CN101049504A - 一种脂质体药物载体及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脂质体药物载体，该脂质体的主要成分为聚乙二醇甘油双酯，此外还含有适量的磷酸酯、海藻糖以及抗氧化氨基酸等。本发明还公开了一种脂质体药物载体的制备方法。本发明提供的脂质体是一种能自动形成脂质微球且相当稳定的脂质体，该脂质体同时保留了传统脂质体的优点，即与生物体质膜的基本双分子层膜结构相似，因此有很好的生物兼容性，具有稳定、易生产和高包封率等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种脂质体药物载体，本发明还涉及脂质体药物载体的制备方法。
背景技术
脂质体是利用磷脂双分子层膜所形成的囊泡包裹药物分子而形成的一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将溶液或溶液中的活性物质包埋在直径为纳米级的微粒中。目前，脂质体的主要原料为磷脂，磷脂是构成脂质体的主要化学成分，其中最具有代表性的是卵磷脂。胆固醇也是脂质体另一个重要组成成分，它本身并不形成膜结构，但是能够以1∶1甚至2∶1的摩尔比插入磷脂膜中。加入胆固醇可以改变脂膜的相变温度，从而影响膜的通透性和流动性，增加磷脂膜的稳定性。
磷脂分散在水中时能形成多层微囊，且每层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开，这种微囊就是脂质体。脂质体可分为单室脂质体、多室脂质体，含有表面活性剂的脂质体。
制备脂质体的方法主要是将磷脂或磷脂与胆固醇溶于有机溶剂中配成溶液，然后蒸发除去有机溶剂，在器壁上形成双分子层脂质薄膜，将此薄膜收集并与水溶液搅拌混合形成脂质体。此时的脂质体往往是直径很大的多室脂质体，必须经过处理制成有实用价值的脂质微球。制备脂质微球的方法主要是超声波、超过滤、高压粉碎及机械碾磨。
脂质体的应用十分广泛。磷脂可将各种药物包封成脂质微球(脂质体)，该脂质微球在与人体皮肤接触或进入人体内后，利用其膜与细胞膜结构相似的特征，与细胞膜进行融合或通过细胞内吞作用将药物载送到靶点细胞内。药物通过脂质载体，可以顺利穿过表皮的角质层，为各种外用药及人体护理用品的开发提供了有效的方法。而对口腔及胃部敏感的药物经脂质体的包裹后，可使其免受口腔及胃酶的破坏，使其安全的到达肠道，利用脂质膜与肠壁细胞膜的结构相似性，更有效地将药物导入到细胞内，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。
脂质体作为药物载体的应用虽然具备了许多优点和特点，但就目前来看，也还存在相当的局限性，自从1971年英国科学家莱门等人开始将脂质体用作药物载体以来已三十多年时间，脂质体技术发展缓慢，使用脂质体研制的药品少之又少便是佐证之一。其中主要原因可归纳于以下几方面：
首先，脂质体的制备技术给工业化生产带来了很大难度。生产工艺复杂，对设备的要求高。而且，目前的生产工艺无法控制脂质体的大小和室囊结构，使生产的脂质体大小不均，室囊结构多样不一。
第二，脂质体的稳定性不佳，不能保证药物开发的稳定性要求。脂质体生产过程往往需要加温和改变压力来去除有机溶剂，然后用机械碾磨或超声波等极端手段来制备直径微小的脂质微球，这些极端措施需要或产生高温高压而导致脂质和其封包的药物分解。
第三，脂质体不易被无菌化，特别是大容量脂质体的无菌化更是一大挑战，而无菌化是药物生产的必须途径。无菌化的主要手段包括热消毒、酒精消毒、氧化杀菌、gamma射线消毒和无菌超过滤。这些方法中只有无菌超过滤适合脂质体的无菌化，而脂质体的超过滤已被证明十分困难。
第四，脂质体极易相互吸附聚集并融合。在脂质体的保存过程、或遇到温度变化以及加入不同添加剂或辅料，脂质体都有可能相互吸附聚集并融合，导致脂质体的不稳定。
第五，包封率低。目前以磷脂为主要原料的脂质体对药物的包容率低，特别是对于某些水溶性药物包封率更低，且药物易从脂质体中渗漏。
基于以上原因，开发一种稳定的、易生产的、高包封率的新型脂质体来克服目前现有脂质体的不足是十分必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的、易生产的、高包封率的新型脂质体药物载体。
本发明的另一目的是提供一种工艺简单的脂质体药物载体的制备方法。
为达上述目的，本发明通过采取以下技术方案予以实现：
一种脂质体药物载体，该脂质体的主要成分为聚乙二醇甘油双酯，其分子式为：
其中，R1为饱和或不饱和酰基、R2为饱和或不饱和酰基、R3为(C2H40)n-OH，n＝1-35。
上述方案中，所述的聚乙二醇甘油双酯为聚乙二醇200甘油双酯，聚乙二醇400甘油双酯、聚乙二醇600甘油双酯，聚乙二醇800甘油双酯或聚乙二醇1500甘油双酯。
所述的脂质体的成分中还包括有磷酸酯，磷酸酯优选磷酸酯POPC，其含量为聚乙二醇甘油双酯的0-30％。
所述的脂质体的成分中还包括有海藻糖，海藻糖的含量为脂质体总量的0.2-5％。
所述的脂质体的成分中还包括有抗氧化氨基酸，抗氧化氨基酸为色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸或甲硫氨酸。
本发明提供的一种脂质体药物载体的制备方法是：脂质体的主要成分聚乙二醇甘油双酯在室温或加温和常压下与水溶液混合搅拌即自动形成脂质体，其中聚乙二醇甘油双酯溶液中可选择添加磷酸酯、海藻糖和抗氧化氨基酸中的一种或几种混合物用于制备脂质体。
传统脂质体是一种由磷酸酯双分子层膜形成的囊泡，具有包裹药物分子能力和靶向给药功能的药物剂型。典型的脂质体为微球形，如图1所示，微球的内外表面分别为极性亲水磷酸酯双分子表层(图1，A、B)，极性亲水的微球内腔可包囊亲水的药物分子(图1，B)，而脂溶性的药物分子则可镶嵌在脂质双分子层中间(图1，C)，D为极性亲水的磷脂双分子表面。而传统磷酸酯脂质体的最大不足就是稳定性差、生产过程繁琐、设备要求高，而这些不足均起源于用于生产脂质体的原始材料磷酸酯，因此筛选一种或多种更稳定、更具有自我囊泡形成功能的脂质作为原材料便是解决传统脂质体不足的首要因素。
影响脂质分子形成脂质体的因素很多，首先要考虑的是脂质的分子几何结构。如前所述，形成脂质体的分子必须是既亲水又亲脂的双亲分子，而这种结构在甘油酯中非常常见，然而并非所有的双亲分子都能形成药用脂质体。双亲脂质分子的亲水基团(头部)和亲脂的碳链(尾部)的结构必须符合形成脂质体的要求，而首先必须具备的结构是分子的几何结构。而这类双亲分子的几何结构又可以用一种叫表面活性参数(S)来表示：
如图2所示，V0表示亲脂部分的体积，l0代表碳氢链的长度，a0表示亲水头部的有效面积。表面活性参数反映了双亲分子的几何结构，与该分子聚集时的弯曲率直接相关。当此活性参数小于1/3时，分子聚集后建成实心球体，不具备药物包裹能力；当此参数为1时，基本机构将是平板，很难形成球体；而此参数大于1时，形成反向微球，即亲脂碳链在外不能与极性溶剂兼溶；只有在表面活性参数在1/3～1之间时，理想的囊泡微球才能形成。因此，通过对分子的表面活性参数的评估便可初步筛选脂质体脂质分子。
甘油酯作为生物膜的主要组成部分自然是脂质体脂质的首选分子，磷酸甘油酯的基本结构如图3所示。就甘油酯而言，单碳链甘油酯的S值往往小于1/3，因此不能用于脂质体的制备，双碳链甘油酯将是脂质体脂质的主要分子。
为了使脂质分子能自发地在常温常压下形成脂质体，脂质分子的熔点必须低，即在室温或适当加温时必须是液体，因此，在选择脂质分子时排除高熔点的脂质。
碳链(亲脂的尾部)选择将是该分子是否自然地形成脂质体并具有良好的表皮穿透性的关键之一。众多的研究表明，在与极性分子连接后，各种饱和与不饱和脂肪酸均有不同程度的表皮渗透性。另外，不饱和键有顺反式构象，顺式构象可使直链分子弯曲，弯曲的顺式构象(cis-)不饱和脂肪酸(见图4)能有效地利用其几何弯曲构象松动生物体细胞间紧密排列的脂质层，使生物膜变得更具通透性。因此，适当比例的不饱和脂肪酸可以增加皮肤的通透性。我们应用了多种脂肪酸组合(表二)，证明均可以在适当条件下自发的形成脂质体。
正如前面表面活性参数所描述，脂质分子的亲脂碳链的长度和极性亲水基团体积的比例将是决定此分子是否自己形成脂质体的关键。亲水基团必须相对庞大才能使此分子有足够的弯曲率形成双层脂质膜的囊泡脂质体。在传统脂质体的磷酸酯中，磷酸基团、与磷酸相连的图3中的R3基团(见图3)以及与之相关的电荷构成了极性“头部”。但由于传统脂质体的不稳定性和生产的难度必然与磷酸酯有直接的关系，我们采用了非磷酸酯作为本脂质体的基本脂质分子。被美国FDA批准可作为药用辅料的聚乙二醇具有良好的极性，并可选择其链的长度而改变“头部”的大小，聚乙二醇甘油双酯被证明是理想的脂质体脂质。通过显微镜的观察，当聚乙二醇甘油双酯被加到搅拌中的水溶液中时，在室温或适当加温条件下脂质体便自动产生(见图5)，无需有机溶剂和高温加压等附加条件的帮助。聚乙二醇200甘油双酯、聚乙二醇400甘油双酯、聚乙二醇600甘油双酯，均被证明为理想的脂质分子，聚乙二醇800甘油双酯、聚乙二醇1500甘油双酯就已缺乏在室温条件下自动形成脂质体的能力，然而在适当的温度条(37℃或50℃)件下也能自发形成脂质体。
聚乙二醇甘油双酯能在室温和常压下在与水溶液混合后自动形成脂质体，但它不是生物膜的组成脂质，因此用聚乙二醇甘油双酯制备的脂质体的生物兼容性可能受到挑战。为了解决这个问题，生物膜磷酸酯被加入到聚乙二醇甘油双酯溶液中，以增加所制备的脂质双分子膜与生物体细胞膜结构的相类性，从而增加其生物兼容性。良好的生物兼容性可能使脂质体进入人体内部启动的系统免疫机制，被网状内皮系统吞噬，从而在肝、脾、肺和骨髓等组织中靶向性地富集。这就是脂质体的被动靶向性。
过高浓度的磷酸酯导致了聚乙二醇甘油双酯失去了在常温常压下自动形成脂质体的能力。磷酸酯POPC(1-软脂酰，2-油酰磷酸酰胆碱)(1-palmitoyl，2-oleoylphosphatidylcholine)是最常用的脂质体磷酸酯之一，表二是磷酸酯POPC为例和聚乙二醇600甘油双酯混合脂在常温或适当加温及常压下形成脂质体的试验结果。当磷酸酯的浓度在混合酯中低于30％时不影响聚乙二醇甘油双酯的自发形成脂质体的能力，而超过30％的磷脂浓度，聚乙二醇甘油双酯的脂质体形成的自发性即受到影响。为了尽可能保持聚乙二醇甘油双酯的脂质体发生的自发性，同时增加与生物膜的兼容性，我们的结果显示含0-30％磷酸酯的聚乙二醇甘油双酯和磷酸酯的混合酯为较佳药物载体脂质体脂质。
不稳定性是传统磷酸酯脂质体的一大不足之一。磷酸酯脂质体的不稳定性表现在两个方面：脂质分子的不稳定性，主要表现在磷酸酯分子易被氧化性和易水解性；另一种不稳定性则是脂质体相互聚集而导致脂质体团的形成，而磷脂酯脂质体聚集的另一种结果则是脂质体相互融合形成超大脂质体而影响载体导入效果，这过程还将导致包容药物的泄漏，降低包埋率。经长时间保存，磷酸酯脂质体的相互聚集而导致稳定性下降是限制其在药物开发中应用的一个主要原因之一，增进脂质体的长效稳定性有着十分重要的意义。我们在自发性脂质体的制备过程中加入了海藻糖，以及抗氧化氨基酸，明显地提高了脂质体的稳定性，从而增加了其实用性。
附图说明
图1为脂质体效果图；
图2为表面活性参数与形状的关系示意图；
图3为磷脂的分子结构图；
图4为顺反式脂肪酸示意图；
图5为油脂聚乙二醇600脂质体电子显微镜照片；
图6为海藻糖对脂质体稳定性的影响示意图；
图7为抗氧化氨基酸对酯质体稳定性的影响示意图。
具体实施方式
实施例1
自发脂质体的制备
本实施例的脂质体的主要成分聚乙二醇甘油双酯以聚乙二醇双油酸甘油酯为例进行说明。当聚乙二醇双油酸甘油酯与水溶液混合后，脂质体便自发性的形成。聚乙二醇200，400，600，800 and 1500双油酸甘油酯从杜邦研发中心(美国德拉瓦州崴名登市)合成获得，水为纯净水。将脂质和水分别预热至设计温度(见表一)，然后将各种聚乙二醇双油酸甘油酯脂质分别缓慢地加入到搅拌的水溶液中，再搅拌两小时或直至平衡致室温，分别用光学显微镜和电子显微镜来观察脂质体的形成。聚乙二醇双油酸甘油酯的最终浓度为10％，在室温(20℃)聚乙二醇200，400，600双油酸甘油酯均自发的产生了脂质体(见表一)，在37℃，聚乙二醇200，400，600，800双油酸甘油酯均自发产生了脂质体，在50℃，聚乙二醇200，400，600，800、1500双油酸甘油酯均自发产生了脂质体。我们用最终聚乙二醇双油酸甘油酯浓度1％和5％进行了类似的实验，结果与10％的相同。图5是聚乙二醇600双油酸甘油酯脂质体电子显微镜照片，插图为多囊泡脂质体。
表一
| 脂质分子 | 是否自动形成脂质体 | ||
| 20℃ | 37℃ | 50℃ | |
| 聚乙二醇200双油酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇400双油酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600双油酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇800双油酸甘油酯 | 否 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇1500双油酸甘油酯 | 否 | 否 | 是 |
自发性脂质体的药物包裹作用
用聚乙二醇600双油酸甘油酯为例，以咖啡因为药物指标进行了该脂质体的药物包裹功能。聚乙二醇600双油酸甘油酯的浓度5％，咖啡因的浓度为100mM。咖啡因先溶于水，然后将聚乙二醇600双油酸甘油酯在室温下缓慢的加到搅拌中的咖啡因溶液中，继续搅拌2小时，所形成的脂质体用显微镜观察。脂质体形成后经超速离心机(Beckman L8-55)5万RPM离心3小时后，脂质体和水溶液被分开，脂质体沉淀，未被包裹的咖啡因继续留在液相中，液相中的咖啡因浓度为未被脂质体包裹的咖啡因含量。咖啡因含量用HPLC方法检测。经五次试验平均，该脂质体对咖啡因的包容率很高，平均在87-91％之间。
实施例2
不同脂肪酸链聚乙二醇甘油双酯的自发性脂质体的制备
为了说明其他聚乙二醇甘油双酯也能自发形成脂质体，硬脂酸(十八烷酸)、软脂酸(十六烷酸)、肉豆蔻酸(十四烷酸)、月桂酸(十二烷酸)以及他们与油酸(十八碳烯酸)进行分别组合、用聚乙二醇600为例合成聚乙二醇甘油双酯(由美国杜邦研发中心提供)，来观测其自发形成脂质体的情况。将合成的脂质和纯净水分别平衡到所设计温度，然后将脂质缓慢地加入到搅拌中的水中，再搅拌两小时或直至平衡致室温，分别用光学显微镜和电子显微镜来观察脂质体的形成。聚乙二醇甘油双酯的最终浓度为5％。聚乙二醇双硬脂酸甘油酯可能由于熔点较高，不能在室温(20℃)和37℃条件下自发形成脂质体，乙二醇600-1-硬脂酸-2-油酸甘油酯在室温条件下不能自发地形成脂质体，其他试验的聚乙二醇甘油酯均能自发的产生了脂质体(见表二)。
表二
| 脂质分子 | 是否自动形成脂质体 | ||
| 20℃ | 37℃ | 50℃ | |
| 聚乙二醇600双硬脂酸甘油酯 | 否 | 否 | 是 |
| 聚乙二醇600双软脂酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600双肉豆蔻酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600双月桂酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600-1-硬脂酸-2-油酸甘油酯 | 否 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600-1-软脂酸-2-油酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600-1-肉豆蔻酸-2-油酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
| 聚乙二醇600-1-月桂酸-2-油酸甘油酯 | 是 | 是 | 是 |
实施例3
磷酸酯自发性脂质体
用聚乙二醇600双油酸甘油酯为例，与不同浓度的磷酸酯混合，来验证磷酸酯对聚乙二醇双油酸甘油酯形成自发性脂质体的影响，磷酸酯为POPC(1-软脂酰，2-油酰磷酸酰胆碱)，从Sigma公司购买，水为纯净水。POPC对聚乙二醇600双油酸甘油酯的比例分别为5％，10％，15％，20％，30％，50％。POPC和聚乙二醇600双油酸甘油酯首先按比例搅拌混合均匀，混合后的脂质和水分别预热至要求温度(室温，37℃和50℃，表三)，然后将混合脂慢慢加入到搅拌中的水中，继续搅拌两小时或直至室温，取样在光学显微镜和电子显微镜来观察脂质体的形成，本实验的最终脂质浓度为5％。实验结果表明(表三)，20％或少于20％的磷酸脂对聚乙二醇600双油酸甘油酯自发形成脂质体没有影响，磷酸酯在混合酯中的浓度等于30％时，只有在加温至50℃时，混合酯才能自发地形成脂质体(表三)。由此可见，磷酸酯在混合酯中的浓度对自发形成脂质体影响很大，自发性脂质体的混合酯中磷酸酯的浓度应该低于30％(0-30％之间)。试验结果也表明，磷酸酯在混合酯中的浓度大于10％时，所形成的脂质体在长期保存时(大于20天，37℃)有轻微相互聚集想象，磷脂的百分比越高，聚集现象越严重。
表三
| 聚乙二醇800双油酸甘油酯浓度％ | 磷脂POPC浓度％ | 是否自动形成脂质体 | ||
| 20℃ | 37℃ | 50℃ | ||
| 95 | 5 | 是 | 是 | 是 |
| 90 | 10 | 是 | 是 | 是 |
| 85 | 15 | 是 | 是 | 是 |
| 80 | 20 | 是 | 是 | 是 |
| 70 | 30 | 否 | 否 | 是 |
| 50 | 50 | 否 | 否 | 否 |
含磷酸酯自发性脂质体的药物包裹作用
用聚乙二醇600双油酸甘油酯为例，加入磷酸酯POPC形成的混合酯中甘油酯浓度为85％磷酸酯浓度为15％，用咖啡因为药物指标进行了该脂质体的药物包裹功能。混合酯的最后浓度为5％，咖啡因的浓度为100mM。咖啡因先溶于水，然后将预混合的脂质在室温下缓慢的加到搅拌中的咖啡因溶液中，继续搅拌2小时，所形成的脂质体用显微镜观察。脂质体形成后经超速离心机(BeckmanL8-55)5万RPM离心3小时后，脂质体和水溶液分开，水溶液中的咖啡因浓度为未被脂质体包裹的咖啡因含量。咖啡因含量用HPLC方法检测。经五次试验平均，该脂质体对咖啡因的包容率在85-90％之间。
实施例3
海藻糖增加脂质体的稳定性
海藻糖(trehalose)是被广泛用来作为蛋白分子的稳定剂，其主要机理是海藻糖可以与某些氨基酸分子以氢键相结合，而防止蛋白分子相互聚集。海藻糖是人体体内自我合成分子，也是美国FDA认定的药物安全添加剂。我们将海藻糖加入到磷酸脂质体中，发现也能有效地防止脂质体的相互聚集，增加脂质体的稳定性。
聚乙二醇600双油酸甘油酯和POPC(1-软脂酰，2-油酰磷酸酰胆碱)混合搅拌均匀，混合酯中聚乙二醇600双油酸甘油酯浓度为85％，POPC为15％。海藻糖先溶于水，浓度分别为1％和5％。然后将脂质混合物慢慢加入到搅拌中的海藻糖水溶液中，脂质最后浓度为5％，脂质体的形成用显微镜观测，脂质体的大小用Zetasizer颗粒大小测试仪(英国Malvern仪器公司)测量。我们对形成的脂质体进行了100天的脂质体平均大小监测，如图6所示(A，传统磷酸酯质体(纯POPC脂质体)；B，聚乙二醇600双油酸甘油酯+15％POPC脂质体；C，聚乙二醇600双油酸甘油酯+15％POPC脂质体+1％海藻糖；D，聚乙二醇600双油酸甘油酯+15％POPC脂质体+5％海藻糖)，在脂质体中加入1％到5％的海藻糖对脂质体有明显的增加稳定性的作用。我们同时也用0.2％和0.5％的海藻糖进行了脂质体稳定性试验，在此低浓度的条件下也有增加脂质体稳定性的作用。
含海藻糖脂质体的药物包裹作用
用聚乙二醇600双油酸甘油酯为例，加入磷酸酯POPC形成的混合酯中聚乙二醇甘油双酯浓度为85％磷酸酯浓度为15％，用咖啡因为药物指标进行了该混合酯的药物包裹功能。混合脂的最后浓度为5％，咖啡因的浓度为100mM，海藻糖的浓度为1％。。咖啡因和海藻糖先溶于水，然后将预混合的混合酯在室温下缓慢的加到搅拌中的咖啡因和海藻糖溶液中，继续搅拌2小时，所形成的脂质体用显微镜观察。脂质体形成后经超速离心机(Beckman L8-55)5万RPM离心3小时后，脂质体和水溶液分开，水溶液中的咖啡因浓度为未被脂质体包裹的咖啡因含量。咖啡因含量用HPLC方法检测。经五次试验平均，该脂质体对咖啡因的包容率在85-90％之间。
实施例4
抗氧化氨基酸对脂质体稳定性的影响
为了增加脂质体的抗氧化稳定性，我们在脂质体剂型中加入了抗氧化的氨基酸。在聚乙二醇600双油酸甘油酯+15％磷酸酯POPC脂质体制剂中加入了50mM色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸，各种氨基酸分别从Sigma公司购得，咖啡因为被包裹活性物，包裹在脂质体中的咖啡因泄漏情况为稳定性指标。
聚乙二醇600双油酸甘油酯和POPC(1-软脂酰，2-油酰磷酸酰胆碱)混合搅拌均匀，比例为聚乙二醇600双油酸甘油酯为85％，POPC为15％。色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸以及咖啡因先溶于水，各种氨基酸的浓度为50mM，咖啡因的浓度为100mM。对照试验只加咖啡因，不加氨基酸。将混合脂质缓慢地加到搅拌中的咖啡因和氨基酸溶液中，继续搅拌两小时。脂质体形成后经超速离心机(Beckman L8-55)5万RPM离心3小时后，脂质体和水溶液分开，水溶液中的咖啡因浓度为未被脂质体包裹的咖啡因含量。脂质体刚形成时，咖啡因在水溶液中的残留未8-10mM(图7，0天)，图7中A为对照实验，不加氨基酸；B为加了50mM氨基酸后的结果。脂质体对咖啡因的包容率很高，达90％-92％。经过30天在50度温度的加速稳定性试验，不加氨基酸的对照组，溶液中的咖啡因浓度逐步增加，到第30天时达到18mM，说明脂质体的稳定性逐步下降，咖啡因从脂质体漏出。而加了氨基酸的脂质体的稳定性明显好于对照，到第30天时溶液中的咖啡因浓度才11mM，基本保持原有水平。此试验表明加入抗氧化氨基酸后脂质体的稳定性明显增加。
实施例5
自发稳定脂质体的药物环孢霉素包裹试验
聚乙二醇600双油酸甘油酯和磷酸酯POPC先预混合，比例为POPC占脂质的20％(5∶1)。然后将环孢霉素A预溶于事先准备好的脂质混合液中成混合液A。色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸先配成母液，使其的最后浓度为50mM。海藻糖及氨基酸母液先与水混合成混合液B(成分见表四)。然后将混合液A缓慢地加入到搅拌中的混合液B中，继续搅拌两小时。脂质体的形成情况用显微镜检测。
表四
| 成分 | 最终浓度 |
| 聚乙二醇600双油酸甘油酯 | 5％ |
| 磷酸酯POPC | 1％ |
| 环孢霉素A | 1％ |
| 海藻糖 | 1％ |
| 氨基酸溶液母液 | 50mM |
| 水 | 加至100％ |
用超高速离心方法将脂质体和液相分离后，液相中的环孢霉素的余留用HPLC检测，五次试验结果表明，脂质体的环孢霉素包裹率在83-91％之间。
自发稳定脂质体的抗癌药物AMPB包裹试验
聚乙二醇600双油酸甘油酯和磷酸酯POPC先预混合，比例为POPC占脂质的20％(5∶1)。然后将抗癌药AMPB(2-4-amino-3-methylphenyl benzothiazole)(Sigma公司)预溶于事先准备好的脂质混合液中成混合液A。色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸先配成母液，使其的最后浓度为50mM。海藻糖及氨基酸母液先与水混合成混合液B(成分见表五)。然后将脂质混合液A缓慢地加入到搅拌中的水溶液B中，继续搅拌两小时。脂质体的形成情况用显微镜检测。
表五
| 成分 | 最终浓度 |
| 聚乙二醇600双油酸甘油酯 | 5％ |
| 磷酸酯POPC | 1％ |
| AMPB | 0.5％ |
| 海藻糖 | 1％ |
| 氨基酸溶液母液 | 50mM |
| 水 | 加至100％ |
超高速离心后，液相中的AMPB的余留用HPLC检测，五次试验结果表明，脂质体的AMPB包裹率平均在91％左右。
Claims (10)
1、一种脂质体药物载体，其特征在于：所述的脂质体的主要成分为聚乙二醇甘油双酯，其分子式为：
其中，R1为饱和或不饱和酰基、R2为饱和或不饱和酰基、R3为(C2H4O)n-OH，n＝1-35。
2、根据权利要求1所述的脂质体药物载体，其特征在于：所述的聚乙二醇甘油双酯为聚乙二醇200甘油双酯，聚乙二醇400甘油双酯、聚乙二醇600甘油双酯，聚乙二醇800甘油双酯或聚乙二醇1500甘油双酯。
3、根据权利要求1所述的脂质体药物载体，其特征在于：所述的脂质体的成分中还包括有磷酸酯。
4、根据权利要求3所述的脂质体药物载体，其特征在于：所述的磷酸酯为磷酸酯POPC，其含量为聚乙二醇甘油双酯的0-30％。
5、根据权利要求1所述的脂质体药物载体，其特征在于：所述的脂质体的成分中还包括有海藻糖。
6、根据权利要求5所述的脂质体药物载体，其特征在于：所述的海藻糖的含量为脂质体总量的0.2-5％。
7、根据权利要求1所述的脂质体药物载体，其特征在于：所述的脂质体的成分中还包括有抗氧化氨基酸。
8、根据权利要求7所述的脂质体抗氧化氨基酸，其特征在于：所述的抗氧化氨基酸为色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸或甲硫氨酸。
9、一种权利要求1所述的脂质体药物载体的制备方法，其特征在于：所述的脂质体的主要成分聚乙二醇甘油双酯在室温或加温和常压下与水溶液混合搅拌即自动形成脂质体。
10、根据权利要求9所述的脂质体药物载体的制备方法，其特征在于：所述的聚乙二醇甘油双酯溶液中选择添加磷酸酯、海藻糖和抗氧化氨基酸中的一种或几种混合物制备脂质体。
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