KR20070057865A - 유도체의 합성 방법, 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법,그리고, 스크리닝 방법 - Google Patents

유도체의 합성 방법, 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법,그리고, 스크리닝 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20070057865A
KR20070057865A KR1020077006827A KR20077006827A KR20070057865A KR 20070057865 A KR20070057865 A KR 20070057865A KR 1020077006827 A KR1020077006827 A KR 1020077006827A KR 20077006827 A KR20077006827 A KR 20077006827A KR 20070057865 A KR20070057865 A KR 20070057865A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
reaction reagent
microorganism
compound
reagent
organic compound
Prior art date
Application number
KR1020077006827A
Other languages
English (en)
Inventor
마사야 이모토
히로미치 오타
켄지 미야모토
Original Assignee
각고호우징 게이오기주크
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 각고호우징 게이오기주크 filed Critical 각고호우징 게이오기주크
Publication of KR20070057865A publication Critical patent/KR20070057865A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

HTS에 의한 랜덤 스크리닝, 의약품 또는 농약품의 탐색, 그리고 의약품 또는 농약품의 리드 화합물의 탐색 등에 유용한 천연 화합물의 유도체를 합성하는 방법, 천연 화합물의 유도체를 함유하는 화합물 라이브러리의 제조방법 및 천연 화합물의 유도체를 함유하는 화합물 라이브러리, 그리고, 화합물 라이브러리를 이용한 스크리닝 방법을 제공하는 것을 과제로 한다. 이 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에 의하면, 유기화합물을 생산하는 미생물을 소정의 배양액에서 배양하고, 배양에 의해 얻어진 유기화합물과 상기 유기 화합물의 유도체를 합성하기 위한 반응 시약을 상기 배양액 중에서 반응시킴으로써, 상기 유기화합물의 유도체를 합성하는 것이 가능하다. 이와 같이 해서 얻어진 유기 화합물의 유도체를 라이브러리화함으로써, HTS(High-Throughput)에 의한 랜덤 스크리닝, 의약품 또는 농약품의 탐색, 및 의약품 또는 농약품의 리드 화합물의 탐색 등이 가능해진다.
미생물, 유기화합물, 반응 시약, 화합물 라이브러리

Description

유도체의 합성 방법, 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법, 그리고, 스크리닝 방법{PROCESS FOR SYNTHESIS OF DERIVATIVES, COMPOUND LIBRARY, METHOD FOR MAKING THE MASE, AND SCREENING METHOD}
본 발명은 미생물이 생산하는 유기 화합물의 유도체의 합성 방법, 상기 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법, 그리고, 상기 화합물 라이브러리를 이용한 스크리닝 방법에 관한 것이다.
의약품이나 농약의 개발에 있어서, 리드 화합물(lead compound) 등의 생리활성 물질을 탐색하기 위해서, 시판의 화합물 라이브러리나, 조합 합성(combinatorial synthesis)에 의한 화합물 라이브러리(예를 들어, 일본국 특표(PCT Japanese Translation Patent Publication) 제2001-518053호 공보 및 특표 제2002-502393호 공보 참조) 등을 이용한 스크리닝이 수행되고 있지만(예를 들어, 일본국 특표 제2002-514612호 공보, 일본국 특표 제2002-517474호 공보 및 일본국 특표 제2003-521673호 공보 참조), 유용한 화합물을 효율적으로 발견해낼 수 없는 것이 현상황이다.
한편, 미생물의 배양액으로부터 단리·정제된 천연화합물의 라이브러리로부터는 많은 의약품이나 의약품의 리드 화합물(예를 들어 페니실린, 타크롤리머 스(tacrolimus)(FK-506), 프라바스타틴(pravastatin) 등)이 발견되어 있다. 이와 같이, 천연화합물은 활성의 다양성이나 구조의 독특성을 갖고 있는 점으로부터, 천연화합물의 라이브러리는 리드 화합물을 탐색하는 데 있어 매우 유용하다고 여겨지고 있다.
또한, 천연화합물을 화학적으로 수식한 유도체 중에는 천연화합물보다 생리활성이 우수한 것, 독성이 약한 것 또는 부작용이 적은 것이 발견되어 있어, 천연화합물의 유도체의 라이브러리도 우수한 의약품을 효율적으로 탐색하는 데 있어 유용한 것으로 여겨지고 있고, 따라서, 천연화합물의 유도체를 포함하는 라이브러리의 구축이 요구되고 있다.
발명의 개시
발명이 이루고자 하는 기술적 과제
그러나, 천연화합물은 단리·정제에 시간이 걸릴 뿐만 아니라, 의약품으로서 유용한 리드 화합물을 발견하는 것이 곤란한 점으로부터, 천연화합물이나 그 유도체를 라이브러리화하는 것은 곤란하였다.
또, 라이브러리를 구축하기 위한 천연화합물의 유도체의 합성에 있어서는, 천연화합물을 단리했을 경우, 그 화합물에 적합한 수식 방법을 특정하기 위해서, 그 구조를 분명하게 할 필요가 있고, 또한 유도체를 합성할 때의 반응 조건을 검토할 필요가 있으므로, 유도체의 합성에 시간이 걸린다고 하는 문제가 있었다. 그 때문에 신속한 유도체의 합성 방법의 개발이 요구되고 있다.
그래서, 본 발명은 HTS(High-Throughput)에 의한 랜덤 스크리닝, 의약품 또는 농약물의 탐색, 및 의약품 또는 농약물의 리드 화합물의 탐색 등에 유용한, 천연화합물의 유도체를 합성하는 방법, 천연화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리의 제작 방법 및 천연화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리, 그리고, 화합물 라이브러리를 이용한 스크리닝 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해서, 천연화합물이나 그 유도체를 라이브러리화하는 것을 시도하였다. 우선, 하기 화학식 (1)로 표시되는 화합물을 합성하는 스트렙토마이세스종(Streptomyces sp.) MK929-43F1을 배양한 배양액에 반응 시약으로서 화합물을 산화시키는 존스 시약(Jones' reagent) 또는 화합물을 에폭시화시키는 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 첨가해서 반응시켰다. 그 후, 아세트산 에틸에 의해 배양액으로부터 추출한 추출물을 고속액체크로마토그래피(HPLC)에 의해서 분획하는 한편, 반응 시약과 반응시키지 않은 상기 배양액의 추출물을 HPLC에 의해서 분획하고, 그들의 분리 패턴을 비교함으로써, 반응 시약을 반응시킨 배양액의 추출물에는 포함되어 있고, 반응 시약을 반응시키지 않은 배양액의 추출물에는 포함되어 있지 않은 물질을 동정해서 회수하였다. 이 회수한 물질의 구조를 해석한 결과, 존스 시약을 반응시킨 배양액으로부터는 하기 화학식 (1)로 표시되는 화합물의 산화물(하기 화학식 (2))이 얻어지고, 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 반응시킨 배양액으로부터는 하기 화학식 (1)로 표시되는 화합물이 에폭시화된 화합물(하기 화학식 (3))이 얻어지는 것을 발견하였다.
이 점으로부터, 배양액에 유도체를 합성하기 위한 반응 시약을 첨가하면, 미생물이 생산하는 유기 화합물의 유도체를 신속하게 얻을 수 있는 것이 명확해지고, 이와 같이 해서, 본 발명자들은 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
Figure 112007023585318-PCT00001
즉, 본 발명에 따른 방법은 미생물이 생산하는 유기 화합물의 유도체를 합성하는 방법이며, 상기 미생물을 소정의 배양액을 이용해서 배양하고, 상기 미생물의 배양에 의해 얻어진 유기 화합물과 상기 유기 화합물의 유도체를 합성하기 위한 반응 시약을 상기 배양액 속에서 반응시키는 것을 포함한다. 또한, 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응은 상기 반응 시약을 함유하는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양하는 것에 의해 행해도 되고, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물을 생산시키고, 상기 미생물을 배양한 배양액에 상기 반응 시약을 첨가하는 것에 의해 행해도 된다.
또한, 본 발명에 따른 방법은 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리의 제작 방법이며, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 하는 것을 포함한다.
또, 본 발명에 따른 화합물 라이브러리는 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리이며, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 함으로써 제작할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 스크리닝 방법은 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리를 이용한 생리학적 활성을 지니는 화합물의 스크리닝 방법이며, 상기 화합물 라이브러리는 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 함으로써 제작되는 것을 포함한다.
또, 본 발명에 따른 스크리닝 방법은 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리를 이용한 치료약의 스크리닝 방법이며, 상기 화합물 라이브러리의 개개의 화합물을 인간 이외의 질환 모델 동물에게 투여하고, 상기 화합물의 투여에 의해 상기 질환의 증상이 개선되었는지의 여부를 평가하는 공정을 포함하고, 상기 화합물 라이브러리는 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 함으로써 제작되는 것을 포함한다.
또한, 상기의 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액은 상기의 미생물을 배양하기 위한 배양액이며, 상기의 미생물의 배양을 행하기 전의 배양액이어도, 배양한 후의 배양액이어도 된다. 또, 상기 반응 시약을 함유하는 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물의 회수는 반응 시약을 함유하는 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있는 화합물 및 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에 포함되어 있는 화합물을 각각 분획화(fractionating)함으로써 동정해서 행하는 것으로 해도 된다. 또한, 상기의 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액은 반응 시약을 함유하는 배양액 속에서 미생물을 배양함으로써 유기 화합물과 반응 시약과의 반응을 행하는 것에 의해 얻는 것으로 해도 되지만, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액 속에서 미생물을 배양함으로써 유기 화합물을 생산시켜, 이 미생물이 생산한 유기 화합물을 포함하는 배양액에 반응 시약을 첨가함으로써 유기 화합물과 반응 시약과의 반응을 행하는 것에 의해 얻는 것으로 해도 된다.
또한, 상기 미생물로서는 예를 들어 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이를 생기게 한 돌연변이체(mutant)여도 되지만, 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자 조작을 시행한 형질전환체여도 된다. 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 돌연변이체로서는 예를 들어 자외선조사, X선 조사 혹은 화학약품투여에 의해 인위적으로 변이가 도입된 돌연변이체여도 되지만, 자연돌연변이체(spontaneous mutant)여도 된다.
또, 본 명세서에 있어서 "미생물"이란, 미소한 생물을 의미하며, 예를 들어 고세균류(Archaea), 진정세균류(Eubacteria), 아케조아류(Archaezoa), 원생생물류(Protista), 크로미스타류(Chromista), 균류(Fungi)(진균류) 및 미소한 동식물 등을 포함한다. 고세균류는 별명으로서 시원생물(archaeorganism)이나 원시세균(archaebacteria)이라고도 불리며, 예를 들어 고도호염균, 호열고세균, 메탄(Methane)균(메탄생성 고세균(Methanogens)) 등을 포함한다. 또한, 진정세균류는 예를 들면 대장균, 방선균 등 대부분의 세균이 여기에 포함된다. 아케조아류란 분자효소(과산화소체) 없이도 살 수 있는 진핵생물을 의미하고, 예를 들어 트리코모나스, 엔테로모나스, 옥시모나스, 미포자벌레, 네글레리아(negleria), 디플로모나스 등이 포함된다. 원생생물류란 단핵단세포 생물을 의미하고, 예를 들어 조류(Algae), 물곰팡이류(Saprolegniaceae), 변형균류(Myxomycetes)(진정점균류), 세포성 점균류(Acrasiomycetes) 등이 포함된다. 크로미스타류란 엽록체가 2매의 엽록체막(chloroplast envelope)의 바깥쪽에 더욱 2매의 막이 있어, 합계 4매의 막으로 둘러싸이는 것을 특징으로 하는 생물군을 의미하고, 예를 들면, 하이포키트리디오마이세테스(Hyphochytridiomycetes), 난균(Oomyteces), 라비린툴로진균류(Labyrinthulomycetes) 등이 포함된다. 균류(진균류)는 자낭균류(Ascomycetes), 접합균류(Zygomycetes), 담자균류(Basidiomycetes), 불완전균류(Deuteromycetes) 등을 포함하고, 예를 들면 곰팡이류, 버섯류, 효모류가 이것에 포함된다. 또한, 본 발명의 기술적 범위에 포함되는 미생물이란 여기에 표시된 생물종에 한정되지 않고, 배양 등 상기 생물종과 마찬가지 처리를 할 수 있으면, 어떤 생물종이어도 된다.
상기의 반응 시약으로서는 예를 들면 산화 반응 시약, 환원 반응 시약, 에폭시화 반응 시약, 디하이드록시화 반응 시약, 산화적 개열(oxidative cleavage) 반응 시약, 수소첨가 반응 시약, 에테르화 반응 시약, 할로겐화 반응 시약, 니트로화 반응 시약, 설폰화 반응 시약, 디아조화 반응 시약, 알돌 반응 시약 및 알킬화 반응 시약으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 시약을 이용할 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
여기에서, "반응 시약"이란, 미생물이 생산하는 유기 화합물과 반응하여, 유도체를 합성하는 시약을 의미한다.
특히, "산화 반응 시약", "환원 반응 시약", "에폭시화 반응 시약", "디하이드록시화 반응 시약", "에테르화 반응 시약", "할로겐화 반응 시약", "니트로화 반응 시약", "설폰화 반응 시약", "디아조화 반응 시약", "알킬화 반응 시약"이란, 미생물이 생산하는 유기 화합물과 같은 반응 기질을 각각 산화, 환원, 에폭시화, 디하이드록시화, 에테르화, 할로겐화, 니트로화, 설폰화, 디아조화, 알킬화하는 시약을 의미한다.
또한, "산화적 개열 반응 시약"이란, 유기 화합물을 산화시켜 개열시키는 시약을 의미한다. "수소첨가 반응 시약"이란, 미생물이 생산하는 유기 화합물의 작용기를 수소로 치환하거나, 미생물이 생산하는 유기 화합물에 수소를 부가하거나 하는 시약을 의미한다. 또한, "알돌 반응 시약"이란, 미생물이 생산하는 유기 화합물의 케톤이나 알데히드에 동일 또는 다른 구조를 지니는 케톤이나 알데히드 또는 에스테르 등을 구핵(求核)부가시켜서, 알돌 또는 알돌로부터 용이하게 유도되는 화합물을 생성시키는 시약을 의미한다.
또한, 이들 시약은 상기 작용을 지니는 시약이면 어느 것이라도 되고, 예를 들어, 대상으로 하는 유기 화합물과 직접 반응하는 화합물을 포함하고 있어도, 촉매작용을 지니는 화합물을 포함하고 있어도, 또 양쪽 모두 포함하고 있어도 된다.
관련 문헌에 대한 교차참조
본원은 2004년 9월 27일자로 출원한 일본국 특허출원 제2004-279597호에 의거하는 우선권을 주장한다. 이 문헌을 본 명세서에 원용한다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 있어서 존스 시약 및 아세톤/옥손 모노퍼설페 이트를 반응시키지 않은 스트렙토마이세스종 MK929-43F1의 배양액의 추출물(상단)과, 존스 시약을 반응시킨 스트렙토마이세스종 MK929-43F1의 배양액의 추출물(중단)과, 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 반응시킨 스트렙토마이세스종 MK929-43F1의 배양액의 추출물(하단)과의 분리 패턴을 표시한 도면;
도 2는 본 발명의 일실시예에 있어서 존스 시약을 반응시킨 스트렙토마이세스종 MK929-43F1의 배양액의 추출물에 포함되어 있는 물질의 구조를 1H-NMR에 의해 해석한 결과를 표시한 도면;
도 3은 본 발명의 일실시예에 있어서 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 반응시킨 스트렙토마이세스종 MK929-43F1의 배양액의 추출물에 포함되어 있는 물질의 구조를 1H-NMR에 의해 해석한 결과를 표시한 도면;
도 4는 본 발명의 일실시예에 있어서 마이그라스타틴(Migrastatin) 및 산화마이그라스타틴의 세포 유주(migration) 능력의 저해 활성을 조사한 결과를 표시한 도면;
도 5는 본 발명의 일실시예에 있어서 마이그라스타틴 및 산화마이그라스타틴이 ATP 합성에 대하여 미치는 영향을 조사한 결과를 표시한 도면.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
이하, 상기 지견에 의거해서 완성된 본 발명의 실시형태를, 실시예를 들면서 상세하게 설명한다. 실시형태 및 실시예에 특히 설명이 없을 경우에는 J. Sambrook, E.F. Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F.M. Ausubel, R. Brent, R.E. Kingston, D.D. Moore, J.C. Seidman, J.A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd. 등의 표준적인 프로토콜집에 기재된 방법 혹은 그것을 수식하거나, 개변한 방법을 이용한다. 또, 시판의 시약 키트나 측정 장치를 이용하고 있을 경우에는, 특히 설명이 없을 경우, 그들에 첨부된 프로토콜을 이용한다.
또한, 본 발명의 목적, 특징, 이점 및 그 사상은 본 명세서의 기재에 의해 당업자에게는 명확하므로, 본 명세서의 기재로부터 당업자라면 용이하게 본 발명을 재현할 수 있다. 이하에 기재된 발명의 실시형태 및 구체적인 실시예 등은 본 발명의 바람직한 실시 태양을 나타내는 것으로, 예시 또는 설명을 위해 제시되고 있는 것이며, 본 발명을 그들로 한정하는 것은 아니다. 본 명세서에서 개시되어 있는 본 발명의 의도 및 범위 내에서 본 명세서의 기재에 의거해서, 여러 가지 개변 및 수식을 할 수 있는 것은 당업자에 있어서 명확하다.
우선, 목적으로 하는 유기 화합물의 유도체를 합성하기 위해서, 미생물을 소정의 배양액을 이용해서 배양하고, 미생물의 배양에 의해 얻어진 유기 화합물과, 이 유기 화합물의 유도체를 합성하기 위한 반응 시약을 상기 배양액 속에서 반응시킨다.
본 발명에서 사용하는 미생물은 배양 조건하에서 대사산물로서 유기 화합물을 생산하는 미생물이면, 진균류(널리 곰팡이·버섯·효모류), 세균류(원핵단세포 생물), 변형균류(진정점균)의 어느 것이어도 된다. 예를 들어, 자낭균류(효모, 붉은 빵곰팡이, 페니실륨, 아스페루길루스(Aspergillus), 컵 펑거스(cup fungus), 트루플(truffle) 등), 접합균류(털곰팡이(Mucor), 물방울곰팡이(pilobolus) 등), 담자균류(송이버섯, 목이버섯 등), 불완전균류(보트리티스(botrytis) 등), 주머니균류(Chytridiomycetes) 등의 진균류; 진정세균류(예를 들어, 대장균, 방선균 등), 고세균류 등의 세균류; 변형균류(스테모니티스목(stemonitales) 등) 등에 포함되는 종이면, 속이나 종을 불문한다. 또한, 야생주(wild-type strain) 외에, 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 변이주를 사용함으로써, 미생물이 생산하는 유기 화합물에 다양성을 줄 수도 있다. 이 변이주는 자외선, X선, 화학 약제 등에 의해 인위적으로 변이를 도입한 돌연변이체여도 되고, 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 대하여, 유전자 조작을 실시한 유전자를 도입한 형질전환체여도 되고, 자연돌연변이체여도 된다.
이들 미생물의 배양은 각각의 미생물에 대하여 보통 이용되고 있는 배양 방법에 의해 행하면 된다. 배양에 이용할 수 있는 배양액은 사용하는 미생물이 생육가능한 배지이면 되고, 합성 배지, 반합성 배지 혹은 천연 배지를 이용할 수 있다. 배지에 첨가하는 영양물로서는 미생물의 영양원으로서 공지된 것을 사용할 수 있다. 예를 들면, 탄소원으로서는 시판되고 있는 당밀, 글루코오스, 말토오스, 프럭토오스, 만니톨, 감자전분, 옥수수전분, 덱스트린, 가용성 전분 등의 탄수화물 혹은 유지, 지방류 등을, 질소원으로서는 시판되고 있는 펩톤류, 육류 엑기스류, 옥수수 침지유, 목화씨 깻묵, 낙화 생분, 대두 가루, 효모 엑기스, NZ-아민, 밀 배아, 카제인류, 어분 및 질산나트륨, 질산암모늄 등의 무기 또는 유기의 질소원을 이용할 수 있다. 또, 금속염으로서는 Na, K, Mg, Ca, Zn, Fe, Mn, Co, Cu 등의 황산염, 염산염, 질산염, 인산염, 탄산염 등을 필요에 따라서 첨가할 수 있다. 한층 더 필요에 따라 발린, 로이신, 이소로이신, 페닐알라닌, 트립토판, 메티오닌, 리신, 아르기닌, 글루탐산, 아스파라긴산 등의 아미노산이나, 비타민류, 올레산, 올레산 메틸, 라드유, 실리콘오일, 계면활성제 등의 2차 대사물 생산 촉진 물질 또는 소포제를 적당하게 사용할 수 있다. 이들 이외에도 미생물이 이용하고, 2차 대사산물의 생산에 도움이 되는 것이면, 어떠한 첨가물도 사용할 수 있다. 배양법으로서는 2차 대사산물의 제조 등에 있어서의 미생물 배양법과 마찬가지로 행하면 되고, 그 배양 방법은 고체 배양이라도 액체 배양이라도 된다. 액체 배양의 경우에는 정치 배양, 진탕 배양, 교반 배양의 어느 것을 실시해도 된다.
이러한 배양 조건하에서, 미생물을 배양함으로써, 2차 대사산물인 유기 화합물이 생산된다. 그리고, 배양액 속에서 유기 화합물의 유도체를 합성하기 위한 반응 시약을 이 유기 화합물과 반응시킴으로써, 유기 화합물의 유도체를 얻을 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 유도체는 독특한 구조를 보유한 신규화합물일 가능성이 매우 높고, 또한 천연에는 없는 활성을 지니는 것도 기대할 수 있다.
이하에 반응 종류와 그 반응에 이용되는 시약의 예를 들지만, 2차 대사산물인 유기 화합물의 작용기나 골격을 변환할 수 있는 것이면 되고, 여기에 기재한 반응의 종류나 시약으로 한정되는 것은 아니다. 또한, 각각의 반응을 2 단계 이상 조합시킬 수도 있다.
산화 반응(시약)
1) 알코올의 산화 반응(CrO3-H2SO4(존스 시약), KMnO4, Na2CrO7, NaOCl-TEMPO 등)
2) 벤질 위치 또는 아릴 위치의 산화 반응(CrO3-AcOH, O2/촉매 등)
3) Baeyer-Villiger 반응(과산화물 등)
환원 반응(시약)
4) 카보닐화합물(알데히드 또는 케톤)의 환원 반응(NaBH4, NaBH3CN, LiAlH4, H2/촉매(예를 들면 Rh, Ru, Pd) 등)
에폭시화 반응(시약)
5) 올레핀의 에폭시화 반응(과산(과아세트산, 메타클로로벤조산 등), H2O2／촉매，옥손-아세톤 등)
하이드록실화 반응(시약)
6) 올레핀의 디하이드록시화 반응(OsO4，KMnO4，R－CO3H／H＋ 등)
산화적 개열반응 (시약)
7) 올레핀의 산화적 개열반응(03，NaIO4 등)
수소 첨가반응(시약)
8) 올레핀의 수소 첨가반응(H2／Pd 또는 Pt，라니(Raney) Ni 등)
에테르화 반응(시약)
9) 알콜의 에테르화 반응((CH3)2SO4，ICH2CO2H，N－에틸말레이미드)
할로겐화 반응(시약)
10) 방향족이나 올레핀의 할로겐화 반응(F2，XeF2，C12，Br2，I2，HCl，HBr，HOCl)
니트로화 반응(시약)
11) 방향족의 니트로화(HNO3／H2SO4)
설폰화 반응(시약)
12) 방향족의 설폰화 반응(SO3／H2SO4)
디아조화 반응 시약
13) 아민의 디아조화 반응(NaNO2／H＋)
알돌반응 시약
14) 알돌반응(루이스산／실릴 에놀 에테르)
알킬화 반응 시약
15) 케톤의 알킬화 반응(R－MgX, RLi)
16) 카보닐의 α위치의 알킬화 반응(염기／R－X)
이들 반응 시약과 2차 대사 산물인 유기화합물을 배양액 속에서 반응시키기 위해서는, 미리 첨가된 반응 시약을 함유하는 배양액 속에서 미생물을 배양해도 되 고, 또, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액 속에서 미생물을 배양하고, 이 미생물을 배양한 배양액에 반응 시약을 첨가해도 된다. 배양 후에 반응 시약을 첨가하는 후자의 방법에는 예를 들면 미생물 배양액에 그대로 합성 시약을 첨가하는 방법이나, 미생물을 포함하는 미생물 배양액 또는 원심분리 혹은 배양물에 여과 조제를 첨가하여 여과해서 얻어진 배양 여과액에 아세트산 에틸, 클로로포름, 벤젠, 톨루엔, 에테르 등의 물과 혼화되지 않는 유기용제를 첨가해서 얻어진 추출액에 합성 시약을 첨가해서 합성 반응을 행하는 방법 등이 있다.
이와 같이, 미생물이 생산하는 유기 화합물을 여러 가지 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 유기 화합물의 유도체를 회수함으로써, 화합물 라이브러리를 제작할 수 있다. 예를 들어, 반응 시약을 함유하는 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 동정해서 회수하면, 유기 화합물의 유도체가 농축된 라이브러리를 제작할 수 있다. 특히, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액으로서, 미생물을 배양하기 전의 배양액을 사용함으로써, 라이브러리에 미생물이 생산하는 유기 화합물의 유도체뿐만 아니라, 유기 화합물 자체를 포함시킬 수 있다. 또, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액으로서, 미생물을 배양한 후이지만 반응 시약을 첨가하지 않은 배양액을 사용함으로써, 주로 미생물이 생산하는 유기 화합물의 유도체를 동정할 수 있고, 그러한 유도체를 높은 빈도로 포함하는 라이브러리를 제작할 수 있다.
미생물이 생산한 유기 화합물 및/또는 유기 화합물의 유도체를 동정하여, 단 리하는 방법으로서는 예를 들어 실리카겔, ODS, 토요펄(Toyopeal) HW-40 등을 이용한 컬럼크로마토그래피, 원심액-액체 분배크로마토그래피, 박층크로마토그래피, 고속액체크로마토그래피(HPLC) 등의 상법이 있다. 이들 방법을 이용해서, 반응 시약을 함유하는 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있는 화합물과, 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에 포함되어 있는 화합물을 각각 분획하고, 그들 분획 패턴을 비교함으로써, 회수해야 할 유기 화합물 및/또는 유기 화합물의 유도체를 동정할 수 있고, 또 단리도 용이하게 행할 수 있다.
또한, 회수한 화합물은 목적에 따라 혼합해서 이용해도 되고, 또한 각각 사용해도 된다. 예를 들면 생리활성이 있는 화합물을 동정하기 위해, 개개의 화합물을 분석하는 데 수고를 요할 경우, 이하와 같은 방법을 이용하면 된다. 우선, 라이브러리를 몇 개의 풀(pool)로 나누고, 그 중에서 활성을 지니는 풀을 동정한다. 또한, 그 풀에 포함되는 화합물을 몇 개의 서브풀(subpool)로 나누고, 마찬가지로, 활성이 있는 서브풀을 동정한다. 이것을 반복함으로써, 적은 분석 횟수로 목적으로 하는 화합물을 동정하는 것이 가능해진다.
라이브러리의 구성요소로 하는 화합물은 매스스펙트럼, 다중 매스스펙트럼, 자외 및 가시흡수스펙트럼, 프로톤(proton) 핵자기공명 스펙트럼, 탄소-13 핵자기공명 스펙트럼, 적외부 흡수스펙트럼, X선 결정 스펙트럼 등을 이용한 공지의 구조해석방법, 또는 이들을 조합시킨 방법에 의해 구조를 결정할 수 있다. 이렇게 해서 구조를 결정한 화합물은 감압 하에 건조 고형화해서 냉암소, 예를 들어 냉장고에서 보존할 수 있다.
이 라이브러리를 이용해서, 생리학적 활성을 지니는 화합물을 얻는 것을 목적으로 여러 가지 스크리닝을 행할 수 있다. 상기 생리학적 활성을 지니는 화합물로서는 예를 들면 효소 저해제, 리간드/수용체 결합 저해제, 혈관신생작용 저해제, 세포접착 저해제, 유전자 발현 저해제, 증식인자형상 활성물질 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 효소 저해제는 예를 들면 티로신 키나제 저해제, 사이클로옥시게나제(COX) 저해제, 텔로메라제 저해제, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제, 프로스타글란딘D 합성 저해제, 포스포디에스테라제 저해제, 콜린에스테라제 저해제, 바이러스 프로테아제 저해제, 역전사효소 저해제 등이다. 또한, 상기 수용체는 예를 들면 아드레날린 수용체, 히스타민 수용체, 로이코트리엔 수용체, 오피오이드 수용체 등이다.
실시예
이하, 실시예 및 도면을 이용해서 더욱 상세하게 설명한다. 또한, 실시예에 있어서, 핵자기공명 스펙트럼(1H-NMR 및 13C-NMR)은 JNM-AL300(일본전자 제품)을 이용해서 측정하였다. 또한 각 반응은 특히 기재되지 않는 한, 아르곤 속에서 반응을 행하였다.
[ 실시예 1]
상기 화학식 (1)로 표현되는 화합물(마이그라스타틴)을 합성하는 스트렙토마이세스속 MK929 -43F1을 배양액(2％ 덱스트린, 2％ 글리세롤, 1％ 소이펩톤, 0.3％ 효모엑기스, 0.2％ 황산암모늄, 0.2％ 탄산칼슘, pH 7.4) 속에서 27℃，4일간 배양하고, 원심분리에 의해 상청액을 얻었다. 얻어진 배양 상청액 60 ㎕에 164 ㎎/㎖ 존스 시약 30 ㎕를 첨가하고, 25 ℃에서 1분간 교반하였다. 또한, 대조군으로서, 존스 시약을 첨가하지 않는 여과액을 준비하였다. 교반 후, 포화 탄산수소나트륨 수용액 180 ㎕를 첨가하여, 중화하고, 아세트산 에틸 720 ㎕에 의해서 추출하였다. 그 후, 추출물을 감압 농축해서 건조시켜, 건조 고형물을 메탄올 300 ㎕에 용해시키고, 얻어진 조(糟)생성물을 고속액체크로마토그래피(칼럼; SenshuPAK ODS C18150 ㎜×4.6φ, 용출계; 아세토니트릴:물 = 150:50)에 의해서 분리하고, UV 검출기(시마즈제작소사 제품, UV 220 ㎚)에 의해서 분리 패턴을 얻었다(도 1 참조). 이들 분리 패턴을 비교하여, 존스 시약을 반응시킨 배양액의 추출물에는 포함되고 있고, 존스 시약을 반응시키지 않은 배양액의 추출물에는 포함되어 있지 않은 물질을 동정해서 회수하고, 이 물질의 구조를 NMR에 의해 해석한 바(도 2 참조), 화학식 (1)로 표시되는 화합물의 산화물(상기 화학식 (2)로 표시되는 화합물: 산화마이그라스타틴)인 것을 알 수 있었다. 이와 같이, 존스 시약을 사용함으로써, 유기 화합물의 산화물을 얻을 수 있었다.
[ 실시예 2]
실시예 1의 여과액 60 ㎕로부터 아세트산 에틸 720 ㎕에 의해 추출한 추출물을 감압 농축해서 건조시켜, 얻어진 건조 고형물을 아세톤 100 ㎕에 용해시켰다. 그 후, NaHCO3 1 ㎎을 가해서 포화시키고, 더욱 20 ㎎/㎖ 옥손 모노퍼설페이트(아세 톤에 용해) 100 ㎕를 첨가하여, 실온에서 3시간 교반하였다. 또한, 대조군으로서, 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 첨가하지 않는 용액을 준비하였다. 교반 후, 아세트산 에틸 600 ㎕에 의해서 추출하고, 추출물을 감압 농축해서 건조시켜, 건조 고형물을 메탄올 300 ㎕에 용해시키고, 얻어진 조생성물을 고속액체크로마토그래피(칼럼; SenshuPAK ODS C18150 ㎜×4.6φ, 용출계; 아세트니트릴:물 = 150:50)에 의해서 분리하고, UV 검출기(시마즈제작소사 제품, UV 220 ㎚)에 의해서 분리 패턴을 얻었다(도 1 참조). 이들 분리 패턴을 비교하여, 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 반응시킨 배양액의 추출물에는 포함되고 있고, 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 반응시키지 않은 배양액의 추출물에는 포함되어 있지 않은 물질을 동정해서 회수하고, 이 물질의 구조를 NMR에 의해 해석한 바(도 3 참조), 화학식 (1)로 표시되는 화합물이 에폭시화된 화합물(상기의 화학식 (3)으로 표시되는 화합물: 에폭시마이그라스타틴)인 것을 알 수 있었다. 이와 같이, 아세톤/옥손 모노퍼설페이트를 사용함으로써, 유기 화합물이 에폭시화된 화합물을 얻을 수 있었다.
[ 실시예 3]
종래, 마이그라스타틴이 종양 세포의 유주 능력을 저해하는 것이 알려져 있다. 그래서, 실시예 1에서 얻어진 산화마이그라스타틴이 종양 세포의 유주 능력을 저해할 수 있는지의 여부를 확인하기 위해서 이하의 실험을 행하였다.
48 웰 플레이트의 각 웰에, 인간 식도암 유래 EC17세포의 현탁액(1.5×105 개/㎖; RPMI1640배지(닛스이사 제품))을 500 ㎕씩 첨가하고, 37 ℃에서 24시간 배 양하였다. 그 후, 각 웰의 밑면의 중앙을 일직선으로 마이크로피펫 선단으로 흠집을 내고, 세포를 직선상으로 벗겼다. 그 후, 즉시 배양 상청액을 제거하고, PBS-(8g/ℓ NaCl, 0.2g/ℓ KCl, 0.916g/ℓ Na2HPO4, 0.02g/ℓ KH2PO4) 300 ㎕에서 세포가 벗겨지지 않도록 주의하면서 세정해서 1％의 혈청(FBS; Tissue Culture Biologicals사 제품)을 포함하는 RPMI1640 배지 500 ㎕를 주의해서 주입하였다. 여기에 마이그라스타틴 또는 산화마이그라스타틴을 첨가하고, 37 ℃에서 24시간 배양하였다. 또한, 대조군으로서, 마이그라스타틴 또는 산화마이그라스타틴을 첨가하지 않은 배양액에서 배양한 것도 준비하였다. 배양 후, 현미경하에서 관찰하고, 마이크로피펫 선단에 의해 흠집을 낸 손상부가 주위에서 이동(즉, 유주)해온 세포에 의해 어느 정도 매립되었는지를 확인하고, 세포의 유주 능력을 평가하였다. 그 결과를 도 4에 표시하였다.
도 4에 표시한 바와 같이, 대조군에서는 EC17 세포의 배양 플레이트에 흠집을 내고(O 시간), 24시간 배양하면 세포가 이동해서 그 손상부가 매립되지만, 흠집을 냄과 동시에(O 시간), 마이그라스타틴을 첨가하면, 농도의존적으로 세포의 유주 능력이 저해되어, 30 ㎍/㎖의 농도에서는 완전하게 저해되는 것을 알 수 있었다. 또한, 흠집을 냄과 동시에 산화마이그라스타틴을 첨가한 경우도 거의 같은 농도 영역에서 마이그라스타틴과 마찬가지의 저해 효과를 나타냈다.
이상의 내용으로부터, 마이그라스타틴의 유도체인 산화마이그라스타틴도 마이그라스타틴과 마찬가지로 종양 세포의 유주 능력을 저해할 수 있는 것으로 밝혀 졌다. 또한, 어느 화합물의 유도체가 원래의 화합물과 같은 활성을 지니는 경우가 있는지 밝혀졌다.
[ 실시예 4]
다음에, 마이그라스타틴이 갖는 ATP 합성의 억제 작용을 산화마이그라스타틴도 갖는지의 여부를 확인하기 위해서 이하의 실험을 행하였다.
24 웰 플레이트의 각 웰에 인간 대장암 유래의 HT-29 세포의 현탁액(4×105 개/㎖; RPMI1640 배지)을 1 ㎕씩 첨가하고, 37 ℃에서 24시간 배양하였다. 그 후, 마이그라스타틴 또는 산화마이그라스타틴을 첨가하고, 3시간 배양하였다. 또한, 대조군으로서, 마이그라스타틴 또는 산화마이그라스타틴을 첨가하지 않고 배양한 배양액도 준비하였다. 배양 후, 빙냉시킨 PBS-로 2회 세정한 후, 2％ 트리클로로 아세트산을 200 ㎕ 첨가하고, 4 ℃에서 30분 정치하였다. 이 상청액 160 ㎕에 대하여, 0.5N NaOH를 36.8 ㎕ 첨가해서 중화시킨 것을 샘플로 하였다. 4mM MgCl2을 함유하는 PBS- 3 ㎖에 이 샘플을 160 ㎕ 첨가하고, 이것에 24 ㎎/㎖ 루시페라제 루시페린(luciferin)(Sigma사 제품)을 40 ㎕ 첨가하고, 즉시 액체 신틸레이션 카운터(scintillation counter)(LS-5000TD: BECKMAN COULTER)의 싱글-포톤 모니터(single-photon monitor)에서 ATP량을 측정하였다. 또한, 블랭크 값은 샘플 및 루시페라제 루시페린을 첨가하지 않은 조건에서 측정하고, 모든 데이터로부터 감산하였다. 그 결과를 도 5에 나타낸다.
도 5에 표시한 바와 같이 마이그라스타틴이 세포 유주를 저해하는 농도영역에서 ATP 합성을 억제하지만, 산화마이그라스타틴은 그 농도영역에서 ATP 합성을 전혀 억제하지 않는 것이 밝혀졌다. 이것으로부터, 마이그라스타틴의 하이드록실기를 산화시키면, ATP 합성의 억제 작용이 없어지는 것을 알 수 있었다. 또한, 마이그라스타틴의 하이드록실기 부분이 ATP 합성의 억제 작용에 중요한 것으로 시사되었다. 이상의 점으로부터, 어떤 화합물의 유도체가 원래의 화합물의 활성을 지니지 않을 경우가 있는 것이 밝혀졌고, 이것은 본 발명에 따른 스크리닝 방법이 예를 들면 부작용을 지니지 않는 화합물을 얻는 등, 다른 활성을 지니는 화합물을 얻는 데도 기여하는 것으로 시사되었다.
본 발명에 의하면, HTS에 의한 랜덤 스크리닝, 의약품 또는 농약물의 탐색 및 의약품 또는 농약물의 리드 화합물의 탐색 등에 유용한, 미생물 생산 물질의 유도체를 합성하는 방법, 미생물 생산 물질의 유도체를 포함하는 라이브러리의 제작 방법 및 미생물 생산 물질의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리, 그리고, 화합물 라이브러리를 이용한 스크리닝 방법을 제공할 수 있다.

Claims (63)

  1. 미생물이 생산하는 유기 화합물의 유도체를 합성하는 방법에 있어서,
    상기 미생물을 소정의 배양액을 이용해서 배양하는 단계; 및
    상기 미생물의 배양에 의해 얻어진 유기 화합물과, 상기 유기 화합물의 유도체를 합성하기 위한 반응 시약을 상기 배양액 속에서 반응시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써, 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약을 반응시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물을 생산시키고;
    상기 미생물을 배양한 배양액에 상기 반응 시약을 첨가함으로써, 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약을 반응시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 미생물은 자외선 조사, X선 조사 혹은 화학약품투여에 의해 인위적으로 변이를 도입한 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 4항에 있어서, 상기 미생물은 자연돌연변이체(spontaneous mutant)인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자 조작을 실시한 형질전환체인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 고세균류(Archaea), 진정세균류(Eubacteria), 원생생물류(Protista) 및 균류(Fungi)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 자낭균류(Ascomycetes), 접합균류(Zygomycetes), 담자균류(Basidiomycetes), 불완전균류(Deuteromycetes), 변형균류(Myxomycetes) 및 세포성 점균류(Acrasiomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 방선균인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약은 산화 반응 시약, 환원 반응 시약, 에폭시화 반응 시약, 디하이드록시화 반응 시약, 산화적 개열(oxidative cleavage) 반응 시약, 수소첨가 반응 시약, 에테르화 반응 시약, 할로겐화 반응 시약, 니트로화 반응 시약, 설폰화 반응 시약, 디아조화 반응 시약, 알돌 반응 시약 및 알킬화 반응 시약으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 시약인 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리의 제작 방법에 있어서,
    상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하는 단계; 및
    상기 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액은 상기 미생물을 배양한 배양액인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 12항 또는 제 13항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있는 화합물 및 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에 포함되어 있는 화합물을 각각 분획화함으로써, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 동정해서 회수하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 12항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하고, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 12항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물을 생산시키고,
    상기 미생물이 생산한 상기 유기 화합물을 포함하는 배양액에 상기 반응 시약을 첨가함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 12항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 17항에 있어서, 상기 미생물은 자외선 조사, X선 조사 혹은 화학약품투여에 의해 인위적으로 변이를 도입한 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 17항에 있어서, 상기 미생물은 자연돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 12항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자 조작을 실시한 형질전환체인 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제 12항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 고세균류, 진정세균류, 원생생물류 및 균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제 12항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 자낭균류, 접 합균류, 담자균류, 불완전균류, 변형균류 및 세포성 점균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 12항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 방선균인 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 12항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약은 산화 반응 시약, 환원 반응 시약, 에폭시화 반응 시약, 디하이드록시화 반응 시약, 산화적 개열반응 시약, 수소첨가 반응 시약, 에테르화 반응 시약, 할로겐화 반응 시약, 니트로화 반응 시약, 설폰화 반응 시약, 디아조화 반응 시약, 알돌 반응 시약 및 알킬화 반응 시약으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 시약인 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리에 있어서,
    상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 함으로써 제작하는 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  26. 제 25항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액은 상기 미생물을 배양한 배양액인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  27. 제 25항 또는 제 26항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있는 화합물 및 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에 포함되어 있는 화합물을 각각 분획화함으로써, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 동정해서 회수하는 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  28. 제 25항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  29. 제 25항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물을 생산시키고,
    상기 미생물이 생산한 상기 유기 화합물을 포함하는 배양액에 상기 반응 시약을 첨가함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  30. 제 25항 내지 제 29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  31. 제 30항에 있어서, 상기 미생물은 자외선 조사, X선 조사 혹은 화학약품투여에 의해 인위적으로 변이를 도입한 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  32. 제 30항에 있어서, 상기 미생물은 자연돌연변이체인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  33. 제 25항 내지 제 29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자 조작을 시행한 형질전환체인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  34. 제 25항 내지 제 33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 고세균류, 진정세균류, 원생생물류 및 균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속 하는 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  35. 제 25항 내지 제 33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 자낭균류, 접합균류, 담자균류, 불완전균류, 변형균류 및 세포성 점균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  36. 제 25항 내지 제 33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 방선균인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  37. 제 25항 내지 제 36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약은 산화 반응 시약, 환원 반응 시약, 에폭시화 반응 시약, 디하이드록시화 반응 시약, 산화적 개열반응 시약, 수소첨가 반응 시약, 에테르화 반응 시약, 할로겐화 반응 시약, 니트로화 반응 시약, 설폰화 반응 시약, 디아조화 반응 시약, 알돌 반응 시약 및 알킬화 반응 시약으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 시약인 것을 특징으로 하는 화합물 라이브러리.
  38. 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리를 이용한 생리학적 활성을 지니는 화합물의 스크리닝 방법에 있어서,
    상기 화합물 라이브러리는 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 함으로써 제작되는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  39. 제 38항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액은 상기 미생물을 배양한 배양액인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  40. 제 38항 또는 제 39항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있는 화합물 및 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에 포함되어 있는 화합물을 각각 분획화함으로써, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 동정해서 회수하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  41. 제 38항 내지 제 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  42. 제 38항 내지 제 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으 로 함유하지 않는 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물을 생산시키고,
    상기 미생물이 생산한 상기 유기 화합물을 포함하는 배양액에 상기 반응 시약을 첨가함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  43. 제 38항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  44. 제 43항에 있어서, 상기 미생물은 자외선 조사, X선 조사 혹은 화학약품투여에 의해 인위적으로 변이를 도입한 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  45. 제 43항에 있어서, 상기 미생물은 자연돌연변이체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  46. 제 38항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자 조작을 실시한 형질전환체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  47. 제 38항 내지 제 46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 고세균류, 진정세균류, 원생생물류 및 균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  48. 제 38항 내지 제 46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 자낭균류, 접합균류, 담자균류, 불완전균류, 변형균류 및 세포성 점균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  49. 제 38항 내지 제 46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 방선균인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  50. 제 38항 내지 제 49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약은 산화 반응 시약, 환원 반응 시약, 에폭시화 반응 시약, 디하이드록시화 반응 시약, 산화적 개열반응 시약, 수소첨가 반응 시약, 에테르화 반응 시약, 할로겐화 반응 시약, 니트로화 반응 시약, 설폰화 반응 시약, 디아조화 반응 시약, 알돌 반응 시약 및 알킬화 반응 시약으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 시약인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  51. 미생물이 생산하는 유기 화합물을 반응 시약과 반응시킴으로써 합성되는 상기 유기 화합물의 유도체를 포함하는 화합물 라이브러리를 이용한 치료약의 스크리닝 방법에 있어서,
    상기 화합물 라이브러리의 개개의 화합물을 인간 이외의 질환 모델 동물에게 투여하고, 상기 화합물의 투여에 의해 상기 질환의 증상이 개선되었는지의 여부를 평가하는 공정을 포함하고,
    상기 화합물 라이브러리는 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 회수하고, 이 회수한 화합물을 상기 화합물 라이브러리의 구성요소로 함으로써 제작되는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  52. 제 51항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액은 상기 미생물을 배양한 배양액인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  53. 제 51항 또는 제 52항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있는 화합물 및 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에 포함되어 있는 화합물을 각각 분획화함으로써, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액에 포함되어 있지만, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액에는 포함되어 있지 않은 화합물을 동정해서 회수하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  54. 제 51항 내지 제 53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  55. 제 51항 내지 제 53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약을 실질적으로 함유하지 않는 배양액 속에서 상기 미생물을 배양함으로써 상기 유기 화합물을 생산시키고,
    상기 미생물이 생산한 상기 유기 화합물을 포함하는 배양액에 상기 반응 시약을 첨가함으로써 상기 유기 화합물과 상기 반응 시약과의 반응을 행하여, 상기 반응 시약을 함유하는 상기 미생물을 배양한 배양액을 얻는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  56. 제 51항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자에 변이가 생긴 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  57. 제 56항에 있어서, 상기 미생물은 자외선 조사, X선 조사 혹은 화학약품투여에 의해 인위적으로 변이를 도입한 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방 법.
  58. 제 56항에 있어서, 상기 미생물은 자연돌연변이체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  59. 제 51항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 상기 유기 화합물의 생산 과정에 관여하는 유전자 조작을 실시한 형질전환체인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  60. 제 51항 내지 제 59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 고세균류, 진정세균류, 원생생물류 및 균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  61. 제 51항 내지 제 59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 자낭균류, 접합균류, 담자균류, 불완전균류, 변형균류 및 세포성 점균류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 류에 속하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  62. 제 51항 내지 제 59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 방선균인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
  63. 제 51항 내지 제 62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응 시약은 산화 반응 시약, 환원 반응 시약, 에폭시화 반응 시약, 디하이드록시화 반응 시약, 산화적 개열 반응 시약, 수소첨가 반응 시약, 에테르화 반응 시약, 할로겐화 반응 시약, 니트로화 반응 시약, 설폰화 반응 시약, 디아조화 반응 시약, 알돌 반응 시약 및 알킬화 반응 시약으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 시약인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법.
KR1020077006827A 2004-09-27 2005-09-27 유도체의 합성 방법, 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법,그리고, 스크리닝 방법 KR20070057865A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2004-00279597 2004-09-27
JP2004279597A JP3916166B2 (ja) 2004-09-27 2004-09-27 化合物ライブラリーの作製方法、並びに、スクリーニング方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20070057865A true KR20070057865A (ko) 2007-06-07

Family

ID=36118916

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077006827A KR20070057865A (ko) 2004-09-27 2005-09-27 유도체의 합성 방법, 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법,그리고, 스크리닝 방법

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20080167201A1 (ko)
EP (1) EP1795603A1 (ko)
JP (1) JP3916166B2 (ko)
KR (1) KR20070057865A (ko)
CN (1) CN101027405A (ko)
CA (1) CA2581254A1 (ko)
WO (1) WO2006035770A1 (ko)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2639737B2 (ja) * 1990-01-23 1997-08-13 寳酒造株式会社 新規ｒ１０６類化合物
ES2087277T3 (es) * 1990-09-20 1996-07-16 Monsanto Co Procedimiento para producir 1-desoxinojirimicina n-sustituida.
US5189042A (en) * 1991-08-22 1993-02-23 Merck & Co. Inc. Fluoromacrolides having immunosuppressive activity

Also Published As

Publication number Publication date
US20080167201A1 (en) 2008-07-10
JP3916166B2 (ja) 2007-05-16
EP1795603A1 (en) 2007-06-13
CA2581254A1 (en) 2006-04-06
WO2006035770A1 (ja) 2006-04-06
JP2006087392A (ja) 2006-04-06
CN101027405A (zh) 2007-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chiang et al. An efficient system for heterologous expression of secondary metabolite genes in Aspergillus nidulans
Watrous et al. Capturing bacterial metabolic exchange using thin film desorption electrospray ionization-imaging mass spectrometry
Kim et al. Identification of Azadinium species and a new azaspiracid from Azadinium poporum in Puget Sound, Washington State, USA
Müller et al. Application of cell culture for the production of bioactive compounds from sponges: synthesis of avarol by primmorphs from Dysidea avara
Zhang et al. Heterologous and engineered biosynthesis of nematocidal polyketide–nonribosomal peptide hybrid macrolactone from extreme thermophilic fungi
Houdai et al. Acetate labeling patterns of dinoflagellate polyketides, amphidinols 2, 3 and 4
EP2509967B1 (en) Novel 24-membered cyclooctadepsipeptides from fungal strains and their use as anthelmintics or endoparasiticides
Alvi et al. Pulchellalactam: A CD45 protein tyrosine phosphatase inhibitor from the marine fungus Corollospora pulchella
Ogasawara et al. Expanding our understanding of sequence-function relationships of type II polyketide biosynthetic gene clusters: bioinformatics-guided identification of Frankiamicin A from Frankia sp. EAN1pec
Zhang et al. 4-Hydroxy pyridones from heterologous expression and cultivation of the native host
Stodůlková et al. Biologically active metabolites produced by the basidiomycete Quambalaria cyanescens
Zadlo et al. Mixed carbonates as useful substrates for a fluorogenic assay for lipases and esterases
Raoof et al. Synthesis of metabolites of paracetamol and cocaine via photooxidation on TiO2 catalyzed by UV light
Liu et al. Molecular networking-based for the target discovery of potent antiproliferative polycyclic macrolactam ansamycins from Streptomyces cacaoi subsp. asoensis
Rosazza et al. Microbial models of mammalian metabolism O-demethylations of papaverine
St Leger et al. Calcium-and calmodulin-mediated protein synthesis and protein phosphorylation during germination, growth and protease production by Metarhizium anisopliae
WO2001073134A3 (en) Gene profiling arrays
Wsól et al. High-performance liquid chromatographic assay for the separation and characterization of metabolites of the potential cytostatic drug oracine
Minns et al. Fuligopyrones from the fruiting bodies of myxomycete Fuligo septica offer short-term protection from abiotic stress induced by UV radiation
Costa et al. Selection of filamentous fungi of the Beauveria genus able to metabolize quercetin like mammalian cells
KR20070057865A (ko) 유도체의 합성 방법, 화합물 라이브러리 및 그 제작 방법,그리고, 스크리닝 방법
EP1767644B1 (en) Microbial strains producing sphingosine
Li et al. Metabolite generation via microbial biotransformations with Actinomycetes: rapid screening for active strains and biosynthesis of important human metabolites of two development-stage compounds, 5-[(5S, 9R)-9-(4-cyanophenyl)-3-(3, 5-dichlorophenyl)-1-methyl-2, 4-dioxo-1, 3, 7-triazaspiro [4.4] non7-yl-methyl]-3-thiophenecarboxylic acid (BMS-587101) and dasatinib
Rodríguez Martín-Aragón et al. OSMAC Approach and Cocultivation for the Induction of Secondary Metabolism of the Fungus Pleotrichocladium opacum
US5605820A (en) Production of strains having biological activities by sexual crosses between vegetatively incompatible strains of Aspergillus nidulans

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid