CN101084204A - 包括亚甲蓝(mtc)在内的二氨基吩噻嗪化合物的化学合成和纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明一般涉及化学合成和纯化领域，更具体涉及合成和纯化某些3，7－二氨基－吩噻嗪－5－嗡化合物(本文称为“二氨基吩噻嗪嗡化合物”)、包括亚甲蓝(MTC)(也称为亚甲基蓝)的方法。在一种实施方式中，该方法包括如下顺序的步骤：亚硝基化(NOS)；亚硝酰还原(NR)；硫代磺酸生成(TSAF)；氧化性偶联(OC)；Cr(VI)还原(CR)；两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)；环闭合(RC)；氯化物盐生成(CSF)；硫化物处理(ST)、二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)、碳酸盐处理(CT)、乙二胺四乙酸处理(EDTAT)之一；有机萃取(OE)；和重结晶(RX)。本发明也涉及所得(高纯度)化合物、包含它们的组合物(例如片剂、胶囊)和它们在灭活病原体的方法和医学治疗与诊断方法等中的用途，例如用于τ蛋白病、阿尔茨海默氏病(AD)、皮肤癌症、黑素瘤、病毒疾病、细菌疾病或原生动物疾病。其中：每个R¹和R⁹独立地选自－H、C_1－4链烯基和卤代C_1－4烷基；每个R^3NA和R^3NB独立地选自C_1－4烷基、C_2－4链烯基和卤代C_1－4烷基；每个R^7NA和R^7NB独立地选自C_1－4烷基、C_2－4链烯基和卤代C_1－4烷基；X是一个或多个阴离子抗衡离子以达到电中性。

Description

包括亚甲蓝(MTC)在内的二氨基吩噻嗪化合物的化学合成和纯化方法

                           相关申请

本申请涉及2004年9月23日提交的英国专利申请GB 0421234.6、2005年2月17日提交的英国专利申请GB 0503343.6、2005年9月7日提交的国际专利申请PCT/GB2005/003441，所有它们的内容都全文引用在此作为参考。

                         技术领域

本发明一般涉及化学合成和纯化领域，更具体涉及合成和纯化某些3，7-二氨基-吩噻嗪-5-_化合物(本文称为“二氨基吩噻嗪_化合物”)、包括亚甲蓝(MTC)(也称为亚甲基蓝)的方法。本发明也涉及所得(高纯度)化合物、包含它们的组合物(例如片剂、胶囊)和它们在灭活病原体的方法和医学治疗与诊断方法等中的用途，例如用于τ蛋白病(tauopathy)、阿尔茨海默氏病(AD)、皮肤癌症、黑素瘤、病毒疾病、细菌疾病或原生动物疾病。

                           背景

除非上下文另有要求，遍及本说明书、包括任意所附的权利要求中的措辞“包含”和变化形式如“包含有”和“包含着”将被理解为隐含包括所规定的整数或步骤或者整数或步骤组，但是不排除任意其他整数或步骤或者整数或步骤组。

必须注意，正如说明书和任意所附权利要求中所使用，单数形式“一种”、“一个”和“该”包括复数指示物，上下文另有明确指令除外。因而例如，对于“药物载体”的称谓包括两种或多种这类载体的混合物，等等。

范围经常在本文中表示为从“约”一个特定数值和/或至“约”另一特定数值。在表示这样一种范围时，另一种实施方式包括从一个特定数值和/或至另一个特定数值。与之相似，在利用先行词“约”表示近似的数值时，将被理解为该特定数值构成另一种实施方式。

亚甲蓝(MTC)(也称为亚甲基蓝)

亚甲蓝(MTC)(也称为亚甲基蓝(MB)、甲基硫堇氯(methylthioninechloride)、四甲基硫堇氯、3，7-双(二甲氨基)吩噻嗪-5-_氯化物、C.I.碱性蓝9、四甲基硫堇氯、3，7-双(二甲氨基)吩噻嗪_氯化物、瑞士蓝(Swiss blue)、C.I.52015、C.I.溶剂蓝(Solvent blue)8、苯胺紫和Urolene Blue^_)是一种低分子量(319.86)、水溶性、三环有机化合物，具有下式：

亚甲蓝(MTC)(也称为亚甲基蓝)也许是最熟知的吩噻嗪染剂和氧化还原指示剂，已经用作生物物理系统的光学探针、纳米孔材料的插层剂、氧化还原介体和用在光电致变色(photoelectrochromic)成像中。

例如参见Colour Index(Vol.4，第三版，1971)和Lillie等人，1979和其中引用的参考文献。

MTC首先被描述在1877年的一份德国专利中(Badische Anilin-undSoda-Fabrik，1877)。在该专利中，MTC如下合成：将二甲基苯胺亚硝基化，随后还原，生成N，N-二甲基-1，4-二氨基苯，随后在硫化氢(H₂S)和氯化铁(III)(FeCl₃)存在下氧化性偶联。

Bernthsen描述了随后关于MTC和其合成方法的研究(参见Bernthsen，1885a，1885b，1889)。

Fierz-David和Blangley于1949也描述了从二甲基苯胺合成MTC的方法，如下流程所述。

                           流程1

在步骤(a)中，将二甲基苯胺用亚硝酸盐(NaNO₂)在酸(HCl)水溶液中处理，制备亚硝基二甲基苯胺。在步骤(b)中，使用锌粉溶液，在酸(HCl)水溶液中还原亚硝基化合物，生成对-氨基二甲基苯胺。在步骤(c)、(d)和(e)中，在酸水溶液中用另一分子二甲基苯胺氧化对-氨基二甲基苯胺，同时引入硫代磺酸基团；然后使用二氧化锰和硫酸铜使环闭合。更具体地，酸化(H₂SO₄)对-氨基二甲基苯胺的澄清中性溶液，加入非还原性氯化锌溶液(ZnCl₂与Na₂Cr₂O₇)。加入硫代硫酸铝(Al₂(S₂O₃)₃)和硫代硫酸钠(Na₂S₂O₃)。加入重铬酸钠(Na₂Cr₂O₇)。将混合物加热，充气。加入二甲基苯胺。加入重铬酸钠(Na₂Cr₂O₇)。将混合物加热，由于Bindschedler Green硫代磺酸盐的生成，颜色变为深绿-蓝色。加入二氧化锰或硫酸铜，将混合物加热，染剂从浓氯化锌溶液中沉淀出来。

非常相似的合成方法描述在Colour Index(Vol.4，第三版，1971)，4470页中。

Masuya等人1992描述了某些吩噻嗪衍生物和它们的制备方法以及在癌症的光动力疗法和采用化学发光的免疫测定法中的用途。这些化合物借助与如上所讨论的那些相似的途径制备。

Leventis等人1997描述了某些MTC类似物的合成方法，其采用吩噻嗪作为原料，并且借助卤化作用、继之以胺化加成所需的3，7-取代基。作者宣称MTC在商业上如下合成：在Na₂S₂O₃存在下用Na₂Cr₂O₇氧化N，N-二甲基-对-苯二胺，继之以在N，N-二甲基胺存在下进一步氧化。

Marshall和Lewis于1975a描述了通过溶剂萃取和结晶纯化商品MTC和天青B(Azure B)。他们宣称：缓冲pH9.5的MTC/天青B混合物水溶液能够用四氯化碳萃取分离。四氯化碳除去天青B，同时在水层中留下MTC。他们进一步宣称：浓度0.25N的MTC与盐酸的低温结晶除去金属污染物。不过，其中所报道的有机纯度分析基于薄层色谱，它不适合于量化。而且，硫酸化灰分的微量分析不表明是无金属样品(在1975年优选的技术是原子吸收)。

Marshall和Lewis于1975b描述了商品噻嗪染剂中金属污染物的原子吸收分光光度分析。他们报道了38份样品，个体样品的金属浓度在0.02％与25.35％之间不等；所检查的金属是铁、钾、钠和锌。他们也报道了可能存在其他没有分析的金属。铝、铬、锰和铜都牵涉在MTC的合成工艺中，几乎肯定是存在的。重要的是，他们报道了商品MTC样品的金属含量有巨大差异。

Lohr等人1975描述了天青B的柱色谱纯化，具体为通过分离分出所需产物，继之以离子交换回氯化物。他们宣称：其他阳离子染剂如MTC也能用这种方法纯化。不过，柱色谱不是适合于大规模纯化MTC的方法。

Fierz-David等人1949描述了MTC的氯化锌复盐的合成和如下除去锌的方法：与碳酸钠螯合，继之以过滤，生成不含锌的亚甲基蓝。不过，作者承认这种技术不能大规模使用，因为收率低。

MTC目前用于治疗高铁血红蛋白血症(一种发生于血液不能递送氧至机体需要部位时发生的病症)。MTC也被用作医学染剂(例如在手术之前或期间染色机体的某些部分)；诊断剂(例如作为检测存在于尿液中的某些化合物的指示染剂)；温和的泌尿系抗菌剂；粘膜表面刺激剂；肾结石的治疗和预防剂；和用在黑素瘤的诊断和治疗中。

MTC已经用于治疗疟疾，单独(Guttmann & Ehrlich，1891)或者与氯喹组合(Schirmer等人，2003；Rengelhausen等人，2004)。人类疟疾由如下疟原虫属四种原生动物之一所导致：恶性疟原虫(P.falciparum)、间日疟原虫(P.vivax)、卵形疟原虫(P.ovale)或三日疟原虫(P.malariae)。所有这些都是通过被感染的雌按蚊叮咬传播。有时候，传播发生于输血、器官移植、针头共享或者先天从母亲传给胎儿。疟疾导致世界上三至五亿例感染，每年大约一百万例死亡。不过，药物耐受性是主要问题，在恶性疟原虫中最多，该品种是几乎所有疟疾-相关性死亡的原因。目前推荐用于疟疾预防的药物或药物组合包括氯喹/盐酸氯胍、氟甲喹羟哌啶、多西环素和伯胺喹。

MTC(名为Virostat，来自Bioenvision Inc.，纽约)已经显示强大的体外杀病毒活性。具体而言，Virostat在实验室试验中有效对抗HIV和西尼罗病毒。西尼罗病毒(WNV)是一种影响中枢神经系统的潜在严重的疾病。大多数被感染者将显示没有可见的症状或轻微的流感样症状如发热和头痛。约一百五十分之一将发展为严重的症状，包括震颤、惊厥、肌肉虚弱、视力丧失、麻木、麻痹或昏迷。一般而言，WNV通过被感染蚊子叮咬传播，但是也能通过输血、器官移植、哺乳或者在妊娠期间从母亲传给孩子。Virostat目前也临床试用于治疗慢性丙型肝炎。丙型肝炎是肝脏病毒感染。HCV病毒是急性肝炎和慢性肝疾病、包括肝硬化和肝癌的主要原因。HCV主要通过直接与人血液接触传播。世界上HCV感染的主要原因是未经筛选的输血的使用和未经充分消毒的针头和注射器的再使用。世界卫生组织已经宣布丙型肝炎是全球性健康问题，大约3％的世界人口感染有HCV，因地区而大不相同。美国的流行率据估计为1.3％或者大约三百五十万人。埃及具有大约六千二百万的人口，丙型肝炎的流行率世界最高，据估计超过全国大约六千二百万人的20％。

MTC在与光线组合时，能够防止核酸(DNA或RNA)的复制。血浆、血小板和血红细胞不合有核DNA或RNA。在向血液组分引入MTC时，它穿越细菌细胞壁或病毒膜，然后移动至核酸结构的内部。在用光线活化时，该化合物与病毒或细菌病原体的核酸结合，防止DNA或RNA的复制。因为MTC被设计用于灭活病原体，它具有减少检测不到的病原体传播危险的潜力。

MTC及其衍生物(例如“二氨基吩噻嗪_化合物”)已被发现可用于治疗τ蛋白病(例如阿尔茨海默氏病)(例如参见Wischik，CM.等人，1996，2002)。

MTC的口服和肠胃外制剂在美国已有市售商品，通常名为UroleneBlue_。不过，这些制剂含有相当量的金属杂质。这些杂质是非常不可取的，很多(例如包括Al、Cr、Fe、Cu)超出由欧洲健康机构所设置的安全限度。

所以，迫切需要较高纯度(例如药物级纯度，例如人用安全的纯度，例如金属含量低或者减低)的二氨基吩噻嗪_化合物，包括MTC。

本发明人已经开发了合成二氨基吩噻嗪_化合物(包括MTC)的方法，得到具有极高纯度的产物，特别是具有极低水平的不需要(有机和金属)杂质的产物，满足(并且经常超出)由欧洲健康机构(例如欧洲药典)所设置的安全限度。

不夸张地讲，由本文所述方法制备的MTC是世界上最纯的。

                           发明概述

本发明的一个方面涉及合成二氨基吩噻嗪_化合物、包括高纯度二氨基吩噻嗪_化合物的方法。

本发明的另一方面涉及纯化二氨基吩噻嗪_化合物的方法。

本发明的另一方面涉及由或者可由本文所述方法得到的高纯度二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明的另一方面涉及组合物(例如药物组合物，例如片剂、胶囊)，包含本文所述的高纯度二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明的另一方面涉及用在人或动物体治疗方法、例如关于任意如本文所讨论的疾病或适应症的治疗方法中的本文所述高纯度二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明的另一方面涉及用在灭活病原体的方法中的本文所述高纯度二氨基吩噻嗪输化合物。

本发明的另一方面涉及本文所述高纯度二氨基吩噻嗪嗡化合物在制备用于治疗例如τ蛋白病(例如阿尔茨海默氏病)的药物中的用途。

本发明的另一方面涉及本文所述合成高纯度二氨基吩噻嗪_化合物的方法的用途，作为制备用于治疗例如τ蛋白病(例如阿尔茨海默氏病)的药物的方法的一部分。

本发明的另一方面涉及治疗患者例如τ蛋白病(例如阿尔茨海默氏病)的方法，包括对所述患者给予治疗有效量的本文所述高纯度二氨基吩噻嗪_化合物。

正如将为本领域技术人员所领会的，发明一方面的特性和优选实施方式也将涉及发明其他方面。

                           详细说明

化合物

一般而言，本发明涉及制备某些下式3，7-二氨基-吩噻嗪-5-嗡化合物的方法，本文统称为“二氨基吩噻嗪_化合物”：

其中：

每个R¹和R⁹独立地选自-H、C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；每个R^3NA和R^3NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；每个R^7NA和R^7NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；和X是一个或多个阴离子抗衡离子以达到电中性。

上述结构仅仅是很多等价共振结构之一，其中一些如下所示，所有它们都应为上述结构所涵盖：

在一种实施方式中，C_1-4烷基选自：直链C_1-4烷基，例如-甲基、-乙基、-正丙基、-异丙基和-正丁基；支链C_3-4烷基，例如-异丙基、-异丁基、-仲丁基和-叔丁基；和环状C_3-4烷基，例如-环丙基和-环丁基。

在一种实施方式中，C_2-4链烯基选自直链C_1-4链烯基，例如-CH＝CH₂(乙烯基)和-CH₂-CH＝CH₂(烯丙基)。

在一种实施方式中，卤代C_1-4烷基选自-CF₃、-CH₂CF₃和-CF₂CF₃。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹独立地是-H、-甲基、-乙基或-CF₃。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹独立地是-H、-甲基或-乙基。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹独立地是-H。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹独立地是-甲基。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹独立地是-乙基。

在一种实施方式中，R¹和R⁹是相同的。

在一种实施方式中，R¹和R⁹是不同的。

在一种实施方式中，每个R^3NA和R^3NB独立地是-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-CH₂-CH＝CH₂或-CF₃。

在一种实施方式中，每个R^3NA和R^3NB独立地是-甲基或-乙基。

在一种实施方式中，每个R^3NA和R^3NB独立地是-甲基。

在一种实施方式中，每个R^3NA和R^3NB独立地是-乙基。

在一种实施方式中，R^3NA和R^3NB是相同的。

在一种实施方式中，R^3NA和R^3NB是不同的。

在一种实施方式中，每个R^7NA和R^7NB独立地是-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-CH₂-CH＝CH₂或-CF₃。

在一种实施方式中，每个R^7NA和R^7NB独立地是-甲基或-乙基。

在一种实施方式中，每个R^7NA和R^7NB独立地是-甲基。

在一种实施方式中，每个R^7NA和R^7NB独立地是-乙基。

在一种实施方式中，R^7NA和R^7NB是相同的。

在一种实施方式中，R^7NA和R^7NB是不同的。

在一种实施方式中，R^3NA和R^3NB和R^7NA和R^7NB是相同的。

在一种实施方式中，基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)是相同的。

在一种实施方式中，基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)是相同的，选自-NMe₂、-NEt₂、-N(nPr)₂、-N(Bu)₂、-NMeEt、-NMe(nPr)和-N(CH₂CH＝CH₂)₂。

在一种实施方式中，基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(F^7NB)是相同的，选自-NMe₂和-NEt₂。

在一种实施方式中，基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)不是-NMe₂。

在一种实施方式中，一个或多个碳原子是¹¹C或¹³C。

在一种实施方式中，一个或多个碳原子是¹¹C。

在一种实施方式中，一个或多个碳原子是¹³C。

在一种实施方式中，一个或多个氮原子是¹⁵N。

在一种实施方式中，一个或多个或所有基团R^3NA、R^3NB、R^7NA和R^7NB的一个或多个或所有碳原子是¹³C。

在一种实施方式中，每个基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)是-N(¹³CH₃)₂。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹是-H；每个基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)是-N(¹³CH₃)₂。

在一种实施方式中，每个R¹和R⁹是-H；每个基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)是-N(¹³CH₃)₂；X^-是Cl^-。

在一种实施方式中，X^-独立地是卤素阴离子(即卤化物)。

在一种实施方式中，X^-独立地是Cl^-、Br^-或I^-。

在一种实施方式中，X^-独立地是Cl^-。

在一种实施方式中，该化合物是混盐的形式，例如ZnCl₂混盐。

这类化合物的实例包括如下：

合成方法A

已知方法与当前所要求保护的方法A之间的一个重要区别是两性离子中间体6的分离和纯化步骤(IAPOZI)。这种分离和纯化步骤使得后续环闭合步骤的收率提高(原因尤其是提高两性离子中间体的稳定性和减少副反应)，以及最终二氨基吩噻嗪_化合物的纯度提高。在常规方法中，不分离两性离子中间体，在后续步骤中使用未经改变的反应混合物。

已知方法与当前所要求保护的方法A之间的另一重要区别是Cr(VI)还原步骤。(至少)在氧化性偶联步骤中使用Cr(VI)。残留的Cr(VI)带来若干严重的问题。首先，高水平的高度毒性污染物如残留Cr(VI)在预定药用的产品中是不可接受的。通过还原残留Cr(VI)为毒性低得多的Cr(III)形式，更容易满足药学标准。其次，残留Cr(VI)使两性离子中间体不稳定并阻碍后续环闭合(RC)步骤，从而减少最终二氨基吩噻嗪_化合物的收率。通过还原残留Cr(VI)为Cr(III)，大大增加了最终二氨基吩噻嗪_化合物的收率。

另外，Cr(III)形式的铬比Cr(VI)形式的铬更容易除去。通过还原残留Cr(VI)为Cr(III)，有可能得到具有非常低水平的残留铬的产物。

已知方法与当前所要求保护的方法A之间的另一重要区别是处理步骤，也就是将氯化物盐用硫化物(ST)、二甲基二硫代氨基甲酸盐(DT)、碳酸盐(CT)、乙二胺四乙酸(EDTAT)或有机溶剂(OE)中的一步或多步处理。这种附加步骤(或者这些附加步骤)大大提高了二氨基吩噻嗪_化合物的纯度。

在一种实施方式中，该合成方法包括如下顺序的步骤：

氧化性偶联(OC)；

两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)；

环闭合(RC)。

在一种实施方式中，该合成方法包括如下顺序的步骤：

氧化性偶联(OC)；

Cr(VI)还原(CR)；

两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)；

环闭合(RC)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括如下初始步骤：

硫代磺酸生成(TSAF)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括如下初始步骤：

亚硝酰还原(NR)；

硫代磺酸生成(TSAF)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括如下初始步骤：

亚硝基化(NOS)；

亚硝酰还原(NR)；

硫代磺酸生成(TSAF)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括如下后续步骤：

氯化物盐生成(CSF)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括选自如下的后续步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括选自如下的后续步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括选自如下的后续步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；

继之以如下后续步骤：

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括选自如下的后续步骤：

硫化物处理(ST)；

继之以如下后续步骤：

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括如下后续步骤：

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该合成方法另外包括如下后续步骤：

重结晶(RX)。

因而，在一种实施方式中，该合成方法包括如下顺序的步骤：

亚硝基化(NOS)；

亚硝酰还原(NR)；

硫代磺酸生成(TSAF)；

氧化性偶联(OC)；

Cr(VI)还原(CR)；

两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)；

环闭合(RC)；

氯化物盐生成(CSF)；

以下一步或多步：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；

有机萃取(OE)；

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该合成方法是2-罐法。

在一种实施方式中，该合成方法是3-罐法。

这些方法完全适合于合成其中R¹和R⁹是-H的二氨基吩噻嗪_化合物。

这些方法尤其完全适合于合成亚甲蓝(MTC)(也称为亚甲基蓝)。

纯化方法

本发明的另一方面涉及纯化某些3，7-二氨基-吩噻嗪-5-_化合物的方法，具体为上文“化合物”下所述“二氨基吩噻嗪_化合物”。

在一种实施方式中，该纯化方法是纯化MTC的方法。

在一种实施方式中，该纯化方法一般应用于二氨基吩噻嗪_化合物(例如MTC)，也就是说它可以是或者可以不是按照本文所述合成方法制备的。

例如，该纯化方法可以应用于商业上可获得的二氨基吩噻嗪_化合物(例如MTC)，例如它是相对不纯的或者含有不需要或高得不可接受的水平的某些杂质(例如有机杂质、金属等)。

例如，在一种实施方式中，该纯化方法应用于商业上可获得的Medex^TM(例如MTC，最初由Medex Medical Export Co.Ltd.提供)。

例如，在一种实施方式中，该纯化方法应用于商业上可获得的UroleneBlue_(例如MTC，最初作为Urolene Blue_提供)。

在一种实施方式中，该纯化方法应用于按照本文所述合成方法制备的二氨基吩噻嗪_化合物(例如MTC)(例如最初作为本文所述合成方法产物提供的MTC)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括一个或多个按顺序选自如下的步骤：

重结晶(RX)；

有机萃取(OE)；

重结晶(RX)；

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；

重结晶(RX)；

有机萃取(OE)；和

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)。

在一种实施方式中，该纯化方法另外包括如下步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下步骤：

硫化物处理(ST)。

在一种实施方式中，该纯化方法另外包括如下步骤：

硫化物处理(ST)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下步骤：

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法另外包括如下步骤：

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下步骤：

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法另外包括如下步骤：

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；和

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)；和

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

有机萃取(OE)；和

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；

有机萃取(OE)；和

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)；

有机萃取(OE)；和

重结晶(RX)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)；和

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)；和

硫化物处理(ST)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)；

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)；

硫化物处理(ST)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)；

碳酸盐处理(CT)；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)；

重结晶(RX)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，该纯化方法包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)；

重结晶(RX)；和

有机萃取(OE)。

在一种实施方式中，有机萃取(OE)采用二氯甲烷(DCM，CH₂Cl₂)。

在一种实施方式中，重结晶(RX)步骤是冷酸性重结晶(RX-CAR)步骤。

亚硝基化(NOS)

在该步骤中，N，N-二取代的-3-可选被取代的苯胺1被4-亚硝基化，得到N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺2，如下流程所述：

在一种实施方式中，N，N-二甲基苯胺1’被4-亚硝基化，得到N，N-二甲基-4-亚硝酰基苯胺2’，如下流程所述：

在一种实施方式中，该亚硝基化用亚硝酸盐进行。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含NO₂ ^-。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含碱金属亚硝酸盐。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含亚硝酸钠或亚硝酸钾。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是亚硝酸钠(NaNO₂)。

在一种实施方式中，亚硝酸盐与苯胺1的摩尔比为0.8至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.0至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.3。

在一种实施方式中，该亚硝基化在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该亚硝基化在pH 1或以下进行。

在一种实施方式中，该亚硝基化在pH 1至-1进行。

在一种实施方式中，该亚硝基化在pH 1至0进行。

(除非另有指定，所有pH值都在室温测量。)

在一种实施方式中，该酸性条件用强酸获得。

在一种实施方式中，该酸性条件用HCl(它具有一个强酸质子)获得。

在一种实施方式中，酸质子与苯胺1的摩尔比为1至4。

在一种实施方式中，该范围为2至4。

在一种实施方式中，该范围为3至4。

在一种实施方式中，该比例为约3.2。

在一种实施方式中，该范围为2至3。

在一种实施方式中，该范围为2.25至2.75。

在一种实施方式中，该比例为约2.5。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为2至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至15℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至10℃。

在一种实施方式中，反应温度为约5℃。

在一种实施方式中，反应时间为10至240分钟。

在一种实施方式中，反应时间为30至120分钟。

在一种实施方式中，反应时间为约60分钟。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

亚硝酰还原(NR)

在该步骤中，N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺2被还原，生成N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯3，如下流程所述：

在一种实施方式中，N，N-二甲基-4-亚硝酰基苯胺2’被还原，生成N，N-二甲基-1，4-二氨基-苯3’，如下流程所述：

在一种实施方式中，该还原是与还原剂反应。

在一种实施方式中，该还原剂是或者包含Fe(0)。

在一种实施方式中，该还原剂是或者包含金属铁。

在一种实施方式中，该还原剂是金属铁。

金属铁可以在商业上获得，例如金属屑。

在一种实施方式中，Fe(0)与苯胺1的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.5至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.5至3.0。

在一种实施方式中，该范围为1.5至2.5。

在一种实施方式中，该范围为1.5至3.5。

在一种实施方式中，该范围为2.0至3.0。

在一种实施方式中，该比例为约2.4。

在一种实施方式中，该反应在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1或以下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至-1进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至0进行。

在一种实施方式中，该酸性条件用强酸获得。

在一种实施方式中，该酸性条件用HCl(它具有一个强酸质子)获得。

在一种实施方式中，酸质子与苯胺1的摩尔比为1至4。

在一种实施方式中，该范围为2至4。

在一种实施方式中，该范围为3至4。

在一种实施方式中，该比例为约3.2。

在一种实施方式中，该范围为2至3。

在一种实施方式中，该范围为2.25至2.75。

在一种实施方式中，该比例为约2.5。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应在2至35℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应在10至30℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应在约10℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应进行10至240分钟。

在一种实施方式中，反应进行30至180分钟。

在一种实施方式中，反应进行约120分钟。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，当还原剂是金属铁时，在反应完成之后、例如通过过滤从反应混合物中除去过量金属铁。

硫代磺酸生成(TSAF)

在该步骤中，在硫代硫酸盐存在下氧化N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯3，得到硫代硫酸S-{2-(氨基)-3-(可选被取代的)-5-(二取代的氨基)-苯基}酯4，如下流程所述：

在一种实施方式中，在硫代硫酸盐存在下氧化N，N-二甲基-1，4-二氨基苯3’，得到硫代硫酸S-{2-(氨基)-5-(二甲氨基)-苯基}酯4’，如下流程所述：

该硫代硫酸盐是或者包含S₂O₃ ^-2。

在一种实施方式中，该硫代硫酸盐是或者包含Na₂S₂O₃。

在一种实施方式中，该硫代硫酸盐是Na₂S₂O₃或其水合物。

Na₂S₂O₃可以在商业上获得，例如无水盐或五水合物。

在一种实施方式中，硫代硫酸盐与二胺3的摩尔比为0.8至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.0至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.3。

在一种实施方式中，该氧化是与氧化剂反应。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr(VI)。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr₂O₇ ^-2。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，该氧化剂是Na₂Cr₂O₇或其水合物。

Na₂Cr₂O₇可以在商业上获得，例如二水合物。

在一种实施方式中，Cr(VI)与二胺3的摩尔比为0.2至2.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.2至1.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.2至0.8。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.3至0.7。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为2至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至15℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至10℃。

在一种实施方式中，反应温度为约5℃。

在一种实施方式中，反应时间为10至240分钟。

在一种实施方式中，反应时间为30至120分钟。

在一种实施方式中，反应时间为约60分钟。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

氧化性偶联(OC)

在该步骤中，使用是或者包含Cr(VI)的氧化剂将硫代硫酸S-{2-(氨基)-3-(可选被取代的)-5-(二取代的氨基)-苯基}酯4与N，N-二取代的-3-可选被取代的-苯胺5氧化性偶联，得到[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6，如下流程所述：

在一种实施方式中，使用是或者包含Cr(VI)的氧化剂将硫代硫酸S-{2-(氨基)-5-(二甲氨基)-苯基}酯4’与N，N-二甲基-苯胺5’氧化性偶联，得到[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二甲氨基)-苯基-亚氨基}-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二甲基铵6’，如下流程所述：

在一种实施方式中，先加入酯4，然后加入苯胺5。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr₂O₇ ^-2。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，该氧化剂是Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，酯4与苯胺5的摩尔比为0.5至1.5。

在一种实施方式中，该范围为0.8至1.2。

在一种实施方式中，该范围为约1.0。

在一种实施方式中，Cr(VI)与苯胺5的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.6至3.0。

在一种实施方式中，该范围为2.0至3.0。

在一种实施方式中，该范围为约2.2。

在一种实施方式中，该反应在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1或以下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至-1进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至0进行。

在一种实施方式中，反应步骤结束时的pH为2至6。

在一种实施方式中，反应步骤结束时的pH为3至5。

在一种实施方式中，反应步骤结束时的pH为约4。

在一种实施方式中，反应步骤结束时的pH为约3.94。

在一种实施方式中，该酸性条件用强酸获得。

在一种实施方式中，该酸性条件用H₂SO₄获得(它具有两个强酸质子)。

在一种实施方式中，酸质子与苯胺5的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.5至2.5。

在一种实施方式中，该范围为约2.0。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为2至20℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至15℃。

在一种实施方式中，反应温度为约5℃。

在一种实施方式中，反应时间为10分钟至12小时。

在一种实施方式中，反应时间为30分钟至4小时。

在一种实施方式中，反应时间为约2小时。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，苯胺5与苯胺1相同。

Cr(VI)还原(CR)

在该步骤中，处理氧化性偶联(OC)步骤的产物，以转化残留Cr(VI)为Cr(III)。

在一种实施方式中，至少25％的残留Cr(VI)被转化为Cr(III)。

在一种实施方式中，该范围为至少35％(即35至100％)。

在一种实施方式中，该范围为至少50％(即50至100％)。

在一种实施方式中，该范围为至少60％(即60至100％)。

在一种实施方式中，该范围为至少70％(即70至100％)。

在一种实施方式中，该范围为至少80％(即80至100％)。

在一种实施方式中，该范围为至少90％(即90至100％)。

在一种实施方式中，该范围为至少95％(即95至100％)。

在一种实施方式中，基本上所有的残留Cr(VI)被转化为Cr(III)。

反应时间的选择使适合比例的Cr(VI)转化为Cr(III)。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，该处理用还原剂处理。

连二亚硫酸盐(hydrosulfite)：

在一种实施方式中，该还原剂是连二亚硫酸盐。

该连二亚硫酸盐是或者包含S₂O₄ ^-2。

在一种实施方式中，该连二亚硫酸盐是金属连二亚硫酸盐。

在一种实施方式中，该连二亚硫酸盐是碱金属连二亚硫酸盐。

在一种实施方式中，该连二亚硫酸盐是或者包含Na₂S₂O₄(也称为连二亚硫酸钠)。

在一种实施方式中，该连二亚硫酸盐是Na₂S₂O₄或其水合物。

不希望受任何特定理论所局限，相信Cr(VI)与连二亚硫酸盐反应生成Cr(III)和硫酸钠(例如Na₂Cr₂O₇+Na₂S₂O₄→Cr₂O₃+2Na₂SO₄)。

在一种实施方式中，连二亚硫酸盐的摩尔量为0.02至1.0倍于用在硫代磺酸生成(TSAF)步骤(如果进行的话，并且如果使用Cr(VI)进行的话)和氧化性偶联(OC)步骤中的Cr(VI)总摩尔量。

在一种实施方式中，该范围为0.03至0.7。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.5。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.3。

在一种实施方式中，该范围为0.1至0.2。

在一种实施方式中，该摩尔量为约0.16倍。

在一种实施方式中，该连二亚硫酸盐是连二亚硫酸盐水溶液。

在一种实施方式中，反应时间为1分钟至6小时。

在一种实施方式中，反应时间为2分钟至1小时。

在一种实施方式中，反应时间为约10分钟。

在一种实施方式中，反应温度为2至50℃。

在一种实施方式中，反应温度为5至30℃。

在一种实施方式中，反应温度为10至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为室温。

链烷醇：

在一种实施方式中，该还原剂是链烷醇。

在一种实施方式中，该链烷醇是或者包含C_1-6链烷醇。

在一种实施方式中，该C_1-6链烷醇是饱和脂族C_1-6链烷醇。

在一种实施方式中，该C_1-6链烷醇是乙醇。

不希望受任何特定理论所局限，相信Cr(VI)与链烷醇(例如乙醇)反应生成Cr(III)和相应的醛，即链烷醛(例如乙醛)，它能够容易地被蒸发除去。

在一种实施方式中，链烷醇(例如乙醇)的摩尔量为0.02至1.0倍于用在硫代磺酸生成(TSAF)步骤(如果进行的话，并且如果使用Cr(VI)进行的话)和氧化性偶联(OC)步骤中的Cr(VI)总摩尔量。

在一种实施方式中，该范围为0.03至0.7。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.5。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.3。

在一种实施方式中，该范围为0.1至0.2。

在一种实施方式中，该摩尔量为约0.12倍。

在一种实施方式中，反应时间为1小时至48小时。

在一种实施方式中，反应时间为2小时至24小时。

在一种实施方式中，反应时间为约16小时。

在一种实施方式中，反应温度为2至50℃。

在一种实施方式中，反应温度为5至30℃。

在一种实施方式中，反应温度为10至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为室温。

碘化物：

在一种实施方式中，该还原剂是碘化物。

不希望受任何特定理论所局限，相信Cr(VI)与碘化物反应生成Cr(III)和碘。

在一种实施方式中，该碘化物是或者包含碱金属碘化物。

在一种实施方式中，该碘化物是或者包含碘化钠或碘化钾。

在一种实施方式中，该碘化物是或者包含碘化钾。

在一种实施方式中，该碘化物是碘化钾。

在一种实施方式中，碘化物的摩尔量为0.02至1.0倍于用在硫代磺酸生成(TSAF)步骤(如果进行的话，并且如果使用Cr(VI)进行的话)和氧化性偶联(OC)步骤中的Cr(VI)总摩尔量。

在一种实施方式中，该范围为0.03至0.7。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.5。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.3。

在一种实施方式中，该范围为0.1至0.3。

在一种实施方式中，该摩尔量为约0.18倍。

在一种实施方式中，该碘化物是碘化物水溶液(例如碘化钠水溶液)。

在一种实施方式中，反应时间为1小时至24小时。

在一种实施方式中，反应时间为2小时至18小时。

在一种实施方式中，反应时间为约12小时。

在一种实施方式中，反应温度为2至50℃。

在一种实施方式中，反应温度为5至30℃。

在一种实施方式中，反应温度为10至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为25℃或以下。

在一种实施方式中，反应温度为15℃或以下。

在一种实施方式中，反应温度为2至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至15℃。

pH调节：

在一种实施方式中，该处理用酸或碱(例如强酸或强碱)处理，以达到5.70至6.35的pH(在室温测量)。

不希望受任何特定理论所局限，相信pH在该范围内，Cr(VI)反应生成Cr(III)。

在一种实施方式中，pH范围为5.80至6.25。

在一种实施方式中，pH范围为5.90至6.15。

在一种实施方式中，pH范围为5.95至6.10。

在一种实施方式中，pH为约6.02。

在一种实施方式中，用强酸或强碱处理。

在一种实施方式中，用强碱处理。

在一种实施方式中，用NaOH水溶液(例如10％)处理。

在一种实施方式中，反应时间为1小时至48小时。

在一种实施方式中，反应时间为2小时至24小时。

在一种实施方式中，反应时间为约16小时。

在一种实施方式中，反应温度为2至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至15℃。

在一种实施方式中，反应温度为5至10℃。

两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)

在该步骤中，分离和纯化两性离子中间体6。

在一种实施方式中，该分离和纯化是过滤。

在一种实施方式中，该分离和纯化是过滤继之以洗涤。

在一种实施方式中，该洗涤用H₂O洗涤。

在一种实施方式中，该洗涤用H₂O和四氢呋喃(THF)洗涤。

在一种实施方式中，H₂O与THF的体积比为1∶1至10∶1，优选4∶1。

在一种实施方式中，该分离和纯化是过滤继之以洗涤和干燥。

在一种实施方式中，该干燥是风干。

在一种实施方式中，该干燥是风干2至72小时。

在一种实施方式中，该干燥是风干2至48小时。

在一种实施方式中，该干燥是风干2至24小时。

在一种实施方式中，该干燥是烘箱干燥。

在一种实施方式中，该干燥是烘箱干燥2至72小时。

在一种实施方式中，该干燥是烘箱干燥2至48小时。

在一种实施方式中，该干燥是烘箱干燥2至24小时。

在一种实施方式中，该干燥在30至60℃烘箱干燥2至48小时。

例如，在一种实施方式中，将反应混合物过滤，残余物(例如～100mmol粗产物)用H₂O(例如4×250cm³)和THF(例如100cm³)洗涤，然后风干过夜。

例如，在一种实施方式中，将反应混合物过滤(例如在真空下通过布氏滤器)，除去固体，加入到含有新鲜水的另一容器中，剧烈搅拌混合物，再次过滤。“过滤-回收-再悬浮”过程可以重复多次。最终得到的固体可以用在后续步骤中。

环闭合(RC)

在该步骤中，使[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6进行环闭合，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7，如下流程所述：

在一种实施方式中，使[{2-(硫代硫酸盐)-4-(二甲氨基)-苯基-亚氨基}-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二甲基铵6′进行环闭合，得到3，7-双(二甲氨基)-吩噻嗪-5-_盐7’，如下流程所述：

在一种实施方式中，环闭合用氧化剂处理实现。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cu(II)。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含硫酸Cu(II)。

在一种实施方式中，该氧化剂是硫酸Cu(II)或其水合物。

硫酸Cu(II)可以在商业上获得，例如五水合物。

不希望受任何特定理论所局限，相信Cu(II)在反应中转化为Cu(I)，沉淀出不溶性Cu₂O。

在一种实施方式中，环闭合在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，环闭合在1至5的pH进行。

在一种实施方式中，环闭合在2至5的pH进行。

在一种实施方式中，环闭合在3至4.5的pH进行。

在一种实施方式中，环闭合在3.5至4.1的pH进行。

在一种实施方式中，环闭合在约3.8的pH进行。

在一种实施方式中，所需pH通过加入强酸获得。

在一种实施方式中，所需pH通过加入HCl获得。

在一种实施方式中，Cu(II)与铵6的摩尔比为0.02至0.10。

在一种实施方式中，该范围为0.03至0.07。

在一种实施方式中，该范围为约0.05。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为30至95℃。

在一种实施方式中，反应温度为50至90℃。

在一种实施方式中，反应温度为60至90℃。

在一种实施方式中，反应温度为约85℃。

在一种实施方式中，反应时间为10至120分钟。

在一种实施方式中，反应时间为20至90分钟。

在一种实施方式中，反应时间为约60分钟。

在一种实施方式中，该反应进行直至反应混合物变色，例如变为深蓝色。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，在该反应之后过滤反应混合物，收集滤液。(滤液含有所需产物的溶液。)

在一种实施方式中，在接近反应温度的温度进行过滤，得到“热”滤液。

在一种实施方式中，先冷却反应混合物，在约室温进行过滤，得到“冷”滤液。

氯化物盐生成(CSF)

在该步骤中，3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7与氯化物反应，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8，如下流程所述：

在一种实施方式中，3，7-双(二甲氨基)-吩噻嗪-5-_盐7′与氯化物反应，得到3，7-双(二甲氨基)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8′(即MTC)，如下流程所述：

用盐酸作为氯化物源的处理：

在一种实施方式中，该氯化物是盐酸。

在一种实施方式中，该反应在相对低的pH进行。

在一种实施方式中，该相对低的pH为-1至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至2。

在一种实施方式中，该相对低的pH为约1。

在一种实施方式中，缓慢调节pH至相对低的pH。

在一种实施方式中，历经5至120分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至60分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至30分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经约10分钟调节pH。

在一种实施方式中，该反应在相对冷的温度进行。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至40℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为5至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为10至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为15至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为20至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为约25℃。

在一种实施方式中，该反应进行直至反应混合物(最初例如深蓝色)变为浅蓝色至无色。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

用氯化物盐作为氯化物源的处理：

在一种实施方式中，该氯化物是氯化物盐。

在一种实施方式中，该氯化物是碱金属氯化物。

在一种实施方式中，该氯化物是氯化钠。

在一种实施方式中，存在大为摩尔过量的(钠)氯化物。

在一种实施方式中，氯化物与盐7的摩尔比为5至100。

在一种实施方式中，该摩尔比为10至80。

在一种实施方式中，该摩尔比为10至50。

在一种实施方式中，该摩尔比为约20。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为20至95℃。

在一种实施方式中，反应温度为30至95℃。

在一种实施方式中，反应温度为50至80℃。

在一种实施方式中，反应温度为约65℃。

在一种实施方式中，反应温度为约室温。

在一种实施方式中，反应时间为10至30分钟。

在一种实施方式中，该反应进行直至反应混合物(最初例如深蓝色)变为浅蓝色至无色。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，在加入氯化物后使反应混合物冷却，得到产物的沉淀。

附加处理

在氯化物盐生成(CSF)步骤之后，可以进行一个或多个附加处理步骤(即ST、DT、CT、EDTAT、OE)，如下所述。如果进行两个或多个这些处理步骤，可以按照任意顺序进行它们。这些处理步骤提高纯度，尤其减少金属含量和减少有机杂质含量。

在一种实施方式中，进行一个或多个选自ST、DT、CT和EDTAT的附加处理步骤继之以OE。

硫化物处理(ST)

在该步骤中，将3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7或者3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用硫化物处理。

在一种实施方式中，将盐7用硫化物处理。

在一种实施方式中，将氯化物盐8用硫化物处理。

该硫化物是或者包含S^2-。

在一种实施方式中，该硫化物是金属硫化物。

在一种实施方式中，该硫化物是碱金属硫化物。

在一种实施方式中，该硫化物是或者包含Na₂S。

在一种实施方式中，该硫化物是Na₂S。

在一种实施方式中，该硫化物是过渡金属硫化物。

在一种实施方式中，该硫化物是或者包含ZnS。

在一种实施方式中，该硫化物是ZnS。

在一种实施方式中，硫化物的量为0.01至0.20当量。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.15当量。

在一种实施方式中，该范围为约0.1当量。

在一种实施方式中，盐7或8的(初始)浓度为0.005至0.25M。

在一种实施方式中，该范围为0.02至0.30M。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.20M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约0.10M。

在一种实施方式中，该处理是用硫化物和氯化物处理。

在一种实施方式中，该氯化物是或者包含NaCl。

在一种实施方式中，该氯化物是NaCl。

在一种实施方式中，存在摩尔过量的氯化物。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至300当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至40当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至30当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为约20当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为约200当量。

在一种实施方式中，处理在2至20℃的温度进行。

在一种实施方式中，该温度范围为2至15℃。

在一种实施方式中，该温度范围为5至15℃。

在一种实施方式中，该温度为约10℃(例如10±2℃)。

在一种实施方式中，该处理在水性介质中进行。

在一种实施方式中，该处理在碱性条件下进行。

在一种实施方式中，该处理在pH 9至12进行。

在一种实施方式中，该处理在pH 10至11进行。

在一种实施方式中，该处理在pH约10.5进行。

在一种实施方式中，该处理的进行使得反应混合物的pH达到至少9至12。

在一种实施方式中，该处理的进行使得反应混合物的pH达到至少10至11。

在一种实施方式中，该处理的进行使得反应混合物的pH达到至少约10.5。

在一种实施方式中，该处理在约10℃(例如10±2℃)的温度、在pH约10.5进行，或者其进行使得反应混合物的pH达到至少约10.5。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

例如，在一种实施方式中，在约65℃的温度，将粗MTC产物完全溶于水，浓度约0.1M。冷却该溶液。可选地过滤该经冷却的溶液。将该溶液用约0.1当量的硫化钠水溶液处理，或者足以达到pH约10.5(例如10.5±0.5)的量。将所得混合物搅拌(例如约10分钟)，过滤，收集滤液。

在一种实施方式中，向滤液加入大为过量的氯化钠(例如约23当量)，同时搅拌，收集所得沉淀。作为替代选择，在另一种实施方式中，将冷(例如约20℃)溶液的pH用HCl调节至约pH1，收集所得沉淀。

在一种实施方式中，在用硫化物处理之后(例如在用氯化物处理之前)，将产物(例如溶液)另外用有机溶剂洗涤。

在一种实施方式中，该有机溶剂选自二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、乙酸乙酯、二乙醚、氯苯、石油醚(例如40∶60)、苯、甲苯和乙酸甲酯。

在一种实施方式中，该有机溶剂是二氯甲烷。

在一种实施方式中，例如在用有机溶剂洗涤之后，调节经洗涤产物的溶液的pH至约4.5至约5.5，或者约5.0。

在一种实施方式中，将溶液(例如另外)加热/冷却至大约20℃，然后进行冷酸重结晶(例如用HCl调节pH至约1，收集所得沉淀)。在可供替代的实施方式中，将溶液(例如另外)加热至大约65℃，进行热盐析。

例如，在一种实施方式中，在约60℃的温度，将粗MTC产物完全溶于水，浓度约0.06M。冷却该溶液。可选地过滤该经冷却的溶液。将该溶液用约0.07当量的硫化钠水溶液处理。将所得混合物搅拌(例如约15分钟)，过滤，收集滤液。将滤液用二氯甲烷洗涤(例如若干次)。

在一种实施方式中，将经洗涤的滤液加热至约60℃，向该(热)滤液加入大为过量的氯化钠(例如约260当量)，同时搅拌。使热溶液非常缓慢地冷却，收集(高度结晶性)沉淀(例如“热盐析”)。作为替代选择，在另一种实施方式中，将冷(例如约20℃)的经洗涤滤液的pH用HCl调节至pH1，收集所得沉淀。

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)

在该步骤中，将3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7或3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理。

在一种实施方式中，将盐7用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理。

在一种实施方式中，将氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理。

该二甲基二硫代氨基甲酸盐是或者包含(CH₃)₂NCS₂ ^-。

在一种实施方式中，该二甲基二硫代氨基甲酸盐是或者包含(CH₃)2_NCS₂Na。

在一种实施方式中，该二甲基二硫代氨基甲酸盐是(CH₃)₂NCS₂Na。

在一种实施方式中，二甲基二硫代氨基甲酸盐的量为0.01至0.20当量。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.15当量。

在一种实施方式中，该范围为约0.1当量。

在一种实施方式中，盐7或8的(初始)浓度为0.005至0.25M。

在一种实施方式中，该范围为0.02至0.30M。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.20M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约0.10M。

在一种实施方式中，该处理是用二甲基二硫代氨基甲酸盐和氯化物处理。

在一种实施方式中，该氯化物是或者包含NaCl。

在一种实施方式中，该氯化物是NaCl。

在一种实施方式中，存在摩尔过量的氯化物。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至40当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至30当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为约20当量。

在一种实施方式中，该处理在水性介质中进行。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

例如，在一种实施方式中，在约65℃的温度，将粗MTC产物完全溶于水，浓度约0.1M。冷却该溶液。可选地过滤该经冷却的溶液。将该溶液用约0.1当量的二甲基二硫代氨基甲酸钠盐水溶液处理。将所得混合物搅拌(例如约10分钟)，过滤，收集滤液。向该滤液加入大为过量的氯化钠(例如约23当量)，同时搅拌，收集所得沉淀。

在一种实施方式中，在用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理之后(例如在用氯化物处理之前)，将产物(例如溶液)另外用有机溶剂洗涤，如上关于硫化物处理所述。

在一种实施方式中，例如在用有机溶剂洗涤之后，调节经洗涤产物的溶液的pH至约4.5至约5.5，或者约5.0，如上关于硫化物处理所述。

碳酸盐处理(CT)

在该步骤中，将3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7或3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用碳酸盐处理。

在一种实施方式中，将盐7用碳酸盐处理。

在一种实施方式中，将氯化物盐8用碳酸盐处理。

该碳酸盐是或者包含CO₃ ^2-。

在一种实施方式中，该碳酸盐是或者包含碱金属碳酸盐。

在一种实施方式中，该碳酸盐是或者包含碳酸钠。

在一种实施方式中，该碳酸盐是碳酸钠。

在一种实施方式中，碳酸钠的量为0.01至0.20当量。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.15当量。

在一种实施方式中，该量为约0.1当量。

在一种实施方式中，盐7或8的(初始)浓度为0.005至0.25M。

在一种实施方式中，该范围为0.02至0.30M。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.20M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约0.10M。

在一种实施方式中，该处理是用碳酸盐和氯化物处理。

在一种实施方式中，该氯化物是或者包含NaCl。

在一种实施方式中，该氯化物是NaCl。

在一种实施方式中，存在摩尔过量的氯化物。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至40当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至30当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为约20当量。

在一种实施方式中，该处理在水性介质中进行。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

例如，在一种实施方式中，在约65℃的温度，将粗MTC产物完全溶于水，浓度约0.1M。冷却该溶液。可选地过滤该经冷却的溶液。将该溶液用约0.1当量的碳酸钠水溶液处理。将所得混合物搅拌(例如约10分钟)，过滤，收集滤液。向该滤液加入大为过量的氯化钠(例如约23当量)，同时搅拌，收集所得沉淀。

在一种实施方式中，在用碳酸盐处理之后(例如在用氯化物处理之前)，将产物(例如溶液)另外用有机溶剂洗涤，如上关于硫化物处理所述。

在一种实施方式中，例如在用有机溶剂洗涤之后，调节经洗涤产物的溶液的pH至约4.5至约5.5，或者约5.0，如上关于硫化物处理所述。

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)

在该步骤中，将3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7或3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理。

在一种实施方式中，将盐7用EDTA或EDTA盐处理。

在一种实施方式中，将氯化物盐8用EDTA或EDTA盐处理。

在一种实施方式中，该EDTA盐是或者包含EDTA碱金属盐。

在一种实施方式中，该EDTA盐是或者包含EDTA二钠盐。

在一种实施方式中，该EDTA盐是EDTA二钠盐。

在一种实施方式中，EDTA的量为0.01至0.20当量。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.15当量。

在一种实施方式中，该量为约0.1当量。

在一种实施方式中，盐7或8的(初始)浓度为0.005至0.25M。

在一种实施方式中，该范围为0.02至0.30M。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.20M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约0.10M。

在一种实施方式中，该处理是用EDTA或EDTA盐和氯化物处理。

在一种实施方式中，该氯化物是或者包含NaCl。

在一种实施方式中，该氯化物是NaCl。

在一种实施方式中，存在摩尔过量的氯化物。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至40当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为5至30当量。

在一种实施方式中，氯化物的量为约10当量。

在一种实施方式中，该处理在水性介质中进行。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

例如，在一种实施方式中，在约65℃的温度，将粗MTC产物完全溶于水，浓度约0.1M。将该溶液冷却至室温，然后用约0.1当量的EDTA二钠盐水溶液处理溶液。将所得混合物搅拌(例如约1小时)，过滤，收集滤液。向该滤液加入大为过量的氯化钠(例如约10当量)，同时搅拌，收集所得沉淀。

在一种实施方式中，在用EDTA处理之后(例如在用氯化物处理之前)，将产物(例如溶液)另外用有机溶剂洗涤，如上关于硫化物处理所述。

在一种实施方式中，例如在用有机溶剂洗涤之后，调节经洗涤产物的溶液的pH至约4.5至约5.5，或者约5.0，如上关于硫化物处理所述。

有机萃取(OE)

在该步骤中，将3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7或3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

在一种实施方式中，将盐7的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

在一种实施方式中，将氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

在一种实施方式中，该有机溶剂是二氯甲烷(CH₂Cl₂，DCM)。

DCM是“2类”化学品，允许每日暴露量(PDE)为6mg/天。

在一种实施方式中，盐7或8的水溶液或悬液与有机溶剂(例如DCM)的体积比为0.1至10。

在一种实施方式中，该比例为0.5至5。

在一种实施方式中，该比例为0.5至2。

在一种实施方式中，该处理(例如洗涤)用多份等量有机溶剂(例如DCM)重复进行。

例如，在一种实施方式中，将250mL盐7或8的水溶液用50mL DCM洗涤五次，总体积为250mL DCM，体积比为1。

在一种实施方式中，盐7或8的水溶液或悬液的pH为8至12。

在一种实施方式中，该pH范围为9至12。

在一种实施方式中，该pH范围为9至11。

在一种实施方式中，该pH范围为约10.8。

在一种实施方式中，处理(例如洗涤)在2至20℃的温度进行。

在一种实施方式中，该温度范围为2至15℃。

在一种实施方式中，该温度为约10℃。

处理(例如洗涤)可以例如利用反应容器进行，该容器装配有与带桨的轴连接的液上机械搅拌器以及烧瓶底物的排放龙头。将盐7或8的水溶液或悬液置于该容器中，加入一份有机溶剂(例如DCM)等分试液，将该异相混合物搅拌适合的时间。使各层分离，经由排放龙头弃去下部(有机溶剂)层。加入另一有机溶剂(例如DCM)等分试液，重复该过程，例如若干次。

有机萃取(OE)特别有效地大大减少最终所得固体(例如结晶性)产物的有机杂质水平。

在一种实施方式中，先进行一个或多个选自ST、DT、CT和EDTAT的附加处理步骤，继之以有机萃取(OE)。

重结晶(RX)

在该步骤中，使3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7或3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8重结晶。

在一种实施方式中，使盐7重结晶。

在一种实施方式中，使氯化物盐8重结晶。

重结晶步骤进一步提高纯度，也提供具有适合粒径的产物，例如适合用在后续药物制剂中的粒径。

为了避免疑问，注意“结晶”和“重结晶”在本文中可互换使用，表示从溶液或悬液中生成固体沉淀(例如晶体)，术语“重结晶”中的“重-”不要求新结晶出来的产物以前是固体或结晶形式。

冷酸性重结晶(RX-CAR)：

在一种实施方式中，该重结晶是在相对冷的温度、通过调节pH至相对低的pH从水(例如水溶液或水悬液)中重结晶(例如“冷酸性结晶”)。

在一种实施方式中，使用HCl调节pH。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至40℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为5至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为10至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为15至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为20至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为约25℃。

在一种实施方式中，该相对低的pH为-1至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至2。

在一种实施方式中，该相对低的pH为约1。

在一种实施方式中，缓慢地调节pH至相对低的pH。

在一种实施方式中，历经5至120分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至60分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至30分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经约10分钟调节pH。

冷酸性重结晶(RX-CAR)特别有效地大大减少所得固体(例如结晶性)产物的金属含量。

热盐析(RX-HSO)：

在一种实施方式中，该重结晶是在初始升高的温度、在氯化物如氯化钠存在下从水(例如水溶液或水悬液)中重结晶(例如“热盐析”)。

在一种实施方式中，盐7或8的(初始)浓度为0.002至0.05M。

在一种实施方式中，该范围为0.005至0.04M。

在一种实施方式中，该范围为0.01至0.04M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约0.03M。

在一种实施方式中，该初始升高的温度为30至90℃。

在一种实施方式中，该范围为40至80℃。

在一种实施方式中，该范围为50至80℃。

在一种实施方式中，该初始升高的温度为约65℃。

在一种实施方式中，氯化物(氯化钠)的(初始)浓度为0.1至3.0M。

在一种实施方式中，该范围为0.5至2.5M。

在一种实施方式中，该范围为1.0至2.2M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约2.0M。

在一种实施方式中，存在大为摩尔过量的氯化物(氯化钠)。

在一种实施方式中，氯化物(氯化钠)与盐7或8的摩尔比为5至100。

在一种实施方式中，该摩尔比为20至80。

在一种实施方式中，该摩尔比为50至80。

在一种实施方式中，该摩尔比为约65。

在一种实施方式中，该重结晶包括随后干燥经过重结晶的(高度结晶性)沉淀，例如在烘箱中，在适合的温度(例如50至120℃)达适合的时间(例如1至24小时)。

例如，在一种实施方式中，在大约65℃，将粗MTC产物或经过处理的粗MTC产物溶于H₂O，浓度为约0.03M。可选地，过滤该溶液。加入氯化钠。缓慢地使混合物冷却，例如至约室温，例如历经1至10小时。收集所得(高度结晶性)沉淀，可选地干燥，例如在烘箱中(例如在约75℃)达适当的时间(例如约16小时)。

研制(RX-TRIT)：

在一种实施方式中，该重结晶是在初始升高的温度、在四氢呋喃(THF)存在下从水(例如水溶液或水悬液)中重结晶(例如研制)。

在一种实施方式中，盐7或8的(初始)浓度为0.002至0.20M。

在一种实施方式中，该范围为0.01至0.20M。

在一种实施方式中，该范围为0.05至0.15M。

在一种实施方式中，该(初始)浓度为约0.13M。

在一种实施方式中，该初始升高的温度为30至90℃。

在一种实施方式中，该范围为40至80℃。

在一种实施方式中，该范围为50至80℃。

在一种实施方式中，该初始升高的温度为约65℃。

在一种实施方式中，水与THF的比例为20∶1至2∶1，按体积计。

在一种实施方式中，该范围为10∶1至2∶1。

在一种实施方式中，该范围为7∶1至3∶1。

在一种实施方式中，该比例为约5∶1。

在一种实施方式中，该重结晶包括随后干燥经过重结晶的(高度结晶性)沉淀，例如在烘箱中，在适合的温度(例如50至120℃)达适合的时间(例如1至24小时)。

例如，在一种实施方式中，在大约65℃，将粗MTC产物或经过处理的粗MTC产物溶于水，浓度为约0.13M。可选地，过滤该溶液。缓慢地使混合物冷却，当温度达到约25℃时加入THF，水∶THF体积比为约5∶1。再次缓慢地使混合物冷却，例如至约5℃，例如历经1至10小时。收集所得(高度结晶性)沉淀，可选地干燥，例如在烘箱中(例如在约100℃)达适当的时间(例如约2小时)。

合成方法B

已知方法与当前所要求保护的方法B之间的一个重要区别是在环融合(RF-2)步骤中使用硫化钠(Na₂S)代替其他硫化物，例如硫化氢(H₂S)。例如参见Michaelis等人，1940。不过，硫化氢极其危险，在工业过程中使用既困难又昂贵。通过使用硫化钠，克服了这些缺点。另外，硫化钠是固体，容易操作，能够更容易和精确地称量；这允许更好地控制反应。

在一种实施方式中，该方法包括如下步骤：

环融合(RF-2)。

在一种实施方式中，该方法另外包括如下后续步骤：

氯化物盐生成(CSF-2)。

在一种实施方式中，该方法另外包括如下初始步骤：

亚硝酰还原(NR-2)。

在一种实施方式中，该方法另外包括如下初始步骤：

亚硝基化(NOS-2)；

亚硝酰还原(NR-2)。

在一种实施方式中，该方法另外包括如下初始步骤：

N，N-二取代(NNDS-2)；

亚硝基化(NOS-2)；

亚硝酰还原(NR-2)。

因而，在一种实施方式中，该方法包括如下顺序的步骤：

N，N-二取代(NNDS-2)；

亚硝基化(NOS-2)；

亚硝酰还原(NR-2)；

环融合(RF-2)；

氯化物盐生成(CSF-2)。

这种方法特别完全适合于合成其中R¹和R⁹不是-H的二氨基吩噻嗪_化合物，例如1，9-二乙基亚甲蓝(DEMTC)。

N，N-二取代(NNDS-2)

在该步骤中，将3-可选被取代的-苯胺9用烷基卤化物、链烯基卤化物或卤代烷基卤化物N，N-二取代，得到N，N-二取代的-3-可选被取代的-苯胺10，如下流程所述：

在一种实施方式中，将3-乙基-苯胺9用甲基卤N，N-二甲基化，得到N，N-二甲基-3-乙基-苯胺10，如下流程所述：

在一种实施方式中，该反应使用烷基卤化物。

在一种实施方式中，该反应使用链烯基卤化物。

在一种实施方式中，该反应使用卤代烷基卤化物。

在一种实施方式中，该卤化物是氯化物、溴化物或碘化物。

在一种实施方式中，该卤化物是溴化物或碘化物。

在一种实施方式中，该卤化物是碘化物。

在一种实施方式中，该反应使用甲基碘。

在一种实施方式中，烷基卤化物、链烯基卤化物或卤代烷基卤化物与苯胺9的摩尔比为2.0至4.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为2.5至3.5。

在一种实施方式中，该反应在碱性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH 8或以上进行。

在一种实施方式中，该反应在pH 8至14进行。

在一种实施方式中，该反应在pH 8至12进行。

在一种实施方式中，该反应在pH 8至10进行。

在一种实施方式中，该碱性条件用碳酸钠获得。

在一种实施方式中，烷基卤化物、链烯基卤化物或卤代烷基卤化物与碱(例如碳酸钠)的摩尔比为约2.0。

在一种实施方式中，反应温度为25至65℃。

在一种实施方式中，反应温度为35至55℃。

在一种实施方式中，反应温度为约45℃。

在一种实施方式中，反应时间为1至24小时。

在一种实施方式中，反应时间为2至18小时。

在一种实施方式中，反应时间为约10小时。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，加入水终止该反应。

亚硝基化(NOS-2)

在该步骤中，N，N-二取代的-3-可选被取代的苯胺10被4-亚硝基化，得到相应的N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺11，如下流程所述：

在一种实施方式中，N，N-二甲基-3-乙基-苯胺10′被4-亚硝基化，生成相应的N，N-二甲基-3-乙基-4-亚硝酰基苯胺11′，如下流程所述：

在一种实施方式中，该亚硝基化用亚硝酸盐进行。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含NO₂ ^-。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含碱金属亚硝酸盐。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含亚硝酸钠或亚硝酸钾。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是或者包含亚硝酸钠。

在一种实施方式中，该亚硝酸盐是亚硝酸钠。

在一种实施方式中，亚硝酸盐与苯胺9的摩尔比为0.8至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.0至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.0至1.3。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.0至1.1。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.3。

在一种实施方式中，该反应在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1或以下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至-1进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至0进行。

在一种实施方式中，该酸性条件用强酸获得。

在一种实施方式中，该酸性条件用HCl(它具有一个强酸质子)获得。

在一种实施方式中，酸质子与苯胺9的摩尔比为1至4。

在一种实施方式中，该范围为2至4。

在一种实施方式中，该范围为3至4。

在一种实施方式中，该比例为约3.2。

在一种实施方式中，该范围为2至3。

在一种实施方式中，该范围为2.25至2.75。

在一种实施方式中，该比例为约2.5。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为2至25℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至15℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至10℃。

在一种实施方式中，反应温度为约5℃。

在一种实施方式中，反应时间为10至240分钟。

在一种实施方式中，反应时间为30至120分钟。

在一种实施方式中，反应时间为约60分钟。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

亚硝酰还原(NR-2)

在该步骤中，还原N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺11，得到N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯12，如下流程所述：

在一种实施方式中，还原N，N-二甲基-3-乙基-4-亚硝酰基-苯胺11′，得到N，N-二甲基-1，4-二氨基-3-乙基-苯12′，如下流程所述：

在一种实施方式中，该还原是与还原剂反应。

在一种实施方式中，该还原剂是或者包含Fe(0)。

在一种实施方式中，该还原剂是或者包含金属铁。

在一种实施方式中，该还原剂是金属铁。

金属铁可以在商业上获得，例如铁屑。

在一种实施方式中，Fe(0)与苯胺9的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.5至4.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.5至3.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.5至2.5。

在一种实施方式中，该反应在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1或以下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至-1进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至0进行。

在一种实施方式中，该酸性条件用强酸获得。

在一种实施方式中，该酸性条件用HCl(它具有一个强酸质子)获得。

在一种实施方式中，酸质子与苯胺9的摩尔比为1至4。

在一种实施方式中，该范围为2至4。

在一种实施方式中，该范围为3至4。

在一种实施方式中，该比例为约3.2。

在一种实施方式中，该范围为2至3。

在一种实施方式中，该范围为2.25至2.75。

在一种实施方式中，该比例为约2.5。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应在2至35℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应在10至30℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应进行时间为10分钟至12小时。

在一种实施方式中，反应进行时间为30分钟至6小时。

在一种实施方式中，反应进行时间为约3小时。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

环融合(RF-2)

在该步骤中，在碱金属硫化物和铁(III)存在下，在pH0.6至2.6，融合两分子的N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯12，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐13，如下流程所述：

在一种实施方式中，在碱金属硫化物和铁(III)存在下，在pH 0.6至2.6，融合两分子的N，N-二甲基-1，4-二氨基-5-乙基-苯12，得到3，7-双(二甲基-氨基)-1，9-(二乙基)-吩噻嗪-5-_盐13，如下流程所述：

在一种实施方式中，该碱金属硫化物是或者包含硫化钠或硫化钾。

在一种实施方式中，该碱金属硫化物是或者包含硫化钠。

在一种实施方式中，该碱金属硫化物是硫化钠。

在一种实施方式中，该铁(III)是或者包含卤化铁(III)。

在一种实施方式中，该铁(III)是或者包含氯化铁(III)。

在一种实施方式中，该铁(III)是氯化铁(III)或其水合物。

氯化铁(III)可以在商业上获得，例如无水盐或六水合物。

在一种实施方式中，该反应在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH0.8至2.4进行。

在一种实施方式中，该范围为1.0至2.2。

在一种实施方式中，该范围为1.2至2.0。

在一种实施方式中，该范围为1.4至1.8。

在一种实施方式中，pH为约1.6。

在一种实施方式中，硫化物与苯胺12的摩尔比为0.5至2.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.8至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为约1.0。

在一种实施方式中，Fe(III)与苯胺12的摩尔比为2.0至6.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为2.6至4.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为约3.0。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，加入多份大约等量的Fe(III)试剂。

在一种实施方式中，加入两份大约等量的Fe(III)试剂。

在一种实施方式中，调节pH至所需值(例如加入强酸或强碱)，加入碱金属硫化物，加入一半的Fe(III)试剂。然后向混合物充气(例如约1小时)，然后加入其余的Fe(III)试剂。

在一种实施方式中，反应在2至35℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应在10至30℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应进行时间为10分钟至12小时。

在一种实施方式中，反应进行时间为30分钟至6小时。

在一种实施方式中，反应进行时间为约3小时。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，在反应后过滤反应混合物，收集滤液。

在一种实施方式中，在接近反应温度的温度进行过滤，得到“热”滤液。

在一种实施方式中，先冷却反应混合物，在约室温进行过滤，得到“冷”滤液。

氯化物盐生成(CSF-2)

在该步骤中，3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐13与氯化物反应，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐14，如下流程所述：

在一种实施方式中，3，7-双(二甲氨基)-吩噻嗪-5-_盐13′与氯化物反应，得到3，7-双(二甲氨基)-吩噻嗪-5-_氯化物盐14′(即DEMTC)，如下流程所述：

用盐酸作为氯化物源的处理：

在一种实施方式中，该氯化物是盐酸。

在一种实施方式中，该反应在相对低的pH进行。

在一种实施方式中，该相对低的pH为-1至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至2。

在一种实施方式中，该相对低的pH为约1。

在一种实施方式中，缓慢调节pH至相对低的pH。

在一种实施方式中，历经5至120分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至60分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至30分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经约10分钟调节pH。

在一种实施方式中，该反应在相对冷的温度进行。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至40℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为5至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为10至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为15至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为20至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为约25℃。

在一种实施方式中，该反应进行直至反应混合物(最初例如深蓝色)变为浅蓝色至无色。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

用氯化物盐作为氯化物源的处理：

在一种实施方式中，该氯化物是氯化物盐。

在一种实施方式中，该氯化物是碱金属氯化物。

在一种实施方式中，该氯化物是氯化钠。

在一种实施方式中，存在大为摩尔过量的氯化物(氯化钠)。

在一种实施方式中，氯化物与盐13的摩尔比为5至100。

在一种实施方式中，该摩尔比为10至80。

在一种实施方式中，该摩尔比为10至50。

在一种实施方式中，该摩尔比为约20。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为2至30℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至20℃。

在一种实施方式中，反应温度为约5℃。

在一种实施方式中，反应时间为5至30分钟。

在一种实施方式中，该反应进行直至反应混合物变色，例如随着产物沉淀出来变为红色/紫色。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

如果需要，可以另外进行上述一个或多个处理步骤(ST、DT、CT、EDTAT、OE)。

如果需要，可以另外进行上述重结晶步骤(RX)。

合成方法C

这种方法特别完全适合于合成其中基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)不是-N(CH₃)₂的二氨基吩噻嗪_化合物，例如其中基团-N(R^3NA)(R^3NB)和-N(R^7NA)(R^7NB)相同，是-N(CH₃CH₂)₂。

在一种实施方式中，该方法包括如下顺序的步骤：

硫代磺酸生成(TSAF-3)；

氧化性偶联(OC-3)；

环闭合(RC-3)。

在一种实施方式中，该方法另外包括如下后续步骤：

氯化物盐生成(CSF-3)。

因而，在一种实施方式中，该方法包括如下顺序的步骤：

硫代磺酸生成(TSAF-3)；

氧化性偶联(OC-3)；

环闭合(RC-3)；

氯化物盐生成(CSF-3)。

硫代磺酸生成(TSAF-3)

在该步骤中，在硫代硫酸盐存在下氧化N，N-二乙基-1，4-二氨基-苯15，得到硫代硫酸S-(2-氨基-5-二乙基氨基-苯基)酯16，如下流程所述：

该硫代硫酸盐是或者包含S₂O₃ ^-2。

在一种实施方式中，该硫代硫酸盐是或者包含Na₂S₂O₃。

在一种实施方式中，该硫代硫酸盐是Na₂S₂O₃。

Na₂S₂O₃可以在商业上获得，例如无水盐或五水合物。

在一种实施方式中，硫代硫酸盐与二胺15的摩尔比为0.8至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.0至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.1至1.3。

在一种实施方式中，该氧化是与氧化剂反应。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr(VI)。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr₂O₇ ^-2。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，该氧化剂是Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，Cr(VI)与二胺15的摩尔比为0.2至2.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.2至1.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.2至0.8。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.3至0.7。

在一种实施方式中，该氧化剂另外包含Al(III)。

在一种实施方式中，该氧化剂另外包含Al₂(SO₄)₃。

在一种实施方式中，Al(III)与二胺15的摩尔比为0.2至2.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.2至1.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.2至0.8。

在一种实施方式中，该摩尔比为0.3至0.7。

在一种实施方式中，该氧化剂进一步包含强酸。

在一种实施方式中，该氧化剂进一步包含硫酸(H₂SO₄)(它具有两个强酸质子)。

在一种实施方式中，酸质子与二胺15的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.5至2.5。

在一种实施方式中，该范围为约2.0。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应在15至50℃的温度进行。

在一种实施方式中，反应进行时间为10分钟至2小时。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，在反应后过滤反应混合物，收集滤液。

在一种实施方式中，该过滤在接近反应温度的温度进行。

在一种实施方式中，先冷却反应混合物，在约室温进行过滤。

氧化性偶联(OC-3)

在该步骤中，将硫代硫酸S-(2-氨基-5-二乙基氨基-苯基)酯16与N，N-二乙基-苯胺17氧化性偶联，得到[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二乙基氨基)-苯基-亚氨基}-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二乙基铵18，如下流程所述：

在一种实施方式中，该氧化用氧化剂进行。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr(VI)。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Cr₂O₇ ^-2。

在一种实施方式中，该氧化剂是或者包含Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，该氧化剂是Na₂Cr₂O₇。

在一种实施方式中，酯16与苯胺17的摩尔比为0.5至1.5。

在一种实施方式中，该范围为0.8至1.2。

在一种实施方式中，该范围为约1.0。

在一种实施方式中，Cr(VI)与苯胺17的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.6至3.0。

在一种实施方式中，该范围为2.0至3.0。

在一种实施方式中，该范围为约2.2。

在一种实施方式中，该反应在酸性条件下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1或以下进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至-1进行。

在一种实施方式中，该反应在pH1至0进行。

在一种实施方式中，该酸性条件用强酸获得。

在一种实施方式中，该酸性条件用HCl(它具有一个强酸质子)获得。

在一种实施方式中，酸质子与苯胺17的摩尔比为1.0至4.0。

在一种实施方式中，该范围为1.5至2.5。

在一种实施方式中，该范围为约2.0。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为20至95℃。

在一种实施方式中，反应温度为30至80℃。

在一种实施方式中，反应时间为10分钟至12小时。

在一种实施方式中，反应时间为10分钟至4小时。

在一种实施方式中，反应时间为约30分钟。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

环闭合(RC-3)

在该步骤中，使[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二乙基氨基)-苯基-亚氨基}-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二乙基铵18与活化二氧化锰(MnO₂)反应以实现环闭合，得到3，7-双(二乙基氨基)-吩噻嗪-5-_盐19，如下流程所述：

在一种实施方式中，MnO₂与铵18的摩尔比为1.0至3.0。

在一种实施方式中，该摩尔比为1.5至2.5。

在一种实施方式中，该摩尔比为约2.0。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为30至95℃。

在一种实施方式中，反应温度为60至90℃。

在一种实施方式中，反应温度为约85℃。

在一种实施方式中，反应时间为10分钟至12小时。

在一种实施方式中，反应时间为10分钟至4小时。

在一种实施方式中，反应时间为约30分钟。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

在一种实施方式中，在反应完成后(观察到蓝色溶液和沉淀)，加入强酸(例如浓H₂SO₄)。

不希望受任何特定理论所局限，相信强酸溶解锰盐和氧化铬(和其他盐，如果存在的话)。

在一种实施方式中，在反应后过滤反应混合物，收集滤液。

在一种实施方式中，在接近反应温度的温度进行过滤，得到“热”滤液。

在一种实施方式中，先冷却反应混合物，在约室温进行过滤，得到“冷”滤液。

氯化物盐生成(CSF-3)

在该步骤中，使3，7-双(二乙基氨基)-吩噻嗪-5-_盐19与氯化物反应，得到3，7-双(二乙氨基)-吩噻嗪-5-_氯化物氯化锌混盐20，如下流程所述：

用盐酸作为氯化物源的处理：

在一种实施方式中，该氯化物是盐酸。

在一种实施方式中，该反应在相对低的pH进行。

在一种实施方式中，该相对低的pH为-1至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至3。

在一种实施方式中，该相对低的pH为0至2。

在一种实施方式中，该相对低的pH为约1。

在一种实施方式中，缓慢调节pH至相对低的pH。

在一种实施方式中，历经5至120分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至60分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经5至30分钟调节pH。

在一种实施方式中，历经约10分钟调节pH。

在一种实施方式中，该反应在相对冷的温度进行。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至40℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为2至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为5至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为10至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为15至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为20至30℃。

在一种实施方式中，该相对冷的温度为约25℃。

在一种实施方式中，该反应进行直至反应混合物(最初例如深蓝色)变为浅蓝色至无色。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

用氯化物盐作为氯化物源的处理：

在一种实施方式中，该氯化物是氯化物盐。

在一种实施方式中，该氯化物是碱金属氯化物。

在一种实施方式中，该氯化物是氯化钠。

在一种实施方式中，该氯化物是碱金属氯化物和氯化锌。

在一种实施方式中，该氯化物是氯化钠和氯化锌。

在一种实施方式中，存在大为摩尔过量的氯化物(氯化钠和氯化锌)。

在一种实施方式中，氯化物与盐19的摩尔比为5至100。

在一种实施方式中，该摩尔比为10至80。

在一种实施方式中，该摩尔比为10至50。

在一种实施方式中，该摩尔比为约20。

在一种实施方式中，该反应在水性介质中进行。

在一种实施方式中，反应温度为2至30℃。

在一种实施方式中，反应温度为2至20℃。

在一种实施方式中，反应温度为约5℃。

在一种实施方式中，反应时间为30分钟至24小时。

在一种实施方式中，在该反应步骤期间搅拌反应混合物。

如果需要，可以另外进行上述一个或多个处理步骤(ST、DT、CT、EDTAT、OE)。

如果需要，可以另外进行上述重结晶步骤(RX)。

化合物

本文所述方法得到二氨基吩噻嗪_化合物，纯度迄今是世界上不可获得的。

例如，很多本文所述方法得到非常高纯度的MTC，有机杂质(例如天青B和亚甲紫Bernthsen(MVB))和金属杂质的水平极低(例如满足或超出欧洲药典的限度)。

因而，本发明在一方面涉及由或者可由本文所述方法得到的本文所述二氨基吩噻嗪_化合物。

在一种实施方式中，本发明涉及由或者可由本文所述方法得到的MTC。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的纯度大于98％。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的纯度大于97％。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的纯度大于96％。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的纯度大于95％。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的纯度大于94％。

在一种实施方式中，该化合物含有少于2％的天青B杂质。

在一种实施方式中，该化合物含有少于3％的天青B杂质。

在一种实施方式中，该化合物含有少于4％的天青B杂质。

在一种实施方式中，该化合物含有少于0.13％的MVB杂质。

在一种实施方式中，该化合物含有少于0.14％的MVB杂质。

在一种实施方式中，该化合物含有少于0.15％的MVB杂质。

(本文引用的所有百分比纯度都按重量计，另有指定除外。)

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的元素纯度(例如Al、Cr、Zn、Cu、Fe、Mn、Ni、Mo、Cd、Sn和Pb)好于欧洲药典(EP)限度。

本文提到的术语“元素纯度”涉及由欧洲药典指定的十一种(11)金属的量：Al、Cr、Zn、Cu、Fe、Mn、Ni、Mo、Cd、Sn和Pb。

本文提到的欧洲药典限度如下表所述：

表1欧洲药典限度(μg/g)
		铝(Al)	100
铬(Cr)	10
		锌(Zn)	10
铜(Cu)	10
		铁(Fe)	100
锰(Mn)	10
		镍(Ni)	10
钼(Mo)	10
		镉(Cd)	1
锡(Sn)	1
		铅(Pb)	10

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的元素纯度好于欧洲药典(EP)限度的0.9倍。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的元素纯度好于欧洲药典(EP)限度的0.5倍。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的元素纯度好于欧洲药典(EP)限度的0.2倍。

在一种实施方式中，该化合物(例如MTC)的元素纯度好于欧洲药典(EP)限度的0.1倍。

(例如，欧洲药典(EP)限度的0.5倍是50μg/g Al、5μg/g Cr、5μg/g Zn等。)

本文公开上述纯度级别的所有似然和相容组合，如同具体和明确引用每种个别组合。

组合物

本发明在一方面涉及组合物，包含本文所述二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明在一方面涉及组合物，包含由或者可由本文所述方法得到的二氨基吩噻嗪_化合物。

在一种实施方式中，该组合物进一步包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

灭活病原体的方法

本发明在一方面涉及本文所述二氨基吩噻嗪_化合物在灭活样品(例如血液或血浆样品)中病原体的方法中的用途，该方法包括向该样品引入该化合物，再使该样品暴露于光。

本发明在一方面涉及由或者可由本文所述方法得到的二氨基吩噻嗪_化合物在灭活样品(例如血液或血浆样品)中病原体的方法中的用途，该方法包括向该样品引入该化合物，再使该样品暴露于光。

医学治疗方法

本发明在一方面涉及用在人或动物体治疗方法中的本文所述二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明在一方面涉及用在人或动物体(例如疾病状况)治疗方法中的由或者可由本文所述方法得到的二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明在一方面涉及本文所述二氨基吩噻嗪_化合物在制备用于治疗疾病状况的药物中的用途。

本发明在一方面涉及由或者可由本文所述方法得到的二氨基吩噻嗪_化合物在制备用于治疗疾病状况的药物中的用途。

本发明在一方面涉及治疗患者疾病状况的方法，包括对所述患者给予治疗有效量的本文所述二氨基吩噻嗪_化合物。

本发明在一方面涉及治疗患者疾病状况的方法，包括对所述患者给予治疗有效量的由或者可由本文所述方法得到的二氨基吩噻嗪_化合物。

疾病状况

在一种实施方式中，该疾病状况是τ蛋白病。

“τ蛋白病”是τ蛋白(及其异常功能或加工)在其中扮演角色的病症。阿尔茨海默氏病是τ蛋白病的一个实例。神经变性疾患如皮克氏病(Pick’sdisease)和进行性核上麻痹(PSP)的发病机理似乎与病理性截短的τ聚集物分别在新皮质的齿状回和星状锥体细胞中的蓄积有关。其他痴呆包括额颞痴呆(FTD)、与染色体17有关的帕金森综合征(FTDP-17)、抑制解除-痴呆-帕金森综合征-肌萎缩复合征(DDPAC)、苍白体-脑桥-黑质变性(PPND)、Guam-ALS综合征、苍白体-黑质-吕伊斯体变性(pallido-nigro-luysiandegeneration，PNLD)、皮质-基底变性(CBD)和其他(例如参见Wischik等人，2000，尤其其中的表5.1)。每种这些疾病都主要或部分地以异常τ聚集为特征，本文称为“τ蛋白病”。

在一种实施方式中，该疾病状况是阿尔茨海默氏病(AD)。

在一种实施方式中，该疾病状况是皮肤癌症。

在一种实施方式中，该疾病状况是黑素瘤。

在一种实施方式中，该疾病状况是病毒、细菌或原生动物疾病。

在一种实施方式中，该原生动物疾病状况是疟疾。在这种实施方式中，治疗可以与另一种抗微生物剂组合，例如与氯喹或阿托夸酮组合。

在一种实施方式中，该病毒疾病状况由丙型肝炎、HIV或西尼罗病毒所导致。

治疗

本文在治疗病症上下文中所使用的术语“治疗”一般涉及治疗和疗法，无论人或动物(例如在兽医应用中)，其中实现一定的所需治疗效果，例如病症进展的抑制，包括进展速率的降低、进展速率的停止、病症的消退、病症的改善和病症的治愈。也包括作为预防性措施的治疗(即预防、防止)。

本文所用的术语“治疗有效量”涉及活性化合物或者包含活性化合物的材料、组合物或剂型在按照所需治疗方案给药时有效产生一定的所需治疗效果、与合理的利益/风险比相称的量。

术语“治疗”包括组合治疗和疗法，其中组合有两种或多种治疗或疗法，例如先后或同时。治疗和疗法的实例包括但不限于化学疗法(活性成分的给药，例如包括药物、抗体(例如在免疫疗法中)、前体药物(例如在光动力疗法、GDEPT、ADEPT等中))、手术、放射疗法和基因疗法。

给药途径

二氨基吩噻嗪_化合物或者包含它的药物组合物可以借助任何适宜的给药途径对受治疗者/患者给药，无论全身/外周还是局部(即在所需作用部位)。

给药的途径包括但不限于口服(例如摄食)、口腔、舌下、透皮(例如包括贴剂、硬膏剂等)、透粘膜(例如包括贴剂、硬膏剂等)、鼻内(例如鼻喷雾剂)、眼(例如滴眼剂)、肺(例如吸入或吹入疗法，例如利用气雾剂，例如通过口或鼻)、直肠(例如栓剂或灌肠剂)、阴道(例如阴道栓)、肠胃外(例如注射，包括皮下、真皮内、肌内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眼眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内(例如包括导管内注射至脑内))、药库或储库植入(例如皮下或肌内)。

受治疗者/患者

受治疗者/患者可以是动物、哺乳动物、有胎盘动物、有袋动物(例如袋鼠、袋熊)、单孔目动物(例如鸭嘴兽)、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠类(例如小鼠)、兔形目动物(例如兔子)、鸟类(例如鸟)、犬类(例如狗)、猫类(例如猫)、马类(例如马)、猪类(例如猪)、绵羊类(例如绵羊)、牛类(例如母牛)、灵长类、猿类(例如猴或无尾猿)、猴类(例如狨、狒狒)、无尾猿类(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人类。

此外，受治疗者/患者可以是任意其发育形式，例如胚胎。

在一种优选的实施方式中，受治疗者/患者是人。

制剂

尽管二氨基吩噻嗪_化合物有可能单独使用(例如给药)，不过经常优选作为组合物或制剂呈递。

在一种实施方式中，该组合物是药物组合物(例如制剂、制备物、药剂)，包含本文所述二氨基吩噻嗪_化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在一种实施方式中，该组合物是药物组合物，包含至少一种本文所述二氨基吩噻嗪_化合物以及一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分，包括但不限于药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、助剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如湿润剂)、掩蔽剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。

在一种实施方式中，该组合物进一步包含其他活性成分，例如其他治疗或预防剂。

适合的载体、稀释剂、赋形剂等可以在标准药学文献中找到。例如参见 Handbook of Pharmaceutical Additives，第2版(eds.M.Ash和I.Ash)，2001(Synapse Information Resources，Inc.，Endicott，纽约，USA)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第20版，pub.Lippincott，Williams& Wilkins，2000；和 Handbook of Pharmaceutical Excipients，第2版，1994。

本发明的另一方面涉及制备药物组合物的方法，包括混合至少一种[¹¹C]-放射性标记的本文所述吩噻嗪或吩噻嗪样化合物以及一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分，例如载体、稀释剂、赋形剂等。如果配制成离散的单元(例如片剂等)，每一单元含有预定量(剂量)的活性化合物。

本文所用的术语“药学上可接受的”涉及化合物、成分、材料、组合物、剂型等，它们在合理的医学判断范围内，适合用于与有关受治疗者(例如人)的组织接触，没有过度的毒性、刺激性、变态反应或者其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。每一载体、稀释剂、赋形剂等在与制剂其他成分相容的意义上也必须是“可接受的”。

制剂可以借助药学领域任意熟知的方法制备。这类方法包括使活性化合物与载体缔合的步骤，该载体构成一种或多种辅助成分。一般而言，制剂如下制备：使活性化合物与载体(例如液体载体、微细粉碎的固体载体等)均匀和紧密地缔合，然后如果必要使产物成形。

制剂经过制备，可以提供迅速或缓慢释放；即时、延迟、定时或持续释放；或者它们的组合。

适合于肠胃外给药(例如注射)的制剂包括水性或非水性、等渗、无热原、无菌的液体(例如溶液、悬液)，其中溶解、悬浮或者以其他方式提供(例如在脂质体或其他微粒中)活性成分。这类液体可以另外含有药学上可接受的成分，例如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、制菌剂、悬浮剂、增稠剂和赋予制剂与接受者血液(或其他有关体液)等渗的溶质。赋形剂的实例包括例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。适合用在这类制剂中的等渗载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸化林格氏溶液。通常，活性成分在液体中的浓度为约1ng/mL至约10μg/mL，例如约10ng/mL至约1μg/mL。制剂可以呈递在单剂量或多剂量密封容器中，例如安瓿和小瓶，并且可以贮存在冷冻干燥(冻干)条件中，在使用前不久仅需加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬液可以从无菌粉末、颗粒和药片制备。

优选制剂的实例

本发明在一方面涉及剂量单元(例如药片或胶囊)，包含20至300mg本文所述二氨基吩噻嗪_化合物(例如由或者可由本文所述方法得到；纯度如本文所述；等等)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在一种实施方式中，该剂量单元是片剂。

在一种实施方式中，该剂量单元是胶囊。

在一种实施方式中，该量为30至200mg。

在一种实施方式中，该量为约30mg。

在一种实施方式中，该量为约60mg。

在一种实施方式中，该量为约100mg。

在一种实施方式中，该量为约150mg。

在一种实施方式中，该量为约200mg。

在一种实施方式中，药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂是或者包含甘油酯(例如Gelucire 44/14_；月桂酰聚乙二醇-32甘油酯PhEur，USP)和胶态二氧化硅(例如2％Aerosil 200_；胶态二氧化硅PhEur，USP)的一种或两种。

剂量

将为本领域技术人员所领会的是，二氨基吩噻嗪_化合物和包含二氨基吩噻嗪_化合物的组合物的适当剂量可以因患者而异。确定最佳剂量一般将牵涉治疗益处水平与任意危险或有害副作用的权衡。所选择的剂量水平将依赖于多种因素，包括但不限于特定化合物的活性、给药的途径、给药的时间、化合物的排泄速率、治疗的持续时间、组合使用的其他药物、化合物和/或材料、病症的严重性和患者的种属、性别、年龄、体重、条件、一般健康状况和既往病史。化合物的量和给药的途径将最终取决于主治医师、兽医或临床医师，不过一般将选择剂量以达到在作用部位的局部浓度，该浓度实现所需效果而不导致实质性伤害或有害副作用。

给药可以在一次剂量中实现，连续或间歇地(例如以适当间隔在分开的剂量中)遍及治疗过程。确定最有效的给药手段和剂量的方法是本领域技术人员熟知的，将因用于疗法的制剂、疗法的目的、所治疗的靶细胞和受治疗者而异。以主治医师、兽医或临床医师所选择的剂量水平和方式，可以进行单次或多次给药。

一般而言，适合的活性化合物剂量在约100ng至约25mg(更典型为约1μg至约10mg)每千克受治疗者体重每天的范围内。若活性化合物是盐、酯、酰胺、前体药物等，在母体化合物的基础上计算给药量，因此成比例地增加所要使用的实际重量。

在一种实施方式中，按照下列剂量方案对人类患者给予活性化合物(例如MTC)：约100mg，每日3次。

在一种实施方式中，按照下列剂量方案对人类患者给予活性化合物(例如MTC)：约150mg，每日2次。

在一种实施方式中，按照下列剂量方案对人类患者给予活性化合物(例如MTC)：约200mg，每日2次。

                             实施例

下列实施例仅供阐述本发明，不旨在限制本文所述发明的范围。

                             实施例1

使用连二亚硫酸盐并分离中间体的亚甲蓝(MTC)3-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，20g，0.165mol)、水(100cm³)和HCl(37％，44cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，12.6g，0.183mol)的水(100cm³)溶液。将所得悬液在低温(5-10℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，22.0g，0.40mol)和HCl(37％，44cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，45.0g，0.181mol)的水(50cm³)溶液处理。历经40分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，20.0g，67.1mmol)的水(40cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，20g，0.165mol)、水(20cm³)与H₂SO₄(98％，16g)的均匀溶液。然后，历经90分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，52.0g，0.174mmol)的水(140cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌2小时。向混合物加入连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄，MW 174.1，15.2g，87.2mmol)的H₂O(20cm³)溶液。将混合物搅拌另外10分钟(在约5℃)。过滤所得绿色-褐色悬液。将残余物用水(4×250cm³)和四氢呋喃(THF)(200cm³)洗涤，得到绿色固体。使固体风干过夜。

将固体加入到硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW 249.7，2.06g，8.25mmol)的HCl水溶液(900cm³，pH2)中。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至室温。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×200cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，200g，3.45mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(18.1g，35％)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                              实施例2

使用乙醇并分离中间体的亚甲蓝(MTC)3-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(100cm³)和HCl(37％，22cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，6.3g，90.8mmol)的水(50cm³)溶液。将所得悬液在低温(约5℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，11.0g，197mmol)和HCl(37％，22cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，22.52g，90.75mmol)的水(25cm³)溶液处理。历经20分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，10.0g，33.6mmol)的水(20cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(10cm³)与H₂SO₄(98％，8g)的均匀溶液。然后，历经25分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，26.15g，87.7mmol)的水(35cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌2小时。向混合物加入乙醇(C₂H₅OH，MW 46.07，1cm³，2.4g，52mmol)。将混合物搅拌另外16小时(在5-10℃)。过滤所得绿色-褐色悬液。将残余物用水(4×250cm³)和四氢呋喃(THF)(100cm³)洗涤，得到绿色固体。使固体风干过夜。

将固体加入到硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW 249.7，2.06g，8.25mmol)的HCl水溶液(450cm³，pH 2)中。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至室温。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×100cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，100g，1.73mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                             实施例3

使用碘化物并分离中间体的亚甲蓝(MTC)3-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(100cm³)和HCl(37％，22cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，6.3g，90.8mmol)的水(50cm³)溶液。将所得悬液在低温(约5-10℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，11.0g，197mmol)和HCl(37％，22cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，22.52g，90.75mmol)的水(25cm³)溶液处理。历经20分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，10.0g，33.6mmol)的水(20cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(10cm³)与H₂SO₄(98％，8g)的均匀溶液。然后，历经25分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，26.15g，87.7mmol)的水(25cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌2小时。向混合物加入碘化钾(KI，MW 166.01，7.3g，43.6mmol)的H₂O(10cm³)溶液。将混合物搅拌另外12小时(在室温)。过滤所得绿色-褐色悬液。将残余物用水(4×250cm³)和四氢呋喃(THF)(100cm³)洗涤，得到绿色固体。使固体风干过夜。

将固体加入到硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW 249.7，2.06g，8.25mmol)的HCl水溶液(450cm³，pH 2)中。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至室温。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×100cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，100g，1.73mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(9.1g)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                           实施例4

使用pH调节并分离中间体的亚甲蓝(MTC)3-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(100cm³)和HCl(37％，22cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，6.3g，90.8mmol)的水(50cm³)溶液。将所得悬液在低温(约5-10℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，11.0g，197mmol)和HCl(37％，22cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，22.52g，90.75mmol)的水(25cm³)溶液处理。历经20分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，10.0g，33.6mmol)的水(20cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(10cm³)与H₂SO₄(98％，8g)的均匀溶液。然后，历经25分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，26.15g，87.7mmol)的水(25cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌2小时(最终pH 4.02，18℃)。将反应混合物的pH用NaOH水溶液(10％)调节至6.0(8.6℃)，同时保持温度低于10℃。将混合物在室温搅拌另外16小时。过滤所得绿色-褐色悬液。将残余物用水(4×250cm³)和四氢呋喃(THF)(100cm³)洗涤，得到绿色固体。使固体风干过夜。

将固体加入到硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW 249.7，2.06g，8.25mmol)的HCl水溶液(450cm³，pH 2)中。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至室温。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×100cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，100g，1.73mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(30％)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                              实施例5

使用pH调节、无需中间体分离的亚甲蓝(MTC)2-罐合成

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(100cm³)和HCl(37％，22cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，6.3g，90.8mmol)的水(50cm³)溶液。将所得悬液在低温(约5-10℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，11.0g，197mmol)和HCl(37％，22cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，22.52g，90.75mmol)的水(25cm³)溶液处理。历经20分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，10.0g，33.6mmol)的水(20cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(10cm³)与H₂SO₄(98％，8g)的均匀溶液。然后，历经25分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，26.15g，87.7mmol)的水(25cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌1小时(最终pH 4.51)。将反应混合物的pH用NaOH水溶液(10％)调节至6.02(8.6℃)，同时保持温度低于10℃。将混合物在该温度(8.6℃)搅拌另外10分钟，然后用10％HCl水溶液再调节pH至3.80。加入硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW249.7，2.06g，8.25mmol)。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至65℃。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×100cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，120g，2.07mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(7.48g，29％)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                            实施例6

使用连二亚硫酸钠、无需中间体分离的亚甲蓝(MTC)2-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(100cm³)和HCl(37％，22cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，6.3g，90.8mmol)的水(50cm³)溶液。将所得悬液在低温(约5-10℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，11.0g，197mmol)和HCl(37％，22cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，22.52g，90.75mmol)的水(25cm³)溶液处理。历经20分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，10.0g，33.6mmol)的水(20cm³)溶液。然后将溶液在低温(5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(10cm³)与H₂SO₄(98％，8g)的均匀溶液。然后，历经25分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，26.15g，87.7mmol)的水(25cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌1小时。将滤液用连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄，MW 174.11，～83％，9.2g，43.9mmol)的水(10cm³)溶液处理。将混合物在～5℃搅拌10分钟(最终pH＝3.05)。将pH用氢氧化钠水溶液(NaOH，10％)调节至3.85。加入硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW249.7，2.06g，8.25mmol)。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至65℃。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×100cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，120g，2.07mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(7.48g，29％)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                              实施例7

      使用连二亚硫酸盐并分离中间体的亚甲蓝(MTC)3-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，20g，0.165mol)和水(100cm³)，形成不均匀混合物。将混合物冷却至～5℃。历经10-15分钟向经过冷却的混合物加入HCl(37％，44cm³)。历经20-30分钟向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，12.6g，0.183mol)的水(100cm³)溶液。将所得悬液在低温(～5℃)搅拌1小时。维持混合物在～5℃，历经5-10分钟加入HCl(37％，44cm³)。搅拌另外5分钟后，历经15-20分钟加入铁屑(Fe，MW 55.85，22.0g，0.40mol)，目的是在加入期间维持反应温度低于30℃。将混合物在～10℃的温度搅拌2小时。过滤混合物。将固体残余物用水(20cm³)洗涤，收集滤液。

将滤液在10-15分钟内冷却至大约5℃。将滤液用一次性快速加入的硫代硫酸钠(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，45.0g，0.181mol)的水(50cm³)溶液处理。历经40分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，20.0g，67.1mmol)的水(80cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后立即向该冷却的溶液一次性加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW121.2，20g，0.165mol)、水(20cm³)与H₂SO₄(98％，16g)的冷却(～5℃)均匀溶液。(在加入之前溶液的制备：将N，N-二甲基苯胺和水在冰浴中冷却至大约5℃，然后历经15-25分钟缓慢加入浓硫酸，目的是防止放热反应的热失控)。然后，历经90分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW298.0，52.0g，0.174mmol)的水(140cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌2小时。向混合物一次性快速加入连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄，MW 174.1，15.2g，87.2mmol)的H₂O(20cm³)溶液。将混合物搅拌另外10分钟(在约5℃)。过滤所得绿色-褐色悬液。将残余物用水(2×250cm³)洗涤，得到绿色固体。使固体风干过夜。

将固体加入到HCl水溶液(900cm³，pH 2)中，形成悬液。一次性快速加入硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW 249.7，4.12g，16.5mmol)。历经15-20分钟增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物历经30分钟冷却至室温，过滤混合物。(在可供替代的实例中，在约60℃过滤混合物；不过，滤液可能在减压真空下暴沸)。将残余物用水洗涤(2×200cm³)。收集滤液。将滤液历经25-30分钟加热至65℃。将(热)滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，200g，3.45mol)处理，历经3.5小时冷却至22℃。在约2.5小时后和约40℃先观察到结晶性产物。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(在这种规模上：18-24g或35％；在5L规模上：60-65g或＞30％)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                            实施例8

            分离中间体的亚甲蓝(MTC)3-罐合成法

向圆底烧瓶(RBF)加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(100cm³)和HCl(37％，22cm³)。将混合物冷却至～5℃。向该混合物滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW 69.0，6.3g，90.8mmol)的水(50cm³)溶液。将所得悬液在低温(5-10℃)搅拌1小时。将混合物冷却至大约5℃。一次性加入铁屑(Fe，MW 55.85，11.0g，197mmol)和HCl(37％，22cm³)。将混合物在低于30℃的温度搅拌2小时。过滤混合物，收集滤液。

将滤液冷却至大约5℃。将滤液用硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.2，22.52g，90.75mmol)的水(25cm³)溶液处理。历经20分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，10.0g，33.6mmol)的水(20cm³)溶液。然后将溶液在低温(约5℃)搅拌1小时。然后向该冷却的溶液加入N，N-二甲基苯胺(C₆H₅N(CH₃)₂，MW 121.2，10g，82.15mmol)、水(10cm³)与H₂SO₄(98％，8g)的均匀溶液。然后，历经25分钟滴加重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.0，26.15g，87.7mmol)的水(35cm³)溶液。将混合物在大约5℃搅拌2小时。过滤所得绿色-褐色悬液。将残余物用水(4×250cm³)和四氢呋喃(THF)(100cm³)洗涤，得到绿色固体。使固体风干过夜。

将固体加入到硫酸铜(II)五水合物(CuSO₄-5H₂O，MW 249.7，2.06g，8.25mmol)的HCl水溶液(455cm³，pH 2)中。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌1小时。生成深蓝色。将混合物冷却至室温。过滤混合物。将残余物用水洗涤(4×100cm³)。收集滤液。将滤液用氯化钠(NaCl，MW 57.96，100g，1.73mol)处理。搅拌混合物直至深蓝色消失。过滤混合物，得到粗的亚甲蓝(MTC)，为固体(15.3g，58％)。

对粗产物可选地进行进一步处理(例如用硫化钠等)，如实施例9至13所述，然后可选地(进一步)经过重结晶纯化，如实施例14和15所述。

                          实施例9

                    用硫化钠处理粗产物

在65℃，将粗MTC产物(MW 373.90，4.5g，～12.0mmol)完全溶于H₂O(125cm³)。将该溶液冷却至室温。过滤澄清该冷却的溶液，以确保完全溶解。将该溶液用硫化钠(Na₂S，MW 78.04，＞60％，200mg，1.54mmol，0.1当量)的H₂O(10cm³)溶液处理。将所得混合物搅拌10分钟。真空过滤混合物。收集滤液。向滤液加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，16g，0.276mol)，同时搅拌。真空过滤收集所得沉淀。

                            实施例10

                       用硫化钠处理粗产物

在60℃，将粗MTC产物(MW 373.90，5g，～13.3mmol)完全溶于H₂O(230cm³)。将该溶液冷却至室温。将该溶液用硫化钠(Na₂S，MW 78.04，＞60％，135mg，～1.00mmol，～0.07当量)的H₂O(20cm³)溶液处理。将所得混合物搅拌15分钟。真空过滤混合物。收集滤液。滤液的pH为10.5±0.5。将滤液用二氯甲烷(DCM)洗涤(5×100cm³)。将经过洗涤的滤液的pH从～9.5-10.2调节至5.0。然后将溶液加热至60℃。向(热)溶液缓慢加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，200g，3.45mol)。(必须加以小心，因为残留的DCM可能导致溶液暴沸)。缓慢冷却(超过3.5小时)，导致亚甲蓝(MTC)以高度结晶形式沉淀。真空过滤收集沉淀，在60℃烘箱中干燥。

                            实施例11

           用二甲基二硫代氨基甲酸钠盐处理粗产物

在65℃，将粗MTC产物(MW 373.90，4.5g，～12.0mmol)完全溶于H₂O(125cm³)。将该溶液冷却至室温。过滤澄清该冷却的溶液，以确保完全溶解。将该溶液用二甲基二硫代氨基甲酸钠盐((CH₃)₂NCS₂Na，MW 143.21，550mg，3.84mmol，0.1当量)的H₂O(10cm³)溶液处理。将所得混合物搅拌10分钟。真空过滤混合物。收集滤液。向滤液加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，16g，0.276mol)，同时搅拌。真空过滤收集所得沉淀。

                           实施例12

                      用碳酸钠处理粗产物

在65℃，将粗MTC产物(MW 373.90，4.5g，～12.0mmol)完全溶于H₂O(125cm³)。将该溶液冷却至室温。过滤澄清该冷却的溶液，以确保完全溶解。将该溶液用碳酸钠(Na₂CO₃，MW 105.99，163mg，0.154mmol，0.1当量)的H₂O(10cm³)溶液处理。将所得混合物搅拌10分钟。真空过滤混合物。收集滤液。向滤液加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，16g，0.276mol)，同时搅拌。真空过滤收集所得沉淀。

                           实施例13

                     用EDTA二钠盐处理粗产物

将粗MTC产物(MW 373.90，10.0g，～26.7mmol)完全溶于H₂O(270cm³)。加入乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐二水合物(MW 372.24，1g，2.68mmol，0.1当量)。将混合物在65℃搅拌大约1小时。真空过滤混合物。收集滤液。向滤液加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，16g，0.276mol，10当量)，同时搅拌。真空过滤收集所得沉淀。

                           实施例14

                     冷酸性重结晶法重结晶

在65℃，将粗MTC产物或经过处理的粗MTC产物(MW 373.90，20g，～53.4mmol)溶于H₂O(1700cm³)。使混合物冷却至22℃。用HCl水溶液调节pH至pH 1，生成悬液，过滤。真空过滤收集所得高度结晶性产物，在75℃烘箱中干燥16小时。

                         实施例15

                      热盐析法重结晶

在65℃，将粗MTC产物或经过处理的粗MTC产物(MW 373.90，20g，～53.4mmol)溶于H₂O(1700cm³)。加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，200g，3.45mol)。历经3.5小时使混合物缓慢冷却至22℃。真空过滤收集所得高度结晶性产物，在75℃烘箱中干燥16小时。

                          实施例16

                      使用THF/H₂O重结晶

在65℃，将粗MTC产物或经过处理的粗MTC产物(MW 373.90，10g，～26.7mmol)溶于H₂O(200cm³)。将溶液冷却至大约22℃。加入四氢呋喃(THF)(40cm³)。在冰浴中历经若干小时使溶液缓慢冷却至大约5℃。真空过滤收集所得高度结晶性产物，在100℃烘箱中干燥2小时。

                          实施例17

                 亚甲蓝(MTC)的合成、处理和重结晶

将N，N-二甲基苯胺(20.0g，165mmol)置于反应容器[V1]中，搅拌。历经1分钟向该容器一次性加入H₂O(200cm³)，利用冰/水浴历经15分钟(±5分钟)将该不均匀混合物冷却至5℃(±2℃)。历经5分钟(±2分钟)加入37％盐酸(44cm³)，可观察到温度从4℃上升至8℃(±2℃)。(注意：放热反应)。维持反应容器在5℃(±2℃)达另外5分钟(±2分钟)，以确保完全均匀的混合物。该过程中全程持续搅拌。

单独制备NaNO₂溶液。历经1分钟将NaNO₂(12.6g，182.6mmol)快速加入到含有搅拌着的H₂O(100cm³)的单独烧瓶中。所致溶解过程是吸热的，观察到温度从20℃降至17℃(±2℃)。完全溶解花费5分钟(±2分钟)。总体积大约110cm³。

历经20分钟(±5分钟)向反应容器[V1]缓慢滴加亚硝酸钠溶液，在加入期间观察到反应温度从5℃上升至9℃。(注意：放热反应)。一旦加入开始，即观察到橙色。将反应混合物搅拌另外60分钟(±5分钟)，同时利用冰/水浴维持温度在5℃(±2℃)。在反应的该阶段中，观察到橙色溶液含有浅色沉淀。也生成少量泡沫。

历经5分钟(±2分钟)向反应混合物[V1]加入37％盐酸(44cm³)，可观察到反应温度从5℃上升至8℃。(注意：放热反应)。一旦加入完全，将反应混合物搅拌另外5分钟(±2分钟)。历经15分钟(±5分钟)向反应容器加入大约2g每份的铁屑(22.0g，0.394mol)。在铁加入期间观察到温度从8℃上升至12℃。(注意：放热反应)(注意：生成橙色烟雾；放出气体)。将反应混合物搅拌另外120分钟(±10分钟)，同时利用冰/水浴维持反应温度大约10℃(±2℃)。

历经5分钟(±2分钟)通过硅藻土真空过滤收集过量铁屑，过滤漏斗中的剩余固体用H₂O(20cm³)洗涤。

保留滤液(澄清褐色液体)，含有所需的N，N-二甲基-对-苯二胺二盐酸盐。滤液的总体积为大约400cm³。在这阶段，溶液在20℃的pH为2.59。在反应全程利用紫外分光光度法监测溶液，目的是确认反应完全和计算N，N-二甲基-对-苯二胺的最终浓度。典型的转化率为82％±2％。

将滤液置于另一反应容器[V2]中，利用冰/水浴历经15分钟(±5分钟)冷却至5℃(±2℃)。

单独制备Na₂S₂O₃-5H₂O溶液。历经1分钟向搅拌着的H₂O(50cm³)一次性加入Na₂S₂O₃-5H₂O(45.0g，181.4mmol)。所致溶解是吸热的，观察到温度从22℃下降至10℃。然后将混合物搅拌15分钟(±5分钟)，以确保完全溶解。总体积为76cm³。

历经1分钟向[V2]中的反应混合物一次性加入Na₂S₂O₃-5H₂O溶液。将反应混合物搅拌另外5分钟(±2分钟)，同时维持反应温度在5℃(±2℃)。单独制备Na₂Cr₂O₇-2H₂O溶液。历经1分钟向搅拌着的H₂O(80cm³)一次性加入Na₂Cr₂O₇-2H₂O(20.0g，67.2mmol)。所致溶解是吸热的，温度从22℃下降至15℃。然后将混合物搅拌15分钟(±5分钟)，以确保完全溶解。历经30分钟(±5分钟)向[V2]中的反应混合物缓慢加入Na₂Cr₂O₇-2H₂O溶液，目的是维持反应温度为5℃至8℃(±2℃)。(注意：放热反应)。然后将反应混合物搅拌60分钟，同时利用冰/水浴维持反应温度在5℃(±2℃)。

单独制备N，N-二甲基苯胺溶液。历经1分钟向含有搅拌着的H₂O(20cm³)的烧瓶一次性加入N，N-二甲基苯胺(20.0g，165mmol)。历经15分钟(±5分钟)将不均匀混合物用冰/水浴冷却至5℃(±2℃)，历经25分钟(±5分钟)缓慢加入浓(98％)硫酸(16.0g)，以防止温度迅速上升。观察到温度从3℃上升至21℃。(注意：放热反应)。酸加入完全后，将混合物搅拌另外10分钟(±5分钟)，以确保完全均匀的混合物。维持该混合物在5℃(±2℃)，直至加入到主反应容器[V2]中。总体积为大约48cm³。

历经1分钟向[V2]中的反应混合物一次性加入在5℃(±2℃)的冷却酸化含水N，N-二甲基苯胺混合物。然后将反应混合物搅拌另外5分钟(±2分钟)，同时维持在5℃(±2℃)。观察到这次向主反应混合物的加入操作没有温度变化。

单独制备Na₂Cr₂O₇-2H₂O溶液。历经1分钟向含有搅拌着的H₂O(140cm³)的烧瓶加入Na₂Cr₂O₇-2H₂O(52.0g，174.4mmol)。历经90分钟(±2分钟)向[V2]中的反应混合物滴加Na₂Cr₂O₇-2H₂O溶液，导致反应中的温度从5℃上升至10℃(±2℃)。(注意：放热反应)。在加入Na₂Cr₂O₇-2H₂O溶液后生成绿色沉淀。将反应混合物搅拌120分钟，同时维持在5℃(±2℃)。反应混合物现在近似于深绿色浆液。Bindschedler Green硫代磺酸盐是这阶段溶液中的绿色沉淀。此时监测废弃的排放液(滤液)，以测定铬(VI)的水平。在高氯酸和硫酸存在下用硫酸铁(II)铵(0.1M)滴定，可以计算Cr(VI)的水平，以便适当处理排放液。

单独制备Na₂S₂O₄溶液。历经1分钟向含有搅拌着的H₂O(20cm³)的烧瓶一次性加入Na₂S₂O₄(15.2g，87.2mmol)。将该混合物搅拌另外30分钟(±5分钟)，以确保完全溶解。

历经1分钟向反应混合物[V2]一次性加入Na₂S₂O₄溶液，在此期间观察到没有温度变化。这次加入完全后，将反应混合物搅拌5分钟(±2分钟)。

然后历经30分钟(±5分钟)在真空下通过布氏漏斗过滤[V2]中的反应混合物。从过滤漏斗中除去固体，置于加入有新鲜水(250cm³)的新容器中。将该混合物剧烈搅拌15分钟，过滤。再次从过滤漏斗中除去固体，置于含有新鲜水(250cm³)的单独容器中，搅拌，过滤。弃去所有洗液。

将在过滤漏斗中收集的固体Bindschedler Green硫代磺酸盐打碎成小块，置于新的洁净的反应容器[V3]中。

单独用5cm³(±1cm³)5M盐酸调节H₂O(900cm³)的pH至pH 2.0(±0.2)。然后历经1分钟向含有Bindschedler Green硫代磺酸盐的反应容器[V3]加入这种经过酸化的水。然后搅拌该容器[V3]的内容物。将Bindschedler Green硫代磺酸盐悬浮在酸化水[V3]中。历经1分钟向该悬液[V3]一次性加入CuSO₄.5H₂O(4.0g，16.0mmol)。在这种规模上观察到没有放热反应。然后历经25分钟(±5分钟)将反应容器[V3]加热至85℃(±2℃)。首先在40℃(±2℃)观察到蓝色。反应容器[V3]一旦达到85℃(±2℃)，继续在该温度搅拌60分钟。然后历经20分钟(±5分钟)将容器[V3]冷却至60℃(±2℃)，历经20分钟(±5分钟)在真空下通过布氏漏斗过滤内容物。然后将固体用新鲜的水(200cm³)洗涤。安全地弃去固体废气物。因为在10g规模上观察到大约68g废弃固体(固体废弃物的干重)，预计有大约146g废弃固体。合并水洗液和滤液，以备纯化。滤液和洗液含有所需的MTC溶液。

历经25分钟(±5分钟)将含有MTC的深蓝色含水滤液加热至65℃(±2℃)，历经10分钟(±2分钟)加入氯化钠(200g，342mmol)。历经360分钟(±5分钟)将溶液冷却至25℃(±2℃)，得到产物，为蓝绿色固体。(总粗产物质量24.1g，大约40％)。

作为替代选择：历经10分钟(±2分钟)向当前为25℃的含有MTC的深蓝色含水滤液加入盐酸(15cm³，5M)，目的是达到pH 1；这形成悬液。历经25分钟(±5分钟)将悬液加热至65℃(±2℃)，历经360分钟(±5分钟)冷却至20℃(±2℃)，得到产物，为蓝绿色固体。(总粗产物质量24.1g，大约40％)。即使这种相对粗的产物通常也具有比商业上可获得的MTC更低的金属含量。

作为替代选择：然后缓慢加入盐酸(1M)至达到pH 1，使MTC从溶液中结晶出来。过滤收集固体MTC。加入NaCl可以回收滤液中的任何残留MTC。

然后对产物进行处理和有机萃取。

将MTC(5g，从上述工艺得到)置于含有水(230cm³)的容器中，历经20分钟(±5分钟)加热至65℃(±5℃)，同时搅拌。继续在该温度搅拌1小时(±10分钟)，然后历经30分钟(±5分钟)将反应混合物冷却至10℃(±2℃)。

单独制备Na₂S溶液。历经10分钟(±5分钟)将硫化钠(135mg)完全溶于水(20cm³)，同时搅拌。(硫化钠具有强烈的令人厌恶的气味)。

立即将在10℃(±2℃)的冷却MTC溶液用所制备的硫化钠溶液一次性处理。将所合并的溶液搅拌15分钟(±5分钟)，同时维持温度为10℃(±2℃)，然后过滤除去所得沉淀。(这除去所络合的金属)。无金属的MTC现在存在于滤液中的溶液中。

MTC滤液的pH为大约10.8，如果不是，用Na₂S水溶液调节pH为大约10.8。将10℃(±2℃)的冷MTC溶液置于反应容器中，该容器装配有与带桨的轴连接的液上机械搅拌器以及烧瓶底部的排放龙头。一旦MTC溶液(滤液)处于容器中，也向同一容器加入二氯甲烷(50cm³)(注意：不可燃，挥发性)，将不均匀的混合物搅拌10分钟。(二氯甲烷在水中不可混溶，在含有MTC的水层下形成单独的一层)。一旦从含MTC水层分离，排放下部二氯甲烷层。(界面是不可能看到的；不过，DCM层是紫色，一旦从龙头中出来，在其与深蓝色/黑色含MTC水层之间可以进行明显的区分)。这种二氯甲烷加入、10分钟搅拌和排放下层重复四次，在这种萃取过程全程维持温度在10℃(±2℃)。(用DCM除去天青B)。二氯甲烷的总体积为250cm³。

深蓝色顶部MTC水层现在用10％盐酸调节pH从9.9到5.0。然后历经20分钟(±5分钟)将MTC溶液加热至65℃(±5℃)，同时搅拌。向MTC溶液加入氯化钠(42g)，立即继之以历经360分钟(±5分钟)冷却至25℃(±2℃)。无金属的高纯MTC从溶液中沉淀出来，过滤回收，得到蓝绿色固体(4.7-4.9g，96％±2％)。

作为替代选择：历经10分钟(±2分钟)向深蓝色顶部MTC水层加入盐酸(15cm³，5M)，目的是达到pH 1；这形成悬液。历经25分钟(±5分钟)将悬液加热至65℃(±2℃)，历经360分钟(±5分钟)冷却至20℃(±2℃)，得到无金属的高纯MTC，为蓝绿色固体。

作为替代选择：调节深蓝色顶部MTC水层的pH在pH 3.5-4.5之间，使温度上升至25℃。然后缓慢加入盐酸(1M)以达到pH 1，使MTC从溶液中结晶出来。过滤收集固体MTC，得到无金属的高纯MTC，为蓝绿色固体。加入NaCl可以回收滤液中任何残留的MTC。

利用实施例1所述方法制备MTC样品。然后利用实施例17所述冷酸重结晶结晶出粗产物(CM-pd-378)。产物然后进一步经过有机萃取和25℃HCl重结晶纯化，也如实施例17所述。这得到高度纯的MTC，基于HPLC分析的有机纯度为98.53％。纯度数据总结在下表中。

表2所合成和纯化的MTC的有机纯度，根据HPLC分析测定
					MTC来源	MTC％	天青B％	MVB％	其他％
MedexTM	94.22	5.24	0.10	0.44
					CM-pd-378	96.60	2.89	0.33	0.06
CM-pd-378b	98.53	1.29	0.14	0.04

注：

Medex^TM：从Medex Medical Export Co.Ltd.获得，供对比。

CM-pd-378：按照实施例1制备的粗MTC，然后从H₂O/HCl(pH 1)中沉淀；T＝25℃。

CM-pd-378b：从粗MTC制备的纯MTC(将CM-pd-378用Na₂S处理，在10℃用DCM处理/洗涤/萃取，然后使用HCl(pH 1)使MTC从水层中重结晶；T＝10-25℃)。

                       实施例18

使用硫化钠和氯化铁(III)的Ethylthioninium Chloride(ETC)合成法

将N，N-二乙基-对-苯二胺(H₂NC₆H₄N(CH₂CH₃)₂，MW 164.25，40g，244mmol)溶于二乙醚(200cm³)。加入盐酸(40cm³，37％)。旋转蒸发浓缩所得溶液，得到N，N-二乙基-对-苯二胺二盐酸盐，为浅褐色固体(57.76g，100％)。δ_H(250 MHz；D₂O)：7.68(2H，m，ArH)，3.45(4H，q，7.25，NCH₂)，1.19(6H，t，7.25，CH₃)。

将N，N-二乙基-对-苯二胺二盐酸盐(H₂NC₆H₄N(CH₂CH₃)₂-2HCl，MW237.17，57.76g，244mmol)溶于水(1200cm³)。使用10％HCl水溶液调节pH至pH 1.6。生成粉红色。加入硫化钠(Na₂S，MW 78.04，32g，＞60％，244mmol)。生成浅黄色溶液，含有绿色沉淀。向混合物加入氯化铁(III)六水合物(FeCl₃-6H₂O，MW 270.30，98.75g，365mmol)的水(400cm³)溶液。颜色立即变为蓝色。然后使混合物充气1小时。向混合物加入第二份氯化铁(III)六水合物(FeCl₃-6H₂O，MW 270.30，98.75g，365mmol)的水(400cm³)溶液。将溶液冷却至5℃。过滤混合物。将残余物用水洗涤。收集滤液。向滤液加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，400g，6.9mol)。将混合物搅拌10分钟。随着有沉淀生成，颜色变为红色/紫色。过滤混合物，收集固体残余物。将固体溶于二氯甲烷(CH₂Cl₂，1000cm³)和甲醇(CH₃OH，100cm³)，经硫酸镁(MgSO₄)干燥。过滤混合物，浓缩滤液，得到产物Ethylthioninium Chloride(ETC)(MW 375.96，4.28g，11.4mmol，9.3％)，为绿色固体。

δ_H(250MHz；D₂O)：7.35(2H，d，ArH)，7.04(2H，d，ArH)，6.86(2H，s，ArH)，3.45(8H，q，7.25，NCH₂)，1.19(12H，t，7.25，CH₃).

可以进行快速柱色谱，目的是除去残留的氯化铁，例如使用10％甲醇∶90％二氯甲烷洗脱液和二氧化硅40-63μm 60A。

                        实施例19

使用硫化钠和氯化铁(III)的1，9-二乙基亚甲蓝(DEMTC)合成法

向100cm³圆底烧瓶加入3-乙基苯胺(H₂NC₆H₄CH₂CH₃，MW 121.18，10g，82.5mmol)、乙醇(15cm³)和碳酸钠(Na₂CO₃，MW 105.99，11.81g，111.4mmol)。滴加甲基碘(CH₃I，MW 141.94，31.63g，222mmol)。然后将混合物在45℃加热10小时。然后将混合物冷却至室温。加入水(100cm³)。将混合物萃取到二乙醚中(3×100cm³)，萃取液经硫酸镁(MgSO₄)干燥。过滤混合物，浓缩滤液，得到产物N，N-二甲基-间-乙基苯胺((CH₃)₂NC₆H₄CH₂CH₃，MW 149.23，4.68g，31.3mmol，38％)，为浅黄色油。

δ_H(250MHz；CDCl₃)：7.22(1H，t，7.75，ArH)，6.63(3H，m，ArH)，2.97(6H，s，NCH₃)，2.63(2H，q，7.5，CH₂)，1.27(3H，t，7.5，CH₃)；δ_c(62.9MHz；CDCl₃)：15.8(CH₃)，29.5(NCH₂)，40.8(NCH₃)，110.3(ArC)，112.4(ArC)，116.5(ArC)，129.1(ArC)，145.3(ArC)，150.9(ArC).

向250cm³圆底烧瓶加入N，N-二甲基-间-乙基苯胺((CH₃)₂NC₆H₄CH₂CH₃，MW 149.23，4.68g，31.3mmol)、水(100cm³)和盐酸(HCl，8.5cm³，37％)。将溶液冷却至5℃。然后滴加亚硝酸钠(NaNO₂，MW69.0，2.46g，35.7mmol)的水(80cm³)溶液。将混合物在室温搅拌3小时。加入铁屑(Fe，MW 55.85，5.24g，94mmol)和盐酸(HCl，8.5cm³，37％)。将混合物在室温搅拌3小时。过滤混合物，收集滤液。将滤液的pH用碳酸氢钠(NaHCO₃)溶液调节至pH 7，萃取到乙酸乙酯中(3×50cm³)。合并萃取液，经硫酸镁(MgSO₄)干燥。过滤混合物，浓缩滤液，得到褐色的油。将该油溶于二乙醚/乙醇(1∶1)(175cm³)。加入盐酸(HCl，5cm³，37％)。过滤溶液，得到产物N，N-二甲基-间-乙基-对-苯二胺二盐酸盐((CH₃)₂NC₆H₄(CH₂CH₃)NH₂-2HCl，MW 237.17，4.44g，1.87mmol，60％)，为浅褐色固体。

δ_H(250MHz；D₂O)：7.66(1H，s，ArH)，7.56(2H，s，ArH)，3.29(6H，s，NCH₃)，2.74(2H，q，7.5，CH₂)，1.25(3H，t，7.5，CH₃)；δ_c(62.9 MHz；CDCl₃)：15.5(CH₃)25.6(NCH₂)，48.9(NCH₃)，122.1(ArC)，124.6(ArC)，128.1(ArC)，132.6(ArC)，143.3(ArC)，144.9(ArC).

将N，N-二甲基-间-乙基-对-苯二胺二盐酸盐((CH₃)₂NC₆H₄(CH₂CH₃)NH₂-2HCl，MW 237.17，1.3g，5.5mmol)溶于水(50cm³)。用10％HCl水溶液调节pH至pH 1.6。生成粉红色。逐份加入硫化钠(Na₂S，MW 78.04，0.71g，＞60％，5.5mmol)。向混合物加入氯化铁(III)六水合物(FeCl₃-6H₂O，MW 270.30，2.23g，8.2mmol)的水(50cm³)溶液。颜色立即变为紫色。然后使混合物充气1小时。向混合物加入第二份氯化铁(III)六水合物(FeCl₃-6H₂O，MW 270.30，2.23g，8.2mmol)的水(50cm³)溶液。将溶液冷却至5℃。过滤混合物。将残余物用水洗涤。收集滤液。向滤液加入氯化钠(NaCl，MW 57.96，50g，0.86mol)。将混合物搅拌10分钟。随着有沉淀生成，颜色变为红色/紫色。过滤混合物，收集固体残余物。将固体溶于二氯甲烷(CH₂Cl₂，100cm³)和甲醇(CH₃OH，10cm³)，经硫酸镁(MgSO₄)干燥。过滤混合物，浓缩滤液，得到产物1，9-二乙基亚甲蓝(DEMTC)(MW375.96，0.15g，0.40mmol，15％)，为绿色固体。

δ_H(250MHz；D₂O)：6.55(2H，s，ArH)，6.23(2H，s，ArH)，2.92(12H，s，NCH₃)，2.56(4H，q，7.5，CH₂)，0.99(6H，t，7.5，CH₃).

可以进行快速柱色谱，目的是除去残留的氯化铁，例如使用10％甲醇：90％二氯甲烷洗脱液和二氧化硅40-63μm 60A。

                           实施例20

使用二氧化锰的Ethylthioninium Chloride(ETC)氯化锌(复盐)合成法

将搅拌着的N，N-二乙基-对-苯二胺((CH₃CH₂)NC₆H₄NH₂，MW 164.25，5.0g，30.4mmol)在H₂O(100cm³)与硫酸(H₂SO₄，浓，“98％”，1cm³)中的混合物用非还原性氯化锌溶液(ZnCl₂，MW 136.29，7.60g，55mmol，在15cm³H₂O中含有Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.00，100mg，0.3mmol)处理，得到红色反应混合物。

加入Al₂(SO₄)₃.16H₂O(5.80g，9.2mmol)的H₂O(10cm³)溶液；硫代硫酸钠五水合物(Na₂S₂O₃-5H₂O，MW 248.18，8.0g，32.2mmol)的H₂O(10cm³)溶液；和三分之一的重铬酸钠二水合物(Na₂Cr₂O₇-2H₂O，MW 298.00，8.7g，29.2mmol)的H₂O(15cm³)溶液，继之以温度迅速上升至40℃。

加入N，N-二乙基苯胺((CH₃CH₂)₂NC₆H₅，MW 149.24，3.0g，20.1mmol)的浓HCl(4cm³)溶液，继之以加入其余重铬酸钠二水合物溶液。生成深绿色沉淀。迅速增加温度至75℃。加入活化二氧化锰(MnO₂，MW 86.94，3.80g，43.7mmol)的H₂O(5cm³)浆液。增加温度至85℃。将混合物在该温度搅拌30分钟。观察到蓝色溶液，含有沉淀。

将混合物冷却至50℃，缓慢加入浓硫酸(H₂SO₄，11cm³)。将混合物冷却至20℃。真空过滤混合物。收集残余物，用盐水(饱和氯化钠水溶液，NaCl)洗涤。在100℃将黑色残余物重新溶于H₂O(250cm³)，冷却至室温，真空过滤除去不溶物。将滤液用氯化锌(ZnCl₂，MW 136.28，4g，29mmol)和氯化钠(NaCl，MW 58.44，23g，0.4mol)处理，在冰箱中放置16小时。真空过滤回收所得沉淀，用盐水(饱和氯化钠水溶液，NaCl，30cm³)洗涤，在真空烘箱中干燥3小时，得到产物Ethylthioninium Chloride(ETC)氯化锌(复盐)(MW 547.70，5.7g，10mmol，71％)，为锈红色粉末。

δ_H(250MHz，D₂O)：1.20(12H，br t，CH₃)，3.50(8H，br q，CH₂)，6.80(2H，s，Ph)，7.05(2H，br d，Ph)和7.30(2H，br d，Ph).

                             实施例21

         所得产物与Urolene Blue_的金属对比定量分析

对商业上可获得的Urolene Blue_样品以及利用本文所述方法得到的高纯度MTC产物样品进行定量分析。通过N，N-二甲基苯胺的亚硝基化，继之以亚硝酰还原、硫代磺酸生成、氧化性偶联、使用连二亚硫酸盐的Cr(VI)还原、环闭合和使用冷NaCl的氯化物盐生成，得到MTC(“所得产物”)。这得到粗的MTC，进一步经过硫化钠处理、继之以使用冷NaCl的氯化物盐生成进行纯化。利用感应偶合等离子体-质谱(ICP-MS)进行分析(使用Agilent 7500_仪器，采用和不用反应池模式(H₂))。按照标准样品制备方案制备样品。使用10ppb铑作为内标。数据总结在下表中。

表3
					金属	检测限度(μg/g)	Urolene Blue_(μg/g)	所得产物(μg/g)	欧洲安全性限度(μg/g)
Mg	0.85	585	3.5	-
					Al	0.98	1939	5.0	100
Ti	0.13	1331	4.2	-
					V	0.08	0.5	＜0.08	-
Cr	0.59	10.2	2.6	10
					Mn	0.06	5.2	＜0.06	10
Fe	0.41	132	6.8	100
					Cu	0.47	34.4	4.4	10
Zn	0.35	0.9	4.6	10
					As	0.22	0.9	＜0.22	-
Sr	0.72	104	＜0.72	-
					Sn	0.68	＜0.68	＜0.68	1
Pb	0.07	0.3	2.4	10
					U	0.01	0.5	＜0.01	-

另外，在Urolene Blue_中检测到、但是在利用本文所述方法所得高纯度MTC产物中没有检测到下列元素：钪、溴、钇、铌、钯、镧、钕、钐、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、铪、钽、钍。

从数据可以看到，Urolene Blue_超出(在有些情况下大大超出)就若干金属而言的欧洲安全性限度，包括Al、Cr、Fe、Cu，而利用本文所述方法所得高纯度MTC产物不仅满足这些标准，而且具有实质性更低水平的这些和其他金属。

                           实施例22

                    所合成和纯化的MTC的分析

按照本文所述方法合成和纯化MTC。分析所得产物的有机和金属杂质。结果总结在下表中。

表4所合成和纯化的MTC的有机纯度，根据HPLC分析测定
						MTC来源	重结晶	MTC％	天青B％	MVB％	其他％
MedexTM	n/a	94.22	5.20	0.11	0.47
						Urolene Blue_	n/a	94.27	5.23	0.09	0.41
NTP	n/a	94.33	5.13	0.13	0.41
						DJPS12a	H2O/HCl，pH 1	96.37	3.07	0.15	0.07
DJPS13a	H2O/HCl，pH 1	96.85	2.73	0.15	0.27

注：

(1)Medex^TM从Medex Medical Export Co.Ltd.获得。

(2)Urolene Blue_(配制成糖衣片的MTC)从Star Pharmaceuticals，Florida，USA获得。

(3)NTP是来自National Toxicology Program的MTC样品。

(4)DJPS12a & DJPS13a是如下所得到的MTC：N，N-二甲基苯胺的亚硝基化继之以亚硝酰还原、硫代磺酸生成、氧化性偶联、使用连二亚硫酸盐的Cr(VI)还原、环闭合和使用热NaCl的氯化物盐生成。这得到粗的MTC，进一步经过冷硫化钠处理、继之以DCM洗涤、然后冷酸性重结晶进行纯化。就样品DJPS12a和DJPS13a而言，没有残留的MTC被NaCl盐析出来。

表5商业来源MTC样品金属污染物的ICP-MS分析
									欧洲药典限度(ug/g)
		Ni	Mo	Cd	Sn	Pb
									10	10	1	1	10
#	MTC来源	金属含量(ug/g)
							1	MedexTM	＜0.65	＜0.47	＜0.12	＜0.90	1.0
2	Urolene Blue_	1.0	0.30	＜0.03	＜0.68	0.3
							3	NTP	＜0.71	＜0.30	＜0.06	＜0.37	0.6
5	DJPS12a	＜0.80	＜0.21	＜0.12	＜0.39	＜0.23
							6	DJPS13a	＜0.80	＜0.21	＜0.12	＜0.39	＜0.23

表5(续)商业来源MTC样品金属污染物的ICP-MS分析
										欧洲药典限度(ug/g)
		Al	Cr	Zn	Cu	Fe	Mn
										100	10	10	10	100	10
#	MTC来源	金属含量(ug/g)
								1	MedexTM	8.0	125	＜1.25	269	92.2	＜0.17
2	Urolene Blue_	1939	10.2	0.9	34.4	132	5.2
								3	NTP	3.4	30.1	＜1.0	202	58.7	0.8
5	DJPS12a	＜0.75	1.5	＜1.05	2.5	16.8	＜0.07
								6	DJPS13a	＜0.75	1.4	＜1.05	＜0.68	＜0.32	＜0.07

注意“＜”表示进行分析当天仪器的检测限度。

注意，不象商业产品，按照本文所述方法合成和纯化的MTC具有实质性减少的有机杂质水平，金属水平小于11种EP金属的EP限度。

                          实施例23

                  商业上可获得的MTC产品的分析

一些从商业来源获得的MTC产品的纯度数据如下表所示。即使化学参照物质，尽管是相对有机纯的，就金属而言也是相对不纯的，不能满足欧洲药典(EP)关于铜和铬的标准。

表6商业来源MTC样品有机成分的HPLC分析
						#	MTC来源	MTC％	天青B％	MVB％	其他％
1	MedexTM	94.22	5.20	0.11	0.47
						2	Urolene Blue_	94.27	5.23	0.09	0.41
3	NTP	94.33	5.13	0.13	0.41
						4	Simpson	95.22	4.38	0.15	0.06
5	Martlndale	93.34	5.91	0.16	0.09
						6	Garuda	93.72	5.74	0.12	0.09
7	Tianjin	91.15	7.52	0.21	0.28
						8	Jonas	94.16	4.65	0.92	0.06
9	Amresco	94.69	4.73	0.10	0.11
						10	MTC CRS	96.06	3.59	0.09	0.08
11	Aldrich	94.26	5.20	0.10	0.11

表7商业来源MTC样品金属污染物的ICP-MS分析
									欧洲药典限度(ug/g)
		Ni	Mo	Cd	Sn	Pb
									10	10	1	1	10
#	MTC来源	金属含量(ug/g)
							1	MedexTM	＜0.65	＜0.47	＜0.12	＜0.90	1.0
2	Urolene Blue_	1.0	0.30	＜0.03	＜0.68	0.3
							3	NTP	＜0.71	＜0.30	＜0.06	＜0.37	0.6
4	Simpson	＜4.58	＜0.56	＜0.49	＜3.5	＜2.05
							5	Martindale	18.9	0.4	＜0.03	＜0.20	455.4
6	Garuda	＜4.58	＜0.56	＜0.49	＜3.5	＜2.05
							7	Tianjin	＜4.58	＜0.56	＜0.49	＜3.5	＜2.05
8	Jonas	＜4.58	＜0.56	＜0.49	＜3.5	＜2.05
							9	Amresco	＜4.58	＜0.56	＜0.49	5.1	＜2.05
10	MTC CRS	＜0.35	0.50	0.27	＜0.54	1.2
							11	Aldrich	＜4.58	＜0.56	＜0.49	＜3.5	＜2.05

表7(续)商业来源MTC样品金属污染物的ICP-MS分析
										欧洲药典限度(ug/g)
		Al	Cr	Zn	Cu	Fe	Mn
										100	10	10	10	100	10
#	MTC来源	金属含量(ug/g)
								1	MedexTM	8.0	125	＜1.25	269	92.2	＜0.17
2	Urolene Blue_	1939	10.2	0.9	34.4	132	5.2
								3	NTP	3.4	30.1	＜1.0	202	58.7	0.8
4	Simpson	＜24.9	82.2	＜6.93	228.1	62.8	7.2
								5	Martindale	161.0	175.1	76.4	1541	309.1	5.7
6	Garuda	＜24.9	85.2	＜6.93	263.5	101.6	6.5
								7	Tianjin	＜24.9	259.6	198.8	64.3	1.8mg	11.2
8	Jonas	＜24.9	3.0	204.2	70.5	27.2	6.1
								9	Amresco	27.2	1.0mg	＜6.93	276.1	96.1	6.0
10	MTC CRS	1.3	31.4	2.6	61.1	38.6	0.6
								11	Aldrich	＜24.9	53.5	＜6.93	208.7	62.4	6.5

注意“＜”表示进行分析当天仪器的检测限度。

注意，所有商业产品不能满足欧洲药典(EP)关于铜的限度。大多数不能满足铬的标准。很多不能满足铝、锌和铁的标准。若干不能满足其他金属的标准，例如镍、锡和铅。很多仅满足EP关于铁和锰的限度。UroleneBlue_不能满足EP关于铜、铬、铝和铁的限度。

另外注意，Medex^TM含有在检测限度以上的碘和溴；Urolene Blue_也含有高水平的镁、钛和锶以及如下元素的水平在检测限度以上：铀、钪、溴、钇、铌、钯、碘、铯、镧、铈、钕、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铥、镱、镥、铪、钽、钨和钍。

关于商业来源MTC样品的细节如下表所述。

表8商业MTC样品来源
				#	产品	级别；批号	来源
1	MedexTM	亚甲基蓝USP24批号030928	Medex Medical Export Co.，Naseby，Northants，UK
				2	Urolene Blue_	Star Pharmaceutical制剂；NDC 0076-0501-03；Lot 033797	Star Pharmaceuticals Inc.，Pompano Beach，Florida，USA
3	NTP	亚甲基蓝三水合物，得自National ToxicologyProgram(NTP)的样品；Sigma批号68H3728	RTI International，ResearchTriangle Park，North Carolina，USA
				4	Simpson	亚甲基蓝BP73批号092002	Simpsons UK Ltd.，Caldicot，Gwent，UK
5	Martindale	注射用USP制剂(1％w/v)；Lot 507565	Martindale Pharmaceuticals，Romford，Essex，UK
				6	Garuda	亚甲基蓝(表XX)批号021222	Garuda Chemicals，Andheri(East)，Mumbai，印度
7	Tianjin	亚甲基蓝，无锌	Tianjin Sanhuan ChemicalCo，.Ltd.，天津，中国
				8	Jonas	亚甲基蓝，无锌批号17040	NY，USAJonas Chemical Corp.，Brooklyn，
9	Amresco	亚甲基蓝，试剂级；编码0722；批号0972B70	Amresco Inc.，Ohlo，USA

表8商业MTC样品来源
				#	产品	级别；批号	来源
10	MTC CRS-EP	亚甲蓝Ph.Eur.CRS；Cat.M1800900；Batch 1(化学参考物质)	“European Directorate for theQuality of Medicines”，(EDQM)Strasbourg，法国
				11	Aldrich	亚甲基蓝三水合物，Cat.M44907；批号KU05126C	Sigma-Aldrich Chemical Co.，Poole，Dorset，UK

                             实施例24

                            胶囊的制备

制备包含MTC和适合于药用的明胶胶囊。

药物产品为1号蓝/蓝明胶胶囊，含有绿/蓝蜡状材料，它是活性物质亚甲蓝(MTC)在蜡状悬液中的混合物，以Gelucire 44/14_(月桂酰聚乙二醇-32甘油酯PhEur，USP)作为悬液载体，2％Aerosil 200_(胶体二氧化硅PhEur，USP)作为触变悬浮剂。

制备三种强度的胶囊，目标强度为30、60和100mg。制备25％MTC(在无水基础上)、73％Gelucire与2％Aerosil 200的大量混合物，借助填充重量的变化控制剂量，每一剂量的制剂组成是恒定的。

表9胶囊含量
							成分名称	功能	参照	量(每粒)
30mg	60mg	100mg	安慰剂
				MTC	活性	USP				30	60	100	0
Gelucire44/14_	填充剂	PhEurUSP	117mg*				234mg*	390mg*	300mg
				Aerosil200_	悬浮剂	PhEurUSP				3mg*	6mg*	10mg*	0

*标称。

由MW Encap Ltd(也称为Encap Drug Delivery)，West Lothian，UK按照cGMP制备胶囊。典型的配方如下表所示。

表10典型的配方
		原料	批量
MTC	1.25kg
		Gelucire 44/14_	5.00kg
Aerosil 200_	100g
		1号胶囊，不透明深蓝	Min 20,000
明胶	1kg(过量)
		纯净水	3升(过量)

在大约65℃融化Gelucire，在混合容器中保持在65℃。加入MTC(通过600μm筛)和Aerosil 200_，混合直至混合物均匀。施加真空达约15分钟使混合物脱气，然后转移至胶囊填充机的料斗(温度设置在55℃)。填充硬明胶胶囊(Capsugel)，以频繁的间隔(大约30分钟间隔)检查目标填充重量。然后将胶囊转移至封装机。制备胶囊封装溶液(明胶的纯净水溶液)。在封装机上封装胶囊，在线检查气泡和不完全的密封。然后使胶囊通过25至30℃的干燥烘箱。

上文已经描述了本发明的原理、优选实施方式和操作模式。不过，本发明不应被解释为限于所讨论的特定实施方式。相反，上述实施方式应被视为阐述性的而非限制性的，应当领会到，本领域技术人员在这些实施方式中可以进行变化，而不背离本文所述本发明的范围。

本发明不限于由附后权利要求所涵盖的那些实施方式，这些权利要求仅涉及很多优选的发明方面和实施方式中的一些。

参考文献

上文引用一些专利和出版物，目的是更充分地描述和公开发明和发明所涉及的技术现状。下面提供这些参考文献的完整引用。每一这些参考文献都全文结合在本文中作为参考，如同每一个别参考文献被具体和个别结合作为参考。

Badische Anilin-und Soda-Fabrik，1877，“Verfahren Zur DarstellungBlauer Farbstoffe Aus Dimethyl-Anilin Und Anderen TertiarenAromatischen Monaminen，”德国专利No.1886，1877年12月15日公开。

Bernthsen，August，1885a，“Studien in der Methylenblaugruppe，”JustusLiebig’s Annalen der Chemie，Band 230，73-136页。

Bernthsen，August，1885b，“Studien in der Methylenblaugruppe，”JustusLiebig′s Annalen der Chemie，Band 230，137-211页。

Bernthsen，1889年8月，“Studien in der Methylenblaugruppe，”JustusLiebig’s Annalen der Chemie，Band 251，1-96页。

Colour Index，Vol.4(第3版，1971)，4470页，Entry Number 52015。

Fierz-David and Blangley，1949，“F.Oxazine and Thiazine Dyes，”in：Fundamental Processes of Dye Chemistry，由Interscience出版(伦敦，UK)，308-314页。

Guttmann P，Ehrlich P._ber die Wirkung des Methylenblau bei Malaria.Berl Klin Wochenschr 1891；28：953-956。

Leventis，N.等人，1997，“Synthesis of Substituted PhenothiazinesAnalogous to Methylene Blue by Electrophilic and Nucleophilic AromaticSubstitutions in Tandem.A Mechanistic PerspectiVe，”Tetrahedron，Vol.53，No.29，10083-10092页。

Lillie，R.D.等人，1979，“Zinc Chloride Methylene Blue，I.Biological StainHistory，Physical Characteristics and Approximation of Azure B Contentof Commercial Samples，” Stain Technology，Vol.54，No.1，33-39页。Lohr，W.，Grubhoffer，N.，Sohmer，I.，Wittekind，D.，1975，“The azuredyes：their purification and physiochemical properties.Purification ofAzure B，” Stain Technology，Vol.50(3)，149-156页。

Marshall，P.N.，Lewis，S.M.，1975a，“The purification of Methylene Blueand Azure B by solvent extraction and crystallisation，” Stain Technology，Vol.50(6)，375-381。

Marshall，P.N.，Lewis，S.M.，1975b，“Metal contaminants in commercialdyes，” Stain Techoology，Vol.50(3)，143-147页。

Masuya，Hirotomo，1992，“Phenothiazine Derivatives，Their Productionand Use，”欧洲专利公开No 0 510 668 A2，1992年10月28日公开。

Michaelis，L.等人，1940，“Semiquinone Radicals of the Thiazines，” Journal of the Americal Chemical Society，Vol.62，204-211页。

Rengelshausen，J.，Burhenne，J.，Frohlich，M.，Tayrouz，Y.，Singh，S.K.，Riedel，K.-D.，Muller，O.，Hoppe-Tichy，T.，Haefeli，W.E.，Mikus，G.&Walter-Sack，I.(2004)Pharmacokinetic interaction of chloroquine andmethylene blue combination against malaria.European Journal of ClinicalPharmacology 60，709-715。

Schirmer，H.，Coulibaly，B.，Stich，A.，Scheiwein，M.，Merkle，H.，Eubel，J.，Becker，K.，Becher，H.，M_iler，O.，Zich，T.，Schiek，W.& Kouyaté，B.(2003)Methylene blue as an antimalarial agent.Redox Report 8，272-275。

Wischik，C.M.等人，1996，“Inhibition of Tau-Tau-Association，”公布的国际专利申请(PCT)申请号WO 96/30766，1996年10月3日公开。

Wischik，C.M.等人，2002，“Materials and Methods Relating to ProteinAggregation in Neurodegenerative Disease，”公布的国际专利申请(PCT)申请号WO 02/055720，2002年7月18日公开。

Claims (149)

1、合成方法，包括如下顺序的步骤：

氧化性偶联(OC)，其中使用是或者包含Cr(VI)的氧化剂将硫代硫酸S-{2-(氨基)-3-(可选被取代的)-5-(二取代的氨基)-苯基}酯4与N，N-二取代的-3-可选被取代的-苯胺5氧化性偶联，得到[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6：

两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)，其中分离和纯化所述[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6；

环闭合(RC)，其中使所述经过分离和纯化的[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6进行环闭合，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7：

其中：

每个R¹和R⁹独立地选自-H、C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；

每个R^3NA和R^3NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；每个R^7NA和R^7NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；且X是一个或多个阴离子抗衡离子以达到电中性。

2、根据权利要求1的合成方法，其中所述氧化性偶联(OC)步骤的所述氧化剂是Na₂Cr₂O₇。

3、根据权利要求1或2的合成方法，其中所述氧化性偶联(OC)步骤在酸性条件下进行。

4、根据权利要求1至3任意一项的合成方法，其中所述分离和纯化是过滤。

5、根据权利要求1至3任意一项的合成方法，其中所述分离和纯化是过滤继之以洗涤。

6、根据权利要求1至3任意一项的合成方法，其中所述分离和纯化是过滤继之以洗涤和干燥。

7、根据权利要求1至6任意一项的合成方法，其中所述环闭合(RC)步骤通过用硫酸Cu(II)处理来实现。

8、根据权利要求1至7任意一项的合成方法，其中所述环闭合(RC)步骤在酸性条件下进行。

9、根据权利要求1至8任意一项的合成方法，进一步包括在所述氧化性偶联(OC)步骤之后和所述两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)步骤之前的如下附加步骤：Cr(VI)还原(CR)，其中处理氧化性偶联(OC)步骤的产物，以转化残留Cr(VI)为Cr(III)。

10、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用还原剂处理。

11、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用连二亚硫酸盐处理。

12、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用连二亚硫酸钠处理。

13、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用链烷醇处理。

14、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用乙醇处理。

15、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用碘化物处理。

16、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用碘化钠处理。

17、根据权利要求9的合成方法，其中转化残留Cr(VI)为Cr(III)的所述处理是用酸或碱处理，以达到pH5.70至6.35。

18、根据权利要求1至17任意一项的合成方法，进一步包括在所述氧化性偶联(OC)步骤之前的如下附加步骤：

硫代磺酸生成(TSAF)，其中在硫代硫酸盐存在下氧化N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯3，得到所述硫代硫酸S-{2-(氨基)-3-(可选被取代的)-5-(二取代的氨基)-苯基}酯4：

19、根据权利要求18的合成方法，其中所述硫代硫酸盐是或者包含Na₂S₂O₃。

20、根据权利要求18或19的合成方法，其中所述硫代磺酸生成(TSAF)步骤中的所述氧化作用是与是或者包含Cr(VI)的氧化剂反应。

21、根据权利要求18或19的合成方法，其中所述硫代磺酸生成(TSAF)步骤中的所述氧化作用是与是或者包含Na₂Cr₂O₇的氧化剂反应。

22、根据权利要求18至21任意一项的合成方法，进一步包括在所述硫代磺酸生成(TSAF)步骤之前的如下附加步骤：

亚硝酰还原(NR)，其中还原N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺2，生成所述N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯3：

23、根据权利要求22的合成方法，其中所述亚硝酰还原(NR)步骤中的所述还原作用是与是或者包含Fe(0)的还原剂反应。

24、根据权利要求22的方法，其中所述亚硝酰还原(NR)步骤中的所述还原作用是与是或者包含金属铁的还原剂反应。

25、根据权利要求22至24任意一项的合成方法，其中所述亚硝酰还原(NR)步骤中的所述还原作用在酸性条件下进行。

26、根据权利要求22至25任意一项的合成方法，进一步包括在所述亚硝酰还原(NR)步骤之前的如下附加步骤：

亚硝基化(NOS)，其中N，N-二取代的-3-可选被取代的苯胺1被4-亚硝基化，得到所述N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰苯胺2：

27、根据权利要求26的方法，其中所述亚硝基化作用使用亚硝酸盐进行。

28、根据权利要求26的合成方法，其中所述亚硝基化作用使用亚硝酸钠进行。

29、根据权利要求26至28任意一项的合成方法，其中所述亚硝基化作用在酸性条件下进行。

30、根据权利要求1至29任意一项的合成方法，进一步包括在所述环闭合(RC)步骤之后的如下附加步骤：

氯化物盐生成(CSF)，其中所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7与氯化物反应，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8：

31、根据权利要求30的合成方法，其中该氯化物是盐酸。

32、根据权利要求31的合成方法，其中氯化物盐生成(CSF)在相对低的pH0至2进行。

33、根据权利要求31的合成方法，其中氯化物盐生成(CSF)在相对低的pH约1进行。

34、根据权利要求31或32的合成方法，其中氯化物盐生成(CSF)在相对冷的温度20至30℃进行。

35、根据权利要求31或32的合成方法，其中氯化物盐生成(CSF)在相对冷的温度约25℃进行。

36、根据权利要求30的合成方法，其中所述氯化物是氯化钠。

37、根据权利要求30至36任意一项的合成方法，进一步包括在所述氯化物盐生成(CSF)步骤之后的如下附加步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用硫化物处理。

38、根据权利要求37的合成方法，其中所述硫化物是金属硫化物。

39、根据权利要求38的合成方法，其中所述硫化物是硫化钠。

40、根据权利要求37至39任意一项的合成方法，其中硫化物处理(ST)在5至15℃的温度进行。

41、根据权利要求37至39任意一项的合成方法，其中硫化物处理(ST)在约10℃的温度进行。

42、根据权利要求37至41任意一项的合成方法，其中硫化物处理(ST)在pH9至12进行。

43、根据权利要求37至41任意一项的合成方法，其中硫化物处理(ST)在pH约10.5进行。

44、根据权利要求37至43任意一项的合成方法，其中所述硫化物处理是用硫化物和氯化物处理。

45、根据权利要求44的合成方法，其中所述氯化物是氯化钠。

46、根据权利要求37至43任意一项的合成方法，其中所述硫化物处理是用硫化物处理，继之以用有机溶剂洗涤。

47、根据权利要求37至43任意一项的合成方法，其中所述硫化物处理是用硫化物处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以用氯化物处理。

48、根据权利要求37至43任意一项的合成方法，其中所述硫化物处理是用硫化物处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以调节pH至约4.5至约5.5，继之以用氯化物处理。

49、根据权利要求46、47或48的合成方法，其中所述有机溶剂选自：二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、乙酸乙酯、二乙醚、氯苯、石油醚(例如40:60)、苯、甲苯和乙酸甲酯。

50、根据权利要求30至36任意一项的合成方法，进一步包括在所述氯化物盐生成(CSF)步骤之后的如下附加步骤：

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理。

51、根据权利要求50的合成方法，其中所述二甲基二硫代氨基甲酸盐是二甲基二硫代氨基甲酸钠。

52、根据权利要求50或51的合成方法，其中所述二甲基二硫代氨基甲酸盐处理是用二甲基二硫代氨基甲酸盐和氯化物处理。

53、根据权利要求52的合成方法，其中所述氯化物是氯化钠。

54、根据权利要求50至53任意一项的合成方法，其中所述二甲基二硫代氨基甲酸盐处理是用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理，继之以用有机溶剂洗涤。

55、根据权利要求50至53任意一项的合成方法，其中所述二甲基二硫代氨基甲酸盐处理是用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以用氯化物处理。

56、根据权利要求50至53任意一项的合成方法，其中所述二甲基二硫代氨基甲酸盐处理是用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以调节pH至约4.5至约5.5，继之以用氯化物处理。

57、根据权利要求54、55或56的合成方法，其中所述有机溶剂选自：二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、乙酸乙酯、二乙醚、氯苯、石油醚(例如40:60)、苯、甲苯和乙酸甲酯。

58、根据权利要求30至36任意一项的合成方法，进一步包括在所述氯化物盐生成(CSF)步骤之后的如下附加步骤：

碳酸盐处理(CT)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用碳酸盐处理。

59、根据权利要求58的合成方法，其中所述碳酸盐是碳酸钠。

60、根据权利要求58或59的合成方法，其中所述碳酸盐处理是用碳酸盐和氯化物处理。

61、根据权利要求60的合成方法，其中所述氯化物是氯化钠。

62、根据权利要求58至61任意一项的合成方法，其中所述碳酸盐处理是用碳酸盐处理，继之以用有机溶剂洗涤。

63、根据权利要求58至61任意一项的合成方法，其中所述碳酸盐处理是用碳酸盐处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以用氯化物处理。

64、根据权利要求58至61任意一项的合成方法，其中所述碳酸盐处理是用碳酸盐处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以调节pH至约4.5至约5.5，继之以用氯化物处理。

65、根据权利要求62、63或64的合成方法，其中所述有机溶剂选自：二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、乙酸乙酯、二乙醚、氯苯、石油醚(例如40:60)、苯、甲苯和乙酸甲酯。

66、根据权利要求30至36任意一项的合成方法，进一步包括在所述氯化物盐生成(CSF)步骤之后的如下附加步骤：

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理。

67、根据权利要求66的合成方法，其中所述EDTA或EDTA盐是EDTA二钠盐。

68、根据权利要求66或67的合成方法，其中所述EDTA或EDTA盐处理是用EDTA或EDTA盐和氯化物处理。

69、根据权利要求68的合成方法，其中所述氯化物是氯化钠。

70、根据权利要求66至69任意一项的合成方法，其中所述EDTA或EDTA盐处理是用EDTA或EDTA盐处理，继之以用有机溶剂洗涤。

71、根据权利要求66至69任意一项的合成方法，其中所述EDTA或EDTA盐处理是用EDTA或EDTA盐处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以用氯化物处理。

72、根据权利要求66至69任意一项的合成方法，其中所述EDTA或EDTA盐处理是用EDTA或EDTA盐处理，继之以用有机溶剂洗涤，继之以调节pH至约4.5至约5.5，继之以用氯化物处理。

73、根据权利要求70、71或72的合成方法，其中所述有机溶剂选自：二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、乙酸乙酯、二乙醚、氯苯、石油醚(例如40:60)、苯、甲苯和乙酸甲酯。

74、根据权利要求30至73任意一项的合成方法，进一步包括如下后续附加步骤：

有机萃取(OE)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

75、根据权利要求74的合成方法，其中所述有机溶剂是二氯甲烷(CH₂Cl₂，DCM)。

76、根据权利要求74或75的合成方法，其中氯化物盐8的水溶液或悬液与有机溶剂的体积比为0.5至5。

77、根据权利要求74至76任意一项的合成方法，其中用有机溶剂处理是用多份有机溶剂等分试样反复进行。

78、根据权利要求74至77任意一项的合成方法，其中盐8的水溶液或悬液的pH为9至12。

79、根据权利要求74至78任意一项的合成方法，其中用有机溶剂处理在5至15℃的温度进行。

80、根据权利要求30至79任意一项的合成方法，进一步包括如下附加最终步骤：

重结晶(RX)，其中使所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8重结晶。

81、根据权利要求80的合成方法，其中所述重结晶在相对冷的温度2至40℃、通过调节pH至相对低的pH-1至3从水中重结晶。

82、根据权利要求81的合成方法，其中该相对冷的温度为10至30℃。

83、根据权利要求81的合成方法，其中该相对冷的温度为约25℃。

84、根据权利要求81至83任意一项的合成方法，其中该相对低的pH为0至2。

85、根据权利要求81至83任意一项的合成方法，其中该相对低的pH为约1。

86、根据权利要求81至85任意一项的合成方法，其中历经5至30分钟调节pH。

87、根据权利要求81至85任意一项的合成方法，其中历经约10分钟调节pH。

88、根据权利要求80的合成方法，其中所述重结晶在初始升高的温度、在氯化物存在下从水中重结晶。

89、根据权利要求80的合成方法，其中所述重结晶在升高的温度、在四氢呋喃(THF)存在下从水中重结晶。

90、合成方法，包括如下顺序的步骤：

亚硝基化(NOS)，其中N，N-二取代的-3-可选被取代的苯胺1被4-亚硝基化，得到所述N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺2：

亚硝酰还原(NR)，其中还原N，N-二取代的-3-可选被取代的-4-亚硝酰基苯胺2，生成所述N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯3：

硫代磺酸生成(TSAF)，其中在硫代硫酸盐存在下氧化N，N-二取代的-1，4-二氨基-5-可选被取代的苯3，得到所述硫代硫酸S-{2-(氨基)-3-(可选被取代的)-5-(二取代的氨基)-苯基}酯4：

氧化性偶联(OC)，其中使用是或者包含Cr(VI)的氧化剂将硫代硫酸S-{2-(氨基)-3-(可选被取代的)-5-(二取代的氨基)-苯基}酯4与N，N-二取代的-3-可选被取代的-苯胺5氧化性偶联，得到[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6：

Cr(VI)还原(CR)，其中处理氧化性偶联(OC)步骤的产物，以转化残留Cr(VI)为Cr(III)；

两性离子中间体的分离和纯化(IAPOZI)，其中分离和纯化所述[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6；

环闭合(RC)，其中使所述经过分离和纯化的[4-{2-(硫代硫酸盐)-4-(二取代的氨基)-6-(可选被取代的)-苯基-亚氨基}-3-(可选被取代的)-亚环己-2，5-二烯基]-N，N-二取代的铵6进行环闭合，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7：

氯化物盐生成(CSF)，其中所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_盐7与氯化物反应，得到3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8：

硫化物处理(ST)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8用硫化物处理；

有机萃取(OE)，其中将所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)；

重结晶(RX)，其中使所述3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8重结晶；

其中：

每个R¹和R⁹独立地选自-H、C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；

每个R^3NA和R^3NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；

每个R^7NA和R^7NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；且X是一个或多个阴离子抗衡离子以达到电中性。

91、根据权利要求90的合成方法，其中所述有机溶剂是二氯甲烷(CH₂Cl₂，DCM)。

92、根据权利要求90或91的合成方法，其中所述重结晶在相对冷的温度10至30℃、通过调节pH至相对低的pH0至2从水中重结晶。

93、根据权利要求80至93任意一项的合成方法，其中所述重结晶包括随后干燥经过重结晶的沉淀。

94、纯化3，7-双(二取代的-氨基)-1，9-(可选被取代的)-吩噻嗪-5-_氯化物盐8的方法，包括选自如下顺序的一个或多个步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)；

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理；

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)；和

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

95、根据权利要求94的纯化方法，包括如下步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理。

96、根据权利要求94的纯化方法，包括如下步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理。

97、根据权利要求94的纯化方法，包括如下步骤：

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

98、根据权利要求94的纯化方法，包括如下步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

99、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

100、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

101、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理；和

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

102、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；和

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

103、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)；和

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

104、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理；

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)；和

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

105、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)；和

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶。

106、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；和

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理。

107、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；和

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理。

108、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

109、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

110、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

111、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

选自如下的处理步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

二甲基二硫代氨基甲酸盐处理(DT)，其中将所述氯化物盐8用二甲基二硫代氨基甲酸盐处理；

碳酸盐处理(CT)，其中将所述氯化物盐8用碳酸盐处理；和

乙二胺四乙酸处理(EDTAT)，其中将所述氯化物盐8用乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA盐处理；

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

112、根据权利要求94的纯化方法，包括如下顺序的步骤：

硫化物处理(ST)，其中将所述氯化物盐8用硫化物处理；

重结晶(RX)，其中使所述氯化物盐8重结晶；和

有机萃取(OE)，其中将所述氯化物盐8的水溶液或悬液用有机溶剂处理(例如洗涤)。

113、根据权利要求94至112任意一项的纯化方法，其中所述有机溶剂如果存在的话是二氯甲烷(DCM，CH₂Cl₂)。

114、根据权利要求94至113任意一项的纯化方法，其中所述重结晶是在相对冷的温度2至40℃、通过调节pH至相对低的pH-1至3从水中重结晶。

115、根据权利要求114的纯化方法，其中相对冷的温度为10至30℃。

116、根据权利要求114的纯化方法，其中相对冷的温度为约251℃。

117、根据权利要求114至116任意一项的纯化方法，其中相对低的pH为0至2。

118、根据权利要求114至116任意一项的纯化方法，其中相对低的pH为约1。

119、根据权利要求114至118任意一项的纯化方法，其中历经5至30分钟调节pH。

120、根据权利要求114至118任意一项的纯化方法，其中历经约10分钟调节pH。

121、根据权利要求94至120任意一项的纯化方法，其中所述氯化物盐8是MTC。

122、根据权利要求94至120任意一项的纯化方法，其中所述氯化物盐8是最初作为Medex^TM提供的MTC。

123、根据权利要求94至120任意一项的纯化方法，其中所述氯化物盐8是最初作为Urolene Blue_提供的MTC。

124、根据权利要求94至120任意一项的纯化方法，其中所述氯化物盐8是最初作为根据权利要求1至93任意一项的合成方法的产物提供的MTC。

125、下式的二氨基吩噻嗪鎓化合物

其中：

每个R¹和R⁹独立地选自-H、C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；

每个R^3NA和R^3NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；

每个R^7NA和R^7NB独立地选自C_1-4烷基、C_2-4链烯基和卤代C_1-4烷基；和

X是一个或多个阴离子抗衡离子以获得电中性；

通过根据权利要求1至93任意一项的合成方法获得；或

通过根据权利要求94至124任意一项的纯化方法获得。

126、下式的二氨基吩噻嗪鎓化合物(MTC)，通过根据权利要求1至93任意一项的合成方法获得，或通过根据权利要求94至124任意一项的纯化方法获得：

127.根据权利要求125或126的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有大于98％的纯度。

128、根据权利要求125或126的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有大于97％的纯度。

129、根据权利要求125或126的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有大于96％的纯度。

130、根据权利要求125或126的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有大于95％的纯度。

131、根据权利要求125至130任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有低于2％的天青B杂质。

132、根据权利要求125至130任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有低于3％的天青B杂质。

133、根据权利要求125至130任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有低于4％的天青B杂质。

134、根据权利要求125至133任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有低于0.13％的MBV杂质。

135、根据权利要求125至133任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有低于0.14％的MBV杂质。

136、根据权利要求125至133任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有低于0.15％的MBV杂质。

137、根据权利要求125至136任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有好于欧洲药典(EP)限度的元素纯度。

138、根据权利要求125至136任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，具有好于欧洲药典(EP)限度0.5倍的元素纯度。

139、药物片剂或胶囊，包含20至300mg根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，以及药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

140、药物片剂或胶囊，包含30至200mg根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，以及药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

141、根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，用于治疗人或动物体的方法中。

142、根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，用于治疗人或动物体的病毒、细菌或原生动物疾病的方法中。

143、根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，用于治疗人或动物体的τ蛋白病、阿尔茨海默氏病(AD)、皮肤癌症、黑素瘤、丙型肝炎、HIV或西罗尼病毒的方法中。

144、根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物在制备用于治疗病毒、细菌或原生动物疾病的药物中的用途。

145、根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物在制备用于治疗τ蛋白病、阿尔茨海默氏病(AD)、皮肤癌症、黑素瘤、丙型肝炎、HIV或西罗尼病毒的药物中的用途。

146、治疗病毒、细菌或原生动物疾病的方法，包括对所述患者给予治疗有效量的根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物。

147、治疗患者的τ蛋白病、阿尔茨海默氏病(AD)、皮肤癌症、黑素瘤、丙型肝炎、HIV或西罗尼病毒的方法，包括对所述患者给予治疗有效量的根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物。

148、灭活样品中病原体的方法，包括向样品中引入根据权利要求125至138任意一项的二氨基吩噻嗪鎓化合物，并使样品暴露于光。

149、根据权利要求148的方法，其中的样品是血液或血浆样品。