CN101027302A - 吡咯并吡啶激酶调节剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了新的吡咯并吡啶激酶调节剂以及使用该新的吡咯并吡啶激酶调节剂治疗由激酶活性介导的疾病的方法。
Description
相关申请的交叉参考
本申请要求2004年7月27日提交的美国临时专利申请号60/591,888、2004年7月27日提交的美国临时专利申请号60/591,887和2005年5月19日提交的美国临时专利申请号60/683,510的权益，在本文中将它们全文引入作为参考。
发明背景
哺乳动物的蛋白激酶是细胞功能的重要调节剂。由于蛋白激酶活性的功能障碍与多种疾病和病症有关，所以蛋白激酶是药物开发的目标。
已经证实酪氨酸激酶受体、FMS-样酪氨酸激酶3(FLT3)与癌症，包括白血病、诸如急性骨髓性白血病(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)以及脊髓发育不良有关。约四分之一至三分之一的AML患者具有可导致激酶和下游信号通道的组成型激活的FLT3突变。尽管在正常人中，FLT3主要通过正常的骨髓和淋巴祖细胞进行表达，但是FLT3在70-80％AML和ALL患者的白血病细胞内进行表达。已报道了靶向于FLT3的抑制剂对表达突变的和/或组成型激活的FLT3的白血病细胞是有毒的。因此，需要开发可用于治疗疾病和病症诸如白血病的FLT3抑制剂。
Abelson非受体酪氨酸激酶(c-Abl)通过其底物蛋白的磷酸化作用而参与信号传导过程。在细胞中，c-Abl穿梭于细胞质和细胞核之间，并且它的活性通常通过多种不同的机制严密地进行调节。已发现Abl参与控制生长因子和整联蛋白的信号传导、细胞周期、细胞分化和神经发生、细胞凋亡、细胞粘着、细胞骨架结构和对DNA损伤和氧化应激的响应。
c-Abl蛋白含有约1150个氨基酸残基，这些氨基酸残基形成了N-末端cap结构域、SH3和SH2结构域、酪氨酸激酶结构域、核定位序列、DNA-结合结构域和肌动蛋白结合结构域。
慢性骨髓性白血病(CML)与染色体9和22之间的费城染色体易位有关。该易位在bcr基因和编码c-Abl的基因之间产生异常融合。所形成的Bcr-Abl融合蛋白具有组成型激活的酪氨酸激酶活性。升高的激酶活性据报道是CML的主要致病因素，并且与细胞转化、生长因子依赖性的丧失和细胞增殖有关。
2-苯基氨基嘧啶化合物伊马替尼(imatinib，也被称作STI-571、CGP57148或Gleevec)已被确定是Bcr-Abl以及两种其它酪氨酸激酶、即c-kit和血小板衍生的生长因子受体的特异性和有效的抑制剂。伊马替尼阻止这些蛋白质的酪氨酸激酶活性。伊马替尼被报道为是治疗CML的所有阶段的有效治疗剂。然而，即使用伊马替尼持续进行治疗，大部分晚期或原始细胞危象CML患者也会出现复发，这是因为产生了对药物的抗药性。通常，这种抗药性的分子基础是出现了Bcr-Abl的激酶结构域的伊马替尼抗药性突变体。导致这种突变的最常见的氨基酸取代包括Glu255Lys、Thr315Ile、Tyr293Phe和Met351Thr。
MET最初被确定为在用N-甲基-N′-硝基-亚硝基胍处理的人骨肉瘤细胞系中的转化DNA重排(TPR-MET)(Cooper等人1984)。MET受体酪氨酸激酶(也被称作肝细胞生长因子受体、HGFR、MET或c-Met)及其配体肝细胞生长因子(″HGF″)具有多种生物学活性，包括刺激增殖、存活、分化和形态发生、分支管的形成(branching tubulogenesis)、细胞活力和侵入性生长。在病理学上，已发现MET与多种不同形式的癌症的生长、侵入和转移有关，包括肾癌、肺癌、卵巢癌、肝癌和乳腺癌。已在人类的癌转移和散发性癌症诸如乳头状肾细胞癌中发现了MET的体细胞、激活性突变。越来越多的证据表明MET是人们长期以来一直在寻找的控制向转移瘤发展的致癌基因之一，因此是一个非常令人感兴趣的靶点。除了癌症之外，还有证据表明抑制MET可用于治疗各种适应症，包括：李斯特菌属的侵入、与多发性骨髓瘤有关的骨质溶解、疟疾感染、糖尿病性视网膜病、牛皮癣和关节炎。
酪氨酸激酶RON是巨噬细胞刺激蛋白质的受体，并且属于受体酪氨酸激酶的MET家族。与MET一样，RON涉及多种不同形式的癌症的生长、侵入和转移，包括胃癌和膀胱癌。
丝氨酸/苏氨酸激酶的Aurora家族对于有丝分裂的进行是必不可少的。在细胞周期过程中，Arurora激酶的表达和活性受到严密的调节。在细胞分裂过程中起作用的多种蛋白质已被确定是Aurora激酶的底物。基于Aurora激酶的已知功能，其活性的抑制据信可以中断细胞周期和阻断增殖，从而抑制肿瘤细胞的生存能力。Harrington等人，Nature Medicine，最新在线发表(2004)。
3-磷酸肌醇依赖型激酶1(PDK1)是可磷酸化和激活AGC激酶超家族中的许多激酶的Ser/Thr蛋白激酶，所述AGC激酶超家族包括Akt/PKB、蛋白激酶C(PKC)、PKC相关激酶(PRK1和PRK2)、p70核糖体S6-激酶(S6K1)以及血清和糖皮质激素调节的激酶(SGK)。首先确认的PDK1底物是原癌基因Akt。许多研究已发现高水平的活化Akt存在于高百分比(30-60％)的常见肿瘤类型中，包括黑瘤和乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、血液癌和卵巢癌。因此，PDK1/Akt信号通道代表了开发可用于治疗癌症的小分子抑制剂的有吸引力的靶点。Feldman等人，JBC Papers in Press。在2005年3月16日以手稿M501367200的形式出版。
由于激酶涉及多种疾病和状况、诸如癌症，所以需要开发新的、有效的可用于治疗的蛋白激酶调节剂。本发明满足了本领域的这些和其它需要。尽管在本文中具体地指定了某些蛋白激酶，但本发明不限于这些激酶的调节剂，并且在其范围内包括相关蛋白激酶的调节剂和同源蛋白质的调节剂。
发明概述
现在已令人惊奇地发现，本发明的吡咯并吡啶化合物可用于调节激酶活性，并且可用于治疗激酶活性所介导的疾病。这些新的吡咯并吡啶激酶调节剂在下面有详细的描述。另外，本文还公开了所选择的化合物的抑制活性。
一方面，本发明提供了具有下式的吡咯并吡啶激酶调节剂(在本文中也被称作″本发明化合物″)：
在式(I)中，L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、取代或未取代的C1-C5亚烷基或取代或未取代的2-5元的杂亚烷基。符号n表示0-2的整数。
A1和A2独立地是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
另一方面，本发明提供了用本发明的吡咯并吡啶激酶调节蛋白激酶活性的方法。该方法包括将所述的激酶与本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂相接触。
另一方面，本发明提供了在需要所述治疗的个体(例如哺乳动物、诸如人)中治疗激酶活性介导的疾病(激酶介导的疾病或病症)的方法。该方法包括向所述的个体施用有效量的本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂。
另一方面，本发明提供了包括与可药用赋形剂相混合的吡咯并吡啶激酶调节剂的药物组合物。
附图简述
图1表示根据ABL外显子Ia的野生型ABL编号。
发明详述
定义
本文所用的缩写词具有其化学和生物学领域的常规含义。
在将取代基通过它们的从左到右书写的常规化学式进行说明的情况下，它们同样也包含将结构式从右至左书写所产生的化学上相同的取代基，例如-CH2O-等同于-OCH2-。
除非另有说明，术语“烷基”本身或作为另一个取代基的一部分是指直链(即不分支)或支链或环状的烃基或其组合，它们可以是完全饱和、单-或多不饱和的，并且可包括具有指定的碳原子数(即C1-C10是指1至10个碳)的二价和多价基团。饱和烃基的实例包括但不限于如下基团，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等的同系物和异构体。不饱和烷基是具有一个或多个双键或三键的基团。不饱和烷基的实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和高级的同系物和异构体。将限于烃基的烷基称作“同烷基(homoalkyl)”。
术语“亚烷基”本身或作为另一个取代基的一部分是指衍生自烷基的二价基团，例如，不限于-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH＝CHCH2-、-CH2C≡CCH2-、-CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2-。在本发明中，烷基(或亚烷基)通常具有1-24个碳原子，具有10个或更少碳原子的基团是优选的。“低级烷基”或“低级亚烷基”是短链烷基或亚烷基，通常具有8个或更少的碳原子。
除非另有说明，术语“杂烷基”本身或与另一个术语相组合是指稳定的直链或支链或环状烃基或其组合，它们由至少一个碳原子和至少一个选自O、N、P、Si和S的杂原子所组成，其中氮、磷和硫原子可任选地被氧化并且氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O、N、P、S和Si可位于杂烷基的任何内部位置或位于该烷基与分子的其余部分相连接的位置。其实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH＝N-OCH3、-CH＝CH-N(CH3)-CH3、O-CH3、-O-CH2-CH3和-CN。最多可以有两个或三个连续的杂原子，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。类似地，术语“杂亚烷基”本身或作为另一个取代基的一部分是指衍生自杂烷基的二价基团，例如，不限于-CH2-CH2-S-CH2-CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于杂亚烷基，杂原子还可以在链末端的任一端或两端(例如，亚烷基氧代、亚烷基二氧代、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。对于亚烷基和杂亚烷基连接基而言，连接基结构式的书写方向对于连接基的方向没有任何暗示。例如式-C(O)OR′-同时表示-C(O)OR′-和-R′OC(O)-。如上所述，本文所用的杂烷基包括通过杂原子与分子的其余部分相连接的那些基团，例如-C(O)R′、-C(O)NR′、-NR′R″、-OR′、-SR′和/或-SO2R′。当在提到“杂烷基”之后又提到具体的杂烷基诸如-NR′R″等时，应当理解术语杂烷基和-NR′R″并不是重复的或互相排斥的。相反，列举具体的杂烷基是为了增加清楚性。因此，在本文中，术语“杂烷基”不应该解释为不包括具体的杂烷基诸如-NR′R″等。
除非另有说明，术语“环烷基”和“杂环烷基”本身或与其它术语的组合分别代表“烷基”和“杂烷基”的环状形式。另外，对于杂环烷基，杂原子可位于杂环与分子的其余部分相连接的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环烷基的实例包括但不限于1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。术语“亚环烷基”和“亚杂环烷基”分别是指环烷基和杂环烷基的二价衍生物。
除非另有说明，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一个取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。另外，术语诸如“卤代烷基”包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”包括但不限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和的芳香族的烃取代基，它们可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(优选1-3个环)。术语“杂芳基”是指含有1-4个(在多环的情况中，是指在每一个单独的环中)选自N、O和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过碳或杂原子连接到分子的其余部分上。芳基和杂芳基的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-_唑基、4-_唑基、2-苯基-4-_唑基、5-_唑基、3-异_唑基、4-异_唑基、5-异_唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。所有上述芳基和杂芳基环的取代基均可选自以下所述的可接受的取代基。术语“亚芳基”和“亚杂芳基”分别是指芳基和杂芳基的二价基团。
为了简明起见，当与其它术语(例如芳基氧代、芳基硫代、芳基烷基)组合使用时，术语“芳基”包括以上所定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳基烷基”包括其中的芳基与烷基相连接的那些基团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中的碳原子(例如亚甲基)被例如氧原子所代替的那些烷基(例如苯氧基甲基、2-吡啶基氧基甲基、3-(1-萘基氧基)丙基等)。然而，本文所用的术语“卤代芳基”仅包括被一个或多个卤素取代的芳基。
在杂烷基、杂环烷基或杂芳基包括成员的具体数目(例如“3-7元”)的情况下，术语“成员”是指碳或杂原子。
本文所用的术语“氧代”是指与碳原子通过双键结合的氧。
所有的上述术语(例如“烷基”、“杂烷基”、“环烷基”和“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”及其二价基团衍生物)均包括所述基团的取代和未取代的形式。下面提供了每种类型的基团的优选取代基。
烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基一价和二价衍生物基团(包括通常被称作亚烷基、链烯基、杂亚烷基、杂链烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基)的取代基可以是一个或多个选自但不限于下列的基团：-OR′、＝O、＝NR′、＝N-OR′、-NR′R″、-SR′、-卤素、-SiR′R″R_、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO2R′、-C(O)NR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR′-C(O)NR″R_、-NR″C(O)OR′、-NR-C(NR′R″)＝NR_、-S(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)2NR′R″、-NRSO2R′、-CN和-NO2，其数量范围为0至(2m′+1)，其中m′是所述基团中碳原子的总数。R′、R″、R_和R_′均优选独立地是指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基(例如被1-3个卤素取代的芳基)、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基或芳基烷基。当本发明化合物包括一个以上的R基团、例如当存在一个以上的这些基团时，所有的R基团均独立地选自R′、R″、R_和R_′基团。当R′和R″与相同氮原子相连接时，它们可与氮原子合在一起形成4-、5-、6-或7-元的环。例如，-NR′R″还包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。从取代基的以上讨论来看，本领域技术人员将会理解，术语“烷基”包括与氢基团之外的基团相结合的碳原子，例如卤代烷基(例如-CF3和-CH2CF3)和酰基(例如-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)CH2OCH3等)。
与以上关于烷基所述的取代基相类似，芳基和杂芳基(及其二价衍生物)的示例性取代基是多种多样的并且选自例如：卤素、-OR′、-NR′R″、-SR′、-卤素、-SiR′R″R_、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO2R′、-C(O)NR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR′-C(O)NR″R_、-NR″C(O)OR′、-NR-C(NR′R″R_)＝NR_′、-NR-C(NR′R″)＝NR_、-S(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)2NR′R″、-NRSO2R′、-CN和-NO2、-R′、-N3、-CH(Ph)2、氟代(C1-C4)烷基氧代和氟代(C1-C4)烷基，其数量范围为零至芳环系上开放价键的总数；并且其中R′、R″、R_和R_′优选独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基。当本发明化合物包括一个以上的R基团、例如当存在一个以上的这些基团时，所有的R基团均独立地选自R′、R″、R_和R_′基团。
在芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可任选地形成式-T-C(O)-(CRR′)q-U-的环，其中T和U独立地是-NR-、-O-、-CRR′-或单键，q是0-3的整数。或者，在芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可任选地被式-A-(CH2)r-B-的取代基所代替，其中A和B独立地是-CRR′-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR′-或单键，r是1-4的整数。所形成的新环的单键之一可任选地被双键所代替。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可任选地被式-(CRR′)s-X′-(CR″R_)d-的取代基所代替，其中s和d独立地是0-3的整数，X′是-O-、-NR′-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR′。取代基R、R′、R″和R_优选独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基。
本文所用的术语“杂原子”或“环杂原子”包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。
本文所用的“氨基烷基”是指与亚烷基连接基共价结合的氨基。氨基是-NR′R″，其中R′和R″通常选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
本文所用的“取代基”是指选自以下的基团：
(A)-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、氧代、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基，和
(B)被至少一个选自下列的取代基所取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基：
(i)氧代、-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基，和
(ii)被至少一个选自下列的取代基所取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基：
(a)氧代、-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基，和
(b)被至少一个选自下列的取代基所取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基：氧代、-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基和未取代的杂芳基。
本文所用的“限制大小的取代基”或“限制大小的取代基基团”是指选自以上关于“取代基”所述的所有取代基的基团，其中所有取代或未取代的烷基均是取代或未取代的C1-C20烷基，所有取代或未取代的杂烷基均是取代或未取代的2-20元的杂烷基，所有取代或未取代的环烷基均是取代或未取代的C4-C8环烷基，并且所有取代或未取代的杂环烷基均是取代或未取代的4-8元的杂环烷基。
本文所用的“低级取代基”或“低级取代基基团”是指选自以上关于“取代基”所述的所有取代基的基团，其中所有的取代或未取代的烷基均是取代或未取代的C1-C8烷基，所有取代或未取代的杂烷基均是取代或未取代的2-8元的杂烷基，所有取代或未取代的环烷基均是取代或未取代的C5-C7环烷基，并且所有取代或未取代的杂环烷基均是取代或未取代的5-7元的杂环烷基。
本发明化合物可以盐的形式存在。本发明包括所述的盐。可应用的盐形式的实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐(例如(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐以及与氨基酸诸如谷氨酸所形成的盐。这些盐可通过本领域技术人员已知的方法制得。还包括碱加成盐诸如钠、钾、钙、铵、有机胺盐或镁盐或类似的盐。当本发明化合物含有相对呈碱性的官能团时，酸加成盐可通过将该化合物的中性形式与足量的所需酸直接或者在适当的惰性溶剂中相接触来得到。可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐以及衍生自有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸诸如精氨酸等的盐和有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，从而既可以将该化合物转化成碱加成盐，也可以将其转化成酸加成盐。
化合物的中性形式优选通过将盐与碱或酸相接触、然后按照常规方式分离母体化合物来进行再生。化合物的母体形式在某些物理性质上诸如在极性溶剂中的溶解度方面不同于各种盐的形式。
本发明的某些化合物可以非溶剂化物的形式以及溶剂化物的形式、包括水合物的形式存在。一般地，溶剂化物的形式等同于非溶剂化物的形式并且包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以多晶型或无定形的形式存在。一般地，所有的物理形式对于本发明所预期的用途而言均是等同的，并且包括在本发明的范围内。
本发明的某些化合物具有不对称的碳原子(光学或手性中心)或双键；对映体、外消旋体、非对映体、互变异构体、几何异构体、根据绝对立体化学可定义为(R)-或(S)-或对于氨基酸可定义为(D)-或(L)-的立体异构形式和单独的异构体也包括在本发明的范围内。本发明化合物不包括本领域已知的太不稳定而不能合成和/或分离的那些化合物。本发明包括外消旋和光学上纯净形式的化合物。旋光性的(R)-和(S)-或(D)-和(L)-异构体可利用手性合成子或手性试剂制得，或者利用常规技术进行拆分。当本文所述的化合物含有烯键或其它几何不对称中心时，除非另有说明，该化合物包括E和Z几何异构体。
本文所用的术语“互变异构体”是指以平衡形式存在并且很容易从一种异构形式转化成另一种的两种或多种结构异构体之一。
对于本领域技术人员来说显而易见的是，本发明的某些化合物可以互变异构形式存在，该化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。
除非另有说明，本文所述的结构也包括该结构的所有立体化学形式；即，每一个不对称中心的R和S构型。因此，单一的立体化学异构体以及该化合物的对映体和非对映体混合物都在本发明的范围内。
除非另有说明，本文所述的结构还包括它们的不同仅在于存在一个或多个同位素富集的原子的化合物。例如，除了氢被氘或氚代替或碳被13C-或14C-富集的碳代替之外，具有该结构的化合物也在本发明的范围内。
本发明化合物在构成该化合物的一个或多个原子上还可含有非天然比例的原子同位素。例如，该化合物可用放射性同位素诸如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)进行放射性标记。本发明化合物的所有同位素变体，无论有没有放射性，都包括在本发明的范围内。
术语“可药用盐”包括用相对无毒的酸或碱(取决于本文所述的化合物上的特定取代基部分)制备的活性化合物的盐。当本发明化合物含有相对酸性的官能团时，碱加成盐可通过将该化合物的中性形式与足量的所需的碱直接或在适当的惰性溶剂中相接触来得到。可药用碱加成盐的实例包括钠、钾、钙、铵、有机胺盐或镁盐或类似的盐。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可通过将该化合物的中性形式与足量的所需要的酸直接或者在适当的惰性溶剂中相接触来得到。可药用酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐以及衍生自相对无毒的有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、杏仁酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸诸如精氨酸等的盐和有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如Berge等人，″Pharmaceutical Salts″，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，从而既可以将该化合物转化成碱加成盐，也可以将其转化成酸加成盐。
除了盐形式之外，本发明还提供了前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药是在生理学条件下很容易发生化学变化以提供本发明化合物的化合物。此外，前药还可在离体环境中通过化学或生物化学方法转化成本发明的化合物。例如，当与适宜的酶或化学试剂一起置于透皮贴剂储库中时，前药可缓慢地转化成本发明的化合物。
在本文中，当提到一组取代基时，术语“一”、“一个”或“一种”是指至少一个。例如，当一种化合物被烷基或芳基取代时，该化合物任选地被至少一个烷基和/或至少一个芳基所取代。此外，当该部分被R取代基所取代时，该基团可被称作“R-取代的”。在该部分是R-取代的情况下，该部分被至少一个R取代基所取代并且所有的R取代基是任选不同的。
关于本发明化合物的描述受本领域技术人员已知的化学成键原则的限制。因此，当一个基团可被一个或多个取代基所取代的情况下，所述取代基的选择应符合化学成键的原则，并且得到内在稳定的和/或本领域普通技术人员已知的在周围条件、诸如含水、中性和几种已知的生理条件下稳定的化合物。例如，杂环烷基或杂芳基通过环杂原子与分子其余部分的连接应符合本领域技术人员已知的化学成键原则，以避免产生内在不稳定的化合物。
当提及具体的疾病时，术语“治疗”还包括该疾病的预防。
符号“
”表示基团与分子的其余部分的连接点。
吡咯并吡啶激酶调节剂
一方面，本发明提供了具有下式的吡咯并吡啶激酶调节剂(在本文中也被称作“本发明的化合物”)：
在式(I)中，L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、取代或未取代的C1-C5亚烷基或取代或未取代的2-5元的杂亚烷基。符号n表示0-2的整数。
A1和A2独立地是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、未取代的C1-C5亚烷基或未取代的2-5元的杂亚烷基。在其它实施方案中，L1和/或L2是键。
A1和A2独立地是取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。A1和A2还可独立地是取代或未取代的芳基或6-元的取代或未取代的杂芳基。
在某些实施方案中，A1是取代或未取代的芳基(例如6-元的取代或未取代的芳基诸如苯基)或6-元的取代或未取代的杂芳基。A1还可以是取代的苯基或6-元的取代的杂芳基。在某些实施方案中，A1是取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的苯并间二氧杂环戊烯基、取代或未取代的苯并二_烷基、取代或未取代的苯并咪唑基或取代或未取代的吲哚基。
A2可以是取代的芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，A2是取代的苯基、取代的噻吩基、取代的吡啶基、取代的吡咯基、取代的三唑基、取代的嘧啶基、取代的吡嗪基或取代的咪唑基。
在某些实施方案中，A1和A2独立地选自取代或未取代的苯基、取代或未取代的乙内酰脲基、取代或未取代的二氧戊环基、取代或未取代的苯并间二氧杂环戊烯基、取代或未取代的二_烷基、取代或未取代的三_烷基、取代或未取代的四氢噻吩基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的四氢噻吩基、取代或未取代的四氢吡喃基、取代或未取代的四氢噻喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的吗啉-4-基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的吡唑基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的咪唑基、取代或未取代的异_唑基、取代或未取代的_二唑基、取代或未取代的_唑基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的吡嗪基(pyrazyl)、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的哒嗪基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的异噻唑基、取代或未取代的三唑基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的三嗪基、取代或未取代的噻二唑基或取代或未取代的四唑基。
在某些实施方案中，A1被至少一个R19基团所取代，其中各R19任选地不同。各R19均可独立地选自卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在某些实施方案中，至少两个R19基团与它们所连接的原子合在一起形成取代或未取代的环。本文所用的术语“取代或未取代的环”是指取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的杂芳基或取代或未取代的芳基。在其它实施方案中，R19独立地是卤素(例如氟或氯)、-NR6R7、OR5或取代或未取代的烷基。
在某些实施方案中，A2被至少一个R20基团和/或一个R1基团所取代，其中各R20基团任选地不同。R1和所有的R20均独立地选自卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在某些实施方案中，至少两个R20基团或R20和R1基团与它们所连接的原子合在一起形成取代或未取代的环。在某些实施方案中，R20独立地是卤素、-NR6R7、-OR5或取代或未取代的烷基。
Z代表N(R23)、S或O，并且w代表0-2的整数。R23是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在某些实施方案中，R23是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂烷基。R23还可以是氢或取代或未取代的C1-C5烷基。在某些实施方案中，R23是氢或未取代的C1-C5烷基。
R5独立地是氢、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R6和R7独立地是氢、-C(O)R10、-S(O)2R11、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R10和R11独立地是氢、-NR12R13、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R12和R13独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R8独立地是氢、-NR14R15、-OR16、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R14、R15和R16独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
在某些实施方案中，R14和R15独立地是取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基，或者与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的哌啶基或取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的吡咯烷基或取代或未取代的吗啉-4-基。在某些实施方案中，R14和/或R15被式-(CH2)t-NR21R22的基团所取代。符号t代表0-10的整数。在某些实施方案中，t代表0-6的整数。R21和R22独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在某些实施方案中，R21和R22任选地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。
在某些实施方案中，R21和R22与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的哌嗪基。在其它实施方案中，R21和R22独立地是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的氨基烷基。
R9独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中如果w是2，则R9可任选地是-NR17R18。
R17和R18独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
在某些实施方案中，R6和R7、R12和R13、R14和R15、和/或R17和R18可独立地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。
在某些实施方案中，R1、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和/或R23独立地选自氢、取代或未取代的C1-C20烷基、取代或未取代的2-20元的杂烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在其它实施方案中，R1、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和/或R23独立地选自氢、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的2-20元的杂烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基、取代或未取代的3-6元的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
在R1、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和/或R23是环或连接在一起形成环(例如环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基)的情况下，所述的环独立地选自取代或未取代的苯基、取代或未取代的乙内酰脲基、取代或未取代的二氧戊环基、取代或未取代的苯并间二氧杂环戊烯基、取代或未取代的二_烷基、取代或未取代的三_烷基、取代或未取代的四氢噻吩基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的四氢噻吩基、取代或未取代的四氢吡喃基、取代或未取代的四氢噻喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的吗啉-4-基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的吡唑基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的咪唑基、取代或未取代的异_唑基、取代或未取代的_二唑基、取代或未取代的_唑基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的吡嗪基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的哒嗪基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的异噻唑基、取代或未取代的三唑基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的三嗪基、取代或未取代的噻二唑基或取代或未取代的四唑基。本领域技术人员将会意识到化合价应用的标准规则。因此，在两个基团与它们所连接的氮合在一起形成环的情况下，该环通常是取代或未取代的杂环烷基或5元的杂芳基。
本领域技术人员将会立即意识到本发明化合物可包括一个以上的R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和/或R23基团。在存在一个以上的R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和/或R23基团的情况下，所有的R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和/或R23基团都是任选不同的。
在某些实施方案中，A1被卤素、-OR5或未取代的C1-C10烷基所取代。在某些实施方案中，A1被至少一个-OR5所取代。在某些相关的实施方案中，R5独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在其它相关的实施方案中，R5是氢或未取代的C1-C10烷基(例如A1被-O-CH3取代)。
在某些实施方案中，A2被至少一个-C(Z)R8基团所取代。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15。在某些相关的实施方案中，R14和R15独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基，或者连接在一起以形成取代或未取代的杂环烷基或5-元的杂芳基(例如哌啶基或哌嗪基)。在某些实施方案中，R14和/或R15被式-(CH2)t-NR21R22的基团所取代。符号t、R21和R22如上所述。
在某些实施方案中，A1具有下式：
在式(II)中，x是1-5的整数。
如上所述，所有的R19均独立地是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在某些实施方案中，两个R19基团任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。R5、R6、R7、R8和R9如式(I)中的定义。
在某些实施方案中，R19连接在位置1和/或位置2上。连接在位置1的R19可以与连接在位置2上的R19合在一起形成取代或未取代的环(与A1稠合)。在某些实施方案中，位置2连接的R19与位置3连接的R19合在一起形成取代或未取代的环(与A1稠合)。通过两个R19基团的合并所形成的环的实例如上所述。在某些实施方案中，所形成的环是取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂芳基。
在某些实施方案中，x是1且R19连接在位置2上。在其它实施方案中，x是1且R19连接在位置1上。或者，x是2-5的整数，并且至少一个R19连接在位置1上。在其它实施方案中，x是2-5的整数，并且至少一个R19连接在位置2上。
R5、R6和R7如上所述。在某些实施方案中，如果R19是-OR5或-NR6R7，则R5、R6和R7独立地是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5、R6和R7是氢或取代或未取代的C1-C5烷基。在其它实施方案中，R5、R6和R7是氢或未取代的C1-C5烷基。
在某些实施方案中，A1具有下式：
在式(III)中，X1是-C(R2)＝、-C(R2)(R3)-、-N＝、-N(R4)-、-S-或-O-。因此，A2是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的取代的杂芳基。在式(III)中，在A2是未取代的情况下，A1除R1(和氢之外)没有其他的取代基。在式(III)中，在A2是取代的情况下，A1除被R1取代之外还被其他的取代基所取代(例如被一个或多个R20基团所取代)。
在某些实施方案中，A2是取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的三唑基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的吡嗪基或取代或未取代的咪唑基。
R1是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R2和R3独立地是氢、卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R4是氢、-C(O)R8、-S(O)2R11、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
R5、R6、R7、R8、R9、R11、Z和w如以上在式(I)中所定义。
因此，在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(IV)中，R1、A2和X1如以上在式(III)中所述，L2、L3和A1如式(I)和(II)所述。因此，在某些实施方案中，A1是6-元的取代或未取代的芳基或6-元的取代或未取代的杂芳基。
在某些实施方案中，A2具有下式：
在式(IV)中，y是0-4的整数。R1如以上在式(III)中所述。R20如以上在式(I)中所述。
如上所述，所有的R20均独立地是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。在某些实施方案中，两个R20基团与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。在其它实施方案中，一个R20和R1与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。
R5、R6和R7基团的实例如上所述。在某些实施方案中，如果R20是-OR5或-NR6R7，则R5、R6和R7独立地是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5、R6和R7是氢或取代或未取代的C1-C5烷基。在其它实施方案中，R5、R6和R7是氢或未取代的C1-C5烷基。
如上所述，R5、R6和R7可独立地是氢或取代或未取代的烷基。R5、R6和R7还可独立地是氢或取代或未取代的C1-C20烷基。R5、R6和R7还可以独立地是氢或未取代的C1-C20烷基。
在某些实施方案中，y是1且R20连接在位置3′上。在其它实施方案中，y是2且R20连接在位置3′和位置4′上。在其它实施方案中，位置3′连接的R20与位置4′连接的R20合在一起形成取代或未取代的环。在其它实施方案中，位置3′连接的R20与R1合在一起形成取代或未取代的环。
在某些实施方案中，A2具有下式：
在式(VI)中，y是0-3的整数。R1如以上在式(III)中所述。R20如以上在式(I)中所述。在某些实施方案中，一个R20和R1任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环，在其它实施方案中，两个R20基团任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。
在某些实施方案中，y是1且R20连接在位置3′上。在其它实施方案中，位置3′连接的R20与R1合在一起形成取代或未取代的环。
在式(I)-(VI)化合物的某些实施方案中，L1和/或L2是键。
在式(I)-(VI)化合物的某些实施方案中，R1是-C(Z)R8。符号Z可简单地是O。R8可以是-NR14R15。R14和R15如上所述。在某些相关的实施方案中，y是0。因此，R14和R15可独立地是取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基，或者与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的哌啶基或取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的吡咯烷基或取代或未取代的吗啉-4-基。R14和R15还可以与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的哌啶基或取代或未取代的哌嗪基。R14和R15还可以与它们所连接的氮合在一起形成被取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂烷基所取代的哌嗪基。
R14和/或R15可以被式-(CH2)t-NR21R22的取代基所取代。例如，在R14和R15合在一起形成杂环烷基(例如哌嗪基或哌啶基)的情况下，杂环烷基可以被-(CH2)t-NR21R22所取代。符号t、R21和R22如上所述。
在某些实施方案中，A1具有式(II)的结构，A2具有式(III)、(V)或(VI)的结构。在某些相关的实施方案中，L1和/或L2是键。
在式(V)和/或(VI)化合物的某些实施方案中，R20是-C(Z)R8，Z是O，R8是-NR14R15。R15和R1与R1所连接的碳以及R15所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或杂芳基。
在式(V)和/或(VI)化合物的其它实施方案中，R1是-C(Z)R8，Z是O，R8是-NR14R15。R15和R20与R20所连接的碳以及R15所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或杂芳基。
在某些实施方案中，R5、R6和R7独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。R6和R7可以与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。在其它实施方案中，R5、R6和R7独立地是氢或取代或未取代的烷基。R5、R6和R7还可独立地是氢或取代或未取代的C1-C20烷基。在其它实施方案中，R5、R6和R7独立地是氢或未取代的C1-C20烷基。
在某些实施方案中，A1具有式(II)的结构，A2具有(V)或(VI)的结构。在某些相关的实施方案中，L1和/或L2是键。在其它相关的实施方案中，x是1且y是0。在其它相关的实施方案中，R19连接在位置1上。在其它相关的实施方案中，R19连接在位置2上。在其它相关的实施方案中，x是2，y是0，R19连接在位置1和4上。在其它相关的实施方案中，x是2，y是0，R19连接在位置1和5上。在其它相关的实施方案中，x是1，y是1，R20连接在位置3′上，R19连接在位置1上。在其它相关的实施方案中，x是1，y是2，R20连接在位置3′和4′上，R19连接在位置1上。在其它相关的实施方案中，x是2，y是0，一个R19连接在位置2上。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(VII)中，L1、L2、R1、R19、R20、x和y如以上在式(I)、(II)和(V)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。在某些实施方案中，x是1且y是0。在其它实施方案中，R19连接在位置1和/或位置2上。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(VIII)中，L1、L2、R1、R19和R20如以上在式(I)、(II)和(V)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。在某些实施方案中，R20是卤素、-OR5或-NR6R7(以上所定义的)。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(IX)中，L1、L2、R1、R19和R20如以上在式(I)、(II)和(V)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(X)中，L1、L2、R1和R19如以上在式(I)、(II)和(V)中的定义。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15(以上所定义的)。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。连接在位置1的R19可以是-OR5。连接在位置4的R19可以是卤素。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(XI)中，L1、L2、R1、R19和R20如以上在式(I)、(II)和(V)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。3′位置连接的R20可以是-OR5。4′位置连接的R20可以是卤素或取代或未取代的烷基(诸如C1-C5烷基)。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(XII)中，L1、L2、R1、R19、R20、x和y如以上在式(I)、(II)和(VI)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。在某些实施方案中，x是1且y是0。在其它实施方案中，R19连接在位置1和/或位置2上。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是-NR14R15(以上所定义的)。R19可以是-OR5。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(XIII)中，L1、L2、R1、R19、R20和x如以上在式(I)、(II)和(VI)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。在某些实施方案中，x是1。 R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是NR14R15(以上所定义的)。R20可以是卤素或取代或未取代的烷基(诸如C1-C5烷基)。R20可以是-OR5。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(XIV)中，L1、L2、R1、R19和x如以上在式(I)和(II)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。在某些实施方案中，x是1。R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。在某些实施方案中，Z是O且R8是NR14R15(以上所定义的)。
在某些实施方案中，本发明化合物具有下式：
在式(XV)中，L1、L2、R1、R19和x如以上在式(I)和(II)中的定义。在某些实施方案中，L1和/或L2是键。在某些实施方案中，x是1。 R1可以是-C(Z)R8(以上所定义的)。R19可以是-OR5(以上所定义的)。在某些相关的实施方案中，Z是O且R8是NR14R15(以上所定义的)。
在某些实施方案中，式(I)-(XV)化合物中的上述所有取代的基团均被至少一个取代基所取代。更具体地讲，在某些实施方案中，式(I)-(XV)化合物中的上述每一个取代的烷基、取代的杂烷基、取代的环烷基、取代的杂环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、取代的亚烷基和/或取代的杂亚烷基均被至少一个取代基所取代。在其它实施方案中，至少一个或所有的这些基团均被至少一个限制大小的取代基所取代。或者，至少一个或所有的这些基团均被至少一个低级取代基所取代。
在式(I)-(XV)化合物的其它实施方案中，所有的取代或未取代的烷基均是取代或未取代的C1-C20烷基，所有的取代或未取代的杂烷基均是取代或未取代的2-20元的杂烷基，所有的取代或未取代的环烷基均是取代或未取代的C4-C8环烷基，所有的取代或未取代的杂环烷基均是取代或未取代的4-8元的杂环烷基，所有的取代或未取代的亚烷基均是取代或未取代的C1-C20亚烷基，和/或所有的取代或未取代的杂亚烷基均是取代或未取代的2-20元的杂亚烷基。
或者，所有的取代或未取代的烷基均是取代或未取代的C1-C8烷基，所有的取代或未取代的杂烷基均是取代或未取代的2-8元的杂烷基，所有的取代或未取代的环烷基均是取代或未取代的C5-C7环烷基，所有的取代或未取代的杂环烷基均是取代或未取代的5-7元的杂环烷基，所有的取代或未取代的亚烷基均是取代或未取代的C1-C8亚烷基，和/或所有的取代或未取代的杂亚烷基均是取代或未取代的2-8元的杂亚烷基。
在另一个实施方案中，本发明化合物包括表1-39中的任一个或方法1-61中的任一个所述的化合物。在其它实施方案中，本发明化合物包括表2-39中的任一个或方法2-61中的任一个所述的化合物。
示例性合成方法
本发明化合物通过通常已知的合成方法的适当组合来合成。用于合成本发明化合物的技术对于相关领域的技术人员来说是显而易见并且易于理解的。下面的讨论用来解释说明通常是如何获得本发明所要求的化合物的，并给出了可用于装配本发明化合物的某些不同方法的细节。然而，所述的讨论不是用于定义或限制用于制备本发明化合物的反应或反应顺序的范围。本发明化合物可通过以下实施例部分所公开的方法和技术以及通过已知的有机合成技术来制得。在方案1、2和3中，L1和L2如以上所定义。R1在方案1、2和3中相当于以上所定义的A1。R2在方案1、2和3中相当于以上所定义的A2。
将本发明某些化合物的完全合成概述在方案1中。这些化合物中的许多种通常从可购买到的2-氨基-烟酸合成。用2-氨基烟酸作为原料，通过化学文献中众所周知的各种方法可实现在5-位的溴化作用以生成1(X＝Br)，例如，但不限于利用元素溴或N-溴琥珀酰亚胺的反应(方案1的步骤a)。
方案1
通式3(X＝Br)的酮中间体的合成可通过用适当的有机金属物质、例如利用有机镁或有机锂化合物处理相应的WEINREB-酰胺2或其盐酸盐来完成[方案1的步骤c]。(例如在酮的合成中利用N-甲氧基-N-甲基酰胺(WEINREB酰胺)，参见S.Nam，S.M.Weinreb-Tetrahedron Lett.1981，22，3815)。WEINREB-酰胺2(X＝Br)通过利用酰胺合成的标准方法，通过事先或就地将酸活化或通过直接缩合，将母体酸1(X＝Br、X2＝CH)与N，O-二甲基羟基胺缩合来得到。这两种转化的方法和试剂记载于化学文献中并且是本领域技术人员众所周知的[方案1的步骤b]。例如，酰胺的形成通过直接法利用适当的偶联剂诸如、但不限于PyBOP、HBTU或HATU来实现。
3(X＝Br)中酮残基R1的引入[方案1的步骤c]所需的有机金属试剂可通过商购得到，或者通过文献中所述的各种方法合成得到，例如，但不限于有机氯化物、溴化物或碘化物与镁的Grignard反应(参见J.March-Advanced Organic Chemistry，第3版，John Wiley & Sons，1992)、利用适当的有机锂或有机镁化合物、例如但不限于正丁基锂、叔丁基锂或异丙基氯化镁或溴化镁进行的有机溴化物或碘化物的金属-卤素交换反应(例如J.Clayden-Organolithiums：Selectivity for Synthesis，Pergamon，2002；A.Boudier，L.O.Bromm，M.Lotz，P.Knochel-Angew.Chem.Int.Ed.(2000)39，4414.)或利用适当的碱、诸如N，N-二异丙基氨化锂或2，2，6，6-四甲基哌啶锂使具有足够酸性的化合物诸如嘧啶、吡嗪、2-氯-或2-氟吡啶脱质子化(参见J.Clayden-Organolithiums：Selectivity for Synthesis，Pergamon，2002；A.Turck，N.Plé，F.Mongin，G.Quéguiner-Tetrahedron(2001)57，4489；F.Mongin，G.Quéguiner-Tetrahedron(2001)57，4059)。上述基团R1可以被一个或多个官能团所取代，其中酸性质子诸如连接到氮或氧上的氢原子在需要时可被适当的保护基通过化学文献中众所周知的方法进行保护(参见T.W.Greene，P.G.M.Wuts-Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，1999)。所述官能团的存在使得可以将按照该方式得到的产物通过通常已知的方法加工成本发明所要求保护的各种化合物。
所形成的酮3(X＝Br)的烯化作用[方案1的步骤d]可通过本领域技术人员已知的多种方法得到，但最为方便的是通过WITTIG-反应(参见B.E.Maryanoff，A.B.Reitz-Chem.Rev.(1989)89，863)利用从商购的甲氧基甲基三苯基氯化_和适当的碱、例如但不限于强有机金属碱、诸如但不限于非亲核性氨化物诸如二(三甲基甲硅烷基)胺的锂、钠或钾盐所产生的叶立德来进行。所述的烯化作用还可方便地利用由WEINREB酰胺2(X＝Br)与以上所述的有机金属试剂反应所得到的粗产物来进行而无需纯化相应的酮3(X＝Br)。
所形成的烯烃4(X＝Br)的随后的环化反应[方案1的步骤e](烯烃可以以E-或Z-型或这两种构型的混合物的形式使用)可在常规酸性催化条件下利用强无机或有机酸、诸如但不限于硫酸、高氯酸、盐酸、三氟甲磺酸或三氟乙酸在适当的溶剂诸如但不限于THF、二_烷、二乙醚、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚、二氯甲烷、二氯乙烷或氯仿、水、甲醇或乙醇或其混合物中来完成。Sakamoto等人在Heterocycles(1992)，34(12)，2379-84中描述了类似的环化反应。其中作者描述了由2-硝基-3-(2-乙氧基乙烯基)吡啶生成母体吡咯并[2，3-b]吡啶的转化。乙烯基的形成通过3-溴类似物与三丁基-2-乙氧基乙烯基锡烷的STILLE-偶联来实现。
芳香族、烯烃、炔烃或脂肪族取代基在溴化物5的5-位上的引入以得到通式6化合物(X＝Br)[方案1的步骤f]可通过标准的卤素交叉偶联方法来完成(参见F.Diederich，P.J.Stang(编)-Metal-catalyzed Cross-couplingReactions，Wiley-VCH，1998；J.Tsuji-Palladium Reagents and Catalysts，John Wiley&Sons，1995)。溴化物5(X＝Br)与适当的试剂、诸如但不限于硼酸和硼酸酯、有机硼烷、三氟硼酸盐(例如G.A.Molander，G.-S.Yun，M.Ribagorda，B.Biolatto-J.Org.Chem.(2003)68，5534；G.A.Molander，B.Biolatto-J.Org.Chem.(2003)68，4302.)、购买的或通过化学文献中众所周知的方法得到的有机锡烷、有机锌化合物、有机镁化合物、烯烃或末端炔烃的偶联在适当的过渡金属催化剂、例如但不限于适当的钯化合物的存在下、或者在配体诸如但不限于膦、二膦或胂的存在下或没有配体和、需要时、在有机或无机碱诸如叔或仲胺、碱性碳酸盐、碳酸氢盐或磷酸盐的存在下和、需要时、在化学文献中已知的可有助于或促进所述转化的其它添加剂诸如氯化锂、卤化铜或银盐的存在下进行。这些交叉偶联反应在适当的溶剂诸如但不限于THF、二_烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚、二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、DMF、N-甲基吡咯烷酮、乙醇或水或其混合物中在25℃-200℃的温度下在没有加热、常规加热或微波照射的条件下进行。
该方法还可用于引入并非基于碳的亲核试剂、诸如但不限于醇、硫醇、伯或仲胺、含有连接到氮原子上的氢的杂环，它们含有或不含有化学文献中已知的醇、硫醇或胺的适当保护基(所述基团的实例可参见T.W.Greene、P.G.M.Wuts-Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，1999)，其通过化学文献中众所周知的方法、例如S.V.Ley，A.W.Thomas-Angew.Chem.(2003)115，5558；J.P.Wolfe，S.Wagaw，J.-F.Marcoux，S.L.Buchwald-Acc.Chem.Res.(1998)31，805和J.F.Hartwig-Acc.Chem.Res.(1998)31，852中所述的方法来进行。通过该方法得到的化合物可通过化学文献中众所周知的方法进一步加工成本发明所要求保护的其它化合物。
在本发明的一种实施方案中，将卤化物5(X＝Br)用硼酸在适当的钯催化剂、例如但不限于四(三苯基膦)钯(0)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)或[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)和适当的碱(例如碳酸钠、碳酸铯或氟化铯)的存在下在含水溶剂混合物诸如乙腈/水或二甲氧基乙烷/水中、在110℃-200℃下利用常规加热或微波照射进行处理。
在某些情况下，有利的是通过将卤化物5首先转化成有机金属衍生物5b诸如硼酸或酯、三氟硼酸盐、有机镁、有机锌或有机锡化合物来实现碳或非碳原子诸如以上所述的所有原子的交叉偶联。该化合物可通过用适当的金属或准金属取代溴化物部分来得到，在该情况下，衍生物5中存在的任何官能团、特别是吡咯并[2，3-b]吡啶的位置1上的环氮原子可通过适当的保护基(所述基团的实例可参见T.W.Greene，P.G.M.Wuts-ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley & Sons，1999)进行保护。所述金属或准金属的引入可按照许多方法来实现，诸如通过利用金属如碱金属或碱土金属或所述金属的活化形式诸如锂、镁或锂萘基金属的还原金属化，或通过利用适当的有机锂或有机镁化合物(例如正丁基锂、叔丁基锂或异丙基氯化镁或溴化镁)的金属-卤素交换反应，需要时，随后将有机金属中间体与适当的可溶的和反应性金属化合物(例如氯化镁、溴化镁、三正丁基氯化锡、三甲基氯化锡、硼酸三甲酯、硼酸三乙酯、硼酸三异丙酯、三氟甲磺酸锌或氯化锌)进行转金属化反应。硼酸频哪醇酯的引入一般通过将衍生物5直接与二(频那醇)二硼在[1，1′-二(二苯基膦)-二茂铁]二氯化钯(II)和适当的碱(例如乙酸钾或乙酸钠)的存在下在溶剂诸如DMSO、DMF、DMA或N-甲基吡咯烷酮中于80-160℃下利用常规加热或微波照射进行反应来完成(用于类似转化的文献方法可参见T.Ishiyama，M.Murata，N.Miyaura-J Org.Chem.(1995)60，7508.)。将通过该方法得到硼酸频哪醇酯转化成其它硼酸衍生物诸如硼酸、硼酸酯或三氟硼酸盐的方法也详细地记载在化学文献中。
金属化的衍生物5b与适当的试剂诸如购买的或通过化学文献中众所周知的方法得到的芳香族、杂芳香族或烯属氯化物、溴化物、碘化物、三氟甲磺酸酯或酰卤的交叉偶联反应在适当的过渡金属催化剂(例如适当的钯化合物、或者在配体诸如膦、二膦或胂的存在下或没有配体和、需要时、在有机或无机碱诸如叔或仲胺、碱性碳酸盐、碳酸氢盐或磷酸盐的存在下和、需要时、在化学文献中已知的可有助于或促进所述转化的其它添加剂诸如卤化铜或银盐的存在下)的存在下进行。这些交叉偶联反应在适当的溶剂(例如THF、二_烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚、二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、DMF、N-甲基吡咯烷酮或其混合物)中在25℃-200℃下在没有加热、利用常规加热或微波照射的条件下进行。通过该方法得到的化合物、尤其是含有适当的官能团(例如羧酸或酯、腈、胺、醛或烯烃)的化合物可通过化学文献中众所周知的方法进一步加工成本发明所要求保护的其它化合物。
反应性更强的有机亲核试剂、诸如含碱金属或碱土金属或某些过渡金属的有机金属化合物5b(例如有机锂、有机镁或有机锌化合物)还可偶联到一系列其它亲电偶联体诸如活泼烯烃(MICHAEL-受体)、醛、腈、芳香族硝基化合物(参见例如I.Sapountzis，P.Knochel-J.Am.Chem.Soc.(2002)124，9390.)、羧酸衍生物、二氧化碳、有机二硫化物或有机卤化物上。所述的偶联可不利用催化剂或利用适当的过渡金属催化剂诸如适当的铜、钴或铁化合物在适当的溶剂(例如醚、THF、二_烷、二甲氧基乙烷或二甘醇二甲醚或其混合物)中在-100℃-100℃下在存在或不存在化学文献中已知的可有助于或促进所述转化的其它添加剂例如卤化锂、胺或二胺或其衍生物的条件下来完成。对于本领域技术人员来说显而易见的是，通过该方法得到的化合物、尤其是含有适当的官能团、例如羧酸或酯、腈、胺、醛或烯烃的化合物可通过化学文献中众所周知的方法进一步加工成本发明所要求保护的其它化合物。
3，5-二取代的吡咯并[2，3-b]吡啶还可通过方案2所述的另一种方法来得到(还可参见WO 2004/032874)。2-氨基-5-溴吡啶的碘化作用可通过将其与碘和高碘酸钠在适当的溶剂诸如DMF、DMA或N-甲基吡咯烷酮中于100-200℃的升高温度下反应来完成以得到中间体31。该中间体31可在标准条件下被酰化，诸如将其与乙酰氯在适当的溶剂诸如吡啶中于25-100℃下进行反应。溴化物32与乙炔基三甲基硅烷偶联以得到炔烃33的反应可通过标准的卤素交叉偶联法(参见F.Diederich，P.J.Stang(编)，Metal-catalyzed Cross-coupling Reactions，Wiley-VCH，1998；J.Tsuji，Palladium Reagents and Catalysts，John Wiley&Sons，1995)，诸如利用适当的钯化合物、诸如二(三苯基膦)二氯化钯(II)或[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)作为催化剂在铜(I)盐诸如碘化亚铜在有机碱诸如三乙胺的存在下在适当的溶剂诸如二氯甲烷中在25℃或更高的温度下来完成。所形成的炔基吡啶33的环化最方便地是通过与适当的氟化物诸如四丁基氟化铵在适当的溶剂诸如THF或二_烷中于25-110℃下相接触来完成，以得到5-溴-吡咯并[2，3-b]吡啶(34)。
方案2
卤化物34、35或38的加工可通过常规的已知方法很容易地实现。例如，可采用利用各种已知过渡金属化合物(例如衍生自钯、铁或镍的化合物)的金属催化的交叉偶联反应。所述的转化反应的实例可参见以下参考文献：Diederich，F.，Stang，P.J.-Metal-catalyzed Cross-coupling Reactions，Wiley-VCH，1998；Beller，M.，Transition Metals for Organic Synthesis，Wiley-VCH，1998；Tsuji，J.，Palladium Reagents and Catalysts，Wiley-VCH，1st.& 2nd ed.s，1995，2004；Fuerstner，A.等人，J.Am.Chem.Soc.(2002)124，13856；和Bolm，C.等人，Chem.Rev.(2004)104，6217。其它有用的方法包括将溴或碘取代基利用通常已知的方法(例如金属卤素交换，并且，在适当和必要时，随后利用硼、镁、锌、锡、硅或铜的可溶性和反应性化合物进行转金属化反应；该方法的代表性实例可参见：Schlosser，M.，Organometallics in Synthesis，第2版，Wiley-VCH，2002.)转化成金属或准金属取代基(例如有机硼、有机锂、有机锡、有机硅、有机锌、有机铜或有机镁化合物)。按照该方式得到的有机金属衍生物本身可用于过渡金属催化的与芳香族或烯属卤化物或三氟甲磺酸酯的偶联反应，或者，如果具有足够的反应性的话，还可直接与适当的亲电试剂诸如某些有机卤化物、MICHAEL-受体、环氧乙烷、环乙亚胺、醛、酰卤或腈反应。
根据用于在任一位置引入官能团的转化反应的性质、特别是在任一位置进行官能化的顺序，在3-或5-位的选择性官能化可能需要不同的策略。因此，在某些情况下，在5-位的官能化之前实现3-位的官能化可能是有利的或必需的，而在其它情况下可能需要相反的顺序，这取决于待引入的具体基团的性质、完成所述转化所需的方法或所用方法的内在选择性。例如，某些反应物、诸如某些缺电子(即，含有一个或多个拉电子取代基或表示某些杂环体系的衍生物)和/或含有一个或多个在硼-碳键邻位的取代基的硼酸或其酯可能需要使用高活性的钯催化剂(例如在Vilar，R.，Christman，U.Angew.Chem.(2005)117，370；Littke，A.F.，Fu，G.-Angew.Chem.(2002)114，4350中提到的那些钯催化剂)和更苛刻的条件、诸如更高的温度和/或更长的反应时间。在5-溴-3-碘-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶的反应中，所述的条件可能不会有助于实现明显的选择性。因此，在这种情况下，有利的是利用以上详细描述的方法通过依次进行5-溴-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶中溴的取代、在3-位进行碘化以及随后在3位引入第二个取代基来完全避免选择性的问题。一般地讲，当任一位置上的卤素原子的取代所需的条件涉及通常不利于5-溴-3-碘-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶中存在的两个卤素原子之间的高水平选择性的高反应性催化剂或试剂时，有利的是采用这种依次取代的方法。
还应该意识到，用适当的保护基保护R1和/或R2以及吡咯并[3，4-b]吡啶骨架内的反应性基团(例如1位上的质子)是有利的或必需的。例如，在某些交叉偶联反应中，有利的是通过在该位置引入例如4-甲苯甲酰磺酰基、三异丙基甲硅烷基或四氢-1H-吡喃基来保护1H-吡咯并[3，4-b]吡啶骨架的1位上的氮。这些保护基的引入和除去可方便地通过化学文献中已知的方法来完成。对本领域技术人员来说显而易见的是，通过上述方法中的任何一种所得到的化合物可含有可通过通常已知的方法进一步加工的游离的或被保护的官能团。
在本发明化合物的合成中，利用交叉偶联方法的更详细的描述记载在方案3中：X1和X2选自但不限于卤素、硼酸或酯、三氟硼酸盐、有机镁、有机锌或有机锡。关于单独的残基L1R1或L2R2的引入，如上所述的转化反应可通过标准的卤素交叉偶联法来完成。
方案3
相应的溴化物或碘化物(X1、X2＝Br、I)与适当的试剂诸如硼酸和硼酸酯、有机硼烷、有机锡烷、有机锌化合物、有机镁化合物、烯烃或末端炔烃(购买的或通过常规的已知方法得到)的偶联可在适当的过渡金属催化剂(例如钯化合物)的存在下进行。所述的偶联可任选地在配体诸如但不限于膦、二膦、ARDUENGO-型杂环碳烯(参见A.J.Arduengo III等人-Organometallics(1998)17，3375；A.J.Arduengo III等人-J.Am.Chem.Soc.(1994)116，4391)或胂的存在下进行。可使用有机或无机碱(例如叔或仲胺、碱金属碳酸盐、碳酸氢盐、氟化物或磷酸盐)和/或其它已知的添加剂(例如氯化锂、卤化铜或银盐)以实现、有助于或促进所述的转化反应。
这些交叉偶联反应可在适当的溶剂诸如THF、二_烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚、二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、DMF、N-甲基吡咯烷酮、水或其混合物中在25℃-200℃下进行。温度任选地用加热、常规加热或微波照射来维持。在3-碘-5-溴-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶的情况下，碘取代基相对于溴取代基的选择性或优先取代可以在较不苛刻的条件下、诸如较低的温度和较短的反应时间并利用适当的过渡金属催化剂来实现。二卤代或低卤代化合物通过过渡金属催化的转化反应的选择性官能化在化学文献中已有记载：例如Ji，J.等人-Org.Lett(2003)5，4611；Bach，T.等人-J.Org.Chem(2002)67，5789，Adamczyk，M.等人-Tetrahedron(2003)59，8129。
该方法还可用于引入并非基于碳的亲核试剂(例如醇、硫醇、伯或仲胺)，所述亲核试剂可任选地含有适当的醇、硫醇或胺的保护基。所述基团的实例可参见Greene，T.等，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，1999。在相关的交叉偶联反应中利用非碳亲核试剂的示例性方法可参见Ley，S.等人，Angew.Chem.(2003)115，5558；Wolfe，J.等人，Acc.Chem.Res.(1998)31，805；Hartwig，Acc.Chem.Res.(1998)31，852；Navarro，O.等人J.Org.Chem.(2004)69，3173，Ji，J.等人，Org.Lett(2003)5，4611。本领域技术人员将会意识到，通过该方法得到的化合物可通过通常已知的方法进一步加工以得到本发明的其它化合物。
在某些情况下，有利的是通过首先将各种卤素衍生物转化成相应的有机金属衍生物(例如硼酸或酯、三氟硼酸盐、有机镁、有机锌或有机锡化合物)来实现与碳或非碳原子的交叉偶联。所述的化合物可通过用适当的金属或准金属取代卤化物部分来得到。存在的任何官能团(例如吡咯并[3，4-b]吡啶的1位上的环氮)都可能需要通过适当的保护基(″PG″，参见Greene，T.等人，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，1999)进行保护。
所述金属或准金属的引入可通过通常已知的方法、诸如利用金属或金属-卤素交换反应进行金属化来实现。用于金属化的有用金属包括碱金属或碱土金属或所述金属的活化形式。用于金属-卤素交换反应的适当试剂包括有机锂或有机镁化合物(例如正丁基锂、叔丁基锂或异丙基氯化镁或溴化镁)。有机金属中间体的随后的转金属化反应可在需要时利用适当的可溶性和反应性金属化合物诸如氯化镁、溴化镁、三正丁基氯化锡、三甲基氯化锡、硼酸三甲酯、硼酸三乙酯、硼酸三异丙酯、三氟甲磺酸锌或氯化锌进行。硼酸频哪醇酯的引入可方便地通过将卤素衍生物直接与二(频那醇)二硼在[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)和适当的碱(例如乙酸钾或钠)的存在下在溶剂诸如DMSO、DMF、DMA或N-甲基吡咯烷酮中于80-160℃下反应来实现。常规加热或微波照射可用于保持适当的温度(关于类似转化反应的文献先例可参见Ishiyama，T.等人-J.Org.Chem.(1995)60，7508.)。
将通过该方法得到的硼酸频哪醇酯转化成其它硼酸衍生物诸如硼酸、硼酸酯或三氟硼酸盐的方法通常是众所周知的。对于本领域技术人员来说显而易见的是，所述的有机金属衍生物可用于交叉偶联反应，该反应类似于以上所述的在吡咯并[3，4-b]吡啶的含卤素衍生物的情况下的反应。所述的偶联可利用适当的偶联反应物诸如芳香族、杂芳香族卤化物或烯属试剂在与上述方法相同或明显类似和/或相关的条件下进行。
其它方法可利用从吡咯并[3，4-b]吡啶的含卤衍生物通过上述方法的任一种所产生的有机金属衍生物的反应性。例如，含碱金属或碱土金属的衍生物(例如有机锂、有机镁或有机锌化合物)可用于直接偶联到一系列其它亲电性偶联反应物诸如活化型烯烃(MICHAEL-受体)、醛、腈、芳香族硝基化合物、羧酸衍生物、环氧乙烷、环乙亚胺、有机二硫化物或有机卤化物上。所述的转化反应通常是本领域已知的(关于与芳香族硝基化合物的反应可参见例如Sapountzis，I.等人，J.Am.Chem.Soc.(2002)124，9390.)。
保护基
术语“保护基”是指可封闭化合物的某些或所有反应性部分并且在该保护基被除去之前可以防止所述部分参与化学反应的化学部分，例如在T.W.Greene，P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版John Wiley&Sons(1999)中所列出和描述的那些化学部分。有利的是，在使用不同的保护基的情况下，每一个(不同的)保护基可通过不同的方法除去。在完全不同的反应条件下除去的保护基可允许所述保护基的除去有差别。例如，保护基可通过酸、碱和氢解除去。基团诸如三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、缩醛和叔丁基二甲基甲硅烷基对酸是不稳定的，并且在被Cbz基团(可通过氢解除去)和Fmoc基团(对碱是不稳定的)保护的氨基的存在下可用于保护羧基和羟基反应性部分。在用对酸不稳定的基团诸如氨基甲酸叔丁酯或用对酸和碱均稳定但可通过水解除去的氨基甲酸酯封闭的胺的存在下，羧酸和羟基反应性部分可用对碱不稳定的基团，例如但不限于甲基、乙基和乙酰基进行封闭。
羧酸和羟基反应性部分还可以用可通过水解除去的保护基诸如苄基进行保护，而能够与酸进行氢结合的胺基团可用对碱不稳定的基团诸如Fmoc进行保护。羧酸反应性部分可用可通过氧化除去的保护基诸如2，4-二甲氧基苄基进行保护，而共存的氨基可用对氟化物不稳定的甲硅烷基氨基甲酸酯进行保护。
烯丙基封闭基团可以在酸和碱保护基存在的条件下使用，因为前者是稳定的并且随后可通过金属或pi-酸催化剂除去。例如，烯丙基保护的羧酸可用钯(0)催化的反应在对酸不稳定的氨基甲酸叔丁酯或对碱不稳定的乙酸盐胺保护基的存在下进行脱保护。保护基的另一种形式是化合物或中间体可与其相连接的树脂。只要残基与树脂相连接，该官能团就被封闭并且不会发生反应。一旦从树脂中释放出来，该官能团就能够进行反应。
常用的封闭/保护基包括但不限于下面的部分：
烯丙基 Bn Cbz alloc Me
叔丁基 TBDMS Teoc Boc
pMB 三苯甲基 乙酰基 Fmoc
抑制激酶的方法
另一方面，本发明提供了利用本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂调节蛋白激酶活性的方法。本文所用的术语“调节激酶活性”是指相对于不存在吡咯并吡啶激酶调节剂时的活性而言，与本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂相接触时蛋白激酶的活性升高或降低。因此，本发明提供了通过将蛋白激酶与本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂(例如式(I)-(XV)中的任一种化合物)相接触来调节蛋白激酶活性的方法。在某些实施方案中，将式(IV)化合物与蛋白激酶相接触。
在某些实施方案中，吡咯并吡啶激酶调节剂抑制激酶活性。本文所用的涉及激酶活性的术语“抑制”是指相对于不存在吡咯并吡啶激酶调节剂的活性而言，与吡咯并吡啶激酶调节剂相接触时激酶活性降低。因此，本发明还提供了通过将蛋白激酶与本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂相接触来抑制蛋白激酶活性的方法。
在某些实施方案中，蛋白激酶是蛋白酪氨酸激酶。本文所用的蛋白酪氨酸激酶是指可催化蛋白质中的酪氨酸残基被磷酸供体(例如磷酸核苷酸供体诸如ATP)磷酸化的酶。蛋白酪氨酸激酶包括例如Abelson酪氨酸激酶(″Abl″)(例如c-Abl和v-Abl)、Ron受体酪氨酸激酶(″RON″)、Met受体酪氨酸激酶(″MET″)、Fms样酪氨酸激酶(″FLT″)(例如FLT3)、src-家族的酪氨酸激酶(例如lyn、CSK)和p21-活化的激酶-4(″PAK″)、FLT3、aurora激酶、B-淋巴酪氨酸激酶(″Blk″)、细胞周期蛋白依赖性激酶(″CDK″)(例如CDK1和CDK5)、src-家族相关的蛋白酪氨酸激酶(例如Fyn激酶)、糖原合酶激酶(″GSK″)(例如GSK3α和GSK3β)、淋巴细胞蛋白酪氨酸激酶(″Lck″)、核糖体S6激酶(例如Rsk1、Rsk2和Rsk3)、精子酪氨酸激酶(例如Yes)和它们的表现出酪氨酸激酶活性的亚型和同源体。在某些实施方案中，蛋白酪氨酸激酶是Abl、RON、MET、PAK或FLT3。在其它实施方案中，蛋白酪氨酸激酶是FLT3或Abl家族的成员。
在另一种实施方案中，激酶是突变体激酶，诸如突变体Bcr-Abl激酶、FLT3激酶或aurora激酶。有用的突变体Bcr-Abl激酶包括具有至少一种下列在临床上分离出的突变的那些激酶：M244V、L248V、G250E、G250A、Q252H、Q252R、Y253F、Y253H、E255K、E255V、D276G、F311L、T315I、T315N、T315A、F317V、F317L、M343T、M351T、E355G、F359A、F359V、V379I、F382L、L387M、H396P、H396R、S417Y、E459K和F486S。在某些实施方案中，突变体Abl激酶具有T315I突变。表示以上的氨基酸突变位置的编号体系是根据ABL外显子Ia的已知的野生型ABL编号。参见Deininger，M.等人，Blood 105(7)，2640(2005)。将该编号体系重现在图1中。在某些实施方案中，突变体Bcr-Abl激酶包括至少一种以上所列出的突变，并且与图1的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，突变体Bcr-Abl激酶包括至少一种以上所列出的突变，具有与以上所述的图1相同的序列，并且包括至少50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050或1100个氨基酸。
在某些实施方案中，激酶选自Abelson酪氨酸激酶、Ron受体酪氨酸激酶、Met受体酪氨酸激酶、Fms样酪氨酸激酶-3、Aurora激酶、p21-活化的激酶-4和3-磷酸肌醇依赖型激酶-1。在某些实施方案中，将式(I)化合物与激酶相接触。
在某些实施方案中，激酶与已知的激酶是同源的(本文中也被称作″同源激酶″)。可用于抑制同源激酶的生物学活性的化合物和组合物最初可以在例如结合试验中进行筛选。同源酶包含相同长度的氨基酸序列，其与全长的已知激酶的氨基酸序列至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％是等同的，或者与已知的激酶活性结构域具有70％、80％或90％的同源性。同源性可利用例如PSI BLAST研究、例如但不限于Altschul等人，Nuc.Acids Rec.25：3389-3402(1997)所述的研究进行确定。在某些实施方案中，至少50％或至少70％的序列在该分析中进行了比对。进行比对的其它工具包括例如DbClustal和ESPript，它们可用于产生比对的PostScript版本。参见Thompson等人，Nucleic Acids Research，28：2919-26，2000；Gouet，等人，Bioinformatics，15：305-08(1999)。同源物与FLT3、Abl或另一种已知激酶或FLT3、Abl或另一种已知激酶的任何功能结构域可例如在至少100个氨基酸上具有1×10-6的BLAST E-值(Altschul等人，Nucleic Acids Res.，25：3389-402(1997)。
同源性还可以通过将酶的活性位点结合袋与已知激酶的活性位点结合袋进行比较来确定。例如，在同源酶中，分子或同系物的至少50％、60％、70％、80％或90％的氨基酸具有与激酶结构域的大小相当的结构域的氨基酸结构坐标，其α碳原子的均方根差最大为约1.5_、约1.25_、约1_、约0.75_、约0.5_或约0.25_。
本发明的化合物和组合物可用于抑制激酶活性，并且还可用于抑制与ATP结合的其它酶。因此，它们可用于治疗能够通过抑制所述的ATP-结合酶活性而得到缓解的疾病和病症。确定所述的ATP结合酶的方法包括本领域技术人员已知的方法、本文所述的涉及选择同源酶的方法，以及应用数据库PROSITE，从其中可以鉴别出包含蛋白质家族或结构域的特征、序列模式、基元或分布图的酶。
本发明的化合物及其衍生物还可用作激酶结合剂。作为结合剂，所述的化合物和衍生物可与作为系留底物的稳定的树脂结合以用于亲合色谱应用。本发明的化合物及其衍生物还可以被修饰(例如放射性标记或亲合性标记等)以便用于酶或多肽的特征、结构和/或功能的研究中。
在一种示范性实施方案中，本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂是激酶抑制剂。在某些实施方案中，激酶抑制剂的抑制常数(Ki)的IC50小于1微摩尔。在另一个实施方案中，激酶抑制剂的IC50或抑制常数(Ki)小于500微摩尔。在另一个实施方案中，激酶抑制剂的IC50或Ki小于10微摩尔。在另一个实施方案中，激酶抑制剂的IC50或Ki小于1微摩尔。在另一个实施方案中，激酶抑制剂的IC50或Ki小于500纳摩尔。在另一个实施方案中，激酶抑制剂的IC50或Ki小于10纳摩尔。在另一个实施方案中，激酶抑制剂的IC50或Ki小于1纳摩尔。
治疗方法
另一方面，本发明提供了在需要所述治疗的个体(例如哺乳动物，诸如人)中治疗激酶活性介导的疾病(激酶介导的疾病或病症)的方法。“激酶介导的”或“与激酶有关的”疾病是指其中的疾病或症状可通过抑制激酶活性而得到缓解的疾病(例如，其中激酶参与了疾病过程的信号传递、介导、调节或调整)。“疾病”是指疾病或疾病的症状。该方法包括向个体施用有效量的本发明的吡咯并吡啶激酶调节剂(例如式(I)-(XV)中的任一项所述的化合物)。
与激酶有关的疾病的实例包括癌症(例如白血病、肿瘤和转移瘤)、过敏、哮喘、肥胖、炎症(例如炎性疾病诸如炎性气道疾病)、血液学疾病、阻塞性气道疾病、哮喘、自身免疫疾病、代谢疾病、感染(例如细菌、病毒、酵母、真菌)、CNS疾病、脑肿瘤、变性性神经疾病、心血管疾病和与血管生成、新血管形成和血管发生有关的疾病。在示例性的实施方案中，该化合物用于治疗癌症、包括白血病，以及其它涉及异常细胞增殖的疾病或病症、诸如骨髓增生病。在某些实施方案中，将式(I)化合物给药于个体。
可用本发明化合物治疗的癌症的更具体的实例包括乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、肾癌、鳞状细胞癌、成胶质细胞瘤、胰腺癌、Kaposi肉瘤、多发性骨髓瘤和白血病(例如骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性成淋巴细胞性白血病、Hodgkins病和其它白血病和血液学癌症)。
可用本发明的化合物或组合物治疗或预防的其它疾病或病症的具体例子包括但不限于移植排斥(例如，肾、肝、心脏、肺、胰岛细胞、胰腺、骨髓、角膜、小肠、皮肤异体移植或异种移植以及其它移植)、移植物抗宿主病、骨关节炎、风湿性关节炎、多发性硬化、糖尿病、糖尿病性视网膜病、炎性肠疾病(例如节段性回肠炎、溃疡性结肠炎以及其它肠疾病)、肾病、恶病质、脓毒性休克、狼疮、重症肌无力、牛皮癣、皮炎、湿疹、皮脂溢、阿耳茨海默氏病、帕金森病、化疗过程中的干细胞保护、自体或异体骨髓移植物的体外选择或体外净化、眼科疾病、视网膜病(例如，黄斑变性、糖尿病性视网膜病以及其它视网膜病)、角膜疾病、青光眼、感染(例如细菌、病毒或真菌感染)、心脏病，包括但不限于再狭窄。
试验
可以很容易地对本发明的化合物进行测试以确定它们调节蛋白激酶、结合蛋白激酶和/或预防细胞生长或增殖的能力。下面是可以采用的试验的某些实例。
激酶抑制和结合试验
对各种激酶的抑制作用通过本领域普通技术人员已知的方法进行测定，诸如本文所提到的各种方法以及2003年6月出版的UpstateKinaseProfiler Assay Protocols中所述的方法。
例如，在进行体外试验的情况下，通常将激酶稀释成适当的浓度以形成激酶溶液。将激酶底物和磷酸盐供体诸如ATP加入到该激酶溶液中。激酶将磷酸根转移到激酶底物上以形成磷酸化的底物。磷酸化的底物的形成可通过任何适当的方法诸如放射性(例如[γ-32P-ATP])或利用可检测的次级抗体(例如ELISA)直接检测。或者，磷酸化底物的形成可利用任何适当的技术进行检测，诸如ATP浓度的检测(例如Kinase-Glo_试验系统(Promega))。激酶抑制剂通过在或不在待测化合物的存在下检测磷酸化底物的形成来进行鉴别(参见下面的实施例部分)。
化合物抑制细胞内激酶的能力还可利用本领域已知的方法进行试验。例如，将含激酶的细胞与可激活激酶的活化剂(诸如生长因子)相接触。在不存在和存在待测化合物的条件下所形成的细胞内磷酸化底物的量可通过溶解细胞并且通过任何适当的方法(例如ELISA)检测所存在的磷酸化底物来进行确定。当在待测化合物的存在下所产生的磷酸化底物的量相对于不存在待测化合物的条件下所产生的量降低时，显示出激酶的抑制作用。更详细的细胞激酶试验在下面的实施例部分有所讨论。
为了测定化合物与激酶的结合，可使用本领域普通技术人员已知的任何方法。例如，可使用Discoverx(Fremont，CA)生产的试验试剂盒，ED-星形孢菌素NSIPTM酶结合检测试剂盒(参见US 5,643,734)。激酶活性还可按照2003年7月8日授权的US 6,589,950所述的方法进行试验。
适当的激酶抑制剂可通过蛋白结晶筛选从本发明的化合物中进行选择，所述方法公开在例如Antonysamy等人，PCT公开号WO 03087816A1中，在本文中将该文献全文引入作为参考。
本发明的化合物可通过计算机进行筛选以测定并显示它们结合和/或抑制各种激酶的能力。可用大量本发明的化合物进行结构的计算机筛选，以确定它们与各种部位的激酶结合的能力。这些化合物可用作药物化学研究的靶点或先导物，以发现例如具有潜在的治疗重要性的抑制剂(Travis，Science，262：1374，1993)。可将所述化合物的三维结构叠加到激酶或其活性位点或结合袋的三维图像上以评估化合物在空间上是否能够与图像、进而与蛋白相吻合。在该筛选中，所述实体或化合物与结合袋的吻合质量可通过形状互补或估算的相互作用能量来判断(Meng等人，J.Comp.Chem.13：505-24，1992)。
根据本发明，在筛选可以结合和/或调节激酶(例如抑制或激活激酶)的本发明的化合物时，通常需要考虑两个因素。首先，该化合物必须能够与激酶产生物理上和结构上的结合，无论是共价的还是非共价的。例如，共价相互作用对于设计不可逆的或自杀性的蛋白抑制剂可能是很重要的。对于激酶与化合物结合而言很重要的非共价分子相互作用包括氢键、离子相互作用、范德华力以及疏水性相互作用。其次，该化合物必须能够呈现与结合袋相符的构象和取向，从而使其能够与激酶相结合。虽然化合物的某些部分并不直接参与与激酶的结合，但这些部分仍有可能影响分子的整体构象并且可能对效力产生明显影响。构象上的要求包括总的三维结构以及化学基团或化合物相对于全部或部分结合袋的取向，或包含多个直接与激酶相互作用的化学基团的化合物的官能团之间的间隔。
本文所述的对接程序(例如DOCK或GOLD)用来鉴别可与活性位点和/或结合袋结合的化合物。可将化合物针对蛋白结构的一个以上的结合袋进行筛选，或针对同一蛋白的一套以上的坐标进行筛选，同时考虑蛋白的不同分子动力学构象。然后可用一致性评分来鉴别与蛋白符合的最好的化合物(Charifson，P.S.等人，J.Med.Chem.42：5100-9(1999))。还可将得自一个以上蛋白分子结构的数据按照Klingler等人(U.S.实用新型申请，申请日2002年5月3日，发明名称“虚拟筛选化合物的计算机系统和方法”)所述的方法进行评分。然后合成或从化学品库的生产商处获得符合的最好的化合物并将其用于结合试验和生物测定。
可用计算机模型技术来评估一种化合物对激酶的潜在的调节或结合作用。如果计算机模型显示有强烈的相互作用，则可以合成该分子并测试其与激酶结合以及影响激酶活性(抑制或激活)的能力。
激酶的调节或其它结合化合物可以通过一系列的步骤用计算机进行评估，其中，根据其与激酶的各个结合袋和其它区域结合的能力对化学基团或片段进行筛选和选择。该方法可从在计算机屏幕上根据激酶的坐标目测活性位点来开始。然后将选择的片段或化学基团在激酶的结合袋内以多个不同的方向进行放置或对接(Blaney，J.M.和Dixon，J.S.，Perspectives inDrug Discovery and design，1：301，1993)。手动对接可用软件诸如Insight II(Accelrys，San Diego，CA)、MOE(Chemical Computing Group，Inc.，Montreal，Quebec，Canada)和SYBYL(Tripos，Inc.，St.Louis，MO，1992)来完成，然后用标准的分子力场诸如CHARMM(Brooks等人，J.Comp.Chem.4：187-217，1983)、AMBER(Weiner等人，J.Am.Chem.Soc.106：765-84，1984)和C2MMFF(Merck Molecular Force Field；Accelrys，SanDiego，CA)进行能量最小化和/或分子动力学。更为自动化的对接可以用例如如下程序来完成：DOCK(Kuntz等人，J.Mol.Biol.，161：269-88，1982；DOCK可以得自University of California，San Francisco，CA)；AUTODOCK(Goodsell & Olsen，Proteins：Structure，Function，andGenetics 8：195-202，1990；AUTODOCK可得自Scripps Research Institute，La Jolla，CA)；GOLD(剑桥结晶数据中心(Cambridge CrystallographicData Centre，CCDC)；Jones等人，J.Mol.Biol.245：43-53，1995)；和FLEXX(Tripos，St.Louis，MO；Rarey，M.等人，J.Mol.Biol.261：470-89，1996)。其它适宜的程序记载于例如，Halperin等人。
在通过上述方法选择化合物的过程中，可以通过计算机评估来测定和优化化合物可能与激酶结合的效率。例如，被设计成或选定起激酶抑制剂功能的化合物可能占据与活性位点残基同天然底物结合时所占据的体积不相重叠的体积，但是，本领域普通技术人员可以理解，在这方面可以有一定的灵活性，以便使主链和侧链可以进行重排。此外，本领域普通技术人员可以设计在结合时能够利用蛋白重排的化合物，从而引起诱导适合。一种有效的激酶抑制剂在其结合和游离状态下应显示相对较小的能量差异(即，它在结合时必须具有较小的结合形变能量和/或较低的构象张力)。因此，最有效的激酶抑制剂应当被设计为例如结合形变能量不大于10kcal/mol、不大于7kcal/mol、不大于5kcal/mol或不大于2kcal/mol。激酶抑制剂可在一种以上的具有相似的总结合能量的构象下与蛋白相互作用。在这种情况下，结合的形变能量应该是游离化合物的能量和抑制剂与酶结合时所观察到的多种构象的平均能量之间的差。
可以采用本领域已知的特定计算机软件来评估化合物的形变能量和静电相互作用。被设计用于这些应用的程序的实例包括：Gaussian 94，C修订版(Frisch，Gaussian，Inc.，Pittsburgh，PA._1995)；AMBER，第7版(Kollman，University of California at San Francisco，_2002)；QUANTA/CHARMM(Accelrys，Inc.，San Diego，CA，_1995)；InsightII/Discover(Accelrys，Inc.，San Diego，CA，_1995)；DelPhi(Accelrys，Inc.，San Diego，CA，_1995)；和AMSOL(University of Minnesota)(QuantumChemistry Program Exchange，Indiana University)。这些程序可用本领域已知的计算机工作站例如LINUX、SGI或Sun工作站来运行。其他硬件系统和软件包是本领域技术人员已知的。
本领域普通技术人员可以利用本领域已知的方法以及本文所公开的方法来表达激酶蛋白。本文所述的天然和突变的激酶多肽可以利用本领域已知的技术进行化学全合成或部分合成(参见，例如Creighton，Proteins：Structures and Molecular Principles，W.H.Freeman & Co.，NY，1983)。
可以用基因表达系统来合成天然和突变的多肽。可以构建包含天然或突变的多肽编码序列以及本领域技术人员已知的适宜转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、合成技术和体内重组/基因重组。参见，例如，Sambrook等人在Molecular Cloning：A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory，NY，2001和Ausubel等人在Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates andWiley Interscience，NY，1989中所描述的技术。
可采用宿主表达载体系统来表达激酶。所述表达系统包括但不限于微生物诸如用包含编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌；用包含编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母；用包含编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用包含编码序列的重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染的或用包含编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或动物细胞系统。蛋白还可以在人类基因疗法系统中表达，包括例如表达蛋白以使蛋白的含量在个体内增加或表达基因工程治疗蛋白。这些系统的表达元件在其强度和特异性上有所不同。
特别设计的载体允许DNA在宿主之间诸如细菌-酵母或细菌-动物细胞之间进行穿梭。适当构建的表达载体可含有：用于在宿主细胞中自主复制的复制源、一种或多种可选择的标记、有限数量的可用的限制性内切酶位点、高拷贝数的可能性以及活性启动子。启动子是指指示RNA聚合酶与DNA结合并引发RNA合成的DNA序列。强启动子是可以使mRNA以高频率被引发的启动子。
表达载体还可以含有影响转录和翻译的各种元件，包括例如组成型启动子和诱导型启动子。这些元件通常是宿主和/或载体依赖性的。例如，当在细菌系统中克隆时，可以使用诱导型启动子诸如T7启动子、噬菌体λ的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac杂合启动子)等；当在昆虫细胞系统中克隆时，可以使用杆状病毒多角体蛋白启动子等；当在植物细胞系统中克隆时，可以使用衍生自植物细胞染色体组的启动子(例如热休克启动子；RUBISCO的小亚基的启动子；叶绿素a/b结合蛋白的启动子)或衍生自植物病毒的启动子(例如CaMV的35S RNA启动子；TMV的外壳蛋白启动子)；当在哺乳动物细胞系统中克隆时，可以使用哺乳动物启动子(例如金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒启动子(例如腺病毒后期启动子；痘苗病毒7.5K启动子；SV40启动子；牛乳头状瘤病毒启动子；和EB病毒启动子)。
可以采用各种方法将载体引入到宿主细胞中，例如转化、转染、感染、原生质体融合和电穿孔法。将含有表达载体的细胞克隆繁殖并单独地进行分析以确定它们是否产生了适宜的多肽。可以采用各种选择方法来鉴别已经转化了的宿主细胞，所述方法包括例如抗生素耐药性。可以通过多种方法来鉴别表达多肽的宿主细胞克隆，所述方法包括但不限于与抗激酶抗体的免疫学反应以及与宿主细胞有关的活性的存在。
cDNA的表达还可以用体外产生的合成mRNA来进行。合成的mRNA可以在各种无细胞的系统、包括但不限于麦胚提取物和网状细胞提取物中有效地翻译，并且还可以在基于细胞的系统中(包括但不陷于显微注射到青蛙卵母细胞中)有效地翻译。
为了确定产生最佳水平的活性和/或蛋白的cDNA序列，构建了改性的cDNA分子。改性的cDNA的非限制性实例是其中cDNA的密码子选择已经针对cDNA将要在其中表达的宿主细胞进行了优化。将宿主细胞用cDNA分子转化并测定激酶RNA和/或蛋白的水平。
宿主细胞中激酶蛋白的水平通过多种方法、例如免疫亲和性和/或配体亲和性技术来定量，用激酶特异性亲和性珠或特异性抗体来分离35S-甲硫氨酸标记的或未标记的蛋白。通过SDS-PAGE来分析标记或未标记的蛋白。未标记的蛋白通过蛋白质印迹法、ELISA或采用特异性抗体的RIA来检测。
激酶在重组的宿主细胞中表达之后，可以回收多肽以提供活性形式的蛋白质。可以采用多种纯化方法。可以通过本领域已知的分级分离或色谱步骤的各种组合或单独应用来从溶胞产物或从条件培养基中纯化重组的激酶。
此外，重组的激酶还可以利用由对全长的初生蛋白或其多肽片段具有特异性的单克隆或多克隆抗体制成的免疫亲和性柱与其他细胞蛋白相分离。也可以采用其他基于亲和性的技术。
或者，多肽可以从宿主细胞中以未折叠的、无活性的形式回收，例如从细菌的包涵体中回收。以该形式回收的蛋白可以用变性剂例如盐酸胍溶解，然后利用本领域技术人员已知的方法例如透析再折叠成活性形式。细胞生长试验
各种细胞生长试验在本领域是已知的并且可用于鉴别能够抑制(例如减少)细胞生长和/或增殖的吡咯并吡啶化合物(即“待测化合物”)。
例如，已知有多种细胞需要特定的激酶来生长和/或增殖。所述细胞在待测化合物存在下的生长能力可进行估计，然后与不存在待测化合物时的生长能力进行比较，由此确认待测化合物的抗增殖特性。该类型方法中的一种常用方法是测定标记物诸如氚代胸腺嘧啶核苷掺入分裂中的细胞的DNA内的程度。或者，对细胞增殖的抑制作用可通过用与细胞数目相关的替代标记物确定细胞的总代谢活性来进行测试。可将细胞用代谢指示物在存在和不存在待测化合物的条件下进行处理。有活力的细胞会代谢代谢指示物，由此形成可检测到的代谢产物。当可检测到的代谢产物水平在待测化合物的存在下相对于不存在待测化合物的条件下降低时，就表示细胞生长和/或增殖的抑制作用。示例性的代谢指示物包括例如四唑_盐和AlamorBlue_(参见下面的实施例部分)。
药物组合物和给药
另一方面，本发明提供了药物组合物，该组合物包含与可药用赋形剂相混合的吡咯并吡啶激酶调节剂。本领域技术人员可以理解，该药物组合物包括以上所述的吡咯并吡啶激酶调节剂的可药用盐。
在治疗和/或诊断应用中，本发明化合物可配制成各种给药形式，包括全身和局部或定位给药。各种技术和制剂通常可参见Remington：TheScience and Practice of Pharmacy(第20版)Lippincott，Williams &Wilkins(2000)。
本发明化合物在宽的剂量范围内是有效的。例如，在成年人的治疗中，所用剂量的实例是0.01-1000mg、0.5-100mg、1-50mg/天和5-40mg/天。最优选的剂量是10-30mg/天。精确剂量将随着给药途径、给药化合物的形式、待治疗的个体、待治疗的个体的体重和主治医师的偏好和经验而变化。
可药用盐对于本领域技术人员来说通常是已知的，并且可包括例如但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙盐、carnsylate、碳酸盐、柠檬酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、glycollylarsanilate、hexylresorcinate、哈胺、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、多聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐或氯茶碱盐。其它可药用盐可参见例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(第20版)Lippincott，Williams & Wilkins(2000)。优选的可药用盐包括例如乙酸盐、苯甲酸盐、溴化物、碳酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、双羟萘酸盐、硫酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐或酒石酸盐。
根据待治疗的具体状况，所述的试剂可配制成液体或固体剂型并且全身或局部给药。该试剂可以以例如本领域技术人员已知的定时或缓释的形式给药。配制和给药的方法可参见Remington：The Science and Practice ofPharmacy(第20版)Lippincott，Williams & Wilkins(2000)。适当的途径可包括口服、含服、通过吸入剂喷雾、舌下、直肠、经皮、阴道、经粘膜、经鼻或经肠给药；非肠道给药，包括肌肉内、皮下、髓内注射以及鞘内、直接的心室内、静脉内、关节内、胸骨内、滑膜内、肝内、损伤内、颅内、腹膜内、鼻内或眼内注射或其它给药方式。
对于注射，本发明的试剂可在水溶液诸如在生理上相容的缓冲液诸如Hank溶液、Ringer溶液或生理盐水缓冲液中进行配制和稀释。对于所述的经粘膜给药，在制剂中使用适用于所要穿透的屏障的渗透剂。所述的渗透剂通常是本领域已知的。
为了实施本发明，利用可药用惰性载体将本文所公开的化合物配制成适于全身给药的剂型也在本发明的范围内。通过恰当地选择载体和适宜的生产实践条件，本发明的组合物、尤其是以溶液形式配制的组合物可非肠道给药，诸如通过静脉注射。利用本领域已知的可药用载体将该化合物很容易地配制成适于口服给药的剂型。所述的载体能够使本发明化合物配制成用于待治疗的个体(例如患者)口服摄入的片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶剂、糖浆剂、膏剂、混悬剂等。
对于鼻内或吸入给药，本发明的试剂还可通过本领域技术人员已知的方法进行配制，并且可包括例如但不限于增溶剂、稀释剂或分散物质诸如盐水、防腐剂诸如苄醇、吸收促进剂和氟碳化合物。
适用于本发明的药物组合物包括其中以有效量包含活性成分以实现其预期目的组合物。有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内、特别是根据本文提供的详细公开的范围内。
除了活性成分之外，这些药物组合物还可含有适当的可药用载体，所述的载体包括赋形剂和便于将活性化合物加工成可药用制剂的助剂。用于口服给药的制剂可以是片剂、糖衣丸、胶囊或溶液的形式。
用于口服的药物制剂可通过以下方法得到：将活性化合物与固体赋形剂相混合、任选地研磨所形成的混合物，然后，如果需要的话，在加入适当的助剂后，将颗粒混合物进行加工以得到片剂或糖衣丸片芯。具体地讲，适当的赋形剂是填充剂诸如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制品例如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP：聚维酮)。如果需要的话，可加入崩解剂诸如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐诸如海藻酸钠。
对糖衣丸片芯提供适当的包衣。就此而言，可使用浓的糖溶液，其任选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡巴浦尔胶(carbopol gum)、聚乙二醇(PEG)和/或二氧化钛、透明保护膜涂液和适当的有机溶剂或溶剂混合物。可向片剂或糖衣丸涂层中加入染料或颜料以区别或表征活性化合物剂量的不同组合。
可口服使用的药物制剂包括由明胶制成的扣合(push-fit)胶囊以及由明胶和增塑剂诸如甘油或山梨糖醇制成的软的密封胶囊。扣合胶囊含有与填充剂诸如乳糖、粘合剂诸如淀粉和/或润滑剂诸如滑石或硬脂酸镁和任选的增溶剂相混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶于或悬浮在适当的液体诸如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇(PEG)中。另外，还可加入稳定剂。
根据待治疗或预防的特定状况或疾病状态，还可与本发明的抑制剂一起给予通常被用来治疗或预防所述状况的其它治疗剂。例如，可将化学治疗剂或其它抗增殖试剂与本发明的抑制剂联合来治疗增殖性疾病和癌症。已知的化学治疗剂的实例包括但不限于阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟脲嘧啶、托泊替康、红豆杉醇、干扰素类和铂衍生物。
还可与本发明的抑制剂联合应用的试剂的其它实例包括但不限于抗炎剂诸如皮质甾类、TNF阻断剂、I1-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调节剂和抑制免疫剂诸如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、吗替麦考酚酯、干扰素、皮质甾类、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经因子诸如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥剂、离子通道阻断剂、利鲁唑和抗帕金森氏病试剂；用于治疗心血管疾病的试剂诸如β-阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸酯、钙通道阻断剂和他汀类药物；用于治疗肝病的试剂诸如皮质甾类、消胆胺、干扰素和抗病毒性试剂；用于治疗血液疾病的试剂诸如皮质甾类、抗白血病试剂和生长因子；用于治疗糖尿病的试剂诸如胰岛素、胰岛素类似物、α葡糖苷酶抑制剂、双胍和胰岛素敏化剂以及用于治疗免疫缺限病症的试剂诸如γ球蛋白。
这些附加的试剂可作为多剂量给药方案的一部分与包含抑制剂的组合物分别给药。或者，这些试剂还可以作为单一剂型的一部分与抑制剂在单一组合物中相混合。
本发明不受用于解释本发明的各个方面的示范性实施方案的范围的限制。事实上，除了本文所述的内容之外，本发明的各种改进从前面的描述来看对于本领域技术人员来说是显而易见的。所述的改进也落入本发明的范围内。此外，本发明的任何实施方案的任何一个或多个特征都可与本发明的任何其它实施方案的任何一个或多个其它特征相组合而不偏离本发明的范围。例如，在“吡咯并吡啶激酶调节剂”部分所述的吡咯并吡啶激酶调节剂可等同地应用于本文所述的治疗方法和抑制激酶的方法。在本中请中所引用的参考文献是现有技术水平的实例，在本文中将它们全文引入作为参考。
实施例
以下实施例是用于解释而不是限制所要求保护的本发明。本发明的实施方式的制备在以下实施例中有所描述。本领域普通技术人员将会理解，所提供的化学反应和合成方法可进行改进以制得本发明的许多其它化合物。在没有举例说明本发明化合物的情况下，本领域普通技术人员将会意识到，这些化合物可通过改进本文所述的合成方法以及通过利用本领域已知的合成方法来制得。将给出了试验结果的化合物用AE标记。
化合物的合成：
方法1：
步骤1：5-溴-3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向500mL的圆底烧瓶中加入5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(10.11g，51.3mmol)和250ml丙酮。加入N-碘琥珀酰亚胺(NIS，12.7g，56.4mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将沉淀物收集，然后用冷丙酮洗涤得到黄褐色粉末状的12.2g(74％)标题化合物。1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝12.35(br.s，1H)，8.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.84(d，J＝2.0Hz 1H)，7.79(s，1H)；MS：m/z 322.8/324.8[MH+]。
步骤2：5-溴-3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向250mL的圆底烧瓶中加入5-溴-3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(8.00g，40.6mmol)和120mL干燥THF。将溶液在冰浴中于0℃下冷却，然后分三批加入NaH(2.40g，60.0mmol)。20分钟后，加入对甲苯磺酰氯(8.70g，45.63mmol)并将反应混合物在30分钟内加热至室温。将反应混合物浓缩并加入己烷以得到沉淀物，将该沉淀物收集并用冰冷的2M NaOH洗涤。将粗产物用EtOAc/己烷重结晶得到浅黄褐色粉末状的17.8g(92％)标题化合物。1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ 8.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.99(d，J＝2.0Hz，1H)，7.98(d，J＝8.5Hz，2H)，7.42(d，J＝8.5Hz，2H)，2.32(s，3H)；MS：m/z 476.8/478.8 [MH+]。
步骤3：5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向500mL的圆底烧瓶中加入5-溴-3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(11.80g，20.96mmol)、2-甲氧基苯基硼酸(3.76g，24.74mmol)、二氯化二(三苯基膦)钯(II)(0.756g，1.08mmol)、乙腈(100mL)和100mL2M Na2CO3(水溶液)。在烧瓶上装配回流冷凝器，然后在60℃下于快速搅拌下在N2下加热8小时。将反应混合物过滤得到灰色-黄褐色沉淀物，将该沉淀物溶于EtOAc并用水和盐水洗涤。浓缩该溶液得到黄褐色粉末状的7.70g(80％)标题化合物。1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，8.14(d，J＝2.5Hz，1H)，8.07(s，1H)，8.03(d，J＝8.0Hz，2H)，7.54(dd，J＝1.5，7.5Hz，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，2H)，7.39(m，1H)，7.15(d，J＝7.5Hz，1H)，7.05(t，J＝7.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，2.34(s，3H)；MS：m/z456.9/458.9[MH+]。
步骤4：3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向5mL的Personal Chemistry微波反应瓶中加入5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(0.102g，0.220mmol)、二(频那醇)二硼(0.123g，0.483mmol)、1，1′-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(9.1mg，0.01mmol)以及无水乙酸钠(55mg，0.67mmol)和无水DMF(1mL)。将形成的混合物在Personal Chemistry Optimizer中于140℃下照射60分钟，然后用EtOAc稀释并用水萃取4次。将有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，利用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到白色粉末状的90.9mg(81％)标题化合物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.79(d，J＝1.0Hz，1H)，8.32(d，J＝1.0Hz，1H)，8.11(d，J＝5.5Hz，2H)，7.94(d，J＝3.0Hz，1H)，7.50(m，1H)，7.35(t，J＝7.5Hz，1H)，7.25(d，.J＝7.5Hz，2H)，7.05(t，J＝7.2Hz，1H)，7.01(d，J＝7.2Hz，1H)，3.85(s，3H)，2.35(s，3H)，1.31(s，12H)；MS：m/z 505.1[MH+]。
通过方法1制得的其它化合物：
表1
*参见关于合成2-(5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻唑的方法23。
方法2：
步骤1：5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-烟酰胺的合成
向5mL的Personal Chemistry微波反应瓶中加入3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(0.136g，0.270mmol)、5-溴-N，N-二甲基-烟酰胺(0.0756g，0.332mmol；制备方法如下所述)、1，1′-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(16.2mg，0.01mmol)、乙腈(2mL)和饱和NaHCO3水溶液(2mL)。将该小瓶密封，用N2净化，然后在Personal ChemistryOptimizer中于90℃下照射15分钟。将各层分离，将水相用EtOAc萃取3次。将合并的有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将粗产物溶于3∶1 MeOH/丙酮(4mL总量)并用500μL 50％w/w KOH(水溶液)处理1小时。加入冰乙酸以达到pH7，然后将反应混合物浓缩。将残余物在EtOAc和水之间进行分配，然后将各层分离，将有机相用水洗涤2次。将有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯(含10％MeOH)和己烷梯度洗脱得到黄褐色粉末状标题化合物(57mg，57％)。1H-NMR(500 MHz，d6-DMSO)δ＝11.96(br.s，1H)，8.95(d，J＝2.5Hz，1H)，8.56(d，J＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.24(d，J＝2.0Hz，1H)，8.13(t，J＝2.0Hz，1H)，7.72(d，J＝3.0Hz，1H)，7.59(dd，J＝2.0，5.5Hz，1H)，7.25(dd，J＝1，7.5Hz，1H)，7.08(d，J＝7.5Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，3.76(s，3H)，2.97(s，3H)，2.92(s，3H)；MS：m/z 373.1[MH+]。
中间体5-溴-N，N-二甲基-烟酰胺的制备：向100mL的圆底烧瓶中加入5-溴烟酰基氯(0.531g，2.41mmol)和无水吡啶(5mL)。滴加2M二甲基胺的THF溶液(5mL，10.0mmol)，然后将反应混合物在室温下于N2下搅拌6小时，然后将其真空浓缩。将粗残余物在EtOAc和水之间进行分配。将各层分离，将有机相用水洗涤3次，然后用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到棕色油状的5-溴-N，N-二甲基-烟酰胺(0.4951g，89％)。MS：m/z229/231[MH+]。
通过方法2(将硅胶色谱或基于质量采集的反相HPLC或两者用于下列化合物的纯化)制得的其它化合物：
表2
*Suzuki偶联在140℃下在微波中进行30分钟，并且Ts基团的除去并不需要碱处理。
方法3：
步骤1：5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酸乙酯的合成
向20mL的Personal Chemistry微波反应瓶中加入3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(0.995g，2.18mmol)、5-溴-烟酸乙酯(0.645g，2.33mmol)、1，1’-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(95.5mg，0.117mmol)、乙腈(10mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)。将小瓶密封，用N2净化，然后在Personal Chemistry Optimizer中于90℃下照射15分钟。将各层分离，将水相用EtOAc萃取三次。将合并的有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱得到白色粉末状的5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酸乙酯(0.794g，69％)。MS：m/z 528.1[MH+]。
步骤2：N-异丙基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酰胺的合成
向5mL的带螺帽的小瓶中加入5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酸乙酯(50.2mg，0.095mmol)和异丙基胺(500μL)。将该小瓶密封，然后在加热组件中在100℃下加热48小时。将反应溶液浓缩，将残余物溶于1∶1 MeOH/丙酮(2mL总量)并用100μL50％w/w KOH(水溶液)处理1小时。加入冰乙酸以达到pH7，然后将反应混合物浓缩。将残余物在EtOAc和水之间进行分配，然后将各层分离，将有机相用水洗涤2次。将有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯(含10％MeOH)和己烷梯度洗脱得到白色粉末状标题化合物(13mg，35％)。1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝11.96(br.s，1H)，9.05(d，J＝2.5Hz，1H)，8.94(d，J＝2.0Hz，1H)，8.64(d，J＝2.0Hz，1H)，8.51(d，J＝8.0Hz，1H)，8.46(d，J＝2.0Hz，1H)，8.30(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.61(d，J＝5.5Hz，1H)，7.29(dd，J＝2，7.5Hz，1H)，7.12(d，J＝7.5Hz，1H)，7.04(d，J＝7.5Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.84(s，3H)，1.17(s，6H)；MS：m/z 387.1[MH+]。
通过方法3制得的其它化合物：
表3
方法4：
步骤1：3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸的合成
向微波小瓶中的5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(1.01g，2.21mmol)的1∶1乙腈/饱和NaHCO3水溶液(20mL总量)溶液中加入(3-叔丁氧基羰基苯基)硼酸(0.54g，2.43mmol)和[1，1，-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(0.90g，0.11mmol)。将该小瓶盖上盖子，用N2冲洗，抽真空，随后在微波中于90℃下加热1800秒钟。将该物质用乙酸乙酯稀释，将有机层用H2O洗涤，然后用Na2SO4干燥。将溶液吸附到硅胶上，通过快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱得到白色固体状的3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸叔丁酯(1.07g，87％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.68(s，1H)，8.17(br s，3H)，8.09(s，1H)，7.99(m，2H)，7.71(d，J＝6.5Hz，1H)，7.50(m，2H)，7.34(t，J＝8.0Hz，1H)，7.32(d，J＝6.5Hz，2H)，7.06(m，2H)，3.88(s，3H)，2.39(s，3H)，1.60(s，9H)。MS：m/e 555.1(M+H+)。
向3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸叔丁酯(1.07g，1.82mmol)在1∶1 MeOH/丙酮溶液(40mL总量)的溶液中加入4mL 50％KOH水溶液。将反应混合物在室温下搅拌20小时。滴加冰乙酸至溶液的pH＝6。将产物用乙酸乙酯萃取并用Na2SO4干燥。将产物吸附到硅胶上并通过快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱得到无色油状的3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸叔丁酯，其开始结晶生成白色固体(1.97g，定量收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 11.34(s，1H)，8.50(s，2H)，8.21(s，1H)，8.05(d，J＝8.0Hz，1H)，7.75(m，2H)，7.55(m，2H)，7.40(t，J＝6.0Hz，1H)，7.10(m，2H)，3.88(s，3H)，1.25(s，9H)。MS：m/e 401.1(M+H+)。
向3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸叔丁酯(1.97g，4.92mmol)的乙酸(4mL)溶液中滴加预先混合的溴化氢(33％wt的乙酸溶液)(889μL，4.92mmol)和巯基乙酸(444μL，6.39 mmol)的溶液。将该烧瓶的内壁用另外的乙酸(3mL)冲洗，然后将反应溶液在室温下搅拌10分钟，此时产物开始从溶液中析出沉淀。将反应液在室温下继续搅拌1小时。将沉淀物过滤并用乙酸和二乙醚充分冲洗得到亮黄色固体状标题化合物(448mg，67％收率)。1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ 12.03(br s，1H)，8.58(s，1H)，8.21(d，2H)，7.99(d，1H)，7.94(d，1H)，7.76(d，1H)，7.61(m，2H)，7.31(t，1H)，7.14(d，1H)，7.06(t，1H)，3.83(s，3H)。MS：m/e 345.1(M+H+)。
步骤2：N-(2-二甲基氨基-乙基)-3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N-甲基-苯甲酰胺的合成
向3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸(21mg，0.06mmol)的无水DMF(1mL)溶液中加入HATU(23mg，0.06mmol)和N，N，N′-三甲基乙二胺(7.9μL，0.06mmol)。将反应溶液在室温下搅拌16小时，然后用DMSO(1mL)稀释，通过0.45μm注射过滤器过滤，然后通过反相色谱纯化，流动相为H2O和乙腈(含有0.1％甲酸作为改性剂)。将澄清的级分合并，冷冻干燥得到白色粉末状标题化合物(14.0mg，54％收率)。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ 8.51(d，J＝2.0Hz，1H)，8.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.83(br s，1H)，7.81(bs，1H)，7.69(s，1H)，7.60(m，2H)，7.49(m，1H)，7.32(t，J＝7.5Hz，1H)，7.13(d，8.5Hz，1H)，7.07(t，J＝6.5Hz，1H)，3.90(t，J＝6.0Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.33(s，3H)，3.17(s，3H)，2.91(s，3H)，2.80(br s，2H)。MS：m/e 429.1(M+H+)。
通过方法4制得的其它化合物：
表4
方法5：
步骤1：2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸甲酯的合成
在微波小瓶中，向3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(502mg，1.00mmol)在1.5mL饱和NaHCO3水溶液和5.0mL乙腈中的溶液中加入5-溴水杨酸甲酯(253mg，1.10mmol)和[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(41mg，0.05mmol)。将该小瓶盖上盖子，用N2冲洗，抽真空，随后在微波中于90℃下加热300秒钟。将该物质用乙酸乙酯稀释，将有机层用饱和NaHCO3(水溶液)和盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥。将该物质过滤，然后吸附到硅胶上，通过快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱得到吸湿性的白色固体状标题化合物(480mg，91％收率)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.55(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06(m，4H)，7.96(s，1H)，7.77(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)，7.52(dd，J＝2.0，6.0Hz，1H)，7.40(m，3H)，7.16(d，J＝8.5H，1H)，7.08(m，2H)，3.98(s，3H)，3.87(s，3H)，2.39(s，3H)。MS：m/z 529.1(M+H+)。
步骤2：N-(2-二甲基氨基-乙基)-2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N-甲基-苯甲酰胺的合成
向2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸甲酯(52mg，0.10mmol)的吡啶(0.5mL)溶液中加入过量的N，N，N′-三甲基乙二胺(0.5mL)。将反应液在闪烁瓶中于100℃下搅拌16小时。形成约50％的产物，并且有约50％的甲酯水解成了羧酸。将PS-碳二亚胺树脂(244mg，0.29mmol，1.21mmol/g负载容量)和DMF(1mL)加入到反应溶液中，然后在70℃下继续加热16小时。将树脂滤出并用THF和MeOH充分冲洗。将滤液浓缩得到黄色油，然后重新溶于1∶1 MeOH/丙酮溶液(总量为4 mL)中。将该溶液用200μL50％KOH(水溶液)溶液处理并在室温下搅拌3小时。滴加冰乙酸至pH＝7。将产物用乙酸乙酯萃取，将有机层用H2O洗涤，用Na2SO4干燥，过滤然后真空浓缩。将该物质溶于MeOH并通过0.45μm注射过滤器过滤。将溶液通过反相色谱纯化，用H2O和乙腈(含有0.1％的甲酸作为改性剂)梯度洗脱。将澄清的级分冷冻干燥得到白色粉末状标题化合物(5.2mg，12％收率)。1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ11.80(d，J＝2.5Hz，1H)，8.49(s，1H)，8.19(s，1H)，8.10(s，1H)，7.74(d，J＝2.5Hz，1H)，7.63(dd，J＝2.0，6.0Hz，1H)，7.51(d，J＝8.5Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.33(m，1H)，7.17(d，J＝8.5Hz，1H)，7.09(t，J＝6.5Hz，1H)，7.01(d，J＝9.0Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.01(br s，3H)，2.90(br s，2H)，2.59(m，2H)，2.36(br s，3H)，2.00(br s，3H)。MS：m/z 445.1(M+H+)。
通过方法5制得的其它化合物：
表5
方法6：
步骤1：(3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
将5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(3g，15mmol)、3-(吗啉-4-羰基)苯基硼酸(4g，18mmol)、碳酸氢钠(4g，46mmol)和四(三苯基膦)钯(0)在二_烷/水(100mL/20mL)中的混合物在110℃下搅拌15小时。然后将形成的混合物倒入冰水中并用乙酸乙酯萃取(3X)。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。将粗产物进行硅胶色谱得到黄色固体状的(3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(3.86g，84％收率)。MS：m/z308.1(M+H+)。
步骤2：(3-(3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
向(3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(550mg，1.79mmol)的丙酮(10mL)溶液中加入NIS(604mg，2.68mmol)并将混合物在室温下搅拌20分钟。减压除去丙酮，将粗产物通过硅胶色谱纯化得到(3-(3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(600mg，77％收率)。MS：m/z 434.2(M+H+)。
步骤3：(3-(3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
将(3-(3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(600mg，1.38mmol)、对甲苯磺酰氯(528mg，2.77mmol)、氢氧化钾(50％w/v的水溶液，0.387mL，3.45mmol)和四丁基氢氧化铵(40％w/v的水溶液，0.448mL，0.69mmol)在甲苯(5mL)中的混合物在室温下搅拌15小时。将水加入到混合物中并将含水混合物用乙酸乙酯萃取(3x)。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。将粗产物进行硅胶色谱得到黄色固体状的(3-(3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(600mg，74％收率)。MS：m/z 588.1(M+H+)。
步骤4：(3-(3-(2-氟苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
将(3-(3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(40mg，0.068mmol)、2-氟苯基硼酸(18mg，0.128mmol)、[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(3.9mg，0.005mmol)和碳酸钠(2M水溶液，0.102mL，0.204mmol)的乙腈(1mL)混合物在Personal微波中于90℃下加热30分钟。将形成的混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩至干得到粗品(3-(3-(2-氟苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮，其不经进一步纯化即可用于步骤5。
步骤5：(3-(3-(2-氟苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
将上一步骤得到的粗品(3-(3-(2-氟苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮溶于甲醇(1mL)并将氢氧化钾(50％w/v，0.038mL，0.136mmol)加入到该溶液中。将形成的混合物在室温下搅拌30分钟，然后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。然后将粗产物溶于DMSO，通过基于质量采集的反相HPLC得到纯化得到浅棕色糖浆状的纯净的(3-(3-(2-氟苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(5.6mg，21％收率，以(3-(3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮计)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 3.60(m，br，8H)，7.33(m，3H)，7.39(m，1H)，7.55(t，J＝7.5Hz，1H)，7.74(m，1H)，7.84(m，3H)，8.28(m，1H)，8.61(d，J＝2.5Hz，1H)，12.17(s，1H)。MS：m/z 402.1(M+H+)。
通过方法6制得的其它化合物：
表6
方法7：
步骤1：(3-(3-(2，6-二甲氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
将(3-(3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(40mg，0.068mmol)、2，6-二甲氧基苯基硼酸(18.6mg，0.102mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(3.9mg，0.0034mmol)和碳酸钠(2M水溶液，0.102mL，0.204mmol)在乙腈(1mL)中的混合物在Personal微波中于120℃下加热30分钟。将形成的混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩至干得到粗品(3-(3-(2，6-二甲氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮，其不经进一步纯化即可用于步骤2。
步骤2：(3-(3-(2，6-二甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成
将甲醇(1mL)加入到步骤1得到的粗品(3-(3-(2，6-二甲氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮中，然后将氢氧化钾(50％w/v，0.038mL，0.34mmol)加入到所形成的溶液中。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。进行硅胶色谱得到浅黄色固体状的(3-(3-(2，6-二甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮(7)(31％收率，以(3-(3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)(吗啉-4-基)甲酮计)。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ3.65(m，br，8H)，3.75(s，6H)，6.77(d，J＝8.5Hz，2H)，7.31(t，J＝8.5Hz，1H)，7.39(m，1H)，7.46(s，1H)，7.55(t，J＝7.5Hz，1H)，7.67(m，1H)，7.74(m，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，8.45(d，J＝2.0Hz，1H)。MS：m/z 444.1(M+H+)。
通过方法7制得的其它化合物：
表7
方法8：
步骤1：1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮的合成
向搅拌着的氯化铝(6.77g，50.75mmol)的无水CH2Cl2(100mL)悬浮液中于N2下加入5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(2.00g，10.15mmol)。将反应溶液在室温下搅拌1小时，然后滴加乙酰氯(3.61mL，50.75mmol)并将形成的溶液再搅拌5小时。将反应液在冰浴中冷却至0℃，然后小心地加入MeOH终止反应至该溶液变澄清。将反应液真空浓缩。加入H2O并滴加1N NaOH至pH＝4。将产物用乙酸乙酯萃取，将有机层用饱和酒石酸钠钾溶液洗涤以除去任何残留的铝盐。将有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。将该物质重新溶于乙酸乙酯并通过硅胶床过滤。将滤液浓缩得到橙色固体状标题化合物(2.25g，93％收率)。1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ12.70(br s，1H)，8.56(d，J＝2.5Hz，1H)，8.55(s，1H)，8.40(d，J＝2.5Hz，1H)，2.46(s，3H)。MS：m/z 238.9/240.9(M+H+)。
步骤2：1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-3-二甲基氨基-丙烯酮的合成
向1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮(2.25g，9.41mmol)中加入叔丁氧基二(二甲基氨基)甲烷(5.83mL，28.23mmol)(纯的)并在油浴中于100℃下回流6.5小时。将反应液冷却并用二乙醚滴定。将固体过滤，然后真空干燥得到橙色粉末状标题化合物(1.93g，70％收率)。1H NMR(500MHz，d6-OMSO)δ8.67(d，J＝2.5Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.31(d，J＝2.0Hz，1H)，7.57(d，J＝12.5Hz，1H)，5.78(d，J＝12.0Hz，1H)，2.49(s，6H)。
步骤3：5-溴-3-(2H-吡唑-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向微波小瓶中的1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-3-二甲基氨基-丙烯酮(1.93g，6.54mmol)的乙醇(5 mL)溶液中加入无水肼(247μL，7.85mmol)。将反应混合物在微波中于80℃下加热2.5小时。将反应混合物真空浓缩得到浅红棕色粉末状标题化合物(1.50g，87％收率)。1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ12.71(s，1H)，11.97(s，1H)，8.62(s，1H)，8.30(s，1H)，7.94(s，1H)，7.75(s，1H)，6.65(s，1H)。MS：m/z 263.0(M+H+)。
步骤4：5-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-3-[2-(甲苯-4-磺酰基)-2H-吡唑-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向5-溴-3-(2H-吡唑-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(1.51g，5.75mmol)的甲苯(5mL)溶液中加入四丁基氢氧化铵(40％wt的H2O水溶液，285μL)和50％KOH水溶液(5.7mL)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入对甲苯磺酰氯(2.17g，11.50mmol)。将反应液在室温下搅拌2.5小时。将产物用乙酸乙酯萃取，将有机层用H2O洗涤，然后用Na2SO4干燥。将该物质真空浓缩，然后吸附到硅胶上。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱得到黄色固体状标题化合物(1.73g，53％收率)。1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ8.68(s，1H)，8.57(d，J＝2.5Hz，1H)，8.54(d，J＝2.5Hz，1H)，8.49(d，J＝2.5Hz，1H)，7.96(d，J＝9Hz，2H)，7.92(d，J＝8.5Hz，2H)，7.47(d，J＝8.5Hz，2H)，7.41(d，J＝8Hz，2H)，7.29(d，J＝3Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.32(s，3H)。MS：m/z 570.9/571.9(M+H+)。
步骤5：5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-3-[2-(甲苯-4-磺酰基)-2H-吡唑-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向微波小瓶中的5-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-3-[2-(甲苯-4-磺酰基)-2H-吡唑-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(1.73g，3.02mmol)的DMF(7mL)溶液中加入二(频那醇)二硼(1.54g，6.04mmol)、[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(86mg，0.11mmol)和乙酸钠(0.74g，9.06mmol)。将该小瓶盖上盖子，用N2冲洗，抽真空，然后在微波中于140℃下加热3600秒钟。将产物用乙酸乙酯萃取，用H2O洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并吸附到硅胶上。将粗产物立即通过快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱。纯化得到白色固体状标题化合物(0.72g，39％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.81(s，1H)，8.73(s，1H)，8.16(m，1H)，8.07(d，J＝8.0Hz，2H)，8.04(m，2H)，7.038(d，J＝8.0Hz，2H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，6.67(m，1H)，2.41(d，J＝6.5Hz，3H)，2.36(d，J＝5.5Hz，3H)，1.39(s，12H)。MS：m/z 619.1(M+H+)。
步骤6：5-[3-(2H-吡唑-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酰胺的合成向微波小瓶中的5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-3-[2-(甲苯-4-磺酰基)-2H-吡唑-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(56mg，0.09mmol)在1∶1乙腈/饱和NaHCO3水溶液(总量为2mL)中的溶液中加入5-溴烟酰胺(20mg，0.10mmol)和[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(3.7mg，0.004mmol)。将该小瓶盖上盖子，用N2冲洗，抽真空，然后在微波中于90℃下加热1800秒钟。将产物用乙酸乙酯萃取，将有机层用Na2SO4干燥。将溶液过滤并真空浓缩。将残余物重新溶于1∶1 MeOH/丙酮溶液(总量为2mL)并用200μL 50％KOH水溶液处理，然后在室温下搅拌1小时。滴加柠檬酸(1M)至pH＝7，然后将产物用乙酸乙酯萃取，将有机层用Na2SO4干燥，过滤并吸附到硅胶上。将产物通过快速色谱纯化，用乙酸乙酯(含10％MeOH)和己烷梯度洗脱，然后真空浓缩。将残余物用二乙醚滴定得到米色固体状标题化合物(0.8mg，3％收率)。1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ12.67(s，1H)，11.87(s，1H)，8.95(s，1H)，8.62(s，1H)，8.50(s，1H)，8.25(s，1H)，7.89(s，1H)，7.63(s，1H)，7.41(d，J＝7.5Hz，1H)，7.05(d，J＝7.5Hz，1H)。MS：m/z 305.0(M+H+)。
通过方法8制得的其它化合物：
表8
方法9：
步骤1：(2-氨基-5-溴-苯基)-环戊基-甲醇的合成
向2-氨基-5-溴-吡啶-3-甲醛(632mg，3.14mmol)的无水THF(20mL)溶液中于-50℃下加入3M甲基溴化镁的二乙醚溶液(6.06mL，34.8mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌过夜。将饱和氯化铵水溶液加入到混合物(15mL)中，分离出有机层，将水相用EtOAc萃取(3×20mL)。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品残余物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱。得到黄色粉末状的(2-氨基-5-溴-苯基)-环戊基-甲醇(425.9mg，50％收率)。MS：m/z 271/273[MH+]。
步骤2：(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-环戊基-甲酮的合成
将(2-氨基-5-溴-苯基)-环戊基-甲醇(425.9mg，1.57mmol)和氧化锰(IV)(2.73g，31.4mmol)在二氯乙烷(12mL)中的混合物在50℃下加热20小时。将混合物用硅藻土垫过滤，然后将滤液蒸发得到黄色粉末状的(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-环戊基-甲酮(363.2mg，86％收率)。MS：m/z 269/271[MH+]。
步骤3：5-溴-3-(1-环戊基-2-甲氧基-乙烯基)-吡啶-2-基胺的合成
向冷却至0℃的甲氧基甲基三苯基氯化_(2.03g，5.92mmol)的THF(8mL)悬浮液中加入(二-三甲基甲硅烷基)氨化钾(1.26g，6.32mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后加入2-氨基-5-溴-吡啶-3-基-环戊基-甲酮(363.2mg，1.35mmol)的5mL THF溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液通过硅胶垫过滤。然后将滤液蒸发，将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc的己烷溶液梯度洗脱得到白色固体状的5-溴-3-(1-环戊基-2-甲氧基-乙烯基)-吡啶-2-基胺(116.9mg，29％收率)。MS：m/z 297/299[MH+]。
步骤4：5-溴-3-环戊基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将5-溴-3-(1-环戊基-2-甲氧基-乙烯基)-吡啶-2-基胺(116.9mg，0.39mmol)和高氯酸(0.1mL)在二_烷(1mL)中的混合物在80℃下加热2小时。蒸发溶剂，然后将残余物用2M碳酸钠溶液(5mL)洗涤。形成沉淀物，然后滤出。将其用水洗涤，然后干燥得到棕色固体状产物5-溴-3-环戊基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(69.8mg，67％收率)。MS：m/z 265/266[MH+]。
步骤5：3-(3-环戊基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚的合成
将5-溴-3-环戊基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(31.8mg，0.12mmol)、3-羟基苯基硼酸(33.1mg，0.24mmol)和4.2 mg(5mol％)二氯化二(三苯基膦)钯(II)的混合物置于小瓶中，然后加入0.8ml乙腈和0.8ml 2M碳酸钠水溶液并将该混合物在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下照射900秒钟。将形成的混合物在15mL饱和碳酸氢钠水溶液和30mL二氯甲烷之间进行分配。将有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到米白色粉末状的3-(3-环戊基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(4.5mg，14％收率)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.36(s，1H)，8.14(d，2Hz，1H)，7.29(t，8Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.10(d，7Hz，1H)，7.06(s，1H)，6.79(dd，2Hz，8Hz，1H)，2.1(m，2H)，1.94(m，2H)，1.8(m，4H)，1.37(m，1H)。MS：m/z 279.1[MH+]。
方法10：
步骤1：5-[3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(723-z1-26a)和2-{3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯基}-咪唑烷-2-醇的合成
将3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(43mg，0.085mmol)、2-(3-碘-苯基)-4，5-二氢-1H-咪唑(34.7mg，0.128mmol)和1，1’-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(3.1mg，4.2μmol)在0.8ml乙腈/0.8ml 2N碳酸钠中的混合物在Personal Chemistry Optimizer中于135℃下照射20分钟。将粗品反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。然后将水相用二氯甲烷萃取，将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到5-[3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(11.2mg，MS：MS：m/z 369.1 [MH+])和2-{3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯基}-咪唑烷-2-醇(13.2mg，m/z 387.1[MH+])，两者均为绿色固体。
方法11：
步骤1：5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-2-吗啉-4-基甲基-苯酚的合成
将3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(14.2mg，0.045mmol)、吗啉(5.87μl，0.067mmol)和低聚甲醛(2.7mg，0.09mmol)在400μl甲醇/甲苯(3∶7)中的混合物在60℃下搅拌1小时，然后在90℃下搅拌3小时。将形成的浅棕色残余物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到白色固体状的5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-2-吗啉-4-基甲基-苯酚(11.7mg，63％收率)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ 8.44(d，1.5Hz，1H)，8.22(d，1.5Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.56(dd，1.5Hz，7Hz，1H)，7.37(d，8Hz，1H)，7.32(dt，2Hz，7.8Hz，1H)，7.19(dd，2Hz，8Hz，1H)，7.17(d，1.5Hz，1H)，7.14(d，8Hz，1H)，7.06(dt，1Hz，7Hz，1H)，4.18(s，2H)，3.87(s，3H)，3.85(br s，4H)，3.09(br s，4H)。MS：m/z 416.1[MH+]。
通过方法11制得的其它化合物：
表9
方法12：
步骤1：3-(3-(2-甲氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯甲亚胺酸甲酯的合成
将HCl气体鼓泡通过3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苄腈(287.8mg，0.60mmol)的3.5mL无水MeOH悬浮液。然后将形成的混合物在室温下搅拌5小时，然后加入乙醚(20mL)。然后将沉淀物通过过滤收集，干燥，不经进一步纯化即可得到3-(3-(2-甲氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯甲亚胺酸甲酯。
步骤2：(1-(亚氨基(3-(3-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)苯基)甲基)哌啶-4-基)甲醇的合成
将亚胺酸酯沉淀物溶于MeOH至总体积为15.0mL，然后将其分成15等份(每份约为0.04mmol)以便与15种不同的胺反应。向该亚胺酸酯溶液中加入4-羟基甲基哌啶(9.9mg，0.086mmol，2当量)和三乙基胺(60μl，0.43mmol，10当量)，将混合物在室温下搅拌2天。在第2天结束时将NaOH(20mg，0.5mmol)的100μl水溶液加入到各反应混合物中以水解磺酰胺。在0℃下反应过夜。除去溶剂后，将粗产物通过反相HPLC纯化得到白色固体状的5.0mg[4-(亚氨基-{3-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯基}-甲基)-环己基]-甲醇。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ8.54(d，2Hz，1H)，8.33(d，2.5Hz，1H)，8.00(dt，1.5Hz，9Hz，1H)，7.91(br s，1H)，7.35(t，7.8Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.58(m，2H)，7.32(dt，1Hz，8.3Hz，1H)，7.12(dd，1Hz，8Hz，1H)，7.07(dt，1Hz，7.3Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.48(d，6.5Hz，2H)，3.38(m，4H)，1.78(m，1H)，1.42(m，4H)。MS：m/z 441.1 [MH+]。
通过方法12制得的其它化合物：
表10
方法13：
步骤1：3-(2-甲氧基-苯基)-5-(1H-四唑-5-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成将3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈(24.9mg，0.10mmol)、叠氮化钠(78mg，1.2mmol)和氯化铵(64.2mg，1.2mmol)的混合物置于小瓶中并加入2ml DMF。将混合物在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下照射900秒钟，然后在165℃下照射600秒钟。将混合物浓缩，通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到浅黄色固体状的3-(2-甲氧基-苯基)-5-(1H-四唑-5-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(28mg，95％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 11.95(brs，1H)，8.92(d，2Hz，1H)，8.59(d，2Hz，1H)，7.99(br s，1H)，7.74(s，1H)，7.59(dd，1.5Hz，7.5Hz，1H)，7.33(t，7.8Hz，1H)，7.16(d，8Hz，1H)，7.10(t，7.5Hz，1H)，3.84(s，3H)。MS：m/z 293.1[MH+]。
方法14：
步骤1：[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲醇的合成
将1.5M n-BuLi的己烷溶液(160μL，0.24 mmol)于-78℃下加入到5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(91.5mg，0.20mmol)的2ml THF溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后加入3，4，5-三甲氧基-苯甲醛(94.2mg，0.48mmol)的3mL THF溶液。将混合物在-78℃下搅拌1小时，然后在0℃下搅拌30分钟，用MeOH终止反应，然后浓缩。将粗品残余物通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到白色固体状的[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲醇(32mg，38％收率)。MS：m/z 420.1[MH+]。
通过方法14制得的其它化合物：
表11
方法15：
步骤1：[2-(4-{5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-基)-乙基]-二甲基-胺的合成
向5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-吡啶-3-甲醛(24mg，0.050mmol)和二甲基-(2-哌嗪-1-基-乙基)-胺(10μL，0.065mmol)的1.5ml二氯乙烷溶液中加入3μL AcOH。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(22mg，0.10mmol)。将反应混合物在室温下继续搅拌2小时，然后浓缩。然后将形成的残余物溶于2mlMeOH，向其中加入100μL 5N NaOH，将混合物在60℃下搅拌2小时。除去溶剂，将残余物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯和溶剂混合物(NH4OH/MeOH/CH2Cl2/EtOAc＝0.05/1/4/4)洗脱得到白色固体状的[2-(4-{5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-基)-乙基]-二甲基-胺(4.70mg，20％收率)。MS：m/z 471[MH+]。
通过方法15制得的其它化合物：
表12
方法16：
步骤1：5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-2-甲基-1H-苯并咪唑的合成
向微波小瓶中的5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-3-[2-(甲苯-4-磺酰基)-2H-吡唑-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(50.4mg，0.10mmol)在1∶1乙腈/饱和NaHCO3水溶液(总量为2mL)中的溶液中加入5-溴2-甲基-1H-苯并咪唑(46mg，0.22mmol)和[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(3.7mg，0.004mmol)。将该小瓶盖上盖子，用N2冲洗，抽真空，然后在微波中于155℃下搅拌1800秒钟。将产物用乙酸乙酯萃取，将有机层用Na2SO4干燥。将溶液过滤并真空浓缩。将残余物通过反相HPLC纯化得到米色固体状的5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-2-甲基-1H-苯并咪唑(10.1mg，28％收率m/e 355(M+H+)。
中间体的合成
5-溴-2-异丙基-1H-苯并咪唑的合成
将4-溴-苯-1，2-二胺二-HCl盐(1g，3.8mmol)和异丁醛(0.71mL，7.7mmol)在10mL水中的混合物在100℃下搅拌15小时。除去溶剂得到深棕色固体状的粗品5-溴-2-异丙基-1H-苯并咪唑，其不经进一步纯化即可直接使用。MS：m/e 239.0/241.0[MH+]。
5-溴-2-甲基-1H-苯并咪唑的合成
将4-溴-苯-1，2-二胺二-HCl盐(2g，3.8mmol)和乙酸(0.87mL，15.2mmol)在10mL水中的混合物在100℃下加热15小时。除去溶剂得到深棕色固体状的粗品5-溴-2-甲基-1H-苯并咪唑，其不经进一步纯化即可直接使用。MS：m/e 239.0/241.0[MH+]。
通过方法16制得的其它化合物：
表13
a)用硅胶色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱
b)二氯化二(三苯基膦)钯(II)作为催化剂
方法17：
步骤1：N-(5-溴-3-碘-吡啶-2-基)-乙酰胺的合成
向2-氨基-5-溴吡啶(12.7g，73.4mmol)的DMF(150ml)溶液中加入碘(14.9g，58.7mmol)和高碘酸钠(6.3g，29.4mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌20小时，然后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液用1M硫代硫酸钠水溶液洗涤2次，用无水硫酸镁干燥，然后通过硅胶垫过滤。蒸发溶剂得到16.5g棕色固体。将该固体溶于THF(150ml)并冷却至0℃。加入吡啶(6.7ml，71.7mmol)，然后滴加乙酰氯(5.1ml，71.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌20小时，然后在60℃下搅拌4小时。蒸发溶剂，将残余物在水(200ml)和二氯甲烷(250ml)之间进行分配。将水层用二氯甲烷萃取三次，将合并的有机层用无水硫酸镁干燥，然后过滤。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酯/己烷梯度洗脱得到橙色固体状标题化合物(7.76g，41％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ10.17(s，1H)，8.55(d，J＝2.0Hz，1H)，8.54(d，J＝2.0Hz，1H)，2.01(s，3H)；HPLC/MS m/z：340.8，342.8[MH]+。还分离得到浅橙色固体状的二乙酰基化的物质(7.0g，33％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.78(d，J＝2.5Hz，1H)，8.74(d，J＝2.5Hz，1H)，2.17(s，6H)；HPLC/MS m/z：402.8，404.8[MNa]+。
将二乙酰基化的物质(7g，18.27mmol)溶于二氯甲烷(180ml)并用PS-三胺(26g，3.53 mmol/g负载量，Argonaut Technologies)处理17小时。将树脂滤出，用二氯甲烷洗涤，然后蒸发溶剂得到5.95g标题化合物，其中含有10％的杂质2-氨基-3-碘-5-溴吡啶。
步骤2：N-(5-溴-3-三甲基硅烷基乙炔基-吡啶-2-基)-乙酰胺的合成
向N-(5-溴-3-碘-吡啶-2-基)-乙酰胺(6.42g，18.83mmol)的二氯甲烷(90ml)悬浮液中加入三乙胺(3.15ml，22.6mmol)，然后将混合物冷却至0℃并依次加入二氯化二(三苯基膦)钯(II)(66mg，0.094mmol)和碘化铜(I)(36mg，0.188mmol)。最后滴加三甲基甲硅烷基乙炔(2.93ml，20.71mmol)并除去冰浴。在室温下搅拌17小时后，将粗品混合物直接吸附到硅胶上。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到浅黄色固体状标题化合物(4.75g，81％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ9.99(s，1H)，8.31(d，J＝2.5Hz，1H)，7.95(d，J＝2.5Hz，1H)，1.82(s，3H)，0.00(s，9H)；HPLC/MSm/z：311，313[MH]+。
步骤3：5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向N-(5-溴-3-三甲基硅烷基乙炔基-吡啶-2-基)-乙酰胺(4.75g，15.26mmol)的THF(90ml)溶液中滴加1M四正丁基氟化铵的THF溶液(30.5ml，30.5mmol)。搅拌回流15小时后，将反应混合物真空浓缩并加入水。将水层用二氯甲烷萃取三次，将合并的萃取液直接吸附到硅胶上。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到2.29g米色固体。用乙酸乙酯/己烷重结晶得到淡米色薄片状标题化合物(1.33g)。将滤液用硅胶进一步纯化，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到结晶粉末状标题化合物(675mg)，合并收率为2.01g；67％。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.89(s，1H)，8.24(d，J＝2.0Hz，1H)，8.17(d，J＝2.5Hz，1H)，7.53(t，J＝3.0Hz，1H)，6.42(dd，J＝1.0，3.0Hz，1H)；HPLC/MS m/z：197[MH]+。
步骤4：5-溴-3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(300mg，1.52mmol)的丙酮(10ml)溶液中一次性加入N-碘琥珀酰亚胺(377mg，1.67mmol)。将反应混合物在室温下搅拌45分钟。将形成的沉淀物滤出，用最少量的丙酮洗涤，然后真空干燥得到乳白色固体状标题化合物(329mg，67％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ12.36(s，1H)，8.30(d，J＝2.0Hz，1H)，7.85(d，J＝2.0Hz，1H)，7.80(d，J＝2.5Hz，1H)；HPLC/MS m/z：323。
方法18：
步骤1：4-[3-(2-乙基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-2-(4-羟基-甲基-哌啶-1-基甲基)-苯酚的合成
将59.8mg(0.19mmol)4-[3-(2-乙基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚溶于0.6ml甲醇和2.4ml甲苯的混合物。加入11.4mg(0.38mmol)低聚甲醛和32.3mg(0.28mmol)4-哌啶甲醇并将该混合物在90℃下加热20小时。
将混合物在乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液之间进行分配。将水层用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，然后蒸发。将粗产物通过基于质量采集的反相HPLC纯化得到2mg(4μmol，2％收率)米色固体状的4-[3-(2-乙基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-2-(4-羟基甲基-哌啶-1-基甲基)-苯酚。1H-NMR(d4-甲醇)δ：8.50(m，1H)，8.45(s，1H)，7.90(d，J＝2Hz，1H)，7.52(m，2H)，7.41(s，1H)，7.38(d，J＝7.3Hz，1H)，7.32-7.34(m，2H)，7.26(t，J＝7.3Hz，1H)，6.96(d，J＝8.8Hz，1H)，4.17(s，2H)，3.44(d，J＝5.9Hz，2H)，3.38(d，J＝12.2Hz，2H)，2.80(t，J＝11.2Hz，2H)，2.68(q，J＝7.3Hz，2H)，1.91(d，J＝13.2Hz，2H)，1.46(m，2H)，1.08(t，J＝7.8Hz，3H)。MS：m/z 442[MH+]。
方法19：
4-[3-(2-乙基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-吡啶-2-醇的合成
将26mg(82μmol)3-(2-乙基-苯基)-5-(2-氟-吡啶-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶溶于3ml 1，4-二_烷、1.5L水和0.5mL浓盐酸水溶液的混合物。将该溶液在室温下搅拌16小时，然后在100℃下搅拌3小时。
冷却后，将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。将水层用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机相依次用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，然后蒸发得到25mg(79μmol，96％收率)4-[3-(2-乙基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-吡啶-2-醇。1H-NMR(d4-甲醇)δ：8.52(s，1H)，7.97(d，J＝2Hz，1H)，7.44(d，J＝6.3Hz，1H)，7.40(m，1H)，7.32(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25-7.28(m，2H)，7.18-7.22(m，1H)，6.69-6.71(m，2H)，2.59-2.63(m，2H)，1.02(m，3H)。MS：m/z 316[MH+]。
表14
*用30％HBr代替浓HCl。
方法20：
步骤1：甲苯-4-磺酸4-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酯的合成
将2.82 g(9.75mmol)4-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-苯酚和3.10g对甲苯磺酰氯于45℃下分散在400ml甲苯中。加入45ml 50％KOH水溶液和1.5ml 40％四正丁基氢氧化铵水溶液并将形成的混合物在室温下剧烈搅拌6小时。将形成的混合物用100ml饱和溴化钠水溶液稀释，将各相分离，将水层用甲苯萃取3次。将合并的有机相用2M氢氧化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物用含有10％v/v甲苯的乙醇结晶得到3.22g(5.29mmol，55％收率)象牙色结晶针状的甲苯-4-磺酸4-[5-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酯。
将1.50g(2.51mmol)该物质、1.30mg二(频那醇)二硼、680mg无水乙酸钠和100mg[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]-二氯化钯(II)二氯甲烷加合物置于Smith_瓶中，然后将该瓶用氮气冲洗。加入15ml无水DMF并将该混合物在Personal Chemistry微波反应器中在130℃下照射1小时。然后将形成的混合物在65℃下减压蒸发，将形成的残余物在乙醚和饱和溴化钠水溶液之间进行分配。将水层用乙醚萃取三次，将有机相合并，用硫酸钠干燥，然后通过硅藻土过滤。将滤液蒸发并真空干燥。
将残余物重新溶于150ml乙醚并将形成的悬浮液用80ml饱和溴化钠水溶液洗涤3次，用硫酸钠干燥然后蒸发。将残余物与200ml己烷一起搅拌至得到米色悬浮液。将不溶残余物滤出，真空干燥得到1.00g(1.55mmol，62％)米色粉末状的甲苯-4-磺酸4-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酯。1H-NMR(d4-甲醇)：δ9.19(d，J＝1.4 Hz，1H)，8.95(d，J＝1.5Hz，1H)，8.57(d，J＝8.3Hz，2H)，8.57(s，1H)，8.26(d，J＝8.3Hz，2H)，8.16(d，J＝8.3Hz，2H)，7.96(d，J＝7.8Hz，2H)，7.88(d，J＝8.3Hz，2H)，7.64(d，J＝8.7Hz，2H)，2.99(s，3H)，2.89(s，3H)，1.89(s，12H)。
步骤2：4-[5-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酚的合成
将50mg(80μmol)甲苯-4-磺酸4-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酯和7mg[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物置于Smith_瓶中。加入1ml乙腈、1ml 2M碳酸钠水溶液和16μl 2-溴-1-甲基-1H-咪唑并将形成的混合物在Personal Chemistry微波反应器中于165℃下照射20分钟。将形成的混合物用2ml DMSO和1ml甲醇稀释，随后用硫酸钠和0.45μmPTFE注射过滤器过滤。将滤液直接通过基于质量采集的反相HPLC纯化得到无色固体状的12mg(41μmol，52％收率)4-[5-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酚。1H-NMR(d6-DMSO)：δ11.97(s，1H)，9.40(s，1H)，8.53(d，J＝2.0Hz，1H)，8.40(d，J＝1.4Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.77(d，J＝2.4Hz，1H)，7.54(d，J＝8.3Hz，2H)，7.30(s，1H)，7.02(s，1H)，6.86(d，J＝8.7Hz，2H)，3.78(s，3H)；MS：m/z 291[MH+]。
通过方法20制得的其它化合物：
表15
方法21：
步骤1：5-溴-3-碘-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将2.30g(11.67mmol)5-溴-3-碘-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶在氮气下溶于90ml无水THF。在室温下加入过量氢化钠，随后加入3ml三异丙基甲硅烷基氯。将反应混合物在室温下搅拌4小时。
将混合物在乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液之间进行分配。将水相用乙酸乙酯萃取三次，将有机相合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到结晶固体状的3.493g(7.235mmol，62％收率)5-溴-3-碘-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)：δ8.34(d，J＝1.9Hz，1H)，7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.72(s，1H)，1.86(m，3H)，1.05(d，J＝7.8Hz，18H)。
步骤2：5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将1.01g(2.10mmol)5-溴-3-碘-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、336mg 2-甲氧基苯基硼酸和75mg(1，1′-二(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)二氯甲烷加合物置于Smith_瓶中，然后将其溶于15ml乙腈、5ml甲苯和7ml饱和碳酸氢钠水溶液的混合物。将混合物在65℃下加热4小时，然后冷却至室温。将粗产物在二氯甲烷和水之间进行分配，将有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。然后将粗产物通过快速硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到黄色油状的708mg(1.53mmol，73％)5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(以不能分离的混合物形式含有约20％残余原料)。1H-NMR(d6-DMSO)：δ8.33(d，J＝2.4Hz，1H)，8.15(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.55(dd，J＝1.3Hz，7.3Hz，1H)，7.33(ddd，J＝1.9Hz，7.3Hz，1H)，7.15(dd，J＝1.0Hz，8.3Hz 1H)，7.06(dt，J＝1.0Hz，7.3Hz，1H)，3.82(s，3H)，1.88(m，3H)，1.10(d，18H)。
步骤3：[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-甲基-苯基-胺的合成
将30mg叔丁醇钠和12mg二(叔丁基膦)钯(0)置于Smith_瓶中，然后将该瓶用氮气冲洗。加入100mg(0.22mmol)5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的1ml无水1，4-二_烷溶液和35μlN-甲基苯胺，然后将形成的混合物在130℃下加热15小时。然后将反应混合物冷却至室温并加入0.4ml 1M四正丁基氟化氨的THF溶液。将混合物在室温下搅拌2小时。加入2ml甲醇和负载钠的amberlyst强酸性离子交换树脂。在室温下振荡2小时后，将粗产物直接吸附到硅胶上，然后通过快速硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到棕色残余物形式的42mg(0.14mmol；64％收率)[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-甲基-苯基-胺。1H-NMR(d6-DMSO)：δ11.88(s，1H)，8.11(d，J＝2.5Hz，1H)，7.75(d，J＝2.4Hz，1H)，7.70(d，J＝2.5Hz，1H)，7.48(dd，J＝1.5Hz，7.3Hz，1H)，7.26(ddd，J＝1.5Hz，8.3Hz，1H)，7.16(t，J＝7.9Hz，2H)，7.08(d，J＝8.3Hz，1H)，7.00(t(d)，J＝0.9Hz，8.3Hz，1H)，6.72-6.68(m，3H)，3.76(s，3H)，3.29(s，3H)；MS：m/z 330[MH+]。
通过方法21制得的其它实施例：
表16
方法22：
步骤1：5-溴-1-(2-甲氧基-乙氧基甲基)-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
在氮气下，将755mg(2.49mmol)5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶溶于30ml无水THF。加入200mg氢化钠并将形成的混合物在室温下搅拌4小时。加入0.5ml(2-甲氧基-乙氧基)甲基氯并将形成的混合物在室温下搅拌72小时。加入0.75ml(2-甲氧基-乙氧基)甲基氯和过量氢化钠并将该反应混合物在室温下继续搅拌4小时。加入250mg四正丁基碘化铵并将该反应混合物在室温下搅拌2小时。然后通过加入甲醇终止反应，并在饱和氯化铵水溶液和二氯甲烷之间进行分配。将水相用吡啶pethane萃取，将合并的有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。然后将粗产物通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到黄色油状的922mg(2.36mmol，95％收率)5-溴-1-(2-甲氧基-乙氧基甲基)-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)：δ8.40(d，J＝1.9Hz，1H)，8.17(d，7＝1.9Hz，1H)，7.97(s，1H)，7.52(dd，7＝1.3Hz，7.3Hz，1H)，7.34(dd，J＝1.4Hz，8.7Hz，1H)，7.15(d，J＝8.2Hz 1H)，7.06(t，J＝7.3Hz，1H)，5.71(s，2H)，3.83(s，3H)，3，57(m，2H)，3.41(m，2H)，3.20(s，3H)；MS：m/z 315，317[MH+-MeOC2H4O]。
步骤2：1-(2-甲氧基-乙氧基甲基)-3-(2-甲氧基-苯基)-5-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将180mg(0.5mmol)5-溴-1-(2-甲氧基-乙氧基甲基)-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、10mg二(苄腈)二氯化钯(II)、11mg 2，5-二-(2，6-二-异丙基苯基)咪唑_氯化物和65mg叔丁醇钾置于Smith_瓶中。将该瓶用氮气冲洗并加入3ml无水1，4-二_烷和70μl吗啉。将形成的混合物在120℃下加热14小时。将混合物冷却至室温，吸附到硅胶上，然后通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到无色油状的65mg(0.17mmol，33％收率)1-(2-甲氧基-乙氧基甲基)-3-(2-甲氧基-苯基)-5-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(CDCl3)：δ8.17(d，J＝2.8Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.59(d，J＝2.5Hz，1H)，7.54(dd，J＝1.6Hz，7.4Hz，1H)，7.31(ddd，J＝1.6Hz，7.4Hz，9Hz，1H)，7.07(ddd，J＝1.1Hz，7.4Hz，7.4Hz，1H)，7.03(d(m)，J＝8.3Hz，1H)，5.71(s，2H)，3.87(s，3H)，3.68(m，2H)，3.49(m，2H)，3.35(s，3H)；MS：m/z 398[MH+]。
步骤3：3-(2-甲氧基-苯基)-5-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将65mg(0.17mmol)1-(2-甲氧基-乙氧基甲基)-3-(2-甲氧基-苯基)-5-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶溶于3ml乙醇和2ml水的混合物。加入500μl甲酸并将该混合物在65℃下加热16小时，然后在微波中于150℃下照射40分钟。将形成的混合物通过加入碳酸氢钠和水来中和，然后将粗产物在乙酸乙酯和盐水之间进行分配。将水相用用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机相用硫酸钠干燥，然后蒸发得到47mg(0.15mmol，94％收率)3-(2-甲氧基-苯基)-5-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)：δ11.58(s，1H)，8.11(d，J＝2.5Hz，1H)，7.59(d，J＝2.4Hz，1H)，7.51(dd，J＝1.4Hz，7.3Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.27(ddd，J＝1.5Hz，8.8Hz，1H)，7.11(d，J＝8.3Hz，1H)，7.02(dd(d)，J＝1.5Hz，7.3Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.77(m，4H)，3.07(m，4H)；MS：m/z 310[MH+]。
方法23：
步骤1：5-碘-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将337.3mg(0.74 mmol)5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、11.3mg(59μmol)碘化铜(I)和185mg(1.24mmol)碘化钠置于Smith_瓶中并将该瓶用氮气冲洗。加入6ml无水甲苯和14μl(0.13mmol)N，N′-二甲基乙二胺并将形成的悬浮液在120℃下加热16小时。
将混合物冷却至室温，然后在乙酸乙酯和水之间进行分配。将水层用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到无色固体状的261mg(0.52mmol，70％收率)5-碘-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。
步骤2：3-(2-甲氧基-苯基)-5-吡咯-1-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将40mg(79μmol)5-碘-3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、30mg(0.14mmol)无水磷酸钾和1.2mg(6μmol)碘化铜(I)置于Smith_瓶中。将该瓶用氮气冲洗并加入1ml无水甲苯、6.7μl(95μmol)吡咯和2μl(10μmol)外消旋-反式-N，N′-二甲基-1，2-环己烷二胺。将形成的悬浮液在120℃下加热22小时。加入1.2mg(6μmol)碘化铜(I)和2μl(10μmol)外消旋-反式-N，N′-二甲基-1，2-环己烷二胺并将反应混合物继续加热20小时。
将形成的混合物在水和乙酸乙酯之间进行分配，分离各相并将水层用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到米色固体状的27.9mg(63μmol，80％收率)3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-5-吡咯-1-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。
将该物质溶于乙醇并加入400μl 50％氢氧化钾水溶液。将该溶液在Personal Chemistry Optimizer_微波反应器中于165℃下加热20分钟。将粗产物在水和乙酸乙酯之间进行分配，分离各相，将水层用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，然后蒸发得到米色固体状的20mg(70μmol，87％收率)3-(2-甲氧基-苯基)-5-吡咯-1-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-CDCl3)：δ10.48(s)[1H]，8.49(s)[1H]，8.09(d)[1H]，7.73(s)[1H]，7.56(d)[1H]，7.34(t)[1H]，7.05-7.10(m)[4H]，7.40(d)[2H]，3.81(s)[3H]。MS：m/z 290(88％)[MH+]。
方法24：
步骤1：2-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻唑的合成
将5-溴-3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(1.66g，3.48mmol)、2-三丁基锡烷基-噻唑(1.3g，1.21mL，3.48mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(116mg，0.1mmol)在无水二_烷中的混合物在回流条件下于氮气氛下搅拌3天。将反应混合物冷却至室温，用活性炭处理并通过硅藻土过滤。将滤液浓缩，通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯重结晶得到2-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻唑的混合物(1.11g，73％收率)。MS：m/z434/436(M+H+)。
步骤2：2-(5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻唑的合成
将2-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻唑(75mg，0.17mmol)、吡啶-3-基硼酸(27mg，0.22mmol)、1，1′-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(6.9mg，0.009mmol)、乙腈(1mL)和饱和NaHCO3水溶液(1mL)的混合物在密封微波试管中于140℃下搅拌30分钟。然后将形成的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，然后浓缩至干。进行硅胶色谱得到白色固体状的2-(5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻唑(36mg，76％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.47(m，1H)，7.56(d，J＝3.5Hz，1H)，7.81(d，J＝3.5Hz，1H)，8.10(m，1H)，8.24(s，1H)，8.55(dd，J＝2.0，5.0Hz，1H)，8.61(d，J＝2.5Hz，1H)，(d，J＝2.0Hz，1H)，8.89(m，1H)，12.37(s，1H)。MS：m/z 279.0(M+H+)。
通过方法24制得的其它化合物：
表17
方法25：
步骤1：5-(3，5-二甲基-异_唑-4-基)-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向Smith反应瓶中的5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(40mg，0.087mmol)、3，5-二甲基-异_唑-4-硼酸(16mg，0.114mmol)和[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(4mg，0.0044mmol)中加入0.6mL乙腈和2 M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。将反应混合物用1∶1甲醇/二氯甲烷稀释，过滤，然后将滤液吸附到硅胶上。进行硅胶色谱，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到米色结晶状的5-(3，5-二甲基-异_唑-4-基)-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(20mg，71％收率)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ 2.23(s，3H)，2.41(s，3H)，3.81(s，3H)，7.01(dt，J＝1.0，7.0Hz，1H)，7.1 1(dd，J＝1.0，8.0Hz，1H)，7.28(dt，J＝1.5，7.0Hz，1H)，7.51(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.73(d，J＝3.0Hz，1H)，7.90(d，J＝1.5Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，11.9(s，1H)。MS：m/z 320(M+H+)。
通过方法25制得的其它化合物：
表18
a)二(三苯基膦)二氯化钯(II)作为催化剂
b)从1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮得到
方法26：
步骤1：3-(3-呋喃-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚的合成
向Smith反应瓶中的甲苯-4-磺酸3-[3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯(50mg，0.077mmol，按照方法6制得)、呋喃-3-硼酸(11mg，0.1mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(3mg，0.0046mmol)中加入0.6mL乙腈和2 M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在PersonalChemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。将混合物用DMF(约5mL)稀释并用注射过滤器(0.45微米)过滤。将滤液真空浓缩并重新溶于DMSO。通过反相色谱纯化，用H2O和乙腈(0.1％甲酸作为改性剂)梯度洗脱得到米白色固体状的3-(3-呋喃-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(6mg，56％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.70(dd，J＝2.5，8.0Hz，1H)，6.92(d，J＝2.0Hz，1H)，7.07(t，J＝2.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，7.21(t，J＝8.0Hz，1H)，7.67(t，J＝1.5Hz，1H)，7.77(d，J＝2.5Hz，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，8.27(s，1H)，8.41(d，J＝2.0Hz，1H)，9.5(宽的s，1H)，11.8(s，1H)。MS：m/z 277(M+H+)。
通过方法26制得的其它化合物：
表19
a)10wt％Pd/C作为催化剂
b)[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)作为催化剂
c)通过硅胶色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱
方法27：
步骤1：3-[3-(3-氟-4-羟基苯基)-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚的合成
向Smith反应瓶中的甲苯-4-磺酸3-[3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯(50mg，0.077mmol)、3-氟-4-苄氧基苯基硼酸(24mg，0.1mmol)和[1，1’-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(3mg，0.0046mmol)中加入0.6mL乙腈和2 M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入水，然后加入饱和NH4Cl水溶液至pH6。将水层用EtOAc萃取三次。将粗有机液浓缩并溶于4mL(1∶1)EtOH/KOH水溶液(50％wt)。将混合物在100℃下搅拌21小时，然后用水稀释，用1N HCl水溶液酸化至pH4。将形成的沉淀物过滤，用水洗涤，然后真空干燥。将灰色固体在1N HCl水溶液(2mL)中形成悬浮液并搅拌回流17小时。加入1N NaOH水溶液至pH4，将混合物真空浓缩并用MeOH稀释。将盐过滤并将滤液吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到黄色固体状的3-[3-(3-氟-4-羟基苯基)-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(5mg，20％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 6.75(dd，J＝2.5，7.5Hz，1H)，7.03(dd，J＝9.0，10.0Hz，1H)，7.09(t，J＝2.0Hz，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(t，J＝8.0Hz，1H)，7.41(dd，J＝1.5，8.5Hz，1H)，7.51(dd，J＝1.5，13.0Hz，1H)，7.82(d，J＝2.0Hz，1H)，8.30(d，J＝2.0Hz，1H)，8.47(d，J＝2.0Hz，1H)，9.54(s，1H)，9.80(宽的s，1H)，11.9(s，1H)。MS：m/e 321(M+H+)。
方法28：
步骤1：1-{2-羟基-3-[5-(3-羟基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-乙酮的合成
向3-[3-(2，6-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(12mg，0.0346mmol)中加入0.5mL 33wt％溴的AcOH溶液。将混合物在70℃下搅拌6小时，然后将其用1.2mL 50wt％KOH水溶液处理并在室温下继续搅拌3天，然后在80℃下搅拌3小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH4并用EtOAc萃取三次。将萃取液合并并吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到白色固体状的1-{2-羟基-3-[5-(3-羟基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-乙酮(2.6mg，20％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ2.65(s，3H)，3.85(s，3H)，6.72(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，6.83(d，J＝8.5Hz，1H)，6.99(t，J＝2.0Hz，1H)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H)，7.23(t，J＝8.0Hz，1H)，7.54(d，J＝2.5Hz，1H)，7.73(d，J＝2.0Hz，1H)，8.00(d，J＝9.0Hz，1H)，8.44(d，J＝2.0Hz，1H)，9.49(s，1H)，11.9(s，1H)，13.0(s，1H)。MS：m/z 375(M+H+)。
方法29：
步骤1：2-[5-(3-羟基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯-1，3-二醇的合成
向3-[3-(2，6-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(23mg，0.066mmol)的二氯甲烷(1mL)悬浮液中于-78℃下滴加1M三溴化硼的二氯甲烷溶液(0.23mL，0.23mmol)。将反应混合物在4小时内升温至室温，然后用水终止反应并用饱和碳酸氢钠水溶液中和至pH8。将混合物用EtOAc萃取三次，将萃取液合并，然后吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到米色固体状的2-[5-(3-羟基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯-1，3-二醇(17mg，81％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.43(d，J＝8.0Hz，1H)，6.73(dd，J＝2.5，7.5Hz，1H)，6.91(t，J＝8.0Hz，1H)，7.00(t，J＝2.0Hz，1H)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H)，7.24(t，J＝8.0Hz，1H)，7.46(d，J＝2.5Hz，1H)，7.85(d，J＝2.0Hz，1H)，8.42(d，J＝2.0Hz，1H)，9.10(宽的s，2H)，9.49(宽的s，1H)，11.7(s，1H)。MS：m/z 319(M+H+)。
方法30：
步骤1：3-[3-(2H-吡唑-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚的合成
向1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-3-二甲基氨基-丙烯酮(30mg，0.102mmol)的EtOH悬浮液中加入肼(5μL，0.122mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌3小时，然后真空浓缩。向粗产物中加入3-羟基苯基硼酸(18mg，0.132mmol)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)(4mg，0.006mmol)和1mL乙腈和2M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下进行600秒钟。将反应混合物用甲醇(约6mL)稀释，过滤并将滤液吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到米色固体，将该固体通过反相色谱进一步纯化，用H2O和乙腈(0.1％甲酸作为改性剂)梯度洗脱得到白色固体状的3-[3-(2H-吡唑-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(9.6mg，34％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.61(d，J＝2.0Hz，1H)，6.71(dd，J＝2.5，8.0Hz，1H)，7.03(s，1H)，7.08(d，J＝8.0Hz，1H)，7.22(t，J＝8.0Hz，1H)，7.65(宽的s，1H)，7.84(d，J＝2.5Hz，1H)，8.43(d，J＝2.0Hz，1H)，8.53(宽的s，1H)，9.51(宽的s，1H)，11.8(宽的s，1H)。MS：m/z 277(M+H+)。
通过方法30制得的其它化合物：
表20
a)来自甲基肼
b)来自胍盐酸盐和碳酸钠
方法31：
步骤1：3-(3-苯基乙炔基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚的合成
向甲苯-4-磺酸3-[3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯(60mg，0.093mmol，按照方法6所述的方法制得)的二氯甲烷(0.5mL)溶液中于氮气氛下依次加入三乙基胺(16μL，0.112mmol)、碘化铜(I)(0.6mg，0.00315mmol)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.9mg，0.00128mmol)和苯基乙炔(11μL，0.102mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后直接吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到46mg米白色固体，将该固体进一步悬浮在2ml EtOH和2mL KOH水溶液(50wt％)中。将反应混合物在80℃下搅拌4小时，然后用1N HCl水溶液酸化至pH4。将乳状溶液用EtOAc萃取三次，将萃取液合并，然后吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到米色固体状的3-(3-苯基乙炔基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(12mg，41％收率)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.77(dd，J＝2.5，7.5Hz，1H)，7.10(t，J＝2.0Hz，1H)，7.17(d，J＝6.0Hz，1H)，7.28(t，J＝8.0Hz，1H)，7.37-7.43(m，3H)，7.58(d，J＝7.0Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.18(d，J＝2.5Hz，1H)，8.54(d，J＝2.5Hz，1H)，9.55(s，1H)，12.2(宽的s，1H)。MS：m/e 311(M+H+)。
方法32：
步骤1：3-[3-(2-吡啶-2-基-乙烯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚的合成
向甲苯-4-磺酸3-[3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯(50mg，0.077mmol)、三邻甲苯基膦(10mg，0.031mmol)、乙酸钯(II)(2mg，0.0077mmol)中加入DMF(0.5mL)、三乙基胺(32μL，0.232mmol)和2-乙烯基吡啶(42μL，0.388mmol)。将该瓶用氮气冲洗，反应在PersonalChemistry_微波反应器中于150℃下进行900秒钟。加入水并将混合物用1N HCl水溶液中和至pH6，然后用EtOAc萃取三次。将萃取液合并然后真空浓缩。将粗产物用1mL EtOH和1mL KOH水溶液(50wt％)处理。将反应混合物在80℃下搅拌15小时。将混合物用1N HCl水溶液中和至pH7，将形成的沉淀物过滤，用水洗涤，真空干燥，然后吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到黄色固体状的3-[3-(2-吡啶-2-基-乙烯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(17mg，35％收率)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.78(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.13(s，1H)，7.15-7.20(m，2H)，7.26(d，J＝16.0Hz，1H)，7.29(t，J＝8.0Hz，1H)，7.57(d，J＝7.5Hz，1H)，7.73(dt，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.90(d，J＝16.0Hz，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J＝5.0Hz，1H)，8.54(d，J＝2.5Hz，1H)，9.56(s，1H)，12.1(s，1H)。MS：m/z314(M+H+)。
通过方法32制得的其它化合物：
表21
方法33：
步骤1：3-[3-(2-吡啶-2-基-乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚的合成
将3-[3-(2-吡啶-2-基-乙烯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(10mg，0.032mmol)和10wt％Pd/C(1.7mg，0.0016mmol)在0.9mlMeOH/CH2Cl2/DMF混合物(1∶1∶1)中的悬浮液在H2气氛下搅拌2天。将混合物直接吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到黄色固体状的3-[3-(2-吡啶-2-基-乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(6mg，60％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ3.22(t，J＝7.5Hz，2H)，3.37(t，J＝7.5Hz，2H)，6.77(d，J＝7.5Hz，1H)，7.07(s，1H)，7.11(d，J＝7.0Hz，1H)，7.27(m，2H)，7.82(m，1H)，7.93(d，J＝7.0Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.43(m，2H)，8.79(d，J＝5.5Hz，1H)，9.54(宽的s，1H)，11.53(s，1H)。MS：m/z 316(M+H+)。
方法34：
步骤1：3-[3-(3-氟-苄基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚的合成
向甲苯-4-磺酸3-[3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯(50mg，0.077mmol，按照方法6所述的方法制得)的THF(2mL)溶液中于-90℃下在氮气氛下滴加t-BuLi的戊烷溶液(1.7M，90μL)。搅拌5分钟后，加入3-氟-苯甲醛(40μL，0.38mmol)并将反应混合物在2小时内缓慢升温至10℃，然后用饱和氯化铵溶液终止反应并用EtOAc萃取三次。将萃取液合并，然后吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到26mg甲苯-4-磺酸3-[3-[(3-氟-苯基)-羟基-甲基]-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯。将该物质在氮气氛下溶于二氯甲烷(0.3mL)。加入三乙基硅烷(24μL，0.149mmol)，然后滴加三氟化硼醚合物(7μL，0.149mmol)。搅拌15小时后，将反应液用饱和碳酸氢钠溶液终止反应并用二氯甲烷萃取三次。将萃取液合并然后真空浓缩。将粗产物用2mLEtOH和2mL KOH水溶液(50wt％)处理。将反应混合物在70℃下搅拌1小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH4并用EtOAc萃取三次。将萃取液合并然后吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到米色固体状的3-[3-(3-氟-苄基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚(8mg，66％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ4.11(s，3H)，6.74(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，6.97(dt，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.00(s，1H)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H)，7.13(d，J＝10.5Hz，1H)，7.17(d，J＝8.0Hz，1H)，7.25(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(q，J＝8.0Hz，1H)，7.40(d，J＝2.5Hz，1H)，8.07(d，J＝2.0Hz，1H)，8.42(d，J＝2.0Hz，1H)，9.56(宽的s，1H)，11.6(s，1H)。MS：m/z 319(M+H+)。
通过方法34制得的其它化合物：
表22
方法35：
步骤1：3-(3-环己-1-烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚的合成
向5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(100mg，0.507mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入环己酮(52μL，1.015mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后真空浓缩。向残余物中加入3-羟基苯基硼酸(91mg，0.66mmol)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)(18mg，0.025mmol)和2mL乙腈和2M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下继续600秒钟。将反应混合物用甲醇稀释，过滤，然后将滤液吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到米白色固体状的3-(3-环己-1-烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(12.6mg，12％收率)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.64(m，2H)，1.74(m，2H)，2.23(m，2H)，2.42(m，2H)，6.27(m，1H)，6.74(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.05(s，1H)，7.11(d，J＝7.5Hz，1H)，7.26(t，J＝8.0Hz，1H)，7.50(d，J＝2.0Hz，1H)，8.26(d，J＝2.0Hz，1H)，8.42(d，J＝2.0Hz，1H)，9.51(宽的s，1H)，11.7(s，1H)。MS：m/z 291(M+H+)。
通过方法35制得的其它化合物：
表23
方法36：
步骤1：3-(3-环己基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚的合成
将3-(3-环己-1-烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(6.7mg，0.023mmol)和10wt％Pd/C(3mg)的甲醇(0.9ml)悬浮液在H2气氛下搅拌24小时。将反应混合物通过硅胶塞过滤，蒸发溶剂得到白色固体状的3-(3-环己基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(2.5mg，37％收率)。1H NMR(500MHz，MeOH-d4)δ1.35(m，1H)，1.54(m，4H)，1.80(m，1H)，1.88(m，2H)，2.10(m，2H)，2.87(m，1H)，6.79(dd，J-2.5，8.0Hz，1H)，7.06(t，J＝2.0Hz，1H)，7.10(d，J＝7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.29(t，J＝8.0Hz，1H)，8.14(d，J＝2.0Hz，1H)，8.35(d，J＝2.0Hz，1H)，9.51(宽的s，1H)，11.7(s，1H)。MS：m/e293(M+H+)。
通过方法36制得的其它化合物：
表24
方法37：
步骤1：3-(3-苯硫基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚的合成
向甲苯-4-磺酸3-[3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酯(50mg，0.077mmol)、碘化铜(I)(1.5mg，0.004mm0l)和碳酸钾(16mg，0.155mmol)中于氮气氛下加入异丙醇(0.2mL)、苯硫酚(8μL，0.077mmol)和乙二醇(9μL，0.155mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌24小时。加入2M KOH水溶液和MeOH的(1∶1)混合物(1mL)并将反应混合物在50℃下继续搅拌3小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH5并用EtOAc萃取2次。将萃取液合并然后真空浓缩。通过反相色谱纯化，用H2O和乙腈(0.1％甲酸作为改性剂)梯度洗脱得到白色固体状的3-(3-苯硫基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-苯酚(4.3mg，17％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.74(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H)，6.98(t，J＝2.0Hz，1H)，7.08(m，4H)，7.23(m，3H)，7.85(d，J＝2.5Hz，1H)，7.98(s，1H)，8.56(d，J＝2.0Hz，1H)，9.55(宽的s，1H)，12.4(宽的s，1H)。MS：m/z 319(M+H+)。
通过方法37制得的其它实施例：
表25
方法38：
步骤1：(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-苯基-甲酮的合成
向AlCl3(338mg，2.54mmol)的二氯甲烷(10mL)悬浮液中加入5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(100mg，0.507mmol)。搅拌45分钟后，加入苯甲酰氯(0.3mL，2.54mmol)，将反应混合物搅拌3小时，然后在0℃下用MeOH终止反应。将混合物真空浓缩，通过加入1N NaOH水溶液将pH改变至4，将水层用EtOAc萃取2次。将有机层用MgSO4干燥，过滤，然后吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用EtOAc/己烷梯度洗脱得到白色固体状的(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-苯基-甲酮(61mg，40％收率)。
步骤2：[5-(3-羟基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯基-甲酮的合成
向Smith反应瓶中的(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-苯基-甲酮(50mg，0.167mmol)、3-羟基苯基硼酸(30mg，0.217mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(6mg，0.0083mmol)中加入1mL乙腈和2M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下进行1200秒钟。将混合物用DMF(约5mL)稀释并通过硅胶塞过滤。将滤液吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用MeOH/二氯甲烷梯度洗脱得到黄色固体状的[5-(3-羟基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯基-甲酮(37mg，71％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.80(dd，J＝2.0，7.5Hz，1H)，7.10(t，J＝2.0Hz，1H)，7.14(d，J＝9.0Hz，1H)，7.31(t，J＝7.5Hz，1H)，7.57(t，J＝7.5Hz，2H)，7.65(t，J＝7.5Hz，1H)，7.84(d，J＝7.0Hz，2H)，8.14(s，1H)，8.61(d，J＝2.0Hz，1H)，8.68(d，J＝2.0Hz，1H)，9.65(宽的s，1H)。MS：m/z315(M+H+)。
方法39：
步骤1：3-(2H-吡唑-3-基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向Smith反应瓶中的5-溴-3-(2H-吡唑-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(30mg，0.114mmol)、3-吡啶基硼酸频哪醇酯(30mg，0.148mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(4mg，0.0057mmol)中加入1mL乙腈和2M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下进行900秒钟。将混合物用DMF(约5mL)稀释，通过硅胶塞过滤，然后蒸发溶剂。通过反相色谱纯化，用H2O和乙腈(0.1％甲酸作为改性剂)梯度洗脱得到白色固体状的3-(2H-吡唑-3-基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的甲酸盐(4.5mg，13％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.61(宽的s，1H)，6.73(宽的s，1H)，7.53(dd，J＝5.5，7.0Hz，1H)，7.71(宽的s，1H)，7.94(d，J＝2.5Hz，1H)，8.18(宽的s，1H)，8.60(m，2H)，8.68(宽的s，1H)，8.98(宽的s，1H)，12.0(宽的s，1H)，12.7(宽的s，1H)。MS：m/z 262(M+H+)。
通过方法39制得的其它化合物：
表26
方法40：
步骤1：3-(2-乙基-苯基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向Smith反应瓶中的5-溴-3-碘-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(15mg，0.0314mmol，按照方法1所述的方法制得)、2-乙基苯基硼酸(5.2mg，0.034mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.3mg，0.0002mmol)中加入0.5mL乙腈和2M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。将反应混合物搅拌6小时，然后加入3-吡啶基硼酸频哪醇酯(8.4mg，0.041mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.3mg，0.0002mmol)，反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下进行900秒钟。将混合物用DMF(2mL)稀释，通过硅胶塞过滤，然后蒸发溶剂.通过反相色谱纯化，用H2O和乙腈(0.1％甲酸作为改性剂)梯度洗脱得到固体状的3-(2-乙基-苯基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(5.8mg，61％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.05(t，J＝7.5Hz，3H)，2.66(q，J＝7.5Hz，2H)，7.27(t，J＝7.0Hz，1H)，7.31(t，J＝7.0Hz，1H)，7.38(d，J＝7.5Hz，2H)，7.45(dd，J＝5.5，8.5Hz，1H)，7.60(s，1H)，7.98(d，J＝2.0Hz，1H)，8.10(dd，J＝1.5，8.0Hz，1H)，8.54(d，J＝5.0Hz，1H)，8.60(d，J＝2.0Hz，1H)，8.90(s，1H)，12.0(s，1H)。MS：m/z 300(M+H+)。
通过方法40制得的其它化合物：
表27
a，b，c2，3-二氢-苯并呋喃-7-硼酸、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-4-硼酸和2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-4-硼酸按照以下所述的方法制得。
1，3-二溴-2-(2-溴-乙氧基)-苯的合成
将1，2-二溴乙烷(5.0ml，58mmol)加入到氢氧化钠(2.5g，63mmol)和2，6-二溴苯酚(14.5g，57.6mmol)的45ml水溶液中。将混合物在回流下搅拌20小时，然后用乙醚萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩得到无色油。进行硅胶色谱，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到无色油状的1，3-二溴-2-(2-溴-乙氧基)-苯(11.55g，57％收率)。
7-溴-2，3-二氢-苯并呋喃的合成
将2.5M n-BuLi(13.0ml，32.5mmol)的溶液在-78℃下在30分钟内加入到1，3-二溴-2-(2-溴-乙氧基)-苯(11.5，32.0mmol)的115ml THF和28ml己烷溶液中。在-78℃下继续反应30分钟，然后升温至0℃。将混合物倒入水(100ml)中并将水相用乙醚萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩得到浅黄色油。进行硅胶色谱，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到无色针状的7-溴-2，3-二氢-苯并呋喃(5.00g，78％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.27(dd，1Hz，8Hz，1H)，7.20(dd，1Hz，7.5Hz，1H)，6.75(t，7.8Hz，1H)，4.59(t，9Hz，2H)，3.28(t，8.8Hz，2H)。
2，3-二氢-苯并呋喃-7-硼酸的合成
将1.7M t-BuLi(6.5ml，11.1mmol)的戊烷溶液于-78℃下在15分钟内加入到7-溴-2，3-二氢-苯并呋喃(2.00g，10.1mmol)的15ml THF溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后加入硼酸三甲酯(1.34ml，12.0mmol)。将混合物缓慢升温至0℃并加入水(100ml)。分离出有机层，将水相用乙醚萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩得到白色粘稠状残余物。然后将粗产物用水和20％EtOAc的己烷溶液洗涤得到白色固体状的2，3-二氢-苯并呋喃-7-硼酸(1.48g，90％收率)。
类似地制得苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-4-硼酸和2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-4-硼酸。
方法41：
步骤1：2-溴-1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮的合成
向AlCl3(338mg，2.54mmol)的二氯甲烷(10mL)悬浮液中加入5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(100mg，0.507mmol)。搅拌30分钟后，加入溴乙酰氯(0.21mL，2.54mmol)并将反应混合物搅拌2小时，然后用MeOH在0℃下终止反应。将混合物真空浓缩，通过加入饱和碳酸氢钠水溶液将pH改变至7，将水层用EtOAc萃取2次。将有机层用MgSO4干燥并通过硅胶塞过滤。蒸发溶剂至干得到浅黄色固体状的2-溴-1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮(160mg，定量)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ4.70(s，2H)，8.44(d，J＝2.0Hz，1H)，8.55(d，J＝2.5Hz，1H)，8.68(d，J＝3.5Hz，1H)，12.9(s，1H)。MS：m/z 316(M+H+)。
步骤2：4-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-噻唑-2-基胺的合成
将浅黄色固体状的2-溴-1-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮(80mg，0.251mmol)和硫脲(21mg，0.276mmol)的EtOH(1mL)溶液在80℃下搅拌1.5小时。将形成的沉淀物过滤，用MeOH洗涤，然后真空干燥得到米色固体状的4-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-噻唑-2-基胺氢溴酸盐(66mg，70％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.11(s，1H)，8.00(d，J＝2.5Hz，1H)，8.39(t，J＝2.5Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，12.4(s，1H)。MS：m/z 295(M+H+)。
步骤3：4-[5-(1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-噻唑-2-基胺的合成
向Smith反应瓶中的4-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-噻唑-2-基胺氢溴酸盐(20mg，0.053mmol)、5-吲哚基硼酸(13mg，0.08mmol)和[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(2mg，0.0026mmol)中加入0.5mL乙腈和2M碳酸钠水溶液的1∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下进行1200秒钟。将混合物用DMF(3mL)稀释，通过硅胶塞过滤，然后蒸发溶剂。通过反相色谱纯化，用H2O和乙腈(0.1％甲酸作为改性剂)梯度洗脱得到米白色固体状的4-[5-(1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-噻唑-2-基胺的甲酸盐(8.5mg，42％收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.44(m，1H)，6.82(s，1H)，6.91(s，2H)，7.32(t，J＝2.5Hz，1H)，7.41(m，2H)，7.67(d，J＝2.5Hz，1H)，7.81(s，1H)，8.14(s，1H)，8.46(d，J＝2.0Hz，1H)，8.49(d，J＝2.0Hz，1H)，11.0(s，1H)，11.7(s，1H)。MS：m/z 332(M+H+)。
方法42：
步骤1：(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(6-氟-吡啶-3-基)-甲酮的合成
向5-溴-2-氟吡啶(5.6ml，54.2mmol)的THF(50ml)溶液中于0℃下在氮气下于10分钟内滴加2M异丙基氯化镁的THF(27ml)溶液。除去冰浴，将反应混合物在室温下搅拌2小时。将形成的浆液在室温及氮气下于30分钟内通过套管滴加到2-氨基-5-溴-N-甲氧基-N-甲基-烟酰胺盐酸盐(3.0g，11.5mmol)的THF(50ml)溶液中。搅拌3小时后，通过在0℃下加入饱和氯化铵水溶液(50ml)终止反应，然后将混合物在室温下继续搅拌20分钟。加入水并将混合物用乙酸乙酯萃取(三次)。将合并的有机层用硫酸钠干燥，然后过滤并浓缩。用甲醇(约60ml)结晶得到深黄色结晶状标题化合物(1.48g，49％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.49(s，1H)，8.34(d，J＝1.5Hz，1H)，8.23(dt，J＝2.5，8.0Hz，1H)，7.81(d，J＝2.5Hz，1H)，7.74(宽的s，2H)，7.36(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)；MS：m/z 295.9，297.9[MH]+。
步骤2：5-溴-3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-吡啶-2-基胺的合成
向(甲氧基甲基)三苯基氯化_(1.16g，3.38mmol)的THF(4ml)悬浮液中于0℃及氮气下滴加1M二(三甲基甲硅烷基)氨化锂的THF溶液(3.4ml，3.4mmol)。将形成的深红色混合物在0℃下搅拌10分钟以产生叶立德试剂。向(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(6-氟-吡啶-3-基)-甲酮(400mg，1.35mmol)的THF(6ml)溶液中于0℃及氮气下滴加1M叔丁基氯化镁的THF溶液(1.35ml)。将反应混合物在0℃下搅拌5分钟，然后在5分钟内滴加叶立德试剂。将反应混合物在45分钟内升温至室温，然后用饱和氯化铵水溶液(50ml)在0℃下终止反应。将混合物在室温下剧烈搅拌1.5小时。加入水，随后用乙酸乙酯萃取(三次)。将合并的有机层用盐水洗涤，然后直接吸附到硅胶上。用硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到深色泡沫状标题化合物(单一异构体)(220mg，50％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.15(d，J＝2.5Hz，1H)，8.00(d，J＝2.5Hz，1H)，7.78(dt，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.48(d，J＝2.5Hz，1H)，7.10(dd，J＝3.0，8.5Hz，1H)，6.61(s，1H)，5.73(宽的s，2H)，3.80(s，3H)；MS：m/z 324，326[MH]+。
步骤3：5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-醇的合成
向Smith反应瓶中的5-溴-3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-吡啶-2-基胺(220mg，0.678mmol)的1，4-二_烷(3ml)溶液中加入0.3ml 70％高氯酸水溶液。将反应液在Personal Chemistry_微波中于150℃下照射300秒钟。将反应混合物用水稀释，然后通过加入氢氧化钠水溶液中和至pH7。将形成的沉淀物过滤，用水洗涤，然后真空干燥得到米色固体状标题化合物(152mg，77％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ12.1(宽的s，1H)，11.7(宽的s，1H)，8.32(d，J＝2.5Hz，1H)，8.30(d，J＝2.5Hz，1H)，7.83(dd，J＝2.5，11.5Hz，1H)，7.82(s，2H)，7.67(s，1H)，6.43(d，J＝11.5Hz，1H)；MS：m/z 290[MH]+。
步骤4：5-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡啶-2-醇的合成
向Smith反应瓶中的5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-醇、3，4-二甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(6mol％)中加入乙腈、水和2M碳酸钠水溶液的3∶2∶1混合物以达到原料的总浓度为0.10M。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入水并将该混合物用乙酸乙酯萃取三次。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到米白色固体状的5-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡啶-2-醇(34％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.86(宽的s，1H)，11.67(宽的s，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，7.89(dd，J＝2.5，10Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.73(s，1H)，7.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.23(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.04(d，J＝8.5Hz，1H)，6.44(d，J＝9.0Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.79(s，3H)；MS：m/z 348.1[MH]+。
通过方法42制得的其它化合物：
表28
a)从5-溴-3-(6-氯-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶制备，该化合物通过下列方法之一制得。
从5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-醇合成5-溴-3-(6-氯-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
将5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-醇(152mg，0.524mmol)在2ml膦酰氯中在封口瓶中加热。将反应混合物在110℃下搅拌2小时，然后倒在冰上并用1N氢氧化钠水溶液中和至pH4。将沉淀物滤出，用水洗涤，然后真空干燥。将形成的固体在甲醇中加热30分钟，然后过滤冷却，用甲醇洗涤，真空干燥得到米色固体状标题化合物(117mg，72％收率)。1HNMR(DMSO-d6)：δ12.4(宽的s，1H)，8.80(d，J＝2.5Hz，1H)，8.53(d，J＝2.0Hz，1H)，8.36(d，J＝1.5Hz，1H)，8.23(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.54(d，J＝7.5Hz，1H)；MS：m/z 307.9，309.9[MH]+。
从5-溴-3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-吡啶-2-基胺合成5-溴-3-(6-氯-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
将5-溴-3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-吡啶-2-基胺(375mg，1.16mmol)用4M HCl的1，4-二_烷(5ml)溶液处理。将反应混合物在110℃下在密封试管中搅拌16小时，然后倒在冰上并用1N氢氧化钠水溶液中和至pH6。将沉淀物滤出，用水洗涤，然后真空干燥得到333 mg米色固体。将该固体与膦酰氯一起在封口瓶中加热。将反应混合物在110℃下搅拌2小时，然后倒在冰上并用1N氢氧化钠水溶液中和至pH2-3。将沉淀物滤出，用水洗涤，然后真空干燥。用硅胶色谱纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱得到米色固体状标题化合物(241mg，67％收率)。
方法43：
步骤1：[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-(6-氨基-吡啶-3-基)-甲酮的合成
将(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(6-氟-吡啶-3-基)-甲酮(120mg，0.405mmol)、氯化铵(5当量)和三乙胺(5当量)的无水乙醇溶液(0.2M)密封在Smith反应瓶中。将反应液在Personal Chemistry_微波反应器中于200℃下加热25分钟。将混合物用水稀释，将形成的黄色沉淀物滤出，用水洗涤，然后真空干燥。将粗产物与3，4-二甲氧基苯基硼酸(1.3当量)、6mol％二(三苯基膦)二氯化钯(II)与乙腈、水和2M碳酸钠水溶液(0.11M)的3∶2∶1混合物相混合。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入水并将混合物用乙酸乙酯萃取三次。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到黄色固体状的[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-(6-氨基-吡啶-3-基)-甲酮(37mg，31％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.50(d，J＝2.5Hz，1H)，8.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.86(d，J＝2.0Hz，1H)，7.75(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.15(d，J＝2.0Hz，1H)，7.06(m，3H)，6.98(d，J＝8.0Hz，1H)，6.92(宽的s，2H)，6.50(d，J＝9.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.75(s，3H)。HPLC/MS m/z：351[MH+]。
步骤2：5-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡啶-2-基胺的合成
向(甲氧基甲基)三苯基氯化_(166mg，0.485mmol)的THF(1ml)悬浮液中于0℃及氮气下加入二(三甲基甲硅烷基)氨化钾(97mg，0.485mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后将其一次性加入到[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-(6-氨基-吡啶-3-基)-甲酮(34mg，0.097mmol)中。将反应混合物搅拌2小时，然后用含水甲醇终止反应并真空浓缩。将粗产物用2ml 1，4-二_烷稀释并用0.1ml 70％高氯酸水溶液处理。将混合物在80℃下搅拌19小时，用THF/甲醇(1∶1)稀释并用2.0g PS-三胺(ArgonautTechnologies，4当量/当量所用的酸)处理30分钟。将树脂滤出并用THF/MeOH(1∶1)洗涤。通过硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到黄色固体状的5-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡啶-2-基胺(9.7mg，29％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.8(s，1H)，8.51(d，J＝2.0Hz，1H)，8.31(d，J＝2.0Hz，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(dd，J＝2.0，10.0Hz，1H)，7.70(d，J＝2.5Hz，1H)，7.28(d，J＝2.0Hz，1H)，7.24(dd，J＝2.0，7.5Hz，1H)，7.04(d，J＝8.5Hz，1H)，6.55(d，J＝8.5Hz，1H)，5.90(宽的s，2H)，3.86(s，3H)，3.79(s，3H)。HPLC/MS m/z：347.1[MH]+。
方法44：
步骤1：(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-[6-(2-甲氧基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-甲酮的合成
将(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(6-氟-吡啶-3-基)-甲酮、2-甲氧基乙基胺(1当量)和三乙基胺(1.2当量)的无水EtOH溶液(0.17M)密封在Smith反应瓶中。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于160℃下进行900秒钟。将混合物用水稀释，将形成的沉淀物滤出，用水洗涤，然后真空干燥得到黄色固体状的(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-[6-(2-甲氧基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-甲酮(86％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.28(d，J＝2.5Hz，1H)，8.23(d，J＝2.5Hz，1H)，7.75(d，J＝2.5Hz，1H)，7.69(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H)，7.64(宽的s，1H)，7.12(宽的s，2H)，6.59(d，J＝9.5Hz，1H)，3.51(t，J＝4.5Hz，2H)，3.47(t，J＝4.5Hz，2H)，3.26(s，3H)；HPLC/MS m/z：351，353[MH]+。
步骤2：[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-[6-(2-甲氧基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-甲酮的合成
向Smith反应瓶中的(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-[6-(2-甲氧基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-甲酮、3，4-二甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(6mol％)中加入乙腈、水和2M碳酸钠水溶液的3∶2∶1混合物以达到原料的总浓度为0.10M。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入水并将该混合物用乙酸乙酯萃取三次。用硅胶色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2梯度洗脱得到黄色固体状的[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-[6-(2-甲氧基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-甲酮(74％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.49(d，J＝2.0Hz，1H)，8.33(d，J＝2.5Hz，1H)，7.85(d，J＝2.0Hz，1H)，7.73(d，J＝8.5Hz，1H)，7.58(宽的s，1H)，7.14(s，1H)，7.05(m，3H)，6.98(d，J＝8.5Hz，1H)，6.59(d，J＝9.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.75(s，3H)，3.50(宽的t，J＝5.0Hz，2H)，3.46(t，J＝5.0Hz，2H)，3.26(s，3H)；HPLC/MS m/z：409.2[MH]+。
步骤3：{5-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡啶-2-基}-(2-甲氧基-乙基)-胺的合成
向(甲氧基甲基)三苯基氯化_(7-10当量)的THF悬浮液(0.45M)中于0℃及氮气下加入二(三甲基甲硅烷基)氨化钾(1当量，相对于氯化_)。将混合物在室温下搅拌30分钟。将形成的混合物一次性加入到溶于THF的[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-[6-(2-甲氧基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-甲酮(0.1-0.2M)中。将反应混合物搅拌1-16小时，然后用甲醇稀释并吸附到硅胶上。通过硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到相应的乙烯基醚，将其用于下一步的反应。
将乙烯基醚溶于1，4-二_烷(0.1M)并用2.6当量的70％高氯酸水溶液处理。将混合物在80-100℃下搅拌19-24小时，用THF/MeOH(1∶1)稀释并用PS-三胺(Argonaut Technologies，10当量/当量所用的酸)处理30分钟。将树脂滤出并用THF/MeOH(1∶1)洗涤。通过硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到白色固体状的{5-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡啶-2-基}-(2-甲氧基-乙基)-胺(65％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：利用实施例83制得的化合物作为原料。1H-NMR δ11.8(s，1H)，8.51(d，J＝2.0Hz，1H)，8.39(d，J＝2.5Hz，1H)，8.26(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H)，7.70(d，J＝2.5Hz，1H)，7.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.04(d，J＝9.0Hz，1H)，6.62(d，J＝8.5Hz，1H)，6.55(t，J＝5.5Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.79(s，3H)，3.47(m，4H)，3.28(s，3H)。HPLC/MS m/z：405.2[MH]+。
下面的一锅法用于某些实例中：
将(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(6-氟-吡啶-3-基)-甲酮、1.1当量异丁基胺和1.2当量(或2.3当量盐形式的胺)三乙胺溶于无水乙醇(原料的总浓度：0.22M)并密封在Smith反应瓶中。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下进行900秒钟。蒸发溶剂，将粗产物与1.3当量3，4-二甲氧基苯基硼酸、6mol％二(三苯基膦)二氯化钯(II)和乙腈、水和2M碳酸钠水溶液的3∶2∶1混合物相混合(原料的总浓度：0.18M)。反应在PersonalChemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入水并将该混合物用乙酸乙酯萃取三次。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到黄色固体状的[2-氨基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡啶-3-基]-(6-异丁基氨基-吡啶-3-基)-甲酮(71％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.49(d，J＝2.0Hz，1H)，8.32(d，J＝2.5Hz，1H)，7.86(d，J＝3.0Hz，1H)，7.72(d，J＝9.0Hz，1H)，7.57(宽的s，1H)，7.14(d，J＝2.0Hz，1H)，7.06(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.03(宽的s，2H)，6.98(d，J＝8.0Hz，1H)，6.56(d，J＝8.5Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.75(s，3H)，3.15(宽的s，2H)，1.83(m，1H)，0.89(d，J＝6.5Hz，6H)；HPLC/MS m/z：407.2[MH]+。
通过方法44制得的其它化合物：
表29
a)通过一锅法合成的化合物
方法45：
步骤1：5-{5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基}-吡啶-2-醇的合成
向Smith反应瓶中的5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-醇、4-(4-甲氧基苯基甲氧基)-3-甲氧基苯基硼酸(1.3当量)和6mol％二(三苯基膦)二氯化钯(II)中加入乙腈、水和2M碳酸钠水溶液(0.10M)的3∶2∶1混合物。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入水并将混合物用乙酸乙酯萃取三次。用硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到黄褐色固体状的5-{5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基}-吡啶-2-醇(46％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.86(宽的s，1H)，11.67(宽的s，1H)，8.51(d，J＝2.5 Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.89(dd，J＝2.5，9.5Hz，1H)，7.75(d，J＝2.5Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.38(d，J＝8.5Hz，2H)，7.30(d，J＝2.0Hz，1H)，7.20(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.11(d，J＝8.0Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，2H)，6.44(d，J＝9.5Hz，1H)，5.03(s，2H)，3.85(s，3H)，3.75(s，3H)；HPLC/MS m/z：454.1[MH]+。
步骤2：5-(5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-醇的合成
向5-{5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基}-吡啶-2-醇(25mg，0.055mmol)的1.5ml二氯甲烷悬浮液中加入78mgPS-苯硫酚树脂(Argonaut Technologies，1.41 mmolg-1)，然后加入TFA(0.3ml)。将澄清的悬浮液在室温下搅拌1小时，然后将树脂滤出，用乙酸乙酯和甲醇洗涤。将滤液蒸发，然后向残余物中加入2ml乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液。将形成的沉淀物滤出，用水和乙酸乙酯洗涤，然后真空干燥得到浅米色固体状的5-(5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-醇(15mg，80％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.83(宽的s，1H)，11.67(宽的s，1H)，9.05(s，1H)，8.49(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(d，J＝2.0Hz，1H)，7.88(dd，J＝3.0，9.5Hz，1H)，7.74(d，J＝2.5Hz，1H)，7.71(d，J＝2.0Hz，1H)，7.26(d，J＝2.0Hz，1H)，7.12(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H)，6.44(d，J＝9.0Hz，1H)，3.86(s，3H)；HPLC/MS m/z：334.1[MH]+。
方法46：
步骤1：3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-吡啶-2-基胺的合成
将5-溴-3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-吡啶-2-基胺进行方法20，步骤1以得到黄色固体状的3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-吡啶-2-基胺(70％收率)。1HNMR(DMSO-d6)：δ8.27(d，J＝2.5Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.83(dt，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.61(d，J＝2.0Hz，1H)，7.36(d，J＝8.5Hz，2H)，7.18(s，1H)，7.10(m，2H)，7.07(d，J＝8.5Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，2H)，6.63(s，1H)，5.53(宽的s，2H)，5.00(s，2H)，3.82(s，3H)，3.81(s，3H)，3.75(s，3H)；HPLC/MS m/z：488.2[MH]+。
步骤2：2-甲氧基-4-{3-[6-(2-吗啉-4-基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基}-苯酚的合成
将3-[1-(6-氟-吡啶-3-基)-2-甲氧基-乙烯基]-5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-吡啶-2-基胺(50mg，0.102mmol)和2-吗啉-4-基-乙基胺(0.6ml，4.59mmol)的无水N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)溶液密封在Smith反应瓶中。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于250℃下进行1200秒钟。将混合物用饱和氯化铵水溶液(20ml)稀释，将形成的沉淀物滤出，用饱和氯化铵水溶液和水洗涤，然后真空干燥。将固体转移到Smith反应瓶中，然后溶于二_烷(1ml)。加入高氯酸水溶液(70％，0.1ml)，反应在PersonalChemistry_微波反应器中于150℃下进行300秒。将混合物用(1∶1)THF/甲醇(10ml)稀释并用2.0g PS-三胺(Argonaut Technologies，3.53mmolg-1)处理1小时。将树脂滤出，用(1∶1)THF/甲醇洗涤，然后将滤液蒸发得到75mg深色油。通过基于质量采集的制备型HPLC纯化得到米白色蓬松固体状的2-甲氧基-4-{3-[6-(2-吗啉-4-基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基}-苯酚(10.7mg，21％收率，0.75当量甲酸盐)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.70(s，1H)，8.98(s，1H)，8.42(d，J＝2.5Hz，1H)，8.32(d，J＝2.0Hz，1H)，8.16(d，J＝2.0Hz，1H)，8.08(s，0.75H，甲酸盐)，7.71(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H)，7.63(d，J＝2.5Hz，1H)，7.19(d，J＝1.5Hz，1H)，7.07(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，6.80(d，J＝8.5Hz，1H)，6.53(d，J＝9.5Hz，1H)，6.32(t，J＝5.5Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.52(t，J＝4.5Hz，4H)，3.33(m，2H)，2.44(m，2H)，2.36(宽的s，4H)；HPLC/MS m/z：446.2[MH]+。
方法47：
步骤1：反式-4-[5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-基氨基]-环己醇的合成
将5-溴-3-(6-氯-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(100mg，0.324mmol)、反式4-氨基环己醇(485mg，4.21mmol)和三乙胺(134mg，0.974mmol)的无水N-甲基吡咯烷酮(1ml)溶液密封在Smith反应瓶中。反应在Personal Chemistry_微波反应器中于250℃下进行1小时。将混合物用水(40ml)稀释，将形成的沉淀物滤出，用水洗涤，然后真空干燥。通过硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到白色固体状的反式-4-[5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-基氨基]-环己醇(82mg，66％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ12.00(s，1H)，8.32(d，J＝2.5Hz，1H)，8.21-8.32(m，2H)，7.75(d，J＝11.5，1H)，7.67(dt，J＝2.5，9.0Hz，1H)，6.51(d，J＝9.0Hz，1H)，6.36(d，J＝7.0Hz，1H)，4.55(d，J＝5.0Hz，1H)，3.64(m，1H)，3.42(m，1H)，1.95(m，2H)，1.82(m，2H)，1.22(m，4H)；HPLC/MS m/z：387.0，389.1[MH]+。
步骤2：反式-4-{3-[6-(4-羟基-环己基氨基)-吡啶-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基}-2-甲氧基-苯酚的合成
向Smith反应瓶中的反式-4-[5-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡啶-2-基氨基]-环己醇(52mg，0.134mmol)、4-(4-甲氧基苯基甲氧基)-3-甲氧基苯基硼酸(65mg，0.174mmol)和(6mg，6mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)中加入0.9ml乙腈、水和2M碳酸钠水溶液的3∶2∶1混合物。反应在PersonalChemistry_微波反应器中于165℃下进行1200秒钟。加入甲醇并将混合物吸附到硅胶上。通过硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到57mg黑色泡沫。将该黑色泡沫溶于二氯甲烷(3ml)并加入PS-苯硫酚树脂(150mg，Argonaut Technologies，1.41mmol/g负载量)，然后加入TFA(0.6ml)。将澄清的悬浮液在室温下搅拌1小时，然后将树脂滤出，用乙酸乙酯和甲醇洗涤。将滤液蒸发，将残余物用饱和碳酸氢钠水溶液处理至碱性pH，然后用乙酸乙酯萃取。通过硅胶快速色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得到白色固体状的反式-4-{3-[6-(4-羟基-环己基氨基)-吡啶-3-基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基}-2-甲氧基-苯酚(18mg，41％收率)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.75(d，J＝2.5Hz，1H)，9.03(s，1H)，8.47(d，J＝2.5Hz，1H)，8.37(d，J＝2.5Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，7.73(dd，J＝2.5，9.0，1H)，7.66(d，J＝3.0Hz，1H)，7.25(d，J＝2.0Hz，1H)，7.12(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，6.86(d，J＝7.5Hz，1H)，6.53(d，J＝8.0Hz，1H)，6.31(d，J＝7.0Hz，1H)，4.55(d，J＝4.5Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.65(m，1H)，3.43(m，1H)，1.95(m，2H)，1.82(m，2H)，1.21(m，4H)；HPLC/MS m/z：431.2 [MH]+。
方法48：
步骤1：2-氨基-5-溴烟酸的合成
将25.00g(0.181mol)2-氨基烟酸分散在100ml冰乙酸中。向该悬浮液中加入12.0ml(0.23mol)溴的50ml冰乙酸溶液。将混合物在室温下搅拌20小时。将形成的沉淀物滤出并用100ml冰乙酸分成几份进行洗涤至滤液呈无色。将粗产物通过抽吸干燥，用沸腾的甲醇结晶得到浅绿色至米白色结晶针状的38.63g(0.178mol，98％收率)2-氨基-5-溴烟酸。1H-NMR(d6-DMSO)δ：8.45[1H]d，8.34[1H]d.；MS：m/z 217[MH+]。
步骤2：N-甲氧基-N-甲基-2-氨基-5-溴烟酰胺的合成
a)以游离碱的形式分离
将2-氨基-5-溴烟酸(4.000g，18.43mmol)、N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(4.550g，46.6mmol)和PyBOP(1-苯并三唑基氧基-三(吡咯烷-1-基)_六氟磷酸盐)(15.00g，28.82mmol)置于氮气冲洗的烧瓶中。加入150 ml乙腈和25ml二异丙基乙基胺并将混合物在95℃下加热20小时。然后蒸发溶剂，将残余物在200ml氯仿和100ml 10％柠檬酸水溶液之间进行分配。分离出有机相并用100ml 1M氢氧化钠水溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，将粗产物通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷非线性梯度洗脱得到米白色固体状的2.193g(8.436mmol，46％收率)N-甲氧基-N-甲基-2-氨基-5-溴烟酰胺。1H-NMR(d6-DMSO)δ：8.10[1H] d，7.71[1H]d，6.35[2H]s，3.55[3H]s，3.24[3H]s.；MS：m/z 260[MH+]。
b)以盐酸盐的形式分离
在氮气冲洗的烧瓶中，将3.00g(30.76mmol)N，O-二甲基羟基胺盐酸盐和3.53g(16.27mmol)2-氨基-5-溴烟酸溶于350ml二氯甲烷和30ml N-甲基吗啉的混合物中。加入12.70g(24.40mmol)PyBOP(1-苯并三唑基氧基-三(吡咯烷-1-基)_六氟磷酸盐)并将该反应混合物在室温下搅拌5小时。然后将混合物用150ml 2M氢氧化钠水溶液洗涤，然后用100ml 10％柠檬酸水溶液洗涤2次，然后用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，将形成的油状物溶于300ml乙醚。将形成的沉淀物滤出，丢弃。将澄清的滤液浓缩至约一半的体积，然后用30-60ml二氯甲烷稀释。将形成的溶液剧烈搅拌，加入1M氯化氢的无水乙醚溶液至不再有沉淀物形成。将沉淀物滤出，用乙醚洗涤，然后通过抽吸干燥得到米白色至米色-棕色粉末状的3.15g(12.04mmol，74％收率)N-甲氧基-N-甲基-2-氨基-5-溴烟酰胺盐酸盐。1H-NMR(d6-DMSO)δ：8.24[1H]d，7.97[1H]d，3.56 [3H]s，3.26 [3H]s。MS：m/z 260[MH+]。
该盐酸盐可通过以下方法方便地转化成游离碱：将该产物在乙酸乙酯和2M氢氧化钠水溶液之间进行分配，将水层用乙酸乙酯洗涤三次，然后将合并的有机相用硫酸钠干燥，蒸发，然后将残余物真空干燥。
步骤3：(2-氨基-5-溴-3-吡啶基)-苯基酮的合成
将1.00g(3.38mmol)N-甲氧基-N-甲基-2-氨基-5-溴烟酰胺盐酸盐于氮气下悬浮在50ml无水THF中。将该悬浮液冷却至-50℃并快速加入13.5ml 1.0M苯基溴化镁的乙醚溶液以得到橙色溶液。将混合物搅拌并缓慢升温至室温。将形成的黄色-橙色溶液在75ml 10％柠檬酸水溶液和200ml乙酸乙酯之间进行分配。分离出有机相并用75ml 10％柠檬酸水溶液和75ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。然后将有机相用硫酸钠干燥，然后蒸发得到985mg黄色结晶状固体。1H-NMR(d6-DMSO)δ：8.34[1H]d，7.72[2H]s，7.70[1H]d，7.65[1H]t(m)，7.63[2H]d(m)，7.56[2H]t(m)。MS：m/z 277[MH+]。
步骤4：5-溴-3-(2-甲氧基-1-苯基乙烯基)-2-吡啶基胺的合成
将2.600g(8.77mmol)N-甲氧基-N-甲基-2-氨基-5-溴烟酰胺盐酸盐在氮气下悬浮在50ml无水THF中。将该悬浮液冷却至-50℃并快速加入32ml1.0M苯基溴化镁的乙醚溶液以得到橙色溶液。将混合物搅拌并缓慢升温至室温。1.5小时后，将形成的溶液在50ml 10％柠檬酸水溶液和400ml乙酸乙酯之间进行分配。分离出有机相并用50ml饱和溴化钠水溶液洗涤。然后将有机相用硫酸钠干燥，蒸发得到黄色固体状的2.676g(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-苯基-甲酮。将分离出的固体在氮气下溶于50ml无水THF，然后在室温下将其加入到按以下方法所得到的溶液中：在0℃下，将3.836g(19.23mmol)二(三甲基甲硅烷基)氨化钾在氮气下溶于100ml无水THF。在0℃下，加入7.214g(21.04mmol)甲氧基甲基三苯基氯化_并将形成的混合物在室温下搅拌75分钟。
向该溶液中加入(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-苯基-甲酮后，将形成的混合物在室温下搅拌75分钟。然后将反应混合物通过加入饱和氯化钠水溶液终止反应并在100ml水和250ml乙酸乙酯之间进行分配。将水相每次用100ml乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷混合物非线性梯度洗脱得到1.718g(5.630mmol，64％收率，经过2个步骤)5-溴-3-(2-甲氧基-1-苯基乙烯基)-2-吡啶基胺。1H-NMR(d6-DMSO)(E)-异构体δ：8.00[1H]d，7.44[1H]d，7.34[2H]d(m)，7.29[2H]t(m)，7.18[1H]t(m)，6.51[1H]s，5.50[2H]s，3.78[3H]s；(Z)-异构体δ：7.97[1H] d，7.28[1H]d，7.27[2H]t(m)，7.17[1H]t(m)，7.14[1H]d(m)，6.95[1H]s，5.60[2H]s，3.73[3H]s。MS：m/z 305[MH+]。
步骤5：5-溴-3-苯基吡咯并[2，3-b]吡啶。
将1.093g(3.582mmol)5-溴-3-(2-甲氧基-1-苯基乙烯基)-2-吡啶基胺溶于60ml无水1，4-二_烷。加入800μl 70％高氯酸水溶液并将混合物在100℃下加热13小时。然后将形成的混合物冷却至室温并加入3ml三乙基胺，将混合物蒸发至干。将形成的粗产物用热乙醇结晶得到米棕色至棕色结晶固体状的763mg(2.79mmol，78％收率)5-溴-3-苯基吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ：12.19[1H]s，8.44[1H]d，8.34[1H]d，7.97[1H]d，7.72[2H]d(m)，7.45[2H]t，7.27[1H]t(m)。MS：m/z 273[MH+]。
步骤6：5-(3，4-二甲氧基苯基)-3-苯基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向小瓶中加入50mg(0.18mmol) 5-溴-3-苯基吡咯并[2，3-b]吡啶、43mg(0.24mmol)3，4-二甲氧基苯基硼酸和6.5mg(9.3μmol，5mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)。向该混合物中加入1ml乙腈和1ml 2M碳酸钠水溶液。将该小瓶密封并在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃的设定温度下照射20分钟。将形成的混合物在75ml二氯甲烷和20ml饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。将有机相用硫酸钠干燥，然后蒸发。将得到的残余物用乙腈和乙醇的热混合物重结晶得到无色结晶固体状的20mg(61μmol，34％收率)5-(3，4-二甲氧基苯基)-3-苯基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ：11.97[1H]s，8.55[1H]d，8.38[1H] d，7.90[1H] d，7.79[2H]d，7.45[2H]t，7.30[1H]d，7.26[2H]t(m)，7.06[1H]d，3.87[3H]s，3.81[3H]s。MS，m/z：331[MH+]。
通过方法48制得的其它化合物：
表30
方法49：
步骤1：5-溴-3-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
将1.092g(3.77mmol)5-溴-3-[4-羟基苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶和200mg对甲苯磺酸一水合物溶于180ml二氯甲烷。加入10ml二氢-1H-吡喃并将混合物加热回流4小时。然后将形成的混合物冷却至室温并加入过量三乙基胺。将混合物蒸发并加入2.50g(13.11mmol)对甲苯磺酰氯。将混合物溶于150ml THF并将形成的溶液冷却至0℃。加入过量氢化钠粉末至继续加入不会导致更多氢气的形成，然后将混合物在室温下搅拌16小时。将形成的混合物冷却至0℃并与更多氢化钠一起补加2.5g(13.11mmol)对甲苯磺酰氯。然后将形成的混合物通过加入饱和氯化钠水溶液终止反应，然后在500ml乙醚和水之间进行分配。将有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤3次，用硫酸钠干燥，然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到浅黄色或粉红色固体状的1.163g(2.21mmol，58％收率)5-溴-3-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ：8.53[1H]d，8.46[1H]d，8.20[1H]s，8.03[2H]d(m)，7.71[2H]d(m)，7.43[2H]d，7.14[2H]d(m)，5.54 [1H]t，3.78 [1H]m，3.57[1H]m，2.35[3H]s，1.95-1.74[2H](m)，1.68-1.52[4H](m)。MS，m/z：527[MH+]。
步骤2：4-[5-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酚的合成
将575g(1.09mmol)5-溴-3-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶溶于250ml二氯甲烷。向该溶液中加入2.50g(3.53mmol)PS-苯硫酚(Argonaut Technologies)和1.5ml 2M盐酸的乙醚溶液。将混合物在室温下搅拌3小时，然后将树脂滤出，用二氯甲烷彻底洗涤。将滤液蒸发得到浅黄色固体状的389mg(877μmol，81％)4-[5-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酚。1H-NMR(d6-DMSO)δ：9.67[1H] s，8.52[1H] d，8.43[1H] d，8.11[1H] s，8.03 [2H]d，7.58[2H]d(m)，7.43[2H] d，6.89[2H]d(m)，2.35[3H]s。MS，m/z：443[MH+]。
步骤3：5-溴-3-[4-(3-哌啶-1-基-丙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶盐酸盐的合成
将200mg(0.45mmol)4-[5-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-苯酚和1.20g(2.80mmol)PS-三苯基膦(2.33mmol·g-1，ArgonautTechnologies)溶于30ml无水甲苯。在室温下加入325mg(2.27mmol)3-(1-哌啶基)丙醇和300μl(1.52mmol)偶氮二甲酸二异丙酯并将混合物搅拌72小时。
将树脂滤出并用二氯甲烷和乙醚反复洗涤。将滤液合并，然后蒸发。将残余的米色油溶于20ml甲醇和过量氢氧化钾。将混合物在室温下搅拌48小时。将形成的悬浮液在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。分离各相，将水层用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过胺官能团化的硅胶(ISCO RediSep_胺柱)快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱。将分离出的物质分散在75ml乙醚中并将不溶物滤出。向澄清的滤液中加入过量2M盐酸的乙醚溶液。将沉淀物滤出，然后真空干燥得到黄色固体状的133mg(0.30mmol，66％收率)5-溴-3-[4-(3-哌啶-1-基-丙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶盐酸盐。1H-NMR(d6-DMSO)δ：12.17[1H](d)，10.68 [1H]s，br，8.39[1H]d，8.33[1H]d，7.87[1H]d，7.65[2H]d，7.03 [2H]d，4.10 [2H]t，8.46[2H]d，3.18[2H]m，2.89[2H]m，2.24[2H]m，1.89-1.76[4H](m)，1.71[1H]m，1.39[1H]m。MS，m/z：414[MH+]。
步骤4：2-甲氧基-4-{3-[4-(3-哌啶-1-基-丙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基}-苯酚的合成
将100mg(0.24mmol)5-溴-3-[4-(3-哌啶-1-基-丙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶盐酸盐、120mg(0.33mmol)2-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷和10mg(5mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)置于小瓶中并加入1.5ml乙腈和1.5ml 2M碳酸钠水溶液。将混合物在Personal Chemistry_微波反应器中于165℃下照射1200秒钟。将形成的混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。将水层用二氯甲烷萃取三次，将合并的有机相用硫酸钠干燥，然后蒸发。将粗产物通过胺官能团化的硅胶(ISCO RediSep_胺柱)快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱。将形成的中间体溶于30ml二氯甲烷并加入750mg(1.06mmol)PS-苯硫酚(Argonaut Technologies)。向其中加入1.5ml三氟乙酸并将混合物在室温下搅拌2小时。将树脂滤出并用二氯甲烷洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。将残余物用20ml二氯甲烷研制，然后通过抽吸干燥得到米色粉末状的9mg(20μmol，8％收率)2-甲氧基-4-{3-[4-(3-哌啶-1-基-丙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基}-苯酚。1H-NMR(d6-DMSO)δ：11.83[1H]d，9.06[1H]s，8.50[1H]d，8.28[1H]d，7.76 [1H]，7.67[2H]d(m)，7.25[1H]d，7.12[1H]dd，7.01[2H]d(m)，6.88[1H]d，4.02[2H]t，3.87[3H]s，2.39[2H]t，2.34[4H](m)，br，1.88[2H]t，1.50[4H]qui，1.38[2H](m)。MS，m/z：458[MH+]。
方法50：
步骤1：4-{5-[3-甲氧基-4-羟基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-3-基}-苯酚的合成
将145mg(0.44mmol)5-溴-3-[4-羟基苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、240mg(0.65mmol)2-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷和25mg(8mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)置于小瓶中并加入1.5ml乙腈和1.5ml 2M碳酸钠水溶液。将混合物在PersonalChemistry_微波反应器中于165℃下照射1200秒钟。将形成的混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。将水层用二氯甲烷萃取两次，将合并的有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱。将形成的中间体溶于70ml二氯甲烷并加入2.00g(2.82mmol)PS-苯硫酚(Argonaut Technologies)。向其中加入1ml三氟乙酸并将混合物在室温下搅拌1小时。将树脂滤出并用二氯甲烷洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。分离各相，将水层用乙酸乙酯萃取两次。将所有有机相合并，用硫酸钠干燥然后蒸发。将残余物与乙腈一起加热，冷却至室温并除去上清液。将残余物真空干燥以得到米色粉末状的72mg(0.22mmol，50％收率)4-{5-[3-甲氧基-4-羟基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-3-基}-苯酚。1H-NMR(d6-DMSO)δ：11.77[1H]d，9.37[1H]s，br，9.06[1H]s，br，8.49[1H]d，8.27[1H]d，7.69[1H]d，7.56[2H]d(m)，7.25[1H]d，7.12[1H]dd，6.88[1H]d，6.86[2H]d(m)，3.87[3H]s。MS，m/z：333[MH+]。
方法51：
步骤1：5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向火焰干燥的100ml圆底烧瓶中加入2-氨基-5-溴-N-甲氧基-N-甲基-烟酰胺(661mg，2.54mmol)和无水THF(15ml)。将溶液在-55℃及氮气下搅拌5分钟，然后在3分钟内滴加0.5M 2-甲氧基苯基溴化镁的THF溶液(18ml，9.0mmol)。将形成的溶液在2小时内升温至室温，然后通过加入1M柠檬酸(25ml)终止反应。加入乙酸乙酯(50ml)，分层。将含水级分用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩得到粘稠的黄色固体。用乙醇重结晶得到黄色针状的619.5mg(79％)(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(2-甲氧基-苯基)-甲酮。MS m/z：308[MH]+。
步骤2：5-溴-3-[2-甲氧基-1-(2-甲氧基-苯基)-乙烯基]-吡啶-2-基胺的合成
向50ml的火焰干燥的圆底烧瓶中加入二(三甲基甲硅烷基)氨化钾(832mg，39.2mmol)和无水THF(10ml)。将浆液在氮气下冷却至0℃5分钟，然后加入(甲氧基甲基)三苯基氯化_(1.53g，4.47mmol)。将形成的红橙色溶液在室温下搅拌45分钟，然后一次性加入(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(2-甲氧基-苯基)-甲酮(601mg，1.95mmol的10ml THF溶液)溶液。将反应液在氮气下搅拌4小时，然后通过加入饱和氯化铵水溶液(25ml)终止反应。加入乙酸乙酯(100ml)，分层。将含水级分用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩得到棕色粘稠油。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到554mg(84％)5-溴-3-[2-甲氧基-1-(2-甲氧基-苯基)-乙烯基]-吡啶-2-基胺，为E-和Z-异构体的混合物。
步骤3：5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向50ml圆底烧瓶中加入403mg 5-溴-3-[2-甲氧基-1-(4-甲氧基-苯基)-乙烯基]-吡啶-2-基胺(1.2mmol；合并的E-和Z-异构体)、1，4-二_烷(5ml)和70％高氯酸水溶液(250μl)。该烧瓶配备有回流冷凝器和氮气入口适配器，然后在油浴中在100℃下加热8小时。将反应混合物浓缩，然后用15ml饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯(20ml)处理。将各层分离，将含水级分用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩。将残余物用乙醚研制得到黄褐色粉末状的300mg(82％)5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ＝12.16(br.s，1H)，8.36(d，1H)，8.18(d，1H)，7.82(d，1H)，7.58(d，1H)，7.36(t，1H)，7.19(d，1H)，7.10(t，1H)，3.88(s，3H)；MS m/z：303 [MH]+。
步骤4：5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
2-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷按以下方法制得。向火焰干燥的50ml圆底烧瓶中加入2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯酚(1.00g，4.00mmol)和无水DMF(20ml)。分三批加入氢化钠(251mg，6.29mmol；60％的矿物油分散液)并将该悬浮液在氮气下搅拌30分钟，然后加入对甲氧基苄基氯(655μl，3.62mmol)和四丁基碘化铵(10mg，0.03mmol)并将反应混合物继续搅拌16小时。将反应混合物浓缩，然后在冰浴中冷却，加入50ml1M柠檬酸和100ml乙酸乙酯。分层，水相用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩得到黄褐色粉末。用二乙醚研制得到黄褐色粉末状的1.34g(91％)2-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.35(m，2 H)，7.29(s，1H)，7.26(s，1H)，6.89(m，3H)，5.11(s，2H)，3.91(s，3H)，3.80(s，3H)，1.33(s，12H)；MS m/z：393[M+Na]+。
向Personal Chemistry_微波瓶(2-5ml大小)中加入5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(98mg，0.33mmol)、2-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(148mg，0.400mmol)、6.5mg(9.3μmol，5mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)、1ml乙腈和1ml 2M碳酸钠水溶液。将该瓶密封，抽空并用氮气净化三次，然后在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃的设定温度下照射30分钟。加入乙酸乙酯(50ml)，分层。将含水级分用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到浅黄色固体状的75mg(50％)5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ＝12.12(br.s，1H)，8.51(d，1H)，8.11(d，1H)，7.70(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.38(d，2H)，7.27(t，1H)，7.25(d，1H)，7.18(dd，1H)，7.11(m，2H)，7.02(t，1H)，6.95(d，2H)，5.03(s，2H)，3.85(s，3H)，3.82(s，3H)，3.75(s，3H)；MS m/z：467[MH]+。
通过方法51制得的其它化合物：
表31
*从7-溴-4，5-二氢-3H-苯并[b]氧杂环庚三烯-2-酮得到(通过Baeyer-Villiger反应得到)。
方法52：
步骤1：2-甲氧基-4-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚的合成
向50ml的圆底烧瓶中加入5-[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-苄氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(48mg，0.10mmol)、二氯甲烷(2.5ml)和396mg(0.28mmol)PS-苯硫酚(1.41mmol·g-1；ArgonautTechnologies)。加入三氟乙酸(500μl)并将悬浮液在轨道振动器中振荡1小时。将黄色反应混合物过滤，将树脂用二氯甲烷和乙醚洗涤三次，然后用二氯甲烷洗涤2次。将合并的滤液浓缩得到黄色残余物，将该残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。将各层分离，将水相用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷梯度洗脱得到浅黄色粉末状的31mg(86％)2-甲氧基-4-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯酚。1H-NMR(d6-DMSO)δ＝11.87(br.s，1H)，9.04(br.s，1H)，8.48(d，1H)，8.07(d，1H)，7.68(dd，1H)，7.57(dd，1H)，7.27(t，1H)，7.20(d，1H)，7.13(d，1H)，7.08(dd，1H)，7.02(t，1H)，6.85(d，1H)，3.85(s，3H)，3.82(s，3H)；MS m/z：347[MH]+。
通过方法52制得的其它化合物：
表32
*在这些情况下所需的(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)(2-(三氟甲氧基)苯基)甲酮和(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)(2-(甲硫基)苯基)甲酮通过以下所示的方法制得。(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(2-三氟甲氧基-苯基)-甲酮的合成
向火焰干燥的100ml圆底烧瓶中加入1-溴-2-(三氟甲氧基)苯(2.39g，9.9mmol)。在该烧瓶上配备橡胶隔膜，用氮气净化，然后向其中加入无水THF(20ml)。将溶液在-78℃下冷却10分钟，然后在3分钟内滴加2.5M正丁基锂的己烷溶液(3.9ml，9.8mmol)。将形成的溶液在-78℃及氮气下搅拌40分钟，然后在3分钟内滴加739mg(2.84mmol)2-氨基-5-溴-N-甲氧基-N-甲基-烟酰胺的5ml THF溶液。将形成的红色溶液在5小时内升温至室温，然后通过加入10ml饱和氯化铵水溶液终止反应。加入乙酸乙酯(50ml)，分层。将含水级分用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到黄橙色固体状的530mg(52％)(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-(2-三氟甲氧基-苯基)-甲酮。1H-NMR(CDCl3)δ＝8.29(d，1H)，7.60(m，2H5)，7.45(t，1H)，7.42(m，3H)，1.79(br.s，2H)；MS m/z：361[MH]+。
方法53：
步骤1：3-(2-甲氧基-苯基)-5-[3-甲氧基-4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向8ml的硼硅酸盐反应瓶中加入150mg(0.350mmol)PS-三苯基膦(2.33mmol·g-1；Argonaut Technologies)和无水二氯甲烷(5ml)。在该烧瓶上配备橡胶隔膜，将悬浮液在冰浴(0℃)中搅拌5分钟。滴加偶氮二甲酸二异丙酯(68μL，0.35mmol)并将混合物在20分钟内升温至室温。向该反应瓶中加入2-吡咯烷-1-基-乙醇(54mg，0.47mmol)和2-甲氧基-4-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]苯酚(60mg，0.17mmol)，然后将悬浮液在室温下搅拌8小时。将黄色反应混合物过滤，将树脂用DCM和乙醚洗涤三次，然后用DCM洗涤2次。将合并的滤液浓缩得到黄色残余物，将其通过胺官能团化的硅胶(ISCO RediSep_胺柱)快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到浅黄色粉末状的12mg(8％)3-(2-甲氧基-苯基)-5-[3-甲氧基-4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ＝11.87(br.s，1H)，8.51(d，1H)，8.18(s，1H)，8.11(d，1H)，7.70(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.27(m，1H)，7.24(d，1H)，7.17(dd，1H)，7.12(dd，1H)，7.06(s，1H)，7.04(m，1H)，4.08(t，2H)，3.85(s，3H)，3.83(s，3H)，2.82(t，2H)，2.55(m，4H)，1.69(m，4H)；MS m/z：444[MH]+。
通过方法53制得的其它化合物：
表33
上表中化合物的纯化利用反相HPLC进行(C18；5-95％梯度溶剂A：含5％ACN的0.1％甲酸水溶液，溶剂B：0.1％甲酸的ACN溶液，以基于质量的采集方式进行收集)。
方法54：
步骤1：3-(2-甲氧基-苯基)-5-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向Personal Chemistry_微波瓶(2-5ml大小)中加入5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(96mg，0.32mmol)、1-N-(BOC)吡咯-2-硼酸(103mg，0.487mmol)和12mg(5mol％)[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物、1ml乙腈和1ml 2M碳酸钠水溶液。将该瓶密封，抽空并用氮气净化三次，然后在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃的设定温度下照射15分钟。加入乙酸乙酯(50ml)，分层。将含水级分用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到黄褐色固体状的28.1mg(30％)3-(2-甲氧基-苯基)-5-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d6-DMSO)δ＝11.78(br.s，1H)，11.32(br.s，1H)，8.56(d，1H)，8.20(d，1H)，7.66(d，1H)，7.59(dd，1H)，7.29(dd，1H)，7.12(d，1H)，7.07(t，1H)，6.83(m，1H)，6.49(m，1H)，6.10(m，1H)，3.82(s，3H)；MS m/z：290 [MH]+。
通过方法54制得的其它化合物：
表34
方法55：
步骤1：3，4-二(2-甲氧基乙氧基)苯基硼酸的合成
将6.51g(0.0300mol)4-溴藜芦醚溶于50ml二氯甲烷。向该悬浮液中于0℃下加入37.6g(0.150mol)三溴化硼。将混合物在室温下搅拌3小时。减压除去溶剂。将形成的棕色油溶于乙酸乙酯并通过硅胶垫过滤。将滤液浓缩得到浅棕色油状的5.45g 4-溴儿茶酚。
将1.89g(10.0mmol)该油溶于50ml无水DMF并加入576mg(24.0mmol)氢化钠。向所形成的溶液中于0℃下在25分钟内加入5.56g(40.0mmol)溴乙基甲基醚。将混合物从0℃至室温搅拌过夜。加入5ml水以终止反应。除去溶剂后，将深色油状残余物吸附到硅藻土上，将形成的固体用乙酸乙酯洗涤，然后将滤液浓缩得到淡黄色固体状的3，4-二(2-甲氧基乙氧基)溴苯。
将固体溶于无水THF并将形成的溶液冷却至-78℃。在-78℃下于10分钟内向溶液中加入4.8ml 2.5M正丁基锂的己烷溶液。然后将形成的混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后加入2.77ml(12mmol)硼酸三异丙酯。将反应液在-78℃下继续搅拌30分钟，然后在2小时内加热至0℃。然后将形成的混合物冷却至-20℃，将10ml 2N盐酸水溶液加入到混合物中。搅拌20分钟后，将反应混合物转移到分液漏斗中并用100ml乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，浓缩得到2.85g棕色油。将该油用乙醚研制得到无色粉末状的625mg(2.44mmol；8％总收率)3，4-二(2-甲氧基乙氧基)苯基硼酸。1H-NMR(d4-甲醇)δ：7.36[2H]m，7.23[2H]m，6.98[1H]d(7.5Hz)，6.94[1H]d(8.5Hz)，4.16[4H]m，3.75[4H]m，3.43[3H]s，3.42[3H]s。MS m/z：271.1[MH+]，293.1[MNa+]。
步骤2：5-[3，4-二(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向小瓶中加入81.0mg(0.300mmol)3，4-二(2-甲氧基乙氧基)苯基硼酸、60.6mg(0.200mmol)5-溴-3-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶和8.3mg(5mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)。加入1.5ml乙腈和1.5ml 2M碳酸钠水溶液并将混合物在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下照射15分钟。将混合物用15ml乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。将深棕色残余物(187mg)通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到无色粉末状的57mg 5-[3，4-二-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d4-甲醇)δ：8.41[1H]d(2.0Hz)，8.17[1H]d(2.0Hz)，7.63[1H]s，7.56[1H]dd(1.5Hz，7.5Hz)，7.30[1H]m，7.26[1H]d(2.5Hz)，7.20[1H]dd(2.3Hz，8.3Hz)，7.11[1H]d(8Hz)，7.08[1H]d(8.5Hz)，7.05[1H]dt(1Hz，7.5Hz)4.24[2H]m，4.19[2H]m，3.77[4H]m，3.44[3H]s，3.43[3H]s。MS m/z：449.2 [MH+]，471.1[MNa+]。
方法56：
步骤1：3，4-二(2-吗啉-4-基乙氧基)苯基硼酸的合成
于0℃下在25分钟内，将864mg(36.0mmol)氢化钠加入到900mg(5.0mmol)4-溴儿茶酚和3.72g(20.0mmol)2-氯乙基吗啉盐酸盐的50ml无水DMF悬浮液中。将混合物在室温下搅拌3天。加入5ml水以终止反应。除去溶剂后，将深色油状残余物吸附到硅藻土上并将形成的固体用乙酸乙酯洗涤，然后将滤液浓缩得到0.75g(1.81mmol；36％收率)吸湿性黄色固体状3，4-二(2-吗啉-4-基乙氧基)溴苯。1H-NMR(CD3OD)δ：8.42[1H]d(2.0Hz)，8.18[1H]d(1.5Hz)，7.64[1H] s，7.56[1H]dd(1.5Hz，7.5Hz)，7.30[1H]dt(1.5Hz，7.5Hz)，7.25[1H]d(2.5Hz)，7.19[1H]dd(2.5Hz，8.5Hz)，7.12[1H]d(8.5Hz)，7.08[1H]d(8.5Hz)，7.05[1H]dt(1Hz，7.5Hz)4.25[2H]t(5.75Hz)，4.20[2H]t(5.5Hz)，3.72[8H]m，2.84[4H]m，2.66[8H]m。MS：559.2[MH+]。
将2.4ml 2.5 M正丁基锂的己烷溶液于-78℃在10分钟内加入到2.08g(5.0mmol)3，4-二(2-吗啉-4-基乙氧基)溴苯的THF溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后加入1.39ml(6.0mmol)硼酸三异丙酯。将混合物在-78℃下继续搅拌30分钟，然后在2小时内升温至0℃。将混合物冷却至-20℃并加入5ml 2N盐酸水溶液。搅拌20分钟后，将反应混合物转移到分液漏斗中并用100ml乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机层用硫酸钠干燥，然后浓缩得到棕色油。将该油用乙醚研制得到925mg吸湿性很强的深棕色油，通过LC/MS分析其约为50％纯度，并且其不经进一步纯化即可直接使用。
步骤2：5-[3，4-二-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的合成
向小瓶中加入228mg(约0.3mmol纯硼酸)粗硼酸、60.6mg(0.20mmol)5-溴-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶和8.3mg(5mol％)二(三苯基膦)二氯化钯(II)。加入1.5ml乙腈和1.5ml 2M碳酸钠水溶液并将混合物在Personal Chemistry_微波反应器中于150℃下照射15分钟。将形成的混合物用15ml乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。将形成的深棕色残余物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到浅黄色固体状的9.4mg(16μmol；8％收率)5-[3，4-二-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯基]-3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶。1H-NMR(d4-甲醇)δ：8.42[1H]d(2.0Hz)，8.18[1H]d(1.5Hz)，7.64[1H]s，7.56[1H]dd(1.5Hz，7.5Hz)，7.30[1H]dt(1.5Hz，7.5Hz)，7.25[1H]d(2.5Hz)，7.19[1H]dd(2.5Hz，8.5Hz)，7.12[1H]d(8.5Hz)，7.08[1H] d(8.5Hz)，7.05[1H]dt(1Hz，7.5Hz)4.25[2H]t(5.75Hz)，4.20[2H]t(5.5Hz)，3.72[8H]m，2.84[4H]m，2.66[8H]m。MS m/z：559.2[MH+]。
方法57
步骤1：2-氨基-5-溴-N，N-二甲基-苯甲酰胺的合成
向15mL的高压玻璃瓶(具有Teflon螺旋帽)中加入5-溴靛红酸酐(0.401g，1.66mmol)、DMAP(20mg，0.16mmol)和二甲基胺(2M的THF溶液；5.0mL，10.0mmol)。将该瓶密封，置于油浴中在70℃下放置8小时，然后真空浓缩。将粗产物溶于EtOAc并用水和盐水洗涤2次。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩得到粉红色固体状的0.428g 2-氨基-5-溴-N，N-二甲基-苯甲酰胺，其可直接用于下一步骤。1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝7.19(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.08(d，J＝2.0Hz，1H)，6.63(d，J＝8.5Hz，1H)，5.31(br.s，2H)，2.89(br.s，6H)。MS：m/z 198/200[C＝O+]。
步骤2：2-氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-苯甲酰胺的合成
向5mL的Personal Chemistry微波反应瓶中加入3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]]吡啶(0.167g，0.331mmol)、2-氨基-5-溴-N，N-二甲基-苯甲酰胺(0.088g，0.364mmol)、1，1’-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(14mg，0.017mmol)、乙腈(5mL)和饱和NaHCO3水溶液(5mL)。将该瓶密封，用N2净化，然后在Personal Chemistry Optimizer中于90℃下照射5分钟。将各层分离，将水相用EtOAc萃取三次。将合并的有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并吸附到硅胶上。将粗产物通过硅胶色谱纯化，用EtOAc(含10％MeOH)和己烷梯度洗脱。将纯化后的物质溶于MeOH/丙酮溶液(5mL)并加入200μL 50％KOH溶液，然后将该溶液在室温下搅拌3小时。将反应液通过滴加1M柠檬酸至pH＝5来终止反应。将终止反应的反应混合物在EtOAc和水之间进行分配，将各层分离，将水相用EtOAc萃取2次。将合并的有机相用盐水处理，干燥(Na2SO4)，过滤并吸附到硅胶上。将该物质用氨基硅胶色谱纯化，用EtOAc(含10％MeOH)和己烷梯度洗脱得到浅黄色粉末状标题化合物(13.5mg，11％收率)。1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝11.80(br.s，1H)，8.42(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝2.0Hz，1H)，7.68(d，J＝2.5Hz，1H)，7.58(dd，J＝1.5，6.0Hz，1H)，7.44(dd，J＝2.0，6.0Hz，1H)，7.31(d，J＝2.0Hz，1H)，7.27(t，J＝7.5Hz，1H)，7.12(d，J＝7.5Hz，1H)，7.04(t，J＝7.0Hz，1H)，6.80(d，J＝9.0Hz，1H)，5.26(s，2H)，3.80(s，3H)，2.95(s，6H)。MS：m/z 387.1[MH+]。
通过方法57制得的其它化合物：
表35
方法58：
步骤1：7-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-3-甲基-3，4-二氢-2H-苯并[1，2，4]噻二嗪1，1-二氧化物的合成
向8mL的带螺旋帽的小瓶中加入2-氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯磺酰胺(0.0492g，0.090mmol)、乙醛(200μL，3.54mmol)和乙腈(700μL)。将该瓶密封，置于加热组件中于90℃下加热1小时。将反应混合物真空浓缩，然后溶于THF(1mL)并将500μL 50％w/w KOH水溶液加入到所形成的溶液中。2小时后，通过加入冰乙酸终止反应，然后真空浓缩得到棕色残余物。通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷(0-100％梯度)洗脱得到黄色粉末状标题化合物(23.3mg，61％)，1H-NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝11.88(br.s，1H)，8.44(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(d，J＝2.0Hz，1H)，7.71(m，2H)，7.68(dd，J＝2.5，8.6Hz，1H)，7.59(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.54(br.d，1H)，7.29(m，1H)，7.26(br.s，1H)，7.12(dd，J＝8.5，1Hz，1H)，7.05(t，J＝7.5Hz，1H)，6.89(d，J＝9.0Hz，1H)，4.86(m，1H)，3.81(s，3H)，1.44(d，J＝5.0Hz，3H)。MS：m/z 421.1[MH+]。
通过方法58制得的其它化合物：
表36
方法59：
步骤1：5-溴-2-二乙基氨基-烟酸的合成
将880mg(4.00mmol) 5-溴-2-氟烟酸溶于3ml乙腈。加入1.0ml(9.7mmol)二乙基胺并将形成的混合物在80℃下加热18小时。将混合物蒸发，所形成的棕色油不经进一步纯化即可使用。MS：m/z 273[MH+]。
步骤2：2-二乙基氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酸的合成
将230mg(0.45mmol)3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-5]吡啶、137mg(0.50mmol)5-溴-2-二乙基氨基-烟酸和16mg(23μmol)1，1′-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物溶于2.5ml乙腈和2ml 2M碳酸钠水溶液的混合物中。将反应混合物在100℃下加热1.5小时。
将形成的混合物在盐水和乙酸乙酯之间进行分配，将水相用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。然后将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯和乙酸乙酯、二氯甲烷和甲醇的溶剂混合物(4∶4∶1)(含有1％v/v 35％w/w氨水溶液)梯度洗脱得到棕色固体状的150mg 2-二乙基氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酸。MS：m/z 571[MH+]。
步骤3：2-二乙基氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-烟酰胺的合成
将40mg(0.07mmol)2-二乙基氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-烟酸溶于1.5ml二氯甲烷。加入40mg(0.11mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲_六氟磷酸盐、55μl(0.11mmol)2M二甲基胺的THF溶液和1ml DMF并将形成的混合物搅拌1小时。将溶液完全蒸发。
将残余物溶于甲醇和DMSO的混合物，然后在24小时内分三批加入1.1ml 2M氢氧化钠水溶液。在室温下搅拌共48小时后，将混合物蒸发，将残余物通过加入冰乙酸酸化，然后将形成的产物通过基于质量采集的反相HPLC纯化得到棕色固体状的6.8mg(14μmol；20％收率)2-二乙基氨基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-烟酰胺。1H-NMR(d6-DMSO)：δ11.94(s，1H)，8.52(d，1H)，8.50(d，1H)，8.14(d，1H)，7.73(d，1H)，7.73(s，1H)，7.63(dd，1H)，7.29(ddd，1H)，7.13(d(d)，1H)，7.05(dd(d)，1H)，3.83(s，3H)，3.3.46-3.28(m，4H)，3.00(s，3H)，2.87(s，3H)，1.10(t，6H)。MS：m/z 444[MH+]。
通过方法59制得的其它化合物：
表37
方法60：
步骤1：5-溴-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-烟酸的合成
将500mg(4.00mmol)5-溴-2-氟烟酸溶于3ml乙腈。加入620μl 1-(2-羟基乙基)哌嗪并将形成的混合物在70℃下加热24小时。将混合物在乙酸乙酯和含35％w/w氨水溶液的水之间进行分配以调节pH至约为12。将水相用乙酸乙酯萃取两次，然后将水相冷冻干燥得到米色残余物。
将残余物溶于二氯甲烷、乙腈和甲醇的混合物并用过量MP-异氰酸酯树脂(Argonaut Technologies_)处理。然后将该树脂滤出，将滤液蒸发得到632mg(1.91mmol；84％收率)5-溴-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-烟酸，为米色、部分结晶的残余物。MS：m/z 330[MH+]。
步骤2：5-溴-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-N，N-二甲基-烟酰胺的合成
将630mg(1.90mmol)5-溴-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-烟酸悬浮在50ml二氯甲烷中。加入6ml 2M二甲基胺的THF溶液和850mg(1.63mmol)苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷-1-基_六氟磷酸盐，将形成的混合物在室温下搅拌18小时。将形成的混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。将水相用二氯甲烷萃取，将有机相合并，用硫酸钠干燥，然后蒸发得到浅棕色油状的粗产物5-溴-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-N，N-二甲基-烟酰胺，其含有杂质三(吡咯烷基)氨基磷酸酯(phosphoramidate)。MS：m/z 357[MH+]。
步骤3：2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-烟酰胺的合成
将50mg(99μmol)3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、步骤2得到的215mg粗产物5-溴-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-N，N-二甲基-烟酰胺和5mg(6μmol)1，1’-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物溶于3ml乙腈和2 ml饱和碳酸氢钠水溶液的混合物。将反应混合物在120℃下加热4小时。将形成的混合物在水和乙酸乙酯之间进行分配，将水相用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥然后蒸发。将残余物溶于甲醇并加入400μl 50％w/v氢氧化钾水溶液。将形成的混合物在室温下放置3小时。将粗溶液通过基于质量采集的反相HPLC直接纯化得到无色固体状的14.7mg(29μmol；29％收率)2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-烟酰胺。1H-NMR(d6-DMSO)：δ11.93(s，1H)，8.59(d，1H)，8.52(d，1H)，8.17(d，1H)，7.85(d，1H)，7.74(s，1H)，7.63(dd，1H)，7.29(ddd，1H)，7.12(d(d)，1H)，7.05(dd(d)，1H)，3.83(s，3H)，3.55(m，2H)，3.4-3.3(m，4H)，3.01(s，3H)，2.88(s，3H)，2.58(m，4H)，2.54-2.46(m，2H)。MS：m/z 501[MH+]。
通过方法60制得的其它化合物：
表38
方法61：
步骤1：5-溴-3-氟-2-羟基苯甲酸甲酯的合成
将5.00g(32mmol)3-氟水杨酸悬浮在50ml冰乙酸中。加入2.2ml溴并将混合物用在室温下搅拌48小时。将形成的悬浮液用500ml水稀释，将沉淀物滤出，然后通过抽吸干燥得到乳白色固体状的9.394g 5-溴-3-氟-2-羟基苯甲酸。
将4.08g(最多13.9mmol)粗产物溶于70ml甲苯和30ml甲醇的混合物。加入9ml 2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷溶液至混合物呈黄色。加入200μl冰乙酸至混合物变为无色，然后蒸发溶剂得到3.037g(12.20mmol；88％，经过两个步骤)5-溴-3-氟-2-羟基苯甲酸甲酯。1H-NMR(d6-DMSO)：δ10.57(s，br.，1H)，7.83(dd，1H)，7.67(d(d)，1H)，3.90(s，3H)。
步骤2：3-氟-2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸甲酯的合成
将600mg(1.19mmol)3-(2-甲氧基-苯基)-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、509mg(2.04mmol)5-溴-3-氟-2-羟基苯甲酸甲酯和43mg(60μmol)1，1’-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷加合物溶于10ml甲苯和10ml饱和碳酸氢钠水溶液的混合物中。将反应混合物在70℃下加热2.5小时，然后在90℃下继续加热1.5小时。
将粗产物在二氯甲烷和碳酸氢钠的饱和水溶液之间进行分配。将水相用二氯甲烷萃取三次，将合并的有机相用硫酸钠干燥然后蒸发。将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱得到427mg(0.79mmol；66％收率)3-氟-2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸甲酯。MS：m/z 547[MH+]。
步骤3：3-氟-2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-苯甲酰胺的合成
将22mg(40μmol)3-氟-2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-苯甲酸甲酯溶于2ml 2M二甲基胺的THF溶液。将该溶液在密封瓶中于100℃下加热24小时，然后浓缩。将残余物溶于2ml甲醇并加入350μl 50％w/v氢氧化钾水溶液。将混合物在室温下放置1小时，然后通过加入冰乙酸中和。将粗产物通过基于质量采集的反相HPLC直接纯化得到乳白色固体状的6.0mg(14μmol；37％收率)3-氟-2-羟基-5-[3-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-N，N-二甲基-苯甲酰胺。1H-NMR(d6-DMSO)：δ11.91(s，1H)，8.51(d，1H)，8.14(d，1H)，7.73(d，1H)，7.64(d，1H)，7.62(dd，1H)，7.32-7.25(m，2H)，7.14(d，1H)，7.05(m，1H)，3.82(s，3H)，2.99(s，3H)，2.87(s，3H)。MS：m/z 406[MH+]。
通过方法61制得的其它化合物：
表39
实施例2：生物学试验
可用本领域技术人员已知的激酶试验来测试本发明化合物和组合物的抑制活性。激酶试验包括但不限于以下实施例。
尽管在第一个实施例中采用了突变形式的Abl T315I的激酶结构域(″Abl T315I KD″)，但激酶试验可利用各种形式的突变体和野生型的酶，包括例如完整的蛋白、激酶结构域或其部分(例如Abl Y393F)。试验中所用的激酶还可以处于各种磷酸化状态。在c-Abl实例中，使用处于零磷酸化状态的突变体激酶。
c-Abl丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶偶联的酶试验
在c-Abl丙酮酸激酶(PK)/乳酸脱氢酶(LDH)偶联试验中，将底物肽的蛋白激酶依赖型磷酸化与NADH的氧化相关联。通过监测340nm处吸光度的降低来检测从NADH到NAD+的氧化。
材料：Abl底物肽＝EAIYAAPFAKKK-OH(Biopeptide，San Diego，CA)；βNADH(Sigma目录号N-8129，FW＝709.4)；2M MgCl2；1M HEPES缓冲液，pH7.5；磷酸烯醇丙酮酸盐(PEP)(Sigma目录号P-7002，FW＝234)；乳酸脱氢酶(LDH)(Worthington Biochemical目录号2756)；丙酮酸激酶(PK)(Sigma目录号P-9136)；ATP(Sigma目录号A-3377，FW＝551)；Greiner 384-孔UV星形板；和纯化且未磷酸化的T315I Abl激酶结构域。
储备液：每天新制备的10mM NADH(7.09 mg/ml的miliQH2O溶液)；保存在-20℃下的10mM Abl底物肽(13.4mg/ml的miliQH2O溶液)；100mM HEPES缓冲液，pH7.5(5 ml 1M储备液+45ml miliQH2O)；100mMMgCl2(5ml 2M MgCl2+95ml dH2O)；保存在-20℃下的100mM PEP(23.4mg/ml的dH2O溶液)；保存在-20℃下的10mM ATP(5.51mg/ml的dH2O溶液)(每天将50μl稀释到总共10ml miliQH2O中＝50μM ATP工作储存液)；在液氮下快速冷冻并且保存在-80℃下的1000U/ml PK(U/mg，不同批次之间有所不同)和在液氮下快速冷冻并且保存在-80℃下的1000U/mlLDH(U/mg，不同批次之间有所不同)。
384孔模式的标准试验设置(50μl反应液)：300μM NADH；10mMMgCl2；2mM PEP；45U/ml PK；60U/ml LDH；200μM Abl底物肽；2.5μl待测化合物(DMSO溶液)；2μg/ml Abl激酶结构域；10μM ATP；100mMHEPES缓冲液。阳性对照含有DMSO而没有待测化合物。阴性对照含有5μl 0.5M EDTA(在试验中为50mM)。将c-Abl T315I突变体的脱磷酸化的形式用于生物化学筛选试验。在时间t＝0时通过加入ATP开始激酶的反应。
活性通过在340nm处的吸收波谱根据NADH的时间依赖性损失来测定。然后将得到的进展曲线的线性部分通过线性回归进行分析以得到以吸光度单位/时间表示的活性，报告为最佳拟合的直线的斜率(摩尔/单位时间可以用NADH在340nm处的摩尔消光系数，6250M-1cm-1计算得到)。
将数据用如下方程式进行评价：Z′＝1-[3*(σ++σ-)/μ+-μ-](Zhang等人，1999 J Biomol Screening 4(2)67-73)，其中μ表示平均值且σ表示标准偏差。下标表示阳性或阴性对照。对于粗筛选试验，Z′的分值应该≥0.50。常用的阈值＝μ+-3*σ+。任何在该阈值以下的值都被指定为″hit″。
剂量响应利用如下方程式进行分析：y＝min+{(max-min)/(1+10[化合物]-logIC50)}，其中y是所观察到的初始斜率，max＝在不存在抑制剂下的斜率，min＝在无限抑制剂下的斜率，IC50是相当于1/2观察到的总振幅的[化合物](振幅＝max-min)。
为了测定Abl KD的调节、活化或抑制作用，将待测化合物以一定范围的浓度加入到该试验中。抑制剂抑制Abl KD活性的IC50可以在微摩尔范围内、纳摩尔范围或例如亚纳摩尔(subnanomolar)范围内。
另外的激酶试验
除了c-Abl PK/LDH偶联试验(上述)外，对c-Abl、MET、AurA和PDK1激酶等还开发了基于发光的类似的筛选试验。所有的这些试验都利用ATP消耗试验(Kinase-GloTM，Promega Corporation，Madison，WI)来定量激酶的活性。Kinase-GloTM模式使用热稳定的萤光素酶以在激酶反应之后从保留在溶液中的ATP产生发光信号。该发光信号与激酶活性的量成负相关。
CAbl的基于发光的酶试验
材料：Abl底物肽＝EAIYAAPFAKKK-OH(Biopeptide，San Diego，CA)、ATP(Sigma目录号A-3377、FW＝551)、HEPES缓冲液、pH7.5、牛血清蛋白(BSA)(Roche 92423420)、MgCl2、星形孢菌素(链霉菌属，Sigma目录号85660-1MG)、白色Costar 384孔平底板(VWR目录号29444-088)、Abl激酶(参见下面)、Kinase-GloTM(Promega目录号V6712)。
储备液：保存在-20℃下的10mM Abl底物肽(13.4mg/ml的miliQH2O溶液)；100mM HEPES缓冲液、pH7.5(5ml 1M储备液+45ml miliQH2O)；保存在-20℃下的10mM ATP(5.51mg/ml的dH2O溶液)(每天将50μl稀释到总共10ml miliQH2O中＝50μM ATP工作储存液)；1％BSA(1g BSA的100ml 0.1M HEPES溶液、pH7.5、保存在-20℃下)、100mM MgCl2；200μM星形孢菌素、2X Kinase-GloTM试剂(新制备的或保存在-20℃下)。
384孔模式的标准试验设置(20μl激酶反应液、40μl检测反应液)：10mM MgCl2；100μM Abl底物肽；0.1％BSA；1μl待测化合物(DMSO溶液)；0.4μg/ml Abl激酶结构域；10μM ATP；100mM HEPES缓冲液。阳性对照含有DMSO而没有待测化合物。阴性对照含有10μM星形孢菌素。在时间t＝0时通过加入ATP开始激酶的反应。激酶的反应在21℃下进行30分钟，然后将20μl Kinase-GloTM试剂加入到每一个孔中以终止激酶的反应并引发发光反应。在21℃下保温20分钟后，在板式读数光度计上检测发光。
MET的基于发光的酶试验
材料：Poly Glu-Tyr(4∶1)底物(Sigma目录号P-0275)、ATP(Sigma目录号A-3377，FW＝551)、HEPES缓冲液，pH7.5、牛血清蛋白(BSA)(Roche92423420)、MgCl2、星形孢菌素(链霉菌属，Sigma目录号85660-1MG)、白色Costar 384孔平底板(VWR目录号29444-088)、MET激酶(参见下面)、Kinase-GloTM(Promega目录号V6712)。
储备液：保存在-20℃下的10mg/ml poly Glu-Tyr的水溶液；100mMHEPES缓冲液，pH7.5(5ml 1M储备液+45ml miliQH2O)；保存在-20℃下的10mM ATP(5.51mg/ml的dH2O溶液)(每天将50μl稀释到总共10mlmiliQH2O中＝50μM ATP工作储存液)；1％BSA(1g BSA的100ml 0.1MHEPES溶液，pH7.5，保存在-20℃下)、100mM MgCl2；200μM星形孢菌素、2X Kinase-GloTM试剂(新制备的或保存在-20℃下)。
384孔模式的标准试验设置(20μl激酶反应液、40μl检测反应液)：10mM MgCl2；0.3 mg/ml poly Glu-Tyr；0.1％BSA；1μl待测化合物(DMSO溶液)；0.4μg/ml MET激酶；10μM ATP；100mM HEPES缓冲液。阳性对照含有DMSO而没有待测化合物。阴性对照含有10μM星形孢菌素。在时间t＝0时通过加入ATP开始激酶的反应。激酶的反应在21℃下进行60分钟，然后将20μl Kinase-GloTM试剂加入到每一个孔中以终止激酶的反应并引发发光反应。在21℃下保温20分钟后，在板式读数光度计上检测发光。AurA的基于发光的酶试验
材料：Kemptide肽底物＝LRRASLG(Biopeptide，San Diego，CA)、ATP(Sigma目录号A-3377，FW＝551)、HEPES缓冲液，pH7.5、10％Brij35(Calbiochem目录号203728)、MgCl2、星形孢菌素(链霉菌属，Sigma目录号85660-IMG)、白色Costar 384孔平底板(VWR目录号29444-088)、自身磷酸化的AurA激酶(参见下面)、Kinase-GloTM(Promega目录号V6712)。
储备液：保存在-20℃下的10mM Kemptide肽(7.72mg/ml的水溶液)；100mM HEPES缓冲液+0.015％Brij 35，pH7.5(5ml 1M HEPES储备液+75μL 10％Brij 35+45ml miliQH2O)；保存在-20℃下的10mM ATP(5.51mg/ml的dH2O溶液)(每天将50μl稀释到总共10ml miliQH2O中＝50μM ATP工作储存液)；100mM MgCl2；200μM星形孢菌素、2XKinase-GloTM试剂(新制备的或保存在-20℃下)。
AurA的自身磷酸化反应：将ATP和MgCl2分别以终浓度10mM和100mM加入到1-5mg/ml AurA中。自身磷酸化反应在21℃下进行2-3小时。通过加入EDTA停止反应，终浓度为50mM，将样品用液氮快速冷冻并保存在-80℃下。
384孔模式的标准试验设置(20μl激酶反应液、40μl检测反应液)：10mM MgCl2；0.2mM Kemptide肽；1μl待测化合物(DMSO溶液)；0.3μg/ml自身磷酸化的AurA激酶；10μM ATP；100mM HEPES+0.015％Brij缓冲液。阳性对照含有DMSO而没有待测化合物。阴性对照含有5μM星形孢菌素。在时间t＝0时通过加入ATP开始激酶的反应。激酶的反应在21℃下进行45分钟，然后将20μl Kinase-GloTM试剂加入到每一个孔中以终止激酶的反应并引发发光反应。在21℃下保温20分钟后，在板式读数光度计上检测发光。
PDK1的基于发光的酶试验
材料：PDKtide肽底物
＝KTFCGTPEYLAPEVRREPRILSEEEQEMFRDFDYIADWC(Upstate目录号12-401)、ATP(Sigma目录号A-3377、FW＝551)、HEPES缓冲液，pH7.5、10％Brij 35(Calbiochem目录号203728)、MgCl2、星形孢菌素(链霉菌属，Sigma目录号85660-1MG)、白色Costar 384孔平底板(VWR目录号29444-088)、PDK1激酶(参见下面)、Kinase-GloTM(Promega目录号V6712)。
储备液：保存在-20℃下的1mM PDKtide底物(1mg的200μl溶液，由Upstate提供)；100mM HEPES缓冲液，pH7.5(5ml 1M HEPES储备液+45ml miliQH2O)；保存在-20℃下的10mM ATP(5.51mg/ml的dH2O溶液)(每天将25μl稀释到总共10ml miliQH2O中＝25μM ATP工作储存液)；100mM MgCl2；保存在2-8℃下的10％Brij 35；200μM星形孢菌素、2XKinase-GloTM试剂(新制备的或保存在-20℃下)。
384孔模式的标准试验设置(20μl激酶反应液、40μl检测反应液)：10mM MgCl2；0.01mM PDKtide；1μl待测化合物(DMSO溶液)；0.1μg/mlPDK1激酶；5μM ATP；10mM MgCl2；100mM HEPES+0.01％Brij缓冲液。阳性对照含有DMSO而没有待测化合物。阴性对照含有10μM星形孢菌素。在时间t＝0时通过加入ATP开始激酶的反应。激酶的反应在21℃下进行40分钟，然后将20μl Kinase-GloTM试剂加入到每一个孔中以终止激酶的反应并引发发光反应。在21℃下保温20分钟后，在板式读数光度计上检测发光。
共表达的质粒的制备
λ磷酸酯酶共表达的质粒按照以下方法构建。
Aurora激酶的开放读码框从人类的HepG2 cDNA文库(ATCCHB-8065)通过聚合酶链反应(PCR)利用如下引物进行扩增：
正向引物：TCAAAAAAGAGGCAGTGGGCTTTG
反向引物：CTGAATTTGCTGTGATCCAGG。
将PCR产物(预期795个碱基对)按照以下方法进行凝胶纯化。将PCR产物通过电泳用1％琼脂糖凝胶在TAE缓冲液中纯化，将适当大小的电泳带从凝胶中切除并用标准凝胶提取试剂盒洗脱。将洗脱的DNA用拓扑异构酶在室温下处理5分钟以连接到pSB2-TOPO内。载体pSB2-TOPO是pET26b(Novagen，Madison，WI)的拓扑异构酶-活化的、修饰的变型，其中在NdeI位点插入了以下序列：CATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGTGGTCATATGTCCCTT并且在BamHI位点插入了以下序列：AAGGGGGATCC
TAAACTGCAGAGATCC。从Shine-Dalgarno序列经“原始”NdeI位点、终止位点和“原始”BamHI位点所形成的质粒序列如下：
AAGGAGGAGATATACATA
ATGGGCCATCATCATCATCATCACGGTGGTCATATGTCCCTT[ORF]AAGGGGGATCC
TAAACTGCAGAGATCC。用该载体表达的Aurora激酶具有14个加入到N-末端的氨基酸(MetGlyHisHisHisHisHisHisGlyGlyHisMetSerLeu)和四个加入到C-末端的氨基酸(GluGlyGlySer)。
然后通过将来自λ噬菌体的磷酸酯酶基因插入以上质粒来产生磷酸酯酶共表达质粒(Matsui T等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，2001，284：798-807)。将磷酸酯酶基因用PCR技术从模板λ噬菌体DNA(HinDIIIdigest，New England Biolabs)利用以下寡核苷酸引物进行扩增：
正向引物(PPfor)：GCAGAGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACG
GATGGAGTGAAAGAGATGCGC
反向引物(PPrev)：
GGTGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCAAGCTTT
CATCATGCGCCTTCTCCCTGTAC。
将PCR产物(预期744个碱基对)进行凝胶纯化。然后将纯化的DNA和非共表达的质粒DNA用SacI和XhoI限制酶消化。然后利用标准方法将消化的质粒和PCR产物进行凝胶纯化并与T4 DNA连接酶一起在16℃下连接8小时并转移到Top 10细胞内。在共表达质粒中磷酸酯酶基因的存在通过测序来证实。对于本文所遵循的标准的分子生物学方法，还可参见例如以下文献所述的技术：Sambrook等人，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，NY，2001和Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology，Greene PublishingAssociates and Wiley Interscience，NY，1989。
该共表达的质粒含有Aurora激酶以及在lac引物控制下的λ磷酸酯酶基因，它们均具有自己的核糖体结合位点。通过将磷酸酯酶克隆到多克隆位点的中部、目标基因的下游，可以产生用于将磷酸酯酶亚克隆到其它质粒内的适当的限制位点。这些位点包括SacI、激酶和磷酸酯酶之间的Sa1I和EcoRI以及磷酸酯酶的HinDIII、NotI和XhoI下游。
蛋白激酶表达
c-Abl的开放读码框从由新鲜收获的小鼠肝脏制备的小鼠cDNA文库用可购买的试剂盒(Invitrogen)通过PCR技术利用以下引物进行扩增：
正向引物：GACAAGTGGGAAATGGAGC
反向引物：CGCCTCGTTTCCCCAGCTC。
将PCR产物(预期846个碱基对)从PCR反应混合物中用PCR清除试剂盒(Qiagen)进行纯化。将纯化的DNA在室温下用拓扑异构酶处理5分钟以连接到pSGX3-TOPO内。载体pSGX3-TOPO是pET26b(Novagen，Madison，Wisconsin)的拓扑异构酶活化的、修饰的变型，其中在NdeI位点插入了以下序列CATATGTCCCTT并且在BamHI位点插入了以下序列AAGGGCATCATCACCATCACCACTGATCC。从Shine-Dalgarno序列经终止位点和BamHI位点所形成的质粒的序列如下：
AAGGAGGAGATATACAT
ATGTCCCTT[ORF]AAGGGCATCATCACCATCACCACTGATCC。利用该载体表达的c-Abl具有加入到其N-末端的三个氨基酸(Met Ser Leu)和加入到其C-末端的8个氨基酸(Glu Gly His His His His His His)。
然后将来自实施例1的Aurora共表达质粒的磷酸酯酶亚克隆到上述质粒内产生c-Abl/磷酸酯酶共表达质粒。将Aurora共表达质粒和Abl非共表达质粒均用限制酶EcoRI和NotI消化3小时。将DNA片段进行凝胶纯化，将来自Aurora质粒的磷酸酯酶基因与消化的c-Abl质粒在16℃下连接8小时，然后转移到Top 10细胞内。通过限制消化分析证实所形成的构建体中磷酸酯酶基因的存在。
该质粒编码c-Abl和λ磷酸酯酶的共表达。其另外的优点是具有两个独特的限制位点XbaI和NdeI，它们位于可用于将其它目标蛋白亚克隆到该磷酸酯酶共表达质粒内的目标基团的上游。
Abl T315I的质粒通过将Abl质粒用Quick Change诱变试剂盒(Stratagene)按照生产商建议的方法和下列寡核苷酸进行修饰而制得：
Mm05582dS4
5′-CCACCATTCTACATAATCATTGAGTTCATGACCTATGGG-3′
Mm05582dA4
5′-CCCATAGGTCATGAACTCAATGATTATGTAGAATGGTGG-3′。
将从磷酸酯酶共表达质粒产生的蛋白质按照以下方法纯化。将非共表达的质粒转移到有化学活性的BL21(DE3)Codon+RIL(Stratagene)细胞内，并且将共表达的质粒转移到BL21(DE3)pSA0145内(表达λ噬菌体的溶菌基因并且可在冷冻和融化时溶解的菌株(Crabtree S，Cronan JE Jr.JBacteriol 1984 Apr；158(1)：354-6))，然后将它们置于包含加有卡那霉素的LB琼脂的培养皿上。使分离出的单一菌落生长至mid-log期，并在-80℃下保存在含15％甘油的LB中。将该甘油储备液在含有卡那霉素的LB琼脂板上划痕，将单一菌落用于接种10ml含有卡那霉素和氯霉素的LB培养基，将其在30℃下于振荡下保温过夜。将该培养基用于接种含500ml含有卡那霉素和氯霉素的LB的2L烧瓶，使其在37℃下生长至mid-log期，然后加入IPTG至0.5mM的终浓度进行诱导。诱导后，将该烧瓶在21℃下于振荡下保温18小时。
将c-Abl T315I KD(激酶结构域)按照以下方法纯化。将细胞通过离心收集，在稀的分解缓冲液(50mM Tris HCl，pH7.5，500mM KCl，0.1％Tween 20，20mM咪唑)中超声溶解，然后离心分离以除去细胞碎片。将溶解的级分通过填充有镍的IMAC柱(Pharmacia，Uppsala，Sweden)纯化，在天然条件下用20mM-500mM的咪唑在50mM Tris溶液，pH7.8，500mMNaCl，10mM甲硫氨酸、10％甘油中的溶液梯度洗脱。然后将该蛋白质通过凝胶过滤利用在GF5缓冲液(10mM HEPES，pH7.5，10mM甲硫氨酸，500mM NaCl，5mM DTT和10％甘油)中平衡的Superdex 75制备级柱进一步纯化。收集含有纯化的c-Abl T315I KD激酶结构域的级分。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳证实，所得到的蛋白质具有98％的纯度。纯化后的蛋白质的质谱分析表明其主要是单一磷酸化的。然后将该蛋白质用Shrimp碱性磷酸酶(MBI Fermentas，Burlington，Canada)在以下条件下进行脱磷酸化作用：100U Shrimp碱性磷酸酶/mg c-Abl T315I KD，100mM MgCl2和250mM附加的NaCl。该反应在23℃下进行过夜。该蛋白质经质谱分析证实是非磷酸化的。将所有沉淀物分离出来，将可溶的级分与反应物通过凝胶过滤利用在GF4缓冲液(10mM HEPES，pH7.5，10mM甲硫氨酸，150mMNaCl，5mM DTT和10％甘油)中平衡的Superdex 75制备级柱进行分离。Met的纯化：
将从表达人Met的激酶结构域的12L Sf9昆虫细胞培养液的一半所产生的细胞沉积物重新悬浮在含有50mM Tris-HCl pH7.7和250mM NaCl、体积约为40ml/1L初始培养液的缓冲液中。在每1L初始培养液中加入一片Roche Complete，不含EDTA的蛋白酶抑制剂合剂(目录号1873580)。将该悬浮液在4℃下搅拌1小时。通过在4℃下以39,800xg离心30分钟来除去碎片。将上清液倾到到500ml的烧杯内，然后加入10ml已在50mMTris-HCl pH7.8，50mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸中预先平衡的Qiagen Ni-NTA Agarose(目录号30250)的50％浆液，并在4℃下搅拌30分钟。然后将该样品于4℃下倒入滴注柱(drip column)中并用10个柱体积的50mM Tris-HCl pH7.8，500mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸洗涤。将蛋白质利用均为两个柱体积的相同的缓冲液分步梯度洗脱，所述缓冲液依次含有50mM、200mM和500mM的咪唑。将6x Histidine标记用40单位的TEV蛋白酶(Invitrogen目录号10127017)/1mg蛋白质分解过夜，同时在50mM Tris-HCl pH7.8，500mMNaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸中于4℃下透析。将样品通过Pharmacia 5ml IMAC柱(目录号17-0409-01)以除去6x Histidine标记，所述的柱填充有镍并且在50mM Tris-HCl pH7.8，500mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸中平衡。分解的蛋白质以低亲合性结合到镍柱上，然后进行分步梯度洗脱。分步梯度用15％，然后是80％的B-side(A-side＝50mM Tris-HCl pH7.8，500mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸；B-side＝50mM Tris-HClpH7.8，500mM NaCl，10％甘油，500mM咪唑和10mM甲硫氨酸)进行，均为4个柱体积。Met蛋白在第一步(15％)中洗脱，而未分解的Met和分解的Histidine标记在80％级分中洗脱。在SDS-PAGE凝胶分析证实存在分解的Met后将15％级分收集；进一步的纯化通过凝胶过滤色谱在用50mM Tris-HCl pH8.5，150mM NaCl，10％甘油和5mM DTT平衡的Amersham Biosciences HiLoad 16/60Superdex 200制备级(目录号17-1069-01)上完成。将纯净的级分合并，然后通过在Amicon Ultra-1510,000 Da MWCO离心过滤装置(目录号UFC901024)上进行离心分离浓缩至约10.4mg/ml。
AurA的纯化：
从6L培养的表达人Aurora-2的细胞制备Sf9昆虫细胞沉积物(约18g)并将其重新悬浮在50mM磷酸钠pH8.0，500mM NaCl，10％甘油，0.2％正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(BOG)和3mM β-巯基乙醇(BME)中。在每1L初始培养液中加入一片Roche Complete，不含EDTA的蛋白酶抑制剂合剂(目录号1873580)和85单位Benzonase(Novagen目录号70746-3))。将该沉积物重新悬浮在约50ml/1 L初始培养液中，然后在冰上用两次30-45秒的冲击(100％工作期)进行声波处理。通过离心分离除去碎片，将上清液通过0.8μm的注射过滤器，然后将其负载到5ml Ni2+HiTrap柱(Pharmacia)上。将该柱用6个柱体积的50mM磷酸钠pH8.0，500mM NaCl，10％甘油，3mM BME洗涤。将蛋白质用含有500mM咪唑的相同缓冲液的线性梯度洗脱。将洗脱物(24ml)在4℃下在含有50mM磷酸钠pH8.0，500mM NaCl，10％甘油，3mM BME和10,000单位TEV(Invitrogen目录号10127-017)的缓冲液中分解过夜。将蛋白质通过第二个以上所述的镍亲合柱；收集流出物。将分解的蛋白质级分合并并利用旋转浓缩器浓缩。进一步的纯化通过凝胶过滤色谱在S75分离柱上在50mM磷酸钠(pH8.0)，250mM NaCl，1mM EDTA，0.1mM AMP-PNP或ATP缓冲液和5mM DTT中进行。将最纯净的级分合并，然后浓缩至约8-11mg/ml，或者在液氮下以120μl等分试样快速冷冻并且保存在-80℃下或保存在4℃下。
PDK1的纯化：
从6L表达人PDK1的Sf9昆虫细胞制备细胞沉积物并将其重新悬浮在含有50mM Tris-HCl pH7.7和250mM NaCl、体积约为40ml/1 L初始培养液的缓冲液中。在每1L初始培养液中加入一片Roche Complete，不含EDTA的蛋白酶抑制剂合剂(目录号1873580)和85单位的Benzonase(Novagen目录号70746-3))。将该悬浮液在4℃下搅拌1小时。通过在4℃下以39,800xg离心30分钟来除去碎片。将上清液倾到到500ml的烧杯内，然后加入10ml已在50mM Tris-HCl pH7.8，50mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸中预先平衡的Qiagen Ni-NTA Agarose(目录号30250)的50％浆液，并在4℃下搅拌30分钟。然后将该样品于4℃下倒入滴注柱(drip column)中并用10个柱体积的50mM Tris-HCl pH7.8，500mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸洗涤。将蛋白质利用均为两个柱体积的相同的缓冲液分步梯度洗脱，所述缓冲液依次含有50mM和500mM的咪唑。将6x Histidine标记用40单位的TEV蛋白酶(Invitrogen目录号10127017)/1 mg蛋白质分解过夜，同时在50mMTris-HCl pH7.8，500mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸中于4℃下透析。将样品通过Pharmacia 5ml IMAC柱(目录号17-0409-01)以除去6x Histidine标记，所述的柱填充有镍并且在50mM Tris-HCl pH7.8，500mM NaCl，10％甘油，10mM咪唑和10mM甲硫氨酸中平衡。分解了的蛋白质被洗脱到流出物中，而未分解的蛋白质和His标记仍结合在Ni柱上。将分解了的蛋白质级分合并并利用旋转浓缩器浓缩。进一步的纯化通过凝胶过滤色谱在用25mM Tris-HCl pH7.5，150mM NaCl和5mM DTT平衡的Amersham Biosciences HiLoad 16/60 Superdex 200制备级(目录号17-1069-01)上完成。将最纯净的级分合并，然后通过在Amicon Ultra-1510,000 Da MWCO离心过滤装置(目录号UFC901024)上进行离心分离浓缩至约15mg/ml。
实施例3：细胞试验
将MV4-11和THP细胞保存在补充有10％胎牛血清(FBS)和青霉素/链霉素的Iscove改性的Dulbecco培养基中，将Ba/F3细胞保存在补充有10％FBS、青霉素/链霉素和5ng/ml重组小鼠IL-3的RPMI 1640中。细胞存活试验
将化合物在下面的试验中一式两份地进行测试。
96孔XTT试验：细胞在含有各种浓度的化合物(一式两份)的生长培养基中在96孔板上于37℃下生长72小时。开始的细胞数目是5000-8000个细胞/孔，体积为120μl。在72小时保温的终点，将40μl XTT标记混合物(3′-[1-(苯基氨基-羰基)-3，4-四唑_]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠水合物和电子偶联剂：PMS(N-甲基二苯并吡嗪甲基硫酸盐的50∶1溶液)加入到该板的每一个孔中。在37℃下继续保温2-6小时后，利用分光光度计测定在405nm的吸光度读数，在650nm进行背景校正。
384孔AlamarBlue试验：将90μl细胞悬浮液放置到预先加有0.5μl化合物的DMSO溶液或仅有DMSO的384孔板的每一个孔上。开始的细胞数目是4000个细胞/孔。保温72小时后，将10μl AlamarBlue溶液(440μM刃天青的PBS溶液)加入到该板的每一个孔上。在37℃下继续保温2小时后，利用TECAN板式读数荧光计测定荧光，在535nm激发，在591nm发射。
BCR-ABL Phospho-ELISA试验
下表表示通常用于BCR-ABL phospho-ELISA(″P-ELISA″)试验的试剂。
表40 BCR-ABL phospho-ELISA(p-ELISA)常用试剂列表
| 描述 | 供应商 | 目录号 |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 11875-135 |
| 10％胎牛血清，经鉴定的、加热失活的 | VWR | 16777-014 |
| 人血浆，抗凝剂＝EDTA | Bioreclamation Inc. | HMPLEDTA |
| c-Abl(Ab-3)单克隆抗体 | VWR | 80001-286 |
| 重组小鼠白介素-3 | Chemicon | IL015 |
| 粘性平板密封条 | ||
| 96 孔 PP 325μl 圆底板w/lidTC | ThompsonInstrument Co | 932465 |
| 96 孔 Nunc Maxisorp板(用于比色测定) | Fisher Scientific | 12-565-136 |
| 96孔白色平底板(用于发光试验) | Matrix | 4923 |
| 溶解缓冲液的成分 | ||
| Tris-Cl pH7.4(20mM) | ||
| NP-40(1％) | ||
| EDTA(5mM) |
| 焦磷酸钠(NaPP；5mM) | ||
| NaF(5mM) | ||
| NaCl(150mM) | ||
| 蛋白酶抑制剂合剂 | Sigma | P2714 |
| PMSF(1mM) | ||
| 钒酸钠(NaVO4；2mM) | ||
| PBS，冰冷的 | ||
| 抗-磷酸酪氨酸(4G10TM) | Upstate | 16-105或05-321 |
| HRP结合的或未结合的 | ||
| 山羊抗小鼠IgG，HRP结合物(如果使用未结合的4G10) | Upstate | 12-349 |
| BD OptELA试剂盒B | BD Biosciences | 550534 |
| 涂层缓冲液(0.1M碳酸钠，pH9.5) | ||
| 试验稀释剂 | ||
| 洗涤缓冲液(0.05％Tween/PBS) | ||
| 终止溶液(2N硫酸) | ||
| 底物试剂A & B | ||
| SuperSignal ELISA Pico化学发光底物(可用于代替底物试剂A&B) | Pierce | 37070 |
将细胞(用WT BCR-ABL、其它激酶或T315I、Y253F或BCR-ABL的其它突变体形式转染的Ba/F3细胞)在不存在IL-3的条件下生长至少1/2周，然后进行试验。在试验前一天，将该细胞用新鲜的培养基培养以便在进行试验时细胞处于对数生长期。将已经在不存在IL-3的条件下生长了至少1/2周的Ba/F3细胞重新悬浮在RPMI 1640中，使96孔板的每一个孔含有约200,000个细胞。将细胞分配在含有连续稀释浓度的待测化合物的96孔板中。将细胞通常与或不与待测化合物一起在5％CO2下于37℃保温60-120分钟。保温在或不在其它添加剂诸如10％FCS或50％人血浆的存在下进行。在将化合物保温后，加入溶解缓冲液并保温10-15分钟；通过离心使溶解产物澄清。
为了制备ELISA板，将可购买到的抗-ABL抗体(例如(Ab-3，Calbiochem OP20)以0.125μg/ml的浓度配制到涂层缓冲液(0.1M碳酸钠，pH9.5)中，然后以10ml/进行制板(12.5μl 100μg/ml Ab/10ml)。在高度结合的多孔板中，向各孔中加入100μl Ab的涂层缓冲液溶液，并将每个板用平板密封条覆盖，然后在4℃下保温过夜。
将过量的抗体除去并且将ELISA板用200μl洗涤缓冲液(0.05％Tween的PBS溶液，pH7.4)洗涤3-4次。将150μl溶解产物(参见上面)转移到ELISA板上。将该板密封并在室温下保温2小时。检测抗体(例如HRP结合的抗-pTyr或未结合的α-p-Y 4G10，Upstate)在试验稀释剂中制备。将抗体在试验稀释剂中稀释至1∶1000(储备液＝2μg/μl，200μg的100μl溶液；f.c.＝2μg/ml)并加入10ml稀释的抗体/板。将溶解产物从ELISA板上除去，将各孔用200μl洗涤缓冲液/孔洗涤4次。向各孔中加入100μl检测抗体；将该板封闭，然后在室温下(21℃)保温1小时。将过量的检测抗体从ELISA板中除去，将各孔用200μl洗涤缓冲液/孔洗涤4次。
如果需要的话(即，对于未结合的抗-pTyr抗体)，将次级抗体(山羊抗兔HRP)在试验稀释剂中稀释至1∶3000(3.33μl/10ml稀释剂)并以10ml稀释的抗体/板的量加入。将过量的次级抗体从ELISA板上除去，然后将该板用200μl/孔洗涤缓冲液洗涤4次。
底物试剂A和底物试剂B(Pierce目录号37070 SuperSignal ELISAPico Chemiluminescent Substrate)在临用前加入(10ml所形成的溶液/板)。每孔加入100μl底物，混合1分钟，然后用发光计测定化学发光信号。
关于所选择的化合物的试验结果：
Abl_T315生物学试验：
IC50＜0.05μM：AE1、AE2、AE3、AE4、AE5、AE6、AE7、AE8、AE9、AE10、AE11、AE12、AE13、AE14、AE15、AE16、AE17、AE18、AE19、AE20、AE21、AE22、AE23、AE24、AE25、AE27、AE28、AE29、AE30、AE31、AE32、AE33、AE34、AE35、AE37、AE40、AE41、AE42、AE43、AE44、AE47、AE48、AE49、AE50、AE52、AE55、AE58、AE59、AE60、AE61、AE64、AE62、AE63、AE65、AE66、AE67和AE68。
0.05μM＜IC50＜0.2μM：AE26、AE36、AE38、AE39、AE45、AE46、AE51、AE53和AE54。
Abl_T315 p-ELISA细胞试验：
IC50＜0.1μM：AE1、AE3、AE5、AE6、AE7、AE14、AE20、AE25、AE26、AE30、AE31、AE37、AE41、AE42、AE44、AE54、AE55、AE58和AE64。0.1μM＜IC50＜1μM：AE2、AE4、AE9、AE11、AE13、AE15、AE16、AE18、AE19、AE22、AE29、AE32、AE34、AE35、AE48、AE49、AE52、AE61、AE62和AE63。
AurA生物学试验：
IC50＜0.5μM：AE6、AE7、AE15、AE30、AE31、AE32、AE34、AE35、AE47、AE51、AE52、AE53、AE54、AE55和AE60。
0.5μM＜IC50＜5μM：AE1、AE11、AE13、AE33、AE59、AE62、AE67、AE68。
Met生物学试验：
IC50＜1μM：AE8、AE14、AE40、AE42、AE43、AE48、AE53、AE56和AE66。
1μM＜IC50＜5μM：AE22、AE26、AE41、AE46、AE52、AE57、AE58和AE65。
PDK1生物学试验：
IC50＜1μM：AE50、AE55和AE58。
1μM＜IC50＜5μM：AE2、AE3、AE9、AE10、AE11、AE20、AE21、AE38、AE44、AE45、AE46、AE48、AE49、AE52、AE53、AE59、AE60、AE61、AE63和AE64。
Claims (73)
1、下式化合物：
其中
L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、未取代的C1-C5亚烷基或未取代的2-5元的杂亚烷基，其中n是0-2的整数；
A1是6-元的取代或未取代的芳基或6-元的取代或未取代的杂芳基；
A2是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R1是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
X1是-C(R2)＝、-C(R2)(R3)-、-N＝、-N(R4)-、-S-或-O-；
R2和R3独立地是氢、卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R4是氢、-C(O)R8、-S(O)2R11、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
Z是N(R23)、S或O，其中R23是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂烷基；
w是0-2的整数；
R5独立地是氢、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R6和R7独立地是氢、-C(O)R10、-S(O)2R11、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R10和R11独立地是氢、-NR12R13、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R12和R13独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R8独立地是氢、-NR14R15、-OR16、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R14、R15和R16独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R9独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中如果w是2，则R9可任选地是-NR17R18；并且
R17和R18独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，
其中R6和R7、R12和R13、R14和R15以及R17和R18独立地任选地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。
2、权利要求1所述的化合物，其中A1是6-元的取代的芳基或6-元的取代的杂芳基。
3、权利要求1所述的化合物，其中A1是取代的苯基、取代的吡啶基、取代的嘧啶基、取代的苯并间二氧杂环戊烯基、取代的苯并咪唑基或取代的吲哚基。
4、权利要求3所述的化合物，其中A1被卤素取代。
5、权利要求1所述的化合物，其中A1是取代的苯基。
6、权利要求1所述的化合物，其中A1具有下式：
其中
x是1-5的整数；
R19独立地是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，
其中两个R19基团任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。
7、权利要求6所述的化合物，其中位置1连接的R19与位置2连接的R19合在一起形成取代或未取代的环。
8、权利要求6所述的化合物，其中位置2连接的R19与位置3连接的R19合在一起形成取代或未取代的环。
9、权利要求6所述的化合物，其中两个R19基团任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环，其中所述的取代或未取代的环是取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂芳基。
10、权利要求6所述的化合物，其中R19独立地是卤素、-NR6R7、OR5或取代或未取代的烷基。
11、权利要求10所述的化合物，其中R5、R6和R7独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中R6和R7任选地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。
12、权利要求10所述的化合物，其中R5、R6和R7独立地是氢或取代或未取代的烷基。
13、权利要求10所述的化合物，其中R5、R6和R7独立地是氢或取代或未取代的C1-C6烷基。
14、权利要求6所述的化合物，其中x是1且R19连接在位置2上。
15、权利要求6所述的化合物，其中x是1且R19连接在位置1上。
16、权利要求6所述的化合物，其中x是2-5的整数并且至少一个R19连接在位置1上。
17、权利要求6所述的化合物，其中x是2-5的整数并且至少一个R19连接在位置2上。
18、权利要求1所述的化合物，其中A2是取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
19、权利要求1所述的化合物，其中A2是取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的三唑基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的吡嗪基或取代或未取代的咪唑基。
20、权利要求1所述的化合物，其中A2具有下式：
其中
y是0-4的整数；
R20独立地是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中两个R20基团任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环，或者其中一个R20和R1任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。
21、权利要求20所述的化合物，其中R20独立地是卤素、-NR6R7、OR5或取代或未取代的烷基。
22、权利要求21所述的化合物，其中R5、R6和R7独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中R6和R7任选地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。
23、权利要求21所述的化合物，其中R5、R6和R7独立地是氢或取代或未取代的烷基。
24、权利要求21所述的化合物，其中R5、R6和R7独立地是氢或取代或未取代的C1-C6烷基。
25、权利要求20所述的化合物，其中y是1；R20连接在位置3′上。
26、权利要求20所述的化合物，其中y是2；R20连接在位置3′和位置4′上。
27、权利要求1所述的化合物，其中A具有下式：
其中
y是0-3的整数；
R20独立地是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中一个R20和R1任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。
28、权利要求27所述的化合物，其中y是1；R20连接在位置3′上。
29、权利要求1所述的化合物，其中L1是键。
30、权利要求1所述的化合物，其中L2是键。
31、权利要求1所述的化合物，其中L1和L2是键。
32、权利要求1所述的化合物，其中R1是-C(Z)R8，Z是O，R8是-NR14R15。
33、权利要求27所述的化合物，其中R1是-C(Z)R8，Z是O，R8是-NR14R15。
34、权利要求42所述的化合物，其中R1是-C(Z)R8，Z是O，R8是-NR14R15。
35、权利要求1所述的化合物，其中
R1是-C(Z)R8，
Z是O；
R8是-NR14R15；
R14和R15独立地是取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基，或者与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的哌啶基或取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的吡咯烷基或取代或未取代的吗啉-4-基。
36、权利要求35所述的化合物，其中y是0。
37、权利要求32所述的化合物，其中R14和R15与它们所连接的氮合在一起形成哌嗪基，所述的哌嗪基被取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂烷基所取代。
38、权利要求37所述的化合物，其中所述的哌嗪基被式-(CH2)t-NR21R22的取代基所取代，其中
t是0-6的整数；
R21和R22独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
其中R21和R22任选地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂芳基。
39、权利要求38所述的化合物，其中R21和R22与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的哌啶基或取代或未取代的吗啉-4-基。
40、权利要求38所述的化合物，其中R21和R22独立地是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的氨基烷基。
41、权利要求1所述的化合物，其中A1被至少一个-OR5所取代，其中R5独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
42、权利要求6所述的化合物，其中A2具有下式：
其中
y是0-4的整数；
R20是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中两个R20基团任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环，或者其中一个R20和R1任选地与它们所连接的碳合在一起形成取代或未取代的环。
43、权利要求42所述的化合物，其中位置3′连接的R20与R1合在一起形成取代或未取代的环。
44、权利要求42所述的化合物，其中位置3′连接的R20与位置4′连接的R20合在一起形成取代或未取代的环。
45、权利要求42所述的化合物，其中R1是-C(Z)R8，Z是O，R8是-NR14R15，其中R15和R20与R20所连接的碳和R15所连接的氮合在一起形成取代或未取代的环。
46、权利要求42所述的化合物，其中L1和L2是键。
47、权利要求42所述的化合物，其中x是1且y是0。
48、权利要求47所述的化合物，其中R19连接在位置1上。
49、权利要求47所述的化合物，其中R19连接在位置2上。
50、权利要求42所述的化合物，其中
x是2；
y是0；并且
R19连接在位置1和4上。
51、权利要求42所述的化合物，其中
x是2；
y是0；并且
R19连接在位置1和5上。
52、权利要求42所述的化合物，其中
x是1；
y是1；
R20连接在位置3′上；并且
R19连接在位置1上。
53、权利要求42所述的化合物，其中
x是1；
y是2；
R20连接在位置3′和4′上；并且
R19连接在位置1上。
54、权利要求42所述的化合物，其中
x是2；
y是0；并且
一个R19连接在位置2上。
55、权利要求6所述的化合物，其中A2具有下式：
其中
y是0-3的整数；
R20是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-CF3、-NO2、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
56、权利要求55所述的化合物，其中y是1且R20连接在位置3′上。
57、调节蛋白激酶活性的方法，该方法包括将所述的蛋白激酶与权利要求1所述的化合物相接触。
58、调节选自下列的蛋白激酶活性的方法：Abelson酪氨酸激酶、Ron受体酪氨酸激酶、Met受体酪氨酸激酶、Fms样酪氨酸激酶-3、Aurora激酶、p21-活化的激酶-4和3-磷酸肌醇依赖型激酶-1，所述的方法包括将所述的激酶与下式的化合物相接触：
其中
L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、取代或未取代的C1-C5亚烷基或取代或未取代的2-5元的杂亚烷基，其中n是0-2的整数；并且
A1和A2独立地是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
59、权利要求58所述的方法，其中L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、未取代的C1-C5亚烷基或未取代的2-5元的杂亚烷基。
60、权利要求58所述的方法，其中L1和L2是键。
61、权利要求58所述的方法，其中A1和A2独立地是取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
62、权利要求58所述的方法，其中A1和A2独立地是取代或未取代的芳基或6-元的取代或未取代的杂芳基。
63、权利要求58所述的方法，其中
A2被至少一个-C(Z)R8所取代，其中
Z是N(R23)、S或O，其中R23是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂烷基；
R8是氢、-NR14R15、-OR16、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；并且
R14、R15和R16独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
64、权利要求63所述的方法，其中Z是O且R8是-NR14R15。
65、权利要求58所述的方法，其中所述的化合物是权利要求1所述的化合物。
66、权利要求58所述的方法，其中所述的蛋白激酶是具有选自下列的突变的Bcr-Abl激酶：M244V、L248V、G250E、G250A、Q252H、Q252R、Y253F、Y253H、E255K、E255V、D276G、F311L、T315I、T315N、T315A、F317V、F317L、M343T、M351T、E355G、F359A、F359V、V379I、F382L、L387M、H396P、H396R、S417Y、E459K和F486S。
67、权利要求66所述的方法，其中所述的蛋白激酶具有T3151突变。
68、在需要所述治疗的个体中治疗癌症、过敏、哮喘、炎症、阻塞性气道疾病、自身免疫疾病、代谢疾病、感染、CNS疾病、脑肿瘤、肥胖、哮喘、血液学疾病、变性性神经病、心血管疾病或与血管生成、新血管形成或血管发生有关的疾病的方法，所述的方法包括向所述个体施用治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
69、权利要求68所述的方法，其中所述的癌症是白血病或骨髓增生病。
70、在需要所述治疗的个体中治疗癌症的方法，所述的方法包括向所述个体施用治疗有效量的下式化合物：
其中
L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、取代或未取代的C1-C5亚烷基或取代或未取代的2-5元的杂亚烷基，其中n是0-2的整数；并且
A1和A2独立地是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
71、权利要求70所述的方法，其中所述的癌症是白血病或骨髓增生病。
72、包含可药用赋形剂和下式化合物的药物组合物：
其中
L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、取代或未取代的C1-C5亚烷基或取代或未取代的2-5元的杂亚烷基，其中n是0-2的整数；并且
A1和A2独立地是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。
73、包含可药用赋形剂和下式化合物的药物组合物：
其中
L1和L2独立地是键、-S(O)n-、-O-、-NH-、未取代的C1-C5亚烷基或未取代的2-5元的杂亚烷基，其中n是0-2的整数；
A1是6-元的取代或未取代的芳基或6-元的取代或未取代的杂芳基；
A2是取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R1是卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
X1是-C(R2)＝、-C(R2)(R3)-、-N＝、-N(R4)-、-S-或-O-；
R2和R3独立地是氢、卤素、-OR5、-NR6R7、-C(Z)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R4是氢、-C(O)R8、-S(O)2R11、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
Z是N(R23)、S或O，其中R23是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的杂烷基；
w是0-2的整数；
R5独立地是氢、-CF3、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R6和R7独立地是氢、-C(O)R10、-S(O)2R11、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R10和R11独立地是氢、-NR12R13、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R12和R13独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R8独立地是氢、-NR14R15、-OR16、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R14、R15和R16独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
R9独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，其中如果w是2，则R9可任选地是-NR17R18；并且
R17和R18独立地是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，
其中R6和R7、R12和R13、R14和R15以及R17和R18独立地任选地与它们所连接的氮合在一起形成取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的5-元的杂芳基。
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Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103153956A (zh) * | 2010-07-21 | 2013-06-12 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 制备丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基]-2，4-二氟-苯基}-酰胺的新方法 |
| CN102264743B (zh) * | 2008-11-25 | 2015-02-11 | 罗彻斯特大学 | Mlk抑制剂及其使用方法 |
| CN104854088A (zh) * | 2012-12-07 | 2015-08-19 | 生物控制术公司 | 用于治疗癌症、病毒感染和肺病的新型吲哚衍生物 |
| CN104910150A (zh) * | 2009-08-03 | 2015-09-16 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于制备药物活性化合物的方法 |
| WO2016026078A1 (en) * | 2014-08-19 | 2016-02-25 | Changzhou Jiekai Pharmatech Co., Ltd. | Heterocyclic compounds as erk inhibitors |
| CN105712992A (zh) * | 2012-09-29 | 2016-06-29 | 上海科州药物研发有限公司 | 作为cMet抑制剂的化合物及其制备方法和用途 |
| CN103833753B (zh) * | 2012-11-22 | 2017-02-01 | 广东东阳光药业有限公司 | 炔基化合物及其使用方法和用途 |
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| WO2020015744A1 (zh) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | 南京明德新药研发有限公司 | 氮杂吲哚衍生物及其作为FGFR和C-Met抑制剂的应用 |
| CN114685490A (zh) * | 2020-12-31 | 2022-07-01 | 江苏先声药业有限公司 | 吡咯并吡啶类化合物及其应用 |
| CN115124528A (zh) * | 2022-07-19 | 2022-09-30 | 徐州医科大学 | 一种吡咯并吡啶类化合物及其制备方法和医药应用 |
| CN115991705A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-04-21 | 安徽医科大学 | 3-(1H吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酰基衍生物及其制备与应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6335342B1 (en) * | 2000-06-19 | 2002-01-01 | Pharmacia & Upjohn S.P.A. | Azaindole derivatives, process for their preparation, and their use as antitumor agents |
| US7534800B2 (en) * | 2002-03-28 | 2009-05-19 | Eisai R & D Development Co., Ltd. | 7-azaindoles as inhibitors of c-Jun N-terminal kinases for the treatment of neurodegenerative disorders |
-
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-
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Cited By (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9814704B2 (en) | 2008-11-25 | 2017-11-14 | The University Of Rochester | Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as MLK inhibitors |
| US9181247B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-11-10 | The University Of Rochester | Substituted pyrrolo[2,3-B]pyridines as MLK inhibitors |
| CN102264743B (zh) * | 2008-11-25 | 2015-02-11 | 罗彻斯特大学 | Mlk抑制剂及其使用方法 |
| CN104910150B (zh) * | 2009-08-03 | 2017-04-12 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于制备药物活性化合物的方法 |
| CN104910150A (zh) * | 2009-08-03 | 2015-09-16 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于制备药物活性化合物的方法 |
| CN103153956A (zh) * | 2010-07-21 | 2013-06-12 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 制备丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基]-2，4-二氟-苯基}-酰胺的新方法 |
| CN103153956B (zh) * | 2010-07-21 | 2015-05-27 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 制备丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯-苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基]-2,4-二氟-苯基}-酰胺的新方法 |
| CN105712992A (zh) * | 2012-09-29 | 2016-06-29 | 上海科州药物研发有限公司 | 作为cMet抑制剂的化合物及其制备方法和用途 |
| CN103833753B (zh) * | 2012-11-22 | 2017-02-01 | 广东东阳光药业有限公司 | 炔基化合物及其使用方法和用途 |
| US10485800B2 (en) | 2012-11-30 | 2019-11-26 | The University Of Rochester | Mixed lineage kinase inhibitors for HIV/AIDS therapies |
| CN104854088A (zh) * | 2012-12-07 | 2015-08-19 | 生物控制术公司 | 用于治疗癌症、病毒感染和肺病的新型吲哚衍生物 |
| WO2016026078A1 (en) * | 2014-08-19 | 2016-02-25 | Changzhou Jiekai Pharmatech Co., Ltd. | Heterocyclic compounds as erk inhibitors |
| WO2020015744A1 (zh) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | 南京明德新药研发有限公司 | 氮杂吲哚衍生物及其作为FGFR和C-Met抑制剂的应用 |
| CN112469718A (zh) * | 2018-07-19 | 2021-03-09 | 南京明德新药研发有限公司 | 氮杂吲哚衍生物及其作为FGFR和C-Met抑制剂的应用 |
| KR20210035236A (ko) * | 2018-07-19 | 2021-03-31 | 메드샤인 디스커버리 아이엔씨. | 아자인돌 유도체 및 이의 FGFR과 C-Met 억제제로서의 용도 |
| JP2021531290A (ja) * | 2018-07-19 | 2021-11-18 | メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド | アザインドール誘導体とＦＧＦＲ及びＣ−Ｍｅｔ阻害剤としてのその使用 |
| JP7317938B2 (ja) | 2018-07-19 | 2023-07-31 | シェンチェン リンファン バイオテック カンパニー，リミティド | アザインドール誘導体とＦＧＦＲ及びＣ－Ｍｅｔ阻害剤としてのその使用 |
| CN112469718B (zh) * | 2018-07-19 | 2022-08-30 | 深圳市瓴方生物医药科技有限公司 | 氮杂吲哚衍生物及其作为FGFR和C-Met抑制剂的应用 |
| KR102592556B1 (ko) | 2018-07-19 | 2023-10-23 | 썬전 링팡 바이오테크 컴퍼니 리미티드 | 아자인돌 유도체 및 이의 FGFR과 C-Met 억제제로서의 용도 |
| CN114685490A (zh) * | 2020-12-31 | 2022-07-01 | 江苏先声药业有限公司 | 吡咯并吡啶类化合物及其应用 |
| CN115124528A (zh) * | 2022-07-19 | 2022-09-30 | 徐州医科大学 | 一种吡咯并吡啶类化合物及其制备方法和医药应用 |
| CN115124528B (zh) * | 2022-07-19 | 2023-10-27 | 徐州医科大学 | 一种吡咯并吡啶类化合物及其制备方法和医药应用 |
| CN115991705A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-04-21 | 安徽医科大学 | 3-(1H吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酰基衍生物及其制备与应用 |
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