CN101244040B

CN101244040B - 薯蓣皂苷脂质体及其制剂的制法与用途

Info

Publication number: CN101244040B
Application number: CN2008100871878A
Authority: CN
Inventors: 葛海涛; 张�杰; 陶元明
Original assignee: HUANGHE PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd JIANGSU
Current assignee: HUANGHE PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd JIANGSU
Priority date: 2008-03-20
Filing date: 2008-03-20
Publication date: 2010-08-11
Anticipated expiration: 2028-03-20
Also published as: CN101244040A

Abstract

本发明涉及薯蓣皂苷脂质体及其制剂制法，及其在制备防治心血管病药物中的应用。本发明的薯蓣皂苷脂质体包括下列重量份的组分：1-1000份磷脂、0.5-100份胆固醇、1-200份所述的薯蓣皂苷和20-500份乳化剂。本发明薯蓣皂苷脂质体对光、热稳定性高，可有效延长药物的作用时间。本发明所得薯蓣皂苷脂质体还可以制备成糖衣片剂、糖浆、口服液、滴剂或胶囊剂，与现有工艺相比更简单和经济，并有利于运输和贮存。临床实验证明本发明薯蓣皂苷对冠心病、高脂血症等心血管疾病有显著疗效。

Description

薯蓣皂苷脂质体及其制剂的制法与用途

技术领域

本发明涉及一种中药脂质体及其制剂制备与用途，特别是指薯蓣皂苷脂质体及其制剂的制备方法，以及薯蓣皂苷脂质体制剂在防治心血管病药物中的应用。

背景技术

薯蓣皂苷是薯蓣科值物穿龙薯蓣(Dioscorea Nipponica Makino)根茎的提取物，具有化学结构明确、口服吸收利用度高等特点，并能增加冠脉血流量及心肌营养血流量，对心肌缺血有明显保护作用，缓解心绞痛；调脂、降低血液粘稠度，抑制血小板聚集，改善微循环，防止血栓形成；减轻动脉壁脂质浸润及斑块形成，预防动脉粥样硬化；减少心脏负荷，减少心肌耗氧量，改善心功能。但目前薯蓣皂苷原料药物对光、热不稳定，不易储藏。而且目前薯蓣皂苷制剂主要有片剂和胶囊剂，例如专利号02146284.4的专利中描述了薯蓣皂苷的口服制剂和非肠道给药的剂型，但由于薯蓣皂苷的水溶性较好制备成局部用药制剂则对皮肤、粘膜的渗透性较差，局部药物作用时间及抗菌效果均不理想。

而将一些不稳定异氧化的药物包封在脂质体中，药物因受到脂质体双层膜的保护，在很大程度上提高了药物的稳定性。另外，脂质体作为药物载体已越来越受到重视并得已广泛应用。利用脂质体与生物细胞膜亲合力强的特性，将抗生素包裹在脂质体内可提高抗菌效果。通过脂质体的类脂与角质层脂质相互作用，促进药物的透过，并达到组织深部，由于透过量与粘膜中滞留量的增加，延缓了药物的释放，延长了药物作用的时间。但具体药物的局部作用时间和效果，与脂质体的制备方法，脂质体的组成成份等有关；而针对不同药物活性成分，特别是针对薯蓣皂苷水溶性药物，提高其脂质体的包封率，增加载药量也是一难题。

从薯蓣皂苷用途来看，现有治疗冠心病的薯蓣皂苷药物大多缺乏组织特异性，在体内极易降解，半衰期短或难以进入细胞内，常规剂量的药物病变部位难以达到有效浓度，影响治疗效果。如果能将薯蓣皂苷制成脂质体则能较好地解决上述问题。但是，由于薯蓣皂苷脂质体属于胶体分散系统，属于热力学不稳定体系，其膜材成分磷脂容易发生水解和氧化反应，外界环境的温度、PH值引发脂质体结构的变化，从而引起脂质体中药物的渗漏，影响薯蓣皂苷脂质贮藏过程中的稳定性。这是长期以来一直未能得到很好解决的技术难题。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是上述问题，提供一种渗透能力强的薯蓣皂苷脂质体以及薯蓣皂苷脂质体制剂。

下述为本发明的技术方案为：所述的薯蓣皂苷脂质体包括下列重量份的组分：1-1000份磷脂、0.5-100份胆固醇、1-200份所述的薯蓣皂苷和20-500份乳化剂。

在本发明一较佳实施例中，本发明薯蓣皂苷脂质体包括下列重量份的组分：5-10份磷脂、0.5-2份胆固醇、10-50份薯蓣皂苷和50-100份乳化剂。

其中，所述的磷脂可以是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂等天然磷脂，以及二月桂酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰甘油、二豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰鞘磷脂、1-硬脂酸-2-棕榈酰磷脂酰胆碱和聚乙二醇-2-硬脂酰磷脂酰乙醇胺等合成磷脂中的一种或几种，它们均具有两条疏水链，在水中能自发的形成脂质双分子层，而构成一个封闭的小室。

本发明优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酸(PA)与磷脂酰丝氨酸(PS)中的一种或几种。

而胆固醇的使用，能影响膜的流动性、通透性进而影响膜的稳定性。

本发明所述的乳化剂主要是对脂质体混悬液的均匀性和稳定性有一定作用，并在使用逆向蒸发法时可以得到稳定的初乳。本发明优选泊洛沙姆或吐温80。

上述磷脂、胆固醇、乳化剂与药物的含量配比太小，则影响脂质体的稳定性、包封率和载药量；反之，如磷脂、胆固醇、乳化剂的用量过多，则造成原料浪费且增加成本，其中乳化剂用量过多，还会增加毒性。

本发明的薯蓣皂苷脂质体还可以包括常规用量的相当于脂质体总重量约0.15％的水溶性抗氧化剂和脂溶性抗氧化剂，以防止其在常温下储存时被氧化。

所述的水溶性抗氧化剂可选用但不仅限于亚硫酸盐，如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或硫代硫酸钠等。

而所述的脂溶性抗氧化剂可选用但不仅限于维生素C棕榈酸酯或维生素E。所得到的薯蓣皂苷脂质体的粒径范围为1-6μm。

本发明还提供上述薯蓣皂苷脂质体的制备方法，其可以采用常规的脂质体制备方法，诸如采用注入法、超声分散法、逆相蒸发法等。

本发明的采用薄膜分散法制备薯蓣皂苷脂质体，具体包括如下步骤：

1)将磷脂和胆固醇溶于可挥发有机溶剂中，并在30-50℃下旋转蒸发成膜；

2)将乳化剂溶于pH为6.0-7.5的缓冲液中，再将薯蓣皂苷溶于该缓冲液；

3)将步骤2)所得的溶液加入步骤1)制得的膜中，混合搅拌得薯蓣皂苷脂质体混悬液。

其中，步骤3)中可以采用涡旋混合，使瓶壁的薄膜完全脱落于缓冲液中形成混悬液；另外还可加以搅拌，如磁力搅拌，其时间视形成的混悬液的形态而定，一般不超过120分钟。

本发明所述的薯蓣皂苷脂质体可以制成糖衣片剂、糖浆、口服液、滴剂或胶囊剂。

所述的薯蓣皂苷脂质体糖衣片的制备方法，包括：

(1)取所述的薯蓣皂苷脂质体置入包衣机中，转动包衣机，喷加水或任何浓度的乙醇或以水为溶媒的粘合剂或以乙醇为溶媒的粘合剂或加入纤维素衍生物的粘合剂后喷加水，10份磷脂加入0.04-0.2份水，继续转动15秒-30分钟，制备成湿颗粒；

(2)将湿颗粒经10-40目过筛；

(3)过筛后的颗粒在20-80℃干燥；

(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。

所述的薯蓣皂苷脂质体糖衣片的制备方法，其特征在于所述的以水为溶媒的粘合剂包括羟丙甲纤维素(HPMC)、聚维酮(PVP)、淀粉浆、糊精、糖粉和糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、硅酸镁铝，所述的以乙醇为溶媒的粘合剂包括聚维酮，所述的纤维素衍生物的粘合剂包括羟丙甲纤维素(HPMC)、甲基纤维素(MC)、羧甲基纤维素纳(CMC-Na)。

所述的薯蓣皂苷脂质体能够在制备心血管病药物中的得到应用，心血管病包括冠心病、心肌梗塞、心绞、脑血栓等疾病。

本发明的积极进步效果在于：本发明的提取方法本发明的产品粒径在80-500nm之间，使现有薯蓣皂苷对光和热具有更佳的稳定性。而且本发明的脂质体，特别是通过薄膜分散法制备的产品具有较好的包封率；另外，本发明通过将药物薯蓣皂苷包裹进具有特定组分(如膜材具有荷电性)的脂质体中，脂质体与生物膜具有更好的粘附性，药物不易流失，使药物在局部维持较高的浓度。通过将药物薯蓣皂苷制备成脂质体可以提高薯蓣皂苷扩张冠状动脉、降低心肌耗氧、保护心肌等，并延长了药物的作用时间。而制成的薯蓣皂苷脂质体制剂与现有工艺相比更简单和经济，并有利于运输和贮存。

附图说明

图1为本发明薯蓣皂苷脂质体和对照薯蓣皂苷水溶液的累计透皮量比较图。

图2为本发明薯蓣皂苷脂质体大鼠肌肉长期毒性实验结果图

具体实施方式

实施例1

将500mg大豆卵磷脂，100mg胆固醇和11mg维生素C棕榈酸酯共溶于乙醇中，于50℃的水浴中通过旋转蒸发成膜；将300mg泊洛沙姆溶于pH6.0的PBS缓冲液10ml中，再将薯蓣皂苷100mg溶于该溶液中；将制得的溶液加入上述膜中，涡旋振荡分散得脂质体混悬液；最后在脂质体中加入重量百分比为0.1％的亚硫酸氢钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体的粒径用Nicomp 380ZLS(美国Particle SizingSystems)粒径测定仪测得在200-300nm之间；将产品用超滤离心法测定包封率为60％。

实施例2

将900mg蛋黄卵磷脂，90mg胆固醇和6.3mg的维生素E共溶于乙醇中，于30℃的水浴中通过旋转蒸发成膜；将100mg泊洛沙姆溶于pH7.3的磷酸盐缓冲液5ml中，将再薯蓣皂苷180mg溶于该缓冲溶液中；再将制得的溶液加入上述膜中，涡旋混合后磁力搅拌匀化1小时，得脂质体混悬液；在脂质体中加入重量百分比为0.15％的亚硫酸钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在80-200nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为70％。

实施例3

将总共为5mg的大豆卵磷脂与合成磷脂酰丝氨酸(重量比20∶1)和0.5mg胆固醇、2.1mg的维生素E溶于氯仿中，于40℃的水浴中通过旋转蒸发成膜；将100mg吐温80溶于pH6.5的磷酸盐缓冲液2ml中，将再薯蓣皂苷1mg溶于上述溶液中；将制得的溶液加入上述膜中，振荡分散后搅拌匀化1小时，得脂质体混悬液；在脂质体中加入重量百分比为0.1％的硫代硫酸钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在100-300nm之间；将产品应用超滤离心法测得包封率为80％。

实施例4

将总共为50mg的脑磷脂与磷脂酸(重量比15∶1)，10mg胆固醇、2.3mg维生素C棕榈酸酯溶于乙醚中，于30℃的水浴中通过旋转蒸发成膜；将200mg泊洛沙姆溶于pH7.2的磷酸盐缓冲液2ml中，将再薯蓣皂苷5mg溶于上述缓冲溶液中；将制得的溶液加入上述膜中，振荡分散后搅拌匀化一个小时得脂质体混悬液。在脂质体中加入重量百分比为0.1％的焦亚硫酸钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在100-200nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为68％。

实施例5

将1000mg合成二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，100mg胆固醇和16mg维生素E溶于乙醚中，于30℃的水浴中通过旋转蒸发成膜；将700mg吐温80溶于pH 6.8的磷酸盐缓冲液14ml中，将再薯蓣皂苷200mg溶于上述缓冲溶液中；将制得的溶液加入上述膜中，涡旋混合后磁力搅拌匀化1小时得脂质体混悬液。在脂质体中加入重量百分比为0.1％的亚硫酸氢钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在200-300nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为50％。

实施例6

取20mg薯蓣皂苷溶于含有250mg的泊洛沙姆的5ml磷酸缓冲溶液(pH＝7.3)中，把80mg大豆卵磷脂、10mg胆固醇和5.4mg的维生素E共溶于10ml乙醇中，将含有药物的缓冲溶液置于容器中，在恒温50℃并搅拌下，匀速滴加上述乙醇溶液，加完后继续搅拌1小时(挥尽乙醇)，通过高压乳匀机2次，得到脂质体混悬液，在此混悬液中加入重量百分比为0.1％的亚硫酸氢钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在300-500nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为40％。

实施例7

取1mg薯蓣皂苷溶于含有50mg的吐温80的2ml磷酸缓冲溶液(pH＝7.3)中，把总共为4mg的蛋黄卵磷脂和磷脂酸(重量比18∶1)，以及0.5mg胆固醇共溶于10ml乙醚中，将含有药物的缓冲溶液置于容器中，在恒温30℃并搅拌下，匀速滴加上述乙醚溶液，加完后继续搅拌0.5小时(挥尽乙醚)，得到脂质体混悬液。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在300-500nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为50％。

实施例8

取200mg薯蓣皂苷溶于含有500mg的泊洛沙姆的10ml磷酸缓冲溶液(pH＝7.2)中，把总共为1000mg的大豆卵磷脂和磷脂酰丝氨酸(重量比15∶1)、100mg胆固醇和11.8mg的维生素C棕榈酸酯共溶于10ml甲醇中，将含有药物的缓冲溶液置于容器中，在恒温50℃并搅拌下，匀速滴加上述甲醇溶液，加完后继续搅拌1.5小时(挥尽甲醇)，得到脂质体混悬液，在此混悬液中加入重量百分比为0.1％的亚硫酸氢钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在200-500nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为55％。

实施例9

取100mg薯蓣皂苷溶于含有250mg的吐温80的8ml磷酸缓冲溶液(pH＝7.0)中，把总共为800mg的合成磷脂(二棕榈酰鞘磷脂)和磷脂酸(重量比20∶1)、80mg胆固醇和9.2mg的维生素C棕榈酸酯共溶于15ml氯仿中，将含有药物的缓冲溶液置于容器中，在恒温60℃并搅拌下，匀速滴加上述氯仿溶液，加完后继续搅拌(挥尽氯仿)，得到脂质体混悬液，在此混悬液中加入重量百分比为0.1％的亚硫酸氢钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在100-500nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为60％。

另外，本发明薯蓣皂苷脂质体可采用逆相蒸发法制备。

实施例10

取100mg蛋黄卵磷脂和8mg胆固醇以及5.4mg维生素E共溶于5ml乙醇中，将10mg的薯蓣皂苷溶于250mg泊洛沙姆的5ml磷酸缓冲溶液(pH＝7.0)中，将含有薯蓣皂苷的溶液加入到乙醇溶液中，进行超声使形成初乳，初乳经减压蒸发以除去乙醇而得到水性混悬液，此脂质体混悬液中加入脂质体总重量0.1％的亚硫酸氢钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在100-400nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为60％。

实施例11

取总共为1000mg的二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酸和磷脂酰丝氨酸的混合物(摩尔比12∶1∶1)，以及100mg胆固醇和14.3mg维生素E共溶于12ml乙醚中，将200mg的薯蓣皂苷溶于500mg泊洛沙姆的12.5ml磷酸缓冲溶液(pH＝6.8)中，将含有薯蓣皂苷的溶液加入到乙醚溶液中，用高速剪切机剪切使形成初乳，初乳经减压蒸发以除去乙醚而得到水性混悬液，此脂质体混悬液中加入占脂质体总重量0.1％的亚硫酸钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在200-400nm之间；将产品应用超滤离心分离脂质体和未包封的游离药物，测得包封率为60％。

实施例12

取10mg二硬脂酰磷脂酰胆碱和1mg胆固醇共溶于1ml氯仿中，将2mg的薯蓣皂苷溶于50mg吐温80的1ml磷酸缓冲溶液(pH＝7.3)中，将含有薯蓣皂苷的溶液加入到氯仿溶液中，混合溶液进行高速剪切使形成初乳，初乳经减压蒸发以除去氯仿而得到水性混悬液，此脂质体混悬液中加入脂质体总重量0.1％的焦亚硫酸钠。

所得到的薯蓣皂苷脂质体粒径在100-400nm之间；将产品应用超滤离心法测定包封率为40％。

上述实施例采用的是薄膜分散法。

为更利于保存和运输，上述实施例得到的脂质体混悬液还可经常规的喷雾干燥或冷冻干燥等工艺，进一步得到其粉剂。

上述实施例中的各种磷脂为上海太伟药业有限公司生产、胆固醇为上海源聚生物科技有限公司产品、薯蓣皂苷为江苏黄河药业股份有限公司生产、泊洛沙姆和吐温80为南京威尔化工有限公司生产；磷酸盐缓冲液按中国药典自配；余试剂均为常规市售产品。

实施例13

糖衣片剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取上述实施例1中的薯蓣皂苷脂质体置入包衣机中，转动包衣机，喷加5份水或任何浓度的乙醇或以水为溶媒的粘合剂或以乙醇为溶媒的粘合剂或加入纤维素衍生物的粘合剂后喷加5份水，继续转动23分钟，制备成湿颗粒；

(2)将湿颗粒经25目过筛；

(3)过筛后的颗粒在50℃干燥；

(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。

所述的以水为溶媒的粘合剂包括羟丙甲纤维素(HPMC)、聚维酮(PVP)、淀粉浆、糊精、糖粉和糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、硅酸镁铝，所述的以乙醇为溶媒的粘合剂包括聚维酮，所述的纤维素衍生物的粘合剂包括羟丙甲纤维素(HPMC)、甲基纤维素(MC)、羧甲基纤维素纳(CMC-Na)。

实施例14

糖衣片剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取上述实施例2中的薯蓣皂苷脂质体置入包衣机中，转动包衣机，喷加9份水或任何浓度的乙醇或以水为溶媒的粘合剂或以乙醇为溶媒的粘合剂或加入纤维素衍生物的粘合剂后喷加9份水，继续转动15分钟，制备成湿颗粒；

(2)将湿颗粒经10目过筛；

(3)过筛后的颗粒在20℃干燥；

(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。

实施例15

糖衣片剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取上述实施例3中的薯蓣皂苷脂质体置入包衣机中，转动包衣机，喷加0.5份水或任何浓度的乙醇或以水为溶媒的粘合剂或以乙醇为溶媒的粘合剂或加入纤维素衍生物的粘合剂后喷加0.5份水，继续转动30分钟，制备成湿颗粒；

(2)将湿颗粒经40目过筛；

(3)过筛后的颗粒在80℃干燥；

(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。

实施例16

胶囊剂的制备方法，包括以下步骤：

以甲基纤维素(MC)或羧甲基纤维素(CMC)或40CP-100CP乙基纤维素或硬脂酸钠或甘油明胶为基质，致孔剂聚乙二醇4000或9300或6000，50％-90％上述实施例1中的薯蓣皂苷脂质体，按1-16∶0.1-0.8∶1配制而成。

胶囊剂的制作工艺，取基质、致孔剂按比例置适当空容器中，充分混匀，60％-100％乙醇或甲醇，使溶胀、控制水溶温度10℃-15℃，加入过60目-120目筛的薯蓣皂苷脂质体，搅拌均匀，加丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、正叮烷1-20ml，搅拌，使溶剂挥尽、成颗粒状或粉碎过20-100目筛，装胶囊。

效果实施例1热稳定性

将同浓度(16.7mg/ml)同体积(100ml)的本发明薯蓣皂苷脂质体混悬液和现有的薯蓣皂苷水溶液加入到无色透明容量瓶中，并放置在25℃环境下，24小时后用高效液相色谱法分别测定各溶液浓度。结果显示薯蓣皂苷脂质体混悬液中的薯蓣皂苷的含量为14.2mg/ml，薯蓣皂苷水溶液中的薯蓣皂苷的含量为8.9mg/ml。

效果实施例2光稳定性

将同浓度(16.7mg/ml)同体积(100ml)的本发明薯蓣皂苷脂质体混悬液和现有的薯蓣皂苷水溶液加入到无色透明容量瓶中，开口放置在光照强度为4000Lx的环境下，24小时后用高效液相色谱法分别测定各溶液浓度。结果显示薯蓣皂苷脂质体混悬液中的薯蓣皂苷的含量为12.3mg/ml，薯蓣皂苷水溶液中的薯蓣皂苷的含量为6.6mg/ml。

上述效果实施例的结果表明薯蓣皂苷被脂质体包封后，可以有效地提高药物对光和热的稳定性。

效果实施例3体外透皮实验

采用TK-12A型药物透皮扩散实验仪(上海锴凯科技贸易有限公司生产)，考察2％(2g/100ml)薯蓣皂苷脂质体(实施例8制得)和2％(2g/100ml)薯蓣皂苷水溶液对离体鼠皮的透皮作用和体外释放规律。具体方法：将制得的新鲜皮肤置于扩散池的接合部(表皮层面向供给池，真皮层面向接受池)，剪去多余的皮肤。接受池容积6.5ml，内盛接受液，有效扩散面积为2.8cm²。将皮肤置于扩散池上后，分别将含相同体积的脂质体和药物的水溶液置于表皮上，夹紧两池口密封，排尽气泡。开启磁力搅拌(200rpm)，系统保持恒温(32±0.2)℃。在0、0.5、1、1.5、2、4、6、10、14、24h(小时)分别将接受池内液体取出，再加入相同体积的接受液。应用高效液相色谱法测定接受液中薯蓣皂苷的量，结果表明薯蓣皂苷脂质体的透过率明显加快，24小时累计透皮百分率是普通水溶液的1.4倍(n＝3)(结果见图1)。透皮实验进行24h后，将皮取下，用生理盐水洗去表面的脂质体，重新固定，更换接受液，于7h后取样，测定接受液中药物的浓度。洗去脂质体皮肤接收液中含薯蓣皂苷的量平均为70ug(n＝3)，洗去水溶液皮肤接收液中含薯蓣皂苷的量平均为25ug(n＝3)，结果表明24h透皮实验结束后薯蓣皂苷脂质体存留于皮肤中的药物浓度高于薯蓣皂苷水溶液。由此表明了薯蓣皂苷脂质体具有良好的经皮渗透速率，并有延长药物作用时间的效果。

效果实施例4长期毒性实验

1、材料

1.1受试物：薯蓣皂苷脂质体

1.2实验动物：健康大鼠

2.方法

2.1动物分组：健康大鼠96只，雌雄各半，体重200-220g，每组24只动物。

2.2给药剂量：

薯蓣皂苷脂质体肌肉注射LD₅₀为六个剂量组分别为684.12-452.96mg/kg，设三个剂量组为120mg/kg、70mg/kg、40mg/kg和一个生理盐水对照组，分别为0.05-0.12mg/kg体重肌肉注射给药，对照组按0.12ml/kg体重肌肉注射给药，连续肌肉注射给药30天。

2.3方法

给药观察记录动物中毒表现及死亡情况。死亡动物立即作解剖，肉眼观察各主要脏器的中毒性病变，存活动物继续饲养观察一周。

3.实验结果

3.1在30天的实验期内，每天观察动物一般情况，记录进食量，每周称量体重一次，调整进食量和给药量。结果显示：动物进食量和体重随剂量的增加动物的进食量和体重增加则下降，具有高度显著性差异。实验结果见表2

表2.薯蓣皂苷脂质体大鼠肌肉长期毒性实验结果

*与对照组、低剂量组、中剂量组三组比较有显著性差异(p＜0.01)，见图2。

3.2血液学检测与结果

红细胞和血红蛋白随给药剂量的增高而降低，而白细胞数随着剂量增高，而血清白蛋白的量则随着给药剂量增高而降低。

3.4系统尸体解剖和病理组织学检查

3.4.1对实验动物进行尸体解剖，肉眼观察四组均未发现特殊异常改变。对脑、心、肝、脾、肺、肾、子宫、睾丸、前列腺、垂体、胸腺、肾上腺准确称量计算脏器系数(脏/体比值)。结果见表3

表3.薯蓣皂苷脂质体肌肉注射对大鼠脏器系数的影响

*与对照组、低剂量组两组比较有显著性差异(p＜0.05)。

3.4.2每组随机抽取1/3动物进行脑、心、脾、肺、肾、子卵巢、睾丸、前列腺、胸腺、胸骨、肾上腺、淋巴结、胃肠、脑垂体等脏器进行病理组织学检查，发现高剂量组动物肝脏出现轻微的肝细胞浊肿，动物肾脏出现变异，坏死病理组织学改变，其余各组未见异常。

4、结论

薯蓣皂苷脂质体对大鼠肌肉注射30天长期毒性实验结果显示高剂量组有一定毒副作用。主要表现为动物食欲和体重下降，血清谷草转酶氨基转移酶活性增强和血清白蛋白的含量降低。病理组织学发现肝脏细胞有轻微的浊肿、胞浆疏松现象。肾脏也出现变性现象。中、低剂量组毒副反应不明显。

经体内外实验表明，本发明的将薯蓣皂苷制备成脂质体促进了药物活性成分达到有效部位，提高药物的生物利用度，并且毒副反应不明显。

效果实施例5薯蓣皂苷脂质体对冠心病

薯蓣皂苷治疗冠心病效果较好，由于用于治疗，本发明深入研究薯蓣皂苷脂质体透过的过程，对了解脂质体的靶向治疗的特点有重要意义。

1、材料

薯蓣皂苷、薯蓣皂苷脂质体

2、实验动物

昆明种小鼠250只，体重16-24g

3、实验方法

将小鼠分成15组，每组5只。薯蓣皂苷脂质体用生理盐水溶解成浓度为0.1mg.mL^-1，以0.1mg.mL^-1(体重)单剂量尾静脉注射给药，使药物剂量达到1mg/kg。在给药后5、10、15、30、45、60、90、120、180、240、300、420、600、1200、1800s断头取血，迅速收集血液于肝素化的离心管中，3000r.min^-1，取0.25ml血浆保存。剥离组织后含心脏组织0.1g.mL^-1的比例加入生理盐水制成10％匀浆，待用。匀浆中的薯蓣皂苷用HPLC测定含量。

应用Intergration plot法定量解析药物透过心脏程，小鼠药动学参数AUC用计算机处理求得，以心脏内浓度对血浆中浓度比(K_p，c_b/c_p)为纵轴，血浆中浓度曲线下面积对血浆中浓度比(AUC/c_p)为横轴，反映K_p与AUC/c_p的关系。该曲线符合二室模型，通过计算机处理，以非线形最小二乘法求出流入系数(K₁)以及排出系数(K₂)的关系，以定量反映药物移行入心脏的过程。

4、实验结果

薯蓣皂苷脂质体静脉注射后K_p与AUC/c_p比值见表4。血浆药时曲线计算机处理得AUC＝298.36[s(μg L^-1)]。药物从心脏排出速率K₂(0.00229±0.0031)s^-1，约为进入速度K₁(0.00229±0.0031)s^-1的2倍(K₁/K₂＝0.50)AUC/c_p值在2000s左右时，K_p值达到稳定状态。

对照组静脉注射后K_p与AUC/c_p比值见表4血浆药时曲线计算机处理得AUC＝298.36[s(μg L^-1)]。

表4小鼠静脉注射薯蓣皂苷脂质体的K_p与AUC/c_p比值

5、结论

通过对薯蓣皂苷脂质体静脉注射的小鼠临床观察表明：薯蓣皂苷脂质体能够更长效地、稳定地治疗冠心病，并且相比较现有技术中比较佳的治疗心绞痛的药物制剂疗效更好。

Claims

1.一种薯蓣皂苷脂质体，其特征在于：其包括下列重量份的组分：5-10份磷脂、0.5-2份胆固醇、10-50份所述的薯蓣皂苷和50-100份乳化剂。

2.根据权利要求1所述的薯蓣皂苷脂质体，其特征在于：其还包括各占脂质体总重量0.15％的水溶性抗氧化剂和脂溶性抗氧化剂。

3.根据权利要求1所述的薯蓣皂苷脂质体，其特征在于：所述的薯蓣皂苷脂质体的粒径范围为1-6μm。

4.根据权利要求1所述的薯蓣皂苷脂质体，其特征在于：所述的磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂，以及二月桂酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰甘油、二豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰鞘磷脂、1-硬脂酸-2-棕榈酰磷脂酰胆碱和聚乙二醇-2-硬脂酰磷脂酰乙醇胺等合成磷脂中的一种或几种，所述的乳化剂是泊洛沙姆或吐温80。

5.一种权利要求1所述的薯蓣皂苷脂质体的制备方法，其特征在于：采用薄膜分散法，该薄膜分散法包括如下步骤：

6.根据权利要求1所述的薯蓣皂苷脂质体，其特征在于：所述的薯蓣皂苷脂质体制成糖衣片剂、糖浆、口服液、滴剂或胶囊剂。

7.根据权利要求6所述的薯蓣皂苷脂质体糖衣片的制备方法，其特征在于：

(2)将湿颗粒经10-40目过筛；

(3)过筛后的颗粒在20-80℃干燥；

(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。

8.根据权利要求7所述的薯蓣皂苷脂质体糖衣片的制备方法，其特征在于：所述的以水为溶媒的粘合剂包括羟丙甲纤维素(HPMC)、聚维酮(PVP)、淀粉浆、糊精、糖粉和糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、硅酸镁铝，所述的以乙醇为溶媒的粘合剂包括聚维酮，所述的纤维素衍生物的粘合剂包括羟丙甲纤维素(HPMC)、甲基纤维素(MC)、羧甲基纤维素纳(CMC-Na)。

9.根据权利要求1所述的薯蓣皂苷脂质体制剂在制备心血管病药物中的应用。