CN101261212B - 一种定量鉴别真假百合粉的方法 - Google Patents

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一种定量鉴别真假百合粉的方法，它是采用瑞士染液对百合及掺假淀粉染色，在普通显微镜下清楚的观测到淀粉颗粒形貌显微特征的差别，进而准确地定性鉴别百合和掺假淀粉种类；采用随机连续抽样方式，用图像分析软件和统计学方法测定并计算百合及掺假粉颗粒的体积和颗粒数目，密度瓶法测出颗粒的密度，根据质量比计算出百合粉的掺假率，可定量得到百合粉掺假率的量化指标的一种方法。此方法对试验条件要求低，操作简单、快速、廉价，结果准确。

Description

一种定量鉴别真假百合粉的方法
技术领域
本发明涉及一种真假百合粉的鉴定方法，特别涉及一种定量鉴别真假百合粉的方法。
背景技术
百合是我国传统的名贵食品，是首批卫生部认可的药食两用植物，被誉为蔬菜人参，具有养阴润肺、清心安神等保健功效。百合粉为百合的干燥肉质鳞叶淀粉，由于其出粉率又低，药食价值高，所以百合粉的价格比较高。近年来有一些不法商家在纯的百合粉中掺入一些廉价的淀粉(如马铃薯粉、木薯粉、红薯粉等)或直接用其他淀粉冒充百合粉出售，严重损害消费者的利益。目前国内外对于掺假淀粉的鉴别的较为准确的方法主要是通过观测、比较它们的显微结构，再与标准品对照，这种方法要求用到扫描电镜等高级显微镜，样品要制成金镀膜，对设备要求高，操作复杂，成本昂贵，只能适用于高级实验室。也有采用普通显微镜观察的，但由于淀粉颗粒有一定立体厚度且颗粒不透明，在普通显微镜下淀粉的颗粒表面特征不清晰，而影响结果的定性判断。对于廉价淀粉掺杂百合粉的掺假鉴别及掺假率的定量测定，目前未见有方法报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种定量鉴别真假百合粉的方法，它采用瑞士染液对百合及掺假淀粉染色，在普通显微镜下清楚的观测到它们的淀粉颗粒形貌特征的差别，进而准确地定性鉴别百合和掺假淀粉；采用随机连续抽样地方式，用图像分析软件和统计学方法测定并计算百合及掺假粉颗粒的体积和颗粒数目，密度瓶法测出颗粒的密度，根据质量比计算出百合粉的掺假率，可定量得到百合粉掺假率的量化指标的一种方法。该方法对试验条件要求低，操作简单、快速、廉价，结果准确。
本发明是这样来实现的，其操作步骤为：
1.显微镜鉴别
(1)分别称取0.1～2克各种纯淀粉和被测淀粉于烧杯中，加入20～500倍的水，搅拌均匀；
(2)用移液器移取1～1000μl淀粉混合液于载玻片上，滴加淀粉混合液体积0.1～2倍体积的瑞士染液混匀，制成0.5～3cm2大小的涂片后晾干；
(3)将干燥的涂片于普通显微镜下，放大100～400倍，对淀粉颗粒大小、形貌以及对染料的吸附性等特征进行观察和测量，建立各种纯淀粉颗粒的形貌特征图谱；
(4)通过将被测百合淀粉颗粒的形貌特征与各种纯淀粉的形貌特征图谱比对，定性的鉴定出真假百合粉颗粒。
2.掺假率测定
(1)密度的测定：  按照粉末状固体密度的测定方法测定不同纯淀粉的密度。每种淀粉颗粒用比重瓶法测量5～100次计算各粉的密度，取平均值。
(2)体积测量：按照方法1.制成被测淀粉颗粒涂片。放大100～400倍，在显微镜下观察涂片并以随机的方式在不同位置拍摄5～100张连续的显微图片。通过与纯粉颗粒图谱比对辨别不同的淀粉颗粒，用DT2000图像分析软件统计各粉的粒径和数量。
(3)根据测出的淀粉颗粒的密度、粒径和数量，根据淀粉颗粒的体积外形近似圆或椭圆，采用相应的体积公式计算出各颗粒的体积和质量，通过质量比可得出掺假率。
本发明的积极效果是：本方法是将淀粉颗粒经瑞士染液染色后，大大的提高了显微观察淀粉颗粒形貌特征的清晰度，使得在普通的显微镜下能够清楚地观察到不同淀粉颗粒的形貌特征的明显区别，通过将不同淀粉颗粒的形貌特征的比对鉴别真假百合粉。通过本方法建立的不同纯淀粉的颗粒形貌特征图谱，可以为定性的鉴别不同的淀粉颗粒提供基础数据。本方法操作简单，结果客观明显，只需要普通生物显微镜等简单的实验条件就能快速而准确的鉴别出真假百合粉，适用性广，检测成本低。本分明采用DT2000图像分析软件，用质量比计算掺假率，首次使掺假率可以有量化的指标，通过对结果进行配对t检验，结果证明测得掺假率与实际掺假率无显著性差异(p＞0.05)，此方法也可以作为测定其它廉价粉掺假贵重粉的掺假率测定的重要参考方法。
具体实施方式
实施例一：以纯百合粉、纯马铃薯粉、纯木薯粉以及百合粉中掺杂马铃薯粉，百合粉中掺杂木薯粉为例，鉴别不同淀粉颗粒及计算掺假率，其操作步骤为：
1.显微镜鉴别，步骤包括：
(1)分别称取1克百合纯粉(木薯纯粉、马铃薯粉)或0.5g百合粉+0.5g马铃薯(木薯)粉于烧杯中(淀粉均为过300目筛淀粉)，加入50克水，搅拌均匀；(2)用移液器移取10μl于载玻片上，滴加5μl瑞士染液混匀，制成约1cm2大小的涂片后晾干。(3)将干燥的涂片于普通显微镜下，放大100～400倍，对淀粉颗粒大小、形貌特征进行观察和测量。(4)通过将被测百合淀粉颗粒的形貌特征与各种纯淀粉的形貌特征图谱比对，定性的鉴定出真假百合粉颗粒。
2.掺假率测定
(1)密度的测定：按照粉末状固体密度的测定方法测定百合粉，木薯粉，马铃薯粉的密度。每种淀粉颗粒用比重瓶法测量十次计算各粉的密度，取平均值。
(2)体积测量：称取一定比率的百合粉和马铃薯粉，按照上面的方法制成涂片。放大100倍，在显微镜下观察涂片并以随机的方式按照从左至右的顺序拍摄20张连续的显微图片。用1.的方法辨别百合粉和马铃薯粉(或木薯粉)颗粒，用DT2000图像分析软件统计各粉的粒径和数量。
3.显微镜鉴别结果：
将制成的图片在显微镜下放大100倍和400倍观察淀粉颗粒的形貌特征。
表1.百合粉和常见掺假淀粉的形貌特征
Figure G200810046743701D00041
不同种类植物的淀粉颗粒形貌、大小、等物理性质均不同，建立了不同淀粉颗粒的显微特征图谱之后，可采用比较不同淀粉颗粒的显微形貌特征的方法鉴定淀粉的是否为纯粉，还可以鉴别淀粉的种类，这种方法可作为掺假百合粉的重要鉴别方法。
在电镜下能较清楚看到颗粒的形貌特征，但是样品需要制成金镀膜，操作复杂成本高，适用性受试验条件的限制；在普通显微镜下，分辨率受到影响，仅能从颗粒的大小以及大致的形状等特征进行感官辨别，容易受到主观因素的影响，对鉴定结果带来误差。本实验通过瑞士染液对各淀粉颗粒进行染色涂片，使得淀粉颗粒的表面特征在普通显微镜下也能清晰、明显地表现出来，能够通过比对不同的淀粉颗粒的显微形貌特征，很直观准确的鉴别不同淀粉颗粒种类。此方法操作简单，结果准确明显，在拥有普通生物显微镜等简单的实验条件下就能快速而准确的鉴别出百合粉的掺假情况。
4.掺假率的定量计算结果
百合及掺假粉体密度测量结果：ρ百合＝1.482；ρ马铃薯＝1.482；ρ木薯＝1.482
根据测出的密度、粒径，计算出各颗粒的体积和质量，通过质量比例可得出掺假率。体积和密度测量结果见表2，掺假率结果及分析见表3。
表2.百合及掺假粉体积和质量测量结果
Figure G200810046743701D00051
Figure G200810046743701D00061
注：N1-百合颗粒总数；N2-马铃薯或木薯颗粒总数；∑V1-百合总体积(μm3)；∑V2-马铃薯或木薯总体积(μm3)；∑M1-百合总质量(μg)；∑M2-马铃薯或木薯总质量(μg)；
根据各淀粉颗粒的形状，马铃薯和百合粉颗粒的体积用椭球的体积公式计算，木薯粉颗粒体积用半球体积公式计算。∑M1＝ρ百合粉*∑V1，木薯马铃薯粉的计算公式相同。    
表3.掺假率结果及分析
Figure G200810046743701D00062
注：掺假率计算公式：掺假率＝∑M2/(∑M2+∑M1)，木薯掺假率计算同。
运用统计软件对结果进行配对检验，结果发现：t＝2.013，p＞0.05，表明测得掺假率与实际掺假率无显著性差异。证明这种计算百合粉掺假率的方法是可行的，同时此方法也可用于测定其它淀粉掺合比率。

Claims (1)

1.一种定量鉴别真假百合粉的方法，
(1)显微镜鉴别
a、分别称取0.1～2克纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉和被测百合淀粉于烧杯中，加入20～500倍的水，搅拌均匀；
b、用移液器移取1～1000μl淀粉混合液于载玻片上，滴加淀粉混合液体积0.1～2倍体积的瑞士染液混匀，制成0.5～3cm2大小的涂片后晾干；
c、将干燥的涂片于普通显微镜下，放大100～400倍，对淀粉颗粒大小、形貌特征进行观察和测量，建立纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉颗粒的形貌特征图谱；
d、通过将被测百合淀粉颗粒的形貌特征与纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉的颗粒形貌特征图谱比对，定性的鉴定出真假百合粉颗粒；
(2)掺假率测定
a、密度的测定：按照粉末状固体密度的测定方法测定纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉的密度，纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉颗粒用比重瓶法测量5～100次计算纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉的密度，取平均值；
b、体积测量：按照步骤(1)制成被测百合淀粉颗粒涂片，放大100～400倍，在显微镜下观察涂片并以随机的方式在不同位置拍摄5～100张连续的显微图片，通过与纯百合淀粉、纯马铃薯淀粉、纯木薯淀粉颗粒形貌特征图谱比对辨别不同的淀粉颗粒，用图像分析软件统计百合淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉的粒径和数量；
c、根据测出的百合淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉颗粒的密度、粒径和数量，根据淀粉颗粒的体积外形近似圆或椭圆，采用相应的体积公式计算出显微图片样品中百合淀粉、马铃薯或木薯颗粒的体积和质量，通过质量比得出显微图片样品的掺假率，利用显微图片样品的掺假率代表被测百合淀粉的掺假率。
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