CN101247824A - 超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物治疗炎性皮肤病损的应用 - Google Patents

超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物治疗炎性皮肤病损的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物在制备用于治疗炎性皮肤病损的外用组合物中的应用，所述病损选自：真皮纤维化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。配制本发明组合物，以获得常用于将外用组合物施涂于皮肤的所有剂型，如乳剂、乳膏、洗剂、硬膏剂或贴剂剂型，或者是可临用前溶于水或生理血清的粉条(powder stick)。

Description

超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物治疗炎性皮肤病损的应用
在真皮或表皮的病损(有时使人丧失劳动能力)中，尽管对有些病损已进行了许多尝试，但目前仍然缺少令人满意的治疗效果：这些病损是真皮纤维化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。
虽然这些病损的起因和起源均不同，但它们包括相似的发病机理，这使得能够开发一种组合物，以生产用于治疗这些病痛，更具体是瘢痕疙瘩和皮肤纤维化(尤其是辐射诱导的纤维化)的皮肤或皮肤美容制剂。
纤维化是非特异性病损，其特征是结缔组织增生和成纤维细胞或纤维细胞增殖，形成胶原。它们转变成主要由结缔组织组成的束，随后产生病理现象或治疗作用。
常常认为，成纤维细胞的激活是这种疾病起源的原因之一。在正常的瘢痕形成过程中，暂时激活成纤维细胞，使其变成成肌纤维细胞，后者增殖和形成胶原基质。
可认为纤维化以某种方式影响的皮肤部分是激活瘢痕形成的信号连续释放的区域，因此产生了异常产量的细胞因子和生长因子，这种异常产量可产生慢性激活作用和长期作用于成肌纤维细胞导致纤维化。
已知的引发因素包括辐射(特别是放疗)和自由基，可通过化疗药如博来霉素加强其作用。
此外，离子化辐射与活组织的相互作用(通过产生自由基)引起了产生炎性反应的生物疾病和病损。
已根据所涉及的各种现象(如包括TGF-β1因子)和可能的治疗方法(如采用基于卤夫酮的治疗)作出了大量假设。
然而，迄今为止，仍然没有令人满意的治疗方法。
瘢痕疙瘩是一种良性皮肤肿瘤，其外观通常为皱褶状，在瘢痕上发生。它是由瘢痕形成区域上发生的纤维组织失控性生长引起的，切除后不会消退。这种类型的瘢痕形成过程失调导致或可能导致肥厚性瘢痕，当瘢痕形成过程的同化或异化代谢阶段之间失去平衡时产生这种现象，导致产生的胶原量大于降解的胶原量，而导致在所有方向上生长出瘢痕。
仅当病损成熟时，瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕之间才显现出主要差异，组织学差异主要是瘢痕疙瘩中存在瘢痕疙瘩胶原。在它们开始形成时，出现炎性阶段，常常是红斑形式。治疗各有不同，主要是预防性治疗：包括敷料、瘢痕形成期间压迫、皮质类固醇、放疗(有很大争议)和干扰素治疗。
也广泛采用手术介入，如冷冻手术和激光治疗。已进行基于给予影响胶原合成的活性分子的治疗尝试，所述分子包括脯氨酸-6-羟基脯氨酸、铃兰氨酸、曲尼斯特(trinilast)或具有抗过敏活性的分子。采用生长因子也获得了满意程度或高或低的结果。
此外，很显然这些不同疾病所涉及的瘢痕形成过程失调可能起源于氧化过程产生的炎性。
由US5080886得知用基于超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的药物组合物预防或治疗心脏手术后再灌注阶段由氧化、缺血或血液凝块引起病损。
另外，2004年的临床试验验证了外用SOD对减少乳腺癌放疗后的纤维化具有优势：参见Campana等，J.Cell.Med.，第8卷，第1期，2004，109-116。
然而，在治疗上述炎性来源的其它病损中没有证实这种优势。
因此，本发明涉及超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物在制备治疗真皮纤维化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕的外用组合物中的应用。
超氧化物歧化酶(SOD)是天然来源的稳定酶：它能在不消耗的情况下产生超氧化物自由基，通常可溶于水。超氧化物歧化酶来自植物，或通过生物技术获得。
过氧化氢酶是能催化过氧化氢释放分子氧的铁卟啉酶。
这些酶称作代谢酶，它们能催化细胞内的反应，如产生能量和解毒。在天然状态下，这些酶常同时存在，因为它们的机制互补。
过氧化氢酶通过攻击游离的过氧化物自由基而保护细胞。
有三种类型的SOD：铜/锌SOD、锰SOD和铁SOD。这些酶保护细胞：SOD Cu/Zn保护胞浆，胞浆中的代谢反应会产生自由基；SOD Mn保护细胞的线粒体，其含有遗传信息并作为细胞能量产生部位起作用。
在本发明制剂中，SOD可以是任何来源的SOD。
大多数植物中天然存在SOD，在提取物、苹果、某些品种的卷心菜、花椰菜、球芽甘蓝或者甚至是卷心菜或瓜类(可任选是转基因植物)，还有辣根中存在SOD，或者SOD可提取自富酶谷物如小麦、玉米、大豆或大麦的种子或芽。
也可通过生物技术产生SOD；例如，它可来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株。
它还可提取自牛或人的红细胞，通过微生物如大肠杆菌(E.coli)或酵母重组合成而产生，或提取自哺乳动物肝脏。
因此，本发明的一个实施方式涉及一种组合物，其特征是其中的超氧化物歧化酶通过生物技术获得，来自(例如)酿酒酵母的天然菌株。
按照本发明，SOD可与聚合物络合或结合，而不降低其酶活性—所述聚合物包括(例如)聚乙二醇或多糖。
能够将过氧化氢转变为水和氧的过氧化氢酶(CAT)可以是任何来源。
过氧化氢酶可以(例如)获自哺乳动物肝提取物，或微生物如黑曲霉(Aspergillusniger)。
它还可获自植物提取物或通过重组合成获得。
与SOD相似，它可与聚合物共价结合或络合，而不降低其酶活性—所述聚合物包括(例如)聚乙二醇或多糖。
可将这两种酶包裹到或掺入聚合物微粒中，该聚合物微粒由(例如)交联的离子型多糖和/或亲水性聚合物组成。
单独或混合的这两种酶制剂能保护酶活性，例如，不与外界环境相互作用，同时能促进靶向、分布，也可为药物制剂。
这两种酶可以冻干形式(如粉末形式)、结晶悬液形式或硫酸铵悬液形式存在。
许多动物或植物提取同时含有这两种酶：例如包括瓜类提取物、卷心菜提取物或哺乳动物肝脏提取物。
按照本发明，无论其来源，SOD/CAT混合物指该提取物含有提取的这两种酶的混合物，或者无论是否经过制备，必须使酶活性比值为14/2-15/5、SOD酶活性为每克10000-16000IU。
过氧化氢酶的活性约为每克1500-4000IU。
可用Spitz，D.和Oberley，L.：An Assay for Superoxide Dismutase Activity inMammalian Tissue Homogenates(哺乳动物组织匀浆物中超氧化物歧化酶活性的测定)，Anal.Biochem.179，8，1989修改的Beauchamp C.和Fridovich I.，AnalyticalBiochemistry 44，276(1971)的方法测定SOD的酶活性。
由于SOD半衰期短，所以该方法是间接方法；该方法通过SOD抑制黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统产生的超氧化物阴离子流的能力评估SOD。
通过ClaiBorne A.，Catalase Activity，CRC Handbook of Methods for oxygen radicalresearch(过氧化氢酶活性：CRC氧自由基研究方法手册)，283-284，1985的方法测定过氧化氢酶的酶活性。
该方法依据过氧化氢酶分解过氧化氢，用UV分光光度计于240nm处监测该过程。
因此，本发明涉及超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物在制备治疗炎性来源皮肤病损的外用组合物中的应用。
本发明涉及上述应用，其特征是所述病损选自：真皮纤维化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶提取自可以任选是转基因植物的苹果、花椰菜、球芽甘蓝、卷心菜或瓜类，或者辣根。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶提取自选自小麦、玉米、大豆或大麦的富酶谷物的种子或芽。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶是通过生物技术获得的。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶获自酿酒酵母菌株。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶提取自牛或人的红细胞或提取自哺乳动物肝脏。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶是由大肠杆菌微生物或酵母重组合成而产生的。
本发明涉及上述应用，其特征是所述超氧化物歧化酶是通过生物技术、由酿酒酵母的天然菌株产生的。
本发明涉及上述应用，其特征是所述过氧化氢酶获自哺乳动物肝脏提取物或微生物如黑曲霉的提取物。
本发明涉及上述应用，其特征是所述过氧化氢酶获自植物提取物。
本发明涉及上述应用，其特征是所述过氧化氢酶是通过重组合成获得的。
本发明涉及上述应用，其特征是单独或混合的所述过氧化氢酶或超氧化物歧化酶共价结合或络合于聚合物。
本发明涉及上述应用，其特征是所述聚合物选自聚乙二醇或多糖。
本发明涉及上述应用，其特征是单独或混合的所述过氧化氢酶或超氧化物歧化酶包裹到或掺入聚合物微粒中。
本发明涉及上述应用，其特征是所述聚合物微粒由交联的离子型多糖和/或亲水性聚合物组成。
本发明涉及上述应用，其特征是单独或混合的所述过氧化氢酶和超氧化物歧化酶是冻干粉末形式、结晶悬液形式或硫酸铵悬液形式。
本发明涉及上述应用，其特征是所述过氧化氢酶和超氧化物歧化酶以天然提取物中的混合物形式存在。
本发明涉及上述应用，其特征是所述天然提取物选自瓜类提取物、卷心菜提取物或哺乳动物肝脏提取物。
本发明涉及上述应用，其特征是所述SOD/CAT混合物的酶活性比值为14/2-15/5、SOD酶活性为每克10000-16000IU。
本发明涉及上述应用，其特征是所述过氧化氢酶活性约为每克1500-4000IU。
用以下配方举例说明本发明：
配方例子：
局部外用于病损处的乳膏。
二壬酸丙二醇酯                6％
丙二醇                        5％
硬脂酸甘油酯和PEG硬脂酸酯     3％
硬脂酸                        3％
黄原胶                        2％
乙二醇                        1％
十六烷酸鲸蜡酯                1％
矿脂                          0.5％
鳄梨油                        1％
液体石蜡                      2％
三乙醇胺                      0.67％
山梨酸钾                      0.2％
防腐剂                        0.3％
精油(橙花油)
SOD/CAT混合物                 2％
水                            qs
所用SOD/CAT混合物是提取自各种欧洲油菜(Brassica napus)的混合物。
通过上述方法评估该SOD的酶活性，约为每克14 000IU。
通过上述方法评估该过氧化氢酶的酶活性，为3000IU。
在另一个例子中，用瓜类提取物：拜诺公司(Bionov)以商品名爱初梅尔(Extramel)出售的稳定化提取物提供所述SOD/CAT混合物。
通过上述方法评估该SOD的酶活性，约为每克14000IU。
通过上述方法评估该过氧化氢酶的酶活性，为2000IU。
在另一个例子中，用含有获自生物技术研究公司(Biotics Research Corporation)出售的植物提取物的SOD和过氧化氢酶的混合物提供所述SOD/CAT混合物。
通过上述方法评估该SOD的酶活性，约为每克14500IU。
通过上述方法评估该过氧化氢酶的酶活性，为2500IU。
在另一个例子中，按照所需的最终酶活性，即SOD为14000IU/克和过氧化氢酶为3000IU/克，制备提取自大肠杆菌的冻干粉末形式的SOD(2500IU/mg)和提取自黑曲霉的冻干形式的过氧化氢酶(170IU/mg)的混合物，从而提供所述SOD/CAT混合物。
配制本发明组合物，以提供常规用于将组合物外用于皮肤的所有药学形式。
将它们配制成(例如)乳剂、乳膏、洗剂、硬膏剂或贴剂形式，或者为条形，或者是可在临用前溶于水或生理血清的粉末。
本发明组合物可任选地含有各种添加剂，如悬浮剂，乳化剂，阴离子型、阳离子型、非离子型或两性聚合物，蛋白质，维生素，表面活性剂，矿物油，植物油，蜡，有机硅树脂和/或橡胶，增稠剂，酸化剂或碱化剂，溶剂，pH稳定剂，UV保护剂，防腐剂，抗菌剂和抗真菌剂，香料或美容学或皮肤病学采用的其它常用佐剂。

Claims (21)

1.超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的混合物在制备治疗炎性来源皮肤病损的外用组合物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病损选自：真皮纤维化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。
3.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶提取自可以任选是转基因植物的苹果、花椰菜、球芽甘蓝、卷心菜或瓜类，或者辣根。
4.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶提取自选自小麦、玉米、大豆或大麦的富酶谷物的种子或芽。
5.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶是通过生物技术获得的。
6.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶获自酿酒酵母菌株。
7.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶提取自牛或人的红细胞或提取自哺乳动物肝脏。
8.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶是由大肠杆菌微生物或酵母重组合成而产生的。
9.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶是通过生物技术、由酿酒酵母的天然菌株产生的。
10.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述过氧化氢酶获自哺乳动物肝脏提取物或微生物如黑曲霉的提取物。
11.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述过氧化氢酶获自植物提取物。
12.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述过氧化氢酶是通过重组合成获得的。
13.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，单独或混合的所述过氧化氢酶和超氧化物歧化酶共价结合或络合于聚合物。
14.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述聚合物选自聚乙二醇或多糖。
15.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，单独或混合的所述过氧化氢酶或超氧化物歧化酶包裹到或掺入聚合物微粒中。
16.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述聚合物微粒由交联的离子型多糖和/或亲水性聚合物组成。
17.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，单独或混合的所述过氧化氢酶和所述超氧化物歧化酶是冻干粉末形式、结晶悬液形式或硫酸铵悬液形式。
18.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述过氧化氢酶和所述超氧化物歧化酶以天然提取物的混合物存在。
19.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述天然提取物选自瓜类提取物、卷心菜提取物或哺乳动物肝脏提取物。
20.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述SOD/CAT混合物的酶活性比值为14/2-15/5、SOD酶活性为每克10000-16000IU。
21.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述过氧化氢酶活性约为每克1500-4000IU。
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