CN101244267A - 一种增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明属生物技术领域，涉及一种可作药物作用的β－葡聚糖寡糖－微生物疫苗免疫制剂，本发明以人工合成β－葡聚糖寡糖作为佐剂，与微生物疫苗制成免疫制剂，能增强微生物灭活疫苗、蛋白疫苗或亚单位疫苗稳定性和免疫原性。实验结果显示，本发明免疫制剂可增强疫苗诱导的体液免疫应答和细胞介导的TH2类免疫应答以及增强病毒蛋白诱导的体液免疫应答，免疫效果明显高于蛋白疫苗或灭活疫苗。
Description
技术领域
本发明属生物技术领域，涉及增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，具体涉及一种β-葡聚糖寡糖-微生物疫苗免疫制剂。
技术领域
微生物疫苗包括微生物灭活疫苗和蛋白亚单位疫苗，在防治多种微生物感染疾病中起着非常重要的作用。为了提高疫苗的免疫效果或改变疫苗免疫应答的类型，往往在疫苗中加入佐剂。
疫苗的免疫效果往往需要一种与之相匹配的佐剂才能更好地发挥疫苗抗感染的特性。目前国外已经试验的佐剂有100多种。常用的佐剂包括铝胶、矿物油、灭活细菌和化学合成物质等，免疫佐剂的研究逐渐成为疫苗研究的重要内容之一。经典的氢氧化铝佐剂是目前批准人用疫苗最常用的佐剂，但很难满足现代各种新型疫苗的需要和发展。氢氧化铝佐剂具有高效吸附水溶性抗原，缓慢释放不断刺激机体产生体液免疫，主要用于白喉、破伤风、麻疹等疫苗。然而，氢氧化铝佐剂在注射部位缓慢释放抗原的效应较低，对很多抗原效果不确实。此外，在研的佐剂还有矿物油、天然的微生物产物或合成的微生物产物衍生物、皂苷类(Quil A，ISCOMs)。
不同来源的多糖或者寡糖具有很强的免疫调节作用，可通过与宿主细胞特别是巨噬细胞和树突状细胞表面的受体相互作用并激活细胞的活性产生免疫调节活性。香菇和灵芝作为食物和药物在中国被广泛的应用，最近的研究发现从香菇和灵芝中提取的香菇多糖和灵芝多糖具有抗感染，抗肿瘤和免疫调节等广泛的作用，这些作用的发挥是通过激活天然免疫应答中的巨噬细胞和树突状细胞等以及增强细胞介导的免疫应答，但是天然多糖的提取存在产量低、纯度不高等缺陷，在应用上存在一定的限制。
目前可以通过人工合成的方法获得具有药用作用的寡糖(“可作药物的寡糖及其硫酸化产物和它们的制备方法及含该寡糖的药物组合物”01136237.5宁君；孔繁祚；顾建新)。人工合成的香菇多糖和灵芝多糖的基本结构单位β-葡聚糖寡糖，以β-(1→3)连接为主链，β-(1→6)连接为侧链的寡糖及其类似物，该产品无毒性、无刺激性并具有良好的水溶性，具有抗肿瘤、抗病毒如抗人类免疫缺损病毒(HIV)的作用，以及提高机体天然免疫力的作用。人工合成寡糖具有合成容易，纯度高以及产量高的优势。
发明内容
本发明的目的是提供一种有效增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂。具体涉及一种β-葡聚糖寡糖-微生物疫苗免疫制剂。
本发明采用β-葡聚糖寡糖和微生物疫苗制成免疫制剂，其中，β-葡聚糖寡糖∶微生物疫苗为25-100∶1。
所述的β-葡聚糖寡糖为药用级人工合成β-葡聚糖寡糖(01136237.5)，是以β-(1→3)连接为主链，β-(1→6)连接为侧链的寡糖及其类似物。
所述的微生物疫苗是灭活微生物疫苗、蛋白疫苗或亚单位疫苗，尤其是经非消化道注射的疫苗。
本发明将人工合成的β-葡聚糖寡糖作为免疫佐剂，与灭活疫苗或蛋白疫苗或亚单位疫苗联合制成免疫制剂，能明显增强疫苗的稳定性和免疫原性。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
采用人工合成的寡糖[β-(1→3)连接为主链，β-(1→6)连接为侧链]与微生物疫苗按25-100∶1比例配制，制备成人工合成的β-葡聚糖寡糖-疫苗免疫制剂。
本发明人工合成β-葡聚糖寡糖-疫苗免疫制剂其中所述的β-葡聚糖寡糖的浓度可根据不同疫苗进行调节。
本发明所述的人工合成的β-葡聚糖寡糖的优点是其合成相对容易，产量高而且纯度高，而且人工合成的寡糖的可修饰性，可以根据需要对合成的寡糖进行修饰。同时人工合成β-葡聚糖寡糖将灭活疫苗蛋白连接，具有独特的增强疫苗免疫原性的佐剂作用，可诱导全身免疫应答，特别是诱导有效的TH2类免疫应答，产生高滴度的中和抗体。
附图说明
图1是免疫小鼠血清抗乙型肝炎病毒表面抗原的抗体效价图。
图2是免疫小鼠脾脏淋巴细胞特异性刺激后Th1和Th2类细胞因子的分泌图，
其中：PBS＝磷酸缓冲液，G＝β-葡聚糖，H＝HBsAg，F＝福氏佐剂。
具体实施方式
实施例1
制备人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂
采用药用级人工合成β-葡聚糖寡糖溶于磷酸缓冲液，0.01M PBS，PH7.2，配制成10mg/ml。按25∶1(W/W)加入乙肝疫苗(HbsAg，为亚单位疫苗，北京生物制品研究所)，混匀，置4℃孵育24小时，即得人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂。
实施例2
制备人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂
采用药用级人工合成β-葡聚糖寡糖溶于磷酸缓冲液，0.01M PBS，PH7.2，配制成10mg/ml。按50∶1(W/W)加入乙肝疫苗，混匀，置4℃孵育24小时。即得人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂。
实施例3
制备人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂
采用药用级人工合成β-葡聚糖寡糖溶于磷酸缓冲液，0.01M PBS，PH7.2，配制成10mg/ml。按100∶1(W/W)加入乙肝疫苗，混匀，置4℃孵育24小时。即得人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂。
实施例4
制备人工合成β-葡聚糖寡糖-灭活SARS冠状病毒疫苗免疫制剂
采用人工合成β-葡聚糖寡糖溶于磷酸缓冲液，0.01M PBS，PH7.2，配制成10mg/ml。按25∶1(W/W)与灭活的SARS冠状病毒液(CGMCC No.0977，ZL200410017527.1)配置，置4℃孵育24小时，获得人工合成β-葡聚糖寡糖-灭活SARS冠状病毒免疫制剂。
实施例5
β-葡聚糖寡糖增强乙肝疫苗诱导的体液免疫应答试验
免疫接种的小鼠为4～6周的Balb/c小鼠，通过注射的方法接种200μl人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg蛋白疫苗免疫制剂(25-100μg∶1μgHBsAg/只)，于第30天加强免疫一次，方法剂量同前。自第4周开始每隔一周经眼静脉采血，分离血清，用ELISA检测血清中抗-HBs的抗体滴度和抗体亚类。结果显示与HBsAg单独免疫组相比，人工合成β-葡聚糖寡糖-HBsAg免疫小鼠后能够增强HBsAg蛋白疫苗诱导的抗-HBs IgG抗体滴度，而且抗体亚类以IgG1类为主，抗-HBs IgG1的滴度以及IgG1和IgG2a的比例也明显比单独免疫组要高。提示所述寡糖具有佐剂样的作用能增强HBsAg蛋白疫苗诱导的体液免疫应答。
表1是免疫小鼠血清中抗-HBs抗体的亚类。
表1.
实施例6
增强HBsAg蛋白疫苗诱导的特异性细胞免疫应答试验
免疫小鼠在加强免疫后的第2周，处死小鼠，分离小鼠的脾淋巴细胞，体外用HBsAg刺激，利用ELISPOT方法检测HBsAg特异性脾淋巴细胞分泌Th1类(IFN-γ)和TH2类(IL-4)细胞因子的能力。结果显示：体外受HBsAg刺激后，β-葡聚糖寡糖-HBsAg免疫小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子IL-4的能力明显要高于HBsAg单独免疫组，而两组免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ的能力相同，提示β-葡聚糖寡糖能够增强HBsAg蛋白疫苗诱导的TH2类的免疫应答，但是对TH1类免疫应答并没有明显影响。
实施例7
β-葡聚糖寡糖增强SARS冠状病毒疫苗的免疫原性试验
β-葡聚糖寡糖-SARS冠状病毒(G250)灭活疫苗免疫制剂(100μg β-葡聚糖寡糖：4μg SARS冠状病毒/只)，注射免疫Balb/c小鼠，4周后加强免疫1次，共免疫2次。第2次将强免疫后2周将小鼠处死，取血分离血清，保存于-70℃，待检。检测抗-SARS冠状病毒的中和抗体；结果显示β-葡聚糖寡糖-灭活疫苗制剂的免疫效果明显高于灭活疫苗，其诱导产生血清中和抗体效价(1∶10000)高于单独灭活疫苗(1∶2000)。
Claims (6)
1. 一种增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，其特征是由β-葡聚糖寡糖和微生物疫苗组成，其中，β-葡聚糖寡糖：微生物疫苗为25-100∶1。
2. 根据权利要求1所述的增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，其特征是所述的β-葡聚糖寡糖是药用级人工合成β-葡聚糖寡糖，其结构是以β-(1→3)连接为主链，β-(1→6)连接为侧链的寡糖及其类似物。
3. 根据权利要求1所述的增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，其特征是所述的微生物疫苗是灭活微生物疫苗、蛋白疫苗或亚单位疫苗。
4. 根据权利要求1或3所述的增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，其特征是所述的微生物疫苗是经非消化道注射的疫苗。
5. 根据权利要求1所述的增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，其特征是所述的β-葡聚糖寡糖作为免疫佐剂。
6. 根据权利要求1或5所述的增强微生物疫苗免疫原性的免疫制剂，其特征是所述的β-葡聚糖寡糖的浓度根据不同疫苗进行调节。
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Cited By (5)
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|---|---|---|---|---|
| CN102988981A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-27 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种增强爱德华氏菌疫苗免疫接种效果的佐剂及使用方法 |
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102988981A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-27 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种增强爱德华氏菌疫苗免疫接种效果的佐剂及使用方法 |
| CN102988981B (zh) * | 2012-12-13 | 2015-03-04 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种增强爱德华氏菌疫苗免疫接种效果的佐剂及使用方法 |
| CN104174016A (zh) * | 2014-08-25 | 2014-12-03 | 华中科技大学 | 一种含融合蛋白a1d3r1的结核病亚单位疫苗 |
| CN104225586A (zh) * | 2014-08-25 | 2014-12-24 | 华中科技大学 | 一种含融合蛋白a1d4的结核病亚单位疫苗 |
| CN105749290A (zh) * | 2016-04-11 | 2016-07-13 | 苏州康聚生物科技有限公司 | 一种含有以β-葡聚糖为辅料的蛋白质药物制剂 |
| CN110237249A (zh) * | 2018-03-09 | 2019-09-17 | 南开大学 | 特异靶向树突状细胞的新型铝佐剂及在疫苗制备上的应用 |
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