CN101183054B - 尿液处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及物质分离，具体提供一种尿液处理方法。所述尿液处理方法，包括以下步骤：收集尿液，加入质量分数为1％～3％的叠氮化钠溶液，叠氮化钠溶液的加入量为尿液体积的0.2％～4％，然后加入无水乙醇，所加入的无水乙醇与尿液的体积比为尿液∶无水乙醇＝1～3∶1，静置20～60分钟后，采用0.45～1.2μm滤膜抽滤或离心除去尿液中的细胞碎片和蛋白质即可。经本发明处理后的尿液可以用于正确检测尿液中的纳米和亚微米晶体的组分、形貌、尺寸分布，而根据尿晶体的组分、形貌和尺寸分布。同时本发明的方法操作简单、准确、快速，能为临床上查找结石成因、预防和治疗提供科学依据。

Description

尿液处理方法
技术领域
本发明属于物质分离技术领域，具体涉及一种尿液的处理方法。
背景技术
泌尿系结石(又称尿石症)是一种世界范围的常见病、多发病，其发病率呈上升趋势。尿石症在泌尿外科住院病人中占首位，超过40％。尤其是在我国广东省及港澳地区，亚微米与鼻咽癌一样，成为广东省及港澳地区一个严重的地方病，给人们带来极大的痛苦。在美国佛罗里达，结石病患者1987年是15.7/10万人，1996年为20.8/10万人，上升了32.5％。而在广东东莞地区，八十年代末为101/10万人，九十年代上升为140/10万人，上升了38.6％，而实际患病率远比这个高。
尿石症在手术后复发率高。患者在被检出患尿石症并经过治疗后，短则半个月，长至6年，80％以上的病人都会复发。对结石的预防也尚无十分理想的方法。至今其形成机制未完全阐明，80％以上的尿石症患者病因不明，对目前治疗尿石症药物的作用机理亦欠清楚。因而，预防尿石症形成，延缓尿石症复发，具有极为重要的科学和现实意义。
对尿液中纳米和亚微米晶体尺寸分布、微观构造和组分的分析，不但可以区分正常人和尿石症患者，而且可以预测尿石的类型，从而为临床上对症下药和进行个性化治疗提供依据。然而，由于尿液的成分非常复杂，对尿液成分和尿液中纳米和亚微米晶体的测定，关键在于尿液的处理。
目前进行尿液检测时，处理尿液的方法包括直接检查法、沉淀检查法、离心检查法，也有的对尿液中有形物质进行染色后显微镜检查。但这些方法只适用于尿沉渣检验，主要是检测尿液中有形成分，如白细胞、红细胞、管型、上皮细胞、结晶和盐类等，一般用于医学上常规检验，不适用于尿液组分或者尿液中某种物质含量和浓度的定量检测。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述缺点，提供一种尿液处理方法。所述尿液处理方法，包括以下步骤：收集尿液，加入质量分数为1％～3％的叠氮化钠溶液，叠氮化钠溶液的加入量为尿液体积的0.2％～4％，然后加入无水乙醇，所加入的无水乙醇与尿液的体积比为尿液∶无水乙醇＝(1～3)∶1，静置20～60分钟后，采用0.45～1.2μm滤膜抽滤或离心除去尿液中的细胞碎片和蛋白质即可。
所述的尿液处理方法尿晶体检测前的尿液处理方法。
所述加入的叠氮化钠溶液的质量分数优选为2％。
所述叠氮化钠溶液的加入量较佳为尿液体积的1％～2％。
所述加入的无水乙醇与尿液的体积比较佳为尿液∶无水乙醇＝2∶1。
通过该方法处理过的尿液可用于尿晶体检测。
本发明所述的尿液处理方法具有以下优点：
(1)本发明加入无水乙醇可以使尿液中的蛋白质变性沉淀。
(2)本发明采用0.45～1.2μm滤膜过滤或者离心可以减少尿液中的大分子含量但不会导致纳米和亚微米晶体的沉淀和尿石盐浓度的减少。能排除尿液中细胞碎片和大分子物质对尿液中纳米和亚微米晶体测定的干扰，为尿液中纳米和亚微米晶体的测定提供稳定的尿样。
(3)该方法处理后所提供的尿液，可以用于正确检测尿液中的纳米和亚微米晶体的组分、形貌、尺寸分布，而根据尿晶体的组分、形貌和尺寸分布。
(4)该方法操作简单、准确、快速，能为临床上查找结石成因、预防和治疗提供科学依据。
(5)采用XRD和IR进行成分检测时噪声较小。
(6)叠氮化钠虽然是弱酸强碱盐，但加入量非常少，质量分数仅为尿液的万份之几，所以不会大幅度改变尿液的酸碱度，所以会使尿液中的无机盐保持原有形式存在。
(7)由于去除了微米级粒子，采用纳米粒度仪和激光散射可以测定样品中纳米颗粒的粒度及分布情况。
附图说明
图1是实施例1处理的尿样的XRD谱图，其中a、b为正常人尿液中尿微晶的XRD谱图，c，d为尿石症患者尿液中尿微晶的XRD谱图。
图2是实施例2处理的尿样的TEM图，其中a为正常人尿液中尿微晶的TEM图，其中b为尿石症患者尿液中尿微晶的TEM图。
图3是实施例3处理的尿样的SEM图，其中a为正常人尿液中尿微晶的SEM图，其中b为尿石症患者尿液中尿微晶的SEM图。
图4是实施例4处理的尿样的FT-IR谱图，其中a、b为正常人尿液中尿微晶的FT-IR谱图，c，d为尿石症患者尿液中尿微晶的FT-IR谱图。
图5是实施例5处理的尿样的激光散射谱图，其中a为正常人尿液中尿微晶的激光散射谱图，其中b为尿石症患者尿液中尿微晶的激光散射谱图。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1
收集结石病人和正常人的新鲜晨尿各15ml，立即向所收集结石病人和正常人的新鲜晨尿中各加入0.15ml 2％(质量分数)的叠氮化钠溶液防腐，然后加入15ml无水乙醇，静置30min，使尿液中的蛋白质变性；再用1.2μm的微孔滤膜过滤除去细胞碎片和变性蛋白质沉淀，取滤液将滤液滴在洁净玻璃片上，置于无尘恒温箱内，温度控制在50℃左右，让尿液挥发，留尿液微晶进行XRD表征，结果见图1，图1是本实施例处理的尿样的XRD谱图，其中a、b为正常人尿液中尿微晶的XRD谱图，c，d为尿石症患者尿液中尿微晶的XRD谱图，由图1可以看出正常人尿晶体和尿石症患者尿晶体的XRD谱存在明显差异。
实施例2
收集结石病人和正常人的新鲜晨尿各15ml，立即向所收集结石病人和正常人的新鲜晨尿中各加入0.30ml 1％(质量分数)的叠氮化钠溶液防腐，然后加入15ml无水乙醇，静置40min，使尿液中的蛋白质变性；离心(4000转/分)10min除去细胞碎片和变性蛋白质沉淀，取上清液滴在铜网上，干燥后做TEM检测晶体的形貌和尺寸，结果见图2，图2是本实施例处理的尿样的TEM图，其中a为正常人尿液中尿微晶的TEM图，其中b为尿石症患者尿液中尿微晶的TEM图，由图2可以看出正常人尿晶体和尿石症患者尿晶体的TEM图片存在明显差异。
实施例3
收集结石病人和正常人的新鲜晨尿各15ml，立即向所收集结石病人和正常人的新鲜晨尿中各加入0.30ml 2％(质量分数)的叠氮化钠溶液防腐，然后加入30ml无水乙醇，静置30min，使尿液中的蛋白质变性；再用0.5μm的微孔滤膜过滤除去细胞碎片和变性蛋白质沉淀，滤液用0.15mol/L的NaCl溶液(生理盐水)分别稀释20％后，取其滴在洁净玻璃片上，置于无尘恒温箱内，温度控制在50℃左右，让尿液挥发后，样品喷金处理，对尿液微晶分别进行SEM表征，结果见图3，图3是本实施例处理的尿样的SEM图，其中a为正常人尿液中尿微晶的SEM图，其中b为尿石症患者尿液中尿微晶的SEM图，由图3可以看出正常人尿晶体和尿石症患者尿晶体的SEM图片存在明显差异。尿石症患者的尿微米晶体尺寸不均匀，有聚集现象；而正常人的尺寸分布交为均匀，聚集较少。
实施例4
收集结石病人和正常人的新鲜晨尿各15ml，立即向所收集结石病人和正常人的新鲜晨尿中各加入0.60ml 1％(质量分数)的叠氮化钠溶液防腐，然后加入30ml无水乙醇，静置30min，使尿液中的蛋白质变性；再用1.0μm的微孔滤膜过滤除去细胞碎片和变性蛋白质沉淀，取上层清液滴在洁净玻璃片上，置于无尘恒温箱内，温度控制在50℃左右，让尿液挥发后，将样品与充分干燥的纯KBr混合，在玛瑙研钵内研成粉末，用压模机制成半透明片，迅速置于红外光谱槽中扫描，对尿液微晶分别进行FT-IR表征，结果见图4，图4是本实施例处理的尿样的FT-IR谱图，其中a、b为正常人尿液中尿微晶的FT-IR谱图，c，d为尿石症患者尿液中尿微晶的FT-IR谱图，由图4可以看出正常人尿晶体和尿石症患者尿晶体的FT-IR光谱存在差异。
实施例5
收集结石病人和正常人的新鲜晨尿各15ml，立即向所收集结石病人和正常人的新鲜晨尿中各加入0.45ml 2％(质量分数)的叠氮化钠溶液防腐，然后加入15ml无水乙醇，静置30min，使尿液中的蛋白质变性；离心(4000转/分)30min除去细胞碎片和变性蛋白质沉淀，取上清液用0.15mol/L的NaCl溶液(生理盐水)分别稀释20％后，用激光散射粒度分析仪测定粒径和粒径分布，结果见图5，图5是本实施例处理的尿样的激光散射谱图，其中a为正常人尿液中尿微晶的激光散射谱图，其中b为尿石症患者尿液中尿微晶的激光散射谱图，由图5可见正常人尿晶体和尿石症患者尿晶体的激光散射谱存在明显差异。

Claims (5)

1.尿液处理方法，其特征是，包括以下步骤：收集尿液，加入质量分数为1％～3％的叠氮化钠溶液，叠氮化钠溶液的加入量为尿液体积的0.2％～4％，然后加入无水乙醇，所加入的无水乙醇与尿液的体积比为尿液∶无水乙醇＝1～3∶1，静置20～60分钟后，采用0.45～1.2μm滤膜抽滤除去尿液中的细胞碎片和蛋白质即可。
2.根据权利要求1所述的尿液处理方法，其特征是，所述加入的叠氮化钠溶液中叠氮化钠的质量分数为2％。
3.根据权利要求1所述的尿液处理方法，其特征是，所述叠氮化钠溶液的加入量为尿液体积的1％～2％。
4.根据权利要求1所述的尿液处理方法，其特征是，所述加入的无水乙醇与尿液的体积比为尿液∶无水乙醇＝2∶1。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的尿液处理方法，其特征是，所述的尿液处理方法为尿晶体检测前的尿液处理方法。
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