CN101292036B - 用于重组表达多肽的方法 - Google Patents
用于重组表达多肽的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101292036B CN101292036B CN200680039291.9A CN200680039291A CN101292036B CN 101292036 B CN101292036 B CN 101292036B CN 200680039291 A CN200680039291 A CN 200680039291A CN 101292036 B CN101292036 B CN 101292036B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- prt
- house mouse
- polypeptide
- nucleic acid
- immunoglobulin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 243
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 200
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 197
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 71
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 71
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 71
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 45
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 39
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims abstract description 30
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims abstract description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 89
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 73
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 68
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 68
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 33
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 17
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 9
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- 101100230376 Acetivibrio thermocellus (strain ATCC 27405 / DSM 1237 / JCM 9322 / NBRC 103400 / NCIMB 10682 / NRRL B-4536 / VPI 7372) celI gene Proteins 0.000 claims description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 4
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 abstract description 48
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 46
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 423
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 109
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 36
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 34
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 34
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 23
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 20
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 20
- LMSBRIVOCYOKMU-NRPADANISA-N Val-Gln-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N LMSBRIVOCYOKMU-NRPADANISA-N 0.000 description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 19
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 17
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 17
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 16
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 13
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 13
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 13
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 11
- STIAINRLUUKYKM-WFBYXXMGSA-N Ser-Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)=CNC2=C1 STIAINRLUUKYKM-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 11
- BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N Val-Leu-Ser Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 9
- LYGKYFKSZTUXGZ-ZDLURKLDSA-N Thr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O LYGKYFKSZTUXGZ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 9
- WRDANSJTFOHBPI-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WRDANSJTFOHBPI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 8
- PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N Ser-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 8
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 8
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- CBCCCLMNOBLBSC-XVYDVKMFSA-N Ala-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CBCCCLMNOBLBSC-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 6
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 6
- MAJYPBAJPNUFPV-BQBZGAKWSA-N His-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MAJYPBAJPNUFPV-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 5
- HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N Ser-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 4
- XIPZDANNDPMZGQ-WHFBIAKZSA-N Gln-Cys Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O XIPZDANNDPMZGQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 4
- QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N Val-Asp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N (4s,4as,5as,6s,12ar)-4-(dimethylamino)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4,4a,5,5a-tetrahydrotetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]4(O)C(=O)C3=C(O)C2=C1O NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N 0.000 description 3
- 101710153593 Albumin A Proteins 0.000 description 3
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 3
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 3
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- SMIDBHKWSYUBRZ-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMIDBHKWSYUBRZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- PMTWIUBUQRGCSB-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PMTWIUBUQRGCSB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- TZKPNGDGUVREEB-FOHZUACHSA-N Thr-Asn-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O TZKPNGDGUVREEB-FOHZUACHSA-N 0.000 description 3
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 3
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N hydrochloric acid Substances Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DECCMEWNXSNSDO-ZLUOBGJFSA-N Ala-Cys-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DECCMEWNXSNSDO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- CVHJIWVKTFNGHT-ACZMJKKPSA-N Ala-Gln-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CVHJIWVKTFNGHT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- OKEWAFFWMHBGPT-XPUUQOCRSA-N Ala-His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 OKEWAFFWMHBGPT-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 2
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 2
- RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 2
- RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(O)=O HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- JMQUAZXYFAEOIH-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O JMQUAZXYFAEOIH-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- JOQSQZFKFYJKKJ-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JOQSQZFKFYJKKJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- MANXHLOVEUHVFD-DCAQKATOSA-N Val-His-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N MANXHLOVEUHVFD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- HQYVQDRYODWONX-DCAQKATOSA-N Val-His-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N HQYVQDRYODWONX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N Valyl-Serine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 2
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 2
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 108700020534 tetracycline resistance-encoding transposon repressor Proteins 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical group CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRBLKGHRWFGINE-UGWAGOLRSA-N 2-[2-[2-[[2-[[4-[[2-[[6-amino-2-[3-amino-1-[(2,3-diamino-3-oxopropyl)amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[(2r,3s,4s,5s,6s)-3-[(2s,3r,4r,5s)-4-carbamoyl-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)- Chemical compound N=1C(C=2SC=C(N=2)C(N)=O)CSC=1CCNC(=O)C(C(C)=O)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(O[C@H]1[C@@]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)(C)O[C@H]1[C@@H]([C@](O)([C@@H](O)C(CO)O1)C(N)=O)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C QRBLKGHRWFGINE-UGWAGOLRSA-N 0.000 description 1
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical group NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N Ala-Cys-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LJFNNUBZSZCZFN-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Cys Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O LJFNNUBZSZCZFN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- ICAYWNTWHRRAQP-FXQIFTODSA-N Asp-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)CN=C(N)N ICAYWNTWHRRAQP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102100023927 Asparagine synthetase [glutamine-hydrolyzing] Human genes 0.000 description 1
- 108010070255 Aspartate-ammonia ligase Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100176801 Caenorhabditis elegans gst-10 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 1
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 240000004859 Gamochaeta purpurea Species 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- VHLZDSUANXBJHW-QWRGUYRKSA-N Gln-Phe Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHLZDSUANXBJHW-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- UKKNTTCNGZLJEX-WHFBIAKZSA-N Gln-Ser Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- PYUCNHJQQVSPGN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)CN=C(N)N PYUCNHJQQVSPGN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VLIJYPMATZSOLL-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN VLIJYPMATZSOLL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- 102100020948 Growth hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- AFERFBZLVUFWRA-HTFCKZLJSA-N Ile-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N AFERFBZLVUFWRA-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZLFNNVATRMCAKN-ZKWXMUAHSA-N Ile-Ser-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N ZLFNNVATRMCAKN-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- QGXQHJQPAPMACW-PPCPHDFISA-N Ile-Thr-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N QGXQHJQPAPMACW-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N L-Histidinol Natural products OCC(N)CC1=CN=CN1 ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N L-histidinol Chemical compound OC[C@@H](N)CC1=CNC=N1 ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 101710192606 Latent membrane protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IIKJNQWOQIWWMR-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N IIKJNQWOQIWWMR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- ZEVPMOHYCQFWSE-NAKRPEOUSA-N Met-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N ZEVPMOHYCQFWSE-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000001621 Mucoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010093825 Mucoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000969137 Mus musculus Metallothionein-1 Proteins 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- KLAONOISLHWJEE-QWRGUYRKSA-N Phe-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KLAONOISLHWJEE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LTQCLFMNABRKSH-UHFFFAOYSA-N Phleomycin Natural products N=1C(C=2SC=C(N=2)C(N)=O)CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C LTQCLFMNABRKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010035235 Phleomycins Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007568 Proto-Oncogene Proteins c-fos Human genes 0.000 description 1
- 108010071563 Proto-Oncogene Proteins c-fos Proteins 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GXXTUIUYTWGPMV-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GXXTUIUYTWGPMV-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SFTZTYBXIXLRGQ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SFTZTYBXIXLRGQ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- OWCVUSJMEBGMOK-YUMQZZPRSA-N Ser-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O OWCVUSJMEBGMOK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N Ser-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700025832 Serum Response Element Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 108010068542 Somatotropin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101710109576 Terminal protein Proteins 0.000 description 1
- 108700007696 Tetrahydrofolate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- UNURFMVMXLENAZ-KJEVXHAQSA-N Thr-Arg-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O UNURFMVMXLENAZ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N Thr-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N Thr-His-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010075344 Tryptophan synthase Proteins 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- JLFKWDAZBRYCGX-ZKWXMUAHSA-N Val-Asn-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JLFKWDAZBRYCGX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- CWSIBTLMMQLPPZ-FXQIFTODSA-N Val-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C(C)C)N CWSIBTLMMQLPPZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HIZMLPKDJAXDRG-FXQIFTODSA-N Val-Cys-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N HIZMLPKDJAXDRG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VVZDBPBZHLQPPB-XVKPBYJWSA-N Val-Glu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O VVZDBPBZHLQPPB-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ZHQWPWQNVRCXAX-XQQFMLRXSA-N Val-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ZHQWPWQNVRCXAX-XQQFMLRXSA-N 0.000 description 1
- UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N Val-Ser-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 1
- YVNQAIFQFWTPLQ-UHFFFAOYSA-O [4-[[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]amino]-2-methylphenyl]methylidene]-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]-ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]azanium Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C)C=C1 YVNQAIFQFWTPLQ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical class N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003705 background correction Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013523 data management Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003248 enzyme activator Substances 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000053391 human F Human genes 0.000 description 1
- 108700031895 human F Proteins 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940049547 paraxin Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 108010085336 phosphoribosyl-AMP cyclohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- -1 preparation Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明描述了用于在真核宿主细胞中重组产生异源多肽的方法。该宿主细胞包含表达质粒，其中该表达质粒在5’至3’方向包含a)启动子，b)编码第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列根据第二多肽的头两个氨基酸而选自表1，c)编码第二多肽的核酸，其中该核酸包含编码异源多肽的核酸、编码接头的核酸和编码免疫球蛋白片段的核酸，以及d)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区。还描述了质粒和配套元件。
Description
本发明涉及用于在真核细胞中重组表达多肽的方法。
发明背景
用于产生重组多肽的表达系统在现有技术领域中是众所周知的并且例如由Marino，M.H.，Biopharm.2(1989)18-33；Goeddel，D.V.等，MethodsEnzymol.185(1990)3-7；Wurm，F.和Bernard，A.，Curr.Opin.Biotechnol.10(1999)156-159描述。用于药物应用中的多肽优选在哺乳动物细胞如CHO细胞、NS0细胞、Sp2/0细胞、COS细胞、HEK细胞、BHK细胞等中产生。表达质粒的必需元件是原核质粒增殖单元，例如对于大肠杆菌(E.coli)而言，包含复制起点和选择标记、真核选择标记和用以表达目的结构基因的一个或多个表达盒，其中每个表达盒包含启动子、结构基因和转录终止子(包括聚腺苷酸化信号)。对于哺乳动物细胞中的瞬时表达，可以包括哺乳动物复制起点，如SV40Ori或OriP。就启动子而言，可以选择组成型启动子或诱导型启动子。对于优化的转录，可以在5′非翻译区中包括Kozak序列。对于mRNA加工，尤其mRNA剪接及转录终止，取决于结构基因的组织形式(外显子/内含子组织形式)，可以包括mRNA剪接信号以及聚腺苷酸化信号。
基因的表达以瞬时表达或永久表达而实施。目的多肽通常是分泌性多肽并且因此含有氨基端延伸物(也称作信号序列)，此延伸物是使多肽穿过细胞运输/分泌至细胞外介质所必需的。
通常，信号序列可以衍生自编码分泌性多肽的任何基因。若使用异源信号序列，它优选是由宿主细胞识别并加工(即由信号肽酶切割)的一种信号序列。例如对于酵母中的分泌，待表达的异源基因的天然信号序列可以由衍生自分泌型基因的同源酵母信号序列置换，如酵母转化酶信号序列、α因子前导序列(包括酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)和汉逊酵母属(Hansenula)的α因子前导序列，其中克鲁维酵母属α因子前导序列在US5,010,182中描述)、酸性磷酸酶信号序列或白色假丝酵母(C.albicans)葡糖淀粉酶信号序列(EP0362179)。在哺乳动物细胞表达中，目的蛋白质的天然信号序列是令人满意的，虽然其它的哺乳动物信号序列可以是适用的，如来自相同物种或相关物种的分泌性多肽的信号序列，例如对免疫球蛋白而言，来自人或小鼠来源的分泌信号序列以及病毒的分泌信号序列，例如单纯疱疹病毒糖蛋白D信号序列。编码此种前节段(presegment)的DNA片段以符合可读框方式与编码目的多肽的DNA片段连接。
在WO98/28427中，报道以遗传或化学方式制备的融合蛋白，其包含与OB蛋白质氨基端部分融合的Fc免疫球蛋白区、衍生物或类似物。在WO03/035892中给出了包含羧基端蛋白质输入序列及氨基端货物区的嵌合分子，即抗体融合物或融合蛋白。
在US2003/0049227中，报道用于通过施用免疫细胞因子而在哺乳动物中诱导抗肿瘤的杀细胞性免疫应答的方法，其中所述的免疫细胞因子是包含氨基端的免疫球蛋白部分和羧基端的细胞因子部分的融合蛋白。
WO91/16437报道在哺乳动物循环系统中稳定的可溶性重组融合蛋白，该融合蛋白包含如此多肽，其含有对靶分子的识别位点如补体受体位点，并与免疫球蛋白链的氨基末尾端连接。在US2003/0103984中报道由抗体和具有生物学活性的肽制成的融合蛋白。
在US2004/0033511中报道了抗体-细胞因子融合蛋白以及在US2004/0180035中报道了抗体-细胞因子免疫缀合物。在WO94/26910中报道了包含多花白树毒蛋白和抗体的免疫毒素。
发明概述
本发明包含用于在包含表达质粒的真核宿主细胞中重组产生异源多肽的方法，其中所述的表达质粒在5’至3’方向包含a)启动子，b)编码第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列根据第二多肽的头两个氨基酸而选自表1，c)编码第二多肽的核酸，其中该核酸包含编码异源多肽的核酸、编码接头的核酸和编码免疫球蛋白片段的核酸，以及d)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区。该方法还包括导入表达质粒至培养于适合表达第二多肽的条件下的真核宿主细胞中，以及将第二多肽从培养基中回收。
在本发明的一个实施方案中，编码第二多肽的核酸含有位于编码异源多肽的核酸5’位置的编码单个氨基酸或二肽或氨基酸序列QIWNN(SEQIDNO：472)的肽或其片段的额外核酸。
在另一个实施方案中，免疫球蛋白片段从IgG或从IgE得到。
在又一个实施方案中，真核细胞是哺乳动物细胞，尤其是CHO细胞、NS0细胞、Sp2/0细胞、COS细胞、K562细胞、BHK细胞、PER.C6细胞或HEK细胞。
又在另一个实施方案中，接头是选自SEQIDNO：06、07、08、09、10、139、140、554、555、556和557的肽或多肽。
在另一个实施方案中，免疫球蛋白片段包含a)天然存在的或合成的免疫球蛋白的重链或轻链的羧基端恒定结构域，即重链的CH1-、铰合区、CH2-和CH3-结构域或轻链的CL-结构域。额外地，免疫球蛋白片段包含可变结构域片段。
在另一个实施方案中，可变结构域片段是其中可变结构域的1-6个氨基酸被缺失的免疫球蛋白重链可变结构域或轻链可变结构域。
在又一个实施方案中，可变结构域的1-6个区域(FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2、CDR3)被缺失。
在又一个实施方案中，可变结构域被缺失。
在另一个实施方案中，免疫球蛋白片段衍生自天然存在的免疫球蛋白或其变体。
在又一个实施方案中，免疫球蛋白片段衍生自至少部分合成的免疫球蛋白。
仍在本发明的另一个实施方案中，异源多肽的氨基酸序列有5-500个氨基酸残基，更优选10-350个氨基酸残基，最优选15-150个氨基酸残基。
本发明还包含质粒，该质粒在5’至3’方向包含a)启动子，b)编码第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列根据第二多肽的头两个氨基酸而选自表1，c)编码第二多肽的核酸，其中该核酸包含编码异源多肽的核酸、编码接头的核酸和编码免疫球蛋白片段的核酸，以及d)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区。
本发明还包含用来制备质粒的配套元件(kit)，用于在包含所述质粒的真核细胞中表达异源多肽，其在5’至3’方向包含a)启动子，b)编码第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列选自SEQIDNO：36、37、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328和329，c)编码第二多肽的核酸，该核酸包含i)编码氨基酸序列QIWNN(SEQIDNO：472)的肽或其氨基端部分的核酸，ii)包含至少一个限制性切割位点的克隆位点，适用于插入编码异源多肽的核酸，iii)编码选自SEQIDNO：06、07、08、09、10、139、140、554、555、556和557的接头的核酸，和iv)编码免疫球蛋白片段的核酸，以及d)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区。
发明详述
本发明包含用于在包含表达载体的真核宿主细胞中重组表达目的异源多肽的方法，其中所述表达载体含有合适的启动子、转录终止子、选择标记、编码多肽的核酸序列和编码信号序列的核酸序列，其中编码信号序列的核酸序列根据后续多肽的头两个氨基酸选自表1。编码异源多肽的核酸序列始于编码信号序列的核酸序列的终点后的15个核苷酸中。编码异源多肽的核酸序列可以插入免疫球蛋白FR1区中、免疫球蛋白VL区中或免疫球蛋白第一恒定结构域中或它可以替换全部或部分的免疫球蛋白FR1区、免疫球蛋白VL区或免疫球蛋白第一恒定结构域。
在本发明范围中所用的一些术语定义如下：
“核酸分子”如本文中所用，指天然存在的或者部分或完全地非天然存在的编码多肽的核酸，其中所述多肽可以重组地产生。核酸分子可以由分离的或由化学手段合成的DNA片段组建。核酸分子可以整合至另一种核酸中，例如整合于表达质粒中或真核宿主细胞的基因组/染色体中。质粒包括穿梭载体及表达载体。通常，质粒还包含原核增殖单元，该单元含有分别用于细菌中载体复制和选择的复制起点(例如ColE1复制起点)和选择标记(例如氨苄青霉素或四环素抗性基因)。
“表达盒”指核酸序列，其含有对至少所含有的结构基因在细胞中表达及分泌所必需的元件。
核酸分子同样地通过由分别的核苷酸组成的其核酸序列表征或/和由该核酸分子所编码的氨基酸序列表征。
“基因”指例如对肽、多肽或蛋白质在染色体或在质粒上的表达必需的节段。除编码区之外，基因还包含其它功能性元件，包括启动子、内含子和终止子。
“结构基因”指基因的无信号序列的编码区。
在本申请中可互换加以使用的“抗性基因”或“选择标记”是如此基因，其允许携带该基因的细胞在相应选择剂存在下受到特异性选择。有用的阳性选择标记是抗生素抗性基因。这种选择标记允许以抗生素抗性基因转化的宿主细胞在相应抗生素存在下受到阳性选择；非转化宿主细胞将不能在选择性培养条件下生长或存活。选择标记可以是阳性的、阴性的或双功能性的。阳性选择标记允许选择携带该标记的细胞，而阴性选择标记允许携带该标记的细胞受到选择性消除。通常，选择标记在宿主细胞中赋予耐药性或补偿代谢缺陷或异化缺陷。用于真核细胞的抗性基因包括例如编码氨基糖甙类磷酸转移酶(APH)如潮霉素磷酸转移酶(hyg)、新霉素和G418APH、二氢叶酸还原酶(DHFR)、胸苷激酶(tk)、谷氨酰胺合成酶(GS)、天冬酰胺合成酶、色氨酸合成酶(吲哚)、组氨醇脱氢酶(组氨醇D)的基因和编码对嘌呤霉素、博来霉素、腐草霉素、氯霉素、Zeocin和霉酚酸抗性的基因。其它标记基因在WO92/08796和WO94/28143中描述。
“调节元件”如本文中所用，指以顺式方式存在的核苷酸序列，其对转录和/或翻译包含编码目的多肽的核酸序列的基因为必需。转录调节元件通常包含位于待表达的结构基因序列上游的启动子、转录起始位点和终止位点以及聚腺苷酸化信号序列。术语“转录起始位点”指与基因中掺入初级转录物即mRNA前体的第一个核酸相对应的核酸碱基；转录起始位点可以与启动子序列重叠。术语“转录终止位点”指通常位于待转录目的基因3′端的引起RNA聚合酶终止转录的核苷酸序列。聚腺苷酸化信号序列或聚腺苷酸添加信号提供信号用于在真核mRNA3′端的特定位点处切割并以转录后方式添加约100-200个腺嘌呤核苷酸的核心序列(聚A尾)至已切割的3′端。聚腺苷酸化信号序列可以包含位于切割位点上游约10-30个核苷酸的共有序列AATAAA。
为产生分泌性多肽，目的结构基因包括编码信号序列/前导肽的DNA节段。信号序列指导新合成的多肽抵达并穿过ER膜，于此处多肽可以被通向分泌途径。信号序列在蛋白质跨越ER膜期间由信号肽酶切去。就信号序列的功能而言，被宿主细胞的分泌装置识别是必需的。因此，所用的信号序列必须被宿主细胞分泌装置的蛋白质和酶识别。
翻译调节元件包括翻译起始密码子(AUG)和终止密码子(TAA、TAG或TGA)。在某些构建体中可以包括内部核糖体进入位点(IRES)。
“启动子”指控制与其有效连接的基因/结构基因或核酸序列转录的多核苷酸序列。启动子包括用于RNA聚合酶结合并启动转录的信号。所用的启动子将在宿主细胞的如此细胞类型中有功能，其中在所述细胞类型中所选择序列的表达是想要得到的。多种启动子(包括来自多种不同来源的组成型、诱导型和阻遏型启动子)是本领域众所周知(并且在数据库如GenBank中得到鉴定)并且可作为克隆的多核苷酸获得或可在此多核苷酸中获得(例如来自如ATCC的保藏物以及其它商业来源或个人来源)。“启动子”包含指导结构基因转录的核苷酸序列。通常，启动子位于基因的5′非编码区或非翻译区，接近于结构基因的转录起点。启动子中发挥转录起始功能的序列元件常常以共有核苷酸序列为特征。这些启动子元件包括RNA聚合酶结合位点、TATA序列、CAAT序列、分化特异性元件(DSE；McGehee，R.E.等，Mol.Endocrinol.7(1993)551)、环AMP应答元件(CRE)、血清应答元件(SRE；Treisman，R.，SeminarsinCancerBiol.1(1990)47)、糖皮质激素应答元件(GRE)和用于其它转录因子的结合位点，如CRE/ATF(O′Reilly、M.A.，等，J.Biol.Chem.267(1992)19938)、AP2(Ye，J.，等，J.Biol.Chem.269(1994)25728)、SP1、cAMP应答元件结合蛋白(CREB；Loeken，M.R.，GeneExpr.3(1993)253)和八聚体因子(通常见Watson等编辑，MolecularBiologyoftheGene，第四版(TheBenjamin/CummingsPublishingCompany，Inc.1987)以及Lemaigre，F.P.和Rousseau，G.G.，Biochem.J.303(1994)1-14)。若启动子是诱导型启动子，则对诱导剂应答而增加转录速率。相反若启动子是组成型启动子，则转录速率不受诱导剂调节。阻遏型启动子也是已知的。例如c-fos启动子在生长激素结合至细胞表面的生长激素受体时受到特异性激活。四环素(tet)调节的表达可以通过由例如后接2个Tet操纵基因位点的CMV启动子组成的人工杂合启动子实现。Tet阻遏物结合至2个Tet操纵基因位点上并阻断转录。在添加诱导物四环素后，Tet阻遏物自Tet操纵基因位点释放并且转录继续(Gossen，M.和Bujard，H.，PNAS89(1992)5547-5551)。对于其它诱导型启动子，包括金属硫蛋白启动子和热休克启动子，见例如Sambrook等(见上文)和Gossen等，Curr.Opin.Biotech.5(1994)516-520。在因高水平表达而已鉴定为强启动子的真核生物启动子当中有SV40早期启动子、腺病毒主要晚期启动子、小鼠金属硫蛋白-I启动子、劳斯肉瘤病毒长末端重复序列、中国仓鼠(Chinesehamster)延伸因子1α(CHEF-1，见例如US5,888,809)、人EF-1α启动子、遍在蛋白启动子和人巨细胞病毒立即早期启动子(CMVIE).
“启动子”可以是组成型的或诱导型的。增强子(即作用于启动子以增加转录的顺式作用DNA元件)可能对与启动子联合发挥作用以增加仅用启动子所得到的表达水平是必需的，并且可以作为转录调节元件而包括。含有启动子的多核苷酸节段往往也包括增强子序列(例如CMV或SV40)。
“增强子”如本文中所用，指增强与其有效连接的基因或编码序列转录的多核苷酸序列。与启动子不同，增强子对方向和位置是相对不依赖的并且发现它位于转录单位的5′或3′(Lusky，M.，等，Mol.CellBio.3(1983)1108)、在内含子(Banerji，J.，等，Cell33(1983)729)中以及在编码序列中(Osborne，T.F.等，Mol.CellBio.4(1984)1293)。因此，增强子可以置于转录起点的上游或下游，或距离启动子非常远，当然在实践中增强子可以与启动子物理性或功能性地重叠。包括来自多种不同来源的多种增强子是本领域众所周知(并且在数据库如GenBank中得到鉴定)并且可作为克隆的多核苷酸获得或可在此多核苷酸中获得(例如来自如ATCC的保藏物以及其它商业来源或个人来源)。很多含有启动子序列的多核苷酸(如常用的CMV启动子)也包含增强子序列。例如，以上所列的全部强启动子也可以含有强增强子(见例如Bendig，M.M.，GeneticEngineering7(1988)91-127)。
“内部核糖体进入位点”或“IRES”描述在动物细胞中不依赖于IRES的基因5′而功能性促进翻译起始并允许从一个转录物中翻译两个顺反子(可读框)的序列。IRES为紧邻其下游(下游在本文中与3′可互换地使用)的可读框翻译提供独立的核糖体进入位点。与可以为多顺反子(即编码从mRNA上依次受到翻译的数种不同多肽)的细菌mRNA不同，大多数的动物细胞mRNA是单顺反子的并且编码合成仅一种蛋白质。借助真核细胞中的多顺反子转录物，翻译将从最5′端翻译起点起始，终止于第一终止密码子，并且转录物将从核糖体释放，导致仅翻译mRNA中编码的首个多肽。在真核细胞中，具有与转录物中第二可读框或后续可读框有效连接的IRES的多顺反子转录物允许依次翻译下游的可读框以产生由相同转录物编码的一种或多种多肽。先前已经描述IRES元件在载体构建中的用途，见例如Pelletier，J.，等，Nature334(1988)320-325；Jang，S.K.，等，J.Virol.63(1989)1651-1660；Davies，M.V.，等，J.Virol.66(1992)1924-1932；Adam，M.A.，等，J.Virol.65(1991)4985-4990；Morgan，R.A.，等，Nucl.AcidsRes.20(1992)1293-1299；Sugimoto，Y.，等，Biotechnology12(1994)694-698；Ramesh，N.，等，Nucl.AcidsRes.24(1996)2697-2700；以及Mosser，D.D.，等，Biotechniques22(1997)150-152)。
“有效连接”指两种或多种成分的毗连，其中所述的成分处于允许它们以独立方式发挥作用的关系中。例如若启动子和/或增强子以顺式方式发挥作用以控制或调节所连接的序列转录，则它与编码序列有效连接。通常，但非必需，呈“有效连接”的DNA序列是连续的，并且当需要连接两个蛋白质编码区如分泌前导/信号序列和多肽时，呈“有效连接”的DNA序列是连续的并且符合可读框的。然而尽管有效连接的启动子通常位于编码序列上游，启动子实际上与编码序列并非必须是连续的。
增强子并非必须是连续的。若增强子增强编码序列转录，则它与编码序列有效连接。有效连接的增强子可以位于编码序列的上游、其内部或下游并且距离启动子序列相当远。若聚腺苷酸化作用位点位于编码序列的下游末端以至于转录前进通过编码序列至聚腺苷酸化序列，则聚腺苷酸化作用位点与编码序列有效连接。连接通过本领域已知的重组方法实现，例如使用PCR方法和/或通过在便利的限制性位点处的连接。若便利的限制性位点不存在时，则根据常规习惯使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。
术语“表达”如本文中所用指转录和/或翻译发生在宿主细胞中。宿主细胞中所需产物的转录水平可以基于细胞中存在的相应mRNA的量加以测定。例如，从所选择的序列中转录出的mRNA可以通过PCR或通过Northern杂交(见Sambrook等，MolecularCloning：ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress(1989))定量。由所选择的序列编码的蛋白质可以通过多种方法定量，例如通过ELISA、通过分析蛋白质的生物学活性或通过使用识别并与该蛋白质结合的抗体，采用不依赖于所述活性的验定法，如蛋白质印迹法或放射免疫测定法(见Sambrook等，1989，见上文)。
“宿主细胞”指向其中导入编码本发明多肽的基因的细胞。宿主细胞包括用于增殖质粒/载体的原核细胞和用于表达结构基因的真核细胞。通常，真核细胞是哺乳动物细胞。
“多肽”是通过肽键连接的氨基酸残基的聚合物，无论它是天然产生的或是合成产生的。少于约20个氨基酸残基的多肽可以称作“肽”。包含一个或多个多肽链或包含100个或更多个氨基酸长度的氨基酸链的多肽可以称作“蛋白质”。
“蛋白质”是包含一个或多个多肽链的其中至少一条链具有氨基酸长度100个或更多个氨基酸的大分子。蛋白质也可以包含非肽成分，如糖基。
糖类和其它非肽取代基可以由细胞添加至蛋白质，其中该蛋白质在所述细胞中产生，并且可以随细胞类型而不同。蛋白质在本文中就其氨基酸主链结构进行定义；添加物如糖基通常不予以说明，然而却可以存在。
“异源DNA”或“异源多肽”指给定宿主细胞中不天然存在的DNA分子或多肽，或者DNA分子群或多肽群。对特定宿主细胞为异源的DNA分子可以含有衍生自宿主细胞物种的DNA(即内源DNA)，只要宿主DNA与非宿主DNA(即外源DNA)连接。例如将含有与包含启动子的宿主DNA节段有效连接的编码多肽的非宿主DNA节段的DNA分子认为是异源DNA分子。相反，异源DNA分子可以包含与外源启动子有效连接的内源结构基因。
由非宿主DNA分子编码的肽或多肽是“异源的”肽或多肽。
“克隆载体”是具有在宿主细胞中自主复制能力的核酸分子，如质粒、粘粒、噬菌粒或细菌人工染色体(BAC)。克隆载体通常含有允许以可确定方式插入核酸分子而无损载体基本生物学功能的一个或少量的限制性核酸内切酶识别位点，以及编码抗性基因的核苷酸序列，其中抗性基因适用于鉴定并选择以克隆载体所转化的细胞。抗性基因通常包括提供四环素抗性或氨苄青霉素抗性的基因。
“表达质粒”是宿主细胞中编码待表达蛋白质的核酸分子。通常，表达质粒包含原核质粒增殖单元，例如对于大肠杆菌而言，包含复制起点和选择标记、真核选择标记和用以表达目的结构基因的一个或多个表达盒。其中所述的表达盒包含启动子、结构基因和转录终止子(包括聚腺苷酸化信号)。基因表达通常处于启动子控制下并且称该结构基因与启动子是“有效连接”的。类似地，若调节元件调节核心启动子的活性，则调节元件和核心启动子是有效连接的。
“多顺反子转录单位”是其中超过一个结构基因处于相同启动子控制下的转录单位。
“分离的多肽”是基本上不含与多肽天然结合的污染性细胞成分如糖类、脂类或其它蛋白质杂质的多肽。通常，分离多肽的制备物含有高度纯化形式的即至少约80％纯度、至少约90％纯度、至少约95％纯度、大于95％纯度或大于99％纯度的多肽。一种显示特定蛋白质制备物含有分离多肽的方法是对蛋白质制备物进行十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳并对凝胶进行考马斯亮蓝染色后显示出单一条带。然而，术语“分离的”不排除存在处于备选物理形式(如二聚体或备选地糖基化形式或其衍生形式)的相同多肽。
术语“免疫球蛋白”指由基本上由通过免疫球蛋白基因所编码的一种或多种多肽组成的蛋白质。已识别的免疫球蛋白基因包括不同的恒定结构域(区)基因以及复杂的免疫球蛋白可变区基因。免疫球蛋白可以多种形式存在，包括例如Fv、Fab和F(ab)2以及单链(scFv)(例如Huston，J.S.，等，PNASUSA85(1988)5879-5883；Bird，R.E.，等，Science242(1988)423-426；通常Hood等，Immunology，BenjaminN.Y.，第二版(1984)；以及Hunkapiller，T.和Hood，L.，Nature323(1986)15-16)。
免疫球蛋白通常包含至少两条轻链多肽和两条重链多肽。每条重链多肽和每条轻链多肽可以含有可变结构域(区)(通常是多肽链的氨基端部分)，可变结构域含有能够与抗原相互作用的结合区(结构域)。每条重链多肽链和每条轻链多肽链包含恒定区(通常是羧基端部分)。重链恒定区介导抗体与i)携带Fcγ受体(FcγR)的细胞如吞噬细胞结合或与ii)携带新生Fc受体(FcRn)(也称作Brambell受体)的细胞结合。重链恒定区还介导与一些因子包括经典补体系统的因子如成分(C1q)的结合。
免疫球蛋白的轻链或重链的可变结构域分别包含不同节段，即4个构架区(FR)和3个超变区(CDR)。
“免疫球蛋白片段”指这样的多肽，其至少包含免疫球蛋白的链的恒定结构域，即免疫球蛋白重链的CH1、铰合区、CH2和CH3和任选地CH4或免疫球蛋白轻链的CL。还包含其衍生物和变体。此外，可以存在其中一个或多个氨基酸或氨基酸区域被缺失的可变结构域。在优选的实施方案中，在免疫球蛋白片段中可变结构域被缺失。
“转录终止子”如本申请中所指，是向RNA聚合酶发出信号以终止mRNA合成的长度50-750个碱基对的DNA序列。建议在表达盒3’末端使用极高效(强)的终止子以防止RNA聚合酶通读，尤其防止当使用强启动子时的RNA聚合酶通读。无效的转录终止子可以导致形成操纵子样mRNA，这可能是不想要的基因表达(如质粒编码的基因表达)的原因。
术语“接头”如本申请中所用指天然来源或合成来源的肽接头。它们构成线形氨基酸链。该链的长度是1-50个氨基酸，优选在3-25个氨基酸间。接头可以含有重复的氨基酸序列或天然存在的多肽的部分，如具有铰合功能的多肽。
“合成的接头”设计为富含甘氨酸残基、谷氨酰胺残基和丝氨酸残基。这些残基以不超过5个氨基酸的小肽单位如GGGGS、QQQQG或SSSSG排列。小肽单位重复2-5次以形成多聚体单位。在多聚体单位的每一氨基末尾端和/或羧基末尾端均可以添加多达6个额外氨基酸。
术语“生物活性分子”如本文中所用指当施用于或施用至人工生物系统(如使用细胞系和病毒的生物分析法)中或体内施用至动物(包括但不限于鸟和哺乳动物，包括人)时，引起生物学效应的有机分子，例如生物大分子如肽、蛋白质、糖蛋白、核蛋白、黏蛋白、脂蛋白、合成多肽或蛋白质。这种生物学效应可以是但不限于酶抑制或激活、在结合位点处或在周边与受体或配体结合、信号触发或信号调节。
生物活性分子不限于例如激素、细胞因子、生长因子、受体配体、激动剂或拮抗剂、细胞毒性剂、抗病毒剂、成像剂、酶抑制物、酶激活物或酶活性调节物如别构物质。
术语“氨基酸”如本申请中所用，包含丙氨酸(三字母代码：ala，单字母代码：A)、精氨酸(arg，R)、天冬酰胺(asn，N)、天冬氨酸(asp，D)、半胱氨酸(cys，C)、谷氨酰胺(gln，Q)、谷氨酸(glu，E)、甘氨酸(gly，G)、组氨酸(his，H)、异亮氨酸(ile，I)、亮氨酸(leu，L)、赖氨酸(lys，K)、甲硫氨酸(met，M)、苯丙氨酸(phe，F)、脯氨酸(pro，P)、丝氨酸(ser，S)、苏氨酸(thr，T)、色氨酸(trp，W)、酪氨酸(tyr，Y)和缬氨酸(val，V)。
本领域技术人员已知的用于实施本发明的方法和技术例如在Ausubel，F.M.编辑，CurrentProtocolsinMolecularBiology，第I至III卷(1997)，WileyandSons；Sambrook等，MolecularCloning：ALaboratoryManual，第二版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.(1989)中描述。
本发明包含用于在真核宿主细胞中重组地产生异源多肽的方法。宿主细胞包含表达质粒，该表达质粒在5’至3’方向包含a)启动子，b)编码第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列根据第二多肽的头两个氨基酸而选自表1，c)编码第二多肽的核酸，其中该核酸包含编码具有生物学活性的异源多肽的核酸、编码选自SEQIDNO：06-10、139、140及554-557的肽或多肽的核酸，和编码免疫球蛋白片段的核酸，以及d)3’非翻译区。该表达质粒被导入在适合表达第二多肽的条件下培养的真核宿主细胞中。将分泌的第二多肽从培养基中回收。
第一多肽是所谓的信号序列。信号序列负责所连接/续接/有效连接的多肽的分泌。为产生有效结果，信号序列必需由表达多肽的细胞中的蛋白质和酶识别。在真核宿主细胞的情况时，信号序列优选地是真核信号序列。为确保正确分泌本发明的第二多肽，信号序列选自人和鼠的免疫球蛋白信号序列。信号序列的汇集示于表1。
选择哪种信号序列取决于后续的氨基酸。必需确保在分泌过程后切割信号序列的信号肽酶识别并将分泌性多肽的信号序列除去。为提供从信号序列至异源多肽的“自然”转移，应当以如此方式选择信号序列，即异源多肽的头两个氨基酸与自然续接的免疫球蛋白FR1区的氨基酸序列的头两个氨基酸相同。
表1：分配给信号肽(以单字母代码显示的第一多肽)的第二多肽的头两个氨基酸组(以单字母代码显示)。
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| AC | MEFQTQVLMSLLLCMSMESQTQVLMFLLLWVSMVSTPQFLVFLLFWIP | 163164165 |
| AD | MESQTLVFISILLWLY | 166 |
| AG | MSVPTQLLGLLLLWLT | 167 |
| AH | MKSQTQVFIFLLLCVSMKSQTQVFVFLLLCVS | 168169 |
| AI | MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLQLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC | 6869707172737475767778798081 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| AI(续上页) | MDMRVPAQRLGLLLIWFPGARCMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGAKCMAWISLILSLLALSSMAWTSLILSLLALCSMRCLAEFLGLLVLWIP | 8283848586170171172 |
| AL | MGWNWIFILILSVTT | 173 |
| AQ | MRFQVQVLGLLLLWISMRPSIQFLGLLLFWLH | 174175 |
| AR | MDIRAPAQFLGILLLWFPMDMMVLAQFLAFLLLWFPMDMRAPAQFLGILLLWFPMDMRAPAQFLGILLLWFPMDMRAPAQVFGFLLLWFPMDMRASAQFHGILLLWFPMDMRASAQFHGILLLWFPMDMWTSAQFLGILLLWFLMNTRAPAEFLGFLLLWFLMRAPAPFLGLLLFCFLMRTPAPFLGLLLFCFSMSISTQLLGLLLLWLTMSLPTQLQGLLLLWLTMSVLTQVLALLLLWLTMSVPTQLLALLLLWLTMSVPTQVLGLLLLWLTTDFHMQIFSFMLISFT | 176177178179180181182183184185186187188189190191192 |
| AS | MAWTSLILSLLALCS | 193 |
| AT | MRCLAEFLRLLVLWIP | 194 |
| CQ | MPWALLLLTLLTHSAVSVV | 138 |
| DA | MKLPVRLLVLMFWIPSSS | 195 |
| DI | MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLQLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVIAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQRLGLLLLWFPGARCMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC | 6869707172737475767778798081828384 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| DI(续上页) | MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGAKCMRLPAQLLGLLMLWVPGSSEMRLPAQLLGLLMLWVPGSSEMRLPAQLLGLLMLWVPGSSGMRLPAQLLGLLMLWVPGSSGMRLPAQLLGLLMLWIPGSSAMRLPAQLLGLLMLWIPGSSAMRLPAQLLGLLMLWVSGSSGMRLPAQLLGLLMLWVSGSSGMRLLAQLLGLLMLWVPGSSGMVLQTQVFISLLLWISGAYGMDIRAPAQFLGILLLWFPARCMDMMVLAQFLAFLLLWFPARCMDMRAPAQFFGILLLWFPIRCMDMRAPAQFLGILLLWFPARCMDMRAPAQIFGFLLLLFQTRCMDMRAPAQVFGFLLLWFPARCMDMRASAQFLGFLLLWFPMDMRDPPQFLAFLLLWIPMDMRTPAQFLGILLLWFPIKCMDMRVPAHVFGFLLLWFPTRCMDSQAQVLILLLLWVSTCGMDSQAQVLMLLLLSVSTCGMDSQAQVLMLLLLWVSTCGMDSQARVLMLLLLWVSTCGMEFQTQVFVFVLLWLSVDGMEFQTQVLMSLLLCMSACAMEKDTLLLWVLLLWVPSTGMESDTLLLWVLLLWVPSTGMESQIQAFVFVFLWLSVDGMESQIQVFVFVFLWLSVDGMESQNHVLMFLLLWVSTCGMESQTHVLMFLLLWVSTCGMESQTQVFVYMLLWLSVDGMESQTQVLISLLFWVSTCGMESQTQVLMFLLLWVSACAMESQTQVLMSLLFWVSTCGMETDPLLLWVLLLWVPSTGMETDTILLWVLLLWVPSTGMETDTLLLWVLLLWVPSTGMETDTLLLWVLLLWVPSTGMETHSQVFVYMLLWLSVEGMGFKMESHTQAFVFAFLWLSVDGMGVPTQLLLLWLTVRCMIASAQFLGLLLLCFQTRCMKFPSQLLLFLLFRITIIGMKFPSQLLLLLLFGIPMICMMSSAQFLGLLLLCFQTRC | 8586878889909192939495103196197198199200201202203204205206207208209210211212213214215473474475476477478479480481482483484485486487488489 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| DI(续上页) | MMSSAQFLGLLLLCFQTRYMNMLTQLLGLLLLWFAGKCMRCLAEFLGLLVLWIPAIGMRCLAEFLRLLVLWIPATGMRCSLQFLGVLMFWISVSGMRFSAQLLGLLVLWIPSTAMRPSIQFLGLLLFWLHAQCMRVLAELLGLLLFCFLVRCMRVLPEFLGLLLLWISVRCMSISTQLLGLLLLWLTARCMSVLTQVLALLLLWLTARCMSVPTQLLALLLLWLTARCMSVPTQLLGLLLLWLTAGCMSVPTQVLGLLLLWLTARCMVFTPQILGLMLFWISSTGMVFTPQILGLMLFWISSRGMVLGLKWVFFWFYQSRGMVSTSQLLGLLLFWTSSRGPAQFLFLLVLWIQSRC | 490491492493494495496497498499500501502503504505506507508 |
| DR | MSLLTQLQGLLLLWLT | 216 |
| DV | MRLPAQLLGLLMLWVPGSSEMRLPAQLLGLLMLWPGSSEMRLPAQLLGLLMLWVPGSSGMRLPAQLLGLLMLWVPGSSGMRLPAQLLGLLMLWIPGSSAMRLPAQLLGLLMLWIPGSSAMRLPAQLLGLLMLWVSGSSGMRLPAQLLGLLMLWVSGSSGMRLLAQLLGLLMLWVPGSSGMLPSQLIGFLLLWVPASRGMLPSQLIGFLLLWVPASRGMVSPLQFLRLLLLWVPASRGLILKVQCLVLKVLCMDMRASAQFHGILLLWFPARCMKLPVLLWLLLFTSPSSSMKLPVRLLVLMFWIPSSSMMSPAQFLFLLVLWIQTNGMMSPAQFLFLLVLWIRTNGMMSPVHSIFILLLWIVISGMMSPVQFLFLLMLWIQTNGMNFGLRLIFLVLTLKVQCMNLPVHLLVLLLFWIPSRGMNTRAPAEFLGFLLLWFLARCMRFQVQVLGLLLLWISAQCMRVLSLLYLLTAIPGILS | 878889909192939495105106107217218219220221222223224225226227228229230 |
| EI | METPAQLLFLLLLWLPDTTGMETPAQLLFLLLLWLPDTTGMEAPAQLLFLLLLWLPDTTG | 969798 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| EI(续上页) | MEAFAQLLFLLLLWLPDTTGMEAPAQLLFLLLLWLPDTTGMEAPAQLLFLLILWLTDTTGMEPWKPQHSFFFLLLLWLPDTTGMLPSQLIGFLLLWVPASRGMLPSQLIGFLLLWVPASRGMVSPLQFLRLLLLWVPASRGMDFHVQIFSFMLISVTILSSGMDFQMQIISLLLISVTIVSNGMDFQVQIFSFLLISVTILTNGMDMRAPAQFLGILLLWFPARCMNFHVQIFSFMLISVTIGSSGMTMLSLVLLLSFLLLCSRAMVSTPQFLVFLLFWIPACGTELICVFLFLLSVTAILSSG | 99100101102105106107231232233234235236237238 |
| EI | MDCGISLVFLVLILKVC | 239 |
| EM | MDMWVQIFSLLLICVTSKG | 240 |
| EN | LLISVTIMSRGMDFQVQIFSFLLISASIMSRGMDFQVQIFSFLLISISVMSRGMDFQVQIFSFLLISVSIMSRGMDLQVQIISFLLIIVTIMSRG | 241242243244245 |
| ET | MGSQVHLLSFLLLWISDTRAMGEQRIRSCHATSGAESARMGSQVHLLSFLLLWISDTRAMTMFSLALLLSLLLLCVSSRAMTMLSLAPLLSLLLLSRAMXTMDEHESGAVTPHQVLKSRA | 104246247248249250 |
| EV | MDWTWRILFLVAAATGAHSMDWTWRILFLVAAATGAHSMDWTWRILFIVAAATSAHSMDWTWSILFLVAAPTGAHSMDCTWRILFLVAAATGTHAMDWTWRILFLVAAATDAYSMDXTWRVFCLLAVAPGAHSMDWIWRILFLVGAATGAHSMELGLSWVFLVAILEGVQCMELGLSWIFLLAILKGVQCMEFGLSWVFLVAIIKGVQCMELGLSWVFLVAILEGVQCMEFGLSWIFLAAILKGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMELGLRWVFLVAILEGVQCMEFGLSWLFLVAILKGVQCMEFGLSWVFLVALLRGVQCMEFGLSWVFLVALLRGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMELGLCWVFLVAILEGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQC | 282930313233343538394041424344454647484950 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| EV(续上页) | MEFWLSWVFLVAILKGVQCMTEFGLSWVFLVAIFKGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMEFGLSWVFLVVILQGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMGSTAILALLLAVLQGVCSMGSTAILGLLLAVLQGVCAIKWSWIFLFLLSGTAVHSIKWSWISLFLLSGTAVHSLILKVQCLVLKVQCMAVVTGKGLPSPKLEVNSMDFGLIFFIVALLKVQCMDFGLSLVFLVLILKVQCMDMRASAQFHGILLLWFPARCMEWELSLIFIFALLKDVQCMEWSCIFLFLLSVTAVHSMEWSCIFLFLLSVTAIHSMEWSWIFLFLLSGTAVLSMGWNWIFILILSVTTALSMGWSCIILFLVATATVHSMGWNWIFILILSVTTVHSMGWSCIMLFLAATATVHSMGWSWIFFFLLSGTAVLSMGWSWIFLFFLSGIAVLSMGWSWIFLFLLSGSAVLSMGWSWIFLFLLSGSAVHSMGWSWIFLFLLSGTAVHSMGWSWIFLFLLSGTAVLSMGWSWIFLFLLSGTAVLSMGWSWIFLLFLSGTAVLSMGWSWIFLLFLSGTAVHSMGWSWIFLLFLSGTAVLSMGWSWVFLSFLSGTAVLSMKCSWVIFFLMAVVIINSMKLWLNWILLVALLNIQCMLLGLKWVFFVVFYQVHCMLLGLKWVFFVVFYQGVHCMMVLSLLYLLTALPGILSMNFGLSLIFLVLILKVQCMQLGHLLPDGSVNSMVSETHVLIFLLLWVSVHCRSVPTQLLGLLLLWLTVNS | 51525354556465251252253254255256257258259260261262263264265266267268269270271509510511512513514515516517518519520521522523 |
| GH | MGWSYIILFLVATAT | 272 |
| GI | IDINVQIFRFLLISVTSSG | 273 |
| GK | MNMLTQLLGLLLLWFA | 274 |
| GR | MRTPAHFLGLLLLCFL | 275 |
| HV | MRWSCIILFLVATATVHS | 276 |
| IG | MNFHVQIFSFMLISVT | 277 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| IH | MEWSCIFLFLLSVTA | 278 |
| II | MDFQVQIFQIPVKQCLMDFQVQIFSFLLISASMKFPSQLLLPLLFRIT | 279280281 |
| IK | MDMRTPAQFLGILLLWFP | 282 |
| IL | MAVLALLFCLVTFPSMDFHVQIFSFMLISVTMDFQVQIFSFLLISASMDFQVQIFSFLLISRMDFQVQIFSFLLISVTTELICVTLFLLSVTA | 283284285286287288 |
| IM | LLISVTMDFQVQIFSFLLISASMDFQVQIFSFLLISVSMDFQVQIFSFLLISVSMDFQVQIFSFLLMSASMDLQVQIISFLLIIVTMHFQVQIFSFLLISAS | 289290291292293294295 |
| IN | MKCSWVIFFLMAVM | 296 |
| IQ | MKLWLNWILLVALLN | 297 |
| IR | MDMRAPAQFFGILLLWFP | 298 |
| IS | MIYSLQLLRMLVLWIPMMSPVHSIFILLLWIVMSYSLQLLRMLVLWIP | 299300301 |
| IT | MSYSLQLLRMLVLWIP | 302 |
| IV | MDFQMQIISLLLISVT | 303 |
| KN | MDFQVQIFQIPVKQCLIISRG | 304 |
| LM | MDFQVQIFSFLLISAS | 305 |
| LP | MAWVSFYLLPFIFSTGLCAMAWTQLLLLFPLLLHWTGSLSMAWTPLLFLTLLLHCTGSLS | 127128129 |
| LR | MRPTLSFLGSCCSSLI | 306 |
| MI | MKFPSQLLLLLLFGIP | 307 |
| NF | MAW AP LLLTLLAHCTGSWA | 133 |
| NI | MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLQLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC | 6869707172737475767778798081 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| NI(续上页) | MDMRVPAQRLGLLLLWFPGARCMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGAKCMESDTLLLWVLLLWVPSTSMESQTLVFISILLWLYADGMESQTQVFLSLLLWVSTCGMETDTLLLWVLLLWVPSTG | 8283848586308309310311 |
| PV | MGWSCIMLFLAATATVHSMGWSCIMLFLAATATGVHS | 312313 |
| QA | MD M RVP AQ LLGLLLLWLRGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLRGARCMD M RVP AQ LLGLLQLWLSGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLSGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPDTRCMD M RVP AQ LLGLLLLWFPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWFPGARCMD M RVL AQ LLGLLLLCFPGARCMD M RVL AQ LLGLLLLCFPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWFPGSRCMD M RVP AQ LLGLLLLWFPGSRCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPGARCMD M RVP AQ RLGLLLLWFPGARCM RVP AQ LLGLLLLWLPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPGARCMD M RVP AQ LLGLLLLWLPGAKCMAW TP LLLLLLSHCTGSLSMAW TP LLLLFLSHCTGSLSMAW TL LLLVLLSHCTGSLSMAW TP LFLFLLTCCPGSNSMAW TP LFLFLLTCCPGSNSMAWISLILSLLALSSAISIGWSYIIILLVATATVHSMAWTSLILSLLALCSASSMAWTSLILSLLALCSAISMGWSCVLLFLVSGTAVLC | 68697071727374757677787980818283848586130131132134135314315316317318 |
| QI | MDT LC STLLLLTIPSWVLSMDT LC YTLLLLTTPSWVLSMDFQVQIFSFLLISASIISRGMDFQVQIFSFLLISASILFRGMDFQVQIFSFLLISASILSRGMDFQVQIFSFLLISASIMSRGMDFQVQIFSFLLISASLMSRGMDFQVQIFSFLLISRILSRGMDFQVQIFSFLLISVSIMSRG | 3637319320321322323324325 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| QI(续上页) | MDFQVQIFSFLLMSASIMSRGMDTLCSTLLLITIPSWVLSMGWSWIFLFLLSGTAVHCMHFQVQIFSFLLISASIMSRG | 326327328329 |
| QL | MKH LW FFLLLVAAPRWVLSMKH LW FFLLLVAAPRWVLSMKH LW FFLLLVAAPRWVLPMKH LW FFLLLVAAPRWVLSMKH LW FFLLLVAAPRWVLSMKH LW FFLLLVAAPRWVLSMKH LW FFLLLVAAPRWVLSMKH LW FFLLLVAAPRWVLSMAW VS FYLLPFIFSTGLCAM A WTQ LLLLFPLLLHWTGSLSM AWT PL LFLTLLLHCTGSLSMAWTPLFFFFVLHCSSFS | 5657585960616263127128129330 |
| QM | MDWTWRILFLVAAATGAHSMDWTWRILFLVAAATGAHSMDWTWRILFLVAAATSAHSMDWTWSILFLVAAPTGAHSMDCTWRILFLVAAATGTHAMDWTWRILFLVAAATDAYSMDWTWRVFCLLAVAPGAHSMDWIWRILFLVGAATGAHSMRVLGFLCLVTVLPGSLS | 2829303132333435331 |
| QP | MAWVSFYLLPFIFSTGLCAMAWTQLLLLFPLLLHWTGSLSMAWTPLLFLTLLLHCTGSLSMAWTPLLLLLLSHCTGSLSMAWTPLLLLFLSHCTGSLSMAWTLLLLVLLSHCTGSLSMAWAPLLLTLLSLLTGSLSMAWTPLFFFFLLHCSSFS | 127128129130131132137332 |
| QS | MAWSPLFLTLITHCAGSWAMAWSPLLLTLLAHCTGSWAMASFPLLLTLLTHCAGSWAMAGFPLLLTLLTHCAGSWAMTCSPLLLTLLIHCTGSWAMAWALLLLTLLTQGTGSWAMAWALLLLSLLTQGTGSWAMAWALLLLTLLTQGTGSWAMAWALLLLTLLTQGTGSWAMAWALLLLTLLTQDTGSWA | 108109110111112113114115116117 |
| QT | MAWTPLFLFLLTCCPGSNSMAWTPLFLFLLTCCPGSNSMAWMMLLLGLLAYGSGVDS | 134135136 |
| QV | MDWTWRILFLVAAATGAHSMDWTWRILFLVAAATGAHSMDWTWRILFLVAAATSAHS | 282930 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| QV(续上页) | MDWTWSILFLVAAPTGAHSMDCTWRILFLVAAATGTHAMDWTWRILFLVAAATDAYSMDWTWRVFCLLAVAPGAHSMDWIWRILFLVGAATGAHSMDTLCSTLLLLTIPSWVLSMDTLCYTLLLLTTPSWVLSMELGLSWVFLVAILEGVQCMELGLSWIFLLAILKGVQCMEFGLSWVFLVAIIKGVQCMELGLSWVFLVAILEGVQCM EFGLSWIFLAILKGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMELGLRWVFLVAILEGVQCMEFGLSWLFLVAILKGVQCMEFGLSWVFLVALLRGVQCMEFGLSWVFLVALLRGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMELGLCWVFLVAILEGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMEFWLSWVFLVAILKGVQCMTEFGLSWVPLVAIFKGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMEFGLSWVFLVVILQGVQCMEFGLSWVFLVAILKGVQCMKHLWFFLLLVAAPRWVLSMKHLWFFLLLVAAPRVVLSMKHLWFFLLLVAAPRWVLPMKHLWFFLLLVAAPRWVLSMKHLWFFLLLVAAPRWVLSMKHLWFFLLLVAAPRWVLSMKHLWFFLLLVAAPRWVLSMKHLWFFLLLVAAPRWVLSMSVSFLIFLPVLGLPWGVLSMDWTWRILFLVAAATGAHSIFLFLLSITAVHCKGGSCVSLFLVATANVHFMAVLALLFCLVTFPSILSMAVLGLLFCLVTFPSVLSMAVLGLLLCLVTFPSVLSMAWSWVFLFFLSVTTVHSMDWIWIMLHLLAATGIQSMECSWVFLFLLSLTAVHCMEFGLSWVFLVALLRGVQCMEWLXXFLLFLSLTAVHCMEWSGVFIFLLSVTAVHSMEWSGVFIFLLSVTAVYSMEWSRVFIFLLSVTAVHSMEWSWVFLFFLSVTTVHS | 3132333435363738394041424344454647484950515253545556575859606162636667333334335336337338339340341342343524525526 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| QV(续上页) | MEWSWVFLFLLSLTSVHSMGRLTFSFLLLLPVPAVLSMGWSCIIFFLVATATVHFMGWSCIILFLVAAANVHSMGWSCIILFLVAAATVHSMGWSCIILFLVATATVHSMGWSCIILFLVATATVHSMGWSCIILFLVSTATVHSMGWSCIILILVAAATVHSMGWSCIILILVAAATVHSMGWSCIILILVAAATVQFMGWSCIMLFLAARATVHSMGWSCIMLFLAATATVHFMGWSCIMLFLAATATVHFMGWSCIMLFLAATATVHSMGWSCIMLFLAATATVHSMGWSCIMLFLAATATVHSMGWSFLPLFLAATATGVHSMGWSRIFLFLLSITAVHCMGWSSIILFLVATATVHSMGWSWIFPFLLSGTAVHCMGWSYIIFFLVATATVHFMGWSYIIFFLVATATVHSMGWSYIILFLVATATGHSMGWSYIILFLVATATVHSMGWSYIILFLVATATVNSMRWSCIILFLVATATVHS | 527528529530531532533534535536537538539540541542543544545546547548549550551552553 |
| SA | METPASFLCLLLLWTT | 344 |
| SF | MAWTPLFFFFLLHCSMAWTPLFFFFVLHCS | 345346 |
| SI | MKSQTQVFIFLLLCVSAHGMKSQTQVFVFLLLCVSAHG | 347348 |
| SK | MDMWVQIFSLLLICVT | 349 |
| SR | MXTMDEHESGAVTPHQVLKMGEQRIRSCHATSGAEMNLPVHLLVLLLFWIPMTMFSLALLLSLLLLCVSMTMLSLAPLLSLLLLMTMLSLVLLLSFLLLCMVFTPQILGLMLFWISMVLGLKWVFFWFYQMVSTSQLLGLLLFWTSPAQFLFLLVLWIQ | 350351352353354355356357358359 |
| SS | MAWIPLFLGVLAYCTGSVAMAWTALLLSLLAHFTGSVAMAWTPLLLPLLTFCTVSEAMAWIPLLLPLLTLCTGSEAMAWTPLWLTLLTLCIGSVVMAWTVLLLGLLSHCTGSVT | 118119120121122123 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| SS(续上页) | MAWATLLLPLLNLYTGSIAMAWIPLLLPLLTLCTGSEAMAWIPLLLPLLILCTVSVAIDINVQIFRFLLISVTMKLPVLLVVLLLFTSPMKLPVRLLVLMFWIPMKLPVRLLVLMFWIP | 124125126360361362363 |
| ST | MEKDTLLLWVLLLWVPMESDTLLLWVLLLWVPMESDTLLLWVLLLWVPMETDPLLLWVLLLWVPMETDTILLWVLLLWVPMETDTLLLWVLLLWVPMETDTLLLWVLLLWVPMETDTLLLWVLLLWVPMRFSAQLLGLLVLWIPMVFTPQILGLMLFWIS | 364365366367368369370371372373 |
| SY | MAWIPLFLGVLAYCTGSVAMAWTALLLSLLAHFTGSVAMAWTPLLLPLLTFCTVSEAMAWIPLLLPLLTLCTGSEAMAWTPLWLTLLTLCIGSVVMAWTVLLLGLLSHCTGSVTMAWATLLLPLLNLYTGSIAMAWIPLLLPLLTLCTGSEAMAWIPLLLPLLILCTVSVA | 118119120121122123124125126 |
| TC | MDSQAQVLILLLLWVSMDSQAQVLMLLLLSVSMDSQAQVLMLLLLWVSMDSQARVLMLLLLWVSMESQNHVLMFLLLWVSMESQTHVLMFLLLWVSMESQTQVFLSLLLWVSMESQTQVLISLLFWVSMESQTQVLMSLLFWVS | 374375376377378379380381382 |
| TG | METPASFLCLLLLWTTSAV | 383 |
| TN | QHGHEGLCSVSWVPVAMMSPAQFLFLLVLWIQMMSPAQFLFLLVLWIRMMSPVQFLFLLMLWIQ | 384385386387 |
| TR | MIASAQFLGLLLLCFQMMSSAQFLGLLLLCFQMMSSAQFLGLLLLCFQMDMRAPAQIFGFLLLLFQMDMRVPAHVFGFLLLWFP | 388389390391392 |
| VC | MDCGISLVFLVLILK | 393 |
| VD | MEFQTQVFVFVLLWLSMESQIQAFVFVFLWLSMESQIQVFVFVFLWLS | 394395396 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| VD(续上页) | MESQTQVFVYMLLWLSMGFKMESHTQAFVFAFLWLS | 397398 |
| VE | METHSQVFVYMLLWLS | 399 |
| VH | MEWLXXFLLFLSLTAMEWSCIFLFLLSVTAMEWSGVFIFLLSVTAMEWSRVFIFLLSVTAMEWSWVFLFFLSVTTMEWSWVFLFLLSLTSMGWNWIFILILSVTTMGWSCIIFFLVATATMGWSCIILFLVAAANMGWSCIILFLVAAATMGWSCIILFLVATATMGWSCIILFLVATATMGWSCIILFLVATATMGWSCIILFLVSTATMGWSCIILILVAAATMGWSCIILILVAAATMGWSCIMLFLAARATMGWSCIMLFLAATATMGWSCIMLFLAATATMGWSCIMLFLAATATMGWSCIMLFLAATATMGWSCIMLFLAATATMGWSCIMLFLAATATMGWSCIMLFLAATATMGWSRIFLFLLSITAMGWSSIILFLVATATMGWSWIFLFLLSGSAMGWSWIFLFLLSGTAMGWSWIFLFLLSGTAMGWSWIFLLFLSGTAMGWSWIFPFLLSGTAMGWSYIIFFLVATATMGWSYIIFFLVATATMGWSYIILFLVATATMGWSYIILFLVATATMGWSYIILFLVATATMLLGLKWVFFVVFYQMRWSCIILFLVATATMRWSCIILFLVATATMVSETHVLIFLLLWVSIFLFLLSITAIGWSYIILLLVATATIKWSWIFLFLLSGTAIKWSWISLFLLSGTAKGGSCVSLFLVATANMAWSWVFLFFLSVTT | 400401402403404405406407408409410411412413414415416417418419420421422423424425426427428429430431432433434435436437438439440441442443444445 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| VH(续上页) | MECSWVFLFLLSLTA | 446 |
| VI | MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCMDMRVPAQLLGLLQLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLSGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQRLGLLLLWFPGARCMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCMDMRVPAQLLGLLLLWLPGAKCMIYSLQLLRMLVLWIPISKMSYSLQLLRMLVLWIPISKMSYSLQLLRMLVLWIPITK | 68697071727374757677787980818283848586447448449 |
| VL | LVLKMAVLGLLFCLVTFPSMAVLGLLLCLVTFPSMDRLTSSFLLLIVPAMEWSWIFLFLLSGTAMGRLTFSFLLLLPVPAMGWSCVLLFLVSGTAMGWSWIFFFLLSGTAMGWSWIFLFFLSGTAMGWSWIFLFLLSGSAMGWSWIFLFLLSGTAMGWSWIFLFLLSGTAMGWSWIFLLFLSGTAMGWSWIFLLFLSGTAMGWSWFLSFLSGTA | 450451452453454455456457458459460461462463464 |
| VM | MDFQVQIFSFLLISIS | 465 |
| VN | MAVVTGKGLPSPKLEMGWSYIILFLVATATMQLGHLLPDGSRSVPTQLLGLLLLWLT | 466467468469 |
| VQ | LILKLVLKMDFGLIFFIVALLKMDFGLSLVFLVLILKMGWSCIILILVAAATMNFGLRLIFLVLTLK | 470471141020520 |
| 第二多肽始于氨基酸 | 第一肽(信号序列)氨基酸序列 | SEQ ID NO： |
| VQ(续上页) | MNFGLSLIFLVLILK | 21 |
| VR | MGVPTQLLLLWLTMRVLAELLGLLLFCFLMRVLPEFLGLLLLWIS | 222324 |
| VS | MRCSLQFLGVLMFWISREWSWNFLFLLSGTT | 2526 |
| VY | MEWSGVFIFLLSVTA | 27 |
| 如果第二多肽的头两个氨基酸的组合没在此表中列出，可以使用这些第一多肽 | ELWVLMVWVPELWVLMVWVPSTSHDHALTSSSPQPSSPLCLLAVITSNIWFPMVCMSMDMWTSAQFLGILLLWFLARCMDRLTSSFLLLIVPAVLSMLRAIKAAPFSRFGCSMRAPAPFLGLLLFCFLARCMRCSPHFLELLVFWILMRPTLSFLGSCCSSLILRCMRTPAHFLGLLLLCFLGRCMRTPAPFLGLLLFCFSARCMSLLTQLQGLLLLWLTDRCMSLPTQLQGLLLLWLTARCMTMLSLAPLLSLLLLCVSMTSLSQLLGMLMLQSLMVFAPQILGFLLLWISMVFTPHILGLLLFWISQHGHEGLCSVSWVPVATNSREWSWNFLFLLSGTTVSSTDFHMQIFSFMLISFTARC | 142143144145146147148149150151152153154155156157158159160161162 |
若第二多肽的头两个氨基酸的二肽未在表1中明确地列出，并且不想使用在表1最后一行中列出的序列，则不使第一多肽与第二多肽直接连接是有益的。在这种情况下，有益的是插入多达5个氨基酸的短序列以便模仿免疫球蛋白FR1区域序列的开始部分，其中所述的开始部分天然地连接在第一多肽之后。这种序列可以是单个氨基酸或二肽、肽QIWNN(SEQIDNO：472)或其片段，以便模仿天然续接的免疫球蛋白FR1区域的头两个氨基酸。在一个实施方案中，这种序列是肽QIWNN(SEQIDNO：472)或其包含至少二肽QI的氨基端部分。
在第一多肽后或任选地在插入的短序列后，第二多肽包含异源多肽。此异源多肽具有5-500个氨基酸残基的氨基酸序列。在本发明的优选实施方案中，氨基酸序列是10-350个氨基酸残基并且在更优选的实施方案中是15-150个氨基酸残基。与免疫球蛋白缀合的异源多肽选自生物活性分子。
这些分子在施用至人工生物系统或活细胞(如在分析法)中或施用至活生物(如鸟和哺乳动物，包括人)时，表现生物学效应。这些生物活性化合物包含但不限于受体的激动剂以及拮抗剂、酶抑制物及激活物等，并且还包含显示细胞毒活性、抗病毒活性、抗细菌活性或抗癌活性的肽、多肽和蛋白质，以及抗原。生物学效应可以是但不限于酶抑制、在结合位点处或在周边与受体结合和信号触发。这些生物活性化合物例如用于药物、治疗或诊断用途。
第二多肽还包含在异源多肽之后的接头。可以与本发明优选使用的接头列于表2。
表2.可能的接头
| 接头编号 | 接头氨基酸序列 | SEQ NO： |
| 1 | [Ser(Gly)4]3 | 06 |
| 2 | [Ser(Gly)4]5 | 07 |
| 3 | [Gly(Gln)4]3 | 08 |
| 4 | Gly(Ser)15Gly | 09 |
| 5 | GST | 10 |
| 6 | [(Gly)4Ser]3-Gly-Ala-Ser | 139 |
| 7 | Gly(Ser)15-Gly-Ala-Ser | 140 |
| 8 | [(Gly)4Ser]3-Gly | 554 |
| 9 | [(Gly)4Ser]5-Gly | 555 |
| 10 | [(Gly)4Ser]3-Gly2 | 556 |
| 11 | [(Gly)4Ser]5-Gly2 | 557 |
在接头后面是作为第二多肽羧基端部分的免疫球蛋白片段。
第二多肽包含在接头前面的异源多肽和在接头后面作为羧基端部分的免疫球蛋白片段，即编码第二多肽的核酸在5’至3’方向包含编码异源多肽、接头和免疫球蛋白片段的核酸。
免疫球蛋白分子分成5个不同的类：IgA(免疫球蛋白A)、IgD、IgE、IgG和IgM。这些类中IgG和IgE更常在药物应用和诊断应用中使用。在这些类中，免疫球蛋白在其整体结构方面不同，但是结构单元是相似的。所有的免疫球蛋白均由两种不同的多肽链即轻链和重链构成。
免疫球蛋白片段包含免疫球蛋白轻链或重链的羧基端恒定结构域，例如它包含免疫球蛋白重链的至少CH1-、CH2-、CH3-结构域和铰合区以及任选地包含CH4-结构域，或免疫球蛋白轻链的CL-结构域。从中衍生该片段的免疫球蛋白可以是天然存在的或合成的免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，免疫球蛋白片段额外地含有重链可变结构域或轻链可变结构域或其变体的片段。在可变结构域片段中，氨基酸或氨基酸区域被缺失。在一个实施方案中，可变结构域的1-6个氨基酸被缺失。在另一个实施方案中，可变结构域的1-6个区域被缺失。在又一个实施方案中，可变结构域被缺失。免疫球蛋白片段中的功能性(即抗原识别性)可变结构域对本发明不是必需的。本发明的无功能性免疫球蛋白是没有抗原识别性可变结构域的免疫球蛋白。在一个实施方案中，免疫球蛋白片段是无功能的免疫球蛋白。在一个实施方案中，免疫球蛋白片段中包含的可变结构域和恒定结构域衍生自相同的抗体，即属于相同抗体。
在表达质粒中有效连接有不同的核酸序列。为了表达，将质粒导入宿主细胞。蛋白质优选地在哺乳动物细胞如CHO细胞、NS0细胞、Sp2/0细胞、COS细胞、HEK细胞、K562细胞、BHK细胞、PER.C6细胞等中产生。
提供下列实施例、序列表和图以辅助理解本发明，本发明的真实范围在后附权利要求书中描述。应当理解可以对所述的方法进行修改而不脱离本发明的精神。
附图简述
图1IgG类免疫球蛋白的共同结构。
图2抗IGF-1Rγ1-重链表达载体4818的质粒图。
图3抗IGF-1Rκ-轻链表达载体4802的质粒图。
图4γ1-重链恒定区基因载体4962的质粒图。
图5修饰的抗IGF-1Rκ-轻链表达载体4964的质粒图。
图6修饰的抗IGF-1R轻链表达载体4963的质粒图。
图7亲和纯化的免疫球蛋白缀合物的考马斯兰染色的SDS-PAGE-凝胶；根据表6的样品排列。
图8在HEK293EBNA细胞中瞬时表达后，对细胞培养上清液中轻链的免疫检测；根据表6的样品排列。
图9在HEK293EBNA细胞中瞬时表达后，对细胞培养上清液中重链的免疫检测；根据表6的样品排列。
实施例
材料与方法
关于人免疫球蛋白轻链和重链的核苷酸序列一般信息在Kabat，E.A.等，(1991)具有免疫学意义的蛋白质的序列，第五版，NIH出版编号91-3242中给出。
抗体链的氨基酸根据EU编号法(Edelman，G.M.，等，PNAS63(1969)78-85；Kabat，E.A.等，(1991)具有免疫学意义的蛋白质的序列，第五版，NIH出版编号91-3242)编号。
重组DNA技术
使用标准方法以如Sambrook，J.等，分子克隆：实验手册(Molecularcloning：Alaboratorymanual)；ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，纽约，1989中所述操作DNA。分子生物学试剂根据制造商说明书使用。
蛋白质测定
蛋白质浓度使用基于氨基酸序列计算的摩尔消光系数，通过确定在280nm处的光密度(OD)而测定。
DNA序列测定
DNA序列通过在MediGenomixGmbH(Martinsried，德国)开展的双链测序法测定。
DNA和蛋白质的序列分析和序列数据管理
GCG(GeneticsComputerGroup，Madison，Wisconsin)软件包10.2版本和Infomax′sVectorNTI高级套装8.0版本用于序列生成、作图、分析、注释和阐述。
基因合成
所需的基因节段由MedigenomixGmbH(Martinsried，德国)从通过化学合成制造的寡核苷酸中制备。两侧具有单一限制性核酸内切酶切割位点的100-600bp长的基因节段通过寡核苷酸的复性和连接而组装，包括PCR扩增，并随后通过A突出端克隆至pCR2.1-TOPO-TA克隆载体(InvitrogenCorp.，美国)。亚克隆的基因片段的DNA序列通过DNA测序证实。
免疫球蛋白缀合物的亲和纯化
根据已知方法，使用蛋白A-SepharoseTMCL-4B(GEHealthcare创造者AmershamBioscience，瑞典)，通过亲和层析法纯化已表达和分泌的免疫球蛋白缀合物。简而言之，在离心(10,000g持续10分钟)和通过0.45μm滤器过滤后，将含有免疫球蛋白缀合物的澄清的培养上清液施加至用PBS缓冲液(10mMNa2HPO4，1mMKH2PO4，137mMNaCl和2.7mMKCl，pH7.4)平衡的蛋白A-SepharoseTMCL-4B柱上。未结合的蛋白质用PBS平衡缓冲液和0.1M柠檬酸盐缓冲液，pH5.5洗去。免疫球蛋白缀合物用0.1M柠檬酸盐缓冲液，pH3.0洗脱并且含有免疫球蛋白缀合物的级分用1MTris碱中和。随后，免疫球蛋白缀合物在4℃用PBS缓冲液作充分透析，用配有Biomax-SK膜(MilliporeCorp.，美国)的离心超滤装置进行浓缩并贮存在0℃的冰水浴中。
实施例1
表达质粒的制备
连接编码抗胰岛素样生长因子I受体(IGF-1R)抗体轻链可变结构域(区)(VL)和人κ-轻链恒定结构域(区)(CL)的基因节段，连接编码抗IGF-1R重链可变结构域(区)(VH)和人γ1-重链恒定区(CH1-铰合区-CH2-CH3)的基因节段。
a)载体4818
载体4818是用于HEK293EBNA细胞中瞬时表达抗IGF-1R抗体(在下文中也称作抗IGF-1R)重链(基因组方式组织的表达盒；外显子-内含子组织方式)(序列见US2005/0008642)的表达质粒。该载体包含下列功能性元件：
除了抗IGF-1Rγ1-重链表达盒之外，该载体还含有：
-作为选择标记的潮霉素抗性基因，
-EB病毒(EBV)的复制起点oriP，
-来自载体pUC18的允许该质粒在大肠杆菌中复制的复制起点，和
-在大肠杆菌中赋予氨苄青霉素抗性的β-内酰胺酶基因。
抗IGF-1Rγ1-重链基因的转录单位包含下列元件：
-来自人巨细胞病毒(HCMV)的立即早期增强子和启动子，
-合成的5′-非翻译区(UT)，
-鼠免疫球蛋白重链信号序列，包括信号序列内含子(信号序列1、内含子、信号序列2[L1-内含子-L2])，
-克隆的编码抗IGF-1R可变重链的节段，在5′端具有单一Bsml限制性位点(L2信号序列)并在3′端具有剪接供体位点和单一Notl限制性位点，
-小鼠/人重链杂合内含子2，包括小鼠重链增强子元件(部分JH3、JH4)(Neuberger，M.S.，EMBOJ.2(1983)1373-1378)，
-基因组的人γ1-重链基因恒定区，
-人γ1-免疫球蛋白聚腺苷酸化作用(“聚A”)信号序列，和
-分别在5′-和3′端的单一限制性位点Ascl和SgrAI。
抗IGF-1Rγ1-重链表达载体4818的质粒图示于图2。
b)载体4802
载体4802是用于HEK293EBNA细胞中瞬时表达抗IGF-1R抗体轻链(cDNA)的表达质粒。该载体包含下列功能性元件：
除了抗IGF-1Rκ-轻链表达盒之外，该载体还含有：
-作为选择标记的潮霉素抗性基因，
-EB病毒(EBV)的复制起点oriP，
-来自载体pUC18的允许该质粒在大肠杆菌中复制的复制起点，和
-在大肠杆菌中赋予氨苄青霉素抗性的β-内酰胺酶基因。
抗IGF-1Rκ-轻链基因的转录单位包含下列元件：
-来自人巨细胞病毒(HCMV)的立即早期增强子和启动子，
-克隆的抗IGF-1R可变轻链cDNA，包括
-人免疫球蛋白胚系基因的天然5′-UT和
-天然轻链信号序列，在5′端具有单一BglII限制性位点，
-人κ-轻链基因恒定区，
-人免疫球蛋白κ-聚腺苷酸化作用(“聚A”)信号序列，和
-分别在5′-和3′端的单一限制性位点Ascl和Fsel。
抗IGF-1Rκ-轻链表达载体4802的质粒图示于图3。
c)质粒4962
载体4962作为装配表达质粒4965、4966和4967的基础结构。这些质粒使得能够在HEK293EBNA细胞中瞬时表达经修饰的抗体重链(无可变结构域的氨基端缀合，cDNA组织方式)。质粒4962包含下列功能性元件。
除了γ1-重链恒定区的表达盒之外，该载体还含有：
-作为选择标记的潮霉素抗性基因，
-EB病毒(EBV)的复制起点oriP，
-来自载体pUC18的允许该质粒在大肠杆菌中复制的复制起点，和
-在大肠杆菌中赋予氨苄青霉素抗性的β-内酰胺酶基因。
γ1-重链恒定区基因(CH1-铰合部-CH2-CH3)的转录单位由下列元件组成：
-来自人巨细胞病毒(HCMV)的立即早期增强子和启动子，
-合成的接头(SEQIDNO：01)，包含在5′端的单一BglII限制性位点和在3′端的单一NheI限制性位点(Nhel位点位于CH1氨基端中)
HCMV-启动子AlaSer(CH1)
...agatcttttgccaccgctagc...
BglIINheI
-人γ1-重链基因恒定结构域(区)(CH1-铰合部-CH2-CH3，cDNA组织方式)，
-人γ1-免疫球蛋白聚腺苷酸化作用(“聚A”)信号序列，和
-分别在5′-和3′端的单一限制性位点Ascl和Fsel。
γ1-重链恒定结构域/区域基因载体4962的质粒图示于图4。
d)质粒4964
载体4964作为装配表达质粒4976和4977的基础结构。这些质粒使得能够在HEK293EBNA细胞中瞬时表达经修饰的抗IGF-1R抗体轻链(氨基端缀合)。
质粒4964是表达质粒4802的变体。
抗IGF-1Rκ-轻链基因的转录单位受到如下所示的修饰：
天然轻链信号序列由在5′-端配置单一BglII限制性位点和在3′-端配置单一NheI限制性位点的合成的接头(SEQIDNO：03)替换，此合成的接头与VL-IGF-1R可变结构域(区)直接连接。
I-VL-1R18
...agatctatatatatatatgctagcgaaattgtgttgaca...
AlaSerGluIleValLeuThr...
BglIINheI
经修饰的抗IGF-1Rκ-轻链表达载体4964的质粒图示于图5。
e)质粒4969
表达质粒4969衍生自作为抗IGF-1R抗体轻链表达质粒的质粒4802。表达质粒4969编码经修饰的抗体轻链片段(无可变结构域的氨基端缀合；多肽-接头-κ链恒定区)。
为构建质粒4969，将单一BglII限制性位点引入CMV-启动子的3′端并将单一BbsI限制性位点引入抗IGF-1R抗体轻链恒定区内部(SEQIDNO：04)。
I--c-kBbsl
cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttc...
ArgThrValAlaAlaProSerValPheIlePhe...
f)质粒4963
该质粒使得能够在HEK293EBNA细胞中瞬时表达抗IGF-1R抗体轻链。
质粒4963是表达质粒4802的变体。
抗IGF-1Rκ-轻链基因的转录单位受到如下所示的修饰：
-人κ-轻链恒定基因区域在C-κ-Ig-κpA结合区域中受到轻微修饰(插入单一HindIII限制性位点和单一KasI限制性位点，SEQIDNO：558)。
...c-kIg-k-pA
...AaaagcttcaacaggggagagtgtTGAagggagaggcgccccca
...LysSerPheAsnArgGlyGluCys
HindIIIKasI
经修饰的抗IGF-1R轻链表达载体4963的质粒图示于图6。
实施例2
制备最终的表达质粒
已经用已知的重组方法和技术通过连接相应的基因节段(核酸)组装了包含免疫球蛋白基因节段、接头基因节段和多肽基因节段的免疫球蛋白融合基因(重链和轻链)。
编码肽接头的核酸序列和编码多肽的核酸序列分别通过化学合成法合成并随后连接至大肠杆菌质粒内。亚克隆的核酸序列通过DNA测序进行验证。
所用免疫球蛋白多肽链、免疫球蛋白片段、多肽缀合(氨基端)的位置、采用的接头和采用的多肽列于表2(第29页)、表3和表3a。
表3：所用的蛋白质和多肽；氨基酸序列和位置的编号如BH8参考株那样编号(基因座HIVH3BH8；来自法国的HIV-I分离株LAI/IIIB克隆BH8；Ratner，L.等，Nature313(1985)277-384)。
| 蛋白质和多肽 | SEQ ID NO |
| HIV-1 gp41(BH8gp 160的位置507-851) | 11 |
| T-651(见例如US 6,656,906) | 12 |
| HIV-1 gp41胞外结构域变体单突变：I568P | 13 |
| HIV-1 gp41胞外结构域变体四突变：I568P、L550E、I566E和L580E | 14 |
表3a：用于免疫球蛋白缀合物基因构建的化学制备的基因节段。
| 插入物 | SEQ IDNO |
| 插入物4964(导入单一限制性位点) | 15 |
| 插入物4965(具有T-651)，包含信号序列(MDTLCSTLLLLTIPSWVLS)，插入的短序列(QIWNN)，异源多肽(MTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL)，接头(GGGGSGGGGSGGGGSG) | 16 |
| 插入物4966(具有T-651)，包含信号序列(MDTLCSTLLLLTIPSWVLS)，插入的短序列(QIWNN)，异源多肽(MTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL)，接头(GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG) | 17 |
| 插入物4967(具有T-651)，包含信号序列(MDTLCSTLLLLTIPSWVLS)，插入的短序列(QIWNN)，异源多肽 | 18 |
| (MTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL)，接头(GSSSSSSSSSSSSSSSG) | |
| 插入物4969(gp41单突变)，包含信号肽(MEFGLSWVFLVALLRGVQC)，插入的短序列(Q)，异源多肽(VQARQLLSGIVQQQNNLLRAIEGQQHLLQLTVWGPKQLQARILAVERYLKDQQLLGIWGCSGKLICTTAVPWNASWSNKSLEQIWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL)，接头(GGGGSGGGGSGGGGSG) | 19 |
用于构建用来瞬时表达经修饰的免疫球蛋白多肽轻链和重链(表达盒)的最终表达质粒的组分列于表4，包括所用的基础质粒、克隆位点和插入的编码缀合的免疫球蛋白多肽的核酸序列。
表4：构建所用的表达质粒中采用的组分
在表5中列出：具有HIV-I抑制特性的所用多肽(T-651和HIV-1gp41胞外结构域变体)、使免疫球蛋白轻链或重链与该多肽连接的所用接头和如从所编码氨基酸序列中推导的经修饰抗体链的推导分子量。
表5：所用多肽和经修饰的免疫球蛋白多肽链的推导分子量的总结
实施例3在HEK293EBNA细胞中瞬时表达免疫球蛋白变体
重组的免疫球蛋白变体通过瞬时转染贴壁生长的HEK293-EBNA细胞(表达EB病毒核抗原的人胚肾细胞系293；美国典型培养物保藏中心保藏编号ATCC#CRL-10852)产生，其中HEK293-EBNA细胞在补充有10％超低IgGFCS(胎牛血清，Gibco，InvitrogenCorp.，美国)、2mM谷氨酰胺(Gibco，InvitrogenCorp.，美国)、1％体积比(v/v)非必需氨基酸(Gibco，InvitrogenCorp.，美国)和250μg/mlG418(RocheMolecularBiochemicals，RocheDiagnosticsGmbH，德国)的DMEM(Dulbecco′s改良的Eagle′s培养基，Gibco，InvitrogenCorp.，美国)中培养。对于转染，以试剂(μl)对DNA(μg)比率3∶1至6∶1使用FugeneTM6转染试剂(RocheMolecularBiochemicals，RocheDiagnosticsGmbH，德国)。
使用轻链编码质粒对重链编码质粒1∶2至2∶1的摩尔比，从两种不同质粒表达免疫球蛋白多肽轻链和重链。转染后第4-11日收获含有免疫球蛋白变体的细胞培养上清液。上清液在0℃贮存于冰水浴中直至纯化。
关于例如在HEK293细胞中重组表达人免疫球蛋白的一般信息在KMeissner，P.，等，Biotechnol.Bioeng.75(2001)197-203中给出。
实施例4使用SDSPAGE、蛋白质印迹转移并用免疫球蛋白特异性抗体缀合物检测的表达分析
将表达并分泌的多肽通过十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)处理，并且将分离的多肽从凝胶转移至膜上并且随后通过免疫学方法进行检测。
SDS-PAGE
LDS样品缓冲液，四倍浓缩物(4×)：4g甘油，0.682gTris碱，0.666gTris-盐酸，0.8gLDS(十二烷基硫酸锂)，0.006gEDTA(乙二胺四乙酸)，0.75ml在水中的ServaBlueG250的1％重量(w/v)溶液，0.75ml的1％重量(w/v)酚红溶液，添加水以产生总体积10ml。
将含有分泌性多肽的培养肉汤离心以除去细胞和细胞碎片。将澄清的上清液的一等分试样与1/4体积(v/v)4×LDS样品缓冲液及1/10体积(v/v)0.5M1，4-二硫苏糖醇(DTT)混合。样品随后在70℃温育10分钟并且将蛋白质通过SDS-PAGE分离。根据制造商说明书使用预制凝胶系统(InvitrogenCorp.，美国)。尤其，使用10％Bis-Tris预制凝胶(pH6.4)和MOPS运行缓冲液。
蛋白质印迹
转移缓冲液：39mM甘氨酸、48mMTris-盐酸、0.04％重量(w/v)SDS和20％体积的甲醇(v/v)。
在SDS-PAGE后，将分离的免疫球蛋白缀合物多肽链根据Burnette(Burnette，W.N.，Anal.Biochem.112(1981)195-203)的“半干印迹法”以电泳方式转移至硝酸纤维素滤膜(孔径：0.45μm)。
免疫学检测
TBS-缓冲液：50mMTris-盐酸，150mMNaCl，调整至pH7.5。
封闭溶液：在TBS.缓冲液中的1％(w/v)Western封闭剂(RocheMolecularBiochemicals，RocheDiagnosticsGmbH，德国)。
TBST-缓冲液：含0.05％体积(v/v)吐温20的1×TBS缓冲液。
为进行免疫学检测，将蛋白质印迹膜在室温在TBS-缓冲液中温育2次持续5分钟，并在封闭溶液中温育1次持续90分钟，同时振摇。
免疫球蛋白缀合物多肽链的检测
重链：为检测含有重链或含有重链片段的多肽，使用纯化的缀合过氧化物酶的兔抗人IgG抗体(产品编号P0214，DAKO，丹麦)。
轻链：含有轻链或轻链片段的多肽用纯化的缀合过氧化物酶的兔抗人κ轻链抗体(DAKO，丹麦，产品编号P0129)进行检测。
为使抗体轻链和重链或其片段可见，首先将已洗涤并封闭的蛋白质印迹膜与在10ml封闭溶液中的以1∶10,000稀释的缀合抗体在4℃温育过夜，同时振摇，在重链的情况下是与纯化的缀合过氧化物酶的兔抗人IgG抗体温育或在轻链的情况下与纯化的缀合过氧化物酶的兔抗人κ轻链抗体温育。将膜在室温用TBTS-缓冲液洗涤3次并用TBS缓冲液洗涤1次10分钟后，Western印迹膜用产生化学发光的鲁米诺/过氧化物溶液(Lumi-LightPLUS蛋白质印迹法底物，RocheMolecularBiochemicals，RocheDiagnosticsGmbH，德国)显色。因此，将膜在10ml鲁米诺/过氧化物溶液中温育10秒至5分钟，并且发射光随后用Lumi-ImagerFlAnalysator(RocheMolecularBiochemicals，RocheDiagnosticsGmbH，德国)检测和/或用X射线胶片记录。
点的强度由LumiAnalyst软件(版本3.1)定量。
免疫印迹物的多重染色
可以通过将膜在70℃于含有100mMβ-巯基乙醇和20％(w/v)SDS的1MTris-盐酸-缓冲液(pH6.7)中温育1小时而从染色的印迹物中除去检测用的过氧化物酶标记的第二抗体缀合物。在此处理后，印迹物可以用不同的第二抗体进行二次染色。在第二次检测前，印迹物在室温于TBS缓冲液中洗涤三次，每次10分钟，同时振摇。
样品排列列于表6。
表6：SDSPAGE凝胶/蛋白质印迹的样品排列。
| 14 | 4977 | 4967 | 氨基端；轻链氨基端；重链；无VH |
实施例5
检测组装的免疫球蛋白多肽
通过与蛋白ASepharoseTMCL-4B的亲和结合作用纯化并浓缩免疫球蛋白多肽
将含有一种或多种质粒的HEK293EBNA细胞在适合瞬时表达质粒中的多肽基因的条件下培养6-10日。向1.8mlEppendorf管中的1ml澄清培养上清液中添加0.1ml蛋白ASepharoseTMCL-4B(GEHealthcare创造者AmershamBiosciences，瑞典)混悬液(蛋白ASepharose在PBS缓冲液(10mMNa2HPO4，1mMKH2PO4，137mMNaCl和2.7mMKCl，pH
7.4)中的1∶1(v/v)混悬液)。将混悬液在室温于1小时与16小时之间温育，同时振摇。此后，通过离心(30秒，5000转/分钟)使Sepharose珠沉淀并弃去上清液。将Sepharose沉淀随后分别用1.6mlPBS缓冲液、1.6ml0.1M柠檬酸盐缓冲液pH5.0和1.6ml蒸馏水依次洗涤。结合蛋白A的免疫球蛋白用0.1ml1xLDS-PAGE样品缓冲液在70℃从Sepharose珠提取5-10分钟。通过SDS-PAGE并用考马斯亮蓝如实施例4中所述染色而进行分析。
结果：
在瞬时表达后对含有重链片段和/或轻链片段的多肽表达/分泌-分析：
图7a-c：亲和纯化多肽的考马斯兰染色的SDS-PAGE-凝胶；根据表6的样品排列。
对含有免疫球蛋白的多肽的免疫检测
图8a-c：在HEK293EBNA细胞中瞬时表达后，对细胞培养上清液中含有轻链片段的多肽的免疫检测。
图9a-c：在HEK293EBNA细胞中瞬时表达后，对细胞培养上清液中含有重链片段的多肽的免疫检测。
从图7a-c、图8a-c和图9a-c中，可以推断多肽被瞬时表达并分泌至培养基中。在含有免疫球蛋白的多肽具有一个或数个糖基化位点的情况下，最终的多肽没有明确限定的分子量，而根据糖基化程度产生分子量分布。这导致在SDS-PAGE中代表一种多肽的全部多肽种类不均匀地迁移并且条带因此变宽。
实施例6用人IgGELISA对表达的含有重链的多肽定量
细胞培养上清液中含有免疫球蛋白重链片段的多肽的浓度通过夹心ELISA测定，其中夹心ELISA使用了生物素化的抗人IgGF(ab′)2片段作为捕获剂并用于检测过氧化物酶缀合的抗人IgGF(ab′)2抗体片段。
链霉抗生物素包被的96孔板(PierceReacti-BindTM链霉抗生物素包被的聚苯乙烯条平板，产品编号15121，PierceChemicalCompany，美国)用稀释缓冲液(稀释缓冲液：含有0.5％重量比体积(w/v)的牛血清白蛋白的PBS缓冲液)中的0.5μg/ml生物素化的山羊抗人IgGF(ab′)2多克隆抗体片段((F(ab′)2＜h-Feγ＞Bi；Dianova，德国，产品编号109-066-098)捕获抗体(0.1ml/孔)在室温(RT)温育1小时，同时振摇。此后，板用超过0.3ml的洗涤缓冲液(洗涤缓冲液：含有1％重量比体积(w/v)吐温20的PBS)洗涤三次。将含有IgG免疫球蛋白缀合物的细胞培养上清液(样品)在稀释缓冲液中连续(2倍)稀释直至浓度0.5-20ng/ml，添加至平板中并在室温温育1小时，同时振摇。缓冲液中纯化的抗IGF-1R标准抗体(0.5-20ng/ml)用来产生IgG蛋白质标准曲线。在用0.3ml/孔洗涤缓冲液洗涤平板3次后，与人Fcγ结合的复合物用山羊抗人F(ab′)2-特异性多克隆IgG的缀合过氧化物酶的F(ab′)2片段[F(ab′)2＜h-Fcγ＞POD；Dianova，产品编号109-036-098]进行检测。在用0.3ml/孔洗涤缓冲液洗涤平板3次后，平板用(2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)过氧化物酶底物溶液(RocheMolecularBiochemicals，产品编号1684302，RocheDiagnosticsGmbH，德国)显色。在10-30分钟后，吸光度在TecanSpectrafluorplus平板读数仪(TecanDeutschlandGmbH，德国)上在405nm和490nm处对试剂空白(温育缓冲液+溶液)测量。为了背景校正，将在490nm的吸光度根据式I从在405nm的吸光度中扣除。将至少作为一式两份的全部样品分析并且使来自两个或三个吸光度测量中的值平均化。样品的IgG含量从标准曲线中计算。
式I：
序列表
<110>弗·哈夫曼-拉罗切有限公司
<120>用于重组表达多肽的方法
<130>23215FT
<150>EP05023003
<151>2005-10-21
<150>EP06010665
<151>2006-05-24
<160>558
<170>PatentIn版本3.2
<210>1
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>合成的接头，包含在5’端的BglII限制性位点和在3’端的NheI限制性位点(Nhel
位点位于CHl氨基端中)
<400>1
agatcttttgccaccgctagc21
<210>2
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠(Musmusculus)
<400>2
MetAspPheGlyLeuSerLeuValPheLeuValLeuIleLeuLys
151015
<210>3
<211>24
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>合成的接头，5’-端配置BglII限制性位点和在3’-端配置NHEI限制性位点，直接
连接至VL-IR可变区
<400>3
agatctatatatatatatgctagc24
<210>4
<211>27
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>在CMV-启动子的3’端的BglII限制性位点和在<IGF-IR>HuMab抗体轻链恒定区内部
的BbsI限制性位点
<400>4
cgaactgtggctgcaccatctgtcttc27
<210>5
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>5
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuIleLeuValAlaAlaAlaThr
151015
<210>6
<211>15
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头1
<400>6
SerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGly
151015
<210>7
<211>25
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头2
<400>7
SerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySer
151015
GlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGly
2025
<210>8
<211>15
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头3
<400>8
GlyGlnGlnGlnGlnGlyGlnGlnGlnGlnGlyGlnGlnGlnGln
151015
<210>9
<211>17
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头4
<400>9
GlySerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSer
151015
Gly
<210>10
<211>3
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头5
<400>10
GlySerThr
1
<210>11
<211>345
<212>PRT
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>源自HN-1分离株LAI/IIIB克隆BH8的HIV-1gp41糖蛋白的天然氨基酸序列(基因座
HIVH3BH8)(bp-位置：507-851)
<400>11
AlaValGlyIleGlyAlaLeuPheLeuGlyPheLeuGlyAlaAlaGly
151015
SerThrMetGlyAlaAlaSerMetThrLeuThrValGlnAlaArgGln
202530
LeuLeuSerGlyIleValGlnGlnGlnAsnAsnLeuLeuArgAlaIle
354045
GluGlyGlnGlnHisLeuLeuGlnLeuThrValTrpGlyIleLysGln
505560
LeuGlnAlaArgIleLeuAlaValGluArgTyrLeuLysAspGlnGln
65707580
LeuLeuGlyIleTrpGlyCysSerGlyLysLeuIleCysThrThrAla
859095
ValProTrpAsnAlaSerTrpSerAsnLysSerLeuGluGlnIleTrp
100105110
AsnAsnMetThrTrpMetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTyrThr
115120125
SerLeuIleHisSerLeuIleGluGluSerGlnAsnGlnGlnGluLys
130135140
AsnGluGlnGluLeuLeuGluLeuAspLysTrpAlaSerLeuTrpAsn
145150155160
TrpPheAsnIleThrAsnTrpLeuTrpTyrIleLysLeuPheIleMet
165170175
IleValGlyGlyLeuValGlyLeuArgIleValPheAlaValLeuSer
180185190
IleValAsnArgValArgGlnGlyTyrSerProLeuSerPheGlnThr
195200205
HisLeuProAsnProArgGlyProAspArgProGluGlyIleGluGlu
210215220
GluGlyGlyGluArgAspArgAspArgSerIleArgLeuValAsnGly
225230235240
SerLeuAlaLeuIleTrpAspAspLeuArgSerLeuCysLeuPheSer
245250255
TyrHisArgLeuArgAspLeuLeuLeuIleValThrArgIleValGlu
260265270
LeuLeuGlyArgArgGlyTrpGluAlaLeuLysTyrTrpTrpAsnLeu
275280285
LeuGlnTyrTrpSerGlnGluLeuLysAsnSerAlaValAsnLeuLeu
290295300
AsnAlaThrAlaIleAlaValAlaGluGlyThrAspArgValIleGlu
305310315320
LeuValGlnAlaAlaTyrArgAlaIleArgHisIleProArgArgIle
325330335
ArgGlnGlyLeuGluArgIleLeuLeu
340345
<210>12
<211>36
<212>PRT
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>源自HIV-1gp41胞外结构域的天然氨基酸序列(bp-位置：621-656)
<400>12
MetThrTrpMetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTyrThrSerLeu
151015
IleHisSerLeuIleGluGluSerGlnAsnGlnGlnGluLysAsnGlu
202530
GlnGluLeuLeu
35
<210>13
<211>123
<212>PRT
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>HIV-1gp41胞外结构域变体I568P(单突变)，pb-位置
534-656
<400>13
ValGlnAlaArgGlnLeuLeuSerGlyIleValGlnGlnGlnAsnAsn
151015
LeuLeuArgAlaIleGluGlyGlnGlnHisLeuLeuGlnLeuThrVal
202530
TrpGlyProLysGlnLeuGlnAlaArgIleLeuAlaValGluArgTyr
354045
LeuLysAspGlnGlnLeuLeuGlyIleTrpGlyCysSerGlyLysLeu
505560
IleCysThrThrAlaValProTrpAsnAlaSerTrpSerAsnLysSer
65707580
LeuGluGlnIleTrpAsnAsnMetThrTrpMetGluTrpAspArgGlu
859095
IleAsnAsnTyrThrSerLeuIleHisSerLeuIleGluGluSerGln
100105110
AsnGlnGlnGluLysAsnGluGlnGluLeuLeu
115120
<210>14
<211>135
<212>PRT
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>HIV-1gp41胞外结构域变体I568P，L550E，L566E，I580E
(四突变)，bp-位置522-656
<400>14
GlySerThrMetGlyAlaAlaSerMetThrLeuThrValGlnAlaArg
151015
GlnLeuLeuSerGlyIleValGlnGlnGlnAsnAsnGluLeuArgAla
202530
IleGluGlyGlnGlnHisLeuGluGlnLeuThrValTrpGlyProLys
354045
GlnLeuGlnAlaArgGluLeuAlaValGluArgTyrLeuLysAspGln
505560
GlnLeuLeuGlyIleTrpGlyCysSerGlyLysLeuIleCysThrThr
65707580
AlaValProTrpAsnAlaSerTrpSerAsnLysSerLeuGluGlnIle
859095
TrpAsnAsnMetThrTrpMetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTyr
100105110
ThrSerLeuIleHisSerLeuIleGluGluSerGlnAsnGlnGlnGlu
115120125
LysAsnGluGlnGluLeuLeu
130135
<210>15
<211>133
<212>DNA
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>插入物4964
<400>15
agatctatatatatatatgctagcgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtct60
ttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagtagctac120
ttagcctggtacc133
<210>16
<211>249
<212>DNA
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>插入物4965
<400>16
agatcttttgccaccatggacaccctgtgcagcaccctgctcctgctgaccatccccagc60
tgggtgctctcccaaatctggaacaacatgacctggatggagtgggaccgcgagatcaat120
aactacacaagcttgatccactctctgatcgaggaaagccagaaccagcaggagaagaac180
gagcaggagctcctgggcgggggtggatccggcggcgggggcagcggcgggggaggctcc240
ggcgctagc249
<210>17
<211>279
<212>DNA
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>插入物4966
<400>17
agatcttttgccaccatggacaccctgtgcagcaccctgctcctgctgaccatccccagc60
tgggtgctctcccaaatctggaacaacatgacctggatggagtgggaccgcgagatcaat120
aactacacaagcttgatccactctctgatcgaggaaagccagaaccagcaggagaagaac180
gagcaggagctcctgggcgggggtggctccggcggcgggggcagcggcgggggaggctcc240
ggcgggggcggatccgggggcggtggcagcggcgctagc279
<210>18
<211>252
<212>DNA
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>插入物4967
<400>18
agatcttttgccaccatggacaccctgtgcagcaccctgctcctgctgaccatccccagc60
tgggtgctctcccaaatctggaacaacatgacctggatggagtgggaccgcgagatcaat120
aactacacaagcttgatccactccctgatcgaggaaagccagaaccagcaggagaagaac180
gagcaggagctcctgggatccagctccagctccagctccagctccagcagtagctccagc240
tctggcgctagc252
<210>19
<211>589
<212>DNA
<213>人免疫缺陷病毒
<220>
<221>misc_feature
<223>插入物4969
<400>19
agatctagctctgggagaggagcccagcactagaagtcggcggtgtttccattcggtgat60
cagcactgaacacagaggactcaccatggagtttgggctgagctgggtgttcctcgtggc120
actgctcaggggtgtacagtgtcaggtgcaggcccgccagctgctctccggcatcgtcca180
gcagcaaaacaatctgctgcgggcgatcgaggggcagcagcacctcctgcagctgacggt240
gtggggtcccaagcagctgcaggcccgcattctggccgtggaacggtacctgaaggacca300
gcagctgctcggcatctggggatgctctggcaagcttatctgcaccacagccgtcccctg360
gaacgctagctggagtaacaaaagcctggagcaaatttggaacaacatgacctggatgga420
gtgggatcgcgagatcaataattacacaagcctgatccactccctgatcgaggaaagcca480
gaaccagcaggagaagaacgagcaggagctcctgggcgggggcggatccggcggcggggg540
cagcggtgggggcggctccggccgaactgtggctgcaccatctgtcttc589
<210>20
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>20
MetAsnPheGlyLeuArgLeuIlePheLeuValLeuThrLeuLys
151015
<210>21
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>21
MetAsnPheGlyLeuSerLeuIlePheLeuValLeuIleLeuLys
151015
<210>22
<211>13
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>22
MetGlyValProThrGlnLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
1510
<210>23
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>23
MetArgValLeuAlaGluLeuLeuGlyLeuLeuLeuPheCysPheLeu
151015
<210>24
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>24
MetArgValLeuProGluPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
<210>25
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>25
MetArgCysSerLeuGlnPheLeuGlyValLeuMetPheTrpIleSer
151015
<210>26
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>26
ArgGluTrpSerTrpAsnPheLeuPheLeuLeuSerGlyThrThr
151015
<210>27
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>27
MetGluTrpSerGlyValPheIlePheLeuLeuSerValThrAla
151015
<210>28
<211>19
<212>PRT
<213>人(Homosapiens)
<400>28
MetAspTrpThrTrpArgIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrGly
151015
AlaHisSer
<210>29
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>29
MetAspTrpThrTrpArgIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrGly
151015
AlaHisSer
<210>30
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>30
MetAspTrpThrTrpArgIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrSer
151015
AlaHisSer
<210>31
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>31
MetAspTrpThrTrpSerIleLeuPheLeuValAlaAlaProThrGly
151015
AlaHisSer
<210>32
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>32
MetAspCysThrTrpArgIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrGly
151015
ThrHisAla
<210>33
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>33
MetAspTrpThrTrpArgIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrAsp
151015
AlaTyrSer
<210>34
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>34
MetAspTrpThrTrpArgValPheCysLeuLeuAlaValAlaProGly
151015
AlaHisSer
<210>35
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>35
MetAspTrpIleTrpArgIleLeuPheLeuValGlyAlaAlaThrGly
151015
AlaHisSer
<210>36
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>36
MetAspThrLeuCysSerThrLeuLeuLeuLeuThrIleProSerTrp
151015
ValLeuSer
<210>37
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>37
MetAspThrLeuCysTyrThrLeuLeuLeuLeuThrThrProSerTrp
151015
ValLeuSer
<210>38
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>38
MetGluLeuGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuGluGly
151015
ValGlnCys
<210>39
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>39
MetGluLeuGlyLeuSerTrpIlePheLeuLeuAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>40
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>40
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleIleLysGly
151015
ValGlnCys
<210>41
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>41
MetGluLeuGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuGluGly
151015
ValGlnCys
<210>42
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>42
MetGluPheGlyLeuSerTrpIlePheLeuAlaAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>43
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>43
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>44
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>44
MetGluLeuGlyLeuArgTrpValPheLeuValAlaIleLeuGluGly
151015
ValGlnCys
<210>45
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>45
MetGluPheGlyLeuSerTrpLeuPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>46
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>46
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaLeuLeuArgGly
151015
ValGlnCys
<210>47
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>47
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaLeuLeuArgGly
151015
ValGlnCys
<210>48
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>48
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>49
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>49
MetGluLeuGlyLeuCysTrpValPheLeuValAlaIleLeuGluGly
151015
ValGlnCys
<210>50
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>50
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>51
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>51
MetGluPheTrpLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>52
<211>20
<212>PRT
<213>人胚系序列
<400>52
MetThrGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIlePheLys
151015
GlyValGlnCys
20
<210>53
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>53
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>54
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>54
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValValIleLeuGlnGly
151015
ValGlnCys
<210>55
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>55
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaIleLeuLysGly
151015
ValGlnCys
<210>56
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>56
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>57
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>57
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>58
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>58
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuPro
<210>59
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>59
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>60
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>60
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>61
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>61
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>62
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>62
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>63
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>63
MetLysHisLeuTrpPhePheLeuLeuLeuValAlaAlaProArgTrp
151015
ValLeuSer
<210>64
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>64
MetGlySerThrAlaIleLeuAlaLeuLeuLeuAlaValLeuGlnGly
151015
ValCysSer
<210>65
<211>19
<212>PRT
<213>人胚系序列
<400>65
MetGlySerThrAlaIleLeuGlyLeuLeuLeuAlaValLeuGlnGly
151015
ValCysAla
<210>66
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>66
MetSerValSerPheLeuIlePheLeuProValLeuGlyLeuProTrp
151015
GlyValLeuSer
20
<210>67
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>67
MetAspTrpThrTrpArgIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrGly
151015
AlaHisSer
<210>68
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>68
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuArgGlyAlaArgCys
20
<210>69
<211>22
<212>PRT
<213>人胚系序列
<400>69
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuArgGlyAlaArgCys
20
<210>70
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>70
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuGlnLeuTrp
151015
LeuSerGlyAlaArgCys
20
<210>71
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>71
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuSerGlyAlaArgCys
20
<210>72
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>72
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProAspThrArgCys
20
<210>73
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>73
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
PheProGlyAlaArgCys
20
<210>74
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>74
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
PheProGlyAlaArgCys
20
<210>75
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>75
MetAspMetArgValLeuAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuCys
151015
PheProGlyAlaArgCys
20
<210>76
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>76
MetAspMetArgValLeuAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuCys
151015
PheProGlyAlaArgCys
20
<210>77
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>77
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProGlyAlaArgCys
20
<210>78
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>78
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProGlyAlaArgCys
20
<210>79
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>79
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
PheProGlySerArgCys
20
<210>80
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>80
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
PheProGlySerArgCys
20
<210>81
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>81
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProGlyAlaArgCys
20
<210>82
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>82
MetAspMetArgValProAlaGlnArgLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
PheProGlyAlaArgCys
20
<210>83
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>83
MetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro
151015
GlyAlaArgCys
20
<210>84
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>84
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProGlyAlaArgCys
20
<210>85
<211>22
<212>PRT
<213>人胚系序列
<400>85
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProGlyAlaArgCys
20
<210>86
<211>22
<212>PRT
<213>人
<400>86
MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp
151015
LeuProGlyAlaLysCys
20
<210>87
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>87
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValPro
151015
GlySerSerGlu
20
<210>88
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>88
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValPro
151015
GlySerSerGlu
20
<210>89
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>89
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValPro
151015
GlySerSerGly
20
<210>90
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>90
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValPro
151015
GlySerSerGly
20
<210>91
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>91
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpIlePro
151015
GlySerSerAla
20
<210>92
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>92
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpIlePro
151015
GlySerSerAla
20
<210>93
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>93
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValSer
151015
GlySerSerGly
20
<210>94
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>94
MetArgLeuProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValSer
151015
GlySerSerGly
20
<210>95
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>95
MetArgLeuLeuAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuMetLeuTrpValPro
151015
GlySerSerGly
20
<210>96
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>96
MetGluThrProAlaGlnLeuLeuPheLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro
151015
AspThrThrGly
20
<210>97
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>97
MetGluThrProAlaGlnLeuLeuPheLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro
151015
AspThrThrGly
20
<210>98
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>98
MetGluAlaProAlaGlnLeuLeuPheLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro
151015
AspThrThrGly
20
<210>99
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>99
MetGluAlaProAlaGlnLeuLeuPheLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro
151015
AspThrThrGly
20
<210>100
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>100
MetGluAlaProAlaGlnLeuLeuPheLeuLeuLeuLeuTrpLeuPro
151015
AspThrThrGly
20
<210>101
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>101
MetGluAlaProAlaGlnLeuLeuPheLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AspThrThrGly
20
<210>102
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>102
MetGluProTrpLysProGlnHisSerPhePhePheLeuLeuLeuLeu
151015
TrpLeuProAspThrThrGly
20
<210>103
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>103
MetValLeuGlnThrGlnValPheIleSerLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
GlyAlaTyrGly
20
<210>104
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>104
MetGlySerGlnValHisLeuLeuSerPheLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
AspThrArgAla
20
<210>105
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>105
MetLeuProSerGlnLeuIleGlyPheLeuLeuLeuTrpValProAla
151015
SerArgGly
<210>106
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>106
MetLeuProSerGlnLeuIleGlyPheLeuLeuLeuTrpValProAla
151015
SerArgGly
<210>107
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>107
MetValSerProLeuGlnPheLeuArgLeuLeuLeuLeuTrpValPro
151015
AlaSerArgGly
20
<210>108
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>108
MetAlaTrpSerProLeuPheLeuThrLeuIleThrHisCysAlaGly
151015
SerTrpAla
<210>109
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>109
MetAlaTrpSerProLeuLeuLeuThrLeuLeuAlaHisCysThrGly
151015
SerTrpAla
<210>110
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>110
MetAlaSerPheProLeuLeuLeuThrLeuLeuThrHisCysAlaGly
151015
SerTrpAla
<210>111
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>111
MetAlaGlyPheProLeuLeuLeuThrLeuLeuThrHisCysAlaGly
151015
SerTrpAla
<210>112
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>112
MetThrCysSerProLeuLeuLeuThrLeuLeuIleHisCysThrGly
151015
SerTrpAla
<210>113
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>113
MetAlaTrpAlaLeuLeuLeuLeuThrLeuLeuThrGlnGlyThrGly
151015
SerTrpAla
<210>114
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>114
MetAlaTrpAlaLeuLeuLeuLeuSerLeuLeuThrGlnGlyThrGly
151015
SerTrpAla
<210>115
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>115
MetAlaTrpAlaLeuLeuLeuLeuThrLeuLeuThrGlnGlyThrGly
151015
SerTrpAla
<210>116
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>116
MetAlaTrpAlaLeuLeuLeuLeuThrLeuLeuThrGlnGlyThrGly
151015
SerTrpAla
<210>117
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>117
MetAlaTrpAlaLeuLeuLeuLeuThrLeuLeuThrGlnAspThrGly
151015
SerTrpAla
<210>118
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>118
MetAlaTrpIleProLeuPheLeuGlyValLeuAlaTyrCysThrGly
151015
SerValAla
<210>119
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>119
MetAlaTrpThrAlaLeuLeuLeuSerLeuLeuAlaHisPheThrGly
151015
SerValAla
<210>120
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>120
MetAlaTrpThrProLeuLeuLeuProLeuLeuThrPheCysThrVal
151015
SerGluAla
<210>121
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>121
MetAlaTrpIleProLeuLeuLeuProLeuLeuThrLeuCysThrGly
151015
SerGluAla
<210>122
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>122
MetAlaTrpThrProLeuTrpLeuThrLeuLeuThrLeuCysIleGly
151015
SerValVal
<210>123
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>123
MetAlaTrpThrValLeuLeuLeuGlyLeuLeuSerHisCysThrGly
151015
SerValThr
<210>124
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>124
MetAlaTrpAlaThrLeuLeuLeuProLeuLeuAsnLeuTyrThrGly
151015
SerIleAla
<210>125
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>125
MetAlaTrpIleProLeuLeuLeuProLeuLeuThrLeuCysThrGly
151015
SerGluAla
<210>126
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>126
MetAlaTrpIleProLeuLeuLeuProLeuLeuIleLeuCysThrVal
151015
SerValAla
<210>127
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>127
MetAlaTrpValSerPheTyrLeuLeuProPheIlePheSerThrGly
151015
LeuCysAla
<210>128
<211>21
<212>PRT
<213>人
<400>128
MetAlaTrpThrGlnLeuLeuLeuLeuPheProLeuLeuLeuHisTrp
151015
ThrGlySerLeuSer
20
<210>129
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>129
MetAlaTrpThrProLeuLeuPheLeuThrLeuLeuLeuHisCysThr
151015
GlySerLeuSer
20
<210>130
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>130
MetAlaTrpThrProLeuLeuLeuLeuLeuLeuSerHisCysThrGly
151015
SerLeuSer
<210>131
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>131
MetAlaTrpThrProLeuLeuLeuLeuPheLeuSerHisCysThrGly
151015
SerLeuSer
<210>132
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>132
MetAlaTrpThrLeuLeuLeuLeuValLeuLeuSerHisCysThrGly
151015
SerLeuSer
<210>133
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>133
MetAlaTrpAlaProLeuLeuLeuThrLeuLeuAlaHisCysThrGly
151015
SerTrpAla
<210>134
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>134
MetAlaTrpThrProLeuPheLeuPheLeuLeuThrCysCysProGly
151015
SerAsnSer
<210>135
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>135
MetAlaTrpThrProLeuPheLeuPheLeuLeuThrCysCysProGly
151015
SerAsnSer
<210>136
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>136
MetAlaTrpMetMetLeuLeuLeuGlyLeuLeuAlaTyrGlySerGly
151015
ValAspSer
<210>137
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>137
MetAlaTrpAlaProLeuLeuLeuThrLeuLeuSerLeuLeuThrGly
151015
SerLeuSer
<210>138
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>138
MetProTrpAlaLeuLeuLeuLeuThrLeuLeuThrHisSerAlaVal
151015
SerValVal
<210>139
<211>18
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头6
<400>139
GlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly
151015
AlaSer
<210>140
<211>19
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头7
<400>140
GlySerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSerSer
151015
GlyAlaSer
<210>141
<211>14
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>141
MetAspPheGlyLeuIlePhePheIleValAlaLeuLeuLys
1510
<210>142
<211>10
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>142
GluLeuTrpValLeuMetValTrpValPro
1510
<210>143
<211>13
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>143
GluLeuTrpValLeuMetValTrpValProSerThrSer
1510
<210>144
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>144
HisAspHisAlaLeuThrSerSerSerProGlnProSerSerProLeu
151015
CysLeu
<210>145
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>145
LeuAlaValIleThrSerAsnIleTrpPheProMetValCysMetSer
151015
<210>146
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>146
MetAspMetTrpThrSerAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheLeuAlaArgCys
20
<210>147
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>147
MetAspArgLeuThrSerSerPheLeuLeuLeuIleValProAlaVal
151015
LeuSer
<210>148
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>148
MetLeuArgAlaIleLysAlaAlaProPheSerArgPheGlyCysSer
151015
<210>149
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>149
MetArgAlaProAlaProPheLeuGlyLeuLeuLeuPheCysPheLeu
151015
AlaArgCys
<210>150
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>150
MetArgCysSerProHisPheLeuGluLeuLeuValPheTrpIleLeu
151015
<210>151
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>151
MetArgProThrLeuSerPheLeuGlySerCysCysSerSerLeuIle
151015
LeuArgCys
<210>152
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>152
MetArgThrProAlaHisPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheLeu
151015
GlyArgCys
<210>153
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>153
MetArgThrProAlaProPheLeuGlyLeuLeuLeuPheCysPheSer
151015
AlaArgCys
<210>154
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>154
MetSerLeuLeuThrGlnLeuGlnGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AspArgCys
<210>155
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>155
MetSerLeuProThrGlnLeuGlnGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AlaArgCys
<210>156
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>156
MetThrMetLeuSerLeuAlaProLeuLeuSerLeuLeuLeuLeuCys
151015
ValSer
<210>157
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>157
MetThrSerLeuSerGlnLeuLeuGlyMetLeuMetLeuGlnSerLeu
151015
<210>158
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>158
MetValPheAlaProGlnIleLeuGlyPheLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
<210>159
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>159
MetValPheThrProHisIleLeuGlyLeuLeuLeuPheTrpIleSer
151015
<210>160
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>160
GlnHisGlyHisGluGlyLeuCysSerValSerTrpValProValAla
151015
ThrAsnSer
<210>161
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>161
ArgGluTrpSerTrpAsnPheLeuPheLeuLeuSerGlyThrThrVal
151015
SerSer
<210>162
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>162
ThrAspPheHisMetGlnIlePheSerPheMetLeuIleSerPheThr
151015
AlaArgCys
<210>163
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>163
MetGluPheGlnThrGlnValLeuMetSerLeuLeuLeuCysMetSer
151015
<210>164
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>164
MetGluSerGlnThrGlnValLeuMetPheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>165
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>165
MetValSerThrProGlnPheLeuValPheLeuLeuPheTrpIlePro
151015
<210>166
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>166
MetValSerThrProGlnPheLeuValPheLeuLeuPheTrpIlePro
151015
<210>167
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>167
MetSerValProThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>168
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>168
MetLysSerGlnThrGlnValPheIlePheLeuLeuLeuCysValSer
151015
<210>169
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>169
MetLysSerGlnThrGlnValPheValPheLeuLeuLeuCysValSer
151015
<210>170
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>170
MetAlaTrpIleSerLeuIleLeuSerLeuLeuAlaLeuSerSer
151015
<210>171
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>171
MetAlaTrpThrSerLeuIleLeuSerLeuLeuAlaLeuCysSer
151015
<210>172
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>172
MetArgCysLeuAlaGluPheLeuGlyLeuLeuValLeuTrpIlePro
151015
<210>173
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>173
MetGlyTrpAsnTrpIlePheIleLeuIleLeuSerValThrThr
151015
<210>174
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>174
MetArgPheGlnValGlnValLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
<210>175
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>175
MetArgProSerIleGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuPheTrpLeuHis
151015
<210>176
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>176
MetAspIleArgAlaProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>177
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>177
MetAspMetMetValLeuAlaGlnPheLeuAlaPheLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>178
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>178
MetAspMetArgAlaProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>179
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>179
MetAspMetArgAlaProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>180
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>180
MetAspMetArgAlaProAlaGlnValPheGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>181
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>181
MetAspMetArgAlaSerAlaGlnPheHisGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>182
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>182
MetAspMetArgAlaSerAlaGlnPheHisGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>183
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>183
MetAspMetTrpThrSerAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheLeu
<210>184
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>184
MetAsnThrArgAlaProAlaGluPheLeuGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PheLeu
<210>185
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>185
MetArgAlaProAlaProPheLeuGlyLeuLeuLeuPheCysPheLeu
151015
<210>186
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>186
MetArgThrProAlaProPheLeuGlyLeuLeuLeuPheCysPheSer
151015
<210>187
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>187
MetSerIleSerThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>188
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>188
MetSerLeuProThrGlnLeuGlnGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>189
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>189
MetSerValLeuThrGlnValLeuAlaLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>190
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>190
MetSerValProThrGlnLeuLeuAlaLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>191
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>191
MetSerValProThrGlnValLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>192
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>192
ThrAspPheHisMetGlnIlePheSerPheMetLeuIleSerPheThr
151015
<210>193
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>193
MetAlaTrpThrSerLeuIleLeuSerLeuLeuAlaLeuCysSer
151015
<210>194
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>194
MetArgCysLeuAlaGluPheLeuArgLeuLeuValLeuTrpIlePro
151015
<210>195
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>195
MetLysLeuProValArgLeuLeuValLeuMetPheTrpIleProSer
151015
SerSer
<210>196
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>196
MetAspIleArgAlaProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>197
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>197
MetAspMetMetValLeuAlaGlnPheLeuAlaPheLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>198
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>198
MetAspMetArgAlaProAlaGlnPhePheGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProIleArgCys
20
<210>199
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>199
MetAspMetArgAlaProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>200
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>200
MetAspMetArgAlaProAlaGlnIlePheGlyPheLeuLeuLeuLeu
151015
PheGlnThrArgCys
20
<210>201
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>201
MetAspMetArgAlaProAlaGlnValPheGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>202
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>202
MetAspMetArgAlaSerAlaGlnPheLeuGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>203
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>203
MetAspMetArgAspProProGlnPheLeuAlaPheLeuLeuLeuTrp
151015
IlePro
<210>204
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>204
MetAspMetArgThrProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProIleLysCys
20
<210>205
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>205
MetAspMetArgValProAlaHisValPheGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PheProThrArgCys
20
<210>206
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>206
MetAspSerGlnAlaGlnValLeuIleLeuLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>207
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>207
MetAspSerGlnAlaGlnValLeuMetLeuLeuLeuLeuSerValSer
151015
ThrCysGly
<210>208
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>208
MetAspSerGlnAlaGlnValLeuMetLeuLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>209
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>209
MetAspSerGlnAlaArgValLeuMetLeuLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>210
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>210
MetGluPheGlnThrGlnValPheValPheValLeuLeuTrpLeuSer
151015
ValAspGly
<210>211
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>211
MetGluPheGlnThrGlnValLeuMetSerLeuLeuLeuCysMetSer
151015
AlaCysAla
<210>212
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>212
MetGluLysAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>213
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>213
MetGluSerAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>214
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>214
MetGluSerGlnIleGlnAlaPheValPheValPheLeuTrpLeuSer
151015
ValAspGly
<210>215
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>215
MetGluSerGlnIleGlnValPheValPheValPheLeuTrpLeuSer
151015
ValAspGly
<210>216
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>216
MetSerLeuLeuThrGlnLeuGlnGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>217
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>217
LeuIleLeuLysValGlnCys
15
<210>218
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>218
LeuValLeuLysValLeuCys
15
<210>219
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>219
MetAspMetArgAlaSerAlaGlnPheHisGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>220
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>220
MetLysLeuProValLeuLeuValValLeuLeuLeuPheThrSerPro
151015
SerSerSer
<210>221
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>221
MetLysLeuProValArgLeuLeuValLeuMetPheTrpIleProSer
151015
SerSer
<210>222
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>222
MetMetSerProAlaGlnPheLeuPheLeuLeuValLeuTrpIleGln
151015
ThrAsnGly
<210>223
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>223
MetMetSerProAlaGlnPheLeuPheLeuLeuValLeuTrpIleArg
151015
ThrAsnGly
<210>224
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>224
MetMetSerProValHisSerIlePheIleLeuLeuLeuTrpIleVal
151015
IleSerGly
<210>225
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>225
MetMetSerProValGlnPheLeuPheLeuLeuMetLeuTrpIleGln
151015
ThrAsnGly
<210>226
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>226
MetAsnPheGlyLeuArgLeuIlePheLeuValLeuThrLeuLysVal
151015
GlnCys
<210>227
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>227
MetAsnLeuProValHisLeuLeuValLeuLeuLeuPheTrpIlePro
151015
SerArgGly
<210>228
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>228
MetAsnThrArgAlaProAlaGluPheLeuGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PheLeuAlaArgCys
20
<210>229
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>229
MetArgPheGlnValGlnValLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
AlaGlnCys
<210>230
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>230
MetArgValLeuSerLeuLeuTyrLeuLeuThrAlaIleProGlyIle
151015
LeuSer
<210>231
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>231
MetAspPheHisValGlnIlePheSerPheMetLeuIleSerValThr
151015
IleLeuSerSerGly
20
<210>232
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>232
MetAspPheGlnMetGlnIleIleSerLeuLeuLeuIleSerValThr
151015
IleValSerAsnGly
20
<210>233
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>233
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerValThr
151015
IleLeuThrAsnGly
20
<210>234
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>234
MetAspMetArgAlaProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>235
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>235
MetAsnPheHisValGlnIlePheSerPheMetLeuIleSerValThr
151015
IleGlySerSerGly
20
<210>236
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>236
MetThrMetLeuSerLeuValLeuLeuLeuSerPheLeuLeuLeuCys
151015
SerArgAla
<210>237
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>237
MetValSerThrProGlnPheLeuValPheLeuLeuPheTrpIlePro
151015
AlaCysGly
<210>238
<211>20
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>238
ThrGluLeuIleCysValPheLeuPheLeuLeuSerValThrAlaIle
151015
LeuSerSerGly
20
<210>239
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>239
MetAspCysGlyIleSerLeuValPheLeuValLeuIleLeuLysVal
151015
Cys
<210>240
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>240
MetAspMetTrpValGlnIlePheSerLeuLeuLeuIleCysValThr
151015
SerLysGly
<210>241
<211>11
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>241
LeuLeuIleSerValThrIleMetSerArgGly
1510
<210>242
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>242
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>243
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>243
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerIleSer
151015
ValMetSerArgGly
20
<210>244
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>244
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerValSer
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>245
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>245
MetAspLeuGlnValGlnIleIleSerPheLeuLeuIleIleValThr
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>246
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>246
MetGlyGluGlnArgIleArgSerCysHisAlaThrSerGlyAlaGlu
151015
SerAlaArg
<210>247
<211>20
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>247
MetGlySerGlnValHisLeuLeuSerPheLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
AspThrArgAla
20
<210>248
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>248
MetThrMetPheSerLeuAlaLeuLeuLeuSerLeuLeuLeuLeuCys
151015
ValSerSerArgAla
20
<210>249
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>249
MetThrMetLeuSerLeuAlaProLeuLeuSerLeuLeuLeuLeuSer
151015
ArgAla
<210>250
<211>22
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa可为任一天然存在的氨基酸
<400>250
MetXaaThrMetAspGluHisGluSerGlyAlaValThrProHisGln
151015
ValLeuLysSerArgAla
20
<210>251
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>251
IleLysTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
HisSer
<210>252
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>252
IleLysTrpSerTrpIleSerLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
HisSer
<210>253
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>253
LeuIleLeuLysValGlnCys
15
<210>254
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>254
LeuValLeuLysValGlnCys
15
<210>255
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>255
MetAlaValValThrGlyLysGlyLeuProSerProLysLeuGluVal
151015
AsnSer
<210>256
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>256
MetAspPheGlyLeuIlePhePheIleValAlaLeuLeuLysValGln
151015
Cys
<210>257
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>257
MetAspPheGlyLeuSerLeuValPheLeuValLeuIleLeuLysVal
151015
GlnCys
<210>258
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>258
MetAspMetArgAlaSerAlaGlnPheHisGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PheProAlaArgCys
20
<210>259
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>259
MetGluTrpGluLeuSerLeuIlePheIlePheAlaLeuLeuLysAsp
151015
ValGlnCys
<210>260
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>260
MetGluTrpSerCysIlePheLeuPheLeuLeuSerValThrAlaVal
151015
HisSer
<210>261
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>261
MetGluTrpSerCysIlePheLeuPheLeuLeuSerValThrAlaIle
151015
HisSer
<210>262
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>262
MetGluTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>263
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>263
MetGlyTrpAsnTrpIlePheIleLeuIleLeuSerValThrThrAla
151015
LeuSer
<210>264
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>264
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>265
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>265
MetGlyTrpAsnTrpIlePheIleLeuIleLeuSerValThrThrVal
151015
HisSer
<210>266
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>266
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>267
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>267
MetGlyTrpSerTrpIlePhePhePheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>268
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>268
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPhePheLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>269
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>269
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlySerAlaVal
151015
LeuSer
<210>270
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>270
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlySerAlaVal
151015
HisSer
<210>271
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>271
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
HisSer
<210>272
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>272
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>273
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>273
IleAspIleAsnValGlnIlePheArgPheLeuLeuIleSerValThr
151015
SerSerGly
<210>274
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>274
MetAsnMetLeuThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpPheAla
151015
<210>275
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>275
MetArgThrProAlaHisPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheLeu
151015
<210>276
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>276
MetArgTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>277
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>277
MetAsnPheHisValGlnIlePheSerPheMetLeuIleSerValThr
151015
<210>278
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>278
MetGluTrpSerCysIlePheLeuPheLeuLeuSerValThrAla
151015
<210>279
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>279
MetAspPheGlnValGlnIlePheGlnIleProValLysGlnCysLeu
151015
<210>280
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>280
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
<210>281
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>281
MetLysPheProSerGlnLeuLeuLeuPheLeuLeuPheArgIleThr
151015
<210>282
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>282
MetAspMetArgThrProAlaGlnPheLeuGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>283
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>283
MetAlaValLeuAlaLeuLeuPheCysLeuValThrPheProSer
151015
<210>284
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>284
MetAspPheHisValGlnIlePheSerPheMetLeuIleSerValThr
151015
<210>285
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>285
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
<210>286
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>286
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerArg
151015
<210>287
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>287
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerValThr
151015
<210>288
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>288
ThrGluLeuIleCysValPheLeuPheLeuLeuSerValThrAla
151015
<210>289
<211>6
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>289
LeuLeuIleSerValThr
15
<210>290
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>290
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
<210>291
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>291
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerValSer
151015
<210>292
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>292
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerValSer
151015
<210>293
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>293
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuMetSerAlaSer
151015
<210>294
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>294
MetAspLeuGlnValGlnIleIleSerPheLeuLeuIleIleValThr
151015
<210>295
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>295
MetHisPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
<210>296
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>296
MetLysCysSerTrpValIlePhePheLeuMetAlaValValIle
151015
<210>297
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>297
MetLysLeuTrpLeuAsnTrpIleLeuLeuValAlaLeuLeuAsn
151015
<210>298
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>298
MetAspMetArgAlaProAlaGlnPhePheGlyIleLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>299
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>299
MetIleTyrSerLeuGlnLeuLeuArgMetLeuValLeuTrpIlePro
151015
<210>300
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>300
MetMetSerProValHisSerIlePheIleLeuLeuLeuTrpIleVal
151015
<210>301
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>301
MetSerTyrSerLeuGlnLeuLeuArgMetLeuValLeuTrpIlePro
151015
<210>302
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>302
MetSerTyrSerLeuGlnLeuLeuArgMetLeuValLeuTrpIlePro
151015
<210>303
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>303
MetAspPheGlnMetGlnIleIleSerLeuLeuLeuIleSerValThr
151015
<210>304
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>304
MetAspPheGlnValGlnIlePheGlnIleProValLysGlnCysLeu
151015
IleIleSerArgGly
20
<210>305
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>305
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
<210>306
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>306
MetArgProThrLeuSerPheLeuGlySerCysCysSerSerLeuIle
151015
<210>307
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>307
MetLysPheProSerGlnLeuLeuLeuLeuLeuLeuPheGlyIlePro
151015
<210>308
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>308
MetGluSerAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrSer
<210>309
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>309
MetGluSerGlnThrLeuValPheIleSerIleLeuLeuTrpLeuTyr
151015
AlaAspGly
<210>310
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>310
MetGluSerGlnThrGlnValPheLeuSerLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>311
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>311
MetGluThrAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>312
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>312
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>313
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>313
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrGly
151015
ValHisSer
<210>314
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>314
MetAlaTrpIleSerLeuIleLeuSerLeuLeuAlaLeuSerSerAla
151015
IleSer
<210>315
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>315
IleGlyTrpSerTyrIleIleLeuLeuLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>316
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>316
MetAlaTrpThrSerLeuIleLeuSerLeuLeuAlaLeuCysSerAla
151015
SerSer
<210>317
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>317
MetAlaTrpThrSerLeuIleLeuSerLeuLeuAlaLeuCysSerAla
151015
IleSer
<210>318
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>318
MetGlyTrpSerCysValLeuLeuPheLeuValSerGlyThrAlaVal
151015
LeuCys
<210>319
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>319
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
IleIleSerArgGly
20
<210>320
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>320
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
IleLeuPheArgGly
20
<210>321
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>321
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
IleLeuSerArgGly
20
<210>322
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>322
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>323
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>323
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
LeuMetSerArgGly
20
<210>324
<211>20
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>324
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerArgIle
151015
LeuSerArgGly
20
<210>325
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>325
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerValSer
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>326
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>326
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuMetSerAlaSer
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>327
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>327
MetAspThrLeuCysSerThrLeuLeuLeuLeuThrIleProSerTrp
151015
ValLeuSer
<210>328
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>328
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
HisCys
<210>329
<211>21
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>329
MetHisPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerAlaSer
151015
IleMetSerArgGly
20
<210>330
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>330
MetAlaTrpThrProLeuPhePhePhePheValLeuHisCysSerSer
151015
PheSer
<210>331
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>331
MetArgValLeuGlyPheLeuCysLeuValThrValLeuProGlySer
151015
LeuSer
<210>332
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>332
MetAlaTrpThrProLeuPhePhePhePheLeuLeuHisCysSerSer
151015
PheSer
<210>333
<211>13
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>333
IlePheLeuPheLeuLeuSerIleThrAlaValHisCys
1510
<210>334
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>334
LysGlyGlySerCysValSerLeuPheLeuValAlaThrAlaAsnVal
151015
HisPhe
<210>335
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>335
MetAlaValLeuAlaLeuLeuPheCysLeuValThrPheProSerIle
151015
LeuSer
<210>336
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>336
MetAlaValLeuGlyLeuLeuPheCysLeuValThrPheProSerVal
151015
LeuSer
<210>337
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>337
MetAlaValLeuGlyLeuLeuLeuCysLeuValThrPheProSerVal
151015
LeuSer
<210>338
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>338
MetAlaTrpSerTrpValPheLeuPhePheLeuSerValThrThrVal
151015
HisSer
<210>339
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>339
MetAspTrpIleTrpIleMetLeuHisLeuLeuAlaAlaThrGlyIle
151015
GlnSer
<210>340
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>340
MetGluCysSerTrpValPheLeuPheLeuLeuSerLeuThrAlaVal
151015
HisCys
<210>341
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>341
MetGluPheGlyLeuSerTrpValPheLeuValAlaLeuLeuArgGly
151015
ValGlnCys
<210>342
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(6)
<223>Xaa可为任一天然存在的氨基酸
<400>342
MetGluTrpLeuXaaXaaPheLeuLeuPheLeuSerLeuThrAlaVal
151015
HisCys
<210>343
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>343
MetGluTrpSerGlyValPheIlePheLeuLeuSerValThrAlaVal
151015
HisSer
<210>344
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>344
MetGluThrProAlaSerPheLeuCysLeuLeuLeuLeuTrpThrThr
151015
<210>345
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>345
MetAlaTrpThrProLeuPhePhePhePheLeuLeuHisCysSer
151015
<210>346
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>346
MetAlaTrpThrProLeuPhePhePhePheValLeuHisCysSer
151015
<210>347
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>347
MetLysSerGlnThrGlnValPheIlePheLeuLeuLeuCysValSer
151015
AlaHisGly
<210>348
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>348
MetLysSerGlnThrGlnValPheValPheLeuLeuLeuCysValSer
151015
AlaHisGly
<210>349
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>349
MetAspMetTrpValGlnIlePheSerLeuLeuLeuIleCysValThr
151015
<210>350
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa可为任一天然存在的氨基酸
<400>350
MetXaaThrMetAspGluHisGluSerGlyAlaValThrProHisGln
151015
ValLeuLys
<210>351
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>351
MetGlyGluGlnArgIleArgSerCysHisAlaThrSerGlyAlaGlu
151015
<210>352
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>352
MetAsnLeuProValHisLeuLeuValLeuLeuLeuPheTrpIlePro
151015
<210>353
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>353
MetThrMetPheSerLeuAlaLeuLeuLeuSerLeuLeuLeuLeuCys
151015
ValSer
<210>354
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>354
MetThrMetLeuSerLeuAlaProLeuLeuSerLeuLeuLeuLeu
151015
<210>355
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>355
MetThrMetLeuSerLeuValLeuLeuLeuSerPheLeuLeuLeuCys
151015
<210>356
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>356
MetValPheThrProGlnIleLeuGlyLeuMetLeuPheTrpIleSer
151015
<210>357
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>357
MetValLeuGlyLeuLysTrpValPhePheValValPheTyrGln
151015
<210>358
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>358
MetValSerThrSerGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuPheTrpThrSer
151015
<210>359
<211>13
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>359
ProAlaGlnPheLeuPheLeuLeuValLeuTrpIleGln
1510
<210>360
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>360
IleAspIleAsnValGlnIlePheArgPheLeuLeuIleSerValThr
151015
<210>361
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>361
MetLysLeuProValLeuLeuValValLeuLeuLeuPheThrSerPro
151015
<210>362
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>362
MetLysLeuProValArgLeuLeuValLeuMetPheTrpIlePro
151015
<210>363
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>363
MetLysLeuProValArgLeuLeuValLeuMetPheTrpIlePro
151015
<210>364
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>364
MetGluLysAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>365
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>365
MetGluSerAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>366
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>366
MetGluSerAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>367
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>367
MetGluThrAspProLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>368
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>368
MetGluThrAspThrIleLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>369
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>369
MetGluThrAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>370
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>370
MetGluThrAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>371
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>371
MetGluThrAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
<210>372
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>372
MetArgPheSerAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuValLeuTrpIlePro
151015
<210>373
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>373
MetValPheThrProGlnIleLeuGlyLeuMetLeuPheTrpIleSer
151015
<210>374
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>374
MetAspSerGlnAlaGlnValLeuIleLeuLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>375
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>375
MetAspSerGlnAlaGlnValLeuMetLeuLeuLeuLeuSerValSer
151015
<210>376
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>376
MetAspSerGlnAlaGlnValLeuMetLeuLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>377
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>377
MetAspSerGlnAlaArgValLeuMetLeuLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>378
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>378
MetGluSerGlnAsnHisValLeuMetPheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>379
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>379
MetGluSerGlnThrHisValLeuMetPheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>380
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>380
MetGluSerGlnThrGlnValPheLeuSerLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>381
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>381
MetGluSerGlnThrGlnValLeuIleSerLeuLeuPheTrpValSer
151015
<210>382
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>382
MetGluSerGlnThrGlnValLeuMetSerLeuLeuPheTrpValSer
151015
<210>383
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>383
MetGluThrProAlaSerPheLeuCysLeuLeuLeuLeuTrpThrThr
151015
SerAlaVal
<210>384
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>384
GlnHisGlyHisGluGlyLeuCysSerValSerTrpValProValAla
151015
<210>385
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>385
MetMetSerProAlaGlnPheLeuPheLeuLeuValLeuTrpIleGln
151015
<210>386
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>386
MetMetSerProAlaGlnPheLeuPheLeuLeuValLeuTrpIleArg
151015
<210>387
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>387
MetMetSerProValGlnPheLeuPheLeuLeuMetLeuTrpIleGln
151015
<210>388
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>388
MetIleAlaSerAlaGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheGln
151015
<210>389
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>389
MetMetSerSerAlaGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheGln
151015
<210>390
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>390
MetMetSerSerAlaGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheGln
151015
<210>391
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>391
MetAspMetArgAlaProAlaGlnIlePheGlyPheLeuLeuLeuLeu
151015
PheGln
<210>392
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>392
MetAspMetArgValProAlaHisValPheGlyPheLeuLeuLeuTrp
151015
PhePro
<210>393
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>393
MetAspCysGlyIleSerLeuValPheLeuValLeuIleLeuLys
151015
<210>394
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>394
MetGluPheGlnThrGlnValPheValPheValLeuLeuTrpLeuSer
151015
<210>395
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>395
MetGluSerGlnIleGlnAlaPheValPheValPheLeuTrpLeuSer
151015
<210>396
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>396
MetGluSerGlnIleGlnValPheValPheValPheLeuTrpLeuSer
151015
<210>397
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>397
MetGluSerGlnThrGlnValPheValTyrMetLeuLeuTrpLeuSer
151015
<210>398
<211>20
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>398
MetGlyPheLysMetGluSerHisThrGlnAlaPheValPheAlaPhe
151015
LeuTrpLeuSer
20
<210>399
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>399
MetGluThrHisSerGlnValPheValTyrMetLeuLeuTrpLeuSer
151015
<210>400
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(6)
<223>Xaa可为任一天然存在的氨基酸
<400>400
MetGluTrpLeuXaaXaaPheLeuLeuPheLeuSerLeuThrAla
151015
<210>401
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>401
MetGluTrpSerCysIlePheLeuPheLeuLeuSerValThrAla
151015
<210>402
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>402
MetGluTrpSerGlyValPheIlePheLeuLeuSerValThrAla
151015
<210>403
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>403
MetGluTrpSerArgValPheIlePheLeuLeuSerValThrAla
151015
<210>404
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>404
MetGluTrpSerTrpValPheLeuPhePheLeuSerValThrThr
151015
<210>405
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>405
MetGluTrpSerTrpValPheLeuPheLeuLeuSerLeuThrSer
151015
<210>406
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>406
MetGlyTrpAsnTrpIlePheIleLeuIleLeuSerValThrThr
151015
<210>407
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>407
MetGlyTrpSerCysIleIlePhePheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>408
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>408
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaAsn
151015
<210>409
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>409
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThr
151015
<210>410
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>410
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>411
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>411
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>412
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>412
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>413
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>413
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValSerThrAlaThr
151015
<210>414
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>414
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuIleLeuValAlaAlaAlaThr
151015
<210>415
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>415
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuIleLeuValAlaAlaAlaThr
151015
<210>416
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>416
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaArgAlaThr
151015
<210>417
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>417
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>418
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>418
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>419
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>419
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>420
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>420
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>421
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>421
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>422
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>422
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>423
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>423
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThr
151015
<210>424
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>424
MetGlyTrpSerArgIlePheLeuPheLeuLeuSerIleThrAla
151015
<210>425
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>425
MetGlyTrpSerSerIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>426
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>426
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlySerAla
151015
<210>427
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>427
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>428
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>428
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>429
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>429
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuLeuPheLeuSerGlyThrAla
151015
<210>430
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>430
MetGlyTrpSerTrpIlePheProPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>431
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>431
MetGlyTrpSerTrpIlePheProPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>432
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>432
MetGlyTrpSerTyrIleIlePhePheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>433
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>433
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>434
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>434
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>435
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>435
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>436
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>436
MetLeuLeuGlyLeuLysTrpValPhePheValValPheTyrGln
151015
<210>437
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>437
MetArgTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>438
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>438
MetArgTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>439
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>439
MetValSerGluThrHisValLeuIlePheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
<210>440
<211>10
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>440
IlePheLeuPheLeuLeuSerIleThrAla
1510
<210>441
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>441
IleGlyTrpSerTyrIleIleLeuLeuLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>442
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>442
IleLysTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>443
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>443
IleLysTrpSerTrpIleSerLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>444
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>444
LysGlyGlySerCysValSerLeuPheLeuValAlaThrAlaAsn
151015
<210>445
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>445
MetAlaTrpSerTrpValPheLeuPhePheLeuSerValThrThr
151015
<210>446
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>446
MetGluCysSerTrpValPheLeuPheLeuLeuSerLeuThrAla
151015
<210>447
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>447
MetIleTyrSerLeuGlnLeuLeuArgMetLeuValLeuTrpIlePro
151015
IleSerLys
<210>448
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>448
MetSerTyrSerLeuGlnLeuLeuArgMetLeuValLeuTrpIlePro
151015
IleSerLys
<210>449
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>449
MetSerTyrSerLeuGlnLeuLeuArgMetLeuValLeuTrpIlePro
151015
IleThrLys
<210>450
<211>4
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>450
LeuValLeuLys
1
<210>451
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>451
MetAlaValLeuGlyLeuLeuPheCysLeuValThrPheProSer
151015
<210>452
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>452
MetAlaValLeuGlyLeuLeuLeuCysLeuValThrPheProSer
151015
<210>453
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>453
MetAspArgLeuThrSerSerPheLeuLeuLeuIleValProAla
151015
<210>454
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>454
MetGluTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>455
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>455
MetGlyArgLeuThrPheSerPheLeuLeuLeuLeuProValProAla
151015
<210>456
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>456
MetGlyTrpSerCysValLeuLeuPheLeuValSerGlyThrAla
151015
<210>457
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>457
MetGlyTrpSerTrpIlePhePhePheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>458
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>458
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPhePheLeuSerGlyThrAla
151015
<210>459
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>459
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlySerAla
151015
<210>460
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>460
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>461
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>461
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAla
151015
<210>462
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>462
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuLeuPheLeuSerGlyThrAla
151015
<210>463
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>463
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuLeuPheLeuSerGlyThrAla
151015
<210>464
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>464
MetGlyTrpSerTrpValPheLeuSerPheLeuSerGlyThrAla
151015
<210>465
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>465
MetAspPheGlnValGlnIlePheSerPheLeuLeuIleSerIleSer
151015
<210>466
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>466
MetAlaValValThrGlyLysGlyLeuProSerProLysLeuGlu
151015
<210>467
<211>15
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>467
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThr
151015
<210>468
<211>11
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>468
MetGlnLeuGlyHisLeuLeuProAspGlySer
1510
<210>469
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>469
ArgSerValProThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
<210>470
<211>4
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>470
LeuIleLeuLys
1
<210>471
<211>4
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>471
LeuValLeuLys
1
<210>472
<211>5
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>连接肽
<400>472
GlnIleTrpAsnAsn
15
<210>473
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>473
MetGluSerGlnAsnHisValLeuMetPheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>474
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>474
MetGluSerGlnThrHisValLeuMetPheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>475
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>475
MetGluSerGlnThrGlnValPheValTyrMetLeuLeuTrpLeuSer
151015
ValAspGly
<210>476
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>476
MetGluSerGlnThrGlnValLeuIleSerLeuLeuPheTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>477
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>477
MetGluSerGlnThrGlnValLeuMetPheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
AlaCysAla
<210>478
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>478
MetGluSerGlnThrGlnValLeuMetSerLeuLeuPheTrpValSer
151015
ThrCysGly
<210>479
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>479
MetGluThrAspProLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>480
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>480
MetGluThrAspThrIleLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>481
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>481
MetGluThrAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>482
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>482
MetGluThrAspThrLeuLeuLeuTrpValLeuLeuLeuTrpValPro
151015
SerThrGly
<210>483
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>483
MetGluThrHisSerGlnValPheValTyrMetLeuLeuTrpLeuSer
151015
ValGluGly
<210>484
<211>23
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>484
MetGlyPheLysMetGluSerHisThrGlnAlaPheValPheAlaPhe
151015
LeuTrpLeuSerValAspGly
20
<210>485
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>485
MetGlyValProThrGlnLeuLeuLeuLeuTrpLeuThrValArgCys
151015
<210>486
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>486
MetIleAlaSerAlaGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheGln
151015
ThrArgCys
<210>487
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>487
MetLysPheProSerGlnLeuLeuLeuPheLeuLeuPheArgIleThr
151015
IleIleCys
<210>488
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>488
MetLysPheProSerGlnLeuLeuLeuLeuLeuLeuPheGlyIlePro
151015
MetIleCys
<210>489
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>489
MetMetSerSerAlaGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheGln
151015
ThrArgCys
<210>490
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>490
MetMetSerSerAlaGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuCysPheGln
151015
ThrArgTyr
<210>491
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>491
MetAsnMetLeuThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpPheAla
151015
GlyLysCys
<210>492
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>492
MetArgCysLeuAlaGluPheLeuGlyLeuLeuValLeuTrpIlePro
151015
AlaIleGly
<210>493
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>493
MetArgCysLeuAlaGluPheLeuArgLeuLeuValLeuTrpIlePro
151015
AlaThrGly
<210>494
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>494
MetArgCysSerLeuGlnPheLeuGlyValLeuMetPheTrpIleSer
151015
ValSerGly
<210>495
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>495
MetArgPheSerAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuValLeuTrpIlePro
151015
SerThrAla
<210>496
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>496
MetArgProSerIleGlnPheLeuGlyLeuLeuLeuPheTrpLeuHis
151015
AlaGlnCys
<210>497
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>497
MetArgValLeuAlaGluLeuLeuGlyLeuLeuLeuPheCysPheLeu
151015
ValArgCys
<210>498
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>498
MetArgValLeuProGluPheLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpIleSer
151015
ValArgCys
<210>499
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>499
MetSerIleSerThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AlaArgCys
<210>500
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>500
MetSerValLeuThrGlnValLeuAlaLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AlaArgCys
<210>501
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>501
MetSerValProThrGlnLeuLeuAlaLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AlaArgCys
<210>502
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>502
MetSerValProThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AlaGlyCys
<210>503
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>503
MetSerValProThrGlnValLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
AlaArgCys
<210>504
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>504
MetValPheThrProGlnIleLeuGlyLeuMetLeuPheTrpIleSer
151015
SerThrGly
<210>505
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>505
MetValPheThrProGlnIleLeuGlyLeuMetLeuPheTrpIleSer
151015
SerArgGly
<210>506
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>506
MetValLeuGlyLeuLysTrpValPhePheValValPheTyrGlnSer
151015
ArgGly
<210>507
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>507
MetValSerThrSerGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuPheTrpThrSer
151015
SerArgGly
<210>508
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>508
ProAlaGlnPheLeuPheLeuLeuValLeuTrpIleGlnSerArgCys
151015
<210>509
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>509
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>510
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>510
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>511
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>511
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuLeuPheLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>512
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>512
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuLeuPheLeuSerGlyThrAlaVal
151015
HisSer
<210>513
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>513
MetGlyTrpSerTrpIlePheLeuLeuPheLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>514
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>514
MetGlyTrpSerTrpValPheLeuSerPheLeuSerGlyThrAlaVal
151015
LeuSer
<210>515
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>515
MetLysCysSerTrpValIlePhePheLeuMetAlaValValIleIle
151015
AsnSer
<210>516
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>516
MetLysLeuTrpLeuAsnTrpIleLeuLeuValAlaLeuLeuAsnIle
151015
GlnCys
<210>517
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>517
MetLeuLeuGlyLeuLysTrpValPhePheValValPheTyrGlnVal
151015
HisCys
<210>518
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>518
MetLeuLeuGlyLeuLysTrpValPhePheValValPheTyrGlnGly
151015
ValHisCys
<210>519
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>519
MetMetValLeuSerLeuLeuTyrLeuLeuThrAlaLeuProGlyIle
151015
LeuSer
<210>520
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>520
MetAsnPheGlyLeuSerLeuIlePheLeuValLeuIleLeuLysVal
151015
GlnCys
<210>521
<211>14
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>521
MetGlnLeuGlyHisLeuLeuProAspGlySerValAsnSer
1510
<210>522
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>522
MetValSerGluThrHisValLeuIlePheLeuLeuLeuTrpValSer
151015
ValHisCys
<210>523
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>523
ArgSerValProThrGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrpLeuThr
151015
ValAsnSer
<210>524
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>524
MetGluTrpSerGlyValPheIlePheLeuLeuSerValThrAlaVal
151015
TyrSer
<210>525
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>525
MetGluTrpSerArgValPheIlePheLeuLeuSerValThrAlaVal
151015
HisSer
<210>526
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>526
MetGluTrpSerTrpValPheLeuPhePheLeuSerValThrThrVal
151015
HisSer
<210>527
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>527
MetGluTrpSerTrpValPheLeuPheLeuLeuSerLeuThrSerVal
151015
HisSer
<210>528
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>528
MetGlyArgLeuThrPheSerPheLeuLeuLeuLeuProValProAla
151015
ValLeuSer
<210>529
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>529
MetGlyTrpSerCysIleIlePhePheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisPhe
<210>530
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>530
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaAsnVal
151015
HisSer
<210>531
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>531
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaAlaAlaThrVal
151015
HisSer
<210>532
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>532
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>533
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>533
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>534
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>534
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValSerThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>535
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>535
MctGlyTrpSerCysIleIleLeuIleLeuValAlaAlaAlaThrVal
151015
HisSer
<210>536
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>536
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuIleLeuValAlaAlaAlaThrVal
151015
HisSer
<210>537
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>537
MetGlyTrpSerCysIleIleLeuIleLeuValAlaAlaAlaThrVal
151015
GlnPhe
<210>538
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>538
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaArgAlaThrVal
151015
HisSer
<210>539
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>539
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisPhe
<210>540
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>540
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisPhe
<210>541
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>541
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>542
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>542
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>543
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>543
MetGlyTrpSerCysIleMetLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>544
<211>19
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>544
MetGlyTrpSerPheLeuProLeuPheLeuAlaAlaThrAlaThrGly
151015
ValHisSer
<210>545
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>545
MetGlyTrpSerArgIlePheLeuPheLeuLeuSerIleThrAlaVal
151015
HisCys
<210>546
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>546
MetGlyTrpSerSerIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>547
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>547
MetGlyTrpSerTrpIlePheProPheLeuLeuSerGlyThrAlaVal
151015
HisCys
<210>548
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>548
MetGlyTrpSerTyrIleIlePhePheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisPhe
<210>549
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>549
MetGlyTrpSerTyrIleIlePhePheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>550
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>550
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrGly
151015
HisSer
<210>551
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>551
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>552
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>552
MetGlyTrpSerTyrIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
AsnSer
<210>553
<211>18
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>553
MetArgTrpSerCysIleIleLeuPheLeuValAlaThrAlaThrVal
151015
HisSer
<210>554
<211>16
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头8
<400>554
GlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly
151015
<210>555
<211>26
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头9
<400>555
GlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly
151015
GlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly
2025
<210>556
<211>17
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头10
<400>556
GlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly
151015
Gly
<210>557
<211>27
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>接头11
<400>557
GlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly
151015
GlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGly
2025
<210>558
<211>38
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>插入唯一的HindIII和KasI限制性位点
<400>558
aagcttcaacaggggagagtgttgaagggagaggcgcc38
Claims (10)
1.用于在包含表达质粒的真核宿主细胞中重组产生异源多肽的方法，其特征在于
a)表达质粒在5’至3’方向包含
aa)启动子，
ab)编码为信号序列的第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列是SEQIDNO：327所示的MDTLCSTLLLLTIPSWVLS，
ac)编码第二多肽的核酸，该核酸包含
i)位于编码异源多肽的核酸5′的编码二肽QI或SEQIDNO：472所示的肽QIWNN的额外核酸，
ii)编码所述异源多肽的核酸，所述异源多肽是SEQIDNO：12所示的异源HIV衍生的多肽T-651，
iii)编码接头的核酸，
iv)编码免疫球蛋白片段的核酸，所述免疫球蛋白片段至少包含免疫球蛋白的链的恒定结构域，
ad)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区，
b)将表达质粒导入真核宿主细胞，
c)在适合表达第二多肽的条件下培养宿主细胞，
d)将第二多肽从培养基中回收。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的第二多肽包含在异源多肽后的接头并且在接头后是作为第二多肽羧基端部分的免疫球蛋白片段。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于免疫球蛋白片段获自IgG或IgE。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于真核细胞是哺乳动物细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于哺乳动物细胞是CHO细胞、NS0细胞、Sp2/0细胞、COS细胞、K562细胞、BHK细胞、PER.C6细胞或HEK细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于接头是选自SEQIDNO：06、07、08、09、10、139、140、554、555、556和557的肽或多肽。
7.根据权利要求1至6任一项中所述的方法，其特征在于免疫球蛋白片段包含a)免疫球蛋白重链的CH1-、CH2-、CH3-结构域和铰合区或免疫球蛋白轻链的CL-结构域，和b)免疫球蛋白重链可变结构域或轻链可变结构域的片段。
8.根据权利要求1至6任一项中所述的方法，其特征在于免疫球蛋白片段仅包含恒定结构域。
9.质粒，其在5’至3’方向包含
a)启动子，
b)编码为信号序列的第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列是SEQIDNO：327所示的MDTLCSTLLLLTIPSWVLS；
c)编码第二多肽的核酸，该核酸包含
i)位于编码异源多肽的核酸5′的编码二肽QI或SEQIDNO：472所示的肽QIWNN的额外核酸，
ii)编码异源多肽的核酸，所述异源多肽是SEQIDNO：12所示的异源HIV衍生的多肽T-651，
iii)编码接头的核酸，
iv)编码免疫球蛋白片段的核酸，所述免疫球蛋白片段至少包含免疫球蛋白的链的恒定结构域；
d)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区。
10.用来制备质粒的配套元件，用于在包含所述质粒的真核细胞中表达异源多肽，其在5’至3’方向包含
a)启动子，
b)编码为信号序列的第一多肽的核酸，其中所述第一多肽的氨基酸序列是SEQIDNO：327，
c)编码第二多肽的核酸，该核酸包含
i)编码SEQIDNO：472所示的肽QIWNN或其至少包含二肽QI的氨基端部分的核酸，
ii)包含至少一个限制性切割位点的克隆位点，
iii)编码选自SEQIDNO：06、07、08、09、10、139、140、554、555、556和557的接头的核酸，
iv)编码免疫球蛋白片段的核酸，所述免疫球蛋白片段至少包含免疫球蛋白的链的恒定结构域；
d)包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP05023003.6 | 2005-10-21 | ||
| EP05023003 | 2005-10-21 | ||
| EP06010665.5 | 2006-05-24 | ||
| EP06010665 | 2006-05-24 | ||
| PCT/EP2006/010067 WO2007045465A1 (en) | 2005-10-21 | 2006-10-19 | Method for the recombinant expression of a polypeptide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101292036A CN101292036A (zh) | 2008-10-22 |
| CN101292036B true CN101292036B (zh) | 2016-04-13 |
Family
ID=37734034
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200680039291.9A Active CN101292036B (zh) | 2005-10-21 | 2006-10-19 | 用于重组表达多肽的方法 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7807409B2 (zh) |
| EP (1) | EP1941043B1 (zh) |
| JP (1) | JP4860702B2 (zh) |
| KR (1) | KR101030612B1 (zh) |
| CN (1) | CN101292036B (zh) |
| AR (1) | AR056138A1 (zh) |
| AT (1) | ATE505552T1 (zh) |
| AU (1) | AU2006303440B2 (zh) |
| BR (1) | BRPI0617688A2 (zh) |
| CA (1) | CA2624893C (zh) |
| DE (1) | DE602006021335D1 (zh) |
| IL (1) | IL189420A (zh) |
| TW (1) | TW200732472A (zh) |
| WO (1) | WO2007045465A1 (zh) |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW200817438A (en) | 2006-08-17 | 2008-04-16 | Hoffmann La Roche | A conjugate of an antibody against CCR5 and an antifusogenic peptide |
| US8759297B2 (en) | 2006-08-18 | 2014-06-24 | Armagen Technologies, Inc. | Genetically encoded multifunctional compositions bidirectionally transported between peripheral blood and the cns |
| WO2009018122A2 (en) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Armagen Technologies, Inc. | Methods and compositions for increasing alpha-iduronidase activity in the cns |
| EP2214708A4 (en) * | 2007-10-26 | 2011-01-12 | Centocor Ortho Biotech Inc | VECTORS, HOST CELLS, METHODS OF PRODUCTION AND USES |
| EP2098536A1 (en) | 2008-03-05 | 2009-09-09 | 4-Antibody AG | Isolation and identification of antigen- or ligand-specific binding proteins |
| CA2766836A1 (en) | 2009-07-24 | 2011-01-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Stirrer system |
| ES2725200T3 (es) | 2009-10-09 | 2019-09-20 | Armagen Inc | Métodos y composiciones para aumentar la actividad de iduronato 2-sulfatasa en el SNC |
| KR20120091251A (ko) * | 2009-10-30 | 2012-08-17 | 아보트 러보러터리즈 | Ｓｏｒｆ 작제물 및 다중 유전자 발현 |
| SG10201912571XA (en) | 2009-11-02 | 2020-02-27 | Univ Washington | Therapeutic nuclease compositions and methods |
| TW201120210A (en) * | 2009-11-05 | 2011-06-16 | Hoffmann La Roche | Glycosylated repeat-motif-molecule conjugates |
| FR2957598B1 (fr) * | 2010-03-17 | 2015-12-04 | Lfb Biotechnologies | Nouveau peptide signal, et son utilisation pour la production de proteines recombinantes |
| WO2011135040A1 (en) | 2010-04-30 | 2011-11-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fluorescent antibody fusion protein, its production and use |
| NZ616989A (en) | 2011-04-29 | 2016-03-31 | Univ Washington | Therapeutic nuclease compositions and methods |
| JP2015502165A (ja) | 2011-12-22 | 2015-01-22 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 発現ベクター構成、新規の産生細胞生成法、およびポリペプチドの組換え産生のためのそれらの使用 |
| CN104011075B (zh) * | 2011-12-22 | 2017-06-06 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途 |
| WO2013109904A1 (en) * | 2012-01-19 | 2013-07-25 | University Of Miami | Compositions, methods and kits for treatment of cancer and autoimmune diseases |
| WO2013189516A1 (en) | 2012-06-18 | 2013-12-27 | Apeiron Biologics Ag | Method for treating a gd2 positive cancer |
| SG11201502816YA (en) * | 2012-10-12 | 2015-05-28 | Agency Science Tech & Res | Optimised heavy chain and light chain signal peptides for the production of recombinant antibody therapeutics |
| CN103773770A (zh) * | 2012-10-18 | 2014-05-07 | 高峰 | 一种可分泌的绿色荧光蛋白及其在重组蛋白高产表达细胞株筛选方面的应用 |
| WO2014102101A1 (en) * | 2012-12-31 | 2014-07-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Novel intron sequences |
| EP2938725B1 (en) | 2012-12-31 | 2017-08-23 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Heterologous intron within an immunoglobulin domain |
| EP2938726B1 (en) | 2012-12-31 | 2017-09-27 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Heterologous intron within a signal peptide |
| WO2014102104A1 (en) | 2012-12-31 | 2014-07-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Artificial introns |
| US10988745B2 (en) | 2013-10-31 | 2021-04-27 | Resolve Therapeutics, Llc | Therapeutic nuclease-albumin fusions and methods |
| US9840566B2 (en) * | 2013-11-21 | 2017-12-12 | Apeiron Biologics Ag | Preparations and methods for treating a GD2 positive cancer |
| WO2015075194A1 (en) | 2013-11-21 | 2015-05-28 | Apeiron Biologics Ag | Preparations and methods for treating a gd2 positive cancer |
| CN104928285A (zh) * | 2014-03-21 | 2015-09-23 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 载体克隆表达区基因和蛋白分泌型哺乳动物细胞表达载体 |
| CN113789339A (zh) * | 2014-07-03 | 2021-12-14 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 多肽表达系统 |
| DK3453406T3 (da) * | 2014-07-29 | 2021-07-12 | Cellectis | ROR1(NTRKR1)-specifikke kimære antigenreceptorer til cancerimmunterapi |
| EP3180422B2 (en) * | 2014-08-11 | 2021-11-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for increasing the specific production rate of eukaryotic cells |
| US10538589B2 (en) | 2015-01-14 | 2020-01-21 | Armagen Inc. | Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU |
| ES2880795T3 (es) * | 2015-03-20 | 2021-11-25 | Univ Paris | Péptidos aislados y fragmentos de los mismos a partir de fibrinógeno para la utilización como fármacos, particularmente en enfermedades inflamatorias de la piel |
| WO2020005819A1 (en) * | 2018-06-25 | 2020-01-02 | University Of Washington | De novo design of potent and selective interleukin mimetics |
| US11548938B2 (en) | 2018-08-21 | 2023-01-10 | Quidel Corporation | DbpA antibodies and uses thereof |
| CN113136400B (zh) * | 2020-01-17 | 2022-09-09 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种表达外源蛋白的cho细胞株的构建方法及其应用 |
| CN116583273A (zh) * | 2020-10-14 | 2023-08-11 | 维里迪安治疗公司 | 用于治疗甲状腺眼病的组合物和方法 |
| CN113024652A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-25 | 安徽环球基因科技有限公司 | 人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的重组表达及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0556111A1 (fr) * | 1992-02-11 | 1993-08-18 | Commissariat A L'energie Atomique | Protéines hybrides complexes, leur procédé de préparation, et leurs applications comme agent de diagnostic, comme agent à visée thérapeutique ou comme reactif utilisable en imagerie medicale |
| WO2000011033A2 (en) * | 1998-08-25 | 2000-03-02 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Expression and export of angiostatin and endostatin as immunofusins |
| WO2003016501A2 (en) * | 2001-08-21 | 2003-02-27 | Thomas Jefferson University | Recombinant antibodies, and compositions and methods for making and using the same |
| WO2004046306A2 (en) * | 2001-10-05 | 2004-06-03 | Amgen Inc. | Fully human antibody fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5010182A (en) | 1987-07-28 | 1991-04-23 | Chiron Corporation | DNA constructs containing a Kluyveromyces alpha factor leader sequence for directing secretion of heterologous polypeptides |
| AU4005289A (en) | 1988-08-25 | 1990-03-01 | Smithkline Beecham Corporation | Recombinant saccharomyces |
| US6458360B1 (en) | 1990-04-25 | 2002-10-01 | The Johns Hopkins University | Soluble complement regulatory molecules |
| WO1992008796A1 (en) | 1990-11-13 | 1992-05-29 | Immunex Corporation | Bifunctional selectable fusion genes |
| WO1994026910A1 (en) | 1993-05-12 | 1994-11-24 | Xoma Corporation | Immunotoxins comprising gelonin and an antibody |
| WO1994028143A1 (en) | 1993-05-21 | 1994-12-08 | Targeted Genetics Corporation | Bifunctional selectable fusion genes based on the cytosine deaminase (cd) gene |
| EP1835030A1 (en) | 1996-12-20 | 2007-09-19 | Amgen, Inc. | OB fusion protein compositions and methods |
| US5888809A (en) | 1997-05-01 | 1999-03-30 | Icos Corporation | Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA |
| US20030103984A1 (en) | 1998-05-04 | 2003-06-05 | Heinz Kohler | Fusion proteins of biologically active peptides and antibodies |
| CA2328076C (en) | 1998-04-15 | 2009-10-06 | Lexigen Pharmaceuticals Corporation | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by co-administration with angiogenesis inhibitor |
| MXPA02012734A (es) | 2000-06-29 | 2003-04-25 | Merck Patent Gmbh | Mejoramiento de las respuestas inmunes mediadas por la proteina de fusion anticuerpo-citocina, mediante tratamiento combinado con agentes mejoradores de la captacion de inmunocitocina. |
| DE10045591A1 (de) | 2000-09-15 | 2002-04-04 | Klaus Pfizenmaier | Ortsspezifische, antikörpervermittelte Aktivierung proapoptotischer Zytokine - AMAIZe (Antibody-Mediated Apoptosis Inducing Zytokine) |
| AU2002356824A1 (en) | 2001-10-19 | 2003-05-06 | The Scripps Research Institute | Novel methods for introducing molecules into cells and vectors and compositions for use in such methods |
| AR046071A1 (es) | 2003-07-10 | 2005-11-23 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos |
-
2006
- 2006-10-19 EP EP06806380A patent/EP1941043B1/en active Active
- 2006-10-19 CN CN200680039291.9A patent/CN101292036B/zh active Active
- 2006-10-19 CA CA2624893A patent/CA2624893C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-19 BR BRPI0617688-7A patent/BRPI0617688A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2006-10-19 AU AU2006303440A patent/AU2006303440B2/en not_active Ceased
- 2006-10-19 AT AT06806380T patent/ATE505552T1/de active
- 2006-10-19 KR KR1020087009355A patent/KR101030612B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2006-10-19 TW TW095138577A patent/TW200732472A/zh unknown
- 2006-10-19 AR ARP060104562A patent/AR056138A1/es unknown
- 2006-10-19 WO PCT/EP2006/010067 patent/WO2007045465A1/en active Application Filing
- 2006-10-19 DE DE602006021335T patent/DE602006021335D1/de active Active
- 2006-10-19 US US11/583,573 patent/US7807409B2/en active Active
- 2006-10-19 JP JP2008533956A patent/JP4860702B2/ja active Active
-
2008
- 2008-02-11 IL IL189420A patent/IL189420A/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0556111A1 (fr) * | 1992-02-11 | 1993-08-18 | Commissariat A L'energie Atomique | Protéines hybrides complexes, leur procédé de préparation, et leurs applications comme agent de diagnostic, comme agent à visée thérapeutique ou comme reactif utilisable en imagerie medicale |
| WO2000011033A2 (en) * | 1998-08-25 | 2000-03-02 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Expression and export of angiostatin and endostatin as immunofusins |
| WO2003016501A2 (en) * | 2001-08-21 | 2003-02-27 | Thomas Jefferson University | Recombinant antibodies, and compositions and methods for making and using the same |
| WO2004046306A2 (en) * | 2001-10-05 | 2004-06-03 | Amgen Inc. | Fully human antibody fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL189420A0 (en) | 2008-06-05 |
| AR056138A1 (es) | 2007-09-19 |
| EP1941043A1 (en) | 2008-07-09 |
| AU2006303440B2 (en) | 2011-09-08 |
| US7807409B2 (en) | 2010-10-05 |
| ATE505552T1 (de) | 2011-04-15 |
| IL189420A (en) | 2014-06-30 |
| US20070117185A1 (en) | 2007-05-24 |
| TW200732472A (en) | 2007-09-01 |
| KR20080049115A (ko) | 2008-06-03 |
| EP1941043B1 (en) | 2011-04-13 |
| BRPI0617688A2 (pt) | 2011-06-07 |
| CA2624893A1 (en) | 2007-04-26 |
| CA2624893C (en) | 2015-03-17 |
| DE602006021335D1 (de) | 2011-05-26 |
| JP4860702B2 (ja) | 2012-01-25 |
| KR101030612B1 (ko) | 2011-04-20 |
| WO2007045465A1 (en) | 2007-04-26 |
| AU2006303440A1 (en) | 2007-04-26 |
| CN101292036A (zh) | 2008-10-22 |
| JP2009509558A (ja) | 2009-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101292036B (zh) | 用于重组表达多肽的方法 | |
| CA2248543C (en) | Directed switch-mediated dna recombination | |
| AU734800B2 (en) | Production of a multimeric protein by cell fusion method | |
| US6677138B2 (en) | Production of a multimeric protein by cell fusion method | |
| US5733782A (en) | Methods and compositions for high protein production from non-native DNA | |
| IL300270A (en) | Anti-GPC3 antibody | |
| AU634314B2 (en) | Chimeric mouse-human a10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen | |
| US9399671B2 (en) | Method for producing proteins | |
| IE84034B1 (en) | Preparation and use of a human antibody gene bank (human antibody libraries) | |
| JP2002531103A (ja) | 組換え細胞の作成法 | |
| CA2388955A1 (en) | Recombinant fusion molecules | |
| EP3467117B1 (en) | Selection of cells expressing heteromeric polypeptides | |
| US20190031752A1 (en) | Method for Producing Antibodies | |
| ES2361188T3 (es) | Método para la expresión recombinante de un polipéptido. | |
| AU4845297A (en) | Expression system for production of therapeutic proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1125134 Country of ref document: HK |
|
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: WD Ref document number: 1125134 Country of ref document: HK |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |