500V的电压，试剂溶液中的250bp DNA标记抗体能与电泳样品中的[荧光标记抗体-AFP]免疫复合物接触，同时250bp DNA标记抗体在试剂溶液中富集，从而形成[荧光标记抗体-AFP-250bp DNA标记抗体]免疫复合物，同时于10℃，在试剂溶液中富集了250bp DNA标记抗体。
在这一点上，施加312V电压的反应时间约为200秒，施加625V电压的反应时间约为100秒，施加2500V电压的反应时间约为25秒。
c)分离和检测
当[荧光标记抗体-AFP-250bp DNA标记抗体]免疫复合物穿过L2通道和主通道的交叉部分时，对L2孔施加2800V电压，对L1孔施加300V电压100秒，从而分离和检测所述免疫复合物。
在这一点上，利用荧光显微镜(BX-50，KS Olympus Co.，Ltd.出品)，通过连续测量在距L2通道交叉部分2cm处的毛细管部分的635nm激光激发的荧光强度来进行检测。
[结果]
图4示出AFP浓度和峰面积之间的关系(线性)，图5示出当用AFP浓度为0pM和100pM的电泳样品时的电泳色谱。在这一点上，在图4中，纵轴表示峰面积，横轴表示AFP浓度。另外，在图5中，实线(—)表示当用AFP浓度为100pM的电泳样品的情况，虚线(···)表示当用AFP浓度为0pM的电泳样品的情况。
从图4和图5中发现，可以观察到[荧光标记抗体-AFP-250bp DNA标记抗体]免疫复合物的峰，且其峰面积与AFP浓度成正比。也就是说，可以理解为免疫复合物在毛细管(通道)中通过电泳而形成，而不需要预先在毛细管(通道)外反应来形成免疫复合物。
另外，表2示出了在富集和反应中的施加的电压与AFP反应率之间的关系。作为对比例，表2还表示了通过常规方法将多种溶液引入混合毛细管(通道)同时进行混合和反应(JP-A-2005-31070等)，这些溶液反应120秒时得到的AFP反应率。
在这一点上，AFP反应率是一个相对值，以预先在毛细管外使荧光标记抗体、AFP和250bp DNA标记抗体在10℃反应30分钟，得到10μL含有200nM荧光标记抗体、100pM AFP和20nM 250bp DNA标记抗体的反应溶液，并将S孔中的所得反应溶液引入后，按照上述相似的方法检测的AFP信号(峰面积)作为100％。
表2
Figure A20068004066201071
从表2可以明显地看出，在施加2500V(反应时间约为25秒)电压时，反应率等于或大于常规方法所得的反应率，在施加625V(反应时间约为100秒)时，与常规方法的反应时间基本相同，而反应率则远高于常规方法所得的反应率。也就是说，可以理解为通过本发明的方法，可以以远高于常规方法的反应率形成复合物。
实施例2
[分析物(抗原)]
使用与实施例1相同的分析物。
[反应改良CFS(DNA标记抗体]
使用与实施例1相同的反应改良CFS。
[标记性CFS(荧光标记抗体)]
使用与实施例1相同的标记性CFS。
[毛细管芯片]
按照″Technology and application of microchemistry chip″，T.Kitamori等人，2004年出版(Maruzen Co.，Ltd.)描述的方法来生产具有图6所示设置的毛细管芯片：
也就是说，在石英基底上的Si膜上形成光刻膜。用具有如图6所示的毛细管设计(设置)的掩模使光刻胶曝光。通过溅射除去用显影除去光刻胶的部分上的Si，然后利用氟化氢溶液进行湿刻蚀，从而在石英基底上产生毛细管通道槽(毛细管)。除去光刻胶和留在石英基底上的Si膜后，将所述石英基底和具有储液孔的盖板用HF粘结技术粘结到一起，从而获得毛细管芯片。
在这一点上，在图6中，L1和L2表示用于引入先导缓冲液的孔，SR表示用于引入电泳样品、第一试剂溶液(含有250bp DNA标记抗体的溶液)和第二试剂溶液(含有荧光标记抗体的溶液)的孔。
[电泳]
(1)A电泳样品
用各自含有0nM、0.8nM、4nM、20nM、50nM和100nM AFP的先导缓冲液(含有50mM Cl-离子)作为电泳样品。
(2)第一试剂溶液(含有250bp DNA标记抗体的溶液)
用含有100nM 250bp DNA标记抗体的先导缓冲液(含有50mM Cl-离子)作为第一试剂溶液。
(3)第二试剂溶液(含有荧光标记抗体的溶液)
用含有400nM 250bp荧光标记抗体的先导缓冲液(含有50mM Cl-离子)作为第二试剂溶液。
(4)电泳过程
a)引入电泳样品、第一试剂溶液和第二试剂溶液
在图6所示的整个通道用先导缓冲液填充之后，用滴剂将10μL第二试剂溶液(含有荧光标记抗体的溶液)滴入SR孔，通过对L1孔施加-5psi的压力2秒钟而将第二试剂溶液引入该通道。然后，SR孔中的第二试剂溶液用10μL电泳样品(含有AFP的溶液)代替，同样通过对L1孔施加-5psi的压力2秒钟而将该电泳样品引入该通道。进而，SR孔中的电泳样品用10μL第一试剂溶液(含有250bp DNA标记抗体的溶液)代替，通过对L1孔施加-5psi的压力2秒钟而将第一试剂溶液引入该通道。通过这个过程，在通道内按照下游方向形成了第二试剂溶液区域、电泳样品区域和第一试剂溶液区域。在图7中示出了电泳样品、第一试剂溶液和第二试剂溶液在毛细管中的设置关系。在这一点上，在图7中，垂线区域表示第一试剂溶液的设置区域，阴影区域表示电泳样品的设置区域，网点区域表示第二试剂溶液的设置区域。
然后，SR孔中的第一试剂溶液用10μL含有75mM HEPES的尾随缓冲液代替，通过对L1孔施加-5psi的压力2秒钟，而将尾随缓冲液引入并设置在第一试剂溶液区的上游侧。
b)富集和反应
通过在SR孔和L1孔(用于引入先导缓冲液的孔)之间施加312V的电压，让第一试剂溶液中的DNA标记抗体，电泳样品中的AFP和第二试剂溶液中的荧光标记抗体接触，并同时富集，于10℃形成[荧光标记抗体-AFP-250bp DNA标记抗体]免疫复合物。
在这一点上，反应时间约为200秒。
c)分离和检测
当[荧光标记抗体-AFP-250bp DNA标记抗体]免疫复合物穿过L2通道和主通道的交叉部分时，对L2孔施加2800V电压，对L1孔施加300V电压100秒，从而分离并检测所述免疫复合物。
在这一点上，利用荧光显微镜(BX-50，KS Olympus Co.，Ltd.出品)，通过连续测量在距L2通道交叉部分2cm处的毛细管部分的635nm激光激发的荧光强度来进行检测。
[结果]
图8示出AFP浓度和峰面积之间的关系(线性)，图9示出在低AFP浓度区域(用AFP浓度为0nM、0.8nM、4nM和20nM的电泳样品获得的结果)中，AFP浓度和峰面积之间的关系(线性)。在这一点上，在图8和图9中，纵轴表示峰面积，横轴表示AFP浓度。另外，作为对比例，图8和图9还显示了在将预先在毛细管外使荧光标记抗体、AFP和250bp DNA标记抗体在10℃反应30分钟后获得的反应溶液从SR孔中引入毛细管后，利用与上述相似检测而获得的结果。在这一点上，在反应中的荧光标记抗体终浓度为200nM，AFP的最终浓度为0nM、0.8nM、4nM、20nM、50nM或100nM，250bp DNA标记抗体的终浓度为20nM。
在图8和图9中，·标记表示利用实施例2的方法所得的结果，o标记表示利用对比例的方法所得的结果。另外，在图9中，实线表示利用实施例2的方法所得的结果，虚线表示利用对比例的方法所得的结果。
从图8和图9中发现，可以观察到[荧光标记抗体-AFP-250bp DNA标记抗体]免疫复合物的峰，且其峰面积与AFP浓度成正比。特别是，在预先形成免疫复合物，然后进行电泳处理的情况下，在低AFP浓度区域中的线性差(检测值在实线下)，而在本发明的情况下，在AFP低浓度或高浓度区域都可以得到良好的线性，其中免疫反应在毛细管中电泳进行，然后进行电泳处理。
工业实用性
本发明涉及用于在样品中的分析物或其类似物和可与所述分析物或其类似物形成复合物的物质(CFS)之间形成复合物的方法，将所形成的复合物与未参与所述复合物形成的CFS或类似物分离的方法，以及基于分离的复合物的量或未参与复合物形成的CFS或类似物的量来测量样品中的分析物的方法。
按照本发明的方法，溶液中的分析物或其类似物与溶液中的可与所述分析物或其类似物形成复合物的物质(CFS)之间的反应，可以在短时间内高反应效率地进行。这样就可以快速、简单、高精度地分离复合物和可与所述分析物或其类似物形成复合物的物质(CFS)，和未参与复合物形成的CFS或类似物，而且，可以基于分离的复合物的量或未参与复合物形成的CFS或类似物的量，来高灵敏度地测量样品中的分析物。

Claims (18)

1.用于形成复合物的方法，其包括以下步骤：
第(1)步，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种可与所述分析物或所述其类似物形成复合物的物质(复合物形成物)的溶液置于毛细管内，通过对所述毛细管施加电压，就能在所述分析物或所述其类似物和该复合物形成物间形成复合物，而不用将这些溶液预先混合；和
第(2)步，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，而使所述分析物或所述其类似物与复合物形成物接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种复合物形成物，从而在所述分析物或所述其类似物和该复合物形成物间形成复合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(2)中施加电压的结果是富集的所述分析物或所述其类似物和/或至少一种复合物形成物不低于1.5倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(2)通过ITP(等速电泳)或FASS(场放大样品堆集法)进行。
4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其中至少一种复合物形成物是与标记物结合和/或与能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物。
5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其中使用至少两种复合物形成物、至少两种各自含有所述复合物形成物的溶液，且(1)至少一种复合物形成物是与标记物结合的复合物形成物，至少一种另外的复合物形成物是与能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物，或(2)至少一种复合物形成物是与标记物和能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物。
6.根据权利要求1所述的方法，其中一种复合物形成物是所述分析物或所述其类似物的抗体，或与所述分析物或所述其类似物结合的蛋白。
7.分离复合物的方法，包括以下步骤：
第(1)步，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种可与所述分析物或所述其类似物形成复合物的物质(复合物形成物)的溶液置于毛细管内，通过对所述毛细管施加电压，就在所述分析物或所述其类似物和该复合物形成物间形成复合物，而不用将这些溶液预先混合；
第(2)步，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或所述其类似物与该复合物形成物接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种复合物形成物，从而在所述分析物或所述其类似物和该复合物形成物间形成复合物；和
第(3)步，通过进一步的电移动分离所述复合物、未参与所述复合物形成的复合物形成物或未参与所述复合物形成的类似物。
8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(2)中施加电压的结果是富集的所述分析物或所述其类似物和/或至少一种复合物形成物不低于1.5倍。
9.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(2)通过ITP(等速电泳)或FASS(场放大样品堆集法)进行。
10.根据权利要求7～9任一项所述的方法，其中至少一种复合物形成物是与标记物结合和/或与能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物。
11.根据权利要求7～9任一项所述的方法，其中使用至少两种复合物形成物、至少两种各自含有所述复合物形成物的溶液，且(1)至少一种复合物形成物是与标记物结合的复合物形成物，且至少一种另外的复合物形成物是与能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物，或(2)至少一种复合物形成物是与标记物和能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物。
12.根据权利要求7所述的方法，其中一种复合物形成物是所述分析物或所述其类似物的抗体，或与所述分析物或所述其类似物结合的蛋白。
13.测量分析物的方法，包括以下步骤：
第(1)步，将(a)含有分析物或其类似物的溶液和(b)含有至少一种可与所述分析物或所述其类似物形成复合物的物质(复合物形成物)的溶液置于毛细管内，通过对所述毛细管施加电压，就在所述分析物或所述其类似物和该复合物形成物间形成复合物，而不用将这些溶液预先混合；
第(2)步，在均匀混合这些溶液之前，通过对所述毛细管施加电压，让所述分析物或所述其类似物与该复合物形成物接触，同时富集所述分析物或所述其类似物和/或至少一种复合物形成物，从而在所述分析物或所述其类似物和该复合物形成物间形成复合物；
第(3)步，通过进一步的电移动分离所述复合物、未参与所述复合物形成的复合物形成物或未参与所述复合物形成的类似物；和
第(4)步，测量所分离的复合物的量、或未参与所述复合物形成的复合物形成物或类似物的量，从而基于该结果来确定所述分析物的量。
14.根据权利要求13所述的方法，其中步骤(2)中施加电压的结果是富集的所述分析物或所述其类似物和/或至少一种复合物形成物不低于1.5倍。
15.根据权利要求13所述的方法，其中步骤(2)通过ITP(等速电泳)或FASS(场放大样品堆集法)进行。
16.根据权利要求13～15任一项所述的方法，其中至少一种复合物形成物是与标记物结合和/或与能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物。
17.根据权利要求13～15任一项所述的方法，其中使用至少两种复合物形成物、至少两种各自含有所述复合物形成物的溶液，且(1)至少一种复合物形成物是与标记物结合的复合物形成物，且至少一种另外的复合物形成物是与能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物，或(2)至少一种复合物形成物是与标记物和能改变所述分析物或所述其类似物的电泳迁移率的物质(反应改良物)结合的复合物形成物。
18.根据权利要求11所述的方法，其中一种复合物形成物是所述分析物或所述其类似物的抗体，或与所述分析物或所述其类似物结合的蛋白。
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