CN101284820B

CN101284820B - 一种氨肽酶抑制剂及合成方法

Info

Publication number: CN101284820B
Application number: CN2008101068256A
Authority: CN
Inventors: 涂国刚; 李少华; 黄惠明; 熊芳; 李刚; 薛哲; 吴火华; 匡滨海; 麦曦
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2008-04-25
Filing date: 2008-04-25
Publication date: 2011-05-04
Anticipated expiration: 2028-04-25
Also published as: CN101284820A

Abstract

一种氨肽酶抑制剂，化学通式为：

R₁＝-H，-F，-Cl，-Br.-I，-NO₂，-CH₃，-OCH₃R₂＝H，1至5个碳原子的直链或支链烷烃或烯烃R₃＝-H，-OH，OCH3n＝0，1至3个碳原子的烷烃或烯烃。本发明还涉及到该氨肽酶抑制剂的合成方法，所设计的化合物均为小分子拟肽类化合物，合成工艺路线短，原材料易得，生产成本低。

Description

一种氨肽酶抑制剂及合成方法

技术领域

本发明涉及一种氨肽酶抑制剂及合成方法。

背景技术

氨肽酶是一系列从蛋白质多肽链氨基端催化降解氨基酸残基的水解蛋白酶，种类繁多，作用广泛。其中的氨肽酶N，(又称CD13)，因其与肿瘤生长、免疫调节和病毒感染等多方面的生理病理过程有关而倍受人们的关注。氨肽酶N能够从蛋白质多肽链的N末端降解氨基酸，从而激活体内一系列的重要生化过程。它在肿瘤细胞表面高水平表达，被称作肿瘤细胞标记物或相关抗原CD13。通过对肿瘤细胞外基底膜的降解作用，而引起肿瘤的转移。因此，氨肽酶N/CD13抑制剂对于肿瘤的诊断与治疗有重要意义。另外，氨肽酶N/CD13还能降解胸腺肽、IL等免疫活性介质引起机体免疫功能下降。所以，抑制氨肽酶的活性能有效的阻止肿瘤的侵袭和转移，氨肽酶N抑制剂的研究是寻找和开发抗肿瘤药物的新领域。

发明内容

本发明的目的是提供一种氨肽酶抑制剂及合成方法。

本发明是这样来实现的，其化学通式为：

R₁＝-H，-F，-Cl，-Br.-I，-NO₂，-CH₃，-OCH₃

R₂＝H，1至5个碳原子的直链或支链烷烃或烯烃

R₃＝-H，-OH，OCH₃

n＝0，1至3个碳原子的烷烃或烯烃。

本发明的合成方法步骤是：

(1)5-对甲苯基-2-氨基-1，3，4-噻二唑的合成：将对甲基苯甲酸、氨基硫脲、三氯氧磷置于带有回流装置的圆底烧瓶中，油浴控温75℃，搅拌回流0.5hr，冷却至室温，在圆底烧瓶中缓慢加入水，油浴控温110℃，回流4hr，反应毕，冷却，用50％NaOH调PH至8，趁热抽滤，沉淀用EtOH重结晶，干燥后得白色目的物；

(2)苯甲酰-D-丙氨酸的合成：将苯甲酸、N-羟基丁二酰亚胺溶于二氧六环中，室温缓慢加入DCC的二氧六环溶液，室温反应4hr，滤除白色沉淀，滤液加入D-丙氨酸和NaHCO₃的水溶液中，于50℃反应24hr，反应毕，冷却至室温，滤除白色沉淀，滤液真空融缩，余物用适量水溶解，并滤除不溶物，用浓HCl调PH至2，置冰箱中过夜，析出白色沉淀，过滤并用水重结晶，干燥后得白色目的物；

(3)(R)-5-对甲基苯基-N-((2-苯甲酰胺)-1-氧-丙基)-1，3，4-噻二唑-2-胺的合成：将苯甲酰-D-丙氨酸、N-羟基丁二酰亚胺溶于二氧六环中，室温反应4hr，滤除白色沉淀，滤液中加入5-对甲苯基-2-氨基-1，3，4-噻二唑，室温反应48hr，反应毕，置冰箱中过夜，滤除不溶物，滤液真空融缩，余物用适量EtOAc溶解，依次用饱和Na₂CO₃、水、0.1mol HCl、水各洗三次，收集有机相，并减压蒸除有机相，余物用MeOH溶解，缓慢加入水使析出白色沉淀，过滤，MeOH-乙腈重结晶，干燥后得白色目的物。

本发明的优点是：所设计的化合物均为小分子拟肽类化合物，合成工艺路线短，原材料易得，生产成本低。

具体实施方式

实施例：

5-对甲苯基-2-氨基-1，3，4-噻二唑的合成：

将6.8g(0.05mol)对甲基苯甲酸、4.55g(0.05mol)氨基硫脲、13ml三氯氧磷置于带有回流装置的圆底烧瓶中，油浴控温75℃，搅拌回流0.5hr，冷却至室温，在圆底烧瓶中缓慢加入55ml水，油浴控温110℃，回流4hr，反应毕，冷却，用50％NaOH调PH至8，趁热抽滤，沉淀用EtOH重结晶，干燥后得白色目的物8.6g，产率90％，熔点210-212℃。

苯甲酰-D-丙氨酸的合成：

将4.88g(0.04mol)苯甲酸、5.18g(0.045mol)N-羟基丁二酰亚胺溶于二氧六环中，室温缓慢加入DCC的二氧六环溶液，室温反应4hr，滤除白色沉淀，滤液加入4.01g(0.045mol)D-丙氨酸和3.78g(0.045mol)NaHCO₃的水溶液中，于50℃反应24hr，反应毕，冷却至室温，滤除白色沉淀，滤液真空融缩，余物用适量水溶解，并滤除不溶物，用浓HCl调PH至2，置冰箱中过夜，析出白色沉淀，过滤并用水重结晶，干燥后得白色目的物3.67g，产率47.5％，熔点142-144℃，[α]＝-5.78°(0.025g/ml甲醇溶液，室温)(R)-5-对甲基苯基-N-((2-苯甲酰胺)-1-氧-丙基)-1，3，4-噻二唑-2-胺的合成：

将1.16g(0.006mol)苯甲酰-D-丙氨酸、0.69g(0.006mol)N-羟基丁二酰亚胺溶于二氧六环中，室温反应4hr，滤除白色沉淀，滤液中加入1.0g(0.0052mol)5-对甲苯基-2-氨基-1，3，4-噻二唑，室温反应48hr，反应毕，置冰箱中过夜，滤除不溶物，滤液真空融缩，余物用适量EtOAc溶解，依次用饱和Na₂CO₃、水、0.1mol HCl、水各洗三次，收集有机相，并减压蒸除有机相，余物用MeOH溶解，缓慢加入水使析出白色沉淀，过滤，MeOH-乙腈重结晶，干燥后得白色目的物0.554g，产率29.2％，熔点181-182℃。¹H-NMR(d₆-DMSO)δppm：12.83(s，1H)，8.84-8.82(d，1H)，7.95-7.93(d，2H)，7.92-7.84(d，2H)，7.59-7.52(m，1H)，7.50-7.48(d，2H)，7.35-7.33(d，2H)，4.74-4.71(t，1H)，2.41-2.37(d，3H)，1.51-1.49(d，3H).MS(ESI)，m/z 365(MH⁺)

体外抑酶活性

原理：氨肽酶N与其底物(L-亮氨酰-P-硝基苯胺)相互作用，产生在405nm有吸收的对硝基苯胺，并且对硝基苯胺的浓度与酶活性的大小呈正相关。通过检测405nm处的吸收度确定对硝基苯胺的含量，从而确定氨肽酶的活性，间接反映出抑制剂对酶活性抑制程度的大小。

溶液的配制：缓冲液，7.5mmol的三乙醇胺溶解在900mL蒸馏水中，加1NHCl调pH至8.4，加蒸馏水定容，室温放置备用。氨肽酶N溶解在缓冲液中配成0.2mg/mL的溶液；、底物溶解在DMSO中配成0.5mg/mL溶液，各溶液冰箱放置备用。

方法：96孔板中分别加入上述氨肽酶N溶液5μl，底物5μl，不同浓度(1280μg/mL、3200μg/mL、80μg/mL、20μg/mL、5μg/mL、1.25μg/mL)的化合物40μl，7.5mmol/L的三乙醇胺缓冲液(pH8.4)补足200μl，100％组不含抑制剂，空白组不含酶，均用缓冲液补足200μl。37℃孵育0.5hr，于405nm波长处测定吸收值。按照如下公式计算抑制率：

抑制率＝(100％吸收度-化合物吸收度)/(100％吸收度-空白吸收度)根据化合物的浓度与相应的抑制率，计算得到各化合物的IC₅₀

表1.化合物的抑酶活性

Claims

1.一种氨肽酶抑制剂的合成方法，其特征是合成方法步骤为：

(1)5-对甲苯基-2-氨基-1，3，4-噻二唑的合成：将对甲基苯甲酸、氨基硫脲、三氯氧磷置于带有回流装置的圆底烧瓶中，油浴控温75℃，搅拌回流0.5hr，冷却至室温，在圆底烧瓶中缓慢加入55ml水，油浴控温110℃，回流4hr，反应毕，冷却，用50％NaOH调pH至8，趁热抽滤，沉淀用EtOH重结晶，干燥后得白色目的物；

(2)N-苯甲酰基-D-丙氨酸的合成：将苯甲酸、N-羟基丁二酰亚胺溶于二氧六环中，室温缓慢加入DCC的二氧六环溶液，室温反应4hr，滤除白色沉淀，滤液加入D-丙氨酸和NaHCO₃的水溶液中，于50℃反应24hr，反应毕，冷却至室温，滤除白色沉淀，滤液真空浓缩，余物用适量水溶解，并滤除不溶物，用浓盐酸调pH至2，置冰箱中过夜，析出白色沉淀，过滤并用水重结晶，干燥后得白色目的物；

(3)(R)-5-对甲基苯基-N-(2-苯甲酰基氨基-1-氧代丙基)-1，3，4-噻二唑-2-胺的合成：将N-苯甲酰基-D-丙氨酸、N-羟基丁二酰亚胺溶于二氧六环中，室温反应4hr，滤除白色沉淀，滤液中加入5-对甲苯基-2-氨基-1，3，4-噻二唑，室温反应48hr，反应完毕，置冰箱中过夜，滤除不溶物，滤液真空浓缩，余物用适量EtOAc溶解，依次用饱和Na₂CO₃溶液、水、0.1mol盐酸、水各洗三次，收集有机相，并减压蒸除有机相，余物用MeOH溶解，缓慢加入水使析出白色沉淀，过滤，MeOH-乙腈重结晶，干燥后得白色目的物。