CN101239092B - 一种葛花异黄酮提取物、其提取方法、药物组合物及其在制药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从葛花中提取的葛花异黄酮提取物及该提取物的提取方法。本发明还涉及以该提取物为活性成份的药物组合物。与现有技术相比，本发明的提取方法具有工艺效率高、污染少、便于工业化生产等特点；就葛花苷而言，本发明提取物中葛花苷的溶解度远大于单一成份时葛花苷的溶解度，具有更好地生物利用度。

Description

一种葛花异黄酮提取物、其提取方法、药物组合物及其在制药中的应用

技术领域

本发明涉及一种植物有效成份提取物，具体地说是一种葛花异黄酮提取物、其提取方法及其药物组合物。

背景技术

葛花(Flos Puerariae)，又名葛条花，为豆科(Leguminosae)植物野葛(Pueraria Lobata(Willd.)Ohwi)的干燥花蕾。性凉，味甘，入归阳明经。《神农本草经》、《本草纲目》等记载其具有解酒醒脾之功效，主治伤酒发热烦渴、不思饮食、呕逆吐酸、吐血、肠风下血等症。葛花在我国分布广泛，植物资源丰富，其中黄酮、皂苷等有效成分，有很强的药理活性。但国内对其化学成分、药理作用和临床应用的研究还不够深入，目前在我国主要有葛花解醒汤用于临床，葛花茶、葛花露等保健品上市。主要局限于解酒、保肝药等。

现代药理研究表明葛花中的异黄酮为其主要药理活性成分，异黄酮为生物黄酮中的一种，其结构与人体分泌的雌激素十分相似，又被称为植物雌激素，近年来，国内外对植物异黄酮生物活性有大量的研究报道，研究表明异黄酮化合物对人体雌激素水平有抑制和兴奋双重作用，因而在心血管系统、内分泌系统和抗肿瘤方面具有显著的生物活性，其主要药理作用有：1、异黄酮对心血管作用。大豆异黄酮可以有效降低总胆固醇、LDL、极低密度脂蛋白，并抑制动脉粥样斑块的形成。Pan等报道，异黄酮能抑制有中风倾向的自发高血压大鼠主动脉平滑肌细胞合成，从而抑制动脉粥样硬化形成。还可抑制离体培养的血管内皮细胞增殖，从而延缓动脉粥样硬化病理过程中新生血管的形成，阻止疾病的进展。总之异黄酮对心血管系统的活性作用广泛，如保护心肌、扩张冠状动脉、增加血流量、降低胆固醇、降血糖、抗心律不齐、抗血栓形成等。2、雌激素样作用。可补充体内雌激素不足，异黄酮通过与雌激素受体结合发挥微弱激素效应；同时，对雌激素也有拮抗作用，由于与雌激素竞争结合雌激素受体，使得雌激素不能产生激素效应，进而对与雌激素相关的疾病具有保护作用。在起到预防和减轻妇女更年期综合症的作用的同时，可以减少雌激素替代治疗造成的患乳腺癌和子宫内膜癌的风险3、治疗骨质疏松。大量动物实验结果证实异黄酮可以防止去卵巢大鼠骨丢失。不少流行病学资料提出了异黄酮护骨作用的可能机制为仅抑制骨吸收，而并不影响骨形成。最新研究表明，600mg/d的异黄酮与微量的雌激素(0.3mg/d雌激素本身不能够增强桡骨的骨密度)能够显著增强绝经后妇女的骨密度，减缓骨的丢失。4、抗肿瘤作用。异黄酮具有明显的抗肿瘤作用，特别是与雌激素相关的肿瘤。目前已明确异黄酮抗癌的主要作用机制是异黄酮的植物雌激素作用，该作用可以抑制人及动物体内雌激素水平过高引发的乳腺癌等，人们普遍认为单独服用大豆异黄酮或其配合化疗治疗可能是一种有效的抗肿瘤疗法。除上述功能、作用外，异黄酮还具有抗氧化、抗衰老、抗真菌、抑制真菌活性的功能，另外有资料显示日本目前正在研究通过异黄酮具有的雌激素调节作用，改善妇女皮肤，增强美容效果，还可加强对糖尿病及其他并发症、肾肝疾病、牙周炎等疾病的预防和治疗功效。

现有技术中，葛花异黄酮的提取工艺多采用水提或醇提工艺，得到粗提物。为了得到异黄酮含量较高的提取物，多采用柱层析的方法进行提纯，如氧化铝、硅藻土、硅胶等填充的层析柱，通过不同比例的溶剂进行洗脱，收集需要的组分，回收溶剂可以得到相应的产物。上述工艺所得到的产物含量较高，但是柱层析效率较低，洗脱液需要量很大；并且洗脱液多为有机溶剂的混合物，其配比直接影响产品质量，产品质量不易控制；洗脱液中产品的浓度一般较小，必须经过浓缩干燥才能得到产品，需要耗费大量能量，劳动强度较大；洗脱后的溶剂分离提纯较困难，不易循环使用，废液较多，提取分离成本高，污染严重，严重制约着产品产量的提高和产品成本的降低。

葛花苷(kakkalide，5，7-dihydroxy-6，4′-dimethoxyisoflavone-7-O-β-D-xylopyranosyl-6-O-β-D-glucopyranoside)是葛花异黄酮的有效成分之一，本发明的发明人对其进行过深入的研究，就其抗心血管疾病及抗骨质疏松的药用用途申报了发明专利，专利申请号：200510043968.3。然而葛花苷却存在水溶性较差的不足。

发明内容

本发明的技术任务是提供一种溶解度高、生物利用率好的葛花异黄酮提取物。

本发明另一个技术任务是提供从葛花中提取葛花异黄酮提取物的提取方法。

本发明的进一步的技术任务是提供一种含有该葛花异黄酮提取物的药物组合物。

本发明再进一步的技术任务是提供上述提取物在制备抗心脑血管病药物及抗骨质疏松症药物中的应用。

本发明的技术方案是利用索氏提取器从中药葛花中提取葛花异黄酮提取物。

该提取方法包括以下步骤：

a、干燥葛花用水或有机溶剂煮沸提取，提取液浓缩得提取物浸膏；

所述有机溶剂为丙酮、醇类、水或水醇混合溶剂，所述醇类为甲醇、乙醇或异丙醇，

b、提取物浸膏以1∶5～20的质量比与氧化铝混合拌料，20目筛制粒，装入索氏提取器，用有机溶剂连续提取，

所述有机溶剂为乙酸乙酯、甲酸乙酯、醋酸丁酯、丙酮、丁酮、甲醇或乙醇，

所述氧化铝粒度为50～400目；

c、提取液直接回收溶剂，干燥得异黄酮含量不低于50％的异黄酮提取物；

或者，提取液冷却析出固体，固体过滤经少量乙醇洗涤得到葛花异黄酮提取物，所得提取物中异黄酮成分含量不低于70％。

为了适应更为严格的应用要求，步骤c所得葛花异黄酮提取物用有机溶剂重结晶，还可以得到异黄酮成分含量不低于80％的葛花异黄酮提取物，

所述有机溶剂为丙酮、醇、醇-水混合物或乙酸乙酯，其中醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。

优选地，步骤a中的提取物浸膏可以通过以下两种方法得到：

(一)干燥的葛花用有机溶剂煮沸提取，提取液减压浓缩得异黄酮含量为10％-30％的提取物浸膏，

所述有机溶剂为丙酮、醇类、水或水醇混合溶剂，所述醇类为甲醇、乙醇或异丙醇。

(二)干燥的葛花用水煮沸提取，提取液浓缩成相对密度1.04～1.34的稠浸膏，稠浸膏中加入乙醇至乙醇浓度为40～95％，静置，取上清液浓缩成异黄酮含量为10％-30％的提取物浸膏。

根据需要可以依据上述方法制备得到异黄酮含量在10％以上或50％以上或80％以上的葛花异黄酮提取物。

用上述提取方法制备的葛花异黄酮提取物中含有葛花苷、尼泊尔鸢尾素、尼泊尔鸢尾素-7-O-β-葡萄糖苷、染料木素、染料木苷、印度黄檀苷和鹰嘴豆素甲等异黄酮类活性成分。经发明人研究发现，其溶解性大于单一异黄酮成分，便于制备口服制剂，生物利用度高；多种异黄酮成分协同作用可以更好的发挥异黄酮的生物活性，具有更为显著的抗心脑血管疾病及抗骨质疏松活性。

本发明的药物组合物含有有效量的上述葛花异黄酮提取物为有效成分，并含有一种或多种药学上可接受的载体。

上述药学上可接受的载体是指药学领域常规载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；湿润剂如甘油等；崩解剂如琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠等；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇等；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。另外，还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂、甜味剂等。

本发明的提取物可以经口服或注射等形式给药，给药量因给药途径不同而各有不同，对成人来说，每天100mg-300mg比较合适。

用于口服给药时，可将其制成常规的固体制剂，如颗粒剂、胶囊、片剂等；制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂，如糖浆等。用于非口服给药时，可将其制成注射液、输液剂等。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如将提取物与一种或多种载体混合，然后将其制成所需剂型。

本发明提纯方法采用索式提取器提取，在少量有机溶剂的存在下就可以连续提取，与传统的异黄酮提取工艺，如过大孔树脂柱、氧化铝柱、硅胶拄等相比，有机溶剂需要量只相当于柱层析工艺的10％，就可以得葛花异黄酮含量大于50％的葛花提取物；过滤后的母液可直接作为索式提取器提取液使用，也可回收溶剂，循环使用，回收溶剂后的固体物仍为葛花异黄酮含量大于40％的葛花提取物。本工艺效率高、提取完全，使用单一溶剂提取，提取溶剂可回收循环使用，成本低、污染少，便于工业化生产。

经大量药理试验及动物试验可得，本发明的葛花异黄酮提取物对改善和治疗心、脑血管病及骨质疏松症有明显效果。

                          实施方式

下面的制备实施例、试验实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

〔制备实施例1〕：异黄酮含量大于10％、50％葛花异黄酮的提取方法

取干燥葛花5kg，加丙酮40kg，煮沸提取1.5小时，滤过，滤液备用；药渣再加丙酮30kg煮沸提取1小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液浓缩喷雾干燥即得异黄酮含量大于10％的葛花异黄酮提取物(综褐色固体)。

将上述提取物加乙醇配成相对密度1.1-1.3的浸膏，将此浸膏氧化铝(粒度为200目)拌料，20目筛制粒，浸膏∶氧化铝(1∶8)，上索氏提取器，乙酸乙酯提取，提取液减压浓缩，得到含异黄酮大于50％的葛花提取物，即得异黄酮含量为50％的葛花异黄酮提取物(棕黄色固体)。

〔制备实施例2〕：异黄酮含量大于70％葛花异黄酮的提取方法

取干燥葛花5kg，加水40kg，煮沸提取1.5小时，滤过，滤液备用，药渣再加水30kg煮沸提取1小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液真空浓缩，制成相对密度1.1-1.3的稠浸膏，将此稠浸膏氧化铝拌料，浸膏∶氧化铝(1∶5)，上索氏提取器，丙酮提取，提取液冷却析出固体，过滤收集固体，少量乙醇洗涤，得到含异黄酮大于70％的葛花提取物，即得异黄酮含量为70％的葛花异黄酮提取物(浅棕黄色固体)。

〔制备实施例3〕：异黄酮含量大于80％葛花异黄酮的提取方法

取干燥葛花5kg，加水30kg，煮沸提取2小时，滤过，滤液备用，药渣再加水30kg煮沸提取1小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液浓缩成相对密度1.1-1.3的稠浸膏，将此稠浸膏氧化铝拌料，浸膏∶氧化铝(1∶10)上索氏提取器，乙酸乙酯提取，提取液浓缩，得到含异黄酮大于50％的葛花提取物，即得异黄酮含量为50％的葛花异黄酮提取物。(棕黄色固体)

此提取液经12倍乙醇重结晶得到得异黄酮含量大于80％的葛花异黄酮提取物(黄色浅黄色固体)。

〔制备实施例4〕：异黄酮含量大于30％葛花异黄酮的提取方法

取干燥葛花5kg，加80％乙醇水溶液30kg，煮沸提取2小时，滤过，滤液备用，药渣再加乙醇水溶液30kg煮沸提取1小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液减压干燥即得含有异黄酮大于30％的葛花异黄酮提取物，即得异黄酮含量为大于30％的葛花异黄酮提取物(深棕黄色固体)。

制成相对密度1.2-1.3的稠浸膏，将此稠浸膏用氧化铝拌料，浸膏∶氧化铝(1∶15)，上索氏提取器，丙酮提取，得到含异黄酮75％的葛花提取物，即得异黄酮含量为75％的葛花异黄酮提取物(浅棕黄色固体)。

〔制备实施例5〕：异黄酮含量大于80％葛花异黄酮的提取方法

取实施例1的得到的含异黄酮50％的提取物，用7倍量的80％乙醇水溶液重结晶，过滤干燥得到异黄酮含量大于80％的葛花异黄酮提取物，即得异黄酮含量为80％的葛花异黄酮提取物(黄色浅黄色固体)。

〔制备实施例6〕：异黄酮含量大于90％葛花异黄酮的提取方法

取实施例4的得到的含异黄酮75％的提取物，用7倍量的乙醇重结晶，过滤干燥得到异黄酮含量大于90％的葛花异黄酮提取物，即得异黄酮含量为90％的葛花异黄酮提取物(浅黄色或类白色固体)。

通过下面的试验说明本发明提取物的活性。

〔试验实施例1〕葛花异黄酮提物对去势雌性大鼠预防和治疗骨质疏松模型的治疗作用

1、试验材料

1.1、受试物：葛花异黄酮提物(70％)，由制备实施例2制得。

1.2、阳性对照物：钙尔奇D片剂，规格：30片/瓶，每片含碳酸钙1500mg(元素钙600mg)，维生素D125国际单位，批号：0009033；由苏州立达制药有限公司生产。

1.3、试验动物：Wistar大鼠

1.4、给药途径：灌胃；

2、试验方法

2.1、建立动物模型：本研究以雌性SD大鼠双侧卵巢切除术后的去势大鼠模型为研究对象，该模型为目前国际公认的研究骨质疏松症的标准模型。

2.2、分组及给药：挑选术后4天、健康状况良好的去势大鼠按体重随机分为，葛花异黄酮提物大剂量组(300mg/kg)、小剂量组(100mg/kg)、阳性对照组(500mg/kg)、模型对照组及正常对照组，每组10只；术后第4天开始灌胃给药，每天1次，连续灌胃90天；

3、试验结果：大剂量组(300mg/kg)对股骨直径、重量与模型对照组相比差异非常显著(P＜0.01，表1)，骨强度大于模型对照组。葛花异黄酮提物大剂量，对大鼠股骨指标有明显影响，可能影响到骨吸收与骨形成平衡的复杂过程，

        表1、对骨指标及脏器系数的影响(n＝10)Mpa

注：^*与模型对照组相比P＜0.01

表2对大鼠骨质疏松模型骨钙沉积的影响(n＝10，X±SD)

注：^**与模型对照组比较，P＜0.01

4、病理组织学检查结果：

股骨病理组织学检查

假手术组：骨小梁排列密集，互相连接呈网状结构，骨小梁厚度大，其间距小，骨细胞、成骨细胞正常。

去势模型组：去除卵巢后骨小梁明显变细，数量明显减少，断裂增多，碎裂形成纽扣状碎骨片，髓腔扩大，皮质骨变薄。与假手术组比较，同样倍数下骨小梁的连接中断点明显增多，骨小梁髓腔间距增大，正常骨细胞、成骨细胞减少，骨细胞空陷凹增多。

阳对组：与模型组比较骨小梁稍规则，数目增多，厚度增加，断裂少，髓腔间隙变小，但骨小梁数目及厚度仍低于假手术组。同样倍数下成骨细胞数目多于模型组、少于假手术组，正常骨细胞接近假手术组。

葛花异黄酮提取物大剂量组：与模型组比较骨小梁较规则，数目明显增多，厚度增加，断裂少，髓腔间隙明显变小，骨小梁数目及厚度稍低于假手术组。同样倍数下骨细胞、成骨细胞接近假手术组。

葛花异黄酮提取物小剂量组：与模型组比较骨小梁稍规则，数目轻度增多，厚度增加，断裂少，髓腔间隙变小，骨小梁数目及厚度稍高于模型组。骨细胞空陷凹稍低于模型组，同样倍数下骨细胞、成骨细胞均稍高于模型组。

5、结论

试验结果表明，葛花异黄酮提取物对股骨直径、重量与模型对照组相比差异非常显著(P＜0.01，表1)，骨强度大于模型对照组，病理组织学检查结果证实，对大鼠骨质疏松模型骨小粱和破骨细胞的数量有非常显著性差异(P＜0.01，表2)。因此，葛花异黄酮提取物作为抗骨质疏松药有必要作进一步的研究。

〔试验实施例2〕葛花异黄酮灌胃给药对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的影响。

1、药品

葛花异黄酮提物(70％)：由制备实施例2制得。

盐酸异丙肾上腺素注射液：每支1mg/2ml/支。批号5E2007。由上海禾丰制药有限公司提供。

2、动物

Wistar雌性大鼠50只，体重200～274g。由山东鲁抗医药集团有限公司提供，许可证号：鲁动质字SCXK鲁20030006。

3、方法

将大鼠随机分为5组，即葛花异黄酮大剂量组100mg/kg、小剂量组50mg/kg、阳性药葛根素80mg/kg、心肌损伤模型组和空白对照组。每组10只。灌胃给药。给药体积为2.0ml/250g。每天给药1次，连续7天。空白对照组和模型组给予等体积的蒸馏水。分别于第6天、第7天给药后1h，除空白对照组外，其余各组均皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素4mg/kg，于第7天注射异丙肾上腺素4h后取血测定心肌酶谱，同时处死动物，迅速摘取心脏，取心尖部位于10％福尔马林中固定，HE染色，进行病理学检查。

4、结果

1.葛花异黄酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的影响，结果详见表3。

结果表明，心肌损伤模型组心肌酶谱CK、CK-MB、AST、LDH明显升高，与空白对照组有明显差异(P＜0.05)。葛花异黄酮大剂量组可以明显降低异丙肾上腺素所致心肌酶谱(CK、CK-MB、AST、LDH)的增加，小剂量组可以降低AST、LDH，但对CK、CK-MB也有降低趋势(P＜0.07)，说明葛花异黄酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤具有明显的保护作用。

        表3葛花异黄酮对异丙肾上腺素所致大鼠

      心肌损伤心肌酶谱的影响(n＝10，X±s)

注：与空白对照组，*P＜0.05；与损伤模型组，#P＜0.05；

5.心肌组织病理学检查

正常对照组：心肌结构正常，肌纤维排列整齐，心肌细胞无变性、坏死等形态学改变。间质无水肿，无炎细胞浸润。

损伤模型组：心肌广泛融合性病变，肌纤维大片状坏死、断裂，心肌细胞核碎裂、溶解，仅残存细胞形态，间质水肿，坏死区有大量炎细胞浸润。坏死区周围肌纤维排列尚整齐，但心肌细胞肿胀，间质水肿并可见大量炎细胞浸润。

葛花异黄酮大剂量组：心肌组织片灶状坏死、肌纤维断裂，坏死范围较模型组明显变小，间质水肿，坏死区亦有炎细胞浸润。坏死区周围肌纤维排列整齐，但部分心肌细胞肿胀，间质水肿并可见炎细胞浸润。

葛花异黄酮小剂量组：心肌组织片状坏死、肌纤维断裂，坏死范围介于模型组与大剂量组之间，坏死区有大量炎细胞浸润。坏死区周围肌纤维排列整齐，但心肌细胞肿胀，间质水肿并可见炎细胞浸润。

葛根素组：心肌组织片灶状坏死、肌纤维断裂，坏死范围较模型组明显变小。坏死区周围肌纤维排列整齐，部分心肌细胞肿胀，间质水肿并可见炎细胞浸润。

6、小结

a.葛花异黄酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤具有明显的保护作用。

b.葛花异黄酮能减轻异丙肾上腺素对心肌的病理性损害。

〔试验实施例3〕葛花异黄酮对大鼠急性不完全性脑缺血的影响

1、药物

葛花异黄酮提物(70％)：由制备实施例2制得。

2、动物

Wistar雌性大鼠50只，体重208～282g。由山东鲁抗医药集团有限公司提供，许可证号：鲁动质字SCXK鲁20030006。

3、方法

葛花异黄酮对大鼠急性不完全性脑缺血的保护作用，Wistar大鼠50只，体重208～282gg(平均体重252.79±16.42g)，雌雄各半。随机分为5组，即假手术组、脑缺血模型组、葛花异黄酮大剂量组100mg/kg、小剂量组50mg/kg、阳性对照药葛根素组80mg/kg。每组10只。灌胃给药。每日1次，连续给药5天。给药体积为2.0ml/200g，假手术组和脑缺血模型组均给予等容积的生理盐水。于末次给药后1h开始实验。大鼠在25％乌拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉下，颈部正中切口，分离两侧颈总动脉，双重结扎(假手术组仅穿双线但不结扎)，造成急性不完全性脑缺血。结扎后3h每组各取10只快速断头取脑，装入称量瓶称脑湿重，计算脑指数[脑指数＝脑湿重/体重×100％]，然后置于110℃烤箱中烘烤72小时至恒重，称脑干重，计算脑含水量。

4、结果

葛花异黄酮对大鼠急性不完全性脑缺血的保护作用，结果见表4。

        表4.葛花异黄酮对急性不完全性脑缺血大鼠

        脑指数和脑含水量的影响(X±s，n＝10)

注：与脑缺血模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

结果表明，脑缺血模型组的脑指数和脑含水量明显高于假手术组，经统计学处理有显著性差异(P＜0.01)，说明脑缺血模型建立成功。葛花异黄酮大、小剂量组均明显降低急性不完全性脑缺血大鼠的脑指数和脑含水量，表明葛花异黄酮可明显减轻大鼠急性不完全性脑缺血所引起的脑水肿。

5、小结

葛花异黄酮可明显减轻大鼠急性不完全性脑缺血所引起的脑水肿。〔试验实施例4〕溶解度测定实验

取实施例1中得到的葛花异黄酮提取物(50％)及葛花苷对照品各1g，分别置100ml容量瓶中，加水100ml 25℃水浴中每隔5分钟强力振摇30秒钟，30分钟后由于两瓶中固体都没有完全溶解，静置过滤，取续滤液，采用高效液相色谱法，以葛花苷为对照品，用外标法分别测定两容量瓶中溶解的葛花苷的质量，结果如下：

葛花苷对照品组：    0.0012g

葛花异黄酮提取物组：0.0076g

实验结果显示葛花异黄酮组中溶解的葛花苷是葛花苷对照品组的6倍，说明葛花异黄酮中各成分间存在助溶作用，相同情况下可以增加其中黄酮、异黄酮单一成分的溶解度。

下面的实施例说明包含由本发明提供的提取物的药用制剂。

〔制剂实施例1〕片剂

按照本领域已知的方法制备片剂，每片含有下述成份：

葛花异黄酮提取物(异黄酮含量80％)100mg、

乳糖150mg、  硬脂酸镁3mg、  聚乙烯吡咯烷酮7mg。

〔制剂实施例2〕胶囊

按照本领域已知的方法制备胶囊，每个胶囊中含有下述成份：

葛花异黄酮提取物(异黄酮含量80％)50mg、

乳糖85mg、       淀粉20mg、

硬脂酸镁1mg、    聚乙烯吡咯烷酮4mg。

〔制剂实施例3〕注射液

按照本领域已知的方法制备注射液，每个注射液中含有下述成份：

葛花异黄酮提取物(异黄酮含量80％)40mg、

注射用水2ml、        聚乙二醇400200mg。

用法：葡萄糖注射液稀释，肌肉注射，一日二次，每次1-2支；静脉点滴，一日一次，每次2-3支。

Claims (10)

1.一种葛花异黄酮提取物的提取方法，包括以下步骤：

a、干燥葛花用水或有机溶剂煮沸提取，提取液浓缩得提取物浸膏；

所述有机溶剂为丙酮、醇类、水或水醇混合溶剂，所述醇类为甲醇、乙醇或异丙醇，

b、提取物浸膏以1∶5～20的质量比与氧化铝混合拌料，20目筛制粒，装入索氏提取器，用有机溶剂连续提取，

所述有机溶剂为乙酸乙酯、甲酸乙酯、醋酸丁酯、丙酮、丁酮、甲醇或乙醇，

所述氧化铝粒度为50～400目；

c、提取液直接回收溶剂，干燥得异黄酮含量不低于50％的异黄酮提取物；

或者，提取液冷却析出固体，固体过滤经少量乙醇洗涤得到葛花异黄酮提取物，所得提取物中异黄酮成分含量不低于70％。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、干燥葛花用水或有机溶剂煮沸提取，提取液浓缩得提取物浸膏；

所述有机溶剂为丙酮、醇类、水或水醇混合溶剂，所述醇类为甲醇、乙醇或异丙醇，

b、提取物浸膏以1∶5～20的质量比与氧化铝混合拌料，20目筛制粒，装入索氏提取器，用有机溶剂连续提取，

所述有机溶剂为乙酸乙酯、甲酸乙酯、醋酸丁酯、丙酮、丁酮、甲醇或乙醇，

所述氧化铝粒度为50～400目；

c、提取液直接回收溶剂，干燥得异黄酮含量不低于50％的异黄酮提取物；

或者，提取液冷却析出固体，固体过滤经少量乙醇洗涤得到葛花异黄酮提取物，所得提取物中异黄酮成分含量不低于70％；

d、步骤c所得葛花异黄酮提取物用有机溶剂重结晶，得到异黄酮成分含量不低于80％的葛花异黄酮提取物，所述有机溶剂为丙酮、醇、醇-水混合物或乙酸乙酯，其中醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。

3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤a中干燥的葛花用有机溶剂煮沸提取，提取液减压浓缩得异黄酮含量为10％-30％的提取物浸膏。

4.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤a中干燥的葛花用水煮沸提取，提取液浓缩成相对密度1.04～1.34的稠浸膏，稠浸膏中加入乙醇至乙醇浓度为40～95％，静置，取上清液浓缩成异黄酮含量为10％-30％的提取物浸膏。

5.权利要求1中提取方法提取的葛花异黄酮提取物。

6.药物组合物，其中含有有效量的权利要求5的提取物为有效成分，并含有一种或多种药学上可接受的载体。

7.权利要求5提取物在制备抗心脑血管病药物及抗骨质疏松症药物中的应用。

8.权利要求2中提取方法提取的葛花异黄酮提取物。

9.药物组合物，其中含有有效量的权利要求8的提取物为有效成分，并含有一种或多种药学上可接受的载体。

10.权利要求8提取物在制备抗心脑血管病药物及抗骨质疏松症药物中的应用。