CN101244042A - 一种叶酸冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提供一种叶酸冻干粉针剂及其制备方法，由叶酸和甘露醇组成；叶酸与甘露醇的重量比为1∶2.5－10，配方简单、副作用少，而且采取了先进的冷冻干燥工艺，制得的产品外观饱满，复溶性好，品质优良。

Description

一种叶酸冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种叶酸冻干粉针剂及其制备方法，属于药物制剂领域。

背景技术

叶酸是一种水溶性的B族维生素，在绿叶蔬菜、水果及动物肝脏中储存丰富。叶酸参与人体新陈代谢的全过程，是制造红血球不可或缺的物质，有帮助蛋白质代谢的作用，叶酸也是合成人体重要物质DNA的必须维生素，在核酸(DNA、RNA)的制造上扮演重要的角色，是细胞增生中不可缺少的物质，还能促进乳汁分泌、预防贫血。它的缺乏除了可以导致胎儿神经管畸形外，还可使眼、口唇、腭、胃肠道、心血管、肾、骨骼等器官的畸形率增加。根据研究指出在怀孕前开始每天服用400μg的叶酸，可降低70％的新生儿神经管缺陷(NTDs)发生机率。因此，准备怀孕的女性们，应在怀孕前就开始每天服用400μg的叶酸。

叶酸(Folic Acid for Injection，分子式：C₁₉H₁₉N₇O₆，分子量：441.40，)的化学名称：N-[4-[(2-氨基-4-氧代-1，4-二氢-6-蝶啶)甲氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸。其化学结构式如下：

现有技术的叶酸剂型主要有两种，一种为片剂，如申请号为CN97106707.4的中国专利提供了一种用于预防神经管畸形的叶酸增补剂，含小剂量叶酸为0.01-0.4％与含药用载体为99.99-99.60％的任意比例组成100％的组成，按照常规方法将叶酸与药用载体混合后，加粘合剂，制软材，制粒整粒，压片。

另一种剂型为注射液，目前国内只有上海第一生化药业有限公司生产，有1ml∶15mg和2ml∶30mg两种规格，国药准字为H31022473和H31022474，为叶酸、烟酰胺与维生素B12混合制成的灭菌水溶液。含叶酸(C19H19N7O6)与烟酰胺(C6H6N2O)均应为标示量的90.0％～110.0％。

冻干粉针含水量低，稳定，有利于长期贮存，微粒物质少，但目前尚未发现叶酸冻干粉针剂。究其原因，是因为叶酸粉针剂制作困难，由于其水溶性差，溶解度仅为1.6mg/L(25℃)，即使加入碱促使其溶解，冻干所制得的粉针会出现复溶性差、出现混浊等缺点。

有鉴于此，本发明人经过大量实验，对其辅料的选择和冻干工艺进行了改进，终于克服了以上困难，仅加入甘露醇一种辅料，不仅配方简单，避免了因辅料加入过多而带来的副作用，患者使用更安全，而且在传统冻干工艺上就冻干时间、方式等进行了改进，使得配成的制剂外观饱满，为白色疏松块状物或粉末，复溶性好，具有更好的稳定性，同时也因辅料用量的减少而降低产品的生产成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种叶酸冻干粉针剂。

本发明的另一目的在于提供上述叶酸冻干粉针剂的制备方法。

本发明提供的一种叶酸冻干粉针剂，其特征在于，所述粉针剂中由叶酸和甘露醇组成，叶酸与甘露醇的重量比为1∶2.5-10，优选1∶3-7。

其中，每支粉针剂中包括叶酸10-40mg，优选15mg或30mg。

所述粉针剂的规格为15mg∶1ml或30mg∶2ml。

每支粉针剂中包括甘露醇100-200mg，优选每支粉针剂中包括甘露醇100mg。

本发明还提供了上述叶酸冻干粉针剂的制备方法，包括

将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并使其pH值在6.5-8.5，然后搅拌20分钟pH不变后，补加注射用水至甘露醇含量为50-100mg/ml，然后用活性炭粗滤，然后依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，低温冷冻干燥35小时压塞出箱，轧盖。

其中，所述的活性碳浓度为0.005mg/ml。

所述的低温冷冻干燥过程为：

(1)冻结期：

将药品放入冻干箱冷冻，温度为-50℃，时间为100min；

(2)升华期

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-20℃；时间为20小时20min；

(3)干燥期：

将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h。

优选所述的冻结期过程为将药液从室温先冷却至共融点为-20.5℃左右，停止降温过程，使药液内温度自动平衡，消除其内的温度梯度；然后将药液放入已降温至-50℃的冻干箱中，冷冻100分钟。

优选所述的升华期适当地掺入气体，使真空值在10-20Pa内波动，可缩短升华期时间2-3h。

以下是本发明的详细介绍：

首先从处方的筛选来看，由于叶酸在水中几乎不溶，溶解度仅为1.6mg/L(25℃)；沸水中饱和溶液浓度也仅为1％；因此要制作冻干粉针剂，必须先将其先溶于碱溶液中；虽然在CAS中介绍叶酸在氢氧化钠或碳酸钠的稀溶液中易溶，这两种溶液也是粉针剂的常用pH调节剂；但是发明人发现使用这两种溶液所制得的粉针会出现复溶性很差、出现混浊等缺点；而使用碳酸氢钠溶液溶解的话，可有效的改善这种情况。

同时，在辅料的选择上，本发明人遵循在能制备出质量稳定可控、满足临床需要的产品的基础上，辅料的种类、用量越少越好的原则；这是由于辅料种类越少，意味着生产工艺时可大大简化配料步骤；同时可避免各种辅料带来的难以预料的副作用。因此，本发明最终决定仅仅用一种赋形剂；在比较了葡萄糖、氯化钠、右旋糖酐和甘露醇分别作为填充剂的外观效果后，发现甘露醇的效果较好，因此本发明采用甘露醇一种赋形剂，甘露醇主要起支架剂的作用。

由于所用辅料仅有一种，因此叶酸与甘露醇的比例直接决定了冻干粉针的外观、复溶性等性质。经过大量实验，发现只有叶酸与甘露醇的重量比为1∶2.5-10时，产品的外观为疏松块状物，在本发明工艺条件下，复溶性也达到了要求，但是其中部分产品会有略微开缝现象(自上而下看)，但是不分层；虽然品质合格，但是外观不够好，将会影响产品的销售，因此，对其比例进一步优选，当二者比例为1∶3-7时，产品的外观、复溶性、澄清度达到最优。基于人体对叶酸的需求量不大，因此每支粉针剂中最好包括叶酸10-40mg，优选15mg或30mg；常用的规格为15mg∶1ml或30mg∶2ml；其中每支粉针剂中甘露醇含量必须在100mg以上，否则产品外观将会发生萎缩、塌陷；可参见实验例1；基于成本考虑，优选为100-200mg，最优选100mg。

由于本产品所用辅料简单；必然要对工艺从配料到冻干进行种种改进，才能生产出合格产品。对此，发明人付出了种种努力，终于得到以下工艺：

首先，将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并调整其pH值在6.5-8.5，这是因为在此pH范围内，最终产品的相关物质(即杂质)含量最低，结果可参见实验例2。

叶酸全部溶解并调pH后，搅拌20分钟pH不变后；补加注射用水至甘露醇含量为50-100mg/ml，只有在这个浓度范围内，最终产品的外观才为类白色疏松块状物。然后用活性炭粗滤，在此，活性碳浓度的选择至关重要，活性碳的作用在于吸附原辅料中的热原、杂质等，提高产品的纯度和成品率，但用量过大，会吸附主药使主药含量降低，用量过少，最终产品中杂质含量过高，最终产品的澄清度不合格。活性碳的筛选实验见实验例3，最终选择浓度为0.005mg/ml的活性碳。

活性碳过滤后，依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，以彻底除去粉针中的热原，然后滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，冷冻干燥。冷冻干燥是冻干粉针成败的关键，直接影响了产品的各种性能；本发明正是对冷冻干燥技术做了重大改进，才使得辅料如此简单的叶酸冻干粉针剂得以成功。

简而言之，本发明冷冻干燥过程也分为三个过程：预冻、升华和干燥，下面是详细工艺过程：

1、预冻即冻结期

将药品放入已降温至-50℃的冻干箱冷冻，时间为100分钟；

预冻的目的是为了固定产品，以便在真空下进行升华。如果没有冻实，则抽真空时产品会冒出瓶外来，造成喷瓶，没有一定的形状；如果温度过低，则浪费了能源和时间，此外，预冻过程还在很大程度上决定了干燥过程的快慢和冻干产品的质量。

由于本品的共融点为-10.5℃，设计冷冻温度为-50℃，而之所以要将冻干箱预先降温至-50℃，是为了加大药品与冻干机中搁板的温差。在实际操作中，装瓶的药品主要是与冻干机中搁板完成热量交换的。搁板温度低，药品与冻干机中搁板的温差大，降温速率越快，溶液的过冷度和过饱和度愈大，临界结晶的粒度则愈小，成核速度越快，会轻易形成颗粒较多尺寸较小的细冰晶。这些细冰晶升华后，物料内形成的孔隙尺寸较小，虽然之后的干燥速率低，但干后复溶性好。否则，不预先降温的话，降温速率慢，形成大颗粒的冰晶，冰晶升华后形成的水气逸出通道尺寸较大，虽然有利于提高干燥速率，但干后复溶性差。

在时间的选择上，由于预冻温度较低，因此预冻时间较短，为100min，冷冻时间的筛选可参见实验例4表4-1。

冻干箱预先降温所得到的产品复溶性好，产品外观也基本合格，但有少数瓶子的产品略有萎缩，这是由于本发明是采用瓶冻的冻干方法，受热不能做到完全均匀。在降温时，瓶中的药液上下两部分会产生温度梯度差，冰界面由下向上推进的过程中，溶液中溶质向上迁移，导致上表层的溶质往往较多，密度较高，而下底层密度较小，结构疏松。虽然由于设计冷冻温度较低，在很大程度上缩短了结晶时间，同样缩短了溶质迁移时间，大大改善了由于密度差异造成的萎缩情况，但为了达到更好的效果，本发明优选采用三步法预冻，即将药液从室温先冷却至共融点为-20.5℃左右，停止降温过程，使药液内温度自动平衡，消除其内的温度梯度；然后将药液放入已降温至-50℃的冻干箱中，冷冻100分钟，这样可减少瓶中的药液上下两部分会产生温度梯度差，并容易使得药液形成过冷，当能量积累足够时，瞬间全部结晶，所制得的产品复溶性极佳，而且外观饱满、颜色均匀、孔隙致密，比采用直接预冻法产品的外观、澄清度和稳定性更好。可参见实验例4表4-2

2、升华

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-20℃；然后保温，时间总共为20小时20min。

升华期可除去90％左右的水分。

升华温度的选择关系到升华的速度，之所以选择-20℃，而不是更高的更加接近共融点的-18℃、-15℃，是由于升华时，上层物料将率先干燥，如果其温度上升的过快，有可能达到坍塌温度(或称之为崩解温度)，多孔性骨架刚度降低，干燥层内的颗粒出现脱落，会封闭已干燥部分的微孔通道，阻止升华的进行，使升华速率减慢，甚至使下层部分略微萎缩，影响制品残留水分的含量，导致复溶性、稳定性和澄清度同时变差。

此外，保温时间不宜过长，这是由于本发明药液快速冻结产生的小晶体具有很高的表面能，在加热时有可能会发生再结晶，小冰晶之间相互结合形成大冰晶，使其表面积与体积之比达到最小，而大冰晶使冻干品外观不好，复溶性差。

因此，过高温度或过长时间地升华或保温，对本发明均有不利影响，经过大量实验筛选，可参见实验例5，得到升华温度为-20℃，保温时间为20小时20min。

升华期间的压强为10Pa，而不是更低，这是因为压强低虽然有利于产品内冰的升华，但是由于压强太低时对传热不利，产品不易获得热量，升华速率反而降低。但是，当压强太高时，产品内冰的升华速率减慢，产品吸热量降减少。于是产品自身的温度上升，当高于共熔点温度时，产品将发生熔化，造成冻干失败。因此，将压强设定为10Pa，既利于热量的传递又利于升华的进行。

此外，还可以在升华阶段适当地掺入气体，使真空值在10-20Pa内波动，可缩短升华期时间2-3h，这是因为这种办法使热传递方式不再是靠热传导来主打，还增强了热对流的方式，加快了水分解析的速度。

3、干燥

一旦产品内冰升华完毕，即可进入干燥阶段。在该阶段虽然产品内不存在冻结冰，但产品内还存在10％左右的水份，为了使产品达到合格的残余水份含量，必须对产品进一步的干燥。

干燥的过程为将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h。

以上3步的冷冻干燥总时间为35h。

本发明叶酸粉针，配方简单、副作用少，而且采取了先进的冷冻干燥工艺，制得的产品外观饱满，复溶性好，品质优良。

附图说明

图1：本发明工艺流程图

具体实施方式

实施例1

叶酸15g，甘露醇100g，将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并使其pH值在6.5，然后搅拌20分钟pH不变后，补加注射用水至2000ml，然后用浓度为0.005mg/ml活性炭粗滤，然后依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，预冻，时间为100min，

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-25℃；时间为20小时20min，然后将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h，压塞出箱，轧盖。

实施例2

叶酸30g，甘露醇100g，将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并使其pH值在8.5，然后搅拌20分钟pH不变后，补加注射用水至2000ml，然后用浓度为0.005mg/ml活性炭粗滤，然后依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，预冻，时间为100min，

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-25℃；时间为20小时20min，然后将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h，压塞出箱，轧盖。

实施例3

叶酸40g，甘露醇200g，将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并使其pH值在7.0，然后搅拌20分钟pH不变后，补加注射用水至2000ml，然后用浓度为0.005mg/ml活性炭粗滤，然后；然后依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，预冻，时间为100min，

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-25℃；时间为20小时20min，然后将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h，压塞出箱，轧盖。

实施例4

叶酸10g，甘露醇100g，将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并使其pH值在75，然后搅拌20分钟pH不变后，补加注射用水至2000ml，然后用浓度为0.005mg/ml活性炭粗滤，然后；然后依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，预冻，时间为100min，

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-25℃；时间为20小时20min，然后将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h，压塞出箱，轧盖。

实施例5

其它过程同实施例1。

冻结期过程为将药液从室温先冷却至共融点为-20℃左右，停止降温过程，使药液内温度自动平衡，消除其内的温度梯度；然后将药液放入已降温至-50℃的冻干箱中，冷冻100分钟。

升华期过程为适当地掺入气体，使真空值在10-20Pa内波动，可缩短干燥时间2h。

实施例6

其它过程同实施例2。

冻结期过程为将药液从室温先冷却至共融点为-20℃左右，停止降温过程，使药液内温度自动平衡，消除其内的温度梯度；然后将药液放入已降温至-50℃的冻干箱中，冷冻100分钟。

升华期过程为适当地掺入气体，使真空值在10-20Pa内波动，可缩短干燥时间3h。

实验例1

冻干工艺如实施例1，由冻干后情况可见，当样品中甘露醇量达到100g以上，所得产品水溶性好，外观性状为类白色疏松块状，外观饱满，表面平整。因此从生产的方便性及生产成本考虑，甘露醇量加100g为最佳选择。

表1-1规格：15mg处方辅料选择数据表

处方	A	B	C	D	E
						叶酸(g)	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0

甘露醇(g)碳酸氢钠(g)外观性状

30适量萎缩、塌陷

50适量微萎缩

100适量外观饱满

150适量外观饱满

200适量外观饱满

表1-2规格：30mg处方辅料选择数据表

处方	A	B	C	D	E
						叶酸(g)甘露醇(g)碳酸氢钠(g)外观性状	30.040适量萎缩、塌陷	30.050适量微萎缩	30.0100适量外观饱满	30.0150适量外观饱满	30.0200适量外观饱满

实验例2

此实验例为冻干粉针制备过程中pH的筛选实验例，其它组分工艺参数均同实施例1，在制备过程中用适量4％碳酸氢钠溶液将叶酸溶解，并调节pH分别到6.0、6.5、7、8.5、9，pH的测定方法见中国药典2000年版二部。

表2pH值范围试验

	条件	pH值	有关物质(％)	含量(％)
					pH值6.0	冻干前	6.0	0.7	99.9
冻干后	6.0	1.0	98.9
				pH值6.5		冻干前	6.5	0.7	99.9
冻干后	6.5	0.7	99.7
					pH值7.0	冻干前	7.1	0.6	100.9
冻干后	7.0	0.7	100.2
				pH值8.5		冻干前	8.5	0.6	99.6
冻干后	8.5	0.7	99.3
					pH值9.0	冻干前	9.0	0.6	99.9
冻干后	9.0	0.9	99.3

可见，pH在6.5-8.5时有关物质含量最低。

实验例3

本实验例为活性碳浓度的筛选实验。其它组分工艺参数均同实施例2，分别选用不同浓度的注射用活性炭进行吸附，以叶酸含量、澄清度为考察指标，筛选活性炭的用量。澄清度的检查采用中国药典2000年版二部澄清度检查法，结果见表3：

表3活性炭用量筛选试验

活性炭浓度(g/ml)	叶酸含量(％)	澄清度
			0.02	97.8	符合规定
0.01	98.9	符合规定
			0.005	99.5	符合规定
0.003	99.5	有乳光，浑浊
			0	100.0	有乳光，浑浊

由表中得出，0.005g/ml的活性炭可以使冻干液的澄清度合格，对主药吸附较小，并且污染最小，故此选用浓度为0.005(g/ml)的活性炭进行吸附。

实验例4

本实验例为预冻时间和预冻方式的筛选实验。

其它参数同实施例1

表4-1

	第一批	第二批	第三批	第四批
					时间(min)	60	80	100	120
水分(％)	5.1	3.5	2.0	2.3
					有关物质(％)	0.6	0.7	0.7	0.7
性状	喷瓶	微萎缩	类白色疏松块状物	类白色疏松块状物

表4-2

	直接预冻法	三步预冻法
			时间(min)	100	100
水分(％)	2.0	1.7
			有关物质(％)	0.7	0.5
性状	类白色疏松块状物，但有很少部分产品出现微萎缩	类白色疏松块状物
			澄清度	符合规定	符合规定
稳定性	加速试验至少6个月无明显变化	加速试验至少12个月无明显变化

实验例5

本实验例为升华温度和时间的筛选实验。

其它参数同实施例2

	第一批	第二批	第三批	第四批	第五批
						升华温度(℃)	-25	-20	-20	-18	-15
时间(h)	25	20h20min	22	18	17
						水分(％)	4.3	4.2	3.2	4.0	3.9
有关物质(％)	0.6	0.7	0.6	0.7	0.7
						澄清度	合格	合格	乳光	浑浊	浑浊
性状	类白色疏松块状	类白色疏松块状	类白色疏松块状	分层	分层

实验例6：

本实验例是本发明产品的稳定性试验。

实施例1-6的叶酸冻干粉针经温度在40℃±2℃，相对湿度75％±5％放置12个月，加速试验显示其性状、碱度、澄明度、有关物质及含量均未发生明显变化；叶酸冻干粉针经25℃±2℃，相对湿度60％±10％放置18个月试验考察，结果显示其性状、碱度、澄明度、有关物质及含量均未发生明显变化，说明叶酸冻干粉针性质稳定。

Claims (10)

1、一种叶酸冻干粉针剂，其特征在于，所述粉针剂中由叶酸和甘露醇组成，叶酸与甘露醇的重量比为1∶2.5-10，优选1∶3-7。

2、根据权利要求1所述的叶酸冻干粉针剂，其特征在于，每支粉针剂中包括叶酸10-40mg，优选15mg或30mg。

3、根据权利要求2所述的叶酸冻干粉针剂，其特征在于，所述粉针剂的规格为15mg∶1ml或30mg∶2ml。

4、根据权利要求1所述的叶酸冻干粉针剂，其特征在于，每支粉针剂中包括甘露醇100-200mg。

5、根据权利要求4所述的叶酸冻干粉针剂，其特征在于，每支粉针剂中包括甘露醇100mg。

6、权利要求1-5任意一项所述叶酸冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括将适量的注射用水，叶酸和甘露醇混合，搅拌至糊状；缓慢加入4％碳酸氢钠溶液，使其全部溶解，并使其pH值在6.5-8.5，然后搅拌20分钟pH不变后，补加注射用水至甘露醇含量为50-100mg/ml，然后用活性炭粗滤，然后依次经1.0um，0.45um，0.22um的微孔滤膜除菌过滤，滤进无菌室，测定溶液的pH值及叶酸含量，合格后，灌装，压半塞，放入已降温至-50℃的冻干箱中，低温冷冻干燥35小时压塞出箱，轧盖。

7、根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的活性碳浓度为0.005mg/ml。

8、根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的低温冷冻干燥过程为：

(1)冻结期：

将药品放入冻干箱冷冻，温度为-50℃，时间为100min；

(2)升华期

药品冻结后，开动真空机抽真空至10Pa许，关闭冷冻机，给药品升温使冻结品温度升至-20℃；时间为20小时20min；

(3)干燥期：

将药品逐渐升温至0℃，保温真空干燥10h，继续升温至25℃保温真空干燥3h。

9、根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的冻结期过程为将药液从室温先冷却至共融点为-20℃左右，停止降温过程，使药液内温度自动平衡，消除其内的温度梯度；然后将药液放入已降温至-50℃的冻干箱中，冷冻100分钟。

10、根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的升华期适当地掺入气体，使真空值在10-20Pa内波动，可缩短升华期时间2-3h。

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