CN101255168B

CN101255168B - 一种红曲素、安卡红曲黄素纯品的液相色谱制备方法

Info

Publication number: CN101255168B
Application number: CN 200810103599
Authority: CN
Inventors: 张德权; 崔莉; 胡晓丹; 李淑荣; 李庆鹏
Original assignee: Institute of Food Science and Technology of CAAS
Current assignee: Institute of Food Science and Technology of CAAS
Priority date: 2008-04-09
Filing date: 2008-04-09
Publication date: 2010-06-16
Anticipated expiration: 2028-04-09
Also published as: CN101255168A

Abstract

本发明红曲素、安卡红曲黄素纯品的液相色谱制备方法属纯品制备生产方法，它采用制备型液相色谱仪，C18色谱柱，柱温为室温，检测波长233nm或394nm，流动相甲醇∶水(8∶2)，进样量1mL，流速5ml/min，收集保留时间为37.733min(红曲素)、68.100min(安卡红曲黄素)的目标组分，同时与自动进样器、自动收集器等技术配套，可实现连续生产。该技术可应用于不同色价的红曲米粉、红曲色素粉、膏状红曲色素等含有红曲素、安卡红曲黄素的红曲色素制品。该制备工艺简单、操作方便、快速高效、自动化程度高，可同时制备两种色素纯品，产品纯度高，制备量较大。

Description

一种红曲素、安卡红曲黄素纯品的液相色谱制备方法

技术领域

本发明为色素纯品的制备方法，特别涉及一种用于色素纯品的液相色谱制备技术，适用于红曲色素中红曲素、安卡红曲黄素的液相色谱分离制备。

背景技术

近年来，随着人们对食品安全要求的提高及分析检测、质量控制对多种纯品需求的增加，各种单组分纯品的制备技术研究也越来越广泛。色谱技术可以分离性质差别很小的化合物，是从混合物中分离不同组分的重要方法。常规的色谱技术，如薄层色谱、柱层析色谱等具有操作复杂、分离组分纯度低、重复性不好等缺陷，气相色谱只能分离分析能够气化或在分析温度下有足够蒸汽压的物质，一般分析型液相色谱主要适用于混合物的分离分析，由于进样量很小而不能收集到较大量的单组分分离物。

因此对于单组分纯品的制备，以上常规的色谱分离技术均有一定的限制。因而液相色谱作为一种制备分离技术(制备型液相色谱)的研究应用日益受到重视。所谓制备型液相色谱技术是分析型液相色谱的放大级，即通过放大进样器、色谱柱等设备条件，在保证混合物分离的基础上，提高样品量，收集分离所得组分。作为一种色谱分离技术，制备型液相色谱技术具有快速、高效、条件温和、操作简单、产品纯度高、批处理量较大等优点。

发明内容

本发明的目的在于应用制备型液相色谱对红曲色素进行分离纯化，制备生产红曲素、安卡红曲黄素纯品，可用作分析检测的标准品。该分离制备技术具有工艺简单、操作方便、分离速度快，同时制备两种色素纯品、产品纯度高等优点。其方法在于：称取红曲米粉置索氏提取器中，加入正己烷80℃回流提取，至提取液无色，收集提取液滤纸过滤，减压浓缩成膏状，得到红曲色素粗提物。以甲醇复溶粗提物，经0.45μm滤膜过滤，得样品溶液。取样品溶液手动进样分离制备红曲素、安卡红曲黄素纯品；所用制备型液相色谱条件为：C18色谱柱，柱温为室温，检测波长233nm或394nm，流动相甲醇∶水(8∶2)，进样量1mL，流速5mL/min，收集保留时间为37.733min(红曲素)、68.100min(安卡红曲黄素)的目标组分，将其在30℃-50℃的真空旋转蒸发器中减压浓缩，氮气吹干，最后得到黄色的红曲素、安卡红曲黄素纯品。本发明技术适用于从不同色价的红曲米粉、红曲色素粉等含有红曲素、安卡红曲黄素的红曲色素制品中分离制备红曲素、安卡红曲黄素纯品。

本项发明确定了制备液相的最佳分离条件，进样量1mL，流速为5mL/min时分离度较好，可以达到所需两组分的分离制备，产品纯度分别为96.761％、99.234％，出峰时间分别为37.733min、68.100min，80分钟内即可制备两种纯品。

本项分离制备技术同时制备红曲素、安卡红曲黄素，条件温和、工艺简单、操作方便、产品纯度高、制备量较大。其原理为：红曲素、安卡红曲黄素极性较弱，采用反相色谱法(即流动相的极性大于固定相的极性)进行分离，由于样品液中不同组分极性不同，在色谱柱和流动相中的吸附分配特性不同，采用非极性键合固定相(硅胶-C₁₈H₃₇，简称C18)色谱柱，以强极性的甲醇、水按8∶2的比例混合作为流动相洗脱，极性大的组分先流出，极性小的后流出，从而得到分离，红曲素、安卡红曲黄素由于结构上的差异在色谱柱上显示出不同的保留时间，根据二者对紫外光的特征吸收性能，通过检测器检测两个组分的不同流出时间，在不同组分流出时间进行接收即得到两组分。

与现有技术相比，本技术具有以下优点：

(1)工艺和操作流程简单，操作方便，可与自动进样器、自动收集器等配套，实现自动连续生产，机械化程度高。

(2)流动相采用甲醇∶水为8∶2的简单配比，等度恒速洗脱，条件简单，且流动相可回收循环利用。

(3)条件温和，稍微采取避光措施就不会造成光敏性红曲的红曲素、安卡红曲黄素的破坏损失。

(4)产品纯度高，制备量较大，且可根据不同需要适当调整条件制备不同纯度的产品。

附图说明

图1为红曲素紫外可见光谱图。

图2为安卡红曲黄素组分紫外可见光谱图。

图3为安卡红曲黄素的一级质谱图。

图4为红曲素的一级质谱图。

图5为安卡红曲黄素二级质谱图。

图6为红曲素的二级质谱图。

附仪器型号：液相色谱：Agilent 1100 germany，色谱柱：Agilent EclipseXDB-C18，5um，4.6x150mm，made in USA，质谱：API 3000 toronto canada。

具体实施方式

实施例——使用色价800的红曲米粉制备红曲素、安卡红曲黄素纯品

(1)称取红曲米粉10g置索氏提取器，加入正己烷80℃回流提取，至提取液无色，收集提取液滤纸过滤，减压浓缩成膏状，得到红曲色素粗提物。

(2)以甲醇复溶粗提物，至50ml容量瓶定容，经0.45μm滤膜过滤，得样品溶液。

(3)打开制备液相仪，设置色谱条件(C18色谱柱，柱温为室温，检测波长233nm)，配制甲醇∶水(8∶2)流动相，超声脱气，冲洗色谱柱，稳定基线，取样品溶液手动进样开始制备，进样量1mL，流速5mL/min，收集保留时间为37.733min(红曲素)、68.100min(安卡红曲黄素)的目标组分。

(4)将收集的组分在真空旋转蒸发器中减压浓缩(40℃)，氮气吹干，得到黄色的红曲素、安卡红曲黄素纯品。

红曲素、安卡红曲黄素是指红曲菌发酵过程中产生的两种黄色调单一色素，制备得的两种色素的甲醇溶液在200-600nm范围内进行紫外、可见光扫描，其具有图1、2所示的特征吸收。

在甲醇∶水(80∶20)的等度洗脱液相色谱条件下，对制备的纯品做正离子质谱，结果如图3、4所示。

在以下质谱条件下：NEB：8.00，CUR：12.00，IS：4000.00，TEM：300.00，AD：6.00，DP：50.00(安卡红曲黄素)，20.00(红曲素)，FP：400.00，EP：10.00，CE：35.00，CXP：14.00，分别有如图5、6所示二级质谱结果。

Claims

1.一种红曲素、安卡红曲黄素纯品的液相色谱制备方法，其特征在于：称取红曲米粉置索氏提取器，加入正己烷80℃回流提取，至提取液无色，收集提取液滤纸过滤，减压浓缩成膏状，得到红曲色素粗提物；以甲醇复溶粗提物，经0.45μm滤膜过滤，得样品溶液；取样品溶液手动进样开始制备，液相色谱条件为：C18色谱柱，柱温为室温，检测波长233nm或394nm，流动相甲醇∶水8∶2，进样量1mL，流速5ml/min，收集保留时间为37.733min红曲素、68.100min安卡红曲黄素的目标组分，将其在30℃-50℃的真空旋转蒸发器中减压浓缩，氮气吹干，最后得到黄色的红曲素、安卡红曲黄素纯品。

2.根据权利要求1所述一种红曲素、安卡红曲黄素纯品的液相色谱制备方法，其特征在于：采用进样量1ml，流速为5ml/min的条件，在80min内可完成两种色素的制备，产品纯度分别达到96.761％、99.234％。