CN101249124A - 一种药物组合物及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种药物组合物，它主要由下述重量份配比的中药提取物制成：人参或人参茎叶总皂苷提取物1－20份，灯盏细辛总黄酮提取物1－20份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物1－20份。本发明采用传统中药组合配方，结合中药复方多组分、多靶点、多层次、多途径治疗复杂病症的特色及优势，具有明显的神经保护作用以及促进神经功能恢复等作用；可有效阻断缺血性脑血管病等多种疾病神经损伤的大部分病理机制，特别是对神经系统症状的改善方面，有助于提高患者的生活质量，达到改善预后的目的，具有重要的临床应用意义。本发明还公开了上述药物组合物的医药用途。
Description
技术领域
本发明属于医药制剂技术领域，特别涉及一种药物组合物及其医药用途。
背景技术
神经损伤主要包括脑神经损伤、脊髓神经损伤和周围神经损伤等。
脑神经损伤包括脑外伤、脑血管硬化(脑溢血、脑血栓)后遗症、脑炎与脑膜炎后遗症、脱髓鞘疾病等脑血管病后遗症。
脑血管病是一种世界范围的常见病，在我国以缺血性脑血管病为主，具有发病率高、病死率高、致残率高等特点，一旦发病，将给患者和家庭带来巨大的精神痛苦和经济负担。
根据现代医学研究的结果，不论任何原因引起的缺血性脑血管病，其本质就是因为动脉供血减少或中止而引起局部脑组织缺血或梗死，从而导致神经细胞变性、坏死，临床表现为各种神经功能缺损的症状和体征。
缺血性脑血管病如果没有得到及时的救治，神经损伤将产生后遗症，具体表现为智力减退、记忆力下降、注意力集中障碍、情绪变化等多种障碍，所以神经保护在缺血性脑血管病的治疗中具有举足轻重的重要性，在脑缺血过程中保护神经细胞免受变性、坏死，对患者后期的预后具有重要的意义。
直接或间接暴力作用于脊柱和脊髓均可造成脊髓损伤。脊髓损伤后立即出现损伤平面以下的感觉、运动、反射、括约肌及植物神经系统的完全的或不完全的功能障碍。脊髓损伤分高位损伤与底位损伤、胸部以上合并痉挛称高位截瘫、属上运动神经元损害。常见颈胸端损伤，临床表现为损伤平面以下的运动功能丧失、二便失禁、上肢肌肉萎缩、颈髓伤由于膈肌麻痹常伴呼吸困吸、咳嗽无力、血压不稳等、四肢呈痉挛性瘫痪。
周围神经损伤是指周围运动、感觉和植物神经的结构和功能障碍，临床上相当多见。周围神经损伤后，临床上主要表现为不同程度的运动、感觉障碍，同时可有肢体营养障碍、反射障碍和植物神经系统紊乱等表现。
随着对缺血性脑血管病、脊髓损伤、周围神经损伤等病理过程的逐步认识，神经保护剂得到了越来越多的研究开发和临床应用。
目前研究较多的神经保护剂主要有：Ca2+通道阻滞剂、兴奋性氨基酸受体抑制剂、白由基清除剂、营养神经细胞的药物、具有稳定细胞膜作用的药物、雌激素、与炎症相关的细胞保护剂、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂、GABA受体激动剂、抑制神经凋亡的药物等。
但在实际临床中，神经损伤常涉及多种病理过程，单用上述的任何一种神经保护剂其临床疗效均不太理想，组合使用又缺乏相关的基础和临床研究，所以神经保护剂的研究和临床使用同样亟需思路或使用方法上的突破。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种新的药物组合物，采用传统中药提取物组合配方，具有良好的神经保护作用，以及促进神经功能恢复等作用。
本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的医药用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种药物组合物，它主要由下述重量份配比的中药提取物制成：
人参或人参茎叶总皂苷提取物1-20份，灯盏细辛总黄酮提取物1-20份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物1-20份。
其提取物配比可优选如下：
人参或人参茎叶总皂苷提取物2-15份，灯盏细辛总黄酮提取物2-15份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物2-15份。
其提取物配比可进一步优选如下：
人参或人参茎叶总皂苷提取物5-10份，灯盏细辛总黄酮提取物5-10份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物5-10份。
上述药物组合物中的人参或人参茎叶总皂苷提取物，是从中药材人参或人参茎叶中提取制得的主要含总皂苷的物质；其中总皂苷含量以50％以上为佳，可进一步优选含量为80％以上。
上述药物组合物中的灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，都是从中药材灯盏细辛中提取制得的的物质。
其中：灯盏细辛总黄酮提取物主要含有总黄酮类物质，其总黄酮含量以50％以上为佳，可进一步优选含量为80％以上。
灯盏细辛总咖啡酸酯提取物主要含有总咖啡酸酯类物质，其总咖啡酸酯含量以30％以上为佳，可优选含量为50％以上，进一步优选含量为80％以上。
上述人参或人参茎叶总皂苷提取物，可以通过常用的提取皂苷类物质的方法从人参或人参茎叶中提取制得，也可以优选通过下述方法从人参或人参茎叶中提取制得：
该方法主要包括水提、醇沉、过大孔树脂柱、丙酮沉淀等步骤，具体方法如下：
①水提：取人参或人参茎叶药材，按水煮法加水提取，将水提液浓缩；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到60-85％，静置，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液通过中/低极性大孔吸附树脂柱(常用的大孔吸附树脂型号如D101、AB-8、X-5、HPD100等)，先用水和/或低于20％的乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水和/或低于20％的乙醇洗脱液；再用50-95％乙醇洗脱，收集50-95％乙醇洗脱液；
④丙酮沉淀：将上述③收集的50-95％乙醇洗脱液回收乙醇，浓缩，加入1-3倍量的丙酮，搅拌，静置，滤过，将滤渣干燥，即得人参或人参茎叶总皂苷提取物。
上述步骤④中，必要时，可在上述③收集的洗脱液中加入乙醇使含醇量为80-90％、静置、滤过、再将滤液回收乙醇、浓缩、丙酮处理等；
此外，上述步骤④中，在加入丙酮处理前，还可以进行下述精制处理：将洗脱液或滤液回收乙醇、浓缩后，按0.1-0.7g/100ml加入活性炭，煮沸，滤过，滤液浓缩，再加入丙酮沉淀处理。
上述灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，可以通过常用的提取总黄酮类物质和总咖啡酸酯类物质的方法分别从灯盏细辛中提取制得，也可以优选通过下述方法从灯盏细辛中提取制得：
该方法包括提取总黄酮和总咖啡酸酯，具体方法如下：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，加入碱溶液(如碳酸氢钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钠溶液等)渗漉提取，收集渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液通过中/低极性大孔吸附树脂柱(常用的大孔吸附树脂型号如D101、AB-8、X-5、HPD100等)，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用50-95％乙醇洗脱，收集50-95％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的50-95％乙醇洗脱液回收乙醇，调pH值为0.5-5，静置，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水和/或少量50-95％乙醇洗涤1-3次，减压干燥，即得灯盏细辛总黄酮提取物；
本步骤也可按下述方法处理：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水和/或少量50-95％乙醇洗涤1-3次，再加入水使沉淀混悬，加碱溶液使溶解，放置，滤过，滤液调pH值为0.5-5，静置，滤过，取沉淀；将此沉淀再重复1-4次洗涤、溶解、酸沉处理；将最后的沉淀再用少量水和/或少量50-95％乙醇洗涤1-3次，减压干燥，即得灯盏细辛总黄酮提取物。
本步骤中，还可在任意一次酸沉处理之前或之后进行下述精制处理：按0.1-0.7g/100ml在药液中加入活性炭，煮沸，滤过，滤液再进行相应处理。
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用碱溶液调节pH值为6.5-7.5，并浓缩，过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用60-95％乙醇洗脱，收集60-95％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物。
上述步骤⑤中，也可将上述③酸沉后的滤液，用碱溶液调节pH值为6.5-7.5，浓缩后加乙醇至含醇量60-90％，放置，滤过，滤液回收乙醇，再过聚酰胺柱处理等。
上述药物组合物可以制成药剂学上可能的任意一种口服或非口服剂型的制剂；根据不同剂型的需要，可加入适当的药用辅料。
其制备方法只需按照各种剂型药物的常用制备方法，将所述重量份配比的人参或人参茎叶总皂苷提取物、灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物制成所需剂型的制剂，即可。
上述药物组合物的医药用途，可用于制备具有下述任意一种或多作用的药物：神经保护作用、促进神经功能恢复作用、疏通血管作用、改善血液流变性作用等。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用中药提取物组合配方，具有明显的神经保护作用，以及促进神经功能恢复等作用；结合中药复方多组分、多靶点、多层次、多途径治疗复杂病症的特色及优势，可有效阻断缺血性脑血管病等多种疾病神经损伤的大部分病理机制，不同于现有药物单一作用的机制，也不是简单的联合用药，特别是对神经系统症状的改善方面，有助于提高患者的生活质量，达到改善预后的目的，具有重要的临床应用意义。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。
但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
实施例1
本实施例为由下述重量份配比的中药提取物制成的药物组合物(颗粒剂)：
人参茎叶总皂苷提取物5份，灯盏细辛总黄酮提取物5份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物10份。
其中：
人参茎叶总皂苷提取物为通过下述方法从人参茎叶中提取制得的物质：
取人参茎叶药材，加水8倍量煎煮提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至稠膏，干燥，即得人参茎叶总皂苷提取物，其总皂苷含量为25％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
取灯盏细辛药材，加入50％乙醇8倍量提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至无醇味；用硫酸调pH值为1-3，静置，滤过，取酸沉后的沉淀(即滤渣)，用少量水和/或少量50-95％乙醇洗涤1-3次，减压干燥，即得总黄酮提取物其总黄酮含量为45％。
取酸沉后的滤液，用5％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0左右，并浓缩至约为药材重量的1/4，加入乙醇使乙醇浓度达到80％，4℃冷藏，静置24小时，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为25％。
本实施例药物组合物(颗粒剂)通过下述方法制得：
将所述配比的人参茎叶总皂苷提取物、灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物粉碎，混合均匀，加入约为上述两种提取物总量50％的糊精，20％的蔗糖，制粒，干燥，装成3g/袋的颗粒剂，贴标签，检验，即得。
实施例2
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(胶囊剂)：
人参茎叶总皂苷提取物8份，灯盏细辛总黄酮提取物12份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物7份。
其中：
人参茎叶总皂苷提取物为通过下述方法从人参茎叶中提取制得的物质：
取人参茎叶药材，加水8倍量煎煮提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至药为药材重量的1/2，加入乙醇使乙醇浓度达到80％，4℃冷藏，静置24小时，滤过，将滤液回收乙醇，浓缩，干燥，即得人参茎叶总皂苷提取物，其总皂苷含量为38％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入10％氢氧化钠溶液浸泡1小时后，以10-20ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量5倍量的渗漉液；
②第一次酸沉：将上述①收集的渗漉液浓缩，用30％硫酸溶液调pH值为3-4，4℃冷藏，静置12小时，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
③提取总黄酮：取上述②酸沉后的沉淀，用少量水洗涤3次，再加入5倍量水，使沉淀混悬，用5％氢氧化钠溶液调pH值为8左右使溶解，放置12小时，滤过，滤液用10％硫酸溶液调pH值为3-4，4℃冷藏，静置12小时，滤过，将沉淀用少量水洗涤2次，再用少量50％乙醇洗涤2次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为58％。
④提取总咖啡酸酯：取上述②酸沉后的滤液，用5％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0左右，并浓缩至约为药材重量的1/4，以0.2BV/h的速度通过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用2 BV的80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为52％。
本实施例药物组合物(胶囊剂)通过下述方法制得：
将所述配比的人参茎叶总皂苷提取物、灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物粉碎，混合均匀，加入约为上述两种提取物总量30％的淀粉，制粒，干燥，装入胶囊壳中，制成胶囊剂，检验，即得。
实施例3
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(片剂)：
人参总皂苷提取物12份，灯盏细辛总黄酮提取物17份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物13份。
其中：
人参总皂苷提取物为通过下述方法从人参中提取制得的物质：
①水提：取人参药材，粉碎，加水提取3次，第1次加10倍量水提取3小时，第2次加8倍量水提取2小时，第3次加6倍量水提取0.5小时，合并水提液，浓缩至药材重量的1/2；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到80％，4℃冷藏，静置24小时，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液以0.5BV/h的速度通过D101大孔吸附树脂柱，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；继续用20％乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去20％乙醇洗脱液；再用3BV的80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，即得人参总皂苷提取物，其总皂苷含量为72％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入10％氢氧化钠溶液浸泡1小时后，以5-15ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量5倍量的渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液以2BV/h的速度通过HPD100大孔吸附树脂，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用5BV 60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的60％乙醇洗脱液回收乙醇，用10％硫酸溶液调pH值为1-2，4℃冷藏，静置12小时，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗涤3次，再用少量95％乙醇洗涤1次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为64％。
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用10％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0左右，并浓缩至约为药材重量的1/6，加入乙醇至含醇量为70％，4℃冷藏，放置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为48％。
本实施例药物组合物(片剂)通过下述方法制得：
将所述配比的人参总皂苷提取物、灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物粉碎，混合均匀，加入上述两种提取物总量10％的预胶化淀粉，制粒后压片，制成0.5g/片的片剂，贴标签，检验，即得。
实施例4
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(水针)：
人参茎叶总皂苷提取物10份，灯盏细辛总黄酮提取物10份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物5份。
其中：
人参茎叶总皂苷提取物为通过下述方法从人参茎叶中提取制得的物质：
①水提：取人参茎叶药材，粉碎，加8倍量水提取3次，每次1小时，合并水提液，浓缩至药材重量的1/2；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到70％，4℃以下冷藏，静置24小时以上，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液以0.3BV/h的速度通过D101大孔吸附树脂柱，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；继续用10％乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去10％乙醇洗脱液；再用3BV的60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液；
④丙酮沉淀：在上述③收集的60％乙醇洗脱液中加入乙醇使含醇量为80％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，按0.5g/100ml加入活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液浓缩，加入3倍量丙酮，搅拌，静置30分钟，滤过，将滤渣干燥，即得人参茎叶总皂苷提取物，其总皂苷含量为85％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入0.4％碳酸氢钠溶液浸泡2小时后，以10-20ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量12倍量的渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液以2BV/h的速度通过HPD100大孔吸附树脂，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用3BV 80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的80％乙醇洗脱液回收乙醇，用20％硫酸溶液调pH值为2-3，4℃冷藏，静置12小时，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗涤2次，再加入10倍量水，使沉淀混悬，用5％氢氧化钠溶液调pH值为8左右使溶解，放置12小时，滤过，滤液用20％硫酸溶液调pH值为2-3，4℃冷藏，静置12小时，滤过，将沉淀用少量水洗涤2次，再加入10倍量水，使沉淀混悬，用5％氢氧化钠溶液调pH值为8左右使溶解，按0.4g/100ml加入活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液用20％硫酸溶液调pH值为2-3，4℃冷藏，静置12小时，滤过，取沉淀用少量水洗涤2次，再用少量70％乙醇洗涤2次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为89％；
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用10％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0左右，并浓缩至约为药材重量的1/5，加入乙醇至含醇量为80％，4℃冷藏，放置12小时，滤过，滤液回收乙醇，以0.5BV/h的速度通过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用3BV的80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为85％。
本实施例药物组合物(水针)通过下述方法制得：
取所述配比的灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，加入50倍量注射用水混悬后，用0.5mol/L氢氧化钠调pH值约为8左右，使提取物溶解澄明，得灯盏细辛总黄酮和总咖啡酸酯提取物溶液；再取所述配比的人参茎叶总皂苷提取物，加入10倍量注射用水溶解，得人参茎叶总皂苷提取物溶液；将两种提取物溶液混匀；
另取相当于灯盏细辛总黄酮提取物、灯盏细辛总咖啡酸酯提取物和人参茎叶总皂苷提取物总重量80％的焦亚硫酸钠，用5倍量注射用水溶解，与上述提取物溶液混匀，用0.5mol/L氢氧化钠调pH至6.3～6.8，按0.2g/100ml加入活性炭，再加10％乙醇至总提取物浓度约为1.25g/100ml，搅拌10分钟，分别用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液按10ml/支分装入西林瓶，加盖丁基胶塞及铝盖，115℃热压灭菌30分钟，贴标签，检验，即得。
实施例5
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(水针)：
人参茎叶总皂苷提取物20份，灯盏细辛总黄酮提取物15份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物15份。
其中：
人参茎叶总皂苷提取物为通过下述方法从中药材人参茎叶中提取制得的物质：
①水提：取人参茎叶药材，粉碎，加10倍量水提取2次，第一次2小时，第2次1小时，合并水提液，浓缩至药材重量的1/3；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到85％，4℃冷藏，静置24小时以上，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液以0.7 BV/h的速度通过AB-8大孔吸附树脂柱，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；继续用15％乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去15％乙醇洗脱液；再用5BV的50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液；
④丙酮沉淀：在上述③收集的50％乙醇洗脱液中加入乙醇使含醇量为85％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，按0.7g/100ml加入活性炭，煮沸20分钟，滤过，滤液浓缩，加入1倍量丙酮，搅拌，静置40分钟，滤过，将滤渣干燥，得人参茎叶总皂苷提取物，其总皂苷含量为82％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入1％碳酸钠溶液浸泡3小时后，以40-50ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量15倍量的渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液以1BV/h的速度通过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用1.5BV 90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的90％乙醇洗脱液回收乙醇，用20％盐酸溶液调pH值为1-2，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗涤1次，再用少量95％乙醇洗涤1次，再加入8倍量水，使沉淀混悬，用10％碳酸氢钠溶液调pH值为7-8使溶解，放置12小时以上，滤过，滤液用20％盐酸溶液调pH值为1-2，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，将沉淀用少量水洗涤2次，再用少量60％乙醇洗涤3次，再加入8倍量水，使沉淀混悬，用10％碳酸氢钠溶液调pH值为7-8使溶解，按0.7g/100ml加入活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液用20％盐酸溶液调pH值为1-2，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，取沉淀用少量水洗涤3次，再用少量60％乙醇洗涤2次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为85％；
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用10％碳酸氢钠溶液调节pH值为7.5左右，并浓缩至约为药材重量的1/4，加入乙醇至含醇量为90％，4℃冷藏，放置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇，以2 BV/h的速度通过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用5 BV的60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为84％。
本实施例药物组合物(水针)通过下述方法制得：
取所述配比的灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，加入约45倍量注射用水混悬后，用0.3mol/L氢氧化钠调pH值约为7-8，使提取物溶解澄明，得灯盏细辛总黄酮和总咖啡酸酯提取物溶液；再取所述配比的人参茎叶总皂苷提取物，加入约12倍量注射用水溶解，得人参茎叶总皂苷提取物溶液；将两种提取物溶液混匀；
另取相当于灯盏细辛总黄酮提取物、灯盏细辛总咖啡酸酯提取物和人参茎叶总皂苷提取物总重量85％的焦亚硫酸钠，用约6倍量注射用水溶解，与上述提取物溶液混匀，用0.3mol/L氢氧化钠调pH至6.5～7.0，按0.3g/100ml加入活性炭，再加10％乙醇至总提取物浓度约为2.5g/100ml，搅拌10分钟，分别用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液按10ml/支分装入安瓿，熔封，115℃热压灭菌30分钟，贴标签，检验，即得。
实施例6
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(冻干粉针)：
人参茎叶总皂苷提取物15份，灯盏细辛总黄酮提取物2份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物1份。
其中：
人参茎叶总皂苷提取物为通过下述方法从中药材人参茎叶中提取制得的物质：
①水提：取人参茎叶药材，粉碎，加12倍量水提取3小时，将水提液浓缩至药材重量的1/4；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到60％，4℃冷藏，静置36小时，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液以0.6BV/h的速度通过HPD100大孔吸附树脂柱，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；继续用5％乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去5％乙醇洗脱液；再用4BV的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液；
④丙酮沉淀：在上述③收集的70％乙醇洗脱液中加入乙醇使含醇量为80％，静置36小时，滤过，滤液回收乙醇，按0.1g/100ml加入活性炭，煮沸30分钟，滤过，滤液浓缩，加入1.5倍量丙酮，搅拌，静置20分钟，滤过，将滤渣干燥，得人参茎叶总皂苷提取物，其总皂苷含量为83％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入1％碳酸氢钠溶液浸泡5小时后，以15-25ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量10倍量的渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液以3BV/h的速度通过X-5大孔吸附树脂，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用2BV 70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的70％乙醇洗脱液回收乙醇，用30％盐酸溶液调pH值为0.5-1，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗涤3次，再加入8倍量水，使沉淀混悬，用5％碳酸氢钠溶液调pH值为8-9使溶解，放置12小时以上，滤过，滤液用30％盐酸溶液调pH值为0.5-1，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，将沉淀用少量水洗涤3次，按0.1g/100ml加入活性炭，煮沸15分钟，滤过，滤液用30％盐酸溶液调pH值为0.5-1，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，取沉淀用少量水洗涤3次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为82％；
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用5％碳酸氢钠溶液调节pH值为6.5左右，并浓缩至约为药材重量的1/5，加入乙醇至含醇量为60％，4℃冷藏，放置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇，以1 BV/h的速度通过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用4 BV的60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为81％。
本实施例药物组合物(水针)通过下述方法制得：
取所述配比的灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，加入约50倍量注射用水混悬后，用0.5mol/L氢氧化钠调pH值约为7-8，使提取物溶解澄明，得灯盏细辛总黄酮和总咖啡酸酯提取物溶液；再取所述配比的人参茎叶总皂苷提取物，加入约10倍量注射用水溶解，得人参茎叶总皂苷提取物溶液；将两种提取物溶液混匀；
另取相当于灯盏细辛总黄酮提取物、灯盏细辛总咖啡酸酯提取物和人参茎叶总皂苷提取物总重量11倍的甘露醇，用约3倍量注射用水溶解，与上述提取物溶液混匀，加注射用水至总提取物浓度约为0.75g/100ml，再按0.2g/100ml加入活性炭，搅拌10分钟，分别用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液按10ml/支分装入西林瓶，置于冻干机内冷冻干燥，加盖丁基胶塞及铝盖，贴标签，检验，即得。
实施例7
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(冻干粉针)：
人参总皂苷提取物1份，灯盏细辛总黄酮提取物1份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物20份。
其中：
人参总皂苷提取物为通过下述方法从中药材人参中提取制得的物质：
①水提：取人参药材，粉碎，加8倍量水提取2次，每次2小时，合并水提液，浓缩至药材重量的1/2；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到60％，4℃冷藏，静置24小时以上，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液以0.6BV/h的速度通过X-5大孔吸附树脂柱，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；继续用10％乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去10％乙醇洗脱液；再用3BV的95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液；
④丙酮沉淀：将上述③收集的95％乙醇洗脱液回收乙醇，按0.5g/100ml加入活性炭，煮沸15分钟，滤过，滤液浓缩，加入1倍量丙酮，搅拌，静置30分钟，滤过，将滤渣干燥，得人参总皂苷提取物，其总皂苷含量为81％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入15％碳酸氢钠溶液浸泡1小时后，以20-30ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量8倍量的渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液以3BV/h的速度通过AB-8大孔吸附树脂，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用4BV 50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的50％乙醇洗脱液回收乙醇，用10％盐酸溶液调pH值为4-5，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗涤2次，再用少量80％乙醇洗涤2次，再加入6倍量水，使沉淀混悬，用2％氢氧化钠溶液调pH值为7-8使溶解，放置12小时以上，滤过，滤液用10％盐酸溶液调pH值为4-5，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，将沉淀用少量水洗涤2次，再用少量80％乙醇洗涤2次，再加入6倍量水，使沉淀混悬，用2％氢氧化钠溶液调pH值为7-8使溶解，放置12小时以上，滤过，滤液用10％盐酸溶液调pH值为4-5，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，将沉淀用少量水洗涤2次，再用少量80％乙醇洗涤2次，再加入6倍量水，使沉淀混悬，用2％氢氧化钠溶液调pH值为7-8使溶解，按0.4g/100ml加入活性炭，煮沸10分钟，滤过，滤液用10％盐酸溶液调pH值为4-5，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，取沉淀用少量水洗涤3次，再用少量80％乙醇洗涤3次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为84％；
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用2％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0左右，并浓缩至约为药材重量的1/5，加入乙醇至含醇量为75％，4℃冷藏，放置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇，以1BV/h的速度通过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用4 BV的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为82％。
本实施例药物组合物(水针)通过下述方法制得：
取所述配比的灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，加入约60倍量注射用水混悬后，用1mol/L氢氧化钠调pH值约为7-7.5，使提取物溶解澄明，得灯盏细辛总黄酮和总咖啡酸酯提取物溶液；再取所述配比的人参总皂苷提取物，加入约15倍量注射用水溶解，得人参总皂苷提取物溶液；将两种提取物溶液混匀；
另取相当于灯盏细辛总黄酮提取物、灯盏细辛总咖啡酸酯提取物和人参总皂苷提取物总重量10倍的甘露醇，用约4倍量注射用水溶解，与上述提取物溶液混匀，加注射用水至总提取物浓度约为1.25g/100ml，再按0.4g/100ml加入活性炭，搅拌15分钟，分别用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液按10ml/支分装入西林瓶，置于冻干机内冷冻干燥，加盖丁基胶塞及铝盖，贴标签，检验，即得。
实施例8
本实施例为由下述重量份配比的原料药制成的药物组合物(软胶囊)：
人参茎叶总皂苷提取物2份，灯盏细辛总黄酮提取物20份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物2份。
其中：
人参茎叶总皂苷提取物为通过下述方法从中药材人参茎叶中提取制得的物质：
①水提：取人参茎叶药材，粉碎，加8倍量水提取3次，每次1小时，合并水提液，浓缩至药材重量的1/2；
②醇沉：在上述①浓缩后的水提液中加入乙醇使乙醇浓度达到75％，4℃冷藏，静置24小时以上，滤过，将滤液回收乙醇，再滤过；
③过大孔树脂柱：将上述②处理后的药液以1 BV/h的速度通过D101大孔吸附树脂柱，先用水洗至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；继续用10％乙醇洗脱至洗脱液呈近无色，弃去10％乙醇洗脱液；再用6BV的50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液；
④丙酮沉淀：将上述③收集的50％乙醇洗脱液回收乙醇，浓缩，加入2倍量丙酮，搅拌，静置1小时，滤过，将滤渣干燥，得人参茎叶总皂苷提取物，其总皂苷含量为83％。
灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物为通过下述方法从灯盏细辛中提取制得的物质：
①碱溶液渗漉提取：取灯盏细辛药材，铡碎，加入5％碳酸钠溶液浸泡4小时后，以30-40ml/min.kg速度渗滤提取，收集相当于药材重量12倍量的渗漉液；
②过大孔树脂柱：将上述①收集的渗漉液以3BV/h的速度通过HPD100大孔吸附树脂，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，弃去水洗脱液；再用1.5BV 95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液；
③第一次酸沉：将上述②收集的95％乙醇洗脱液回收乙醇，用40％盐酸溶液调pH值为3-4，4℃冷藏，静置12小时以上，滤过，酸沉后的滤液和沉淀分别备用；
④提取总黄酮：取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗涤2次，再加入12倍量水，使沉淀混悬，用20％氢氧化钠溶液调pH值为8左右使溶解，放置12小时，滤过，滤液用20％硫酸溶液调pH值为1-2，4℃冷藏，静置12小时，滤过，将沉淀用少量水洗涤3次，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总黄酮提取物，其总黄酮含量为80％；
⑤提取总咖啡酸酯：取上述③酸沉后的滤液，用5％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0左右，并浓缩至约为药材重量的1/3，加入乙醇至含醇量为85％，4℃冷藏，放置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇，以1.5BV/h的速度通过聚酰胺树脂柱，先用水洗脱至洗脱液呈近无色，再用2 BV的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，减压干燥(80℃，-0.09MPa)，即得灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，其总咖啡酸酯含量为81％。
本实施例药物组合物(软胶囊)通过下述方法制得：
取所述配比的人参茎叶提取物、灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，混匀，按提取物总量与辅料比例为1∶1.2加入药用辅料PEG400，混匀，制成软胶囊，贴标签，检验，即得。
发明人以上述实施例4制得的本发明药物注射液(水针)为实验药物，按照国家食品药品监督局《药品注册管理办法》的规定要求，设计试验方案，进行了下述主要药效学试验研究(对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用、对局灶性脑缺血大鼠神经功能障碍的保护作用、改善小鼠微循环试验)和长期毒性试验研究：
1对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用
1.1试验材料
1.1.1药品
本发明药物：按照上述实施例4的配方和方法制得的水针，发明人自制。(试验中药物浓度均以总黄酮、总咖啡酸酯及总皂苷的总量计，下同)
阴性对照药：0.9％NaCl，四川科伦药业股份有限公司生产，批号：A061121。
阳性对照药：尼莫地平注射液，山东新华制药股份有限公司生产，批号：050108，规格：2mg/10mi/支×5支。配制方法：临用时用5％葡萄糖配成所需浓度供试验用。
1.1.2仪器
电热恒温鼓风干燥箱，上海跃进医疗器械厂出品。
电子天平，北京赛多利斯天平有限公司出品，分辨值：0.001g。
TD-5-L离心机，上海安亭科学仪器厂制造。
UV1240型紫外-可见分光光度计，日本岛津。
1.1.3试剂
MDA检测试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070327；
GSH-PX检测试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070328；
SOD检测试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070327；
LDH试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070328；
一氧化氮(NO)：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070403；
一氧化氮合酶(Nos)：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070328；
总蛋白(双缩脲法)试剂：南京建成生物工程研究所提供，批号：20070328。
1.1.4动物
沙土鼠54只，雄性，体重60～80g，由浙江省实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(浙)2003-0001。试验时在成都中医药大学实验动物中心实验动物观察室饲养及观察。使用许可证：SCXK(川)2004-049。
1.2方法和结果
选取沙土鼠54只，按体重随机分为6组，分别为：假手术组、模型组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。各组分别按表1所示药物和剂量于手术前腹腔注射连续给药10天，于第10天末次给药后30min开始手术。各组动物均在乙醚麻醉下分离双侧颈总动脉，除假手术组外各组用血管夹夹闭双侧颈总动脉，40min后开夹使血流再通，缝合待动物清醒后正常进水进食。各组于再灌注后24h断头取脑，称重。将脑均分为2份。一份取大脑皮层测定水含量，并做病理切片观察海马CA1区锥体神经元，以2个视野下的存活锥体神经元数总和来表示海马损伤的程度。另一份用0.5mol/L、PH＝7.8的磷酸盐缓冲水溶液冰浴下制备10％脑组织匀浆，按试剂盒操作步骤测定匀浆中MDA、GSH-PX、LDH、SOD、NO及NOS的含量，试验结果见表2～4。
表1 对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用-给药方案
| 组别 | 受试药物 | 药物浓度(mg/ml) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(mg/kg) | 临床倍数(倍) | 给药途径 |
| 假手术组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | -0.9％NaCl尼莫地平注射液本发明药物本发明药物本发明药物 | --0.375mg1.20.60.3 | -1010101010 | ---1.510.675.332.67 | --201684 | -i.pi.pi.pi.pi.p |
表2对脑再灌注损伤沙土鼠脑组织GSH-PX、LDH活力和大脑皮层含水量的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量×天数(mg/kg×d) | 鼠数(只) | GSH-PX活力(酶活力单位) | LDH活力(U/mg) | 大脑皮层含水量(％) |
| 假手术组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.33×1012.0×106.0×103.0×10 | 999999 | 130.36±6.88137.30±7.88138.15±8.14126.12±5.45**128.54±6.13*135.54±6.76 | 320.23±16.94345.68±13.87△313.04±23.36**316.43±19.54**315.12±20.76**335.64±21.52 | 59.03±14.2372.53±7.5968.39±6.6162.47±9.3565.14±9.1172.97±10.03 |
注：①模型组与假手术组比较 △P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001；
②各给药组与模型组比较 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表2结果显示，本发明药物高剂量、中剂量组分别能明显和显著升高GSH-PX活力(P＜0.05)，且能显著降低LDH活力(P＜0.05和P＜0.01)。
表3对脑再灌注损伤沙土鼠脑组织NO、NOS、SOD和MDA含量的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量×天数(mg/kg×d) | 鼠数(只) | NO(umol/mg) | NOS(U/mg) | SOD活力(U/mg) | MDA含量(nmol/mg) |
| 假手术组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.33×1012.0×106.0×103.0×10 | 999999 | 1.55±0.072.67±0.18△△△1.96±0.17***1.56±0.11***1.65±0.13***1.78±0.15*** | 11.54±1.1216.66±1.12△△△13.74±0.53**12.05±1.06***12.57±0.76***12.94±0.55*** | 47.97±9.5524.55±3.25△△44.17±8.01***43.14±6.19***40.31±7.03**37.43±7.48* | 3.85±0.324.82±0.39△△3.81±0.17**3.69±0.22***4.32±0.184.38±0.22 |
注：①模型组与假手术组比较 △P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001；
②各给药组与模型组比较 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表3结果显示，本发明药物高剂量、中剂量、低剂量组与模型组比较均能显著增加SOD活力(P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05)。高剂量组与模型组比能明显降低MDA含量(P＜0.001)。
脑缺血再灌注后脑组织NOS活力显著升高(P＜0.001)，N0含量显著升高(P＜0.001)，对脑组织产生有害作用。本发明药物高剂量、中剂量、低剂量组与模型组比较均能显著降低脑内NO水平(P＜0.001)；高剂量、中剂量、低剂量组与模型组比较均能显著降低脑内NOS活性(P＜0.01或P＜0.05)。
表4对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元密度的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量×天(mg/kg×d) | 鼠数(只) | 神经元密度(个/2个高倍视野) |
| 假手术组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.33×1012.0×106.0×103.0×10 | 999999 | 171.89±16.84108.33±6.71△△△150.44±12.91***146.77±11.76***136.09±8.88**126.83±7.22** |
注：①模型组与假手术组比较△△△P＜0.001；
②各给药组与模型组比较**P＜0.01 ***P＜0.001。
表4结果显示，本发明药物高剂量组、中剂量组及低剂量组分别能明显和显著减轻沙土鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的损伤，增加其存活率(P＜0.05和P＜0.01)。
上述沙土鼠脑缺血再灌注损伤神经保护试验结果显示：
本发明药物高剂量组、中剂量组及低剂量组与模型组比较能明显增加再灌注损伤模型动物大脑皮层SOD、GSH-PX酶活力，降低LDH活力，降低脑内NO水平和NOS活性，促进自由基的清除，减少MDA的产生，对抗脂质过氧化，降低大脑皮层水含量，减轻后海马CA1区神经元的损伤，增加其存活率，且均有统计学差异(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。
2对局灶性脑缺血大鼠神经功能障碍的保护作用
2.1试验材料
2.1.1药品
本发明药物：按照上述实施例4的配方和方法制得的水针，发明人自制。
阴性对照药：0.9％NaCl，四川科伦药业股份有限公司生产，批号：A061121。
阳性对照药：舒血宁注射液，北京双鹤高科天然药物有限公司生产，批号：050618，规格：5ml×10支，每支含总黄酮苷4.2mg，含银杏内酯A 0.3mg，合计含4.5mg提取物/5ml。
2.1.2仪器
ACS-3H-B电子秤：中山市金利电子衡器有限公司。
SHANGPING JA2003电子天平：上海天平仪器厂。
2.1.3试剂
戊巴比妥钠：中国医药集团(上海)化学试剂公司进口分装，25g/瓶，A.R级，批号：040506。
龙胆紫：成都科龙化工试剂厂，规格：25g，批号：041011。
2.1.4动物
健康SD种大鼠，50只，雌雄各半，体重200～250g。由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(川)2004-11。试验时在成都中医药大学实验动物中心实验动物观察室饲养及观察。使用许可证：SCXK(川)2004-049。
2.2方法和结果
取健康SD种大鼠50只，随机分为5组，分别为：模型组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。每组10只，按表5所示药物和剂量尾静脉注射给药，1次/日，连续7天。于末次给药后30min，左侧颈内动脉注射血(凝块直径小于0.1mm的血栓混悬液0.4ml)造模，此后于第2，6，12和24h采用0-3级评分标准(见表6)评定每只大鼠的意识和运动能力。在处死前，又以0-3级标准(见表7)进行神经行为学的评分。随后颈总动脉注射龙胆紫染色，处死动物，开颅取出脑组织，称全脑重，遂切下未染色的脑组织(即缺血区脑组织)称重，求出其占全脑重量的百分率，结果见表8～10。
表5对局灶性脑缺血大鼠神经功能障碍的保护作用-给药方案
| 组别 | 受试药物 | 药物浓度(mg/ml) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(mg/kg) | 临床倍数(倍) | 给药途径 |
| 模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | 0.9％NaCl舒血宁注射液本发明药物本发明药物本发明药物 | 0.3751.20.60.3 | 1010101010 | --1.510.675.332.67 | -201684 | i.vi.vi.vi.vi.v |
表6大鼠的意识和运动能力评分标准
| 评分 | 标准 |
| 0分1分2分3分 | 正常活动自发活动+/-触觉刺激不能唤醒疼痛刺激不能唤醒，无自发活动 |
表7 大鼠神经行为学的评分标准
| 评分 | 标准 |
| 0分1分2分3分 | 未观察到行为缺陷前肢弯曲抵抗侧推力量下降，但无旋转抵抗侧推力下降，但有旋转 |
表8改善局灶性脑缺血大鼠意识和运动能力的作用
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 大鼠的意识和运动能力评分 | |||
| 2h | 6h | 12h | 24h | |||
| 模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | --1.512.06.03.0 | 1010101010 | 2.30±0.481.60±0.51*1.49±0.46**1.54±0.62*2.17±0.46 | 1.60±0.520.80±0.42**0.74±0.33**1.43±0.441.52±0.48 | 1.00±00.50±0.52**0.50±0.44**0.70±0.360.80±0.56 | 0.70±0.480.30±0.480.30±0.480.30±0.500.40±0.42 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表8结果显示，大剂量本发明药物注射能显著改善大鼠局灶性脑缺血2～12h的意识和运动能力(P＜0.01)，中剂量能明显改善大鼠局灶性脑缺血2h的意识和运动能力(P＜0.05)。
表9改善局灶性脑缺血大鼠神经行为学的作用
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 大鼠神经行为学评分(分，X±SD) |
| 模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | --1.512.06.03.0 | 1010101010 | 1.80±0.421.20±0.63*1.20±0.56*1.40±0.501.60±0.44 |
注：各给药组与模型组比较 *P＜0.05 **P＜0.01。
表9结果显示，大剂量本发明药物注射能显著改善大鼠局灶性脑缺血的神经行为学症状(P＜0.05)。
表10本发明药物注射液减少大鼠脑缺血百分率作用(X±SD)
| 组别 | 剂量×天(mg/kg×d) | 鼠数(只) | 全脑重量(g) | 缺血区重量(g) | 大鼠脑缺血百分率(％) |
| 模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | --1.512.06.03.0 | 1010101010 | 1.74±0.141.65±0.121.82±0.131.84±0.181.77±0.23 | 0.78±0.170.46±0.12**0.44±0.18**0.52±0.20*0.66±0.21 | 45.13±9.3328.20±7.84**24.56±7.35**32.85±8.38*37.39±8.04 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表10结果显示，大、中剂量本发明药物注射能显著和明显降低局灶性脑缺血大鼠缺血区重量和脑缺血百分比(P＜0.01和P＜0.05)，中、小剂量有作用的趋势。
上述局灶性脑缺血大鼠神经功能障碍试验结果显示：
本发明药物大剂量注射能显著改善大鼠局灶性脑缺血2～12h的意识和运动能力(P＜0.01)；还能显著改善大鼠局灶性脑缺血的神经行为学症状(P＜0.05)。中剂量注射能明显改善大鼠局灶性脑缺血2h的意识和运动能力(P＜0.05)；大剂量注射和中剂量注射能显著和明显降低局灶性脑缺血大鼠缺血区重量和脑缺血百分比(P＜0.01和P＜0.05)，中、小剂量有作用的趋势。
3改善小鼠微循环试验
3.1试验材料
3.1.1药品
本发明药物：按照上述实施例4的配方和方法制得的水针，发明人自制。
阳性对照药：舒血宁注射液，北京双鹤高科天然药物有限公司生产，批号：050618，规格：5ml×10支，每支含总黄酮苷4.2mg，含银杏内酯A 0.3mg，合计含4.5mg提取物/5ml。
阴性对照药：0.9％NaCl，四川科伦药业股份有限公司生产，批号：A050506。
盐酸肾上腺素注射液(Adr)：上海禾丰制药有限公司出品，批号：0503027，规格：1mg/1ml×10支。临用时用生理盐水配成0.1％(v/v)溶液备用。
3.1.2仪器
XSN-H生物显微镜，重庆光电仪器有限公司出品。
BI-2000医学图像分析系统，泰盟科技有限公司出品。
3.1.3试剂
戊巴比妥钠：佛山市化工实验厂进口分装，AR级，25g/瓶，批号：030526。用蒸馏水配成1％溶液。
3.1.4动物
昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g，健康一级动物，由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(川)2004-11。试验时在成都中医药大学实验动物中心实验动物观察室饲养及观察。使用许可证：SCXK(川)2004-049。
3.2方法和结果
取昆明种小鼠60只，体重18～22g，随机分为6组，分别为：空白对照组、模型组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。每组10只，雌雄各半。实验时分别腹腔注射0.3％戊巴比妥钠0.1ml/10g麻醉，然后将小鼠俯卧位固定在小鼠观察台上，滴加少许香柏油于耳廓表面，使耳廓平铺于耳拖上，置显微镜载物台上。尾静脉注射0.1％Adr 10ml/kg，同时按表11所示药物和剂量尾静脉注射给药一次，然后用40倍镜观察给药前及给药后1min、5min、10min、15min耳廓微循环的微血管管径、血液流态(参照表12评分标准)、血液流速及毛细血管开放数量的情况，实验结果见表13～17。
表11对局灶性脑缺血大鼠神经功能障碍的保护作用-给药方案
| 组别 | 受试药物 | 药物浓度(mg/ml) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(mg/kg) | 临床倍数(倍) | 给药途径 |
| 空白对照组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | -0.9％NaCl舒血宁注射液本发明药物注射液本发明药物注射液本发明药物注射液 | --0.3751.360.680.34 | -1010101010 | ---1.51263 | --201894.5 | -i.vi.vi.vi.vi.v |
表12血液流态评分标准
| 分级 | 0级 | 1级 | 2级 | 3级 | 4级 | 5级 | 6级 |
| 流速分值 | 线流0分 | 线粒流1分 | 粒线流2分 | 粒流3分 | 粒缓流4分 | 粒摆流5分 | 停流6分 |
表13本发明药物注射液对小鼠耳廓毛细血管网交点开放数的影响(x±SD)
| 组别 | 剂量×次(mg/kg×次) | 鼠数(只) | 耳廓微循环毛细血管网点开放数(个/视野) | ||||
| 滴加Adr前 | 滴加Adr后1min | 滴加Adr后5min | 滴加Adr后10min | 滴加Adr后15min | |||
| 空白对照组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.5×113.6×16.8×13.4×1 | 101010101010 | 12.7±1.711.84±1.9712.7±1.5912.63±1.5712.48±1.3912.58±1.65 | 12.54±1.325.51±2.23△△△8.11±1.56**7.85±1.34*7.23±0.896.85±1.05 | 12.56±1.677.56±1.87△△△10±1.64**10.06±1.36**9.35±1.129.04±1.25 | 12.52±1.469.04±2.1△△△11.17±1.53*11.08±1.04*10.53±1.5410.05±1.11 | 12.34±1.1412.47±1.7812.61±1.4412.22±1.8311.85±1.3412.14±1.31 |
注：①模型组与对照组比较 △P＜0.05 △△P＜0.01；
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01。
表13显示，12mg/kg本发明药物注射液能明显促进注射盐酸肾上腺素后1min、5min小鼠耳廓毛细血管网交点开放数(P＜0.05)。
表14本发明药物注射液对小鼠耳廓微循环血液流速的影响
| 组别 | 剂量×次(mg/kg×次) | 鼠数(只) | 耳廓微循环血液流速(μm/s，x±SD) | ||||
| 滴加Adr前 | 滴加Adr后1min | 滴加Adr后5min | 滴加Adr后10min | 滴加Adr后15min | |||
| 空白对照组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.5×113.6×16.8×13.4×1 | 101010101010 | 754.26±42.01756.55±38.43744.62±51.79752.65±40.84755.36±38.89753.25±42.96 | 761.26±44.19319.04±49.7△△△378.18±72.25**383.38±40.49**353.50±43.86351.55±34.39 | 759.12±50.14385.97±55.6△△△463.55±48.88**448.46±58.23*432.43±55.11417.12±54.21 | 762.04±46.26501.5±40.74△△574.36±54.66**553.94±35.32*534.38±41.91529.53±31.80 | 764.63±48.03650.14±32.18△△680.03±52.56675.03±38.18667.04±43.53646.39±48.71 |
注：①模型组与对照组比较 △△△P＜0.001；
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01。
表14显示，12mg/kg本发明药物注射液在滴加Adr后5min、10min能明显对抗肾上腺素所致小鼠耳廓微血管收缩，加快血流速度(P＜0.05)。
表15本发明药物注射液对小鼠耳廓微循环血液流态的影响
| 组别 | 剂量×次(mg/kg×次) | 鼠数(只) | 耳廓微循环血液流态(分，x±SD) | ||||
| 滴加Adr前 | 滴加Adr后1min | 滴加Adr后5min | 滴加Adr后10min | 滴加Adr后15min | |||
| 空白对照组模型组阳性对照组同剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.5×113.6×16.8×13.4×1 | 101010101010 | 0±00±00±00±00±00±0 | 0±02.8±0.422△△2.3±0.483*2.3±0.534*2.5±0.5342.6±0.524 | 0±02.4±0.516△△△1.7±0.483**1.8±0.593*1.8±0.306*2.0±0.444 | 0±01.7±0.483△△1.1±0.316**1.1±0.458*1.3±0.4391.5±0.548 | 0±00.4±0.516△0.1±0.3160.4±0.5110.4±0.5110.4±0.511 |
注：①模型组与对照组比较 △△△P＜0.01；
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01。
表15显示，12～6mg/kg本发明药物注射液在滴加Adr后5min～10min能明显改善肾上腺素所致小鼠耳廓微循环血流速度减慢(P＜0.05)。
表16本发明药物注射液对小鼠耳廓微循环第三级动脉血管管径的影响
| 组别 | 剂量×次(mg/kg×次) | 鼠数(只) | 耳廓微循环第三级动脉血管管径(μm，x±SD) | ||||
| 滴加Adr前 | 滴加Adr后1min | 滴加Adr后5min | 滴加Adr后10min | 滴加Adr后15min | |||
| 空白对照组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.5×113.6×16.8×13.4×1 | 101010101010 | 12.864±1.68412.928±1.21912.833±1.72512.784±1.38513.101±1.39212.890±1.496 | 12.886±1.4926.551±0.916△△△7.896±1.362*7.859±1.374*7.113±1.7587.107±1.439 | 12.833±2.1078.278±1.026△△△9.655±1.035**9.732±1.132**9.085±0.9979.231±1.084 | 12.96±2.31710.163±0.93△ △12.3451±.487***11.873±1.237**11.338±1.21811.073±1.087 | 12.728±1.71612.919±1.41812.444±1.34712.311±1.78413.084±1.78312.845±1.793 |
注：①模型组与对照组比较 △△P＜0.01 △△△P＜0.001；
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01。
表16显示，12mg/kg本发明药物注射液在滴加Adr后1min～10min能明显对抗肾上腺素所致小鼠耳廓微动脉血管收缩(p＜0.05)。
表17本发明药物注射液对小鼠耳廓微循环第三级静脉血管管径的影响
| 组别 | 剂量×次(mg/kg×次) | 鼠数(只) | 耳廓微循环第三级静脉血管管径(μm，x±SD | ||||
| 滴加Adr前 | 滴加Adr后1min | 滴加Adr后5min | 滴加Adr后10min | 滴加Adr后15min | |||
| 空白对照组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组 | ----1.5×113.6×16.8×13.4×1 | 101010101010 | 23.164±1.65823.439±2.12123.846±1.45623.547±2.38423.665±2.95323.285±1.889 | 22.856±1.69312.076±2.005△△△15.046±1.34**14.274±1.382*13.657±1.08413.332±1.143 | 22.889±1.72214.32±2.083△△△17.741±1.093***16.637±1.328**15.887±1.496*14.923±1.338 | 22.988±1.52519.49±1.974△△△21.701±2.198*21.563±1.665*18.747±1.46318.001±1.324 | 23.021±1.54221.789±0.827△22.779±1.82922.469±1.09821.778±1.34521.342±1.204 |
注：①模型组与对照组比较 △P＜0.05 △△△P＜0.001；
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表17显示，12～6mg/kg本发明药物注射液在滴加Adr后1min～10min能显著或明显对抗肾上腺素所致小鼠耳廓微静脉血管收缩(P＜0.01或p＜0)。
上述改善小鼠微循环试验结果显示：
本发明药物注射具有改善小鼠耳廓微循环功能，能明显促进注射盐酸肾上腺素后小鼠耳廓毛细血管网交点开放数，能明显对抗肾上腺素所致小鼠耳廓微血管收缩，微静脉血管收缩血，血流速度减慢，具有扩张微血管和加快血流速度的作用。
4毒性试验：
发明人还以上述实施例4所得的本发明药物注射液(水针)进行了长期毒性试验研究，结果表明：80、40、20mg/kg(高、中、低)三剂量以0.5ml/100g大鼠连续90天腹腔注射给药，各组动物各外观体征均未见异常，饲料消耗和体重增长均正常。对部分脏器系数的影响无明显的量效关系，相应脏器的病理组织镜检也未见异常，提示这种影响不是药物的毒性反应所致。对血清钾、钠、氯离子也有一定影响，但这种影响产生的变化值均很小且都在正常范围内波动，无生物学意义。
结论：在80mg·kg-1以下剂量大鼠连续90天腹腔注射给药是安全的。
Claims (10)
1.一种药物组合物，它主要由下述重量份配比的中药提取物制成：
人参或人参茎叶总皂苷提取物1-20份，灯盏细辛总黄酮提取物1-20份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物1-20份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的各提取物的重量份配比为：
人参或人参茎叶总皂苷提取物2-15份，灯盏细辛总黄酮提取物2-15份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物2-15份。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的各提取物的重量份配比为：
人参或人参茎叶总皂苷提取物5-10份，灯盏细辛总黄酮提取物5-10份，灯盏细辛总咖啡酸酯提取物5-10份。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：
所述的人参或人参茎叶总皂苷提取物，是从中药材人参或人参茎叶中提取制得的主要含总皂苷的物质，其中总皂苷含量为50％以上；
所述的灯盏细辛总黄酮提取物和灯盏细辛总咖啡酸酯提取物，都是从中药材灯盏细辛中提取制得的的物质；其中：灯盏细辛总黄酮提取物主要含有总黄酮类物质，其总黄酮含量为50％以上；灯盏细辛总咖啡酸酯提取物主要含有总咖啡酸酯类物质，其总咖啡酸酯含量为30％以上。
5.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于：所述的人参或人参茎叶总皂苷提取物中总皂苷含量为80％以上。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于：所述的灯盏细辛总黄酮提取物中总黄酮含量为80％以上。
7.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于：所述的灯盏细辛总咖啡酸酯提取物中总咖啡酸酯含量为50％以上。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：所述的灯盏细辛总咖啡酸酯提取物中总咖啡酸酯含量为80％以上。
9.权利要求1-8中任一项所述的药物组合物的医药用途，其特征在于：将其用于制备具有神经保护作用和/或促进神经功能恢复作用的药物。
10.权利要求1-8中任一项所述的药物组合物的医药用途，其特征在于：将其用于制备具有疏通血管作用和/或改善血液流变性作用的药物。
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| CN (1) | CN101249124A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102846735A (zh) * | 2011-07-01 | 2013-01-02 | 贵阳医学院 | 一种防治脑血管疾病的有效组分配伍中药制剂及其制备方法 |
| CN110179843A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-08-30 | 昆明医科大学 | 一种治疗非变应性鼻炎的外用药物组合物 |
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2007
- 2007-12-29 CN CNA2007100510432A patent/CN101249124A/zh active Pending
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|---|---|---|---|---|
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| CN110179843A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-08-30 | 昆明医科大学 | 一种治疗非变应性鼻炎的外用药物组合物 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20080827 |