CN101166526A - 用17-aag或17-ag或其前药与蛋白酶体抑制剂联合治疗多发性骨髓瘤的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗对象的多发性骨髓瘤的方法，即将17－烯丙基氨基－17－去甲氧基－格尔德霉素或17－氨基格尔德霉素或者17－AAG或17－AG的前药与蛋白酶体抑制剂联合给予所述对象。

Description

用17-AAG或17-AG或其前药与蛋白酶体抑制剂联合治疗多发性骨髓瘤的方法

技术领域

本发明涉及用17-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素或17-氨基格尔德霉素或者17-AAG或17-AG的前药与蛋白酶体抑制剂联合治疗多发性骨髓瘤的方法。

发明背景

多发性骨髓瘤(“MM”，也称为骨髓瘤或浆细胞骨髓瘤)是不可治愈但可治疗的浆细胞癌。浆细胞是免疫系统的重要部分，它产生帮助抵御感染和疾病的免疫球蛋白(抗体)。MM的特征是骨髓(“BM”)中异常浆细胞数量过多和过量生产完整的单克隆免疫球蛋白(IgG、IgA、IgD或IgE；“M-蛋白”)或Bence-Jones蛋白(游离的单克隆轻链)。高钙血症、贫血、肾损伤、对细菌感染的易感性增加和正常免疫球蛋白的生产受阻是MM的共同临床表现。MM的特征常常还有弥散性骨质疏松，通常发生在骨盆、脊柱、肋骨和颅骨。

MM的治疗包括化疗、干细胞移植、高剂量化疗与干细胞移植联用以及补救治疗。化疗包括用Thalomid^(沙利度胺)、硼替佐米、Aredia^(帕米膦酸盐)、类固醇和Zometa^(唑来膦酸)治疗。然而，许多化疗药对活跃分裂的非癌细胞，如BM、肠胃内衬和毛囊的细胞有毒性。因此，化疗可导致血细胞计数减少、恶心、呕吐、腹泻和毛发脱落。

MM患者的初期或初步治疗一般是常规化疗或标准剂量化疗。患者也可接受化疗，以准备高剂量化疗和干细胞移植。在移植前，可用诱导治疗(在于细胞移植之前的常规化疗)降低肿瘤负荷。某些化疗药比其它药物更适合诱导治疗，因为它们对BM细胞的毒性较小，并导致BM产生干细胞的产率较高。适用于诱导治疗的化疗药的例子包括地塞米松、沙利度胺/地塞米松、VAD(长春新碱、阿霉素^(多柔比星)和地塞米松联用)和DVd(聚乙二醇化的脂质体多柔比星(Doxil^、Caelyx^)、长春新碱和减少用药的地塞米松联用)。

MM的标准治疗是美法仑与氯泼尼松(皮质类固醇药物)联用，实现50％的反应率。不幸的是，美法仑是烷化剂，不大适合诱导治疗。皮质类固醇(尤其是地塞米松)有时单独用作MM治疗，尤其是在年龄较大的患者和不能耐受化疗的患者中。地塞米松也单独或与其它药物联合用于诱导治疗。VAD是最常用的诱导治疗，但近年来证明，DVd在诱导治疗中同样有效。近年来，硼替佐米已被批准用于治疗MM，但它的毒性很大。然而，现有治疗都无法提供显著的治愈潜能。

17-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(“17-AAG”，有时也称为17-烯丙基氨基格尔德霉素)是天然产生化合物格尔德霉素的半合成类似物(Sasaki等，1981)。可通过培养生产生物体，如吸湿链霉菌去势变种(Streptomyces hygroscopicus var.geldanus)NRRL 3602获得格尔德霉素。另一种生物活性格尔德霉素衍生物是17-氨基格尔德霉素(“17-AG”)，它是17-AAG在人体中代谢产生的物质。17-AG也可由格尔德霉素制备(Sasaki等1979)。虽然在上世纪90年代，已经深入研究了作为抗癌药的格尔德霉素和其类似物(如Sasaki等，1981；Schnur，1995；Schnur等，1999)，但它们都没有被批准用于抗癌应用。

相信17-AAG和格尔德霉素通过结合热休克蛋白-90(“Hsp90”)并抑制其活性起作用(Schulte和Neckers，1998)。Hsp90用作许多细胞蛋白(“客户蛋白”)的正常加工的侣伴蛋白，存在于所有哺乳动物细胞中。应激(缺氧、热等)能诱导其表达增加数倍。还存在其它应激诱导蛋白(辅侣蛋白)如热休克蛋白-70(“Hsp70”)，它们也在细胞应答和应激恢复中起作用。

在癌细胞中，Hsp90抑制导致破坏Hsp90和其客户蛋白如erbB2、类固醇受体、raf-1、cdk4和Akt的相互作用。例如，接触17-AAG导致SKBr3乳腺癌细胞中erbB2耗尽以及Raf-1和突变p53的去稳定(Schulte和Neckers，1998)，乳腺癌细胞中类固醇受体耗尽(Bagatell等，2001)，MEXF 276L黑色素瘤细胞中Hsp90耗尽以及Raf-1和erbB2下调(Burger等，2004)，结肠腺癌细胞中Raf-1、c-Akt和Erk1/2耗尽(Hostein等，2001)，白血病细胞中胞内Bcr-Abl和c-Raf蛋白下调以及Akt激酶活性降低(Nimmanapalli等，2001)，具有野生型Rb的肺癌细胞中cdk4、cdk6和细胞周期蛋白E降解(Jiang和Shapiro，2002)，以及NSCLC细胞中erbBl(EGFR)和erbB2(p185)耗尽(Nguyen等，2000)。

因为17-AAG对参与肿瘤发生和癌细胞转移的Hsp90和其它蛋白有活性，所以许多临床研究者在人类临床试验中评价了它作为抗癌药的有效性。在这些不同试验中，国家癌症研究院(National Cancer Institute)的癌症治疗评价计划(CTEP)推荐用以下2期剂量/方案进行进一步研究：在3周中以220mg/m²(每平方米患者或对象的体表面积的mg数)每周给药两次，给予两周；450mg/m²每周给药一次连续给药，或其间有停药期或中断期；在4周中以300mg/m²每周给药一次，给予3周。用17-AAG进行不同临床试验的结果(几乎仅有实体瘤患者)通常显示出，临床活性有限，小结如下：

(a)在成年实体瘤患者中进行1期试验，其中每3周的5天中，患者每天接受17-AAG。起始剂量是10mg/m²，递增至56mg/m²，最大耐受剂量(“MTD”)和推荐2期剂量确定为40mg/m²。修改该方案，以排除事先患有严重肝病的患者，然后以相同方案用高达110mg/m²的剂量治疗患者。没有观察到客观肿瘤反应。由于剂量限制性可逆肝脏毒性，进一步修改该方案，以便以每隔一周、每周两次的方案进行给药，起始剂量为每日40mg/m²。以每日剂量40和56mg/m²给药5天后，峰值血浆浓度分别为1,860±660和3,170±1,310nM。以56mg/m²治疗的患者中，17-AAG和17-AG的平均AUC值分别为6,708和5,558nM*h，平均t_分别为3.8和8.6小时。17-AAG和17-AG的清除率分别为19.9和30.8 L/h/m²，V_z值分别为93和203 L/m²(Grem等，2005)。

(b)在第二个1期试验中，晚期实体瘤患者每天接受17-AAG，共计5天，起始剂量为5mg/m²。在80mg/m²时，观察到剂量限制性毒性(肝炎、腹痛、恶心、呼吸困难)，然而在剂量达到157mg/m²/天后不再继续增加剂量。进一步修改剂量方案，以便实现每周给药两次。在80mg/m²的剂量水平下，t_为1.5小时，血浆C_max为2,700nM。相似地，就17-AG而言，t_为1.75小时，C_max为607nM。血浆浓度超过了体外和体内异种移植瘤模型中实现细胞杀伤所需的浓度(10-500nM)(Munster等，2001)。

(c)进行17-AAG的1期试验，其中每4周的三周中，每周治疗晚期实体瘤患者，起始剂量为10mg/m²，推荐的2期剂量为295mg/m²。剂量递增达到395mg/m²的剂量，此时观察到胰腺炎继发性恶心和呕吐以及3级疲劳。修改该给药方案，以便实现在每四周的三周中每周给药两次；每3周的2周中每周给药两次。对此试验中获得的数据进行群体药动学(PK)分析。17-AAG在中央室的Vd(分布容积)为24.2 L，在外周室的Vd为89.6 L。17-AAG和17-AG的清除率值分别为26.7 L/h和21.3 L/h。代谢清除说明，46.4％的17-AAG代谢为17-AG。迄今为止，在此试验中没有观察到客观肿瘤反应。(Chen等，2005)。

(d)在4周周期的3周中，每周给药，从而在实体瘤和淋巴瘤患者中进行另一个1期试验。起始剂量为15mg/m²。剂量递增到112mg/m²时没有显著毒性，激素增加剂量，目标是达到“生物学”活性剂量范围。在308mg/m²时达到每周给予17-AAG的MTD。迄今为止，在此试验中没有观察到客观肿瘤反应，经测定，治疗期间Hsp90客户蛋白的水平未改变。没有观察到侣伴蛋白或客户蛋白水平和17-AAG或17-AG PK之间的相关性。17-AAG PK和其临床毒性之间没有相关性(Goetz等，2005)。

(e)用每周给药一次的方案进行另一个1期试验，包括11名转移性黑色素瘤患者。起始剂量为10mg/m²，在450mg/m²/周时观察到剂量限制性毒性(AST升高3/4级)。在较高剂量(16-450mg/m²/周)下，单次输注所用的17-AAG制剂含有10-40mL二甲亚砜(DMSO)，它可能对试验中观察到的胃肠道毒性起到一定作用。用320-450mg/m²治疗的患者中，两名患者显示出放射性验证的长期稳定性疾病。没有记录到完全或部分反应。在最高剂量水平(450mg/m²)下，血浆17-AAG浓度超过10μM并在超过24小时中维持在120nM以上。最高剂量水平450mg/m²下，平均分布容积为142.6L，平均清除率为32.2L/h，平均峰值血浆水平为8,998μg/L。剂量和所研究剂量水平的曲线下面积(AUC)之间呈线性相关。还测定了药效学(PD)参数，在用320-450mg/m²/周治疗的9名患者的8名中观察到诱导辅侣蛋白Hsp70。也在肿瘤活检样品中观察到客户蛋白耗尽：9名患者的8名中CDK4耗尽，24小时时6名患者的4名中Raf-1耗尽。这些数据表明，1-5天即抑制了肿瘤中的Hsp90。(Banerji等，2005)。

用弥散性GFP阳性MM病损的SCID/NOD小鼠模型研究了17-AAG的体内抗-MM活性(Mitsiades等，2006)。存活分析显示，该治疗显著延长了总体存活时间中值，但根据非临床数据常常无法预见临床活性。如上所述，这尤其是17-AAG在实体瘤中的情况，其中在1期临床试验中仍未证实临床前数据的前景。

因此，尽管非常努力地将17-AAG开发成抗癌药，但没有管理机构批准将其用于治疗任何癌症。仍然需要定量和给予17-AAG和17-AAG前药(和其代谢物17-AG)的方法，以便实现其潜在的治疗益处。本发明提供了用17-AAG有效治疗MM的这种方法。

近年来，临床前和临床研究证明，硼替佐米(Velcade，BZ，PS-341)可克服MM细胞对常规或高剂量细胞毒性化疗的耐受性(Hideshima等，2001；Mitsiades等，2001；Mitsiades等，2003)，并改善MM病患结果。最近，硼替佐米已被批准用于治疗复发性和难治性MM(Richardson等，2003a)。临床前研究也表明，用硼替佐米处理MM细胞引发Hsp90显著上调，这是MM细胞的主要应激反应。虽然硼替佐米能够改善病患结果，但它的毒性很高。

本发明提供了能有效治疗多发性骨髓瘤的17-AAG或17-AG或者它们的前药与硼替佐米的联合治疗。

本说明书的最后一部分提供了本文引用的参考文献列表。将本文引用的所有文献纳入本文作参考，就好像将各发表物或文献特别和单独地纳入本文作参考的那样。

发明概述

本发明提供了在需要治疗的对象中治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法，所述方法包括给予所述对象治疗有效剂量的17-AAG或17-AG或者17-AAG或17-AG的前药和治疗有效剂量的蛋白酶体抑制剂的步骤和任选地重复所述给药步骤，直到不再获得进一步的治疗益处。

在一个实施方式中，所述方法包括用至少两周的时间将多个剂量的17-AAG或其前药给予患有MM的对象，其中各剂量的范围约为100mg/m²-340mg/m²的17-AAG或等效量的17-AAG或17-AG前药。在一个实施方式中，所述剂量约为340mg/m²的17-AAG或等效量的17-AAG或17-AG前药。在一个实施方式中，此剂量每周给予两次，至少给予两周。在一个实施方式中，在3周的至少两周中，此剂量每周给予两次，这种每三周的给药速率称为一个周期，对所述MM患者施予多个这种治疗周期。

在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致每剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h的剂量。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG(或前药)的C_max不超过9,600ng/mL(或摩尔等效量的前药)。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,300ng/ml。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,800ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,300ng/mL但不超过9,600ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,800但不超过9,600ng/mL。

在一个实施方式中，17-AG或17-AG的前药(其前药包括17-AAG)的治疗有效剂量是导致每剂量中17-AG的AUC_总约为800ng/mL*h-17,000ng/mL*h的剂量。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AG的C_max不超过1,400ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AG的C_max大于140ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AG的C_max大于230ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AG的C_max大于140但不超过1,400ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AG的C_max大于230但不超过1,400ng/mL。

在一个实施方式中，17-AAG、17-AAG的前药、17-AG或17-AG的前药的治疗有效剂量是导致每剂量中17-AAG和17-AG的总AUC_总约为3,500-35,000ng/mL*h的剂量。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max不超过9,600ng/mL和/或17-AG的C_max不超过1,400ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,300ng/mL和/或17-AG的C_max大于140ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,800ng/mL和/或17-AG的C_max大于230ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,300但不超过9,600ng/mL和/或17-AG的C_max大于140但不超过1,400ng/mL。在一个实施方式中，以一定速率和频率给予此剂量，以使17-AAG的C_max大于1,800但不超过9,600ng/mL和/或17-AG的C_max大于230但不超过1,400ng/mL。

在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致17-AAG的终末t_1/2为1.6-5.6小时的剂量。在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致17-AAG的终末t_在上述范围内和每剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h的剂量。

在一个实施方式中，17-AG或17-AG的前药的治疗有效剂量是导致17-AG的终末t_为3.7-9.1小时的剂量。在一个实施方式中，17-AG或17-AG的前药的治疗有效剂量是导致17-AG的终末t_在上述范围内和每剂量中17-AG的AUC_总约为800-17,000ng/mL*H的剂量。

在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致17-AAG的分布容积V_z为56-250L的剂量。在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致17-AAG的分布容积V_z在上述范围内和每剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h的剂量。

在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致清除率为13-85L/h的剂量。在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致17-AAG的清除率在上述范围内和每剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h的剂量。

在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致V_ss为96-250 L的剂量。在一个实施方式中，17-AAG或17-AAG的前药的治疗有效剂量是导致17-AAG的V_ss在上述范围内和每剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h的剂量。

在一个实施方式中，在单独的药物制剂中分别给予17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药和蛋白酶体抑制剂。在另一实施方式中，17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药和蛋白酶体抑制剂在同一药物制剂中。各药物制剂还任选地含有药学上可接受的运载体或稀释剂。

在一个实施方式中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。在一个实施方式中，以输注90或120分钟的方式给予各剂量的17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药，以静脉内快速推注3-5秒的方式给予各剂量的硼替佐米。在一个实施方式中，在给予各剂量的17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药之前给予各剂量的硼替佐米。在一个实施方式中，所述方法包括用至少2周时间给予MM患者多个剂量的硼替佐米，其中各剂量至少为1mg/m²或约为1mg/m²-1.3mg/m²硼替佐米。

在一个实施方式中，所述方法包括用至少2周时间给予MM患者多个剂量的硼替佐米和17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药，其中各剂量的硼替佐米至少为1mg/m²或约为1-1.3mg/m²硼替佐米，各剂量的17-AAG至少为100mg/m²17-AAG(或等效量的17-AG或17-AAG或17-AG的前药)或约为100-340mg/m²17-AAG(或等效量的17-AG或17-AAG或17-AG的前药)。在优选实施方式中，所述方法包括用至少2周时间给予MM患者多个剂量的硼替佐米和17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药，其中各剂量的硼替佐米至少为1mg/m²或约为1-1.3mg/m²硼替佐米，各剂量的17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药至少为150mg/m²17-AAG(或等效量的17-AG或17-AAG或17-AG的前药)或约为150-340mg/m²17-AAG(或等效量的17-AG或17-AAG或17-AG的前药)。

附图简要说明

图1显示了剂量水平1(0.7mg/m²硼替佐米和100mg/m²17-AAG)下相对于时间的17-AAG和17-AG的血浆浓度，组合了第1天和第11天的平均值和标准差(SD)。

图2显示了剂量水平2(1.0mg/m²硼替佐米和100mg/m²17-AAG)下相对于时间的17-AAG和17-AG的血浆浓度，组合了第1天和第11天的平均值和SD。

图3显示了剂量水平3(1.0mg/m²硼替佐米和150mg/m²17-AAG)下相对于时间的17-AAG和17-AG的血浆浓度，组合了第1天和第11天的平均值和SD。

图4显示了剂量水平4(1.3mg/m²硼替佐米和150mg/m²17-AAG)下相对于时间的17-AAG和17-AG的血浆浓度，组合了第1天和第11天的平均值和SD。

图5显示了个体患者的17-AAG和17-AG的AUC总。

图6显示了个体患者的总接触值(AUC_总(17-AAG)和AUC_总(17-AG)之和)。

图7显示了患者的血清M-峰、总IgA和尿M-蛋白的降低百分数(患者201)。

图8显示了患者的血清M-峰和总IgG的降低百分数(患者204)。

图9显示了患者的血清M-峰降低百分数(患者307)。

图10显示了患者的血清M-峰和尿M-蛋白的降低百分数(患者308)。

图11显示了给予0.7mg/m²硼替佐米和100mg/m²17-AAG；1.0mg/m²硼替佐米和100mg/m²17-AAG；1.0mg/m²硼替佐米和150mg/m²17-AAG以及1.3mg/m²硼替佐米和150mg/m²17-AAG后20S蛋白酶体活性降低的百分数(治疗周期1，第11天)。

图12A和12B显示了输注17-AAG四次之后在CD138+骨髓瘤细胞中诱导凋亡并使AKT水平降低。

发明详述

定义

为了帮助理解和实施本发明，以下提供本文所用某些术语的定义。

在描述本发明的过程中，17-AAG浓度定义为包括17-AAG前药的摩尔等效浓度。

在描述本发明的过程中，17-AG浓度定义为包括17-AG前药的摩尔等效浓度。

“副作用”的定义与国家癌症研究院(National Cancer Institute)(2003)相同。

“剂量限制性毒性”(DLT)定义为以下任何临床毒性，参照国家癌症研究院(2003)。血液毒性包括：(1)4级嗜中性白血球减少症(连续5天以上绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)＜0.5×10⁹/L)，或发热性嗜中性白血球减少症(ANC＜1.0×10⁹/L，发热≥38.5℃)，(2)4级血小板减少(血小板＜25.0×10⁹/L或出血时需要输入血小板)，和/或4级贫血(血红蛋白＜6.5g/d1)。非血液学毒性包括：(1)任何≥3级的非血液学毒性(除了3级注射部位反应、脱发、食欲缺乏、疲劳)，(2)尽管采用了最大限度的医学介入和/或预防，仍有≥3级的恶心、腹泻和/或呕吐，和/或(3)由于从药物相关毒性恢复的时间延长，治疗延迟4周以上。

“完全反应(CR)”定义为对血清和尿的阴性免疫固定(“IF”)持续至少6周。含有＜5％浆细胞的骨髓吸出物(“BMA”)可用于验证CR。进行环钻活检，结果表明浆细胞＜5％。在非分泌型骨髓瘤，6周间隔后重复骨髓活检，以验证CR。溶骨性病变的大小和数量不应该增加(发生压缩性骨折不排除反应)，软组织浆细胞瘤消失。

“KPS行为状态”的定义如表1所示，该表也提供了与ECOG标准的比较。

表1-KPS行为状态
				Kamofsky标准		ECOG标准
正常，无抱怨	100	完全活动性，能够进行所有病前行为，无限制	0
				能够坚持正常活动，少量病征或症状	90
通过努力能正常活动	80	体力劳动能力受限，但能步行，并能够进行轻微或静坐的工作(如办公室工作或轻家务劳动)	1
				不能进行正常活动或进行工作；自我照顾	70
偶尔需要帮助，但能够照顾大多数自身需求	60	能步行，并能够进行所有自我照顾，但不能进行任何劳动；超过50％的清醒时间起床走动	2
				需要大量帮助，经常性医疗护理	50
丧失能力；需要特殊医疗护理和帮助	40	仅能够进行有限的自我照顾，超过50％的清醒时间限制于床或椅	3
				严重丧失能力；住院治疗，但未濒临死亡	30
重病；住院治疗和能活动	20	完全丧失能力；不能进行任何自我照顾；完全限制于床或椅	4
				濒临死亡；死亡过程进展迅速	10
死亡	0

“最小反应”定义为下述一种或多种情况：血清M-蛋白减少25-49％，维持至少六周；尿轻链排泄减少50-89％，但仍超过200mg/24小时，维持至少6周；对于仅患非分泌型骨髓瘤的患者，BMA或骨环钻活检样品(如果进行活检)中浆细胞减少25-49％，维持至少6周；软组织浆细胞瘤减小25-49％(经射线照相法或临床检测)；，溶骨性病变的大小或数量没有增加(发生压缩性骨折不排除反应)。(Bladé等，1998)。

“无改变”定义为不满足最小反应或进行性疾病的标准。(Bladé等，1998)

“部分反应(PR)”定义为满足了一部分、而非全部CR标准的患者，包括常规电泳为阴性但未进行IF的患者发生的反应。参见例如Bladé等(1998)。

“平台期”定义为稳定的副蛋白水平持续至少3个月。平台要求在评价反应时观察结果在值的25％以内，升高到25％以上是疾病进展的标准之一。(Bladé等，1998.)

不属于CR的患者的“疾病进展”定义为部份缓解或平台期的患者的疾病活性明确增加，而术语复发应用于先前属于CR的患者再次发生明显疾病。参见例如Bladé等(1998)。

“难治性癌症”指对一种或多种在先治疗不反应的癌症。

“复发”指通过一种或多种在先治疗获得一段时间改善后返回癌症的病症和症状。“由CR复发”定义为以下一种或多种情况：IF或常规电泳上再次出现血清或尿副蛋白，通过至少一种其它实验进行确认并排除了寡克隆重建；BMA或环钻骨活检样品中浆细胞多于5％；发生新的溶骨性病变或软组织浆细胞瘤或残留骨病变的大小明显增加(发生压缩性骨折不排除连续反应，可能不表示进展)；和发生不可归因于任何其它原因的高钙血症(校正的血清钙大于11.5mg/dL)。

除非另有说明，“治疗有效剂量”指给药后实现所需治疗结果所需的药物量。

实施方式

本发明提供了一种采用17-AAG或17-AG和具有其抗癌效果的它们的前药通过17-AAG或17-AG的体内形成治疗MM的重要新方法。本发明的产生部分借助于新方法的发现，所述方法用于定量和给予17-AAG以实现和维持治疗有效血液水平的17-AAG或其主要代谢物17-AG(或17-AAG与17-AG加在一起的血液水平，因为这些部分在细胞试验中等效)，表示为AUC_总、C_max、终末T_清除率和/或分布容积和/或V_ss，而不达到可能引起无法控制的毒性的血液水平。

在一个实施方式中，本发明方法包括用三周时间给予多个剂量的17-AAG或17-AAG的前药和多个剂量的蛋白酶体抑制剂。总之，所述三周期间的剂量给药称为一个周期。可用多个治疗周期治疗患者。可用不同周期(包括与本文特别描述的实施方式相比时间较长或较短或包括较多或较少剂量的周期)实施本发明，只要达到本文所述的治疗有效剂量。在一个实施方式中，每个周期给予四个剂量，各剂量之间间隔3-4天。在另一实施方式中，每个周期给予四个剂量，在三周周期的前两周每周给予两个剂量。

在一个实施方式中，在至少3周的时间中通过将多个剂量的17-AAG、或者17-AAG或17-AG的前药、以及蛋白酶体抑制剂联合给予(包括在至少一周内分别给予)MM患者实现所述治疗有效剂量，其中所述多个剂量导致每剂量中17-AAG的AUC_总至少为2,300ng/ml*h但不超过19,000ng/ml*h。在一个实施方式中，每个周期给予四个剂量，各剂量至少为100或150mg/m²，各剂量之间间隔3-4天。在另一实施方式中，每个周期给予四个剂量，在三周周期中的头两周，每周给予两个剂量。

可给予在体内能转化为17-AAG或17-AG的除17-AAG或17-AG以外的化合物(前药)。一种类型的前药是苯醌环被还原成氢醌环、但在对象中又代谢成苯醌环的化合物。17-AAG前药的特定例子是17-烯丙基氨基-18，21-二氢-17-去甲氧基格尔德霉素。(Adams等，2005)。因此，在一个实施方式中，本发明方法包括在需要治疗的患者中治疗MM的方法，其中所述方法包括用至少3周的时间将多个剂量的17-AAG或17-AG或者17-AAG或17-AG的前药给予MM患者，其中所述多个剂量导致每剂量中17-AG的AUC_总至少为5,000但不超过18,000ng/mL*h。在一个实施方式中，每个周期给予四个剂量，各剂量至少为150mg/m²，各剂量之间间隔3-4天。在另一实施方式中，每个周期给予四个剂量，在三周周期中的头两周，每周给予两个剂量。

因此，本发明的范围内包括采用17-AAG的前药，术语“给予”包括用药学等效量的给予需要治疗对象后能体内转化为17-AAG或17-AG的化合物治疗MM。Wermuth，2003中描述了选择和制备合适的前药衍生物的常规方法。

蛋白酶体抑制剂是与17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药联用能有效治疗MM患者或通过基本类似于硼替佐米的机制行使其治疗作用的抑制蛋白酶体降解蛋白质的任何化合物。在一个实施方式中，蛋白酶体抑制剂是抗肿瘤药，并且是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶-样活性的可逆抑制剂。蛋白酶体抑制剂可以是天然或合成的。合适的天然蛋白酶体抑制剂包括但不限于：乳胞素、环氧酮和TMC-95环肽。环氧酮的例子包括但不限于：环氧霉素(epoxomicin)和艾硼霉素(eponemycin)。合适的合成蛋白酶体抑制剂包括但不限于：肽醛和肽乙烯基砜。肽醛的例子包括但不限于：Z-Leu-Leu-Leu-al(MG132)、Z-Ile-Glu(Obut)-Ala-Leu-al(PSI)和Ac-Leu-Leu-Nle-al(ALLN)。参见例如，Kisselev和Goldberg(2001)和Richardson等(2003b)。蛋白酶体抑制剂的例子包括但不限于：PS-519(Shah等(2002))、NPI-0052(Cusack等(2005))、ZL3VS(Kadlcikova等(2004))、AdaAhx3L3VS(Kadlcikova等(2004))、艾法肽菌素(efrapeptin)(Abrahams等(1996))。在一个实施方式中，肽醛的醛基被硼酸取代，形成肽硼酸。在一个实施方式中，肽硼酸是二肽硼酸，优选硼替佐米。

硼替佐米是抗肿瘤改性的二肽硼酸，它是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶-样活性的可逆抑制剂。Adams等(1998、2000、2001、2003和2004)和Gupta(2004)中介绍了硼替佐米的制备和使用以及合适的药物剂型和给药方式。硼替佐米以商品名Velcade出售(Millennium Pharmaceuticals，Inc.，Cambridge，MA)，批准用于治疗接受过至少一次治疗并且在在先治疗后显示疾病进展的MM患者。含有硼替佐米的药物制剂可含有约0.9％盐水和1.0mg/mL甘露醇。硼替佐米的一个剂量可以是至少约0.7-1.3mg/m²。可通过注射给予硼替佐米，通过直接注射或静脉内输注在3-5秒内将整个剂量注射到对象体内。

出于本发明目的，需要治疗的对象一般是患有MM的人患者，但本发明方法也可用于兽医目的，只要适当调节单位剂量以获得与本文所述AUC_总或其它PK和PD参数等效的用于感兴趣的具体哺乳动物(包括猫、牛、犬、马等)的剂量。药物科学领域技术人员通过本发明公开的剂量和人体治疗的PK参数能了解并不难确定感兴趣物种的适用转换系数。然而，所述方法一般用于使人对象受益，所述对象一般显示出一些MM的组织学证据，包括以下一种或多种情况：血清或尿中的M-峰、BM浆细胞增多＞30％、贫血、肾衰竭、高钙血症和/或溶骨性病变。

在一个实施方式中，根据Durie-Salmon系统诊断为III期MM的患者显示出以下一种或多种症状：血红蛋白值＜8.5g/dL，血清钙值＞12mg/dL，晚期溶骨性病变(3级)，高M-组分生产率(IgG值＞7g/dL；IgA值＞5g/dl；Bence Jones蛋白＞12g/24小时)。或者，根据International Staging System(ISS)系统诊断为III期MM的对象β-2微球蛋白血清水平＞5.5g/dL。

在一个实施方式中，根据Durie-Salmon系统诊断为II期MM的对象没有III期MM但显示出以下一些症状而非全部症状：血红蛋白值＞10g/dL、血清钙值≤12mg/dL、骨x射线显示正常骨结构(0级)或仅有骨浆细胞瘤、低M组分生产率(IgG值＜5g/dL；IgA值＜5g/dL)。或者，根据ISS系统将该对象诊断为II期MM而非III期MM，其没有＜3.5g/dL的β-2微球蛋白血清水平和≥3.5g/dL的清蛋白血清水平。

在另一实施方式中，所述患者具有一种或多种以下MM病症或症状：血清M蛋白的水平升高(如＞3g/dL)，和/或来自对象的BM样品中10％以上的细胞是浆细胞。在另一实施方式中，在治疗前患者的Karnofsky行为状态(KPS)至少为70％。在另一方面，患者的KPS至少为60％、50％、40％、30％、20％或10％。在一个方面，所述患者的ECOG至少为0、1、2或3。

17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药的治疗有效剂量和蛋白酶体抑制剂的治疗有效剂量是是在一个治疗每次联合给予对象能带来治疗结果的17-AAG、17-AG或者17-AAG或17-AG的前药以及蛋白酶体的量。治疗结果可以是癌症的进展或扩散的速率减慢或停止一段时间。在一些患者中，治疗结果可以是完全或部分消除了MM。在一些患者中，可用一个治疗周期实现治疗结果。在其它患者中，仅在多个治疗周期后才能实现治疗结果。然而，本领域技术人员应理解，任何抗癌治疗都无法保证每位MM患者获得治疗结果。

如上所述，在一个实施方式中，各治疗周期是三周。在其它实施方式中，可采用其它治疗周期时间，如2或4周(或一个月)，只要实现本文所述的等效AUC_总或其它PK和PD参数。每个治疗周期中，各周期中采用的单位剂量给予至少一次，至多8次。一般地，每个治疗周期中所述剂量给予2-4次。在一个实施方式中，在各个三周的治疗周期的2周中，每周给予该剂量两次2次。例如，如果在给予第一个剂量时开始周期，那么在一个实施方式中，在治疗周期的头两周而非第三周中给予该单位剂量一次或两次。在一个实施方式中，在各治疗周期的第1、4、8和11天给予该剂量，第1天是给予第一个剂量的那天。

17-AAG的各单位剂量是不大于最大耐受剂量(“MTD”)的剂量，MTD可定义为接受该治疗方法的六名对象中一名或更少的对象显示出无法进行支持性护理的血液学或非血液学毒性的最大剂量。17-AAG的给药量优选等于或小于MTD。17-AAG的给药量优选为不导致不可接受和/或无法控制的血液学或非血液学毒性的剂量。

单位剂量17-AAG或17-AG或其前药的治疗有效量是经过一个或多个本发明给药周期后，在至少一段时间，如3周、6周、2个月、6个月、一年或几年中，产生完全反应(CR)、部分反应(PR)、最小反应(MR)、稳定性疾病(StD)状况、血清单克隆蛋白(血清M蛋白)减少或对象BM中浆细胞减少的量(Bladé等，1998)。在一个实施方式中，给予17-AAG导致MM患者的血清和/或尿M蛋白减少、BM浆细胞减少、贫血减轻、肾衰竭减轻、高钙血症减轻和/或溶骨性病变减轻/缓解。在一个实施方式中，一些患者不会从CR复发或疾病进展出现显著延迟。

在一个单位剂量中给予的17-AAG量可以是每剂量100-340mg/m²。每三周的两周中，每周给予17-AAG两次时，17-AAG的给药量为每剂量100-340mg/m²。优选地，17-AAG的给药量为每剂量150-340mg/m²。17-AAG的给药量也可以是每剂量220-340mg/m²。本领域技术人员应了解，17-AAG或17-AG前药或者17-AG本身的单位剂量可通过本文提供的17-AAG剂量以及提供的17-AAG和17-AG的PK参数以及前药或17-AG的分子量和相对生物利用度计算。

也可按照每个治疗周期17-AAG的给药量来描述本发明方法。每个周期的剂量一般大于400mg/m²，更通常大于600mg/m²。每个周期的剂量一般为至少880mg/m²。在各种实施方式中，17-AAG的给药量至少为600-1,360mg/m²/治疗周期；880-1,360mg/m²/治疗周期和1,100-1,360mg/m²/治疗周期。

当蛋白酶体抑制剂是硼替佐米时，单个剂量中的给药量可以是每剂量0.7-1.3mg/m²。一个单位剂量中的给药量可以是每剂量0.7、1.0或1.7mg/m²。每三周的两周中，每周给予硼替佐米两次时，给药量可以是每剂量0.7-1.3mg/m²。也可根据硼替佐米给药量/治疗周期描述本发明方法。每个周期的量一般大于2.8，更通常大于4.0mg/m²。每个周期的量一般为至少5.2mg/m²。或者，硼替佐米给药量至少为2.8-5.2mg/m²/治疗周期或4.0-5.2mg/m²/治疗周期。

如上所述，给予单位剂量的频率为每周一次或每周两次。在本发明方法的一个实施方式中，每3或4周的2周中，每周静脉内给予该药物制剂两次。在一个实施方式中，给予该患者治疗前药物，以预防或缓解治疗相关毒性。以下实施例中描述了说明性治疗前用药。在本发明方法的一个实施方式中，在各周期的第1、4、8和11天给予17-AAG或17-AG或其前药，该周期时间是3周。一般通过静脉内输注给予17-AAG，输注时间至少为30、60、90或120分钟。就体表面积(“BSA”)大于2.4m²的患者而言，可按照本文所述方法用最大BSA 2.4m²计算剂量。

在本发明方法的人类临床试验中，将不达到剂量限制性毒性(“DLT”)的以下给药方案用于任何治疗患者：在三周的两周中(第1、4、8和11天，周期时间为21天)，每次给予275mg/m²17-AAG，每周给药两次。

如上所述，给予17-AAG后，在对象中出现本身具有抗癌活性的主要代谢物17-AG。因此，17-AAG和17-AG各自并一起产生本发明方法的治疗益处。17-AAG的治疗有效剂量和给药方案是在本文所述对象中实现17-AAG和/或17-AG的曲线下面积(AUC_总)的剂量和方案。以下实施例中介绍了各种治疗有效剂量和给药方案。也可根据终末半衰期(t_)、清除率(CL)和/或消除期或稳态的分布容积(V_z和/或V_ss)描述本发明提供的17-AAG和/或17-AG的治疗有效剂量和给药方案。

治疗开始后3、6、12、18或24周，即可在对应对象中观察到本发明治疗方法的治疗益处。在一个实施方式中，所述治疗的治疗益处是患者的血清蛋白和/或BUN或血清钙减少。在各种实施方式中，减少了至少25％；至少50％-80％；至少90％；和100％。可通过(例如)血清蛋白电泳或免疫固定技术测定血清M蛋白的减少。在治疗一段时间后测定患者的血清蛋白、BUN或钙的水平降低百分数，然后与临治疗前测定的患者的血清M蛋白、BUN或钙的水平作比较。血清蛋白是在血清中水平升高时表明该对象患有MM的蛋白质。这种血清蛋白包括但不限于：血清M蛋白(也称为血清M副蛋白)、β2-微球蛋白、轻链和总蛋白。

可通过本发明获得的其它治疗益处包括以下一种或多种益处：BM浆细胞减少、贫血减轻、肾衰竭减轻、高钙血症减轻和/或溶骨性病变减轻/缓解。另一治疗益处是患者KPS改善了10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多或者50％或更多。另一治疗益处是患者ECOG改善了1或更多、2或更多或者3或更多。

理想地，实施本发明不产生无法控制的血液学或非血液学毒性。要避免的血液学毒性包括：4级嗜中性白血球减少症、4级血小板减少和/或4级贫血。非血液学毒性包括：任何≥3级的非血液学毒性(除了注射部位反应、脱发、食欲缺乏和/或疲劳)、恶心、腹泻和/或呕吐≥3级(尽管采用最大限度的医学介入和/或预防)和/或由于从药物相关毒性恢复的时间延长而使治疗延迟4周以上。本领域技术人员认识到，癌症患者中可能出现各种毒性；本发明方法提供了减少或消除这些毒性的发生的益处。

药物制剂含有可引起过敏反应的其它化合物(如克列莫佛^)时，可给予其它药物以预防或减轻过敏反应，如(a)氯雷他定或苯海拉明，(b)法莫替丁和(c)甲泼尼龙或地塞米松。

本发明也在各种实施方式中提供了，通过与蛋白酶体抑制剂和第三种抗癌化合物联合给予17-AAG或17-AG或其前药治疗MM的方法，所述另一种抗癌化合物可以是(例如)Thalomid^、Aredia^和Zometa^或Revlimid^(来那度胺)。可以单位剂量和本领域目前采用的给药方案给予另一种抗癌药物或药剂。

可用本发明治疗至少一种现有的抗癌治疗方案失败，即患有难治性或复发的难治性MM的MM患者。这些现有的抗癌治疗包括但不限于：单一治疗(单一药物治疗)或以下治疗和抗癌药的联合治疗：化疗、干细胞移植、Thalomid^、Velcade^和Revlimid^。化疗包括美法仑和氯泼尼松联合治疗(MP)、VAD或者烷化剂单用或与其它药物联用。如环磷酰胺+依托泊甙或依托泊甙、地塞米松、多柔比星的联合治疗。

可能有益于实施本发明的诊断和实验室的方法和测试是本领域普通技术人员熟知的。参见例如，Pagana和Pagana，《Mosby诊断和实验室测试手册》(Mosby′s Manualof Diagnostic and Laboratory Tests)，第2版，Mosby-Year Book，2002；Jacobs和DeMott《实验室测试手册》(Laboratory Test Handbook)，第5版，Jacobs等(编)，Lexi-Comp，Inc.，2001(各自纳入本文作参考)。可用Freelite^TM(The Binding Site Inc.，英国伯明翰)测定血清中游离的κ和游离的λ轻链浓度。

用于本发明方法的活性药物成分(“API”，17-AAG、17-AG、前药、蛋白酶体抑制剂、其它抗癌化合物等)可配制成适合口服或静脉内给药的固体或液体形式。参见Gennaro编，《雷明顿：药物科学和实践》(Remington：The Science and Practice ofPharmacy)，第20版(Lippincott Williams&Wilkins 2003)，纳入本文作参考。API可与(例如)用于溶液、乳液、悬液或适合经肠给药或胃肠道外给药的任何其它形式的药学上可接受的无毒运载体或赋形剂混合。药学上可接受的运载体包括适合用于制备液化形式的制剂的水和其它运载体。此外，可采用辅助性稳定剂、增稠剂和着色剂。

用于本发明方法的API可配制成微胶囊、纳米颗粒或纳米悬液。这些制剂的总体方案参见(例如)《医学和药学中的微胶囊和纳米颗粒》(Microcapsules and Nanoparticlesin Medicine and Pharmacy)，Max Donbrow编，CRC Press(1992)和Bosch等(1996)、DeCastro(1996)和Bagchi等(1997)。通过提高表面积与体积的比率，这些制剂尤其适用于递送17-AAG或另一种相对不溶的API。

可用维生素E或其PEG化衍生物将17-AAG配制成乳液。用这些赋形剂配制制剂的一般方法参见Quay等(1998)和Lambert等(2000)。可将17-AAG溶解于含有乙醇(优选少于1％w/v)的水溶液中。加入维生素E或PEG化维生素E。然后去除乙醇，以形成可配成用于静脉内或口服给药途径的预制乳剂。

可用于本发明方法的药物制剂的另一种制备方法包括将17-AAG或其它API包入脂质体中。形成作为药物递送载体的脂质体的方法是本领域熟知的。适合本发明的合适方法包括Boni等(1997)、Straubinder等(1995)和Rahman等(1995)(紫杉醇)以及Sonntag等(2001)(大环内酯)所述的方法，已作必要改动。在可用于这些制剂的各种脂质中，值得注意的是磷脂酰胆碱和聚乙二醇-衍生的二硬脂酰磷脂酰-乙醇胺。

可与载体物质混合产生一种或单位剂型的17-AAG或其它API取决于所治疗的对象和具体的给药方式。例如，用于静脉内的制剂的17-AAG含量约为1mg/mL-25mg/mL，优选约为5mg/mL，更优选约为10mg/mL。一般在临用前用注射用水(WFI)、生理盐水或5％右旋糖溶液将静脉内制剂稀释约2-30倍。在许多情况下，稀释约5-10倍。

在本发明方法的一个实施方式中，将17-AAG配制成含有溶解于载体的17-AAG的药物溶液制剂，所述载体含有(i)第一组分即乙醇；(ii)第二组分即聚乙氧基化蓖麻油；和(iii)选自丙二醇、PEG 300、PEG 400、甘油或其组合的第三组分，如Zhong等(2005)所述。

可以采用的另一种17-AAG的制剂是基于二甲亚砜(“DMSO”)和卵磷脂的制剂，如Tabibi等(2004)所述。然而，由于DMSO的某些特性(气味、患者副反应)，与本文所述不含DMSO的制剂相比不大优选这种制剂。

可用于本发明方法的其它17-AAG制剂参见Ulm等(2003)、Ulm等(2004)、Mansfield等(2006)、Desai等(2006)和Isaacs等(2006)。

在另一实施方式中，在用无菌WFI给药前，可以1∶7地稀释药物制剂USP(一份未稀释的药品加入6份无菌WFI)。在无菌控制条件下进行稀释。以17-AAG为例，最终稀释的药品浓度至少为1.00mg/mL，如约1.43、约2.00或约10.00mg/mL。

根据BSA和指定剂量，17-AAG或其它API的剂量需要将不同体积的药品加入混合包中。可计算过充盈，以说明给药装置的损失。优选地，含有稀释药品的药物制剂的pH为中性，该溶液为高渗溶液，约为600mOsm。该药物制剂可于-20℃避光保存。在混合之前使药品升温至室温，然后通过温和颠倒混合。稀释后，该药品应该在室温下稳定约10小时以上(稀释度1∶7)。

下述实施例描述了上面以小结方式详细描述的本发明。

实施例1-用17-AAG和硼替佐米联合治疗多发性骨髓瘤患者

在开放标记、剂量递增的临床试验中检测本发明方法。设计试验以确定在持续3周的给药周期的第1、4、8和11天通过60分钟IV输注与硼替佐米共同给药的17-AAG的MTD。此试验的剂量递增组分从硼替佐米推荐剂量的约50％开始给药，用前述制剂将17-AAG起始剂量设定为稍低于单一药物剂量的50％(100mg/m²)。然后逐渐增加各药物的剂量，直到可以确定此联合用药的MTD。

每两个治疗周期(大约每6周)后评价疾病反应。根据按照标准化骨髓瘤反应评价系统作出的客观肿瘤评价在稳定或有反应的患者中测定抗肿瘤效力。

在开始治疗前28天内进行所有基线成像肿瘤评价，然后每6周(约每两个周期)再评价一次。检测具有对应肿瘤的所有患者(CR或PR)，以确认第一次记录反应后6周的反应。按照Bladé等(1998)的指南制订所用的反应标准。

仅在第一个治疗周期中获得药代动力学(PK)和药效学(PD)样品。在药物相关性严重副作用(SAEs)和/或4级毒性的情况下，额外收集PK样品。

此研究中征集的MM患者是先前至少经历两种抗癌治疗方案失败的患者。征集标准为：(1)患者年龄至少为18岁；(2)KPS行为状态＞70％；(3)有MM的组织学证据但不一定能检测到疾病，但一定在治疗开始前28天内评价疾病；(4)根据先前进行的任何化疗、手术或放疗的所有副作用，转变为NCI CTCAE(3.0版)级别≤2；和(5)17-AAG给药10天内产生以下实验室结果：血红蛋白≥8g/dL，绝对嗜中性粒细胞计数≥1.5×10⁹/L，血小板计数≥75×10⁹/L，血清胆红素≤2×正常值上限(ULN)，AST≤2.5×ULN，血清肌酸酐≤2×ULN。

按照表1所述的KPS行为状态标准对患者进行分级。如果患者有以下情况如先前存在神经病、怀孕、哺乳、最近接受过化疗等，则将该患者排除在本研究之外。患者也得满足某些血液学条件，才能符合征集的条件。

17-AAG在血浆中与蛋白质高度结合(在采用人血的体外实验中结合率约为95％)；然而，药物结合的血浆蛋白和结合亲和力未知。征集到试验中后，对接受已知与蛋白质高度结合的药物的患者进行密切临床监测。体外研究表明，细胞色素P450酶参与了17-AAG代谢。没有用17-AAG和作为细胞色素P450-3A4的底物、抑制剂或诱导物的药物进行正式的药物相互作用研究。虽然将任何药物与17-AAG同步使用没有禁忌征，但将17-AAG与蛋白质高度结合的药物(如华法林)和作为细胞色素P450-3A4的底物、抑制剂或诱导物的药物联用时应该小心。不将激素避孕药施用于征集到该试验中有怀孕可能的妇女。在整个研究期间(从第一次给药前3周直至治疗评价结束)不允许有其它试验药。

PK评价包括以下测试：仅在第一次和第四次给予17-AAG后(第1天和第11天)收集用于测定母体化合物及其初级代谢物的浓度的血样。收集的PK样品总数约为115mL全血(7-8大汤匙)。如果患者显示出可能与药物有关的SAE，额外收集PK样品。用留置导管从输注部位的对侧手臂抽血，以避免多次扎针。就17-AAG样品而言，将5mL血液抽入含有肝素作为抗凝剂的真空管中。将该血液试管颠倒数次，立即将该试管置于冰水中，等待血浆分离。如果用导管采血，在每次样品采集之前完全抽出导管中的液体并丢弃。在采集和离心过程中，将血浆样品保持在冰水上。将血浆样品分入两个冻存管中，然后冷冻于-70℃。通过经验证的LC/MS法测定17-AAG和其初级代谢物17-AG的血浆浓度。(Egorin等，1998)。

PD评价包括以下测试：(1)临床相关性：将感兴趣特定毒性的情况(如严重性、持续时间和可逆性)与PK参数(如清除率、接触值、清除半衰期、最大血浆浓度和目标血浆浓度以上的时间)作比较。这些毒性包括肝脏毒性和胃肠道毒性。(2)多发性骨髓瘤细胞：(i)MM细胞表面表达IL-6R、胰岛素样生长因子受体-1(IGF-1R)；(ii)MM细胞中磷酸化-Akt、Akt、Hsp90和Hsp70的总表达；和(iii)基因表达概况分析以鉴定有关药物敏感性和耐受性的其它可能生物标记物。纯化在基线(第一次给予研究药物前至多3周)、第四次输注17-AAG和硼替佐米(第11天)后3-4小时和治疗结束后(或在发生进行性疾病时)获得的骨髓(BM)吸出物中的MM细胞。用磁珠技术根据CD138表达从BM吸出物中纯化MM细胞，并经流式细胞术分析确认＞95％是CD138+MM细胞。流式细胞术分析用荧光素异硫氰酸酯(FITC)-偶联的抗-人IGF-1R单克隆抗体(R&D Systems，Minneapolis，MN)评价了IGF-1R表面表达。免疫印迹分析评价了磷酸化-Akt、AKT、Hsp90和Hsp70的总水平。(3)外周血单核细胞：获得PBMC(治疗前以及第1天和第11天静脉内推注硼替佐米后4小时)，并通过Western印迹检测Hsp70、Hsp90和其它蛋白的改变。在PBMC分离中，将血液采集到不含防腐剂的肝素(袋)中，通过Ficoll-Paque密度梯度离心分离PBMC。(4)按照Lightcap等(2000)的方法评价蛋白酶体功能的抑制百分数(通过测定20S蛋白酶体活性评价)。输注前，第1天和第11天IV推注硼替佐米1、4和24小时后获得全血裂解物。(5)血浆：将全血(每个时间点8cc)收集到含有EDTA的试管中。

进行治疗结束评价的方法如下。计划的治疗时间为24周(8个周期)。在没有进行性级别或不可接受的治疗相关毒性的情况下治疗患者。对接受至少一个记录的研究药物和因为任何原因(除了死亡)停止治疗的患者进行治疗结束评价。在最后一次接受17-AAG后长达28天进行该评价，其包括体检，测量体重和生命指征，记录KPS行为状态、血液学概况、血凝和化学/电解质测定，尿液分析，评价患者目前的医学状况和发生的临床副作用(如果有)。只有在停药前4周以上进行先前评价时，才进行肿瘤评价(骨髓瘤实验室检验，评价髓外疾病、BM吸出物和其它射线照相分级，如果适合)。

在每3周的两周中(第1、4、8和11天)，每周通过快速注射(3-5秒)以递增剂量(以mg/m2计)静脉内给予硼替佐米(购得)两次。按照药品说明书(纳入本文作参考)给予硼替佐米。硼替佐米的起始剂量为0.7mg/m²；根据观察到的毒性增加剂量。该剂量不超过它在此群体中进行单一药物治疗中的推荐剂量(1.3mg/m²)。

每3周的2周中(第1、4、8和11天)，每周在先前用药后静脉内给予剂量递增的17-AAG(以mg/m²计)两次，输注时间为60分钟。对于体表面积(BSA)大于2.4m²的患者，用最大BSA 2.4m²计算剂量。

17-AAG的制备和给药如下。在药瓶中将17-AAG溶解于30％丙二醇、20％克列莫佛^EL和50％乙醇，至浓度为10mg/mL。药品装在带有20mm瓶口的20mL 1型透明玻璃瓶中(含有200mg/小瓶)。用灰色20mm涂有特氟龙的血清塞和白色20mm旋出式白色喷漆旋盖密封该药瓶。用无菌WFI给药前1∶7稀释USP(1份未稀释的药品加入6份无菌WFI)。在无菌控制条件下进行稀释。最终稀释的药品浓度约为1.43mg/mL。用玻璃真空容器或相容性非PVC、非DEHP(二(2-乙基己基)邻苯二甲酸酯)IV混合包制备17-AAG。两种系统需要不含PVC和DEHP的给药装置和嵌入式0.22μm滤器或采用含有这种滤器的增设装置。由于17-AAG的光敏性，建议避光保存。

对于玻璃收集单位，相容性设备的例子包括Baxter 1A8502(或等效装置)，该设备采用装有0.22μm空气滤清器的增设装置(Baxter 1 C8363或等效装置)的Baxter2C1106或等效IV给药装置。对于非PVC、非DEHP混合袋，相容性混合袋可以是空的或预先装有250cc WFI。相容性混合袋的例子包括Excel(250cc WFI；由聚烯烃制成)。

根据个体患者的体表面积和指定剂量，17-AAG的剂量需要将不同量的药品加入混合包中。可计算过充盈，以说明给药设备的损失。

如上所述，每3周的2周中，每周静脉内给予17-AAG两次。将递送的总剂量四舍五入至毫克。

按如下方法进行在先用药治疗。在每次输注17-AAG之前，所有患者都经过在先用药。根据17-AAG治疗后可能观察到的克列莫佛^诱导性超敏反应以及该超敏反应的类型和严重性的病史，对每个患者采用合适的在先用药方案。标准的在先用药方案是在输注17-AAG之前30分钟先施用氯雷他定10mg p.o.、法莫替丁20mg p.o.和甲泼尼龙40-80mg IV或地塞米松10-20mg IV。根据研究者的判断选择抗组胺剂和皮质类固醇、给药途径、17-AAG输注之前的剂量，但类似于其它含有克列莫佛^的产品(如泰素^，紫杉醇)的预防作用。如果患者同步接受氯泼尼松则降低皮质类固醇的剂量。高剂量在先用药方案是在输注17-AAG之前至少30分钟先施用苯海拉明50mg IV、法莫替丁20mg IV和甲泼尼龙80mg IV或地塞米松20mg IV(或者分成10mg口服剂量在输注前6小时和12小时给药)。

研究药物的剂量和方案的选择如下。患者在3周周期中的第1、4、8和11天接受治疗。通过静脉内快速(3-5秒)推注进行由硼替佐米组成的治疗，然后通过60分钟静脉内推注(IV)给予17-AAG。如果剂量较高时给药体积需要，则将17-AAG的输注延长到90或120分钟。在初次给药中，将17-AAG和硼替佐米给予所有患者，除了恰好在进入研究前硼替佐米治疗失败的患者。

最初的患者组接受剂量为0.7mg/m²的硼替佐米，然后静脉内输注剂量为100mg/m²的17-AAG(第1组)。随后按照每个下述递增方案征集一组患者：剂量为1.0mg/m²的硼替佐米和剂量为100mg/m²的17-AAG(第2组)，剂量为1.0mg/m²的硼替佐米和剂量为150mg/m²的17-AAG(第3组)，剂量为1.3mg/m²的硼替佐米和剂量为150mg/m²的17-AAG(第4组)，剂量为1.3mg/m²的硼替佐米和剂量为220mg/m²的17-AAG(第5组)，剂量为1.3mg/m²的硼替佐米和剂量为275mg/m²的17-AAG(第6组)，剂量为1.3mg/m²的硼替佐米和剂量为340mg/m²的17-AAG(第7组)。

每组分配三名患者。如果在可进行评价以决定增加剂量的组中没有观察到DLT(“可评价”定义为在三周中接受了四次治疗或由于药物相关毒性而退出)，则评价下一剂量水平。如果一名或多名患者发生DLT，那么将患者组增加到六名可评价患者。如果患者组的六名可评价患者中两名或多名进入DLT组，则认为已经超过MTD；所有其它试验都在前一剂量水平上进行。如果六名患者中不超过1名患者发生DLT，则评价下一剂量水平。一旦确定MTD后，再征集一定数量的患者，以使MTD剂量水平的患者总数达到12名。按照这种方案治疗18名患者。

在这18名患者中，9名男性、9名女性。他们的年龄中值为63岁(年龄范围是44-81岁)。他们的亚型是：72％为IgG，28％为IgA。KPS中值为90(范围是70-100)。在先化疗次数为4次(范围是2-16次)。在先化疗包括硼替佐米、沙利度胺、VAD/VdD、美法仑和来那度胺等。先前移植的患者数量为12(67％)。有髓外疾病的患者数量为4(22％)。基线β-2微球蛋白的中值为3.7(范围是1.4-9.7)。诊断为MM以来的时间的中值为61个月(范围是14-238个月)。

三名患者(第1组；患者101-103)首先接受0.7mg/m²硼替佐米(3-5秒静脉内快速推注)，然后接受100mg/m²剂量的17-AAG(一小时静脉内输注)，每3周的2周中每周给药2次(第一个治疗周期的第1天和第11天)。患者平均进行3.3个治疗周期。在这三名患者中没有观察到DLT。这三名患者治疗后，在接受了5个治疗周期的一名患者中观察到稳定性疾病(以此剂量水平治疗的所有患者的33％)，在两名患者中观察到进行性疾病(以此剂量水平治疗的所有患者的67％)。

三名患者(第2组；患者201、203和204)首先接受1.0mg/m²硼替佐米(3-5秒静脉内快速推注)，然后接受100mg/m²剂量的17-AAG(一小时静脉内输注)，每3周的2周中每周给药2次(第一个治疗周期的第1天和第11天)。患者平均进行11.3个治疗周期。在这三名患者中没有观察到DLT。这三名患者治疗后，治疗导致所有三名患者出现MR(以此剂量水平治疗的所有患者的100％)。三名患者中一名是没有用过硼替佐米的患者。两名患者进行了至少9个治疗周期。一名患者以此剂量水平进行9个治疗周期，然后增加到剂量水平3进行第10个治疗周期，之后观察到MR。此患者至少进行了13个治疗周期。

八名患者(第3组；患者301-308)首先接受1.0mg/m²硼替佐米(3-5秒静脉内快速推注)，然后接受150mg/m²剂量的17-AAG(一小时静脉内输注)，每3周的2周中每周给药2次(第一个治疗周期的第1天和第11天)，以下是例外情况：三名患者的输注时间为1.6-2小时(患者303、305和306)。患者平均进行4.3个治疗周期(治疗仍在进行)。通过6.0或更多个治疗周期，一名患者被鉴定为4级肝脏毒性、肝脏中出现1.4cm的浆细胞瘤、肝脏和心脏中出现淀粉样病变以及ALT/AST升高。由于无关原因(心脏淀粉样病变)造成一名患者死亡。在两名患者中观察到nCR。这两名患者中一名是没有用过硼替佐米的患者。在一名患者中观察到MR。在两名患者中观察到SD。这两名患者中，一名是没有用过硼替佐米的患者。观察到一名患者发生PD。两名患者无法评价。

四名患者(第4组；患者401-404)首先接受1.3mg/m²硼替佐米(3-5秒静脉内快速推注)，然后接受150mg/m²剂量的17-AAG(一小时静脉内输注)，每3周的2周中每周给药2次(第一个治疗周期的第1天和第11天)。患者平均进行4.5个治疗周期(治疗仍在进行)。一名患者被鉴定为3级胰腺炎(评价仍未确定)。观察到三名患者发生MR。这三名患者中，一名是没有用过硼替佐米的患者。

在这些患者中观察到的其它药物相关性毒性包括1-2级转氨酶升高、恶心、疲劳、腹泻、贫血、肌痛、皮疹和输液反应、以及血小板减少。

按照如下安排采集血液进行血浆药物浓度的PK分析：给药前，开始输注后30分钟，恰好在输注结束(EOI)之前以及输注后5、15、30分钟和1、2、4、8和24小时。对于每位患者(除了患者#301)而言，到第4天母体化合物和代谢物都检测不到，在各3周周期的第11天重复PK。

血浆概况显示，母体药物(17-AAG)快速清除，代谢物(17-AG)清除较慢。

第1组和第2组的所有六名患者都接受100mg/m² 17-AAG。六名患者的一名(患者103)的72小时样品中检测到代谢物，浓度为10.2ng/mL。图1和2显示了这两个剂量水平下17-AAG和17-AG的血浆浓度概况。

输注结束后，第1天和第11天给药的17-AAG和17-AG的血浆概况类似。鉴于第11天未收集输注结束样品，曲线可能无法区分。第11天给药前血浆中也有代谢物浓度。

用Kinetica软件4.3版(Innaphase，Champs sur Marne，法国)凭借非隔室分析法分析相对于时间的血浆浓度的结果，以确定17-AAG和17-AG的药代动力学概况。患者平均结果和统计学小结见表2(17-AAG)和3(17-AG)。

表2(第I部分)-17-AAG的PK参数
						患者(ID和天)	剂量(mg)	输注时间(h)	Cmax(ng/mL)	Tmax(h)	AUC最后(ng/mL*h)
第1组和第2组平均值SDCV％最小最大中值第3组和第4组平均值SDCV％最小最大中值	18631.0116.671322152002642911.09219309268	1.10.2825.1311.9211029.930.972.081	1,78859633.337552,6201,7403,4721,89354.541,8309,5402,740.5	10.6853.490.5311040.410.52.170.97	3,5801,315.3836.742,231.77,248.83,347.95,7743,19255.283,15217,6504,871

表2(第II部分)-17-AAG的PK参数
					患者(ID和天)	AUC外(ng/mL*h)	AUC总ng/mL*h	AUCext(％)	Lz(1/h)
第1组和第2组平均值SDCV％最小最大中值第3组和第4组平均值SDCV％最小最大中值	225153.3568.1887.9608.6165.925616263.4554595199	3,8051,438.0537.792,380.57,857.43,513.86,0303,25353.953,29418,2465,071	62.4041.892.5410.806.105359.180.910.53.8	0.303760.0788625.960.134320.420430.302540.31270.074423.780.12080.42760.3160

表2(第II部分)-17-AAG的PK参数
						患者(ID和天)	BSA(m2)	t1/2(h)	MRT(h)	清除率(L/h)	清除率(L/h/m2)
第1组和第2组平均值SDCV％最小最大中值第3组和第4组平均值SDCV％最小最大中值	1.860.3116.671.322.1521.760.1911.11.52.11.8	2.490.9738.741.725.162.292.400.8836.71.65.72.2	3.321.0631.912.376.042.8872.891.0235.21.56.02.9	52.7615.4429.2626.7384.3355.4551.0016.8433.013.275.350.6	28.637.5726.4412.7342.0128.4628.949.1231.58.245.529.6

表2(第IV部分)-17-AAG的PK参数
					患者(ID和天)	yz(L)	yz(L/m2)	Vss(L)	Vss(L/m2)
第1组和第2组平均值SDCV％最小最大中值第3组和第4组平均值SDCV％最小最大中值	192.6596.1849.9272.61430.47188.14165.9949.3529.756.8244.8172.5	104.5849.8147.6334.58215.2399.1794.7928.3729.931.5149.393.7	174.1974.5642.8196.59349.09159.32143.0754.1237.835.8221.9151.4	93.8835.6938.0148.42174.5579.6580.8929.2736.219.9135.384.3

表3(第I部分)-17-AG的PK参数
						患者(ID和天)	剂量(mg/m2)	Cmax(ng/mL)	Tmax(h)	t1/2(h)	AUC最后(ng/mL*h)
第1组和第2组平均值SDCV％最小最大中值第3组和第4组平均值SDCV％最小最大中值	1000010010010015000.00150150150	52341278.81461,51038966930345.312371,360685	1.420.3222.512.1671.4171.60.532.391.0831.45	7.512.2429.93.7711.897.056.01.220.304.589.065.77	3,478.23,547.1102.0628.510,592.61,783.53,9842,83371.193413,7203,080

表3(第II部分)-17-AG的PK参数
					患者(ID和天)	AUC外(ng/mL*h)	AUC总ng/mL*h	AUCext(％)	Lz(1/h)
第1组和第2组平均值SDCV％最小最大中值第3组和第4组平均值SDCV％最小最大中值	229.5320.7139.872.31,182.0122.5299535178.7462,604160	3,707.63,690.099.5803.810,730.41,861.44,2843,31677.498016,3233,253	8.15.971.91.321.86.95.53.156.32.216.05.0	0.10070.033733.40.05830.18410.09840.11900.020917.550.07650.15120.1200

表2和3的数据的统计学分析显示，17-AG的AUC_总与母体药物17-AAG的AUC_总的平均比例为82.5±90.5％。剂量为100mg/m²时平均总接触值(17-AAG加17-AG)为7,513±3,891ng/mL*h，剂量为150mg/m²时其值为10,313±6,076ng/mL*h。图5显示了代谢物和母体药物的AUC_总的相对值。图6显示了代谢物和母体药物加在一起的总接触值。剂量与总接触值的相关性不是非常强，R²＝0.682。17-AAG的终末清除半衰期为2.43±0.9小时，17-AG为6.52±1.74小时。17-AAG的全身总清除率为51.58±16.16L/h或28.83±8.51L/h/m²。17-AAG的分布容积为：V_z＝174.88±68.2L或98.05±36.41L/m²和V_ss＝153.44±62.3L或85.25±31.60L/m²。

前四个剂量组的结果表明，硼替佐米对17-AAG代谢无影响。

药效学分析

评价蛋白酶体功能显示，输注结束时检测的4个剂量水平的蛋白酶体功能下降了37％-50％(图11)。也在浆细胞(CD138+)中观察到诱导凋亡和AKT水平降低(图12)。AKT是骨髓瘤细胞中上调的对骨髓瘤细胞生长和进展至关重要的Ras/Raf/MAPK胞内通路上的信号转导蛋白。在该细胞凋亡(程序性细胞死亡)前观察到线粒体电位异常。

在没有用过硼替佐米和硼替佐米-难治性患者中观察到抗骨髓瘤活性。观察到患者201、204、307和308的血清和尿中各种蛋白质减少。

患者201先前接受过VAD治疗、每周美法仑-皮质类固醇治疗和VAD与沙利度胺联合治疗。在所有前述治疗后都观察到疾病进展。患者201进行了9个治疗周期，产生MR。图7和表4显示了血清M-峰、总IgA和尿M-蛋白降低。

表4-患者201血清和尿蛋白读数
				阶段	M-峰(g/dL)	总IgA(mg/dL)	尿M-蛋白(mg/24h)
基线周期1后周期2后周期3后周期4后周期5后周期6后周期7后	3.944.573.393.062.932.732.673.4	6,6207,2305,7704,550ND4,0003,920ND	97.260.2000000

患者204先前接受过MP和Velcade/Doxil/沙利度胺治疗。患者204进行了至少6个治疗周期，产生MR。图8和表5显示了患者204的血清M-峰和总IgG降低。

表5-患者204血清蛋白质读数
			阶段	M-峰(g/dL)	总IgG(mg/mL)
基线周期1后周期2后周期3后周期4后	1.681.541.311.261.24	2,4602,0501,7001,6201,770

患者307先前接受过VAD、依托泊甙/环磷酰胺、干扰素、沙利度胺和硼替佐米/Doxil/沙利度胺治疗。患者307进行了至少8个治疗周期。图9显示患者307的血清M-峰降低。治疗患者307导致nCR。

患者308先前接受过地塞米松和沙利度胺/地塞米松治疗。患者308进行了至少8个治疗周期。图10显示患者308的血清M-峰和尿M-蛋白降低。治疗患者308导致nCR。

虽然参照具体实施方式详细描述了本发明，但本领域技术人员应认识到，修改和改进都属于本发明范围和构思。目前通过书面描述的方式描述本发明，但本领域技术人员应了解，可以各种实施方式来实施本发明，上述说明的目的仅为说明，而非限制所附权利要求书。

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Zhong等(2005)US2005/0256097A1。

Claims (45)

1.一种在需要治疗的对象中治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法，所述方法包括将治疗有效量的17-烯丙基氨基-17-去甲氧基-格尔德霉素(17-AAG)或17-氨基格尔德霉素(17-AG)或者17-AAG或17-AG的前药以及治疗有效量的蛋白酶体抑制剂给予所述对象的步骤，和任选地重复所述步骤，直到不再获得进一步的治疗益处。

2.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括用至少2周的时间给予所述对象多个剂量的17-AAG或17-AG或者它们的前药和多个剂量的蛋白酶体抑制剂的步骤，其中各剂量约为100-340mg/m² 17-AAG，或等效量的17-AG或17-AAG前药或17-AG前药，其中所述蛋白酶体抑制剂是硼替佐米，各剂量至少约为1mg/m²。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，17-AAG的各剂量约为150-340mg/m²或等效量的17-AG或者17-AAG或17-AG的前药。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述剂量每周给予两次，至少给药两周。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在3周时间内，所述剂量每周给予两次，至少给药两周。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，对所述对象施用多个治疗周期，其中各治疗周期由在三周中至少两周每周给予两次所述剂量组成。

7.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括给予治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使每个剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h的治疗有效量的17-AAG或17-AAG前药的步骤。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG，以使17-AAG的C_max不超过9,600ng/mL。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG，以使17-AAG的C_max大于1,300ng/mL。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG，以使17-AAG的C_max大于1,800ng/mL。

11.如权利要求7所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG，以使17-AAG的C_max大于1,300但不超过9,600ng/mL。

12.如权利要求7所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG，以使17-AAG的C_max大于1,800但不超过9,600ng/mL。

13.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使每个剂量中17-AG的AUC_总约为800-17,000ng/mL*h的治疗有效量的17-AG或17-AG前药给予所述对象的步骤。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AG，以使17-AAG的C_max不超过1,400ng/mL。

15.如权利要求13所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AG，以使17-AAG的C_max大于140ng/mL。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AG，以使17-AAG的C_max大于230ng/mL。

17.如权利要求13所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AG，以使17-AAG的C_max大于140但不超过1,400ng/mL。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AG，以使17-AAG的C_max大于230但不超过1,400ng/mL。

19.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使每个剂量中17-AAG和17-AG的总AUC_总约为3,500-35,000ng/mL*h的治疗有效量的17-AAG、17-AAG前药、17-AG或17-AG前药给予所述对象的步骤。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG、17-AAG前药、17-AG或17-AG前药，以使17-AAG的C_max不超过9,600ng/mL或17-AG的C_max不超过1,400ng/mL。

21.如权利要求19所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG、17-AAG前药、17-AG或17-AG前药，以使17-AAG的C_max大于1,300ng/mL或17-AG的C_max大于140ng/mL。

22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量，以使17-AAG的C_max大于1,800ng/mL或17-AG的C_max大于230ng/mL。

23.如权利要求19所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量的17-AAG、17-AAG前药、17-AG或17-AG前药，以使17-AAG的C_max大于1,300但不超过9,600ng/mL或17-AG的C_max大于140但不超过1,400ng/mL。

24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，以一定速率和频率给予所述剂量，以使17-AAG的C_max大于1,800但不超过9,600ng/mL或17-AG的C_max大于230ng/mL但不超过1,400ng/mL。

25.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使17-AAG的终末T_1/2为1.6-5.6小时的治疗有效量的17-AAG或17-AAG前药给予所述对象的步骤。

26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述剂量的17-AAG或17-AAG前药使每个剂量中17-AAG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h。

27.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使17-AG的终末T_1/2为3.7-9.1小时的治疗有效量的17-AG或17-AG前药给予所述对象的步骤。

28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述剂量的17-AG或17-AG前药使每个剂量中17-AG的AUC_总约为800-17,000ng/mL*h。

29.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使17-AAG的分布容积V_Z为56 L-250 L的治疗有效量的17-AAG或17-AAG前药给予所述对象的步骤。

30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述剂量的17-AAG或17-AAG前药使每个剂量中17-AG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h。

31.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使17-AAG的清除率为13-85 L/h的治疗有效量的17-AAG或17-AAG前药给予所述对象的步骤。

32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述剂量的17-AAG或17-AAG前药使每个剂量中17-AG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h。

33.一种在需要治疗的对象中治疗MM的方法，所述方法包括将治疗有效量的蛋白酶体抑制剂和使17-AAG的分布容积V_ss为96-250L的治疗有效量的17-AAG或17-AAG前药给予所述对象的步骤。

34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述剂量的17-AAG或17-AAG前药使每个剂量中17-AG的AUC_总约为2,300-19,000ng/mL*h。。

35.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述硼替佐米的各个剂量在约1.0-1.3mg/m²的范围内。

36.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶体抑制剂是肽醛。

37.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肽醛是肽硼酸。

38.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述肽硼酸是二肽硼酸。

39.如权利要求38所述的方法，其特征在于，所述二肽硼酸是硼替佐米。

40.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述给药步骤导致在所述对象的外周血单核细胞中诱导HSP70。

41.如权利要求40所述的方法，其特征在于，在所述给药步骤后1天可以观察到所述HSP70诱导。

42.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述给药步骤导致所述对象的骨髓吸出物细胞中CD138+细胞凋亡增加。

43.如权利要求42所述的方法，其特征在于，在所述给药步骤后4小时可以观察到所述CD138+细胞凋亡增加。

44.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述给药步骤导致所述对象的骨髓吸出物细胞中总AKT减少。

45.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述给药步骤后4小时可以观察到所述总AKT减少。

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