CN105327345A - 一种疫苗佐剂以及包含该佐剂的疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物化学技术领域，具体公开了一种疫苗佐剂以及包含该佐剂的疫苗。所述的疫苗佐剂为小分子化合物，具有式(Ⅰ)所示的结构。该疫苗佐剂能有效地增强流感病毒灭活疫苗的免疫效果，并且对小鼠的无毒性；可以作为流感病毒灭活疫苗的一种有效的佐剂。

Description

一种疫苗佐剂以及包含该佐剂的疫苗
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种疫苗佐剂以及包含该佐剂的疫苗。
背景技术
流感病毒引起的急性呼吸系统疾病传播迅速，具有高发病率和死亡率的特点。根据核蛋白(NP)和基质蛋白(M1)的不同可分为甲型、乙型和丙型。上个世纪曾经爆发过多次全球性流感大流行，最为严重的一次是发生于1918～1919年的西班牙流感，该流感的流行毒株为最常见的甲型H1N1，至少2千万人死亡。目前，预防流感病毒最有效、最经济的手段是接种流感疫苗。然而，疫苗的有效性受多种因素影响并且每年不同。流感疫苗主要基于表面糖蛋白抗原血凝素(HA)的保守区域。HA的抗原漂移具有高塑性，因此需要开发新的抗原，利用佐剂增强疫苗自身的免疫原性。普通流感疫苗虽然能够激发有效的针对病毒的抗体，但是对于免疫系统不完善的幼儿、免疫力低下的人，及老年人，长期反复的感染常常导致严重的、不可逆转的呼吸器官损伤，诱发呼吸系统功能衰竭，后果严重。因此，开发一种免疫佐剂具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中疫苗佐剂的种类不足，提供一种疫苗佐剂。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
本发明提供一种疫苗佐剂，所述的疫苗佐剂为小分子化合物(命名为SZU-101)，具有式(Ⅰ)所示的结构；
一种疫苗佐剂，它包含式(Ⅰ)所示的化合物。
优选地，所述的疫苗佐剂为流感疫苗佐剂。
更优选地，所述的疫苗佐剂为H1N1流感疫苗佐剂。
优选地，所述的疫苗佐剂的剂型为生理上可接受的液体制剂、乳液制剂或冻干制剂。
具有式(Ⅰ)所示的结构的化合物(命名为SZU-101)作为疫苗佐剂的应用。
优选地，所述的疫苗佐剂为流感疫苗佐剂。
更优选地，所述的疫苗佐剂为H1N1流感疫苗佐剂。
本发明还提供一种疫苗，它包含具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂。
优选地，所述的疫苗，由具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂和抗原偶联而成。
更优选地，所述的疫苗，由具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂和流感疫苗偶联而成。
最优选地，所述的疫苗，由具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂和H1N1流感疫苗偶联而成。
以上所述的偶联是采用本领域常规手段而实现。
具有式(Ⅰ)所示的结构的化合物在制备流感疫苗中的应用。
有益效果：本发明提供了一种新型的疫苗佐剂，该疫苗佐剂能有效地增强流感病毒灭活疫苗的免疫效果，并且对小鼠的无毒性；因此，SZU-101可以作为流感病毒灭活疫苗的一种有效的佐剂。实施例结果显示SZU-101偶联流感疫苗(Flu-T7)能显著增强血清抗体效价，且高于单独疫苗组，并且促进小鼠特异性Th1型免疫反应，各组小鼠脾脏指数差异无统计学意义(P>0.05)，说明SZU-101作为疫苗佐剂具有良好的安全性及有效性。
附图说明
图1为Flu-T7激活T细胞诱导细胞因子实验结果图。其中图1A为SZU-101(T7)的结构式；图1B为Flu-T7对比于单独Flu组，产生的IL-12细胞因子水平图；图1C为Flu-T7对比于单独Flu组，产生的IFN-γ细胞因子水平图；图1D为Flu-T7对比于单独Flu组，产生的TNF-α细胞因子水平图；图1E为Flu-T7对比于单独Flu组，产生的IL-6细胞因子水平图。
图2为免疫小鼠的血清抗体反应实验结果图。图2A为分别于第7天、21天、35天尾静脉采血结果图；图2B为从第二次免疫开始，Flu-T7的抗体效价图；图2C为IgG1亚类的含量图；图2D为IgG2a亚类的含量图；图2E为Ig2a/IgG1的比例图。
图3为安全性实验结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
本实施例中的小鼠为SPF级BALB/c小鼠，雌性，4-6周，购于广东省医学动物实验中心。
H1N1流感病毒灭活疫苗(Flu)由北京科兴生物制品有限公司惠赠。
具有式(Ⅰ)所示的结构小分子化合物SZU-101(简称T7)由本实验室自行合成纯化；已发表文章，参见：ZhuJ,HeS,DuJ,WangZ,LiW,ChenX,JiangW,ZhengD,JinG.LocaladministrationofanovelToll-likereceptor7agonistincombinationwithdoxorubicininducesdurabletumouricidaleffectsinamurinemodelofTcelllymphoma.JHematolOncol.2015Mar4；8(1):21.
SZU-101偶联流感疫苗(Flu-T7)由本实验室偶联合成；方法参见：GaoD,LiuY,LiW,ZhongF,ZhangX,DiaoY,GaoN,WangX,JiangW,JinG.SynthesisandimmunoregulatoryactivitiesofconjugatesofaToll-likereceptor7inertligand.BioorgMedChemLett.2014,24(24):5792-5.
实施例1Flu-T7激活T细胞诱导细胞因子
为了评价本发明具有式(Ⅰ)所示的结构小分子化合物SZU-101(简称T7)作为流感疫苗佐剂的活性。本实施例利用小鼠淋巴细胞分离液，提取小鼠脾脏中的淋巴细胞，1*105个淋巴细胞/孔种在24孔板中，淋巴细胞分别孵育1μg/ml，5μg/ml，10μg/ml的Flu或者Flu-T7，细胞培养箱培养24小时。收集上清，利用ELISA试剂盒检测IFN-γ、IL-2、IL-12、TNF-α细胞因子水平。
结果如图1显示，Flu-T7对比于单独Flu组，产生更多的IL-12(图1B)、IFN-γ(图1C)、TNF-α(图1D)、IL-6(图1E)的表达(P<0.05)。这些结果表明，SZU-101偶联流感疫苗(Flu-T7)促进了Th1型和Th2型免疫应答，诱导了细胞免疫和体液免疫的发生。也说明SZU-101可以作为流感病毒灭活疫苗的一种有效的佐剂。
实施例2免疫小鼠的血清抗体反应
为了评价本发明具有式(Ⅰ)所示的结构小分子化合物SZU-101(简称T7)作为流感疫苗佐剂的效果。本实施例采用如下试验：
雌性4-6周龄的Balb/c小鼠随机分为4组，每组8只：①生理盐水；②T7组(1mg/ml)；③Flu(3μg)；④Flu-T7(3μg)。分别于第0天，第14天，第28天免疫3次，每次经腹腔注射，0.1ml/只。量效实验分别在第7天，21天，35天采集小鼠尾巴静脉血(如图2A所示)，分离血清，检测抗体效价。
用ELISA法检测特异性IgG抗体。首先向96孔酶标板各孔中加入100μl包被液(含1μg/ml的Flu)，4℃过夜。取出酶标版，弃孔中包被液后，向孔中加入300μlPBST洗涤3次。血清样品1：500稀释，室温孵育2小时。碱性磷酸酶标记的IgG，IgG1，IgG2a抗体，100μl/孔，室温孵育1小时。加入p-NPP底物溶液显色，100μl/孔，每孔加50μl3MNaOH终止反应，酶标仪测定OD405值。
结果，图2B显示，从第二次免疫开始，Flu-T7的抗体效价高于对比于Flu对照组。IgG根据结果和功能的不同包含不同的亚类，IgG1和IgG2a为最主要的IgG亚类。IgG2a/IgG1的比例结果显示，Flu-T7主要偏属于Th1型，产生IgG2a型抗体。上述结果表明SZU-101可以作为流感病毒灭活疫苗的一种有效的佐剂。
实施例3T7作为流感疫苗佐剂的安全性实验
免疫后第35天，对各组小鼠的脾脏和体重进行称量，计算各组小鼠脾重与体重的比值，结果比值无统计学意义(P>0.05)，见图3。结果表明以T7为佐剂的疫苗对小鼠机体刺激性较少，对其生长并无显著影响。

Claims (10)

1.一种疫苗佐剂，其特征在于，所述的疫苗佐剂为小分子化合物，具有式(Ⅰ)所示的结构；
2.一种疫苗佐剂，其特征在于，所述的疫苗佐剂包含权利要求1中式(Ⅰ)所示的化合物。
3.根据权利要求1或2所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述的疫苗佐剂为流感疫苗佐剂；优选地，所述的疫苗佐剂为H1N1流感疫苗佐剂。
4.根据权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述的疫苗佐剂的剂型为生理上可接受的液体制剂、乳液制剂或冻干制剂。
5.具有式(Ⅰ)所示的结构的化合物作为疫苗佐剂的应用。
6.一种疫苗，其特征在于，包含权利要求1所述的具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂。
7.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，由权利要求1所述的具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂和抗原偶联而成。
8.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，由权利要求1所述的具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂和流感疫苗偶联而成。
9.优选地，根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，由权利要求1所述的具有式(Ⅰ)所示结构的疫苗佐剂和H1N1流感疫苗偶联而成。
10.根据权利要求7所述的疫苗，具有式(Ⅰ)所示的结构的化合物在制备流感疫苗中的应用。
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