CN101291664A - 组蛋白脱乙酰基酶抑制剂与放射的组合 - Google Patents

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂与放射的组合 Download PDF

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CN101291664A CNA2006800391352A CN200680039135A CN101291664A CN 101291664 A CN101291664 A CN 101291664A CN A2006800391352 A CNA2006800391352 A CN A2006800391352A CN 200680039135 A CN200680039135 A CN 200680039135A CN 101291664 A CN101291664 A CN 101291664A
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Abstract

本发明涉及式(I)的有机化合物，特别是用于增殖性疾病、尤其是实体肿瘤疾病发展的延迟或治疗的与电离放射组合使用的药物组合物。

Description

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂与放射的组合
发明领域
本发明涉及有机化合物，特别是用于增殖性疾病、尤其是实体肿瘤疾病发展的延迟或治疗的与电离放射组合使用的药物组合物。
发明概述
我们已发现某些组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，即HDAC当与电离放射组合用于增殖性疾病、特别是实体肿瘤疾病发展的延迟或治疗时是有效的。
附图详述
图1说明了使用LBH589和0-6Gy的每次处理的H460细胞系产克隆分析的平均存活分数与标准误。
图2说明了通过LBH589的HDAC抑制的细胞凋亡作用的膜联蛋白V-FITC/PI流式细胞分析结果。
图3说明了证实LBH589敏化人体肺癌细胞系的能力的由DAPI染色测定的固缩核的平均百分数和标准误。
图4说明了剪切的半胱天冬酶3和肌动蛋白的蛋白质印迹。LBH589诱导半胱天冬酶3的剪切以验证在用LBH589和放射处理的细胞中细胞凋亡的作用。
图5说明了用LBH589处理的每个治疗组的肿瘤体积(A)增加和肿瘤生长延迟(B)的倍数。
图6A说明了LBH589与IR组合处理H23细胞系的代表性照片。
图6B说明了IR后24小时存在的γ-H2AX转化灶的数量。
图7说明了用抗-HDAC4抗体和罗丹明标记的二级抗体然后用DAPI复染探查的H460细胞系的代表性照片。
发明详述
因此，本发明提供给需要这种治疗的个体用于增殖性疾病、特别是实体肿瘤疾病发展的延迟或治疗的方法，其包括给个体施用有效量的式(I)的HDAC：
Figure A20068003913500071
其中：
R1是H；卤素或直链C1-C6烷基(尤其是甲基、乙基或正-丙基，该甲基、乙基和正-丙基取代基是未取代的或者被一个或多个以下关于烷基取代基所述的取代基所取代)；
R2选自H；C1-C10烷基(优选C1-C6烷基，例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH)；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；C4-C9杂环烷基烷基；环烷基烷基(例如环丙基甲基)；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；-(CH2)nC(O)R6；-(CH2)nOC(O)R6；氨基酰基；HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；
R3和R4相同或不同并独立地是H；C1-C6烷基；酰基或酰基氨基，或者
R3和R4与它们所键合的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8；或者
R2与它所键合的氮一起和R3与它所键合的碳一起可以形成C4-C9杂环烷基；杂芳基；多杂芳基(polyheteroaryl)；非芳族多杂环(polyheterocycle)或混合的芳基和非芳基多杂环的环；
R5选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；酰基；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；芳族多环(polycycle)；非芳族多环；混合的芳基和非芳基多环；多杂芳基；非芳族多杂环以及混合的芳基和非芳基多杂环；
n、n1、n2和n3相同或不同并独立地选自0-6，当n1是1-6时，各碳原子可任选地并独立地被R3和/或R4所取代；
X和Y相同或不同并独立地选自H；卤素；C1-C4烷基如CH3和CF3；NO2；C(O)R1；OR9；SR9；CN和NR10R11；
R6选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；环烷基烷基(例如环丙基甲基)；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基、2-苯基乙烯基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；OR12和NR13R14；
R7选自OR15；SR15；S(O)R16；SO2R17；NR13R14和NR12SO2R6；
R8选自H；OR15；NR13R14；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)和杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；
R9选自C1-C4烷基例如CH3和CF3；C(O)-烷基例如C(O)CH3和C(O)CF3；
R10和R11相同或不同并独立地选自H；C1-C4烷基和-C(O)-烷基；
R12选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；C4-C9杂环烷基烷基；芳基；混合的芳基和非芳基多环；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)和杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；
R13和R14相同或不同并独立地选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；氨基酰基，或者
R13和R14与它们所键合的氮一起是C4-C9杂环烷基；杂芳基；多杂芳基；非芳族多杂环或混合的芳基和非芳基多杂环；
R15选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R16选自C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；多杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R17选自C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；芳族多环；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；多杂芳基和NR13R14；
m是选自0至6的整数；且
Z选自O；NR13；S和S(O)，
或其可药用的盐。
视情况而定，未取代的指的是没有取代基或者唯一的取代基是氢。
卤素取代基选自氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。
除非特别说明，否则烷基取代基包括直链和支链的C1-C6烷基。适宜的直链和支链C1-C6烷基取代基的实例包括甲基、乙基、正-丙基、2-丙基、正-丁基、仲-丁基、叔-丁基等。除非特别说明，否则烷基取代基既包括未取代的烷基又包括被一个或多个适宜的取代基取代的烷基，所述的适宜的取代基包括不饱和的取代基(即存在一个或多个双或三C-C键)、酰基、环烷基、卤素、氧代烷基、烷基氨基、氨基烷基、酰基氨基和OR15，例如烷氧基。烷基优选的取代基包括卤素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
除非特别说明，否则环烷基取代基包括C3-C9环烷基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。除非特别表明，否则环烷基取代基既包括未取代的环烷基又包括被一个或多个适宜的取代基取代的环烷基，所述的适宜的取代基包括C1-C6烷基、卤素、羟基、氨基烷基、氧基烷基、烷基氨基和OR15，如烷氧基。环烷基优选的取代基包括卤素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
上面对烷基和环烷基取代基的讨论也适用于其它取代基的烷基部分，例如但不限于烷氧基、烷基胺、烷基酮、芳基烷基、杂芳基烷基、烷基磺酰基和烷基酯取代基等中的烷基部分。
杂环烷基取代基包括含有1至3个选自氮、硫、氧的杂原子的3至9元脂族环如4至7元脂族环。适宜的杂环烷基取代基的实例包括吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基(piperazyl)、四氢吡喃基、吗啉代、1，3-二氮杂环庚烷、1，4-二氮杂环庚烷、1，4-氧氮杂环庚烷和1，4-氧硫杂环庚烷。除非特别说明，否则所述的环是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的适宜的取代基包括C1-C6烷基；C4-C9环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)和杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；卤素；氨基；烷基氨基和OR15，例如烷氧基。除非特别说明，否则氮杂原子是未取代的或者被H、C1-C4烷基、芳基烷基(例如苄基)和杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、酰基、氨基酰基、烷基磺酰基和芳基磺酰基取代。
环烷基烷基取代基包括式-(CH2)n5-环烷基(其中n5是1-6的数字)的化合物。适宜的环烷基烷基取代基包括环戊基甲基-、环戊基乙基、环己基甲基等。该类取代基是未取代的或者在烷基部分或在环烷基部分上被适宜的取代基取代，所述的适宜的取代基包括以上关于烷基和环烷基所列出的那些取代基。
芳基取代基包括未取代的苯基和被一个或多个适宜的取代基取代的苯基，所述的适宜的取代基包括C1-C6烷基；环烷基烷基(例如环丙基甲基)；O(CO)烷基；氧代烷基；卤素；硝基；氨基；烷基氨基；氨基烷基；烷基酮；腈；羧基烷基；烷基磺酰基；氨基磺酰基；芳基磺酰基和OR15，如烷氧基。优选的取代基包括C1-C6烷基；环烷基(例如环丙基甲基)；烷氧基；氧基烷基；卤素；硝基；氨基；烷基氨基；氨基烷基；烷基酮；腈；羧基烷基；烷基磺酰基；芳基磺酰基和氨基磺酰基。适宜的芳基的实例包括C1-C4烷基苯基、C1-C4烷氧基苯基、三氟甲基苯基、甲氧基苯基、羟基乙基苯基、二甲基氨基苯基、氨基丙基苯基、乙酯基苯基、甲磺酰基苯基和甲苯磺酰基苯基。
芳族多环包括萘基和被一个或多个适宜的取代基取代的萘基，所述的适宜的取代基包括C1-C6烷基；烷基环烷基(例如环丙基甲基)；氧基烷基；卤素；硝基；氨基；烷基氨基；氨基烷基；烷基酮；腈；羧基烷基；烷基磺酰基；芳基磺酰基；氨基磺酰基和OR15，如烷氧基。
杂芳基取代基包括具有包含一个或多个例如1至4个选自N、O和S的杂原子的5至7元芳族环的化合物。典型的杂芳基取代基包括呋喃基、噻吩基、吡咯、吡唑、三唑、噻唑、噁唑、吡啶、嘧啶、异噁唑、吡嗪等。除非特别说明，否则杂芳基取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的适宜的取代基包括烷基、以上所给出的烷基取代基和另外的杂芳基取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13所取代；尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
芳基烷基取代基包括式-(CH2)n5-芳基、-(CH2)n5-1-(CH-芳基)-(CH2)n5-芳基或-(CH2)n5-1CH(芳基)(芳基)的基团，其中芳基和n5如以上所定义。该类芳基烷基取代基包括苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、甲苯基-3-丙基、2-苯基丙基、二苯基甲基、2-二苯基乙基、5，5-二甲基-3-苯基戊基等。芳基烷基取代基是未取代的或者在烷基部分或芳基部分上或者在烷基部分和芳基部分上被以上关于烷基和芳基取代基所述的取代基所取代。
杂芳基烷基取代基包括式-(CH2)n5-杂芳基的基团，其中杂芳基和n5如以上所定义并且桥接基团连接在杂芳基部分的碳或氮上，如2-、3-或4-吡啶基甲基、咪唑基甲基、喹啉基乙基和吡咯基丁基。杂芳基取代基是未取代的或者如以上关于杂芳基和烷基取代基所讨论的那样被取代。
氨基酰基取代基包括式-C(O)-(CH2)n-C(H)(NR13R14)-(CH2)n-R5的基团，其中n、R13、R14和R5如上所述。适宜的氨基酰基取代基包括天然和非天然的氨基酸，如甘氨酰基、D-色氨酰基、L-赖氨酰基、D-或L-高丝氨酰基、4-氨基丁酰基(butyric acyl)、±-3-氨基-4-己烯酰基。
非芳族多环取代基包括其中各环可以是4-9元环且各环可含有0、1或多个双键和/或三键的二环和三环稠合环系。非芳族多环的适宜的实例包括十氢萘、八氢茚、全氢化苯并环庚烯、全氢化苯并-[f]-薁。该类取代基是未取代的或者如以上关于环烷基所讨论的那样被取代。
混合的芳基和非芳基多环取代基包括其中各环可以是4-9元环且至少一个环是芳族环的二环和三环稠合环系。混合的芳基和非芳基多环的适宜实例包括亚甲基二氧基苯基(methylenedioxyphenyl)、双-亚甲基二氧基苯基、1，2，3，4-四氢化萘、二苯并环庚烷、二氢蒽、9H-芴。该类取代基是未取代的或者被硝基取代或如以上关于环烷基所讨论的那样被取代。
多杂芳基取代基包括其中各环可以独立地是5或6元环且含有一个或多个例如1、2、3或4个选自O、N或S的杂原子从而使得该稠合环是芳族环的二环和三环稠合环系。多杂芳基环系的适宜实例包括喹啉、异喹啉、吡啶并吡嗪、吡咯并吡啶、呋喃并吡啶、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吲哚、苯并噁唑、吡咯并喹啉等。除非特别说明，否则多杂芳基取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的适宜的取代基包括烷基、以上所给出的烷基取代基和式-O-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H的取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代；尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
非芳族多杂环取代基包括其中各环可以是4-9元环、含有一个或多个例如1、2、3或4个选自O、N或S且含有0或1个或多个C-C双键或三键的二环和三环稠合环系。非芳族多杂环的适宜实例包括己糖醇、顺式-全氢化-芳庚并[b]吡啶基、十氢-苯并[f][1，4]氧氮杂
Figure A20068003913500121
基(oxazepinyl)、2，8-二氧杂二环[3.3.0]辛烷、六氢-噻吩并[3，2-b]噻吩、全氢化吡咯并[3，2-b]吡咯、全氢化萘啶、全氢化-1H-双环戊二烯并[b，e]吡喃。除非特别说明，否则非芳族多杂环取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个取代基取代，所述取代基包括烷基和以上所给出的烷基取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代；尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
混合的芳基和非芳基多杂环取代基包括其中各环可以是4-9元环、含有一个或多个选自O、N或S的杂原子且至少一个环必须是芳族的二环和三环稠合环系。混合的芳基和非芳基多杂环的适宜实例包括2，3-二氢吲哚、1，2，3，4-四氢喹啉、5，11-二氢-10H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂
Figure A20068003913500122
、5H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂
Figure A20068003913500123
、1，2-二氢吡咯并[3，4-b][1，5]苯并二氮杂
Figure A20068003913500124
、1，5-二氢-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂-4-酮、1，2，3，4，6，11-六氢-苯并[b]吡啶并[2，3-e][1，4]二氮杂
Figure A20068003913500126
-5-酮。除非特别说明，否则混合的芳基和非芳基多杂环取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的适宜的取代基包括-N-OH、＝N-OH、烷基和以上所给出的烷基取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代；尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
氨基取代基包括伯、仲和叔胺和盐形式的季胺。氨基取代基的实例包括单-和二-烷基氨基、单-和二-芳基氨基、单-和二-芳基烷基氨基、芳基-芳基烷基氨基、烷基-芳基氨基、烷基-芳基烷基氨基等。
磺酰基取代基包括烷基磺酰基和芳基磺酰基，例如甲磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基等。
酰基取代基包括式-C(O)-W、-OC(O)-W、-C(O)-O-W或-C(O)NR13R14的基团，其中W是R16、H或环烷基烷基。
酰基氨基取代基包括式-N(R12)C(O)-W、-N(R12)C(O)-O-W和-N(R12)C(O)-NHOH的取代基且R12和W如以上所定义。
R2取代基HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-是下式的基团：
Figure A20068003913500131
各取代基的优选含义如下：
R1是H、卤素或直链C1-C4烷基；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；
R3和R4相同或不同并独立地选自H和C1-C6烷基，或者
R3和R4与它们所键合的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8；
R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多杂芳基、非芳族多杂环以及混合的芳基和非芳基多杂环；
n、n1、n2和n3相同或不同并独立地选自0-6，当n1是1-6时，各碳原子是未取代的或者独立地被R3和/或R4所取代；
X和Y相同或不同并独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；
R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、烷基环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；
R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；
R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；
R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；
R10和R11相同或不同并独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；
R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；
R13和R14相同或不同并独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基酰基；
R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和NR13R14；
m是选自0至6的整数；且
Z选自O、NR13、S、S(O)，
或其可药用的盐。
有用的式(I)化合物包括其中R1、X、Y、R3和R4各自是H的那些化合物，包括其中n2和n3中一个是0且另一个是1的那些化合物，尤其是其中R2是H或-CH2-CH2-OH的那些化合物。
一类适宜的异羟肟酸盐化合物是式(Ia)的化合物：
Figure A20068003913500141
其中：
n4是0-3；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；且
R5’是杂芳基、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多杂芳基或者混合的芳基和非芳基多杂环；或其可药用的盐。
另一类适宜的异羟肟酸盐化合物是式(Ia)的化合物，
Figure A20068003913500151
其中：
n4是0-3；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；
R5’是芳基；芳基烷基；芳族多环；非芳族多环以及混合的芳基；和非芳基多环，尤其是芳基，如对-氟苯基、对-氯苯基、对-O-C1-C4-烷基苯基如对-甲氧基苯基和对-C1-C4-烷基苯基；和芳基烷基，如苄基、邻、间或对-氟苄基、邻、间或对-氯苄基、邻、间或对-单、二或三-O-C1-C4-烷基苄基如邻、间或对-甲氧基苄基、间、对-二乙氧基苄基、邻、间、对-三甲氧基苄基和邻、间或对-单、二或三C1-C4-烷基苯基如对-甲基、间，间-二乙基苯基；
或其可药用的盐。
另一个值得关注的种类是式(Ib)的化合物：
Figure A20068003913500161
其中：
R2’选自H；C1-C6烷基；C4-C6环烷基；环烷基烷基(例如环丙基甲基)；(CH2)2-4OR21，其中R21是H、甲基、乙基、丙基和异-丙基，且
R5”是未取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基，或取代的1H-吲哚-3-基如5-氟-1H-吲哚-3-基或5-甲氧基-1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基，
或其可药用的盐。
另一类值得关注的异羟肟酸盐化合物是式(Ic)的化合物：
其中：
包含Z1的环是芳族或非芳族环，其中非芳族环是饱和或不饱和的，
Z1是O、S或N-R20，
R18是H；卤素；C1-C6烷基(甲基、乙基、叔-丁基)；C3-C7环烷基；芳基，例如未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基；或杂芳基，如2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基；
R20是H；C1-C6烷基；C1-C6烷基-C3-C9环烷基(例如环丙基甲基)；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；酰基(例如乙酰基、丙酰基、苯甲酰基)或磺酰基(例如甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基)；
A1是1、2或3个取代基，其独立地是H；C1-C6烷基；-OR19；卤素；烷基氨基；氨基烷基；卤素或杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；
R19选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)和-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；
v是0、1或2；
p是0-3，且
q是1-5且r是0，或
q是0且r是1-5；
或其可药用的盐。其它可变的取代基如以上所定义。
尤其有用的式(Ic)化合物是这样的化合物，其中R2是H或-(CH2)pCH2OH，其中p是1-3，尤其是其中R1是H的那些化合物；如这样的化合物，其中R1是H且X和Y各自是H，其中q是1-3且r是0或其中q是0且r是1-3，尤其是其中Z1是N-R20的那些化合物。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选是1。
另一类值得关注的异羟肟酸盐化合物是式(Id)的化合物：
Figure A20068003913500171
其中：
Z1是O、S或N-R20；
R18是H；卤素；C1-C6烷基(甲基、乙基、叔-丁基)；C3-C7环烷基；芳基，例如未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基；或杂芳基；
R20是H；C1-C6烷基；C1-C6烷基-C3-C9环烷基(例如环丙基甲基)；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)；杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；酰基(例如乙酰基、丙酰基、苯甲酰基)或磺酰基(例如甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基)；
A1是1、2或3个取代基，其独立地是H、C1-C6烷基、-OR19或卤素；
R19选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基(例如苄基)和杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)；
p是0-3，且
q是1-5且r是0，或
q是0且r是1-5；
或其可药用的盐。其它可变的取代基如以上所定义。
尤其有用的式(Id)化合物是这样的化合物，其中R2是H或-(CH2)pCH2OH，其中p是1-3，尤其是其中R1是H的那些化合物；如这样的化合物，其中R1是H且X和Y各自是H，其中q是1-3且r是0或其中q是0且r是1-3。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选是1。
本发明还涉及式(Ie)的化合物：
Figure A20068003913500181
或其可药用的盐。可变的取代基如以上所定义。
尤其有用的式(Ie)化合物是这样的化合物，其中R18是H、氟、氯、溴、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基、C3-C7环烷基、未取代的苯基、在对位上被取代的苯基或杂芳基(例如吡啶基)环。
另一组有用的式(Ie)化合物是这样的化合物，其中R2是H或-(CH2)pCH2OH，其中p是1-3，尤其是其中R1是H的那些化合物；如这样的化合物，其中R1是H且X和Y各自是H，其中q是1-3且r是0或其中q是0且r是1-3。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选是1。在这些化合物中，p优选是1且R3和R4优选是H。
另一组有用的式(Ie)化合物是这样的化合物，其中R18是H、甲基、乙基、叔-丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基，其中所述的2-呋喃基、2-噻吩基和2-、3-或4-吡啶基取代基是未取代的或者如以上关于杂芳基环所述的那样被取代；R2是H或-(CH2)pCH2OH，其中p是1-3；尤其是这样的化合物，其中R1是H且X和Y各自是H，其中q是1-3且r是0或其中q是0且r是1-3。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选是1。
那些其中R20是H或C1-C6烷基、尤其是H的式(Ie)化合物是上述式(Ie)化合物的各亚类中的重要成员。
N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐是重要的式(Ie)化合物。
本发明还涉及式(If)的化合物：
Figure A20068003913500191
或其可药用的盐。可变的取代基如以上所定义。
有用的式(If)化合物包括这样的化合物，其中R2是H或-(CH2)pCH2OH，其中p是1-3，尤其是其中R1是H的那些化合物；如这样的化合物，其中R1是H且X和Y各自是H，其中q是1-3且r是0或其中q是0且r是1-3。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选是1。
N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐是一种重要的式(If)化合物。
以上描述的化合物常常以可药用盐形式应用。可药用盐包括，适当时，可药用碱加成盐及酸加成盐，例如金属盐，如碱及碱土金属盐、铵盐、有机胺加成盐及氨基酸加成盐及磺酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐，如盐酸盐、硫酸盐及磷酸盐；以及有机酸加成盐，如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、醋酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐及乳酸盐。金属盐的实例为碱金属盐，如锂盐、钠盐及钾盐；碱土金属盐，如镁盐及钙盐、铝盐及锌盐。铵盐的实例为铵盐及四甲基铵盐。有机胺加成盐的实例为与吗啉及哌啶形成的盐。氨基酸加成盐的实例为与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸及赖氨酸形成的盐。磺酸盐包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐及苯磺酸盐。
式(I)范围内的额外HDAI化合物及它们的合成在2002年3月21日公布的WO 02/22577中公开，将该文献在此处全部引用作为参考。在WO02/22577的范围内两个优选的化合物是式(II)的N-羟基-3-[4-[(2-羟基乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基}-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐：
Figure A20068003913500201
和式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(LBH589)或其可药用盐：
Figure A20068003913500202
另外，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐或前体药物酯，用于制备与电离放射组合使用的治疗增殖性疾病的药物的用途。
另一方面，本发明提供了式(I)的HDAC或其可药用盐或前体药物酯与电离放射组合治疗增殖性疾病特别是实体肿瘤的用途。
另一方面，本发明提供了式(I)化合物的HDAC或其可药用盐或前体药物酯，作为活性成分用于与电离放射组合治疗增殖性疾病特别是实体肿瘤的用途。
另一方面，本发明提供了包含式(I)的HDAC或其可药用盐或前体药物酯和与电离放射组合用于增殖性疾病特别是实体肿瘤的治疗的使用说明的包装。
本文使用的术语“发展的延迟”，意思是组合施用的患者的待治疗的增殖性疾病正处于早期阶段。
本文使用的术语“实体肿瘤疾病”，包括但不限于胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌和总的胃肠道癌、宫颈癌、肺癌，特别是小细胞肺癌、和非小细胞肺癌、头颈癌、膀胱癌、前列腺癌或卡波西氏肉瘤。在本发明的一个优选的实施方案中，待治疗的肿瘤疾病是胶质瘤、前列腺癌或甲状腺癌。本组合抑制了实体肿瘤亦包括液体肿瘤的生长。再者，可获得的肿瘤体积的降低取决于肿瘤类型和所用的特殊组合。本文公开的组合亦适合预防肿瘤的转移传播和微转移的生长或发展。
组合是指一定量的式(I)的HDAC的施用与一定量的电离放射的施用组合，以便获得协同作用，这种协同作用如果没有式(I)的HDAC与电离放射分开、同时或相继施用将不能获得。其中电离放射的施用可以是连续的、相继的或不定时的。或者如果没有式(I)的HDAC衍生物的分开、同时或相继施用，电离放射将不能获得这种协同作用，其中的施用可以是连续的、相继的或不定时的。
优选地，组合是指与一定量的电离放射组合施用一定量的式(I)HDAC以便具有协同的抗增殖作用和/或产克隆细胞杀死作用，如果在以下情况下则不能获得这种协同作用：
1)式(I)的HDAC未在电离放射的施用之前、同时或之后施用，其中的施用可以是连续的、相继的或不定时的；
2)电离放射的施用未在式(I)的HDAC的施用之前、同时或之后施用，其中的施用可以是连续的、相继的或不定时的。
上文和下文中的术语“电离放射”是指发生在不论电磁射线(诸如X-射线和γ-射线)或粒子(诸如α和β粒子)的电离放射。电离放射提供于放射治疗中，但不限于此，并且是本领域已知的[见Hellman，“放射治疗原理，癌症，肿瘤的原理和实践”，pp.248-275，Devita等人，第四版，第1卷(1993)]。
包括下列的组合：
(a)式(I)的HDAC，其可以游离形式或可药用盐形式和任选至少一种可药用载体存在；和
(b)电离放射，将指的是下文的本发明的组合。
增殖性疾病像实体肿瘤疾病的性质是多因素的。在某些情况下，可组合不同作用机制的药物。但是，仅考虑具有不同作用机制的药物的任意组合不必然地导致有利作用的组合。
在本发明的组合中，式(I)的HDAC和可药用盐及前体药物衍生物的组合优选地以包含相关治疗有效量的活性成分以任选地与适合施用的无机或有机、固体或液体的可药用载体一同或相混合的药物制剂的形式进行使用。
在可选择的实施方案中，电离放射作为预治疗给予，即在用本发明的组合治疗开始之前；给患者仅施用电离放射一定时间，例如，每日仅施用电离放射两天或三天或数周。
HDAC药物组合物可以是例如肠道诸如口服、直肠施用的组合物，气雾剂吸入或经鼻施用的组合物，胃肠外组合物，诸如静脉或皮下施用，或用于透皮施用的组合物(例如，被动或离子导入)，或用于局部施用的组合物。
优选地，HDAC药物组合物适于口服施用。
本发明的药物组合物可以用本身已知的方法来进行制备，并且是那些适于对包括人在内的哺乳动物(温血动物)进行肠道施用如口服或直肠施用和肠胃外施用的组合物，其可只包含至少一种治疗有效量的药理学活性的组合伴侣或同时包含一种或多种可药用的载体，尤其是适于肠道施用或肠胃外施用的载体。
该新的药物组合物包含例如约10％至约100％，优选约20％至约60％的活性成分。用于肠道施用或肠胃外施用的组合治疗的药物制剂是例如单位剂量形式的药物制剂，如糖衣片、片剂、胶囊或栓剂，以及安瓿剂。如果没有另外说明，则这些制剂都是用本身已知的方法来进行制备的，例如通过常规混合、制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥法来制备的。可以理解，因为可以通过使用多个剂量单位来获得必需的有效量，所以在各剂型的各剂量中所包含的组合伴侣的单位含量本身不需要构成有效量。
在制备口服剂型的组合物时，可以使用任何常用的药用介质，如，例如水、甘醇、油类、醇类、矫味剂、防腐剂、着色剂；或在口服固体制剂例如散剂、胶囊和片剂的情况中可以使用载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等，与液体制剂相比，优选使用固体口服制剂。因为易于施用，所以片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单位形式，在这些剂型中显然要使用固体药用载体。
具体地讲，本发明的组合中的各组合伴侣的治疗有效量可以同时施用或以任何顺序相继施用，并且各组分可以单独施用或以固定的组合施用。例如，本发明的延缓增殖性疾病的进程或对其进行治疗的方法包括：
(i)施用第一种组合伴侣；和
(ii)施用第二种组合伴侣，
其中组合伴侣以共同治疗有效量、优选以协同有效量同时进行施用或以任何顺序相继进行施用，例如以与文中所描述的量相应的日剂量或周剂量来进行施用。在治疗过程中，本发明的组合的各组合伴侣可以在不同的时间分别施用或同时进行施用。此外，术语“施用”还包括使用在体内可转化成所述组合伴侣的式(I)HDAC的前体药物。因此，本发明应理解为包含同时或交替治疗的所有这些方案并且术语“施用”也具有相应的解释。
电离放射和式(I)的HDAC的剂量彼此相关，优选地具有协同作用的比例。
如果所述的温血动物是人类，式(I)化合物的剂量优选是在每天100-1500mg范围之内的适当剂量，例如，200-1000mg/天，如200、400、500、600、800、900或1000mg/天，每天施用一或两次剂量。死亡受体配体的适当剂量及施用频率取决于待治疗适应症的性质及严重度、所需的反应、患者的状况等等因素。
式(I)化合物的施用的特别方式和剂量可由主治医师考虑患者的特点，特别是年龄、体重、生活方式、活动水平等进行选择。
式(I)HDAC的剂量可取决于各种因素，诸如活性成分作用的有效性和持续时间、电离放射的施用方式、作用的有效性和持续时间和/或待治疗个体的性别、年龄、体重和个体条件。
电离放射的剂量可取决于各种因素，诸如电离放射作用的有效性和持续时间、施用方式、施用位置、式(I)的HDAC作用的有效性和持续时间和/或待治疗的个体的性别、年龄、体重和个体的状况。电离放射的剂量通常根据放射吸收的剂量、时间和分数而定义，且必须由主治医师仔细地定义。
在本发明的一个优选的实施方案中，该组合包括电离放射和上文式(III)的羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
此外，本发明涉及治疗有增殖性疾病的温血动物的方法，包括给动物以共同治疗有效的方式施用本发明的组合对抗增殖性疾病，并且其中组合伴侣亦可以其可药用盐的形式存在。
此外，本发明涉及本发明组合用于增殖性疾病发展的延迟或治疗和用于制备增殖性疾病的发展延迟或治疗的药物的用途。
以下实施例只是解说性的，而不是以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
肿瘤模型：LLC、H450和H23细胞系是从ATTC获得的。这些细胞系在裸鼠中皮下注射入后肢后形成肿瘤。细胞经胰蛋白酶作用，并用血细胞计数器计数。细胞在完全培养基中清洗，并将106细胞皮下注射至后肢或背部皮肤皱折窗中。
蛋白质印迹：LLC、H450和H23细胞在DMEM/F-12培养基(Gibco)中血清饥饿过夜。然后将细胞用10μM化合物III处理1小时并/或用3Gy照射。将细胞用PBS清洗两次，并加入裂解液缓冲液(20nM Tris，150mMNaCl，1mM EDTA，1％Triton X-100，2.5mM Na PP，1mM苯甲磺酰氟，和1μg/mL亮肽素)。蛋白质浓度用Bio-Rad法定量。20μg的总蛋白加至每个孔中并根据所研究的靶蛋白的大小用7％或10％SDS-PAGE凝胶进行分离。将蛋白转移至硝基纤维素膜(Hybond ECL；Amersham，ArlingtonHeights，IL)上并用半胱天冬酶3、剪切的半胱天冬酶3、磷酸化-Akt、Akt、PDGFRα和β(细胞信号传导；1:1000)的第一抗体进行探查。清洗印迹并用羊抗家兔二级抗体(Sigma；1:1000)进行探查。
细胞凋亡定量：在显微镜下使用碘化丙啶染色进行LLC细胞中的细胞凋亡的形态学分析。根据它们的核浓缩、核碎裂识别凋亡的细胞。简言之，LLC细胞用3Gy和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(LBH589)(100nM)或两种成分处理。24小时后，将细胞用PBS清洗数次，用30％甲醇渗透并在PBS中用碘代丙啶染色。凋亡的和非凋亡细胞在多个随机选择的场中计数，且数据以凋亡细胞的百分数表示。使用总的和剪切的半胱天冬酶3蛋白质印迹分析鉴定细胞凋亡。
肿瘤体积的评价：LLC、H450和H23细胞被分别植入C57BL6和裸鼠。混悬于0.1ml细胞基质的106存活的细胞皮下注射至后肢中。每组小鼠由12只小鼠组成，其分成两组以使生成大约相同的平均肿瘤体积。小鼠中肿瘤平均体积在用放射、对照、已照射、LBH589单独和在照射之前给予LBH589的处理时间(0天)时约为200mm3。照射的小鼠用140μL的氯胺酮固定，且全身用铅防护，荷瘤的后肢除外。21Gy的总剂量在0-4、7和8天以7个分剂量施用。接受LBH589的LBH589组通过食管注射在第-1和6天经口施用。
治疗组
LBH589        放射
10mg/kg 5x/wk 3Gy×7
40mg/kg 1x/wk 3Gy×7
0             3Gy×7
10mg/kg 5x/wk 0
40mg/kg 1x/wk 0
0             0
12只裸鼠以上文描述的LLC相同的方式植入H450和H23细胞。在对照、已放射、LBH589和LBH589加放射中放射处理时间(0天)时小鼠中肿瘤的平均体积是200mm3。
在第0、2、4、7、9、11、14、16、18、20和22天使用皮肤测径器测定肿瘤体积。用椭圆体公式(πd3/6)衍变的公式(a×b×c/2)计算肿瘤体积。数据以原始(0天)肿瘤体积的百分数计算并以肿瘤体积分数±SD对每个处理组作图。
肿瘤组织学切片：混悬于0.1mL细胞基质中的106LLC细胞注射入C57BL6小鼠右后肢。使肿瘤生长14天的时间。三只小鼠用LBH589处理，三支小鼠为未处理的对照。处理后一小时后处死小鼠并收集肿瘤，用甲醛染色并切片。然后用磷酸化-Akt抗体(细胞信号传导1:1000)探查来自LBH589处理的小鼠和对照的切片。照我们已描述的进行TUNEL染色。
统计学分析：使用SPSS和R软件进行统计学分析以计算使用student’s t-检验的p-值和单个数据点的标准偏差。
结果：LBH589增敏了NSCLC对电离放射的细胞毒作用。使用LBH589和0-6Gy进行H460细胞系的产克隆分析。图1显示每个处理组的平均存活分数和标准误(n＝3)。将细胞混悬，用血细胞计数器计数，并以特定细胞密度铺板。一旦附着，细胞用LBH589在0、2、4或6Gy之后处理1个小时或18小时。IR之后更换基质，使细胞增殖10天。显示的是集落相对分数的均值和标准误(n＝3)。
未处理对照细胞证实了显著的抗放射性，6Gy带来存活率仅1log的降低。在IR前1小时和18小时使用LBH589与未处理细胞相比较导致集落存活协同性降低，正如从剂量响应曲线的负斜率的增加所显见的。单独用LBH589处理18小时与对照相比导致铺板效率显著降低，而单独处理1小时未降低铺板效率。这些数据显示LBH589提高了NSCLC细胞系电离放射的细胞毒作用。
LBH589提高放射诱导的细胞凋亡。为了研究LBH589对细胞凋亡的HDAC抑制的影响进行了三个体外试验。图2显示膜联蛋白V-FITC/PI的细胞凋亡的流式细胞分析结果。H23和H460细胞系用25nM LBH58处理18小时然后用3Gy照射。20小时后，收集细胞，用膜联蛋白-FITC和PI染色，并进行流式细胞分析。显示的是每个处理条件的凋亡细胞数量和标准误(n＝3)。＊与对照比较P＜0.05。
3Gy之前使用25nM LBH589与对照比较显著增加H23细胞系凋亡细胞数量从7％至30％(P＜0.001)，增加H460细胞系从6％至25％(P＝0.003)。仅使用IR或仅使用LBH589仅产生极小的增加，且组合治疗的作用比预期的加和作用更大。
为了证实LBH589敏化人体肺癌细胞系对放射诱导的细胞凋亡的能力，进行了核形态学研究。图3显示DAPI染色测定的固缩核的平均百分数和标准误。DAPI染色的细胞用LBH589和IR处理。细胞在片上传代培养并用25nM LBH589处理18小时后进行3Gy处理。18小时后细胞用DAPI固定并染色。显示的是显微镜人工计数测定的固缩核的百分数和标准误(n＝3)。＊与对照比较P＜0.05。
在3Gy之前18小时使用25nM LBH589显著增加了固缩核的百分数，H23(P＜0.001)和H460(P＝0.042)细胞系超过10％。未处理的H23和H460细胞具有少于1％的凋亡核，用3Gy处理的H23和H460细胞具有3％和2％的凋亡核，且仅用LBH589处理的H23和H460细胞分别有4％和2％凋亡的核。
分析半胱天冬酶3的剪切并验证用LBH589和放射处理的细胞的凋亡作用。对H23和H460全细胞溶解物进行蛋白质印迹分析。图4显示剪切的半胱天冬酶和肌动蛋白的蛋白质免疫印迹。LBH589诱导半胱天冬酶3的剪切。H23和H460细胞用25nM LBH589处理18小时然后用3Gy放射。六小时后，提取、定量蛋白，在12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶中运行，转移，并用抗体检验剪切的半胱天冬酶3和肌动蛋白探查。显示的是H23和H460细胞系的半胱天冬酶3、剪切的半胱天冬酶3和肌动蛋白的免疫印迹。
在用LBH589处理后，H23和H460细胞系中半胱天冬酶3剪切的增加是显著的。在IR前使用LBH589增加了H460细胞中半胱天冬酶3剪切的水平。但是，此增加不如H23细胞系中显著。
LBH589提高了体内肿瘤生长的延迟。H460细胞注入小鼠后肢。在肿瘤形成后小鼠在七天中用两个40mg LBH589口服剂量和/或五份3Gy处理。图5显示了每个治疗组肿瘤体积(A)增加的倍数和肿瘤生长延迟(B)。仅使用LBH589导致了不大的但显著的两天的肿瘤生长延迟(P＜0.001)。仅使用IR延迟了生长大约4天(P＜0.001)。组合治疗显著延迟了肿瘤生长约20天(P＜0.001)表明HDAC抑制作用改善了IR对NSCLC肿瘤生长的作用。另外，接受LBH589的小鼠在研究过程期间显示毒性极小的迹象，毒性通过体重降低和活动性进行监察。
图5B显示LBH589和电离放射在异种移植肿瘤模型中的作用。H460细胞注入裸鼠后肢，并使其生长一周。小鼠分成四组：对照、3Gy、LBH58940mg、LBH 40mg+3Gy。LBH589在IR之前1小时经口管饲施用。小鼠在头七天用两个剂量的LBH589和5份的3Gy处理。A，显示的是每个处理组(n＝5)的肿瘤体积增加的平均倍数和标准误。B，显示的是使用肿瘤体积10-倍增加作为基准计算的平均肿瘤生长延迟和标准误。
LBH589延长了放射诱导的γ-H2AX转化灶的持续时间。进行免疫染色以研究在DNA双链断裂处存在的γ-H2AX转化灶。图6A显示用LBH589和IR联合处理H23细胞系的代表性照片。γ-H2AX转化灶的红色染色和DAPI复染色的蓝色染色得到显示。处理后早在30分钟时3Gy诱导γ-H2AX转化灶。到6小时这些转化灶在仅用IR处理的细胞系中消失。仅使用LBH58920小时导致γ-H2AX转化灶的轻微增加。相比较，LBH589在IR之前18小时加入，延长了γ-H2AX转化灶持续时间高达IR后的24小时(LBH589施用后的42小时)。再者，在经历细胞凋亡的细胞中(箭头)在IR 18小时和24小时之后可见到γ-H2AX转化灶。有趣地是，在无HDAC抑制的放射处理后，无γ-H2AX转化灶存在于经历细胞凋亡的细胞中。在H460细胞系可见到相似的结果(增补图S1)。
图6B显示在IR 24小时后存在的γ-H2AX转化灶数。LBH589延长了在经照射的肺癌细胞γ-H2AX转化灶的持续时间。H23细胞系接受了25nM LBH589和/或3Gy的指定的处理。抗-γ-H2AX抗体被用于用罗丹明红标记的二级抗体(红色)的免疫染色。细胞用DAPI(蓝色)复染。显示的是H23细胞系(A)在IR后指定的时间点的代表性照片。箭头指向凋亡细胞。B，显示的是有γ-H2AX核转化灶的细胞的均值和标准误。＊与对照相比P＜0.05。仅用3Gy和仅用LBH589的处理导致γ-H2AX的快速消除(在24小时＜5％)。在IR前使用LBH589显著延迟了在两个细胞系中γ-H2AX转化灶与60％残留转化灶的消除(P＜0.001)。γ-H2AX转化灶在用LBH589和IR处理后增加的持续时间表明HDAC抑制破坏了DNA修复过程，且这种机制潜在地敏化了NSCLC对放射的细胞毒作用。
在经放射的肺癌细胞系中的HDAC4核易位。
HDAC4的免疫染色是在H23和H460细胞系上进行的以鉴别LBH589对HDAC4区室作用的影响。图7显示了用抗-HDAC4抗体和罗丹明标记的二级抗体(红色)然后用DAPI复染(蓝色)探查的H460细胞系代表性照片。未处理的细胞和仅用LBH589处理的细胞显示细胞质和细胞核中背景HDAC4染色。当H460细胞用3Gy处理时，HDAC4在2小时时定位于核，且极少的HDAC4存在于细胞质中。但是，LBH589在IR之前加入显著地限制HDAC4核定位。相似的作用见于H23细胞系中。这些结果在H460细胞系中使用抗-HDAC4抗体用于细胞质和细胞核蛋白的蛋白质印迹分析中得到证实。

Claims (10)

1.在需要这样的治疗的个体中治疗增殖性疾病的方法，其中所述的方法包括施用；
(a)式(I)的HDAC：
其中：
R1是H；卤素或直链C1-C6烷基，尤其是甲基、乙基或正-丙基，该甲基、乙基和正-丙基取代基是未取代的或者被一个或多个以下关于烷基取代基所述的取代基所取代；
R2选自H；C1-C10烷基，其优选C1-C6烷基，例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；C4-C9杂环烷基烷基；环烷基烷基例如环丙基甲基；芳基；杂芳基；芳基烷基例如苄基；杂芳基烷基例如吡啶基甲基；-(CH2)nC(O)R6；-(CH2)nOC(O)R6；氨基酰基；HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；
R3和R4相同或不同并独立地是H；C1-C6烷基；酰基或酰基氨基，或者
R3和R4与它们所键合的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8；或者
R2与它所键合的氮一起和R3与它所键合的碳一起可以形成C4-C9杂环烷基；杂芳基；多杂芳基；非芳族多杂环或混合的芳基和非芳基多杂环的环；
R5选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；酰基；芳基；杂芳基；芳基烷基例如苄基；杂芳基烷基例如吡啶基甲基；芳族多环；非芳族多环；混合的芳基和非芳基多环；多杂芳基；非芳族多杂环以及混合的芳基和非芳基多杂环；
n、n1、n2和n3相同或不同并独立地选自0-6，当n1是1-6时，各碳原子可任选地并独立地被R3和/或R4所取代；
X和Y相同或不同并独立地选自H；卤素；C1-C4烷基如CH3和CF3；NO2；C(O)R1；OR9；SR9；CN和NR10R11；
R6选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；环烷基烷基例如环丙基甲基；芳基；杂芳基；芳基烷基例如苄基和2-苯基乙烯基；杂芳基烷基例如吡啶基甲基；OR12和NR13R14；
R7选自OR15；SR15；S(O)R16；SO2R17；NR13R14和NR12SO2R6；
R8选自H；OR15；NR13R14；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基例如苄基和杂芳基烷基例如吡啶基甲基；
R9选自C1-C4烷基例如CH3和CF3；C(O)-烷基例如C(O)CH3和C(O)CF3；
R10和R11相同或不同并独立地选自H；C1-C4烷基和-C(O)-烷基；
R12选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；C4-C9杂环烷基烷基；芳基；混合的芳基和非芳基多环；杂芳基；芳基烷基例如苄基和杂芳基烷基例如吡啶基甲基；
R13和R14相同或不同并独立地选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基例如苄基；杂芳基烷基例如吡啶基甲基；氨基酰基；或者
R13和R14与它们所键合的氮一起是C4-C9杂环烷基；杂芳基；多杂芳基；非芳族多杂环或混合的芳基和非芳基多杂环；
R15选自H；C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R16选自C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；多杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R17选自C1-C6烷基；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；芳族多环；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；多杂芳基和NR13R14；
m是选自0至6的整数；且
Z选自O；NR13；S和S(O)，
或其可药用的盐，组合
(b)电离放射。
2.根据权利要求1的方法，其包括施用：
(a)式(I)的化合物，组合
(b)电离放射。
3.根据权利要求1或2的方法，其包括施用：
(a)式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺：
Figure A20068003913500041
或其可药用盐，组合
(b)电离放射。
4.根据权利要求1、2或3的方法，其中的个体是患有增殖性疾病的温血动物，包括给动物以共同治疗有效的方式施用根据权利要求1、2或3的任意项的对抗增殖性疾病的组合。
5.根据权利要求1至4的方法，其包括施用用于与电离放射组合的共同治疗有效量的对抗增殖性疾病的式(I)化合物和至少一种可药用的载体。
6.根据权利要求1、2、3、4或5在需要这类治疗的个体中延迟增殖性疾病的发展的方法。
7.根据权利要求1、2、3、4或5的用于治疗增殖性疾病的方法。
8.根据权利要求1、2或3的式(I)化合物与电离放射组合使用用于制备用于增值性疾病的延迟发展或治疗的药物的用途。
9.根据权利要求6、7或8的方法，其中所述的增殖性疾病是实体瘤。
10.包含可药用形式的式(I)化合物和与电离放射组合用于增殖性疾病的治疗的使用说明的包装。
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