CN101027405A - 合成衍生物的方法，化合物库及其构建方法，以及筛选方法 - Google Patents

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Abstract

[问题]提供合成天然化合物的衍生物的方法，该方法可用于HTS随机筛选，用于寻找药物或农用化学品，寻找药物或农用化学品的先导化合物；建立包含天然化合物的衍生物的化合物库的方法；包含天然化合物的衍生物的化合物库；以及利用该化合物库的筛选方法。[解决方法]通过在预定培养肉汤中培养能产生有机化合物的微生物，然后在培养肉汤中让通过培养获得的有机化合物与用于合成该有机化合物的衍生物的反应试剂发生反应，可以合成该有机化合物的衍生物。通过构建包含这样得到的有机化合物衍生物的化合物库，可以进行HTS(高通量)随机筛选，寻找药物或农用化学品，寻找药物或农用化学品的先导化合物等。

Description

合成衍生物的方法，化合物库及其构建方法，以及筛选方法
相关文件交叉参考
本申请要求2004年9月27日提交的第2004-279597号日本专利申请的优先权，该专利申请参考结合入本文中。
技术领域
本发明涉及由微生物产生的有机化合物的衍生物的合成方法，包含所述衍生物的化合物库和该化合物库的构建方法，以及利用该化合物库的筛选方法。
背景技术
在药物和农用化学品的开发中，为了寻找生理活性物质(如先导化合物)，人们已经对商用化合物库和通过组合合成法产生的化合物库(例如，PCT日本翻译专利公开第2001-518053和2002-502393号)进行了筛选(例如，PCT日本翻译专利公开第2002-514612、2002-517474和2003-521673号)。不过，在目前条件下，无法有效地找到有用的化合物。
另一方面，从微生物培养肉汤中分离和纯化的天然化合物库里已经发现了大量药物或用于药物的先导化合物[例如青霉素、他克莫司(FK-506)和普伐他汀]。由此可见，天然化合物具有极为多样的活性和不同寻常的结构。因此，在寻找先导化合物时，天然化合物库被认为是至关重要的。
不仅如此，已经发现通过对天然化合物进行化学改性得到的一些衍生物，比原天然化合物具有更强的生理活性、更低的毒性和/或更少的负效应。因此，天然化合物的衍生物库也被认为可用于有效地寻找优良的药物，因此需要构建包含天然化合物衍生物的化合物库。
发明概述
然而，由于分离和纯化天然化合物要花大量时间，要找到可用作药物的先导化合物也比较困难，所以建立天然化合物库或其衍生物的库不是一件容易的事。
此外，为了建立化合物库，在为合成天然化合物的衍生物而分离天然化合物时，需要鉴别化合物的结构，这样才能确定适合对化合物进行改性的方法，以及探寻合成衍生物的反应条件。由此带来的不利结果是，合成衍生物要花大量时间。因此，需要开发一种方法，用于快速合成衍生物。
因此，本发明的一个目标是提供一种合成天然化合物的衍生物的方法，一种建立包含天然化合物衍生物的化合物库的方法，包含天然化合物衍生物的化合物库，以及利用化合物库的筛选方法，这些可用于高通量(HTS)随机筛选、药物或农业化学品的寻找、药物或农用化学品的先导化合物的寻找等。
为解决上述问题，本发明人尝试构建天然化合物库或其衍生物库。首先，在用于培养链霉菌(Streptomyces sp.)MK929-43F1的培养肉汤中，作为反应试剂，加入用于对化合物进行氧化的琼斯试剂或用于对化合物进行环氧化的丙酮/单过硫酸氢钾，其中链霉菌用于合成下面化学式(1)所示化合物。接着，用高效液相色谱(HPLC)对来自培养肉汤的乙酸乙酯萃取物进行分级分离。另外，来自未加反应试剂的培养肉汤的萃取物也用HPLC进行分级分离。通过比较它们之间的分离图样，可以鉴定并回收一些物质，它们包含在与反应试剂反应的培养肉汤的萃取液中，但不包含在未与反应试剂反应的培养肉汤的萃取液中。对这些回收的物质进行结构分析，结果发现从与琼斯试剂反应的培养肉汤中可以得到下面化学式(1)所示化合物的氧化物(下面化学式(2)所示)，从与丙酮/单过硫酸氢钾反应的培养肉汤中可以得到化学式(1)所示化合物的环氧化化合物(下面化学式(3)所示)。
这些结果表明，通过在培养肉汤中加入用于合成衍生物的反应试剂，可以快速得到微生物产生的有机化合物的衍生物。因此，本发明人已经成功完成了本发明。
[化合物1]
Figure A20058003231100101
根据本发明，由微生物产生的有机化合物的衍生物的合成方法包括如下步骤：在预定培养肉汤中培养微生物，使通过培养微生物得到的有机化合物与反应试剂反应，在培养肉汤中合成有机化合物的衍生物。有机化合物与反应试剂的反应可通过在含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来进行，也可通过下面这种方式进行，即先通过在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来产生有机物，然后向培养了微生物的培养肉汤中加入反应试剂。
对于通过让微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，根据本发明建立包含该衍生物的化合物库的方法包括如下步骤：对一种化合物进行回收，然后将其列为化合物库的一员，该化合物包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但在基本上不含所述反应试剂的培养肉汤中不含这种化合物。
对于通过让微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，可以根据本发明建立包含该衍生物的化合物库：对一种化合物进行回收，然后将其列为化合物库的一员，所述包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但在基本上不含该反应试剂的培养肉汤中不含该化合物。
对于通过让微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，根据本发明利用包含该衍生物的化合物库筛选具有生理活性的化合物的方法包括构建该化合物库的步骤，而该化合物库通过以下步骤构建：回收一种化合物，然后将其列为化合物库的一员，所述化合物包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但在基本上不含反应试剂的培养肉汤中。
另外，对于通过让微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，根据本发明利用包含该衍生物的化合物库筛选治疗药剂的方法包括如下步骤：给予除人以外的疾病模型动物以该化合物库中的每种化合物，然后评价给服该化合物是否改善了病征，其中所述化合物库通过以下步骤建立：回收一种化合物，并将其列为化合物库的一员，该化合物包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但基本上不含该反应试剂的培养肉汤中不含该化合物。
应当注意，上述基本上不含反应试剂的培养肉汤是用于培养微生物的培养肉汤，它既可以是培养微生物之前、也可以是培养微生物之后的培养肉汤。所述包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含该反应试剂的培养肉汤中的化合物可以通过以下方式回收：通过分级分离(fractionating)包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中的化合物，并分级分离包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物，来鉴定所述化合物。上述含有反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤可通过以下方式制备：通过在含有反应试剂的培养肉汤中培养微生物，使有机化合物与反应试剂反应，或者先在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物以产生有机化合物，然后向含有微生物产生的有机化合物的培养肉汤中加入反应试剂，使有机化合物与反应试剂之间发生反应。
举例来说，上述微生物可以是突变体，其与产生有机化合物的过程相关的基因发生了突变，或者是通过对微生物中与有机化合物的形成过程相关的基因进行遗传操作产生的转化体。与产生有机化合物的过程相关的基因发生了突变的突变体可以是人为使其发生突变的突变体，人为因素如紫外线辐射、X射线辐射或用化学试剂处理；或者是自然突变体。
本说明书中的术语“微生物”是指微小的生物，包括古生菌(Archaea)、真细菌(Eubacteria)、太古菌(Archaezoa)、原形动物、原藻、真菌(Fungi)(真菌(Eumycetes))以及微小的植物和动物。古生菌亦称原生物或古细菌，包括极度嗜盐生物、嗜热古生菌和甲烷细菌(产烷生物)。真细菌包括多数细菌，如大肠杆菌和放线菌。原生动物指可以在不含分子酶(过氧化物酶体)的情况下存活的真核生物，包括毛滴虫、肠滴虫、锐滴虫、微孢子虫、耐格里原虫和diplomonas。原形动物指单核单细胞生物，包括藻类、水霉、粘菌(粘液霉菌)和细胞粘液霉菌。原藻指其被两层叶绿体被膜覆盖的叶绿体进一步被两层被膜覆盖，因此总共被四层被膜覆盖的生物，包括丝壶菌、卵菌和网粘菌。真菌(真菌)包括子囊菌、接合菌、担子菌和不完全菌，例如霉菌、蘑菇和酵母菌等也包括在内。包括在本发明技术范围之内的微生物不限于上述有机体，任何能像上述有机体那样进行类似处理的有机体均包括在内。
上述反应试剂的例子包括氧化剂、还原剂、环氧化剂、双羟基化试剂、氧化断裂试剂、氢化剂、醚化剂、卤化剂、硝化剂、磺化剂、叠氮化剂、醇醛反应试剂和烷基化试剂，从这些试剂中选择的一种或多种试剂都可用作反应试剂。不过，反应试剂不限于上述这些试剂。
这里所用术语“反应试剂”是指能与微生物产生的有机化合物反应，以合成衍生物的试剂。
具体来说，“氧化剂”、“还原剂”、“环氧化剂”、“双羟基化试剂”、“醚化剂”、“卤化剂”、“硝化剂”、“磺化剂”、“叠氮化剂”和“烷基化试剂”分别指能使诸如微生物产生的有机化合物这样的反应底物发生氧化、还原、环氧化、双羟基化、醚化、卤化、硝化、磺化、叠氮化和烷基化的试剂。
“氧化断裂试剂”是指能使有机化合物发生氧化和断裂的试剂。“氢化剂”是指能以氢取代微生物产生的有机化合物上的一个官能团，或者将氢加成到微生物产生的有机化合物上的试剂。
“醇醛反应试剂”是指能与酮、醛或酯发生亲核加成反应并产生醇醛或产生很容易从醇醛得到的化合物的试剂，其中酮、醛或酯与微生物产生的有机化合物上具有相同或不同的结构。
应当注意，可以使用具有上述功能的任何试剂。例如，所述试剂可以包含直接与作为靶的有机化合物反应的化合物，包含具有催化活性的化合物，或同时包含这两种化合物。
附图简述
图1所示为本发明的一种实施方式中，既未加入琼斯试剂也未加入丙酮/单过硫酸氢钾的链霉菌MK929-43F1培养肉汤的萃取物的分离图样(上图)，已经加入琼斯试剂的链霉菌MK929-43F1培养肉汤的萃取物的分离图样(中图)，已经加入丙酮/单过硫酸氢钾的链霉菌MK929-43F1培养肉汤的萃取物的分离图样(下图)。
图2所示为本发明的一种实施方式中，已经加入琼斯试剂的链霉菌MK929-43F1培养肉汤的萃取物中所含物质的1H-NMR结构分析结果。
图3所示为本发明的一种实施方式中，已经加入丙酮/单过硫酸氢钾的链霉菌MK929-43F1培养肉汤的萃取物中所含物质的1H-NMR结构分析结果。
图4所示为本发明的一种实施方式中，对米格拉斯它汀(migrastatin)和氧化米格拉斯它汀抑制细胞迁移的活性的观察结果。
图5所示为本发明的一种实施方式中，对米格拉斯它汀和氧化米格拉斯它汀影响ATP合成的观察结果。
本发明最佳实施方式
下面结合实施例详细描述基于上述发现完成的本发明的实施方式。除非对实施方式或实施例有特别说明，一般采用诸如J.Sambrook，E.F.Fritsch & T.Maniatis主编的《分子克隆实验室手册(Molecular cloning，a laboratory manual)》[第3版，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(2001)]和F.M.Ausubel，R.Brent，R.E.Kingston，D.D.Moore，J.G.Seidman，J.A.Smith，K.Struhl主编的《分子生物学最新协议(Current Protocols in Molecular Biology)》(John Wiley & Sons Ltd.)等标准协议中所揭示的方法，或者采用其改进或变通方法。当采用商业成套试剂箱或测量设备时，除非另有特别说明，试剂箱或设备按照其所附说明使用。
应当指出，根据本描述中所揭示的内容，本发明的目标、特征、优点和思路对本领域的技术人员来说是显而易见的，本领域的技术人员很容易根据本描述中所揭示的内容实施本发明。下面描述的本发明实施方式和具体实施例仅仅是用于阐释或说明本发明的优选的具体实施例，本发明不限于此。对本领域的技术人员来说显而易见的是，在本描述所揭示的本发明的思路和范围之内，可以根据所揭示的内容作出各种变通和改进。
首先，为了合成有机化合物的目标衍生物，在预定的培养肉汤中培养微生物，并且在培养肉汤中使微生物培养基产生的有机化合物与反应试剂反应，合成该有机化合物的衍生物。
用于本发明的微生物没有限制，只要微生物在培养条件下能够以代谢产物的形式产生有机化合物即可，所述微生物可以是任何真菌(一般而言，例如霉菌、蘑菇和酵母菌)、细菌(原核单细胞生物)和粘菌(粘液菌)。微生物的属或种不受限制，微生物的例子包括真菌，如子囊菌(酵母菌、脉孢菌、青霉菌、曲霉菌、杯菌、块菌等)、接合菌(毛霉菌、水玉霉等)、担子菌(松茸、木水母(tree jellyfish)等)、不完全菌(灰霉病菌等)和壶菌；细菌，如真细菌(大肠杆菌、放线菌等)和古生菌；粘菌(发网粘菌等)。另外，与产生有机化合物的过程相关的基因发生突变的突变体以及野生菌株，可用于为微生物产生的有机化合物提供多样性。突变体可以是用紫外线、X射线或化学试剂人为诱导突变的突变体，或者是通过对与产生有机化合物的过程相关的基因进行遗传操作得到的转化体，或者是自然突变体。
这些微生物可根据各微生物的常用培养方法进行培养。适合微生物生长的任何培养肉汤都可用于培养，其例子包括合成培养基、半合成培养基和天然培养基。可以在培养肉汤中加入作为微生物营养源的已知营养成分。碳源的例子包括碳水化合物，如市售糖浆、葡萄糖、麦芽糖、果糖、甘露醇、马铃薯淀粉、玉米淀粉、糊精和可溶淀粉；以及脂肪和油。氮源的例子包括无机或有机氮源，如市售蛋白胨、肉汁、玉米浆、棉籽粕、花生粉、大豆粉、酵母提取物、NZ胺、麦芽、酪蛋白、鱼粉、硝酸钠和硝酸铵。可根据需要加入金属盐，如钠、钾、镁、钙、锌、铁、锰、钴或铜的硫酸盐、盐酸盐、硝酸盐、磷酸盐或碳酸盐。此外，可根据需要加入氨基酸，如缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸或天冬氨酸；或次级代谢产物促进剂；或消泡剂，如维生素、油酸、油酸甲酯、猪油、硅油或表面活性剂。除了这些添加剂外，还可以加入其他任何能够被微生物利用并有助于产生次生代谢物的添加剂。培养方式可以与生产次生代谢物的微生物所用培养方式相同。培养方法可以是固态培养或液态培养。液态培养可以是静态培养、摇动培养或搅动培养。
在这种培养条件下，可以通过培养微生物产生作为次生代谢物的有机化合物。让该有机化合物与用于在培养肉汤中合成有机化合物衍生物的反应试剂反应，可以得到该有机化合物的衍生物。非常有可能的是，这样得到的衍生物是具有独特结构的新型化合物。此外，可以预期该衍生物具有在自然状态下不具备的活性。
下面列出了反应中所用的反应类型和反应试剂类型的实例。任何类型的反应和反应试剂均可采用，只要它们能够改变作为次生代谢物的有机化合物的官能团或骨架即可，反应和反应试剂的类型不限于下面列出的那些。此外，也可采用两种或多种反应的组合。
氧化反应(反应试剂)
1)醇的氧化(CrO3-H2SO4(琼斯试剂)、KMnO4、Na2CrO7、NaOCl-TEMPO等)
2)苄基位或烯丙基位的氧化(CrO3-AcOH、O2/催化剂等)
3)拜尔-维利格(Baeyer-Villiger)反应(过氧化物等)
还原反应(反应试剂)
4)羰基化合物(醛或酮)的还原(NaBH4、NaBH3CN、LiAlH4、H2/催化剂(例如铑、钌或钯)等)
环氧化反应(反应试剂)
5)烯烃的环氧化(过酸(过乙酸、间-氯过苯甲酸等)、H2O2/催化剂、过一硫酸氢钾-丙酮等)
羟基化反应(反应试剂)
6)烯烃的双羟基化反应(OsO4，KMnO4，R-CO3H/H+等)
氧化断裂反应(反应试剂)
7)烯烃的氧化断裂(O3，NaIO4等)
氢化反应(反应试剂)
8)烯烃的氢化(H2/Pd or Pt，阮内镍等)
醚化反应(反应试剂)
9)醇的醚化((CH3)2SO4，ICH2CO2H，N-乙基马来酰亚胺]
卤化反应(反应试剂)
10)芳环或烯烃的卤化(F2，XeF2，Cl2，Br2，I2，HCl，HBr，HOCl)
硝化反应(反应试剂)
11)芳环的硝化(HNO3/H2SO4)
磺化反应(反应试剂)
12)芳环的磺化(SO3/H2SO4)
叠氮化反应(反应试剂)
13)胺的叠氮化(NaNO2/H+)
醇醛反应(反应试剂)
14)醇醛反应(路易斯酸/甲硅烷基烯醇基醚)
烷基化反应(反应试剂)
15)酮的烷基化(R-MgX，RLi)
16)羰基α位的烷基化(碱/R-X)
上述任何反应试剂与从培养肉汤中得到的作为次生代谢物的有机化合物可以按照以下方式进行反应：在已经加入了反应试剂的培养肉汤中培养微生物；或者在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物，然后在培养微生物之后的培养肉汤中加入反应试剂。在后一种方法中，即在培养之后向培养肉汤中加入反应试剂的情况下，举例来说，合成反应可以通过直接向微生物的培养肉汤中加入合成试剂来进行，或者先用不与水混溶的有机溶剂如乙酸乙酯、氯仿、苯、甲苯或乙醚从包含微生物的培养肉汤中萃取培养肉汤，或从通过对加入了过滤助剂的培养肉汤进行离心或过滤得到的培养基滤液中萃取培养肉汤，然后向萃取物中加入合成试剂。
化合物库可以通过合成由微生物产生的有机化合物的衍生物并回收这些衍生物来构建，可以如上所述让有机化合物与各种反应试剂反应来合成所述衍生物。例如，包含有机化合物的浓缩衍生物的化合物库，可以通过鉴定并回收包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物来建立。具体说来，化合物库不仅可以包含微生物产生的有机化合物的衍生物，而且可以包含通过使用培养微生物之前的培养肉汤(基本上不含反应试剂的培养肉汤)得到的有机化合物本身。此外，通过使用已经用于培养微生物但未加入反应试剂的培养肉汤作为基本上不含反应试剂的培养肉汤，可以鉴定主要由微生物产生的有机化合物的衍生物，并高效地建立包含这些衍生物的化合物库。
鉴定和分离由微生物产生的有机化合物和/或该有机化合物的衍生物的方法可以是任何常用方法，如使用硅胶、ODS或Toyopearl HW-40的柱色谱，离心液—液分配色谱，薄层色谱，以及高效液相色谱(HPLC)。通过采用上述任何方法，可以分级分离包含在含有反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤中的化合物，也可类似地分级分离包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物。通过比较这些分级分离图样，可以很容易鉴定并分离待回收的有机化合物和/或有机化合物的衍生物。
回收的化合物可根据需要以混合物形式使用，或者单独使用。例如，如果对具有生理活性的化合物的鉴定要求对单独的化合物进行繁琐的化验，那么可以采用以下过程。首先，将化合物库划分成几组，并鉴定具有活性的那组。然后，将包含在该组中的化合物划分成几个小组。接下来，用类似方法鉴定具有活性的小组。不断重复这些步骤，就可以较少的化验次数鉴定出目标化合物。
库中化合物的结构可用任何已知的结构分析方法确定，如质谱、串联质谱、紫外/可见光吸收光谱、质子核磁共振谱、C13核磁共振谱、红外吸收光谱和X射线晶体光谱，或者它们的组合。由此鉴定出它们的结构之后，可对这些化合物进行减压干燥，然后存放在阴凉处，例如冰箱里。
此外，为了得到具有生理活性的化合物，可利用该化合物库进行各种筛选。具有生理活性的化合物的例子包括但不限于酶抑制剂、配体/受体结合抑制剂、血管新生抑制剂、细胞粘附抑制剂、基因表达抑制剂和类生长因子活性物质。酶抑制剂的例子包括酪氨酸激酶抑制剂、环氧化酶(COX)抑制剂、端粒酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、前列腺素D合成抑制剂、磷酸二酯酶抑制剂、胆碱脂酶抑制剂、病毒蛋白酶抑制剂和逆转录酶抑制剂。受体的例子包括肾上腺素受体、组胺受体、白三烯受体和阿片受体。
实施例
下面结合实施例和附图进一步详细描述本发明。在这些实施例中，用JNM-AL300(JEOL有限公司制造)进行核磁共振(1H-NMR和13C-NMR)的测定。除非特别说明，每个反应都在氩气气氛中进行。
[实施例1]
合成上述化学式(1)所示化合物(米格拉斯它汀)的链霉菌MK929-43F1，在27℃的培养肉汤(2％糊精、2％甘油、1％大豆蛋白胨、0.3％酵母菌提取物、0.2％硫酸铵、0.2％碳酸钙，pH为7.4)中培养4天。然后，通过离心得到上清液。向所得到的60微升培养基上清液中，加入30微升浓度为164毫克/毫升的琼斯试剂，所得混合物在25℃搅拌1分钟。另外还制备了从未加琼斯试剂的培养肉汤中得到的滤液，作为参比。搅拌之后，向混合物中加入180微升饱和碳酸氢钠水溶液进行中和，然后用720微升乙酸乙酯进行萃取。接着，浓缩萃取物，并减压干燥，将干燥残余物溶解在300微升甲醇中。用高效液相色谱(柱：SenshuPAK ODS C18 150毫米×4.6φ；洗提系统：乙腈∶水＝50∶50)分离所得粗产物，利用UV检测器(Shimadzu制造，UV：220纳米)得到分离图样(参见图1)。与参比样的分离图样进行比较，鉴定并回收一种物质，该物质包含在加过琼斯试剂的培养肉汤的萃取物中，但不包含在未加琼斯试剂的培养肉汤的萃取物中。用NMR分析此物质的结构(参见图2)，证实该物质是化学式(1)所示化合物的氧化物(上述化学式(2)所示化合物：氧化米格拉斯它汀)。因此，用琼斯试剂可以得到有机化合物的氧化物。
[实施例2]
用720微升乙酸乙酯萃取实施例1得到的滤液(60微升)，浓缩萃取物并减压干燥，将干燥残余物溶解在100微升丙酮中。然后，向其中加入1毫克NaHCO3使其饱和。接着，向其中加入100微升浓度为20毫克/毫升的单过硫酸氢钾(溶解在丙酮中)，室温下搅拌所得混合物3小时。另外，同样制备未加丙酮/单过硫酸氢钾的溶液，作为参比。搅拌之后，用600微升乙酸乙酯进行萃取，浓缩萃取物并减压干燥，将干燥残余物溶解在300微升甲醇中。用高效液相色谱(柱：SenshuPAK ODS C18 150毫米×4.6φ；洗提系统：乙腈∶水＝50∶50)分离所得粗产物，利用UV检测器(Shimadzu制造，UV：220纳米)得到分离图样(参见图1)。与参比样的分离图样进行比较，鉴定并回收一种物质，该物质包含在加过丙酮/单过硫酸氢钾的培养肉汤的萃取物中，但不包含在未加丙酮/单过硫酸氢钾的培养肉汤的萃取物中。用NMR分析此物质的结构(参见图3)，证实该物质是化学式(1)所示化合物的环氧化物[上述化学式(3)所示化合物：环氧化米格拉斯它汀]。因此，用丙酮/单过硫酸氢钾可以得到有机化合物的环氧化物。
[实施例3]
已知米格拉斯它汀可抑制癌细胞的转移。因此，进行下面的实验以检验实施例1得到的氧化米格拉斯它汀是否能抑制肿瘤细胞的转移。
将500微升来自人食道肿瘤的EC17细胞悬浮液[1.5×105个细胞/毫升；RPMI1640培养基(Nissui)]加入48孔培养板中的每个孔，在37℃保温培养24小时。然后，用微吸液管尖端沿直线刮擦每个孔的底部中央，将细胞沿直线刮下来。接着，立即除去培养肉汤的上清液。用300微升PBS-(8克/升NaCl，0.2克/升KCl，0.916克/升Na2HPO4，0.2克/升KH2PO4)仔细清洗孔，不可将余下的细胞刮下来，然后轻轻地向孔中加入500微升含1％血清(FBS：Tissue Culture Biologicals制造)的RPMI1640培养基。接下来，向其中加入米格拉斯它汀或氧化米格拉斯它汀，并在37℃保温培养24小时。另外，类似地保温培养未加米格拉斯它汀和氧化米格拉斯它汀的培养肉汤。保温培养之后，利用显微镜观察的方法，确定有多少条微吸液管尖端形成的直线上被从周围转移过来的细胞填充，由此评价细胞的转移情况。图4显示了观察结果。
如图4所示，在对照样中，保温培养24小时之后，通过刮擦(0小时)培养板上的EC17细胞而形成的直线上充满转移过来的细胞。然而，在刮擦(0小时)之后立即向培养肉汤中加入米格拉斯它汀的情况下，观察到细胞的转移受到抑制，抑制程度与米格拉斯它汀的浓度有关，浓度为30微升/毫升时完全受到抑制。类似地，在刮擦之后立即向培养肉汤中加入氧化米格拉斯它汀的情况下，在几乎相同的浓度范围内观察到了抑制效果。
总之，实验显示，作为米格拉斯它汀衍生物之一的氧化米格拉斯它汀，能够与米格拉斯它汀一样抑制肿瘤细胞转移。实验还显示，化合物的衍生物可能具有与原化合物一样的活性。
[实施例4]
接下来进行下面的实验，用以证明氧化米格拉斯它汀是否能像米格拉斯它汀一样抑制ATP的合成。
将1毫升来自人大肠肿瘤的HT-29细胞的悬浮液(4×105个细胞/毫升；RPMI1640介质)加入24孔培养板中的每个孔，在37℃保温培养24小时。然后，向其中加入米格拉斯它汀或氧化米格拉斯它汀并保温培养3小时。此外，类似地对未加米格拉斯它汀或氧化米格拉斯它汀的培养肉汤进行保温培养，作为参比。保温培养之后，用经过冰冷却的PBS-洗涤每个孔。加入200微升2％的三氯乙酸之后，将培养板在4℃下放置30分钟。用36.8微升0.5N的NaOH中和上清液(160微升)，用作样品。将此样品(160微升)加入3毫升含4mM MgCl2的PBS-。然后，向其中加入40微升4毫克/毫升的荧光素酶—虫荧光素(Sigma)，立即用闪烁计数器的单光子监视器(LS-5000TD：BECKMAN COULTER)测定ATP含量。另外，在未加入样品和荧光素酶—虫荧光素的条件下测定ATP含量，将其作为空白值，从上面每个测量值中减去该空白值。图5显示了测定结果。
如图5所示，可以看到米格拉斯它汀抑制ATP合成的浓度范围与它抑制细胞转移的浓度范围相同，而氧化米格拉斯它汀在相同浓度范围内根本不抑制ATP的合成。因此，可以证实的是，米格拉斯它汀在其羟基被氧化后失去了抑制ATP合成的效应。这表明，米格拉斯它汀的羟基对于抑制ATP合成非常重要。总之可以看到，一种化合物的衍生物可能不具有与原化合物相同的活性。这表明本发明的筛选方法可用于获得具有不同活性的化合物，例如鉴定不会引起负面效应的化合物。
工业应用
本发明提供了合成微生物所产生物质的衍生物的方法，构建包含微生物所产生物质的衍生物的化合物库的方法，包含微生物所产生物质的衍生物的化合物库，以及利用该化合物库的筛选方法，该筛选方法可用于高通量(HTS)随机筛选，用于寻找药物或农用化学品，寻找药物或农用化学品的先导化合物，等等。

Claims (63)

1.微生物产生的有机化合物的衍生物的合成方法，该方法包括以下步骤：
在预定培养肉汤中培养微生物；
使通过培养微生物得到的有机化合物与反应试剂反应，在培养肉汤中合成有机化合物的衍生物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机化合物与反应试剂的反应可通过在含所述反应试剂的培养肉汤中培养微生物来进行。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来产生有机物，
向已用于培养微生物的培养肉汤中加入反应试剂，使所述有机化合物与反应试剂发生反应。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其与产生有机物的过程相关的基因发生了突变。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其突变是通过紫外线辐射、X射线辐射或化学试剂处理而人为诱导产生的。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述微生物是自然突变体。
7.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物是通过对与产生有机化合物的过程相关的基因进行遗传操作而产生的转化体。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物选自古生菌、真细菌、原生生物和真菌中的任何一种。
9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物选自子囊菌、接合菌、担子菌、不完全菌、粘菌和集胞粘菌中的任何一种。
10.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物是放线菌。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应试剂是选自氧化剂、还原剂、环氧化剂、双羟基化试剂、氧化断裂试剂、氢化剂、醚化剂、卤化剂、硝化剂、磺化剂、叠氮化剂、醇醛反应试剂和烷基化试剂中的一种或多种。
12.构建包含有机化合物衍生物的化合物库的方法，所述有机化合物通过微生物产生的有机化合物与反应试剂发生反应来合成，所述方法包含如下步骤：
回收化合物，所述化合物包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中；
将该化合物列为化合物库的一员。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述基本上不含反应试剂的培养肉汤是已经用于培养微生物的培养肉汤。
14.如权利要求12或13所述的方法，其特征在于，通过分级分离包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中的化合物，并分级分离包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物，来鉴定和回收所述包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中、但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物。
15.如权利要求12-14中任一项所述的方法，其特征在于，含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤通过使有机化合物与反应试剂反应得到，所述反应通过在含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来完成。
16.如权利要求12-14中任一项所述的方法，其特征在于，所述含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤通过以下方式得到：通过在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来产生有机化合物，然后在包含由微生物产生的有机化合物的培养肉汤中加入反应试剂，使该有机化合物与反应试剂反应。
17.如权利要求12-16中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其与产生有机物的过程相关的基因发生了突变。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其突变是通过紫外线辐射、X射线辐射或化学试剂处理而人为诱导产生的。
19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，微生物是自然突变体。
20.如权利要求12-16中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物是通过对与产生有机化合物的过程相关的基因进行遗传操作而产生的转化体。
21.如权利要求12-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物选自古生菌、真细菌、原生生物和真菌中的任何一种。
22.如权利要求12-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物选自子囊菌、接合菌、担子菌、不完全菌、粘菌和集胞粘菌中的任何一种。
23.如权利要求12-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物是放线菌。
24.如权利要求12-23中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应试剂是选自氧化剂、还原剂、环氧化剂、双羟基化试剂、氧化断裂试剂、氢化剂、醚化剂、卤化剂、硝化剂、磺化剂、叠氮化剂、醇醛反应试剂和烷基化试剂中的一种或多种。
25.一种化合物库，该化合物库包含通过让微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，
所述化合物库通过以下方式建立：回收化合物，并将其列为化合物库的一员，所述化合物包含在含有反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中。
26.如权利要求25所述的化合物库，其特征在于，所述基本上不含反应试剂的培养肉汤是已经用于培养微生物的培养肉汤。
27.如权利要求25或26所述的化合物库，其特征在于，通过分级分离包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中的化合物，并分级分离包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物，来鉴定和回收所述包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中、但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物。
28.如权利要求25-27中任一项所述的化合物库，其特征在于，包含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤，是通过使有机化合物与反应试剂反应得到的，所述反应通过在含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来完成。
29.如权利要求25-27中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述包含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤通过以下方式得到：通过在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来产生有机化合物，
在包含由微生物产生的有机化合物的培养肉汤中加入反应试剂，使该有机化合物与反应试剂反应。
30.如权利要求25-29中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述微生物是突变体，其与产生有机物的过程相关的基因发生了突变。
31.如权利要求30所述的化合物库，其特征在于，所述微生物是突变体，其突变是通过紫外线辐射、X射线辐射或化学试剂处理而人为诱导产生的。
32.如权利要求30所述的化合物库，其特征在于，所述微生物是自然突变体。
33.如权利要求25-29中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述微生物是通过对与产生有机化合物的过程相关的基因进行遗传操作而产生的转化体。
34.如权利要求25-33中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述微生物选自古生菌、真细菌、原生生物和真菌中的任何一种。
35.如权利要求25-33中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述微生物选自子囊菌、接合菌、担子菌、不完全菌、粘菌和集胞粘菌中的任何一种。
36.如权利要求25-33中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述微生物是放线菌。
37.如权利要求25-36中任一项所述的化合物库，其特征在于，所述反应试剂是选自氧化剂、还原剂、环氧化剂、双羟基化试剂、氧化断裂试剂、氢化剂、醚化剂、卤化剂、硝化剂、磺化剂、叠氮化剂、醇醛反应试剂和烷基化试剂中的一种或多种。
38.利用化合物库筛选具有生理活性的化合物的方法，所述化合物库包含通过让微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，所述筛选方法包括以下步骤：
通过回收化合物，然后将该化合物列为化合物库的一员，建立化合物库，所述化合物包含在含有反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中。
39.如权利要求38所述的筛选方法，其特征在于，所述基本上不含反应试剂的培养肉汤是已经用于培养微生物的培养肉汤。
40.如权利要求38或39所述的筛选方法，其特征在于，通过分级分离包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中的化合物，并分级分离包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物，来鉴定和回收所述包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物。
41.如权利要求38-40中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述包含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤通过使有机化合物与反应试剂反应得到，所述反应通过在含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来完成。
42.如权利要求38-40中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述包含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤是通过以下方式得到的：通过在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来产生有机化合物，
在包含由微生物产生的有机化合物的培养肉汤中加入反应试剂，使该有机化合物与反应试剂反应。
43.如权利要求38-42中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其与产生有机物的过程相关的基因发生了突变。
44.如权利要求43所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其突变是通过紫外线辐射、X射线辐射或化学试剂处理而人为诱导产生的。
45.如权利要求43所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是自然突变体。
46.如权利要求38-42中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是通过对与产生有机化合物的过程相关的基因进行遗传操作而产生的转化体。
47.如权利要求38-46中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物选自古生菌、真细菌、原生生物和真菌中的任何一种。
48.如权利要求38-46中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物选自子囊菌、接合菌、担子菌、不完全菌、粘菌和集胞粘菌中的任何一种。
49.如权利要求38-46中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是放线菌。
50.如权利要求38-49中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述反应试剂是选自氧化剂、还原剂、环氧化剂、双羟基化试剂、氧化断裂试剂、氢化剂、醚化剂、卤化剂、硝化剂、磺化剂、叠氮化剂、醇醛反应试剂和烷基化试剂中的一种或多种。
51.利用化合物库来筛选治疗药剂的方法，所述化合物库包含通过使微生物产生的有机化合物与反应试剂反应而合成的该有机化合物的衍生物，所述筛选方法包括以下步骤：
给予除人以外的疾病模型动物以该化合物库中的每种化合物，该化合物库通过以下步骤建立：回收化合物，然后将该化合物列为化合物库的一员，所述化合物包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中；
评价给服该化合物是否改善了病征。
52.如权利要求51所述的筛选方法，其特征在于，所述基本上不含反应试剂的培养肉汤是已经用于培养微生物的培养肉汤。
53.如权利要求51或52所述的筛选方法，其特征在于，通过分级分离包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中的化合物，并分级分离包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物，来鉴定和回收所述包含在含有反应试剂并已用于培养微生物的培养肉汤中，但不包含在基本上不含反应试剂的培养肉汤中的化合物。
54.如权利要求51-53中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤通过使有机化合物与反应试剂反应得到，所述反应通过在含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来完成。
55.如权利要求51-53中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述包含反应试剂并已经用于培养微生物的培养肉汤通过以下步骤得到：通过在基本上不含反应试剂的培养肉汤中培养微生物来产生有机化合物，
然后在包含由微生物产生的有机化合物的培养肉汤中加入反应试剂，使该有机化合物与反应试剂反应。
56.如权利要求51-55中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其与产生有机物的过程相关的基因发生了突变。
57.如权利要求56所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是突变体，其突变是通过紫外线辐射、X射线辐射或化学试剂处理而人为诱导产生的。
58.如权利要求56所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是自然突变体。
59.如权利要求51-55中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是通过对与产生有机化合物的过程相关的基因进行遗传操作而产生的转化体。
60.如权利要求51-59中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物选自古生菌、真细菌、原生生物和真菌中的任何一种。
61.如权利要求51-59中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物选自子囊菌、接合菌、担子菌、不完全菌、粘菌和集胞粘菌中的任何一种。
62.如权利要求51-59中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述微生物是放线菌。
63.如权利要求51-62中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述反应试剂是选自氧化剂、还原剂、环氧化剂、双羟基化试剂、氧化断裂试剂、氢化剂、醚化剂、卤化剂、硝化剂、磺化剂、叠氮化剂、醇醛反应试剂和烷基化试剂中的一种或多种。
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ATE137266T1 (de) * 1990-09-20 1996-05-15 Monsanto Co Verfahren zur herstellung von n-substituiertem 1- deoxynojirimycin
US5189042A (en) * 1991-08-22 1993-02-23 Merck & Co. Inc. Fluoromacrolides having immunosuppressive activity

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