CN101052874B - 用于分析液体样品的多层分析元件 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题是提供一种用于分析液体样品的多层分析元件，该多层分析元件在保持基本性能(例如灵敏性和储存性能)的同时，即使在加工时受到操作处理，在透明支持体和检测层之间也具有得到增强的粘合力。所述的用于分析液体样品的多层分析元件的特征在于，在透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠至少以下各层：检测层，该层含有在气态物质的作用下会发生可检测的变化的物质；液体阻隔层，该层选择性地使所述的气态物质透过；以及铺展层；并且所述的检测层包含粘合性聚合物以及非水溶性乙烯基聚合物。

Description

用于分析液体样品的多层分析元件
技术领域
本发明涉及用于分析液体样品的多层分析元件。更具体地说，本发明涉及用于分析液体样品(例如血和尿)中的氨或成氨物质(例如肌酸和尿素)的液体样品分析用多层分析元件。
背景技术
为了简化和加速检测过程、并消除检测者之间的个体差异，迄今为止，人们已经提出了种种被称为干法(干式化学法)的方法作为检测体液中所含脲氮的方法。通常的方法是使用一种整体式多层分析元件，该多层分析元件具有：试剂层，其包含尿素酶和碱性缓冲液；指示剂层，用于检测气态氨；以及被夹在上述两层之间的选择透过性层，用于只让气态氨选择性地透过。例如，专利文献(JP-A-52-3488)公开了一种基本具有上述多层结构的整体式分析元件。该分析元件采用疏水性聚合物薄膜作为对氨气的选择透过性层。
专利文献2(JP-A-58-77661)公开了一种用于分析液体样品中的氨或成氨底物的整体式多层分析材料，该多层分析材料具有透明支持体，在该透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠以下各层：气态氨指示剂层；液体阻隔层；试剂层，其包含碱性缓冲液、和可以通过与底物发生反应而生成氨的试剂(如果需要的话)；以及铺展层；该多层分析材料的特征在于，所述的液体阻隔层含有多孔物质，该多孔物质在使用条件下构成基本阻隔液体样品并使气态氨透过的气孔。针对这种多层分析材料，公开了一种整体式多层分析元件，该整体式多层分析元件采用过滤膜作为选择透过性层，从而增强对指示剂层的粘合作用并且提高检测灵敏性。
此外，专利文献3(JP-A-4-157363)公开了这样一种用于分析氨或成氨物质的整体式多层分析元件，通过在支持体的底涂层中采用基本不含氨或铵离子的聚乙烯基烷基醚、或者在指示剂层的粘结剂中采用聚乙烯基烷基醚，从而进一步使显色光密度增强而背景的显色光密度减弱，由此进一步提高检测精度。此外，专利文献4(JP-A-4-157364)公开了这样一种用于分析氨或成氨物质的整体式多层分析元件，在该分析元件中，通过使多孔铺展层包含聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、使成氨反应试剂层基本不含氨、以及采用在pH约9.0或更高时不产生氨并且其粘合性也不会改变的粘合剂，从而进一步使显色光密度增强而背景的显色光密度减弱，由此进一步提高检测精度。此外，专利文献5(JP-A-2002-122585)公开了这样一种用于分析液体样品中的氨或成氨物质的整体式多层分析元件，该多层分析元件具有透明支持体，在该透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠以下各层：指示剂层，其包含在气态氨的作用下会发生可检测的变化的试剂；液体阻隔层，用于使气态氨透过；试剂层，其包含碱性缓冲液、和可以通过与底物发生反应而生成氨的试剂(如果需要的话)；以及铺展层；该多层分析元件的特征在于，所述的液体阻隔层具有至少两层多孔膜。
专利文献1：JP-A-52-3488
专利文献2：JP-A-58-77661
专利文献3：JP-A-4-157363
专利文献4：JP-A-4-157364
专利文献5：JP-A-2002-122585
发明内容
本发明要解决的课题
如上所述，在(例如)专利文献2到5中公开的、用于分析氨或成氨物质的整体式多层分析元件的特征在于，在该分析元件的透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠以下各层：指示剂层(检测层)，其包含在气态氨的作用下会发生可检测的变化的试剂；液体阻隔层，其使气态氨透过；成氨反应试剂层；以及铺展层；如果需要的话，还可在铺展层上层叠含乙烯基聚合物的覆盖层。另外，特别是在用于肌酸检测的整体式多层分析元件中，还存在着在成氨反应试剂层和铺展层之间进一步层叠氨扩散防止层和内源氨捕捉层的情况。
然而，随着上述各层的重复层叠，包含于检测层内的成分会渗漏到液体阻隔层(该层为多孔层)中，并且使透明支持体和检测层之间的粘合力降低，从而使得在加工时出现因操作处理而发生剥离的情况，由此导致生产率不能提高的问题。
因此，本发明的目的是提供这样一种用于分析液体样品的多层分析元件，该多层分析元件在保持基本性能(例如灵敏性和储存性能)的同时，即使在加工时受到操作处理，在透明支持体和检测层之间也具有得到增强的粘合力。
可通过以下手段解决上述问题。
1)一种用于分析液体样品的多层分析元件，该多层分析元件具有透明支持体，在该透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠至少以下各层：检测层，该层含有在气态物质的作用下会发生可检测的变化的物质；液体阻隔层，该层选择性地使所述的气态物质透过；以及铺展层；
其中所述的检测层包含粘合性聚合物以及非水溶性乙烯基聚合物。
2)根据上述1)所述的用于分析液体样品的多层分析元件，
其中所述的非水溶性乙烯基聚合物具有缩醛基。
3.根据上述1)或2)所述的用于分析液体样品的多层分析元件，
其中所述的非水溶性乙烯基聚合物是聚乙烯醇缩丁醛。
本发明的优点
根据本发明，因为检测层含有特定的聚合物，所以可提供这样一种用于分析液体样品的多层分析元件，该多层分析元件在保持基本性能(例如灵敏性和储存性能)的同时，即使在加工时受到操作处理，在透明支持体和检测层之间也具有得到增强的粘合力。
本发明的最佳实施方式
本发明的用于分析液体样品的多层分析元件的特征在于，检测层(该检测层含有在气态物质的作用下会发生可检测的变化的物质)包含粘合性聚合物和非水溶性乙烯基聚合物。
本说明书中所述的在气态物质的作用下会发生可检测的变化的物质是指这样一种物质，该物质与气态物质发生反应和/或发生相互作用会导致其自身的结构发生变化、并且由于这种结构变化而使其光谱特征(例如吸收波长)发生变化。本文使用的术语“结构变化”包括诸如原子组成变化、键合关系(例如共价键和氢键)变化和空间结构变化之类的结构变化。
当本发明的用于分析液体样品的多层分析元件具有这样一种结构，即，所述的多层分析元件具有透明支持体，在该透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠至少以下各层：检测层、液体阻隔层和铺展层，就可在选自以下位置中的一个或多个位置处再设置至少一层，所述位置位于：透明支持体和检测层之间、检测层和液体阻隔层之间、液体阻隔层和铺展层之间、以及铺展层之上。
本发明的用于分析液体样品的多层分析元件在其检测层中含有粘合性聚合物。该粘合性聚合物是一种有助于粘合位于透明支持体和检测层之间以及位于检测层和液体阻隔层之间的各个界面的聚合物。
将Tg为0℃或更低(更优选为-150到-5℃、特别优选为-100到-10℃)的粘合性聚合物用于本发明是优选的。此外，质量平均分子量为10,000到1,000,000(更优选为10,000到500,000、特别优选为20,000到200,000)的粘合性聚合物是优选的。
所述的粘合性聚合物的实例包括聚乙烯基烷基醚(例如聚乙烯甲醚、聚乙烯乙醚和聚乙烯异丁醚)、天然橡胶、氯丁橡胶、丁苯橡胶、主要含有脂肪醇(具有2到16个碳原子)丙烯酸酯的并由该丙烯酸酯与少量的具有极性基团的单体(例如丙烯酸和丙烯酰胺)共聚而得到的聚合物、通过混合硅橡胶和硅树脂而形成的有机硅压敏粘合剂、主要含有苯乙烯-异戊二烯-苯乙烯嵌段共聚物的压敏粘合剂、松香树脂、萜烯树脂、氢化石油树脂、聚异丁烯、聚茚树脂、达玛树脂、珂巴树脂(コ一パル)、香豆酮树脂、皮可帕勒(ピコペ一ル)、醇酸树脂、纤维素酯和氯丁二烯橡胶。其中，聚乙烯基烷基醚为优选。
粘合性聚合物的添加量为检测层中指示剂量的1到500倍、优选为3到300倍、更优选为5到100倍。
包含于检测层中的非水溶性乙烯基聚合物必须不溶于水，但优选的是，该非水溶性乙烯基聚合物可溶解在用于形成检测层的涂布溶剂中，并且更优选的是，该非水溶性乙烯基聚合物与其它可一起使用的聚合物具有相容性。在本发明的说明书中，术语“非水溶性或不溶于水”是指在100g 20℃的水中溶解度为1g或更低。检测层的涂布溶剂通常是有机溶剂、或者是有机溶剂和水形成的混合溶剂。非水溶性乙烯基聚合物优选为可溶于醇，特别优选为可溶于乙醇。
此外，Tg为10℃或更高(更优选为20到150℃、特别优选为30到120℃)的非水溶性乙烯基聚合物是优选的。此外，平均聚合度为30到5,000(更优选为50到3,000、特别优选为100到2,500)的非水溶性乙烯基聚合物是优选的。
具有缩醛基的非水溶性乙烯基聚合物是优选的。缩醛基的实例包括缩丁醛基、缩乙醛基和缩甲醛基。
综上所述，适用于本发明的非水溶性聚合物是由下式(1)表示的共聚物。该共聚物包含重复单元x、y和z，并且y具有缩醛基。
式(1)：
在式(1)中，x、y和z表示相应各重复单元的摩尔比，均为大于或等于0的整数，并且x∶y∶z优选为(20到70)∶(20到90)∶(1到10)、更优选为(30到60)∶(30到80)∶(1到5)。R表示烷基。R可以是直链或支链，并且优选为具有1到5个碳原子的直链烷基。
此外，本发明特别优选的是，非水溶性乙烯基聚合物为聚乙烯醇缩丁醛。本发明使用的聚乙烯醇缩丁醛是指在上述式(1)中，y单元中的R为丙基，并且y单元占20摩尔％或更多。
非水溶性乙烯基聚合物的添加量占粘合性聚合物量的1质量％到50质量％、优选为1质量％到30质量％、更优选为1质量％到20质量％。
以下参照各个构成元件来说明本发明用于分析液体样品的多层分析元件的优选实施方式。在以下说明中，采用以气态氨作为气态物质的情况作为实例，并进行说明。
(透明支持体)
采用通常用于这种分析元件中的疏水性透明支持体(例如含有诸如聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯或聚乙烯基化合物之类的聚合物的透明支持体)作为本发明的透明支持体。该透明支持体的厚度为约50到1,000μm，通常为约80到300μm。
(检测层)
检测层至少包含粘合性聚合物、非水溶性乙烯基聚合物、以及在气态物质氨的作用下会发生可检测的变化的物质。
作为在气态物质的作用下会发生可检测的变化的物质，优选的是，例如，其吸收波长通过与气态氨发生反应而发生变化的化合物(下文称为发色前体)。可用于本发明分析元件的发色前体的实例包括：诸如无色菁染料、硝基取代的无色染料、以及无色酞染料之类的无色染料(参见专利文献JP-A-52-3488和美国专利RE 30 267)；诸如溴酚蓝、溴甲酚绿、溴百里酚蓝、喹啉蓝和玫红酸之类的pH指示剂(参见化学大辞典，第10卷，第63-65页，由共立出版株式会社出版)；三芳基甲烷染料前体；无色亚苄基染料(参见专利文献JP-A-56-145273)；重氮盐和偶氮染料偶联剂；以及碱性可漂白染料。
当把这些发色前体中的至少一种与粘合性聚合物和非水溶性乙烯基聚合物混合、并将所得到的混合物施加到透明支持体上时，可形成检测层。此外，不同于上文所述聚合物的其它多种聚合物也可共同用作粘结剂聚合物。所使用的其它粘结剂聚合物为：诸如酸处理明胶、碱处理明胶和去离子明胶之类的明胶；诸如乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素和乙酸丙酸纤维素之类的纤维素酯；诸如甲基纤维素、乙基纤维素和丙基纤维素之类的烷基纤维素；等等。
发色前体的用量占粘合性聚合物、非水溶性乙烯基聚合物和其它粘结剂聚合物(下文有时简称为粘结剂聚合物)的质量的约0.1质量％到50质量％(优选约0.5质量％到20质量％)是合适的。此外，为了控制灵敏性，可加入各种缓冲液、有机酸和无机酸等以便调节pH。缓冲液可选自下文所述的材料，而作为有机酸和无机酸，则可使用乙磺酸、天冬氨酸、壬二酸、戊二酸、琥珀酸、戊烯二酸、酒石酸、庚二酸、丙二酸、苹果酸、3，3-二甲基戊二酸、柠檬酸、对甲苯磺酸、高氯酸、盐酸等。此外，可向检测层中加入诸如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸氢钠之类的碱。合适的用于形成涂布液的溶剂为：有机溶剂，例如丙酮、2-甲氧基乙醇、甲乙酮或乙醇；水；或由这些化合物形成的混合溶剂。将发色前体和粘结剂聚合物等加入到这些溶剂中，使得固体浓度为约1质量％到30质量％、优选为约3质量％到20质量％，由此形成涂布液。将该涂布液以使得其干态厚度为约1到30μm、优选为2到20μm的量施加到透明支持体上，然后进行干燥，从而形成检测层。
在检测层上布置液体阻隔层。优选的是，液体阻隔层由具有贯通气孔的微孔物质构成，从而使得在制造多层分析元件时和/或在进行分析操作时，诸如涂布液和样品液之类的液体、以及溶解于和含于这些液体中的干扰成分(例如碱性成分)基本不会透过，而诸如气态氨之类的气态物质可选择性地透过。
本发明的液体阻隔层具有一层或两层或多层多孔膜。在具有两层或多层多孔膜的情况下，优选的是，与下文所述的试剂层接触的最上层多孔膜的孔径等于或小于位于该最上层多孔膜紧下方的多孔膜的孔径。具体而言，最上层多孔膜的孔径为0.01到1μm、优选为0.04到0.2μm，而位于其紧下方的多孔膜的孔径为0.2到20μm、优选为0.5到10μm，并且最上层多孔膜的平均孔径与位于其紧下方的多孔膜的孔径之比为0.001到1.0、优选为0.01到0.5。除非另作说明，否则本说明书中的孔径都是指平均孔径。对多孔膜的材料没有特别限定，但可举例为聚乙烯、聚丙烯、含氟聚合物(例如聚四氟乙烯)、乙酸纤维素、聚砜、聚酰胺(尼龙)、或其混合物。聚乙烯多孔膜和聚丙烯多孔膜的组合是优选的。各多孔膜的厚度为3到40μm、优选为5到20μm。将两层或多层(通常为2到3层)所述的膜结合起来从而形成液体阻隔层。合适的方式是，液体阻隔层整体的孔隙率为25％到90％、优选为35％到90％，并且其整体的厚度为10μm到50μm、优选为10μm到30μm。
以实用的强度将液体阻隔层粘合在检测层上。按以下方法实施粘合操作：使检测层的表面处于润湿状态，将液体阻隔层粘合在其上，并且进行干燥。术语“润湿状态”是指残留有用于溶解粘结剂的溶剂、或者使用可溶性溶剂将干燥的膜润湿，从而使粘结剂处于溶胀状态、分散状态或溶液状态。
采用诸如使用热压粘合剂或热熔粘合剂以点对点的接触状态进行粘合的物理方法和/或化学方法将多孔膜彼此粘合。可以将这些多孔膜依次层叠到检测层上，或者可以将各多孔层彼此层叠、然后将所得的叠层粘合到检测层上。
可在液体阻隔层上布置试剂层。该试剂层是通常含有以下物质的层，所述物质(例如)为：与成氨物质反应而形成氨的试剂(通常是酶或者是含有酶的试剂)、有效地使反应生成的氨作为气态氨释放的碱性缓冲液、以及具有成膜能力的亲水性聚合物粘结剂。成氨底物和试剂的组合的实例包括：尿素/脲酶、肌酸/肌酸脱亚胺酶、氨基酸/氨基酸脱氢酶、氨基酸/氨基酸氧化酶、氨基酸/氨基酸脱水酶、氨基酸/脱氨酶、胺/胺氧化酶、二胺/胺氧化酶、葡糖和氨基磷酸酯/氨基磷酸酯己糖磷酸转移酶(燐アミダ一トヘキソ一ス膦トランスフエラ一ゼ)、ADP/氨基甲酸激酶和氨基甲酰磷酸、酰胺/酰胺水解酶、核酸碱基/脱氨酶、核苷/脱氨酶、核苷酸/脱氨酶、以及鸟嘌呤/鸟嘌呤脱氨酶。
可用于试剂层中的碱性缓冲液是pH为7.0到10.5、优选为7.5到10.0的缓冲液。缓冲液的实例包括Good’s缓冲液(例如乙二胺四乙酸(EDTA)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸缓冲液、N，N-二(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-羟基丙-3-磺酸(HEPPSO)、和N-羟乙基哌嗪-N’-乙磺酸(HEPES))和硼酸缓冲液。
可用于试剂层中的具有成膜能力的亲水性聚合物粘结剂的实例包括明胶、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
除了与成氨物质反应而生成氨的试剂、有效地使反应生成的氨作为气态氨释放的碱性缓冲液、以及具有成膜能力的亲水性聚合物粘结剂以外，根据需要，试剂层还可包含润湿剂、粘结剂的交联剂(固化剂)、稳定剂、和重金属离子捕获剂(络合剂)等。
通过把与成氨底物反应而生成氨的试剂、有效地使反应生成的氨作为气态氨释放的碱性缓冲液、以及上述根据需要而加入的试剂这三者与具有成膜能力的亲水性聚合物粘结剂(例如明胶)混合，而制成涂布液，再将涂布液施加到液体阻隔层上，然后进行干燥，即可形成试剂层。
合适的方式是，试剂层所包含的可与成氨底物发生反应而生成氨的试剂的量通常为粘结剂质量的约0.1质量％到约50质量％、优选为约0.2质量％到约20质量％。碱性缓冲液的量为粘结剂质量的约0.1质量％到约60质量％是合适的。试剂层的干态膜厚通常为约1到约40μm、优选为约2到约20μm。
在试剂层上布置铺展层。作为铺展层的材料有：在(例如)专利文献JP-A-55-164356(对应于美国专利4,292,272)和JP-A-57-66359(对应于美国专利4,783,315)中描述的纤维质地的微孔铺展层(例如机织物铺展层(例如，诸如细平布和府绸之类的平纹组织织物)，在(例如)专利文献JP-A-60-222769(对应于专利文献EP0162302A)中描述的针织物铺展层(例如，经平组织织物、重经平组织织物和米兰尼斯(ミラニ一ズ)组织织物)，在专利文献JP-A-57-148250中描述的含有有机聚合物纤维的浆粕、经造纸而制成的纸质铺展层，以及在专利文献JP-A-57-125847中描述的通过涂敷含有纤维和亲水性聚合物的分散体而形成的铺展层；在(例如)专利文献JP-B-53-21677(对应于美国专利3,992,158)中描述的诸如膜过滤层(经拉绒的聚合物层)之类的各向同性的非纤维质地的微孔铺展层，含有连续微孔的各向同性微孔铺展层(其中诸如聚合物微珠之类的细颗粒以点对点的接触状态与亲水性聚合物粘结剂粘合)，以及在专利文献JP-A-55-90859(对应于美国专利4,258,001)中描述的由含有连续微孔的各向同性微孔层(三维点阵颗粒状结构层)构成的铺展层(其中，聚合物微珠以点对点的接触状态与没有用水溶胀的聚合物粘合剂粘合)；以及，在(例如)专利文献JP-A-61-4959(对应于美国专利5,019,347)、JP-A-62-138756、JP-A-62-138757和JP-A-62-138758(对应于专利文献EP0226465A)中描述的血细胞分离性能优异的铺展层，其中多个微孔层(例如，由机织物(或针织物)和过滤膜构成的两层；以及由机织物(或针织物)、过滤膜和机织物(或针织物)构成的三层)在各自的表面上由精细的不连续点状或岛状(在印刷区内的网点状)的粘合剂将各层以粘合方式层叠起来。
可通过对铺展层所用的机织物或针织物的至少一个表面进行以辉光放电处理或电晕放电处理为代表的物理活化处理(如专利文献JP-A-57-66359所述)、或者进行诸如水洗脱脂处理或亲水性聚合物浸渍处理之类的亲水化处理(如(例如)专利文献JP-A-55-164356和JP-A-57-66359所述)、或者将这些处理步骤以适当的组合方式连续地实施，从而使其被亲水化，由此增大各层下表面(靠近支持体的那一面)的粘合力。此外，如(例如)专利文献JP-A-59-171864、JP-A-60-222769和JP-A-60-222770中所述，可通过从铺展层的上面那一侧施加含聚合物的水溶液或含聚合物的水/有机溶剂混合溶液，来控制液体样品的铺展面积或液体样品的铺展情况。
此外，当本发明的分析元件用于肌酸测定时，可在试剂层和铺展层之间依次布置氨扩散防止层和内源氨捕捉层。在(例如)专利文献JP-A-4-157364中描述了氨扩散防止层和内源氨捕捉层，并且这些层都是常规的。但是，例如，氨扩散防止层为一种基本上不能进行氨的捕捉和进行成氨反应的层，并且可采用亲水性聚合物(例如羟基丙基纤维素)来制成所述的氨扩散防止层。氨扩散防止层的厚度为(例如)2到50μm。内源氨捕捉层是包含这样一种试剂的层，该试剂会与已经存在于液体样品中的内源氨发生作用、并将该内源氨的存在状态改变为不能实质性地进入试剂层的状态。所述的试剂包括这样一种组合物，该组合物包含具有催化能力的、用于将氨作为底物转化成其它物质的酶。所述组合物的具体实例是其中含有作为粘结剂聚合物的亲水性聚合物(例如羟乙基纤维素)、以及α-酮戊二酸、NADPH和谷氨酸脱氢酶的组合物。内源氨捕捉层的厚度为(例如)1到30μm。
此外，在试剂层和铺展层之间可布置遮色层和反光层。遮色层或反光层是这样一种层，其中具有遮光性和反光性的白色细颗粒(例如二氧化钛细颗粒和硫酸钡细颗粒)以几乎均匀一致的方式分散在亲水性聚合物粘结剂(例如明胶)中，并且该层的干态厚度为约2μm到约20μm。
此外，为了形成牢固的粘合作用并保持整体性，可在试剂层、氨扩散防止层、内源氨捕捉层、遮色层或反光层之上布置含有亲水性聚合物的常规粘合剂层。该粘合剂层的干态厚度为约0.5μm到约5μm。
在试剂层、氨扩散防止层、内源氨捕捉层、遮色层或反光层、粘合剂层、铺展层等中可含有表面活性剂。表面活性剂的实例是非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂的具体实例包括对辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、对壬基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚氧乙烯油酰基醚、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、对壬基苯氧基聚缩水甘油和辛基葡萄糖苷。通过将非离子型表面活性剂引入铺展层中，会使得水性液体样品的铺展作用(配量作用)变得更好。通过将非离子型表面活性剂引入试剂层、氨扩散防止层、内源氨捕捉层、遮色层或反光层、粘合剂层等中，会使得水性液体样品中的水在分析操作时易于被基本均匀地吸附在试剂层中，此外，液体与铺展层的接触会加快并且变得基本均匀一致。
为了使用本发明的分析元件检测液体样品中的(例如)氨或成氨底物，将3到30μL、优选为6到15μL的全血、血浆、血清、尿等水性液体样品液滴滴加到铺展层上，在基本恒定的温度条件(约20到40℃)下温育1到10分钟，通过在透明支持体那一侧进行反射光测定、或者与标准颜色进行视觉对比来检测检测层的变色程度(显色或褪色)。
实施例
通过实施例和对比例来进一步描述本发明，但是本发明不限于下述的例子。
[实施例1]
使用乙醇溶液以下述的覆盖量将检测层施加到厚度为180μm的透明的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜上，并进行干燥。
检测层
溴酚蓝            110mg/m2
聚乙烯甲醚        1.8g/m2，质量平均分子量：约40,000
聚乙烯醇缩丁醛    0.18g/m2，平均聚合度：约300
氢氧化钠          6.8mg/m2
接着，把由聚乙烯制成的过滤膜(其平均孔径为0.2μm，孔隙率为75％，厚度为100μm)均匀地压合到检测层上，以提供液体阻隔层。使用水溶液以下述的覆盖量将试剂层施加到液体阻隔层上，并进行干燥。
试剂层(pH9.0)
羟乙基纤维素     3.0g/m2
平均分子量：     约40,000
羟乙基平均取代度：DS＝1.0到1.3
摩尔数平均值：MS＝1.8到2.5
硼砂              1g/m2
肌酸亚氨基水解酶  1,800U/m2
(EC 3.5.4.21)
此外，以下述的覆盖量将氨扩散防止层施加到试剂层上，并进行干燥。
氨扩散防止层
羟基丙基纤维素   20.0g/m2
含甲氧基：       28％到30％
含羟基丙氧基：   7％到12％
2％水溶液在20℃下的粘度为0.05Pa.s(50cps)
此外，以下述的覆盖量将内源氨捕捉层施加到氨扩散防止层上，并进行干燥。
内源氨捕捉层(pH 8.2)
羟乙基纤维素    5g/m2
两性电解质      1.2g/m2
α-酮戊二酸     1.2g/m2
NADPH           0.4g/m2
谷氨酸脱氢酶    1,000U/m2
(EC 1.4.1.4)
使用0.2％的对壬基苯氧基聚缩水甘油水溶液以几乎均匀的方式润湿上述的内源氨捕捉层，并立即将聚酯针织物(机号为40)均匀地压合于其上。此外，为了改善铺展性能，使聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液作为浸渍溶液，将其以如下的覆盖量施加到上述叠层上，并进行干燥，然后将得到的叠层切割成12mm宽，从而制成用于肌酸定量检测的整体式多层分析元件。
聚乙烯吡咯烷酮  7.5g/m2，平均分子量：约1,200,000
[对比例1]
以与实施例1相同的方式制备用于肌酸定量检测的整体式多层分析元件，不同之处在于检测层不使用聚乙烯醇缩丁醛。
对上述得到的用于肌酸定量检测的整体式多层分析元件的透明PET膜支持体和检测层之间的剥离力进行检测。该剥离力是通过以下方法检测得到的值。
剥离力的检测方法：采用TENSILON UTM-II-20(オリエンテツク社的产品)作为剥离力检测装置。将样品切割成宽为12mm、长为150mm的条状，使用双面胶粘带将样品的PET膜表面粘贴到安装台上。手动剥开PET膜和检测层之间的界面，把剥开的检测层用夹具固定、并将其与检测装置相连，然后开始检测。将剥离力记录在记录用的图中，可由该图读出剥离力。
此外，同时检测样品的灵敏度和储存性能。
灵敏度的检测方法如下：将10μL含肌酸的溶液(比例为12.7mg/dL)滴加到铺展层上，于5分钟后在650nm的检测波长处测定显色光密度(OD)，结果以相对值示出。
通过在45℃下进行为期4天的加速试验来检测储存性能。评价方式是，A：在±0.5％的范围内；B：超出±0.5％的范围。
结果显示如下。
    剥离力     灵敏度   储存性能
实施例1     218g     104％     A
对比例1     15g     100％     A
结果可见，与不使用非水溶性乙烯基聚合物的常规分析元件(对比例1)相比，实施例1制备的分析元件的剥离力是前者的约15倍，实施例1制备的分析元件的灵敏性没有变差、并且储存稳定性良好。

Claims (2)

1.一种用于分析液体样品的多层分析元件，该多层分析元件具有透明支持体，在该透明支持体上以粘合成整体的方式依次层叠至少以下各层：检测层，该层含有在气态物质的作用下会发生可检测的变化的物质；液体阻隔层，该层选择性地使所述的气态物质透过；以及铺展层；
其中所述的检测层包含作为粘合性聚合物的聚乙烯甲醚以及作为非水溶性乙烯基聚合物的聚乙烯醇缩丁醛，并且所述的非水溶性乙烯基聚合物的添加量为所述粘合性聚合物的量的1质量％到50质量％。
2.根据权利要求1所述的用于分析液体样品的多层分析元件，
其中所述的非水溶性乙烯基聚合物的添加量为所述粘合性聚合物的量的1质量％到30质量％。
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