CN101172111B - 甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物的应用，其中所述的甾体化合物结构如下：

Description

甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及甾体化合物，具体涉及一种甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。

背景技术

心脑血管疾病是威胁人类健康的头号杀手，其发病群体在逐步年轻化，发病率和死亡率也在不断上升。心脑血管疾病的主要病因是心脑血管，中央或外周血管结构和功能的改变，如血管张力的异常增加。目前市场上作为治疗心脑血管疾病的药物都存在一定的不足，如容易产生耐药性，作为治疗心律失常的药物本身又导致心律失常的产生，甚至有的药物具有较强的毒副作用等等。

海洋甾体化合物一直引起海洋化学家和药物研究学家的兴趣，一些结构新颖的海洋甾体化合物具有引人注目的生理和药理活性，有可能为人类治疗重大疾病提供思路。目前已经发现的一些甾体类化合物多具有抗炎、抗肿瘤等多种生理活性，其中有许多已经被开发为新型药品，如环巴胺用于抗肿瘤。但用于心血管疾病的甾体化合物数量较少。海星属棘皮动物门海星纲(Asteroidea)，约有1千2百种，广布全球，以北太平洋分布的种类较多，我国主要分布在渤海以南海域。《中国药用海洋生物》记载多种药用海星。近年来，有关海星活性成分的研究日益受到国内外的关注。迄今为止，已相继从海星体内获得了十几类化合物，它们具有许多重要的生理活性，如抗癌作用，溶血作用，调节生殖发育作用，降血压作用，抗溃疡作用，抗炎，抗病毒及抗菌作用。但目前尚没有关于将其作为治疗心脑血管疾病的药物加以开发利用的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。

其中，所述的甾体化合物结构如下：

本发明所提供的甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，所述的药物是将上述甾体化合物与医药上可接受的赋型剂制成相应的制剂。

本发明的进一步目的是将上述甾体化合物制备成血管舒张剂。

本发明所述的甾体化合物可作为活性成分与医药上可接受的赋型剂制备成各种剂型，如胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、注射剂等。

本发明的优点：

(1)本发明涉及的甾体化合物具有促进血管舒张作用和对KCl诱导的心肌细胞内钙超载的保护作用，可以发挥良好的心血管保护作用。

(2)本发明涉及的甾体化合物可从海星中获得，由于海星资源丰富，本发明涉及的甾体化合物来源非常丰富。

附图说明

图1是实施例1所得的甾体化合物对抗去甲肾上腺素所致血管收缩的作用的张力曲线图。

图2是实施例1所得的甾体化合物对抗KCl所致心肌细胞内钙超载的作用的共聚焦扫描图，其中a：对照；b：KCl；c：对照；d：实施例1所得的甾体化合物+KCl。

具体实施方式

以下提供本发明的一些具体实施例，以助于进一步理解本发明。

实施例1    甾体化合物及其制备

多棘海盘车(Asterias amurensis)4公斤，甲醇回流提取3次(24L×3)，减压回收甲醇。甲醇提取物分散于4L水中，等体积正丁醇萃取3次，合并，减压浓缩得到正丁醇提取物350克。取上述正丁醇提取物，经硅胶柱层析(Φ30×80cm)，氯仿甲醇混合溶液(氯仿和甲醇按照体积比100∶0，50∶1，20∶1，10∶1，8∶2，7∶3，6∶4配比)梯度洗脱，每1000毫升作为一个馏分收集，然后按照薄层层析的结果合并得到15个馏分(馏分A到O)；馏分H(氯仿-甲醇8∶2洗脱部分)20克经ODS中低压柱层析，甲醇-水(体积比30％，50％，70％，90％)梯度洗脱，得到13个子馏分(H-1到H-13)；其中，子馏分H-2(50％甲醇水洗脱部分)经sephadex LH-20柱层析，氯仿-甲醇(体积比1∶1)洗脱，进而采用HPLC制备(甲醇-水55∶45，示差折光检测)，即得本发明的甾体化合物(0.5克)，使用IR、MS、NMR等现代波谱手段结合理化方法鉴定其结构如下：

所得的甾体化合物：3β-O-sulfated-6α-ol-cholest-9(11)-en-23-onesodium salt，白色无定型粉末；[α]_D ²⁵+28.8°(c 1.0，Methanol)；分子式C₂₇H₄₃O₆SNa；正离子ESI-MS给出[M+Na]⁺峰m/z 541，负离子ESI-MS给出[M-Na]^-m/z 495。¹H-NMR和¹³C-NMR数据见表1。

表1.所得化合物核磁共振数据(400MHz，MeOH-d₄)

实施例2    促进血管舒张活性的检测

精密称取实施例1所得的甾体化合物，加入DMSO，振摇溶解配成1mol·L^-1溶液。取大鼠胸主动脉，切割成3mm宽的动脉环，然后将动脉环悬挂在充满生理盐水、体积为20ml的浴槽中，并持续不断通以95％ O₂+5％ CO₂的混合气体。动脉环一端固定，另一端用细线连接到BL-420生物信号记录系统的张力传感器上，给予前负荷1克。稳定一小时后加入去甲肾上腺素。洗脱后，稳定20分钟，加入去甲肾上腺素，在去甲肾上腺素收缩的高峰期加入10μM实施例1所得的甾体化合物(编号为YLH-3)，记录张力曲线。对抗去甲肾上腺素所致血管收缩的作用的张力曲线图如图1所示。

由图1可以看出：去甲肾上腺素使血管明显收缩，张力增加。在去甲肾上腺素收缩的高峰期加入10μM实施例1所得的甾体化合物后，张力明显降低，血管舒张，提示该化合物可通过扩张血管而降低外周阻力，进而增加局部组织的血液供应，对心脑血管起到保护作用。

实施例3    对KCl诱导的心肌细胞内钙超载的保护作用

精密称取实施例1所得的甾体化合物，加入DMSO，振摇溶解配成1mol·L^-1溶液。酶解法分离单个大鼠心室肌细胞，将心肌细胞置于20μmol·L^-1Fluo-3/AM的负载液中，Fluo-3/AM被动扩散进入细胞后，被酯酶水解释出Fluo-3，Fluo-3与Ca²⁺络合，受488nm的激光激发而产生荧光，其荧光值与[Ca²⁺]_i呈正相关，即以荧光值变化表示[Ca²⁺]_i变化，在激光扫描共聚焦显微镜timeseries程序下对细胞XY平面进行扫描，间隔时间为10s，共扫描25次。计算细胞XY平面内平均荧光强度，以平均荧光强度代表[Ca²⁺]_i。

图2是实施例1所得的甾体化合物对抗KCl所致心肌细胞内钙超载的作用的共聚焦扫描图，其中，a：对照；b：KCl；c：对照；d：实施例1所得的甾体化合物+KCl。由图2可以看出：加入KCl诱发心肌细胞内L型钙通道开放，细胞内荧光强度升高，[Ca²⁺]_i增加导致钙超载；而同时加入实施例1所得的甾体化合物和KCl后细胞内荧光强度与对照组相比无明显升高，说明实施例1所得的甾体化合物(即本发明所述的具有心血管保护作用的甾体化合物)可通过抑制Ca²⁺经电压依赖性Ca²⁺通道涌入细胞内，减轻细胞内的钙超载，明显对抗KCl的作用，证明该化合物可抑制心肌细胞钙超载，从而发挥心肌保护作用。

实施例4    胶囊剂的制备

取实施例1所得的甾体化合物20mg和微粉硅胶280mg，充分混合均匀，过筛，加入适量的硬脂酸镁，混匀，用干法造粒机制粒，过筛，筛取40-80目之间的颗粒，装入胶囊，每粒装0.3g。

实施例5    胶囊剂的制备

按照实施例4所述方法制备胶囊，不同的是使用200mg实施例1所得的甾体化合物、200mg微粉硅胶和适量的硬脂酸镁，每粒胶囊装0.4g。

实施例6    片剂的制备

按本技术领域技术人员公知的方法制备实施例1所得的甾体化合物的片剂：其中所述片剂按实际需要制成含20～200mg/片，实施例1所得的甾体化合物100g、微粉硅胶420g、无水乳糖380g、氧化硅30g，混合30分钟后，再筛入200g硬脂酸镁，继续混匀，最后用12/32英寸标准凹冲压成片。

实施例7    注射剂的制备

取注射用水约800毫升，加入氯化钠8克，搅拌溶解，再加入实施例1所得的甾体化合物5克，在加水到1000毫升，搅匀，过滤灌封于中性玻璃容器中，用流通蒸汽100度灭菌30分钟。

Claims (3)

1.甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其中，所述的甾体化合物具有如下结构式：

2.根据权利要求1所述的甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其特征是，所述的药物是所述的甾体化合物与医药上可接受的赋形剂制成的血管舒张剂。

3.根据权利要求1或2所述的甾体化合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其特征是，所述的药物是将所述的甾体化合物与医药上可接受的赋形剂制成的注射剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或者片剂。

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