CN101147809A - 以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法及该方法制备的植骨材料 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法及该方法制备的植骨材料，用鹿茸的提取物及鹿的松质骨制备植骨材料，资源丰富，价格适宜，使用安全，不会出现疯牛病感染的问题。去抗原的鹿松质骨载体网架结构与人骨网架结构很接近，具有非常良好的骨传导作用；其网架内复合了鹿茸中含有多种生长因子及鹿茸多肽等，具有显著地骨诱导作用，是一种应用前景广阔的植骨材料。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备植骨材料的方法，尤其是以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法及该方法制备的植骨材料。
背景技术
我国吉林、辽宁、黑龙江、河北、北京等地有很多养殖场饲养梅花鹿、马鹿。梅花鹿和马鹿的医学、药学价值越来越受到关注。首先是鹿茸，梅花鹿茸为梅花鹿的幼角。多具1～2分枝。具1分枝者，习称“二杠”，具2分枝者，习称“三岔”，二茬茸和头茬茸相似。马鹿茸又名青毛茸。为马鹿的幼角，形状比花鹿茸粗大，分枝亦较多，侧枝一个者习称“单门”，二个称“莲花”，三个称“三岔”，四个称“四岔”，或更多。其中以莲花、三岔、四岔为主。鹿茸的显微鉴定：粉末：淡黄色。①表皮角质层表面呈颗粒状，茸毛脱落后的毛窝呈圆洞状。②毛茸中部直径13-50μm，表面由扁平细胞(鳞片)呈覆瓦状排列的毛小皮包围，细胞的游离缘指向毛尖，皮质有棕色色素，髓质断续或无。毛根常与毛囊相连，基部膨大作撕裂状。③骨碎片表面有纵纹及点状孔隙，骨陷窝呈类圆形或类梭形，边缘骨小管呈放射状沟纹。横断面可见大的圆形孔洞，边缘凹凸不平。④未骨化骨组织表面多具不规则的块状突起物。⑤角化梭形细胞多散在。我们对东北产的上、中、下三等鹿茸进行分析，水溶性浸出物12％，8.77％，7.02％；醇溶性浸出物2.31％，1.08％，0.89％；醚溶性浸出物1.16％，0.64％，0.61％；灰分26.65％，37.79％，40.11％。灰分中含钙、磷。镁等。近年来国内外学者已经在鹿茸中发现多种细胞生长因子，如胰岛素样生长因子(IGF)，神经生长因子(NGF)，表皮生长因子(EGF)以及具有促进成骨、软骨细胞增殖的鹿茸多肽(PAP)等。
骨移植是骨科修复手术的重要手段，骨库及骨移植材料相关问题研究一直是骨科的重要课题.国内外的骨库主要是储存异体骨，但因异体骨来源受限，有潜在乙肝、艾滋病交叉感染的危险，不能满足临床对骨移植材料的多种需求.国内近年来已有重组合异种骨材料，该产品是将从牛皮质骨中提取的BMP与去抗原的牛松质骨载体复合而成，经系列动物实验和临床研究，证明其既有诱导成骨作用和良好骨传导作用，生物相容性较好，是一种可应用的植骨材料.由于在欧洲出现了疯牛病，对国内的重组合异种骨产品的临床应用带来不良影响，部分患者对用牛骨提取的具有促进成骨作用的植骨材料心理上有恐惧感。国内临床需要不受疯牛病影响的植骨材料。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法及该方法制备的植骨材料，以该方法制备的植骨材料具有促进成骨、软骨细胞增殖的多种生长因子及鹿茸多肽(PAP)。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，包括以下步骤：
A、以鹿茸为原料，经粉碎机粉成细粉，分成两份，一份在弱酸条件室温下搅拌，另一份在弱碱条件室温下搅拌，分别过滤，合并所得的提取液，合并所得的残渣，残渣留下后用，将提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮，脱水得沉淀物，将沉淀物用无热源水溶解，经中空纤维超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分，加入无水乙醇或丙酮沉淀，冷冻干燥后，得到鹿茸提取液冻干粉；
B、将步骤A中在弱酸条件和弱碱条件下过滤后的残渣在60-65℃下进行醇水提取，经中空纤维超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，浓缩后，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用；
C、制备作为植骨材料的鹿骨载体：将新鲜鹿骨的上端松质骨切成颗粒状，以温水冲洗干净，进行脱脂、去抗原和部分脱钙处理后，用无热源水浸泡，甩干，备用；
D、将步骤B中制得的经微孔滤膜过滤的浓缩液浸入步骤C中制得的鹿骨载体松质骨颗粒中，冷冻干燥备用；
E、在室温下，将步骤A中得到鹿茸提取液冻干粉加入无热源水溶解，经微孔滤膜过滤后，将其浸入步骤D中得到的浸泡过的鹿骨载体松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经钴60辐射灭菌，制得以鹿茸及鹿骨为原料的植骨材料。
所述的鹿茸为梅花鹿茸或马鹿茸中的一种。
所述的梅花鹿茸为梅花鹿茸二杠或三岔；所述的马鹿茸为马鹿茸的莲花、三岔或四岔。
所述的步骤A为：以鹿茸原料，用粉碎机粉成80～120目细粉分成两份，一半加入弱酸强碱盐，调pH为8.5-8.8室温下搅拌3小时后，加入丙酮继续搅拌2小时，过滤得提取液待用；将另一半鹿茸粉加入弱酸，调pH为3.5-4.0，室温下搅拌3小时后，加入丙酮继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将混合提取液置于0～10℃冷柜冷藏，加入冷丙酮，分二次脱水得沉淀物，将沉淀物用无菌水溶解，经超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分，加入无水乙醇或丙酮沉淀，冷冻干燥后，得到鹿茸提取液冻干粉。
所述的弱酸为pH3.5-4.0的醋酸或稀盐酸；所述的弱酸强碱盐为pH8.5-8.8的碳酸盐或磷酸盐的缓冲液。
所述的步骤B为：将步骤A中弱酸及弱碱条件下过滤后的残渣加入水、乙醇，控制温度在60-65℃，搅拌提取2～3小时，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，然后浓缩，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用。
所述的步骤C为：取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，以50℃温水冲洗干净，将其用5--10倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用3--5倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时，然后用0.5M的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干备用。
所述的钴60辐射灭菌的强度为25拉德，照射15小时。
一种上述方法制备的植骨材料，由鹿茸提取液冻干粉、鹿茸提取液浓缩液和鹿松质骨颗粒组成，其混合重量份数比例为：
鹿茸提取液冻干粉：2-7份
鹿茸提取液浓缩液冻干粉：2-7份
鹿松质骨颗粒：500-1000份。
本发明的有益效果是：用鹿茸的提取物及鹿的松质骨制备一种植骨材料，资源丰富，价格适宜，使用安全，不会出现疯牛病感染的问题。其去抗原的鹿松质骨载体网架结构与人骨网架结构很接近，具有非常良好的骨传导作用；其网架内复合了鹿茸中含有多种生长因子及鹿茸多肽(PAP)等，具有显著地骨诱导作用。骨内埋植试验结果：组织学观察6-7周时，内网架间有大量未分化间充组织长入，可见软骨细胞及类骨质形成，呈弥漫灶状分布。术后7-8周新生软骨融合，并有较多编织骨形成，原鹿松质骨网架逐渐被吸收，术后8-9周见较多板层骨及大量骨髓形成，原鹿松质骨网架仅见少部分残留，是一种应用前景广阔的植骨材料。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明：
一种以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，包括以下步骤：
A、以鹿茸为原料，经粉碎机粉成细粉，分成两份，一份在弱酸条件室温下搅拌，另一份在弱碱条件室温下搅拌，分别过滤，合并所得的提取液，合并所得的残渣，残渣留下后用，将提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮，脱水得沉淀物，将沉淀物用无热源水溶解，经中空纤维超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分，加入无水乙醇或丙酮沉淀，冷冻干燥后，得到鹿茸提取液冻干粉；
B、将步骤A中在弱酸条件和弱碱条件下过滤后的残渣在60-65℃下进行醇水提取，经中空纤维超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，浓缩后，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用；
C、制备作为植骨材料的鹿骨载体：将新鲜鹿骨的上端松质骨切成颗粒状，以温水冲洗干净，进行脱脂、去抗原和部分脱钙处理后，用无热源水浸泡，甩干，备用；
D、将步骤B中制得的经微孔滤膜过滤的浓缩液浸入步骤C中制得的鹿骨载体松质骨颗粒中，冷冻干燥备用；
E、在室温下，将步骤A中得到鹿茸提取液冻干粉加入无热源水溶解，经微孔滤膜过滤后，将其浸入步骤D中得到的浸泡过的鹿骨载体松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经钴60辐射灭菌，制得以鹿茸及鹿骨为原料的植骨材料。
所述的鹿茸为梅花鹿茸或马鹿茸中的一种。
所述的梅花鹿茸为梅花鹿茸二杠或三岔；所述的马鹿茸为马鹿茸的莲花、三岔或四岔。
所述的步骤A为：以鹿茸原料，用粉碎机粉成80～120目细粉分成两份，一半加入弱酸强碱盐，调pH为8.5-8.8室温下搅拌3小时后，加入丙酮继续搅拌2小时，过滤得提取液待用；将另一半鹿茸粉加入弱酸，调pH为3.5-4.0，室温下搅拌3小时后，加入丙酮继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将混合提取液置于0～10℃冷柜冷藏，加入冷丙酮，分二次脱水得沉淀物，将沉淀物用无菌水溶解，经超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分，加入无水乙醇或丙酮沉淀，冷冻干燥后，得到鹿茸提取液冻干粉。
所述的弱酸为pH3.5-4.0的醋酸或稀盐酸；所述的弱酸强碱盐为pH8.5-8.8的碳酸盐或磷酸盐的缓冲液。
所述的步骤B为：将步骤A中弱酸及弱碱条件下过滤后的残渣加入水、乙醇，控制温度在60-65℃，搅拌提取2～3小时，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，然后浓缩，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用。
所述的步骤C为：取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，以50℃温水冲洗干净，将其用5--10倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用3--5倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时。然后用0.5M的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干备用。
所述的钴60辐射灭菌的强度为25拉德，照射15小时。
一种上述方法制备的植骨材料，由鹿茸提取液冻干粉、鹿茸提取液浓缩液和鹿松质骨颗粒组成，其混合重量份数比例为：
鹿茸提取液冻干粉：2-7份
鹿茸提取液浓缩液冻干粉：2-7份
鹿松质骨颗粒：500-1000份。
实施例1
取鹿茸的二杠为原料，称取100克，用粉碎机粉成100目细粉。取出一半加入0.1Mole/L碳酸钠缓冲溶液200ml，pH为8.5-8.8，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液待用。将另一半鹿茸粉加入0.001/L盐酸溶液200ml，pH为3.5-4.0，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将该混合提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮2500ml，分二次脱水得沉淀物，将该沉淀物用无热源水250ml溶解，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，将之经截留50000道尔顿的超滤器超滤，先收集分子量大于50000道尔顿的部分，然后将分子量小于50000道尔顿的部分，经截留30000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分，将分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分加入2500ml无水乙醇沉淀，冷冻干燥后，经称量为4.4克。
取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，称重500克以50℃温水冲洗干净，将其用五倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用三倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时。然后用0.5M的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干。将鹿茸渣提取浓缩液80ml经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入该500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥备用。然后将鹿茸室温下提取液冻干粉加入无热源水50ml溶解，经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入上述500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经25拉德的钴60，辐射灭菌15小时，产品入库。
实施例2
取马鹿茸的莲花为原料，称取100克，用粉碎机粉成100目细粉。称取100克，用粉碎机粉成100目细粉。取出一半加入0.1Mole/L碳酸钠缓冲溶液200ml，调pH为8.5，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液待用。将另一半鹿茸粉加入0.001Mole/L盐酸溶液200ml，调pH为4，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将该混合提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮2500ml，分二次脱水得沉淀物，将该沉淀物用无菌水250ml溶解，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，将之经截留50000道尔顿的超滤器超滤，先收集分子量大于50000道尔顿的部分，然后将分子量小于50000道尔顿的部分，经截留30000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分，将分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分加入2500ml无水乙醇沉淀，冷冻干燥后，经称量为4.3克。
将鹿茸粉经水提取留下的残渣加入水400ml、乙醇200ml，控制温度在60-65℃，搅拌提取2小时，经截留70000道尔顿的超滤器过滤，然后浓缩成80ml，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用。
取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，称重500克以50℃温水冲洗干净，将其用五倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用三倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将.鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时。然后用0.5M的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干。将鹿茸渣提取浓缩液80ml经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入该500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥备用。然后将鹿茸室温下提取液冻干粉加入无热源水50ml溶解，经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入上述500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经25拉德D的钴60，辐射灭菌15小时，产品入库。
实施例3
取鹿茸的三岔为原料，称取100克，用粉碎机粉成100目细粉。取出一半加入0.1Mole/L碳酸钠缓冲溶液200ml，pH为8.5-8.8，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液待用。将另一半鹿茸粉加入0.001Mole/L盐酸溶液200ml，调pH为3.5-4，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将该混合提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮2500ml，分二次脱水得沉淀物，将该沉淀物用无菌水250ml溶解，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，将之经截留50000道尔顿的超滤器超滤，先收集分子量大于50000道尔顿的部分，然后将分子量小于50000道尔顿的部分，经截留30000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分，将分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分加入2500ml无水乙醇沉淀，冷冻干燥后，经称量为3.4克。
将鹿茸粉经水提取留下的残渣加入水400ml、乙醇200ml，控制温度在60-65℃，搅拌提取2小时，经截留70000道尔顿的超滤器过滤，然后浓缩成80ml，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用。
取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，称重500克以50℃温水冲洗干净，将其用五倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用三倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时。然后用0.5mole的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干。将鹿茸渣提取浓缩液80ml经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入该500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥备用。然后将鹿茸室温下提取液冻干粉加入无热源水50ml溶解，经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入上述500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经钴60 25拉德，辐射灭菌，产品入库。
实施例4
取马鹿四岔为原料称取100克，用粉碎机粉成100目细粉。取出一半加入0.1Mole/L碳酸钠缓冲溶液200ml，pH为8.5-8.8，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液待用。将另一半鹿茸粉加入0.1Mole/L醋酸缓冲溶液200ml，调pH为3.5-4.0，室温下搅拌3小时后，加入丙酮100ml继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将该混合提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮2500ml，分二次脱水得沉淀物，将该沉淀物用无菌水250ml溶解，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，将之经截留50000道尔顿的超滤器超滤，先收集分子量大于50000道尔顿的部分，然后将分子量小于50000道尔顿的部分，经截留30000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分，将分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分加入2500ml无水乙醇沉淀，冷冻干燥后，经称量为2.8克。
将鹿茸粉经水提取留下的残渣加入水400ml、乙醇200ml，控制温度在60-65℃，搅拌提取2小时，经截留70000道尔顿的超滤器过滤，然后浓缩成80ml，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用。
取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，称重500克以50℃温水冲洗干净，将其用五倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用三倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时。然后用0.5mole的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干。将鹿茸渣提取浓缩液80ml经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入该500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥备用。然后将鹿茸室温下提取液冻干粉加入无热源水50ml溶解，经0.22μ微孔滤膜过滤后，将其浸入上述500克鹿松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经25拉德的钴60，辐射灭菌，产品入库。
肌内埋植试验
取雄性小鼠108只，体重18-20克，随机分为9周9个时间组，每组12只小鼠。将实施例1制备的鹿松质骨颗粒植入小鼠右股部肌袋内，术后按不同时间取材，标本固定，脱钙，石蜡包埋，常规切片，CD染色，光镜下组织学观察。
骨内埋植试验
取大耳白家兔9只，体重2.800-3.000克，雌雄不限，随机分为9周9个时间组，每组1只家兔，于家兔桡骨中上处截除骨段，造成骨缺损，植入实施例1制备的鹿松质骨颗粒，分层关闭伤口，术后不同时间取材，标本固定，脱钙，石蜡包埋，常规切片，CD染色，在光镜下进行组织学观察。
肌内埋植试验结果
各组小鼠术后一般情况良好，伤口均无感染发生，也无植入物排出。组织学观察，6周时，内网架间有大量未分化间充组织长入，可见软骨细胞及类骨质形成，呈弥漫灶状分布。术后7周新生软骨融合，并有较多编织骨形成，原鹿松质骨网架逐渐被吸收。术后8周见较多板层骨及大量骨髓形成，原鹿松质骨网架仅见少部分残留。各组标本周围均无纤维囊形成，亦未见明显炎性细胞和淋巴细胞浸润。
骨内埋植试验结果
组织学观察7周时，内网架间有大量未分化间充组织长入，可见软骨细胞及类骨质形成，呈弥漫灶状分布。术后8周新生软骨融合，并有较多编织骨形成，原鹿松质骨网架逐渐被吸收。术后9周见较多板层骨及大量骨髓形成，原鹿松质骨网架仅见少部分残留。
综上所述，本发明的内容并不局限在的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。
Claims (9)
1.一种以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，包括以下步骤：
A、以鹿茸为原料，经粉碎机粉成细粉，分成两份，一份在弱酸条件室温下搅拌，另一份在弱碱条件室温下搅拌，分别过滤，合并所得的提取液，合并所得的残渣，残渣留下后用，将提取液置于冷柜冷藏，加入冷丙酮，脱水得沉淀物，将沉淀物用无热源水溶解，经中空纤维超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分，加入无水乙醇或丙酮沉淀，冷冻干燥后，得到鹿茸提取液冻干粉；
B、将步骤A中在弱酸条件和弱碱条件下过滤后的残渣在60-65℃下进行醇水提取，经中空纤维超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，浓缩后，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用；
C、制备作为植骨材料的鹿骨载体：将新鲜鹿骨的上端松质骨切成颗粒状，以温水冲洗干净，进行脱脂、去抗原和部分脱钙处理后，用无热源水浸泡，甩干，备用；
D、将步骤B中制得的经微孔滤膜过滤的浓缩液浸入步骤C中制得的鹿骨载体松质骨颗粒中，冷冻干燥备用；
E、在室温下，将步骤A中得到鹿茸提取液冻干粉加入无热源水溶解，经微孔滤膜过滤后，将其浸入步骤D中得到的浸泡过的鹿骨载体松质骨颗粒中，冷冻干燥，在无菌条件下包装，经钴60辐射灭菌，制得以鹿茸及鹿骨为原料的植骨材料。
2.根据权利要求1所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的鹿茸为梅花鹿茸或马鹿茸中的一种。
3.根据权利要求2所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的梅花鹿茸为梅花鹿茸二杠或三岔；所述的马鹿茸为马鹿茸的莲花、三岔或四岔。
4.根据权利要求1所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的步骤A为：以鹿茸原料，用粉碎机粉成80～120目细粉分成两份，一半加入弱酸强碱盐，调pH为8.5-8.8室温下搅拌3小时后，加入丙酮继续搅拌2小时，过滤得提取液待用；将另一半鹿茸粉加入弱酸，调pH为3.5-4.0，室温下搅拌3小时后，加入丙酮继续搅拌2小时，过滤得提取液与已得提取液混合，然后将混合提取液置于0～10℃冷柜冷藏，加入冷丙酮，分二次脱水得沉淀物，将沉淀物用无菌水溶解，经超滤器超滤，收集分子量小于30000道尔顿的部分及分子量大于50000而小于70000道尔顿的部分，加入无水乙醇或丙酮沉淀，冷冻干燥后，得到鹿茸提取液冻干粉。
5.根据权利要求4所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的弱酸为pH3.5-4.0的醋酸或稀盐酸；所述的弱酸强碱盐为pH8.5-8.8的碳酸盐或磷酸盐的缓冲液。
6.根据权利要求1所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的步骤B为：将步骤A中弱酸及弱碱条件下过滤后的残渣加入水、乙醇，控制温度在60-65℃，搅拌提取2～3小时，经截留70000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量小于70000道尔顿的部分，然后浓缩，用0.22μ的微孔滤膜过滤备用。
7.根据权利要求1所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的步骤C为：取新鲜鹿肱骨上端的松质骨，将其切成3×3×3cm的颗粒状，以50℃温水冲洗干净，将其用5-10倍体积的丙酮浸泡过夜，取出后待丙酮挥散，用3-5倍体积的乙醚浸泡3小时，除去脂肪后，将鹿的松质骨颗粒置于双氧水中处理，过氧化氢浓度9-11％，温度控制在50-60℃保持3小时，然后用0.5M的盐酸浸泡3小时，将制备的鹿松质骨颗粒用无热源水浸泡3次，甩干备用。
8.根据权利要求1所述的以鹿茸及鹿骨为原料制备植骨材料的方法，其特征在于，所述的钴60辐射灭菌的强度为25拉德，照射15小时。
9.一种权利要求1所述的方法制备的植骨材料，其特征在于，由鹿茸提取液冻干粉、鹿茸提取液浓缩液和鹿松质骨颗粒组成，其混合重量份数比例为：
鹿茸提取液冻干粉：2-7份
鹿茸提取液浓缩液冻干粉：2-7份
鹿松质骨颗粒：500-1000份。
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