CN101284812A - 他克林-阿魏酸杂联体,其制备方法及其药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及他克林与阿魏酸杂联体或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物，结构式如式(I)所示，本发明还涉及其制备方法，本发明另外还涉及式(I)化合物为活性成份的组合物，以及其化合物及组合物作为预防、治疗AChE介导的疾病的药物中的应用，特别是在制备防治阿尔茨海默氏病，及其他氧化应激参与的痴呆病的药物中的应用。

Description

他克林-阿魏酸杂联体，其制备方法及其药物组合物

【技术领域】

本发明涉及他克林-阿魏酸杂联体，其制备方法，含有它们的药物组合物，以及它们在制备胆碱酯酶(AChE)介导疾病的药物中的应用，属于医药领域。

【背景技术】

阿尔茨海默氏病(Alzheimer′s disease，AD)是一种临床表现为认知和记忆功能逐渐恶化，日常生活能力进行性减退，并且伴有各种神经精神症状和行为障碍的神经退行性疾病。其病理特征是脑区，尤以新皮质和海马区，神经细胞外出现老年斑(senile plaque，SP)，神经元内tau蛋白异常磷酸化形成神经纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFT)，以及神经突触和锥体细胞的丢失。2006年预防痴呆症国际会议上指出全世界有超过2600万AD患者，全球48％的早老性痴呆症患者在亚洲，形势非常严峻。

目前临床上治疗AD主要是基于胆碱能缺陷假说研究开发的乙酰胆碱酯酶抑制剂(acetylcholinesterase inhibitors，AChEIs)为主。该类药物作用机制是抑制胆碱酯酶(AChE)，提高脑内乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)水平。在改善患者神经精神症状方面具有明显的作用。

美国食品和药物管理局(FDA)批准上市的AChEIs有：他克林(Tacrine)，多奈哌齐(又称安理申，Donpezi，Aricept，E2020)，利伐斯的明(又称艾斯能，Rivastigmine，Exelon)，加兰他敏(Galantamine，Reminyl)。

他克林作为第一个批准治疗AD的药物，现发现存在明显的不足：(1)肝毒副作用较大，服用的患者约有25％转氨酶升高，患者服药的同时必须进行严格的转氨酶监控。(2)服用剂量偏高，后期一般要达到80mg/d甚至更高。(3)口服药次数多。目前该药已经退出了临床使用。

但对他克林衍生物的研究没有停止。根据AChE的双位点同时结合学说，科学家们采用挛药的设计方法，合成出一批他克林二联体或杂联体，以望求得效能更高，选择性更好的新型AChEIs。在Pang等报道了烷烃偶联的“他克林二联体”衍生物中，活性最强，选择性最好的为七个亚甲基(heptylene)连接的双(7)-他克林(bis(7)-tacrine，A7A)，其选择性比他克林高近1000倍，毒性低近10000倍，治疗效果约是他克林的100倍，而且A7A的合成周期短、成本低(Pang，YR，et al，J.Bio.Chem.，1996，271，23646-23649和W09721681，1997-06-19)。虽然，A7A等改进衍生物的活性和药效明显比他克林好，但其水溶性和人体耐受性差，因此A7A等改进衍生物的研究至今还停留在I期临床阶段。

Hu等设计合成出吖啶环上6位被氯取代的A7A，在抑制ACh的效能和选择性上分别是A7A(IC₅₀＝0.2nM，大鼠脑AChE)的2.9倍和1.7倍，他克林(IC₅₀＝333nM)的4757倍和1237倍(J.Med.Chem[J].2002，45(11)：2277-2282)。原因可能在于卤素吸电子效应改变了苯环上电子分布，更有利与酶的氨基酸残基发生作用。

另外一些团队则研究他克林与其它药物的偶合，如与抗氧化剂，钙离子拮抗剂，5-HT₃抑制剂，以望得到除AChE抑制作用外，抗氧化作用，或钙离子拮抗作用，或抑制5-HT₃的作用。Rosini等将他克林与硫辛酸通过一段长度的亚甲基链连接形成一系列的化合物，以达到同时具有抗氧化和AChE抑制的双重作用。Marco小组巧妙地将他克林的丫啶环与1.4-二氢吡啶结构整合得到一类杂合体，达到AChE抑制和钙拮抗双重作用。Cappelli根据上述思路将2-吡啶奎宁-4-羧酰胺部分与他克林的吖啶环通过五个亚甲基连接合成异二联体，使得具有AChE抑制和5-HT₃拮抗作用。除此之外，根据姜黄素，槲皮素等天然抗氧化剂的具有金属螯合作用，Maria等将烷烃链变换成含有羰基的链，具有络合铜、锌的作用。

【发明内容】

基于以上研究，结合作用于AD的不同靶点的药物要比单一靶点的治疗效果更好的特点，我们发明了用于预防治疗AChE介导的相关疾病的药物尤其是预防治疗阿尔茨海默氏病及其他氧化应激参与的痴呆症的药物一系列的他克林-阿魏酸杂联体。阿魏酸，来源广泛，具有抗血小板聚集、抗炎、抗氧化多种药理作用，并能阻滞β1受体、拮抗EI-1生物效应。临床上广泛使用其抗氧化作用。除此之外，阿魏酸还具有抑制Aβ肽纤维{fAβ(fibrils amyloid-beta peptide)}的形成，降低Aβ毒性，并且可使已经形成的fAβ不稳定。

本发明的化合物存在两个主要的单元：他克林部分和阿魏酸部分，它们通过适当的接头连接。一方面可以调整接头的类型和长度以同时与酶的双重位点结合，提高对AChE抑制活性和选择性，降低副作用；另一方面，同时发挥阿魏酸衍生物的抗氧化作用，提高改善AD的症状和进程，使得它们成为药物开发的候选物。我们发现变化接头和长度以及环上是否有取代基可以调节选择性和活性，除此，通过与不同的阿魏酸类衍生物得到的抗氧化作用也是不同的。

本发明涉及式(I)的化合物或其互变异构体，药用盐，前药或溶剂化物。

式(I)

其中，6位R₁＝H，Cl或F，8位R₂＝H，Cl或F；但R₁≠R₂，_Y＝NCH₃，羰基，乙二酰基，1.3-丙二酰基，对环己烷基，或-OC₂H₄O-，n＝0～3，m＝0～3。

除非另外指明，本发明的化合物还意欲包括区别仅在于存在一个或多个同位素富集的原子的化合物。例如，具有本结构的除了用氘或氚替换氢，或者用¹³C或¹⁴C-富集的碳原子替换碳原子，或¹⁵N-富集的氮以为的化合物属于本发明的范围内。

属于“药用盐，衍生物，溶剂化物，前药”是指任何药用盐，酯，溶剂化物，或经施用于接受者后能够提供(直接或间接)本文所述化合物的其他化合物。然而，应当理解非药用盐也属于本发明的范围内，因为那些可能用于制备药用盐，盐，前药和衍生物的制备可以通过本领域已知的方法进行。例如，本发明提供的化合物的药用盐可以通过常规方法由母体化合物合成，该母体化合物含有碱或酸部分。通常，该盐例如通过将游离酸或碱形式的这些化合物与化学计算量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中制备。通常，非水性介质如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇或乙腈是优选的。酸加成盐的实例包括无机酸加成盐例如，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硫酸盐，硝酸盐，和有机酸加成盐，如例如乙酸盐，马来酸盐，富马酸盐，柠檬酸盐，草酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，苹果酸盐，扁桃酸盐和对甲苯磺酸盐。碱加成盐的实例包括无机盐如例如钠，钾，钙，铵，镁，铝和锂盐；和有机碱如例如乙二胺，乙醇胺，N，N-二烷基乙醇胺，三乙醇胺，葡糖胺和碱性氨基酸盐。

优选的衍生物或前药是相对于母体物质，当将这些化合物使用于患者时提高本发明化合物的生物利用度(例如通过使得口服给药的化合物更容易被吸收到血液中)或增强母体化合物向生物区室(例如脑或淋巴系统)的传递的那些。

式(I)化合物前药的任何化合物属于本发明的范围内，术语“前药”以其最广泛的意义使用并且包括在体内转化为本发明化合物的那些衍生物。这些衍生物对于本领域技术人员是显而易见的，并且根据分子中存在的官能团，包括不限于本发明化合物的下列衍生物：酯；氨基酸酯；磷酸；金属盐硫酸；氨基甲酸酯和酰胺。

本发明的化合物可以是作为有利化合物或作为溶剂化物的晶体形式，意欲将两种形式都包括在本发明的范围内。溶剂化的方法是本领域公知的。适当的溶剂化物是药用溶剂化物。在一个具体实施方案中，溶剂化物是水合物。

9-氯四氢吖啶可以按照已经报道的方法合成(Carlier，P.R.；Chow，E.S；Han，Y et al J.Med.Chem.，1999，42，4225-4231)。有机合成的通用方法可以从例如“March’s Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，andStructure”5^th Eidition Wiley；Wiley series“Compendi μM of Organic Synthetic Methods”等。

本发明的优选化合物的结构是：6位R₁被Cl原子取代，8位R₂未被取代，Y为羰基，乙二酰基，或1.3-丙二酰基，n＝1，m＝0时结构活性均优于其他结构活性。

以下为制备本发明的化合物的方法，经过以下两步法合成：

具体制备方法是：

1)、9-氯吖啶或取代的9-氯吖啶溶解在正戊醇中，加入

加热回流后，二氯甲烷稀释，碱洗，干燥，浓缩，纯化得9-烷基氨基四氢吖啶；

2)、室温下，在N₂下向阿魏酸衍生物在无水四氢呋喃中的溶液中加入卡特缩合剂，加入相应的9-烷基氨基四氢吖啶在THF中的溶液，搅拌，过夜，浓缩，纯化得最终产物。

其中9-烷基氨基四氢吖啶的纯化优选采用硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷、甲醇、氨水的任何比例的混合液。

其中式(I)化合物的纯化优选采用硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷、甲醇的任何比例的混合液。

如果需要，可以通过常规方法如结晶法或色谱法纯化反应产物。当用于制备本发明化合物的上述方法产生立体异构体的混合物时，这些异构体可以通过常规技术如制备色谱法分离。如果存在手性中心，化合物可能以外消旋形式制备，或者可以通过对映特异性合成或通过拆分来制备单个的对映异构体。

一种优选的药用形式是结晶形式，包括药物组合物中的这种形式。如果是盐和溶剂化物，另外的离子或溶剂部分也应当是非毒性的。

本发明另外提供以式(I)化合物为活性成份的药物组合物，其包含本发明的化合物或其互变异构体、药用盐、前药或溶剂化物，以及药用载体，辅剂，或赋形剂。

本发明的化合物可以与其它药物一起制备成组合物。例如和雪花胺及其盐，制备成复方药物。

由上述结构式(I)表示的化合物或其互变异构体、药用盐、前药或溶剂化物显示优越的乙酰胆碱酯酶抑制作用。因此，本发明另一方面涉及它们以及以它们为活性成份的药物组合物，在治疗、改善或预防AChE介导的相关疾病的药物的用途，该药物可以用来治疗、改善或预防：认知障碍如老年性痴呆，脑血管痴呆，轻度认知损伤，注意缺损障碍，和/或带有异常蛋白聚集的神经变性痴呆症，特别是阿尔茨海默氏病或病症，及其他氧化应激参与的痴呆症老年痴呆症。

上文所述药学上可接受的载体、辅剂或赋形剂，是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂，赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以以组合物中加入其他辅料如香味剂、甜味剂等。

本发明-阿魏酸杂联体或其互变异物体、药用盐类、前药或溶剂化物可以给患有老年痴呆症病的病人口服或行皮下或静脉注射，或用植入体内的方法给药，因此可以制备成常规的口服制剂、注射剂。

所述他克林衍生物及其药物学上可接受的盐在室温下一般是略溶于水的。因此，可以把它配制成一种水溶液或悬浮液剂型。

所述他克林衍生物及其药物学上可接受的盐类也可以液体或固形剂型来口服，例如水性悬浮液，乙醇溶液，片剂或胶囊。

如果需要，也可以将其制成缓释剂型/控释剂型，其在一端时间内能释放活性成分并因此使在病人体内所述他克林衍生物或其药物学上可接受的盐的浓度保持在一个可控制水平。所述缓释剂型/控释剂型可以采用通常的制药技术来制备。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物含有重量比为0.1％～99.5％的活性成分，优选含有重量比为0.5％～95％的活性成分。

本发明的化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优先0.1～5mg/kg体重。可以一次或多次使用。

【具体实施方式】

以上已经描述了用于制备本发明化合物的通用方法。提供下列实施例进一步举例说明本发明，而不是对本发明范围的限定。

实施例1：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸-{N-(2-[2-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-乙基]-甲基-氨基]}-酰胺。

试剂：阿魏酸(170mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(770mg，17mmol)，和{N-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-N’-甲基}-1.2-双乙二胺(200mg，6.7mmol)。

方法：取阿魏酸溶于无水THF中，加入三乙胺，室温搅拌，之后滴加BOP，最后加入{N-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-N’-甲基}-1.2-双乙二胺，室温搅拌过夜。浓缩后，直接硅胶柱层析分离，洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝11∶3。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。白色固体，产率：110mg(35％)

¹H核磁共振结果为：

¹HNMR(DMSO，400MHz，δppm)：9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，2H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，6H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.75-1.31(m，4H)。

¹³C核三磁共振结果为：

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ168.8，161.4，158.3，，150.1，151.2，148.2，144.5，143.3，136.8，130.5，127.2，126.7，123.3，123.0，122.6，120.7，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，35.5，31.3，29.4，24.5，24.2，21.9；MS(ESI)m/z 476([M+H]+)。

实施例2：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸-{N-(2-[2-(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-乙基]-甲基-氨基]}-酰胺。

试剂：阿魏酸(170mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(770mg，17mmol)，和{N-(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-N’-甲基}-1.2-双乙二胺(200mg，6.0mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用二氯甲烷：甲醇DCM/MeOH(12∶1)。白色固体，产率：106mg(34％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MHz，δppm)：9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，6H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.75-1.31(m，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ168.8，161.4，158.3，，150.1，151.2，148.2，144.5，143.3，136.8，130.5，127.2，126.7，123.3，123.0，122.6，120.7，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，35.5，31.3，29.4，24.5，24.2，21.9；MS(ESI)m/z 512([M+H]+)。

实施例3：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸-{N-[(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-戊基-3-酮]}-酰胺

试剂：阿魏酸(170mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(770mg，17mmol)，和{N-[(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-3-酮]}-戊二胺(200mg，6.1mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。黄色固体，产率：105mg(30％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MHz，δppm)：9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，2H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，3H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.60-1.41(m，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ210.8，168.8，161.4，158.3，，150.1，151.2，148.2，144.5，143.3，136.8，130.5，127.2，126.7，123.3，123.0，122.6，120.7，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，35.5，31.3，29.4，24.5，24.2，21.9；MS(ESI)m/z 475([M+H]+)。

实施例4：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸-{N-[(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-戊基-3-酮]}-酰胺

试剂：阿魏酸(170mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(770mg，17mmol)，和{N-[(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-3-酮]}-戊二胺(200mg，5.5mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。黄色固体，产率：101mg(28％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MHz，δppm)：9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，6H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.65-1.45(m，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ210.8，168.8，161.4，158.3，，150.1，151.2，148.2，144.5，143.3，136.8，130.5，127.2，126.7，123.3，123.0，122.6，120.7，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，35.5，31.3，29.4，24.5，24.2，21.9；MS(ESI)m/z 510([M+H]+)。

实施例5：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸{N-[(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-1.4-二甲胺基-环己烷基]}-酰胺。

试剂：阿魏酸(170mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(770mg，17mmol)，和{N-[(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-1.4-二甲胺基]}-环己烷(200mg，6.7mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。油状物，产率：95mg(40％)。

¹HNMR(DMSO，400MHz，δppm)：9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，2H)，7.80(d，1H)，7.78-7.77(d，1H)，7.60-7.56(d，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，3H)，3.55-3.50(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.65(2br，4H)，1.41(sbr 4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ165.8，161.4，158.3，，150.1，151.2，148.2，144.5，143.3，136.8，130.5，127.2，126.7，123.3，123.0，122.6，120.7，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，39.1，38.2，30.6，30.4，30.2，30.1，29.4，24.5，24.2，21.9；MS(ESI)m/z 501([M+H]+)。

实施例6：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸{N-[(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-1.4-二乙胺基-环己烷基]}-酰胺。

试剂：阿魏酸(170mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(770mg，17mmol)，和{N-[(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-1.4-二甲胺基]}-环己烷(200mg，6.3mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。油状物，产率：120mg(25％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MHz，δppm)：9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(d，1H)，7.78-7.77(d，1H)，7.60-7.56(d，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，3H)，3.55-3.50(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.65(2br，4H)，1.41(sbr 4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ165.8，161.4，158.3，，150.1，151.2，148.2，144.5，143.3，136.8，130.5，127.2，126.7，123.3，123.0，122.6，120.7，118.2，117.6，115.8，56.1，45.2，39.1，38.2，30.6，30.4，30.2，30.1，29.4，24.5，24.2，21.9；MS(ESI)m/z 536([M+H]+)。

实施例7：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸{N-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-2.2’-(乙基-1.2-双二氧-乙基)-氨基})-酰胺。

试剂：阿魏酸(160mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(740mg，17mmol)，和N-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-2.2’-(乙基-1.2-双二氧-乙基)-己二氨(200mg，6.0mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。油状物，产率：115mg(40％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MH，dppm)：9.40(s，1H)，7.90-7.84(m，2H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.83(s，3H)，3.70-3.64(m，4H)3.16-3.11(m，4H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.70-1.40(m，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ171.8，161.4，155.3，，152.1，151.2，150.2，144.8，142.3，134.8，130.5，127.1，126.5，123.6，121.1，120.7，120.6，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，43.1，40.0，36.4，33.7，30.1，22.8，22.6，21.4；MS (ESI)m/z 507([M+H]+)。

实施例8：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸{N-(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-2.2’-(乙基-1.2-双二氧-乙基)-氨基})-酰胺。

试剂：阿魏酸(160mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(740mg，17mmol)，和N-(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-2.2’-(乙基-1.2-双二氧-乙基)-己二氨(200mg，5.7mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。油状物，产率：120mg(40％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MH，dppm)：9.40(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.83(s，3H)，3.70-3.64(m，4H)3.16-3.11(m，4H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.70-1.40(m，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ171.8，161.4，155.3，，152.1，151.2，150.2，144.8，142.3，134.8，130.5，127.1，126.5，123.6，121.1，120.7，120.6，118.2，117.6，115.8，57.1，48.2，43.1，40.0，36.4，33.7，30.1，22.8，22.6，21.4；MS(ES I)m/z 543([M+H]+)。

实施例9：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸-{N-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-甲基}-乙二酰胺

试剂：阿魏酸(160mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(740mg，17mmol)，和N-(1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-甲基}-乙二酰胺(200mg，6.4mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。黄色固体，产率：105mg(40％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MH，dppm)：9.40(s，1H)，8.0(s，3H)，7.90-7.84(m，2H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.83(s，3H)，3.70-3.64(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ171.8，162.7，161.4，159.6，155.3，，152.1，151.2，150.2，144.8，142.3，134.8，130.5，127.1，126.5，123.6，121.1，120.7，120.6，118.2，117.6，115.8，57.1，30.1，22.8，22.6，21.4；MS(ESI)m/z 491([M+H]+)。

实施例10：

3-甲氧基-4-羟基-阿魏酸-{N-(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-甲基}-乙二酰胺。

试剂：阿魏酸(160mg，8.3mmol)，无水THF(35ml)，BOP(740mg，17mmol)，和N-(6-氯-1，2，3，4-四氢-吖啶-9-胺基)-甲基}-乙二酰胺(200mg，5.8mmol)。

纯化：硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(12∶1)。黄色固体，产率：110mg(40％)。

除试剂、纯化柱不同外，其余制备纯化步骤同实施例1。

¹HNMR(DMSO，400MH，dppm)：9.40(s，1H)，8.0(s，3H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.83(s，3H)，3.70-3.64(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)。

¹³C NMR(DMSO，100MHz，δppm)：δ171.8，162.7，161.4，159.6，155.3，，152.1，151.2，150.2，144.8，142.3，134.8，130.5，127.1，126.5，123.6，121.1，120.7，120.6，118.2，117.6，115.8，57.1，30.1，22.8，22.6，21.4；MS (ESI)m/z 526([M+H]+)。

实施例11：制剂实施例

安瓿剂：活性成分   2mg

        氯化钠     9mg

制备方法：将活性成分(即本发明的化合物)和氯化钠溶解于适量的注射用水中，过滤所得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。

本发明的其余制剂同样采用药学制剂领域的常规处方、按常规生产方法制备。

实施例12：生物学评估

乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制试验

Ellman(Ellman，G.L.；Courtney，K.D.；Andres，B.；Featherstone，R.M.Biochem.Pharmacol.1961，7，88-95)报道的比色法在30℃评估AChE抑制活性，测试溶液由以下各项组成：0.1M磷酸盐缓冲液pH8，0.3mM5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman’s试剂)，0.02单位AChE(Sigma Chemical Co.，来源于牛红细胞)，和0.5mM乙酰硫代胆碱碘化物作为酶促反应的底物。将检测的化合物加入测定溶液中并与酶在30℃下预温育5分钟。该时间后，加入底物。用微板读数器Digiscan 340T记录在405mm处的吸光度变化5分钟，比较反应速率，计算由于测试化合物的存在导致的百分比抑制。用至少一式三份的测量值计算分应速率，计算相对于不含化合物的对照，由于测试化合物的存在导致的百分比抑制。测定产生50％的AChE抑制的化合物浓度(IC₅₀)。结果在表1中显示，IC₅₀越小反映抑制AChE活性越强。

实施例13：生物学评估

丁酰胆碱酯酶(BuChE)抑制试验

通过Ellman报道的比色法在30℃评估BuChE抑制活性。测定溶液由以下各项组成：0.01单位来源于人血清的BuChE，0.1M磷酸钠缓冲液pH8，0.3mM5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman’s试剂)，和0.5mM乙酰硫代胆碱碘化物作为酶促反应的底物。用微板读数器Digiscan 340T测量5分钟期间内在405nm下的吸光度，测定酶活性。将测试的化合物与酶在30℃下预温育10分钟。用至少一式三份的测量值计算分应速率。将IC₅₀定义为相对于没有抑制剂下将酶活性降低50％的每种化合物的浓度。结果在表1中显示，IC₅₀越小反映抑制AChE活性越强。

实施例14：生物学评估

有机自由基(DPPH)消除能力的测定

参考Larrauri和Yokozawa等的方法进行修改.利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰，以分光光度法测定加抗氧化剂后，吸光度517nm吸收的下降表示其对有机自由基消除能力.在反应管中加入2ml 0.2mmol/L DPPH的乙醇溶液，再加入2ml的目标化合物终浓度为(5.0，15.0，25.0和50.0μM)，混合均匀，黑暗下室温避光反应30min后在517nm处读取吸光度为实验组，同时以2mlDPPH+2ml缓冲溶液混合后的吸光度为对照组，2ml双蒸水+2ml乙醇混合后的吸光度为正常组，计算清除率(％)＝[1-(化合物组A517-正常组A517)/对照组A517]×100％。EC₅₀表示清除DPPH50％的药物浓度。结果在表1显示，EC₅₀越小反映DPPH清除能力越强。

实施例15：生物学评估

抑制AChE诱导Aβ聚集作用试验

于冻干的2mg/mL六氟异丙醇(HFIP)取Aβ(1-40)(β-淀粉样多肽1-40)2uL，溶解在DMSO，终浓度为230μM，室温下在磷酸缓冲液PBS孵育24h(PH＝8.0)。共同孵育实验，AChE(2.30μM，Aβ/AChE100/1)和AChE待测药物(100μM)，IC50检测，抑制剂的五个不同浓度测试。Aβ，AChE，Aβ加待测药物，AChE加待测化合物。每个测试管最终体积20uL。使用硫磺素T(thioflavin T)荧光检测方法定量测试淀粉样蛋白纤维形成。因此，在孵育之后，样品用包含硫磺素T的甘氨酸-NaOH缓冲液稀释至2mL。采用300秒的荧光强度扫描((λexc＝446nm；λem＝490nm)，在减去背景1.5μM硫磺素T荧光后算每组平均值。结果见表1，抑制率越高反映抑制Aβ聚集的能力越强：

表1、各实施例化合物AchE、BuhE、EC₅₀、Aβ聚集抑制率结果表

结果表明，实施例1-10具有优于或至少与他克林相当的乙酰胆碱酯酶抑制作用。

实施例16：生物学评估：

金属络合能力检测：

该方法学主要参照“Baum，L.；Ng，A.Curcumin interaction with copperand iron suggests one possible mechanism of action in Alzheimer’s diseaseanimal models.J.Alzheimer’s Dis.2004，6，367 377(discussion，443369)”利用分光光度计测量方法检测待测化合物与铜离子和亚铁离子的形成络合物的稳定性，在通过Scatchard分析得到稳定常数K_f，络合时的Gibbs能。其结果见附表2，logKf越大显示络合金属离子能力的越强，而他克林则无金属络合作用：

表2、各实施例化合物Cu²⁺、Fe²⁺物络合能力结果表

实施例17：生物学评估：

肝毒性研究：

取成年雌性SD大鼠(购于中山大学实验动物中心)，按25℃，12h黑白夜，合适湿度饲养。盐酸他克林(购买于SIGMA)溶解在PBS中(PH7.4)，按1.5mg/100g(5.93μmol/100g)腹膜内给药。待测化合物3溶解在酸性的盐水中，按和他克林等摩尔量腹腔给药。在给药后12，20，36小时从眼后静脉丛收集肝素化血清用常规方法检测ASAT，LDH水平和白蛋白浓度(肝损失的三个指标)。在给药后20小时和36小时处死他克林组和待测化合物3组大鼠，取出肝脏根据Biuret检测组织蛋白浓度，再与未给药的空白组比较。其结果见附表3，其值越大反映抑制酶的活性越低：

表3、各实施例化合物肝毒性试验结果表

尽管以上的描述具有许多特性，但其只是本发明的一些优选的实施方案，并非用于限制本发明的范围。

Claims (10)

1、 下述式(I)的化合物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物：

式(I)

其中，R₁＝H，Cl或F；R₂＝H，Cl或F；但R₁≠R₂；

Y＝NCH₃，羰基，乙二酰基，1.3-丙二酰基，对环己烷基，或-OC₂H₄O-，n＝0～3，m＝0～3。

2、 根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物，其特征在于R₁＝Cl，R₂＝H，Y＝羰基，乙二酰基，或1.3-丙二酰基，n＝1，m＝0。

3、 一种药物组合物，包括如权利要求1所述的化合物或其药用盐类、前药或溶剂化物，以及药用载体、辅剂或赋形剂。

4、 权利要求1所述的化合物的制备方法，包括以下两个步骤：

1)、9-氯吖啶或取代的9-氯吖啶溶解在正戊醇中，加入加热回流后，二氯甲烷稀释，碱洗，干燥，浓缩，纯化得9-烷基氨基四氢吖啶；

2)、室温下，在N₂下向阿魏酸衍生物在无水四氢呋喃中的溶液中加入卡特缩合剂，加入相应的9-烷基氨基四氢吖啶在THF中的溶液，搅拌，过夜，浓缩，纯化得最终产物。

5、 根据权利要求4所述的化合物的制备方法，其特征在于9-烷基氨基四氢吖啶的纯化采用硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷、甲醇、氨水的任何比例的混合液。

6、 根据权利要求4所述的化合物的制备方法，其特征在于所述的化合物的纯化采用硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷、甲醇的任何比例的混合液。

7、 权利要求1～2中任意一项的化合物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物在制备预防、治疗AChE介导的疾病药物中的应用。

8、 根据权利要求7所述的化合物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物在制备预防、治疗AChE介导的疾病的药物中的应用，其特征在于所说的AChE介导的疾病为阿尔茨海默氏病或其他氧化应激参与的痴呆症。

9、 权利要求3所述的组合物在制备预防、治疗AChE介导的疾病药物中的应用。

10、 根据权利要求9所述的组合物在制备预防、治疗AChE介导的疾病的药物中的应用，其特征在于所说的AChE介导的疾病为阿尔茨海默氏病或其他氧化应激参与的痴呆症。