CN114685490A - 吡咯并吡啶类化合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物及其制备方法,以及作为HPK1抑制剂的用途。
Description
本发明要求2020年12月31日向中国国家知识产权局提交的,专利申请号为202011634152.9,发明名称为“吡咯并吡啶类化合物及其应用”以及2021年3月16日向中国国家知识产权局提交的,专利申请号为202110279390.0,发明名称为“吡咯并吡啶类化合物及其应用”的在先申请的优先权。上述在先申请的全文通过引用的方式结合于本发明中。
技术领域
本发明涉及一种新型的吡咯并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐,含有它们的药物组合物以及作为HPK1抑制剂在预防或治疗相关疾病中的用途。
背景技术
癌症的一个主要特征是具有免疫逃避能力。肿瘤细胞通过多种复杂机制抑制机体免疫系统对其识别和攻击。为解除这种免疫抑制设计了多项肿瘤免疫治疗的策略,包括干扰负调控效应T细胞功能的机制,例如PD1/PDL1免疫检查点抑制剂,通过阻断PD1和PDL1相互作用,在高表达PDL1的癌症细胞中解除对T淋巴细胞的免疫抑制,针对PD1或PDL1抑制剂抗体开发,在多种癌症类型中临床获益亦已得到证实。另外,阻断CD80/CD86同T细胞共抑制受体(CTLA-4)间相互作用的治疗性抗体,能够促进各级淋巴组织内T细胞扩增。除了这些细胞表面相关蛋白,研究发现细胞内信号也参与免疫负调控,其中造血细胞内特异表达的HPK1(造血祖细胞激酶1,又称MAP4K1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,主要参与细胞内免疫负调控。
研究发现人和小鼠细胞内HPK1失活常常伴随自身免疫疾病的发生,表明HPK1调控机体免疫耐受。比如,银屑病关节炎患者的外周单个核细胞(PBMC)以及系统性红斑狼疮患者的T细胞均发现HPK1表达下调(J Autoimmun 2011,37(3),180-9);小鼠模型实验发现HPK1缺失的小鼠更易发生自体免疫性脑膜炎(Nat Immunol 2007,8(1),84-91)。体外研究证实,以抗原刺激来源于HPK1缺失的T和B淋巴细胞,有更强的激活效果(CancerImmunol.Immunother.2010,59(3),419-429),表明HPK1负调控T和B淋巴细胞功能。此外,HPK1缺失的树突状细胞(DC细胞)表现出更有效的抗原递呈和T细胞激活特性,表明HPK1同样参与DC细胞的免疫调控。
T细胞受体(TCR)和B细胞受体(BCR)活化后,胞质HPK1被募集到细胞膜附近被激活,活化的HPK1磷酸化衔接蛋白SLP76或LAT,以此激活SLP76作为负调节蛋白14-3-3π的停靠位点,介导SLP76泛素化降解,最终导致TCR信号复合物的不稳定,从而下调TCR信号(J.Cell Biol.2011,195(5),839-853)。研究还发现,HPK1可以被PGE2(前列腺素E2)以PKA依赖的方式激活,甚至也可能由肿瘤细胞表达的免疫抑制因子激活(Blood 2003,101(9),3687-3689)。
同野生型相比,HPK1-/-小鼠对接种的同基因型肺癌肿瘤生长表现出较强的抑制生长作用。通过对T细胞移植小鼠模型的抗肿瘤免疫反应研究证实HPK-/-敲除的强抗肿瘤效应至少部分是T细胞依赖性的。而树突细胞在抗肿瘤活性上的贡献也通过来源于HPK1-/-缺陷的小鼠骨髓的DC细胞移植实验得以证实(J.Immunol.2009,182(10),6187-61)。近来,研究发现同野生型HPK转基因小鼠相比,催化酶失活的HPK1转基因小鼠同样能有效抑制胶质母细胞瘤GL261生长,以及能够增强抗-PD1治疗MC38肿瘤的药效。因此,HPK1是一个潜在的抗肿瘤治疗靶点,开发针对HPK1激酶的小分子抑制剂无论作为单药还是联合其它免疫调控治疗策略在抗肿瘤治疗上的效果值得期待。
发明内容
本发明提供一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐:
其中,
环Q选自5-6元杂芳基或7-11元杂环基;
当环Q选自7-11元杂环基时,L1、R1均不存在;
R4、R5、R6、R7、R8独立地选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
R13不存在,或者R13相同或不同,每一个R13独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
R2、R3独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基,所述C1-C6烷基或C1-C6烷氧基任选被F、Cl、Br、I、CN取代;
X1、X4独立地选自CR9或N;
X2、X3独立地选自C(R10)(R11)或NR12;
R9、R10、R11独立地选自H、卤素、CN或任选被Ra取代的以下基团:OH、NH2、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
R12选自H或任选被Ra取代的以下基团:C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
m、n独立地选自0、1或2;
p选自1、2、3或4;
每一个Ra独立地选自卤素、CN、=O或任选被Rb取代的以下基团:OH、NH2、C1-C3烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
每一个Rb独立地选自卤素、CN、=O、C1-C3烷基、OH、O(C1-C3烷基)、NH2、NH(C1-C3烷基)或N(C1-C3烷基)2;
在一些实施方案中,环Q选自10-11元杂环基,L1、R1均不存在。
在一些实施方案中,R4、R7独立地选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、C1-C3烷基、C3-C6环烷基、4-5元杂环基。
在一些实施方案中,R4选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、甲基、乙基、丙基、环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁基、氮杂环丁基。
在一些实施方案中,R4选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、甲基、环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁基、氮杂环丁基。
在一些实施方案中,R7选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、氮杂环丁基。
在一些实施方案中,每一个Ra独立地选自卤素、CN、=O、OH、O(C1-C3烷基)、C1-C3烷基、NH2、NH(C1-C3烷基)或N(C1-C3烷基)2。
在一些实施方案中,每一个Ra独立地选自OH、甲基或N(CH3)2。
在一些实施方案中,每一个Ra独立地选自甲基或N(CH3)2。
在一些实施方案中,R4选自乙基或环丙基。
在一些实施方案中,R13不存在,或者R13选自H、卤素、CN、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基。
在一些实施方案中,R13不存在,或者R13相同或不同,每一个R13独立地选自H、卤素、CN、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基。
在一些实施方案中,R13不存在,或者R13选自H或甲基。
在一些实施方案中,R13不存在,或者R13选自甲基。
在一些实施方案中,R2、R3独立地选自H、卤素、CN、C1-C3烷基。
在一些实施方案中,R2、R3独立地选自H、卤素、CN、甲基。
在一些实施方案中,R2、R3独立地选自H。
在一些实施方案中,R9、R10、R11独立地选自H、卤素、CN、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基。
在一些实施方案中,R9、R10、R11独立地选自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基。
在一些实施方案中,R9选自H、甲基或甲氧基。
在一些实施方案中,X1选自CH、CCH3、C-O-CH3或N。
在一些实施方案中,X1选自CH、CCH3或C-O-CH3。
在一些实施方案中,X1选自CH。
在一些实施方案中,X4选自CH或N。
在一些实施方案中,X4选自CH。
在一些实施方案中,R10、R11独立地选自H。
在一些实施方案中,R12选自H或任选被Ra取代的以下基团:C1-C3烷基、6元杂环基、环丙基。
在一些实施方案中,R12选自H或任选被Ra取代的以下基团:C1-C3烷基、6元杂环基。
在一些实施方案中,R12选自环丙基、C1-C3烷基或C1-C3烷基取代的哌啶基。
在一些实施方案中,R12选自C1-C3烷基或C1-C3烷基取代的哌啶基。
在一些实施方案中,R12选自环丙基、甲基或甲基哌啶基。
在一些实施方案中,R12选自甲基。
在一些实施方案中,X3选自CH2或NCH3。
在一些实施方案中,m、n独立地选自1。
在一些实施方案中,X2选自CH2,X3选自NCH3。
在一些实施方案中,所述式(I)所示的化合物或其药学可接受的盐,选自以下化合物或其药学可接受的盐:
本发明还提供药物组合物,其包含式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
进一步,本发明涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐,或其药物组合物在制备预防或者治疗HPK1相关疾病的药物中的用途。
进一步,本发明涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐,或其药物组合物在制备预防或者治疗肿瘤的药物中的用途。
进一步,本发明涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐,或其药物组合物在预防或者治疗HPK1相关疾病中的用途。
进一步,本发明涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐,或其药物组合物在预防或者治疗肿瘤中的用途。
进一步,本发明涉及预防或者治疗HPK1相关疾病的式(I)化合物或其药学上可接受的盐,或其药物组合物。
进一步,本发明涉及预防或者治疗肿瘤的式(I)化合物或其药学上可接受的盐,或其药物组合物。
本发明还涉及治疗HPK1相关疾病的方法,该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。
本发明还涉及治疗肿瘤的方法,该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。
在一些实施方案中,HPK1相关疾病选自肿瘤。
术语定义和说明
除非另有说明,本发明说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义,包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等,可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构,应当属于本发明说明书记载的范围内。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体,包括顺反异构体、对映异构体和非对映异构体。
本发明的化合物可以具有不对称原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不对称双键。外消旋体、对映异构体、非对映异构体、几何异构体都包括在本发明的范围之内。
除非另有说明,用楔形键和虚楔键(和)表示一个立体中心的绝对构型,用黑实键和虚键(和)表示一个立体中心的相对构型(如脂环化合物的顺反构型)。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时,除非另有规定,它们包括E、Z几何异构体。同样地,所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物,包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体,及其外消旋混合物和其他混合物,例如对映异构体或非对映体富集的混合物,所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子、不对称硫原子、不对称氮原子或不对称磷原子,所有这些异构体以及它们的混合物,均包括在本发明的范围之内。本申请的含有不对称原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分,或通过使用手性原料或手性试剂合成。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。互变异构体一般以平衡形式存在,尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物,其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如,在很多脂族醛和酮如乙醛中,酮型占优势;而在酚中,烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物,其它组分例如生理学/药学上可接受的辅料。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代,可以包括重氢和氢的变体,只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即=O)时,意味着两个氢原子被取代,氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生,该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如,乙基“任选”被卤素取代,指乙基可以是未被取代的(CH2CH3)、单取代的(如CH2CH2F、CH2CH2Cl等)、多取代的(如CHFCH2F、CH2CHF2、CHFCH2Cl、CH2CHCl2等)或完全被取代的(CF2CF3、CF2CCl3、CCl2CCl3等)。本领域技术人员可理解,对于包含一个或多个取代基的任何基团,不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时,其在每一种情况下的定义都是独立的。
本文中涉及到的连接基团若没有指明其连接方向,则其连接方向是任意的。例如当结构单元中的L1选自“C1-C3亚烷基-O”时,此时L1既可以按照与从左到右的读取顺序相同的方向连接环Q和R1构成“环Q-C1-C3亚烷基-O-R1”,也可以按照从左到右的读取顺序相反的方向连接环Q和R1构成“环Q-O-C1-C3亚烷基-R1”。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“C1-C10烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等;“C1-C6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。“C1-C3烷基”应理解为表示具有1、2、3个碳原子的直链或支链饱和一价烃基,本文所述“C1-C10烷基”可以包含“C1-C6烷基”或“C1-C3烷基”,所述“C1-C6烷基”可以包含“C1-C3烷基”。
术语“C1-C6烷氧基”可理解为“C1-C6烷基氧基”或“C1-C6烷基-O”,优选地,“C1-C6烷氧基”可以包含“C1-C3烷氧基”。
术语“亚烷基”应理解为表示具有直链或支链饱和二价烃基。“C1-C6亚烷基”应理解为表示具有直链或支链饱和二价烃基,其具有1-6个碳原子。所述“C1-C6亚烷基”可以包含“C1-C3亚烷基”。
术语“C3-C6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环,其具有3~6个碳原子,如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
术语“C3-C6环烷基氧基”可理解为“C3-C6环烷基-O”。
术语“杂环基”是指完全饱和的或部分饱和的(整体上不是具有芳香性的杂芳族)单环、稠环、螺环或桥环基团,其环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团),所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(=O)2-、-S(=O)-、-P(=O)2-、-P(=O)-、-NH-、-S(=O)(=NH)-、-C(=O)NH-或-NHC(=O)NH-等。术语“4-7元杂环基”意指环原子数目为4、5、6或7的杂环基,且其环原子中含有1-3个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团,具体实例包括但不限于:4元环,如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基;或5元环,如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基;或6元环,如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基;或部分饱和的6元环如四氢吡啶基;或7元环,如二氮杂环庚烷基。
任选地,“4-7元杂环基”可以包含“4-7元杂环烷基”等范围,所述“4-7元杂环烷基”指环原子数目为4、5、6或7的饱和杂环基;“4-7元杂环基”还可进一步包含“4-5元杂环基”、“4元杂环基”、“3-6元杂环烷基”、“4-5元杂环烷基”、“4元杂环烷基”、“6元杂环基”等范围。
术语“7-11元杂环基”意指环原子数目为7、8、9、10或11的杂环基,且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团,具体实例包括但不限于:7元环,如二氮杂环庚烷基;或5,5元并环,如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基,或者5,6元双环,如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪基,或者6、7元并环如任选地,所述“7-11元杂环基”还可以是上文所述4元杂环基、5元杂环基或6元杂环基的苯并稠合环基。所述“7-11元杂环基”可以包含“10-11元杂环基”。
术语“5-6元杂芳基”应理解为具有5或6个环原子的一价芳香环基,且其包含1-3个独立选自N、O和S的杂原子。特别地,“5-6元杂芳基”选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等。
术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状,且包括:
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现,特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态,但尚未被诊断为已患有该疾病状态时;
(ii)抑制疾病或疾病状态,即遏制其发展;
(iii)缓解疾病或疾病状态,即使该疾病或疾病状态消退。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍,(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状,或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“治疗有效量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变,但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性,即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。适用于上述制剂的典型的“药学上可接受的载体”的实例为:糖类,淀粉类,纤维素及其衍生物等在药物制剂中常用到的辅料。
术语“药学上可接受的”是针对那些化合物,材料,组合物和/或剂型而言,它们在可靠的医学判断范围之内,适用于与人类和动物的组织接触使用,而没有过多的毒性,刺激性,过敏性反应或其它问题或并发挥职能,与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的酸或碱的盐,包括化合物与无机酸或有机酸形成的盐,以及化合物与无机碱或有机碱形成的盐。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用,而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的,例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
词语“包括(comprise)”、“含有(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义,即“包括但不限于”。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备,包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式,优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本申请还包括与本文中记载的那些相同的,但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素,诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
某些同位素标记的本申请化合物(例如用3H及14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素,诸如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序,通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本申请化合物。
本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备,例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂,如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造,如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中,药物组合物是口服形式。对于口服给药,可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合,来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等,用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如,可通过下述方法获得:将所述的活性化合物与固体辅料混合,任选地碾磨所得的混合物,如果需要则加入其它合适的辅料,然后将该混合物加工成颗粒,得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于:粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药,如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本文所述的通式Ⅰ化合物的所有施用方法中,每天给药的剂量为0.01到100mg/kg体重,优选为0.05到50mg/kg体重,更优选0.1到30mg/kg体重,以单独或分开剂量的形式。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的,所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物,有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
具体实施方式
下面通过实施例对发明进行详细描述,但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明,其中也公开了其具体实施例方式,对本领域的技术人员而言,在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种改变和改进将是显而易见的。本发明所使用的所有试剂是市售的,无需进一步纯化即可使用。
除非另作说明,混合溶剂表示的比例是体积混合比例。
除非另作说明,否则,%是指重量百分比wt%。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移的单位为10-6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等,内标为四甲基硅烷(TMS);“IC50”指半数抑制浓度,指达到最大抑制效果一半时的浓度。
实施例1:N,N-二甲基-4-[5-(2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡唑-1-甲酰胺(化合物1)的合成
化合物1-2:
将5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1-1)(5g,25.38mmol),联硼酸频哪醇酯(7.73g,30.45mmol)和乙酸钾(7.98g,50.75mmol)溶于二氧六环(100mL)中,氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(414.47mg,507.53μmol)。反应液在80℃搅拌反应16h。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(200mL),用乙酸乙酯(300mL)萃取两次,有机层用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液减压浓缩至干。经柱层析色谱纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1)得化合物5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1-2)(5.12g)。
LCMS m/z(ESI):245.2[M+H];
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(br s,1H),8.46(d,J=1.5Hz,1H),8.27-8.16(m,1H),7.51-7.43(m,1H),6.52-6.39(m,1H),1.31(s,12H)。
化合物1-3:
将化合物1-2(3.24g,13.27mmol),7-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(2-2,参见实施例2的合成)(2g,8.85mmol)和磷酸钾(3.76g,17.69mmol)溶于无水二氧六环(80mL)和水(20mL)中,氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(722.33mg,884.52μmol)。反应液在100℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(300mL),用乙酸乙酯(300mL)萃取三次。有机层用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液减压浓缩至干。经柱层析色谱纯化(石油醚:四氢呋喃=1:2)得化合物2-甲基-7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物1-3)(17g)。
LCMS m/z(ESI):264.1[M+H];
化合物1-4:
将化合物1-3(1.4g,5.32mmol)溶于乙腈(30mL)中,加N-碘代琥珀酰亚胺(1.2g,5.32mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(60mL),用乙酸乙酯(180mL)萃取三次。有机层用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液减压浓缩至干得粗品7-(3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物1-4)(1.7g)。LCMS m/z(ESI):390.1[M+H];
化合物1:
将化合物1-4(129.2mg,331.93μmol),N,N-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吡唑-1-甲酰胺(80mg,301.75μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中,氮气保护下加入磷酸钾(64.05mg,301.75μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)((A-TAphos)2PdCl2)(21.37mg,30.18μmol),反应液在60℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(3mL),用二氯甲烷(50mL)萃取三次。有机层用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液减压浓缩至干。经制备液相色谱纯化(Phenomenex Gemini C18柱,5μm二氧化硅,30mm直径,150mm长度;使用水(含有0.225%甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)得化合物N,N-二甲基-4-[5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡唑-1-甲酰胺(化合物1)(15.74mg)。
LCMS m/z(ESI):401.2[M+H];
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.44-8.41(m,2H),8.28(d,J=1.5Hz,1H),8.07(s,1H),7.70(s,1H),7.57(br d,J=7.8Hz,1H),7.46(s,1H),7.30(d,J=8.0Hz,1H),4.33(s,2H),3.44(br t,J=5.8Hz,2H),3.27-3.14(m,8H),2.95(s,3H).
实施例2:(3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)甲酮(化合物2)的合成
化合物2-2:
将化合物7-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(3.0g)和甲醛水溶液(36%水溶液,12.0mL)溶于甲酸(6mL)中。反应于90℃搅拌2h。TLC检测反应完毕。减压蒸出溶剂,加水(20mL),以碳酸氢钠饱和溶液调节pH=8~9,加入乙酸乙酯(30mL)稀释,水洗(15mL×3),有机相无水硫酸钠干燥,抽滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,得7-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物2-2,粗品)(3.20g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.24(dd,J=8.2,2.1Hz,1H),7.16(d,J=2.1Hz,1H),6.97(d,J=8.1Hz,1H),3.53(s,2H),2.85(t,J=6.0Hz,2H),2.66(t,J=6.0Hz,2H),2.44(s,3H).化合物2-3:
25℃下将化合物2-2(3.18g)溶于二氧六环(50mL)中,依次加入联硼酸频哪醇酯(7.1g)、乙酸钾(4.1g)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(1.0g)。氮气保护下,反应于90℃搅拌3h。TLC检测反应完毕。反应液冷却至25℃,加入二氯甲烷(50mL)稀释,经硅藻土抽滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=20/1),得化合物2-3(1.4g)。LCMS(ESI):m/z=274[M+H];
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(d,J=7.5Hz,1H),7.48(s,1H),7.12(d,J=7.5Hz,1H),3.62(s,2H),2.95(t,J=6.0Hz,2H),2.72(t,J=6.0Hz,2H),2.46(s,3H),1.34(s,12H).
化合物2-4:
将化合物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯(5.00g)和5-溴-3-碘-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(3.70g)溶于二氧六环(60mL),加入碳酸钾(4.34g)、水(15mL)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(0.768g),氮气保护下,100℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕,Boc保护基大部分已脱去。反应液冷却至30℃,加水(100mL),过滤,滤饼烘干后,用二氯甲烷(20mL)打浆1h,过滤,滤饼烘干得到5-溴-3-(1H-吡唑-4-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物2-4)(3.00g)。
LCMS(ESI):m/z=416,418[M+H];
化合物2-5:
将化合物2-4(1.00g)和化合物2-3(0.98g)溶于二氧六环(10.8mL),加入碳酸钾(0.99g)、水(3.6mL)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(0.35g),氮气保护下,100℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕,反应液分液,有机相干燥,减压蒸出溶剂,柱层析(二氯甲烷~二氯甲烷/甲醇=10/1)纯化,得7-(3-(1H-吡唑-4-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物2-5)(0.52g)。
LCMS(ESI):m/z=484[M+H];
化合物2-6:
将化合物2-5(100mg)和N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺盐酸盐(71.6mg)溶于二氯甲烷(5mL),加入三光气(61.4mg),0℃滴加二异丙基乙胺(401.3mg),20℃搅拌1h。LCMS显示原料反应完全,加水(10mL),二氯甲烷(10mL X 2)萃取,有机相干燥,减压蒸出溶剂,用Prep-TLC(二氯甲烷/甲醇=10/1)制备得到(3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)甲酮(化合物2-6)(80mg)。
LCMS(ESI):m/z=610[M+H];
化合物2:
将化合物2-6(50.0mg)溶于四氢呋喃(0.5mL)中,加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.3mL),25℃搅拌2h。LCMS检测原料反应完毕,加水(1mL),碳酸钠水溶液调节pH=8-9,乙酸乙酯萃取(20mL X 3),有机相减压蒸出溶剂,Prep-TLC(二氯甲烷/甲醇=10/1)制备,得(3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)甲酮(化合物2)(4.5mg)。
LCMS(ESI):m/z=456[M+H];
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.083(s,1H),8.567(s,1H),8.512(s,1H),8.125(d,J=1.68Hz,1H),7.933(s,1H),7.493(d,J=1.84Hz,1H),7.42-7.40(m,1H),7.300(s,1H),7.24-7.22(m,1H),4.74(s,1H),4.52(s,1H),4.24(s,1H),4.10(s,1H),3.704(s,2H),3.20-3.14(m,1H),3.01-2.98(t,J=6.00Hz,2H),2.77-2.74(t,J=5.88Hz,2H),2.51(s,3H),2.231(s,6H).
实施例3:N,N-二甲基-2-(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺(化合物3)的合成
化合物3-2:
将化合物2-5(150.00mg)溶于乙腈(5mL),25℃加入氯乙酰二甲胺(35.85mg)和碳酸钾(42.85mg),氮气保护,反应于80℃搅拌4h。LCMS检测反应完成。将反应液冷却至30℃,加入无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸出溶剂,柱层析(二氯甲烷/甲醇=10/1)得N,N-二甲基-2-(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺(化合物3-2)(45.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=569[M+H];
化合物3:
将化合物3-2(45.00mg)溶于甲醇(5mL),加入碳酸铯(77.22mg),反应于65℃搅拌16h,LCMS检测反应结束,反应液减压蒸出溶剂,残余物采用Prep-TLC(二氯甲烷/甲醇=10/1)纯化,得N,N-二甲基-2-(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺(化合物3)(7.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=415[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.72(s,1H),8.50(d,J=1.88Hz,1H),8.29(d,J=1.72Hz,1H),8.17(s,1H),7.90(s,1H),7.74(d,J=2.36Hz,1H),7.54(d,J=7.92Hz,1H),7.46(s,1H),7.22(d,J=7.92Hz,1H),5.13(s,2H),3.63(s,2H),3.06(s,3H),2.90-2.86(m,5H),2.68(s,2H),2.40(s,3H)。
实施例4:N,N-二甲基-1-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物4)的合成
化合物4-2:
将1H-吡唑-4-羧酸(4-1)(1g,8.92mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)和乙酸乙酯(56mL),在25℃下加入对甲苯磺酸(230.45mg,1.34mmol)和3,4-二氢吡喃(2g,23.78mmol),在25℃下搅拌反应3小时。TLC(石油醚/四氢呋喃=1/2)检测反应完全。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)并搅拌10分钟,用乙酸乙酯(60mL)萃取,水相用稀盐酸调pH值为5,然后水相用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。收集到的有机相用无水硫酸钠干燥,过滤后浓缩得到化合物1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸(化合物4-2)(1.56g)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.28(s,1H),7.90(s,1H),5.45-5.42(m,1H),4.05-4.02(m,1H),3.76-3.70(m,1H),2.07-1.99(m,2H),1.77-1.62(m,4H).
化合物4-3:
将化合物4-2(500mg,2.55mmol)和二甲胺盐酸盐(623.42mg,7.65mmol)溶于1,4-二氧六环(7mL),将三正丙基环磷酸酐50%乙酸乙酯溶液(4.87g,7.65mmol)和三乙胺(1.81g,17.84mmol,)加入到反应体系,反应液在80℃搅拌反应16个小时。LCMS监测反应完成。反应液冷却至25℃并加入水(30mL),用乙酸乙酯(50mL)萃取三次,收集到的有机相用无水硫酸钠干燥,过滤浓缩,粗品经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=8/1)得到产物N,N-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物4-3)(169mg)。
LCMS m/z(ESI):223.9[M+H];
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.17(s,1H),7.83(s,1H),5.46-5.43(m,1H),4.06-4.03(m,1H),3.76-3.70(m,1H),3.24(s,3H),3.07(s,3H),2.13-2.01(m,2H),1.74-1.59(m,4H).
化合物4-4:
将化合物4-3(168mg,752.45μmol)溶于二氯甲烷(1mL),在25℃下加入盐酸/1,4-二氧六环溶液(4M,2.90mL),反应液在25℃下搅拌反应1小时。LCMS监测反应完成。将反应液浓缩至干得化合物N,N-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物4-4)盐酸盐(90mg)。LCMS m/z(ESI):139.9[M+H];
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.13(s,2H),3.67-3.66(m,6H).
化合物4-5:
将化合物1-4(500mg,1.28mmol)溶于四氢呋喃(7mL),在0℃冰水浴中加入钠氢(102.76mg,2.57mmol,60%),在0℃下搅拌反应1小时。然后将对甲苯磺酰氯(367.35mg,1.93mmol)加入该反应液中,室温搅拌反应5小时。LCMS检测大部分原料反应完全。反应液在0℃下慢慢滴加水(7mL)淬灭,然后水相用乙酸乙酯(20mL)萃取两次,有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤三次。收集到的有机相用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。浓缩液经过柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃=100/40,0.5%氨甲醇)得到7-(3-碘-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物4-5)(270.00mg)。
LCMS m/z(ESI):543.9[M+H];
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.55(d,J=2.0Hz,1H),8.07-8.00(m,3H),7.81(d,J=2.3Hz,1H),7.43-7.31(m,4H),7.24(d,J=8.0Hz,1H),3.68(s,2H),2.98(t,J=5.9Hz,2H),2.81-2.73(m,2H),2.47(s,3H),2.36(s,3H).
化合物4:
将7-(3-碘-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(140mg,257.63μmol)和化合物4-4的盐酸盐(90.49mg,515.26μmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(1.5mL)中,在氮气氛围下,将N,N-二甲基-1,2-环己二胺(3.66mg,25.76μmol),碳酸铯(335.76mg,1.03mmol)和碘化亚铜(9.81mg,51.53μmol)加入该反应体系,用氮气置换三次。反应液在100℃下搅拌反应10小时。LCMS检测反应完成后,该反应液过滤并浓缩,残留物经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini C18柱,3μm二氧化硅,40mm直径,75mm长度);(使用水(含有0.05%氨水)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化得到N,N-二甲基-1-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物4)(2.69mg)。
LCMS m/z(ESI):401.3[M+H];
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.57(s,1H),8.51-8.48(m,2H),8.08(s,1H),7.86(s,1H),7.50(d,J=7.9Hz,1H),7.41(s,1H),7.27(d,J=8.0Hz,1H),3.73(s,2H),3.36(s,3H),3.14(s,3H),3.03-3.00(m,2H),2.83-2.80(m,2H),2.51(s,3H).
实施例5:N,N-二甲基-2-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻唑-4-甲酰胺(化合物5)的合成
化合物5-2:
将化合物2-溴噻唑-4-羧酸(1.5g)溶于N,N-二甲基乙酰胺(60mL),加入二异丙基乙胺(2.2g)和O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯(2.8g),15℃搅拌30min,加入二甲胺的四氢呋喃溶液(7.2mL,2M)。反应于25℃搅拌3h。TLC检测反应完毕(石油醚/乙酸乙酯=1/1)。反应液减压蒸出溶剂,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=10/1),得2-溴-N,N-二甲基噻唑-4-甲酰胺(化合物5-2)(1.6g),直接用于下一步。
化合物5-3:
将化合物5-2(510.0mg)溶于四氢呋喃(20mL)中,氮气保护,冷却至-70℃,缓慢滴加正丁基锂正己烷溶液(1.2mL,2.5M),于-70℃搅拌30min,缓慢滴加三丁基氯化锡(716.1mg)四氢呋喃溶液,-70℃搅拌4h。TLC检测反应完毕。加水淬灭,升温至10℃,加入乙酸乙酯(30mL)稀释,有机相用水洗(30mL),有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸出溶剂,残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5/1)纯化,得N,N-二甲基-2-(三丁基甲锡烷基)噻唑-4-甲酰胺(化合物5-3)(510.0mg)。
化合物5-4:
将化合物5-3(245.8mg)和化合物4-5(100.0mg)溶于二氧六环(5mL),加入Pd(PPh3)2Cl2(14.0mg),氮气保护,100℃搅拌12h。LCMS检测反应完毕。反应液冷至25℃,加入二氯甲烷(20mL)稀释,经硅藻土抽滤,滤液减压浓缩至干,柱层析(二氯甲烷/甲醇=20/1)纯化,得N,N-二甲基-2-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻唑-4-甲酰胺(化合物5-4)(93.3mg)。
LCMS(ESI):m/z=572[M+H];
化合物5:
将化合物5-4(121.5mg)溶于四氢呋喃(10mL)和水(6mL)中,加入氢氧化钠(25mg)。反应液于30℃搅拌12h。LCMS检测反应完毕。以1M HCl水溶液调节反应液pH=9,减压浓缩至干,用Prep-HPLC(柱子:YMC C18;流动相:0.1%NH4HCO3水溶液;B%:15%-45%,B为乙腈,40mL/min)制备,得N,N-二甲基-2-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻唑-4-甲酰胺(化合物5)(34.6mg)。
LCMS(ESI):m/z=418[M+H];
1H NMR:14699-37-20(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.25(s,1H),9.12(s,1H),8.59(d,J=2.16Hz,1H),8.14(d,J=2.1Hz,1H),7.81(s,1H),7.47(dd,J=7.9,1.92Hz,1H),7.40(d,J=1.92Hz,1H),7.23(d,J=7.92Hz,1H),3.57(s,2H),2.94(s,3H),2.86(t,J=5.9Hz,2H),2.78(s,3H),2.62(t,J=5.9Hz,2H),2.36(s,3H).
实施例6:N,N-二甲基-2-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噁唑-4-甲酰胺(化合物6)的合成
化合物6-2:
将化合物5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.00g)溶于乙酸(5mL)和水(10mL),加入乌洛托品(1.07g),120℃搅拌2h。TLC显示原料反应完全,饱和碳酸钠溶液调节pH=8,乙酸乙酯萃取(20mL X 2),有机相无水硫酸钠干燥,过滤,减压蒸出溶剂,得5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲醛(化合物6-2)(650mg)。
化合物6-3:
将化合物6-2(650mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL),0℃加入氢化钠(173mg,有效含量60%),0℃度下搅拌30min,再滴加2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(626mg),20℃搅拌3h。TLC显示原料反应完全,反应液加水(10mL)稀释,乙酸乙酯萃取(10mL X 3),有机相无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸出溶剂,柱层析(石油醚/乙酸乙酯=10/1)纯化,得5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲醛(化合物6-3)(701mg)。
化合物6-4:
将化合物6-3(700.0mg)溶于N,N-二甲基乙酰胺(5mL),加入碳酸钾(408.0mg)和L-丝氨酸甲酯盐酸盐(460.0mg),23℃搅拌16h。0℃加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(900.0mg)和三氯溴甲烷(1.17g),0℃搅拌5h。TLC检测反应完毕,反应液加水(20mL)稀释,乙酸乙酯萃取(20mL X 3),有机相无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸出溶剂,柱层析(石油醚/乙酸乙酯=10/1~5/1)纯化,得2-(5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噁唑-4-羧酸甲酯(化合物6-4)(200.0mg)。
化合物6-5:
将化合物6-4(200.0mg)溶于甲醇(5mL)和水(1mL),加入氢氧化钠(26.5mg),20℃搅拌4h。TLC检测反应完毕,减压蒸出甲醇,2M盐酸调节pH=4-5,乙酸乙酯萃取(10mL X 3),有机相无水硫酸钠干燥后过滤,滤液减压蒸出溶剂,得2-(5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噁唑-4-羧酸(化合物6-5)(150.0mg)。
化合物6-6:
将化合物6-5(150.0mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中,加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯(164.8mg)和二异丙基乙胺(190.5mg),20℃搅拌30min,加入二甲胺盐酸盐(41.8mg),20℃搅拌16h,LCMS检测反应完毕,反应液加水(20mL),二氯甲烷萃取(20mL X 3),有机相无水硫酸钠干燥,过滤,滤液加压蒸出溶剂,柱层析(石油醚/乙酸乙酯=10/1~3/1)纯化,得到2-(5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基噁唑-4-甲酰胺(化合物6-6)(90.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=465,467[M+H];
化合物6-7:
将化合物6-6(90.0mg)和化合物2-3(79.2mg)溶于二氧六环(1.0mL)和水(0.3mL),加入碳酸钾(80.2mg)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(14.2mg),氮气保护,100℃搅拌4h。TLC显示原料反应完全,反应液加水(2mL),二氯甲烷萃取(5mL X 3),有机相干燥,减压蒸出溶剂,用Prep-TLC(二氯甲烷/甲醇=10/1)制备,得到N,N-二甲基-2-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噁唑-4-甲酰胺(化合物6-7)(83.6mg)。
化合物6:
将化合物6-7(83.6mg)溶于二氯甲烷(4mL)中,加入三氟乙酸(2mL),20℃反应3h。反应液减压蒸出溶剂,用饱和碳酸钠水溶液调节pH=9-10,乙酸乙酯(10mL X 3)萃取,有机相减压蒸出溶剂,加入氨气甲醇溶液(5mL),20℃搅拌2h,TLC检测原料反应完全,反应液减压蒸出溶剂。采用Prep-HPLC(柱子:YMCC18;流动相:0.1%NH4HCO3水溶液;B%:25%-55%,B为乙腈,40mL/min)制备,得N,N-二甲基-2-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噁唑-4-甲酰胺(化合物6)(24.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=402[M+H];
1HNMR:(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.54(brs,1H),8.61(d,J=2.12Hz,1H),8.57(d,J=2.16Hz,1H),8.52(s,1H),8.29(s,1H),7.48-7.46(m,1H),7.40(s,1H),7.24(d,J=7.92Hz,1H),3.58(s,2H),3.38(s,3H),3.00(s,3H),2.88-2.85(t,2H),2.63-2.61(t,2H),2.36(s,3H).
实施例7:N,N-二甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻吩-2-甲酰胺(化合物7)的合成
化合物7-2:
将4-溴噻吩-2-羧酸(2g)溶于N,N-二甲基乙酰胺(60mL)中,依次加入二异丙基乙基胺(3g)以及O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯(3.7g),25℃下搅拌30min后,加入二甲胺四氢呋喃溶液(9.7mL,2M in THF)。于25℃搅拌反应3h。TLC检测反应完毕。将反应液用乙酸乙酯(60mL)稀释,水洗(50mL X 3),有机层无水硫酸钠干燥,抽滤,滤液减压浓缩,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=3/1),得(化合物7-2)(2.7g)。
LCMS(ESI):m/z=234,236[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.89(d,J=1.4Hz,1H),7.53(d,J=1.4Hz,1H),3.17(s,3H),3.02(s,3H).
化合物7-3:
将化合物7-2(100.0mg)溶于二氧六环(4mL)中,依次加入联硼酸频哪醇酯(327.6mg),乙酸钾(126.6mg)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(29.3mg)。氮气保护下,85℃搅拌反应3h。TLC检测反应完毕。反应液降温至25℃,加入乙酸乙酯(20mL)稀释,经硅藻土抽滤,滤液减压浓缩,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=5/1),得N,N-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)噻吩-2-甲酰胺(化合物7-3)(76.1mg)。
LCMS(ESI):m/z=282[M+H];
化合物7-4:
将化合物7-3(84.2mg)溶于1,4-二氧六环(4.5mL)中,依次加入5-溴-3-碘-1-对甲苯磺酰基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶(142.6mg),Pd(dppf)Cl2(22.0mg)和碳酸钾(124.4mg),加入去离子水(1.5mL)。氮气保护下,90℃搅拌反应12h。LCMS检测反应完毕。反应液冷至25℃,加入乙酸乙酯(20mL)稀释,经硅藻土抽滤,滤液减压浓缩,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=1/1),得(化合物7-4)(81.3mg,0.16mmol)。
化合物7-5:
将化合物7-4(81.3mg)和化合物2-3(43.7mg,0.16mmol,1.00eq)溶于1,4-二氧六环(3mL)中,依次加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(14.6mg)和碳酸钾(66.3mg),加入去离子水(1mL)。氮气保护下,90℃搅拌反应12h。LCMS检测反应完毕。反应液冷至25℃,加入乙酸乙酯(20mL)稀释,加入无水硫酸钠干燥,反应液经硅藻土抽滤,滤液减压浓缩,柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10/1),得N,N-二甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻吩-2-甲酰胺(化合物7-5)(53.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=571[M+H];
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 8.66(d,J=2.1Hz,1H),8.16–8.10(m,3H),7.90(s,1H),7.60(s,2H),7.32(m,3H),7.22(m,2H),3.72(s,2H),3.23(m,6H),3.00(t,J=5.9Hz,2H),2.80(t,J=5.9Hz,2H),2.52(s,3H),2.38(s,3H).
化合物7:
将化合物7-5(33.8mg)溶于甲醇(4mL)中,加入碳酸铯(29.3mg),于40℃搅拌反应10h。TLC检测反应完毕。待反应液冷至室温,减压浓缩至干,经制备板纯化(二氯甲烷/甲醇=10/1),得N,N-二甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻吩-2-甲酰胺(化合物7)(4.5mg)。
LCMS(ESI):m/z=417[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.94(d,J=2.7Hz,1H),8.54(d,J=2.1Hz,1H),8.47(d,J=2.1Hz,1H),8.09(d,J=1.4Hz,1H),8.02(d,J=2.6Hz,1H),7.92(d,J=1.4Hz,1H),7.57(dd,J=7.8,2.0Hz,1H),7.50(d,J=2.0Hz,1H),7.23(d,J=7.9Hz,1H),3.64(s,2H),3.17(m,6H),2.89(t,J=5.9Hz,2H),2.75–2.65(m,2H),2.41(s,3H).
实施例8:(3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻吩-2-基)甲酮(化合物8)的合成
参考实施例7的合成方法,将第一步中二甲胺替换为N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺盐酸盐,其余步骤同实施例7,得到(3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)噻吩-2-基)甲酮(化合物8)。
LCMS(ESI):m/z=472[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.97(brs,1H),8.54(s,1H),8.47(s,1H),8.15(s,1H),8.07(s,1H),7.91(s,1H),7.56(d,J=7.72Hz,1H),7.50(s,1H),7.20(d,J=7.88Hz,1H),4.58(s,1H),4.39(s,1H),4.08(s,1H),3.85(s,1H),3.59(s,2H),3.16-3.12(m,1H),2.85(t,2H),2.64(t,2H),2.37(s,3H),2.14(s,6H)。
实施例10:8-甲基-7-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(化合物10)的合成
化合物10-2:
将7-溴-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(合成方法参见专利WO2018183964)(80mg,243.02μmol)和联硼酸频哪醇酯(308.56mg,1.22mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)中,加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(39.69mg,48.60μmol)和乙酸钾(71.55mg,729.06μmol)。反应液于90℃搅拌反应13小时。LCMS检测反应完毕。该反应液冷却减压浓缩至干,然后经薄层色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯=1/1)得到产物8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物10-2)(128mg)。
MS m/z(ESI):377.3[M+H];
化合物10-3:
将化合物10-2(90.01mg,239.23μmol)和7-(3-碘-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(4-5)(65mg,119.61μmol)溶于水(0.4mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1.6mL)中,加入碳酸铯(116.92mg,358.84μmol)和[1,1-双(二叔丁基膦)二茂铁]二氯化钯(7.80mg,11.96μmol),反应液于100℃搅拌反应10小时。LCMS检测反应完毕。向该反应液中加入氢氧化钠水溶液(4M,598.07μL),反应液于80℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(5mL)并搅拌10分钟,该混合物用乙酸乙酯(15mL)萃取三次,饱和食盐水(10mL)洗涤两次,合并有机相用无水硫酸钠进行干燥,过滤,滤液减压浓缩至干,得到产物8-甲基-7-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物10-3)(200mg)。
MS m/z(ESI):512.4[M+H]+;
化合物10:
将化合物10-3(200mg,390.92μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中,在0℃下加入三氟乙酸(770.00mg,6.75mmol)。反应液25℃搅拌反应1小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水并用饱和碳酸氢钠水溶液调pH值为8。该混合物用二氯甲烷(10mL)萃取两次,有机相用无水硫酸钠进行干燥,过滤,滤液减压浓缩至干,经制备液相色谱纯化(Phenomenex Gemini-NX柱:3μm二氧化硅,40mm直径,80mm长度;使用水(含有0.05%氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例:25%-65%)的混合物作为洗脱液)纯化,得到化合物8-甲基-7-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(化合物10)(13.55mg)。
LCMS m/z(ESI):412.2[M+H];
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.92(s,1H),8.53(d,J=1.8Hz,1H),7.87(d,J=2.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.48-7.42(m,2H),7.38(s,1H),7.18(d,J=8.0Hz,1H),5.60(s,1H),4.28(t,J=4.1Hz,2H),3.54(s,2H),3.40-3.37(m,2H),2.90-2.81(t,J=5.6Hz,2H),2.61(t,J=5.8Hz,2H),2.35(s,3H),2.04(s,3H).
实施例11:9-甲基-8-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂(化合物11)的合成
化合物11-2:
将化合物5-溴-4-甲基-3-硝基吡啶-2-酚(9.08g)和3-羟基丙酸乙酯(4.93g)溶于二氧六环(100mL),0℃加入三苯基膦(11.96g),滴加偶氮二甲酸二乙酯(8.01g),反应液于25℃搅拌16h。TLC检测反应完。反应液减压蒸出溶剂,柱层析(石油醚/乙酸乙酯=10/1)得3-((5-溴-4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)氧基)丙酸乙酯(化合物11-2)(6.00g)。
化合物11-3:
将化合物11-2(6.00g)溶于乙酸(60mL),分批加入铁粉(5.05g),反应在60℃搅拌反应4h。TLC检测反应完毕,反应液冷却至30℃,过滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,残留物用饱和碳酸钠溶液调pH至8-9,乙酸乙酯(100mL X 3)萃取,有机相无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸出溶剂,得粗品3-((3-氨基-5-溴-4-甲基吡啶-2-基)氧基)丙酸乙酯(化合物11-3)(6.00g),直接用于下一步。
化合物11-4:
将化合物11-3(4.10g)溶于甲苯(50mL),氮气保护下,0~5℃,滴加三甲基铝甲苯溶液(10.18mL),反应于25℃搅拌2h。TLC检测反应完毕,反应液降温至0~5℃,滴加50mL甲醇淬灭,过滤,滤液减压蒸出溶剂,得8-溴-9-甲基-3,4-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂-2(1H)-酮(化合物11-4)(3.20g)。
化合物11-5:
将化合物11-4(3.20g)溶于四氢呋喃(60mL),0℃滴加硼烷-四氢呋喃溶液(37.50mL),反应于65℃搅拌3h,TLC检测反应完毕,反应液冷却至25℃,缓慢滴加甲醇(100ml)淬灭反应,减压蒸出溶剂,残留物加入6M HCl(100mL),25℃搅拌16h,反应液用饱和碳酸钠调pH至9-10,乙酸乙酯(100mL X 3)萃取,有机相无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸出溶剂,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=2/1),得8-溴-9-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂(化合物11-5)(2.20g)。
化合物11-6:
将化合物11-5(500.00mg)和三乙胺(459.94mg)溶于二氯甲烷(10mL),0-5℃滴加三氟乙酸酐(520.74mg),反应于25℃搅拌3h,TLC检测反应完毕,反应液直接柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=5/1),得1-(8-溴-9-甲基-3,4-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂-1(2H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(化合物11-6)(650.00mg)。
化合物11-7:
将化合物11-6(650.00mg)和联硼酸频那醇酯(1.49g)溶于二氧六环(10mL),加入乙酸钾(574.92mg)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(71.39mg),氮气保护下,反应于90℃搅拌16h,LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至30℃,过滤,滤液直接柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5/1),得2,2,2-三氟-1-(9-甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-3,4-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂-1(2H)-基)乙烷-1-酮(化合物11-7)(750.00mg)。
LCMS(ESI):m/z=387[M+H]。
化合物11-8:
将化合物12-3(参见实施例12)(345.00mg)和化合物化合物11-7(325.64mg)溶于二氧六环(5mL)和水(1mL),加入碳酸钾(293.07mg)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(51.68mg),反应于100℃搅拌16h。TLC检测反应完,将反应液冷却至30℃,过滤,滤液减压蒸出溶剂,柱层析(乙酸乙酯~二氯甲烷/甲醇(10/1))纯化,得2,2,2-三氟-1-(9-甲基-8-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,4-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂-1(2H)-基)乙烷-1-酮(化合物11-8)(290.0mg)。
化合物11:
将化合物11-8(290.00mg)分散在甲醇(10mL)中,加入氢氧化钠(222.6mg),反应于65℃搅拌4h。LCMS检测反应完毕,采用Prep-HPLC(色谱柱:Gemini NX-C18;流动相:0.1%HCOOH水溶液;B%:5%-35%,B为乙腈,18mL/min)制备,得9-甲基-8-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂(化合物11)(50.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=426[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.96(s,1H),8.53(d,J=1.56Hz,1H),8.30(s,3H),7.88(d,J=1.56Hz,1H),7.55(s 1H),7.52(s 1H),7.45(d,J=7.92Hz,1H),7.38(s,1H),7.17(d,J=7.96Hz,1H),5.06(s,1H),4.26(t,2H),3.55(s,1H),3.37(s,2H),2.84(t,2H),2.60-2.67(m,2H),2.35(s,3H),2.09(s,3H),1.97(t,2H);
实施例12:7-(3-(1-(环丙基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物12)的制备
化合物12-2:
将4-吡唑硼酸频哪醇酯(500.0mg)和三乙胺(13.05g)溶于二氯甲烷(20mL)中。氮气保护,0℃滴加环丙基磺酰氯(4.38g)。反应于20℃搅拌24h。LCMS检测反应完全。减压蒸出溶剂,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=10/1),得化合物12-2(420.0mg)。
LCMS(ESI):m/z=299[M+H];
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.29(s,1H),8.02(s,1H),2.77(m,1H),1.51–1.45(m,2H),1.33(s,12H),1.17(m,2H).
化合物12-3:
将化合物1-4(350.0mg)和三乙胺(273.0mg)溶于四氢呋喃(5mL)中,20℃加入二碳酸二叔丁酯(294.5mg)。反应于20℃搅拌7.5h。TLC检测反应完毕。加入二氯甲烷(20mL)稀释,水洗(20mL×3),有机层无水硫酸钠干燥,抽滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=100/1),得3-碘-5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-羧酸叔丁酯(化合物12-3)(348.1mg)。
LCMS(ESI):m/z=490[M+H];
化合物12:
20℃下将化合物12-2(61.0mg)溶于二氧六环(3mL)中,依次加入化合物12-3(100.0mg)、[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(14.6mg)和碳酸钾(82.9mg),加入去离子水(1mL)。氮气保护下,反应70℃搅拌12h。LCMS检测反应完毕,Boc保护基大部分已脱去。反应液冷却至25℃,加入乙酸乙酯(20mL)稀释,无水硫酸钠干燥,抽滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,制备TLC纯化两次(二氯甲烷/甲醇=10/1),得目标产物7-(3-(1-(环丙基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物12)(4.0mg)。LCMS(ESI):m/z=434[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.97(s,1H),8.78(s,1H),8.60–8.50(m,2H),8.46(d,J=2.1Hz,1H),8.01(d,J=2.6Hz,1H),7.58(dd,J=7.9,2.0Hz,1H),7.49(s,1H),7.23(d,J=7.9Hz,1H),3.61(s,2H),3.15(m,1H),2.87(d,J=5.9Hz,2H),2.66(t,J=6.1Hz,2H),2.39(s,3H),1.32(m,2H),1.22–1.16(m,2H).
实施例13:7-(3-(1-(乙基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物13)的制备
化合物13-2:
将4-吡唑硼酸频哪醇酯(1.00g)和三乙胺(1.56g)溶于二氯甲烷(15mL)中,0℃滴加乙基磺酰氯(663mg)。于20℃搅拌3h。TLC检测反应完毕。将反应液用二氯甲烷(30mL)稀释,水洗(50mL X 3),有机层无水硫酸钠干燥,抽滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯=5/1)得化合物13-2(1.21g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.33(d,J=0.6Hz,1H),8.02(s,1H),3.50(q,J=7.4Hz,2H),1.33(s,12H),1.25-1.23(m,3H).
化合物13-3:
20℃下将化合物13-2(58.5mg)溶于1,4-二氧六环(10mL)中,依次加入化合物12-3(100mg),[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(14.6mg)和碳酸钾(82.9mg)。加入去离子水(2mL),反应于70℃搅拌15h。LCMS检测反应完毕。过滤,减压蒸出溶剂,加入乙酸乙酯(20mL)稀释,水洗(20mL X 3),有机层无水硫酸钠干燥,抽滤,收集滤液,减压蒸出溶剂,柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10/1),得到化合物13-3(20mg)。
LCMS(ESI):m/z=522[M+H];
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.78(d,J=2.1Hz,1H),8.38(s,1H),8.18(s,1H),8.12(t,J=2.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.52–7.42(m,2H),7.25(d,J=8.2Hz,1H),4.07(s,2H),3.63(q,J=7.4Hz,2H),3.24(d,J=37.5Hz,4H),2.79(d,J=9.7Hz,3H),1.75(s,9H),1.39(t,J=7.4Hz,3H).
化合物13:
将化合物13-3(20mg)溶于二氯甲烷(0.5mL)中,0℃加入三氟乙酸(0.1mL)。于20℃搅拌反应2h。LCMS检测反应完毕。减压蒸出溶剂,采用Prep-HPLC(色谱柱:YMC-ActusTriart C18 150*30mm*5μm;流动相:[A:(0.05%HCOOH v/v水溶液);B:ACN];B%:0%-65%,B为乙腈,15min)制备,得化合物7-(3-(1-(乙基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物13)(3.8mg)。
LCMS(ESI):m/z=422[M+H];
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.98(d,J=2.6Hz,1H),8.80(s,1H),8.56(s,1H),8.53(d,J=2.1Hz,1H),8.46(d,J=2.1Hz,1H),8.29(s,1H),8.02(d,J=2.5Hz,1H),7.55(d,J=8.7Hz,2H),7.17(d,J=7.8Hz,1H),3.73(q,J=16.0,8.0Hz,2H),3.54(s,2H),2.93(t,J=5.9Hz,2H),2.64(t,J=5.9Hz,2H),2.37(s,3H),1.14(t,J=8.0Hz,3H).
实施例14:N,N-二甲基-6-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)烟酰胺(化合物14)的合成
化合物14-2:
将化合物4-5(120mg,220.82μmol)和6-溴-N,N-二甲基烟酰胺(65.76mg,287.07μmol)溶于二甲苯(3mL)中,加入六甲基二锡烷(120mg,366.27μmol)和四(三苯基膦)钯(25.52mg,22.08μmol)。反应液在100℃搅拌反应2小时,在140℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。该反应液冷却至25℃并减压浓缩,往浓缩液中加入水并搅拌20分钟,乙酸乙酯(10mL)萃取两次,饱和食盐水(10mL)洗涤两次,有机相用无水硫酸钠进行干燥,过滤,滤液减压浓缩至干,然后经薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇=20/1)得到产物N,N-二甲基-6-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)烟酰胺(化合物14-2)(60mg)。
LCMS m/z(ESI):566.1[M+H];
化合物14:
将化合物14-2(60mg,106.07μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中,加入氢氧化钠水溶液(4M,265.17μL),反应液于80℃搅拌反应10小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(5mL)并搅拌20分钟,乙酸乙酯(10mL)萃取两次,饱和食盐水(10mL)洗涤两次,有机相用无水硫酸钠进行干燥,过滤,滤液减压浓缩至干,经制备液相色谱纯化(色谱柱:Phenomenex Gemini-NX:3μm二氧化硅,40mm直径,80mm长度;使用流动相A:水(含有0.05%氨水)和B:乙腈的极性递减(B%:18%-58%)的混合物作为洗脱液)纯化得到N,N-二甲基-6-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)烟酰胺(化合物14)(4.79mg)。
LCMS m/z(ESI):206.5[M/2+H];
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.99(d,J=2.1Hz,1H),8.76(s,1H),8.52(d,J=2.1Hz,1H),8.18(s,1H),7.99-7.87(m,2H),7.53-7.51(m,1H),7.44(s,1H),7.29(d,J=8.1Hz,1H),3.75(s,2H),3.16(s,6H),3.07-2.99(m,2H),2.87-2.78(m,2H),2.52(s,3H).
实施例15:7-(7-(1-(环丙基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物33)的合成
化合物33-2:
将化合物2-3(1.2g)及2-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪(720.0mg)溶于二氧六环(12mL)中,加入碳酸钾(1.5g),[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(266.1mg)和水(4mL)。反应液于氮气保护下90℃,搅拌反应3h。TLC检测反应完毕。反应液冷却至室温,加入二氯甲烷(40mL)稀释,用水洗涤(20mL×3),收集有机相,经无水硫酸钠干燥,抽滤,滤液减压浓缩至干,柱层析纯化(SiO2,二氯甲烷/甲醇=15/1),得产物2-甲基-7-(5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(33-2)(925.0mg)。
LCMS:m/z=265.1[M+H];
化合物33-3:
将氢氧化钾(746.2mg)置于DMF(15mL)中,冰浴下加入化合物33-2(925.0mg),15℃下搅拌30min,再于冰浴下分三批加入碘(1.1g),自然升温至15℃后搅拌7h。TLC检测反应完毕。于冰浴下加入30mL饱和亚硫酸钠水溶液,以1M HCl水溶液调pH=7,抽滤,滤饼水洗两次,得产物7-(7-碘-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(33-3)(1.4g),粗品直接用于下一步反应。
LCMS:m/z=391.0[M+H];
化合物33:
将化合物12-2(114.6mg)溶于1,4-二氧六环(3mL)中,依次加入化合物33-3(100.0mg),[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(18.8mg)和碳酸钾(106.3mg),加入去离子水(1mL)。反应液于氮气保护下,70℃搅拌反应12h。LCMS检测反应完毕。待反应液冷却至室温,加入二氯甲烷(20mL)稀释,用无水硫酸钠干燥,抽滤,滤液减压浓缩至干,柱层析纯化(SiO2,二氯甲烷/甲醇=10/1),所得粗产物再经pre-HPLC纯化(色谱柱:YMC C18;流动相:0.1%NH4HCO3水溶液;B%:45%-75%,B为乙腈,40mL/min),得化合物7-(7-(1-(环丙基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物33)(33.7mg)。LCMS:m/z=435.0[M+H];
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.30(s,1H),8.89(s,1H),8.83(s,1H),8.70(s,1H),8.39(s,1H),7.97(dd,J=7.8,1.7Hz,1H),7.89(s,1H),7.29(d,J=8.1Hz,1H),3.61(s,2H),3.24–3.17(m,1H),2.89(t,J=6.0Hz,2H),2.64(t,J=6.0Hz,2H),2.39(s,3H),1.35–1.20(m,4H).
参考上述实施例的合成方法,还合成了如下化合物,其结构和表征数据为:
生物学活性及相关性质测试例
以下测试例中的化合物均根据本发明上述实施例的方法制备获得。
测试例1:HPK1激酶活性测定
实验材料:
HPK1(MAP4K1)35948购于Signalchem,#M23-11G
MBP35951购于Signalchem,#M42-51N
ADP-GLO购于Promega,#V9102
DMSO购于Sigma
384-well assay plate购于Perkin Elmer#6007290
384-well assay plate购于LABCYTE
MgCl2、MnCl2、DTT、Tween-20、HEPES、BSA购于Sigma
实验仪器:
多标记检测分析仪:Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
实验方法:
本实验采用Promega公司开发的一种发光法激酶检测方式(ADP-GloTM)检测所合成的化合物对HPK1激酶的抑制活性。具体方法:化合物用ECHO650进行梯度稀释,并以50nL/孔转移至反应板内(384孔白板,Perkin Elmer#6007290),最终化合物起始浓度为100nM,3倍梯度稀释,10个浓度点;HPK1用激酶反应缓冲液(50mM HEPES(pH 7.5),0.01%Tween-20,5mM MgCl2,0.01%BSA和0.05mM DTT)稀释至合适浓度,各反应孔加入3μl酶(终浓度50nM)或酶反应缓冲液,将反应板置于离心机内,1000转/分钟离心30秒,冰上孵育30分钟。加入2μl/孔2.5 X ATP(62.5μM)/底物混合物(250μg/mL),1000转/分钟离心30秒,室温孵育60分钟。加入5μL/孔ADP-Glo混合均匀,室温反应40分钟。加入检测底物,10μL/孔,再室温孵育30分钟。置于酶标仪内(Envision,Perkin Elmer)读取化学发光信号。按公式计算受试化合物抑制率(n=2):抑制率%=(最大信号值-各孔信号值)/(最大信号值-最小信号值)*100%。最大信号值为只含DMSO的酶反应活性最强孔读值;最小信号值为不含酶的反应孔读值。将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合:Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)^HillSlope),根据拟合曲线计算IC50。
测试结果见表1。
表1、HPK1酶学抑制活性
测试例2:T细胞激活实验
实验材料:
Jurkat T细胞购于ATCC
RPMI1640购于Gibco(ThermoFisher,USA)
FBS购于Gibco(ThermoFisher,USA)
DMSO购于Sigma
抗CD3单克隆抗体(OKT3)购于BD Biosciences#566685
抗CD28单克隆抗体(CD28.2)购于BD Biosciences#555725
人IL-2 ELISA检测试剂盒购于BD Biosciences#555190
96-well culture plate购于Corning
实验仪器:
CO2细胞培养箱:ThermoFisher(USA)
多标记检测分析仪:Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
细胞计数仪:Vi-CELL(Beckman,USA)
实验方法:
96孔细胞培养板以抗CD3抗体包被预处理,抗CD3抗体用PBS稀释至2μg/mL,每孔加入100μL,37℃孵育4小时,然后用PBS洗涤1~2次,甩干待用;收集Jurkat T细胞,采用细胞计数仪计数,调整细胞密度,以每孔1x105细胞数接种于一新细胞培养板内。化合物用DMSO溶解并做梯度稀释,加入已接种细胞的培养板各对应孔,使DMSO终浓度控制在0.1%以下,化合物起始浓度为10μM,3倍梯度稀释,8个浓度点;将该细胞培养板置于37℃培养箱内,预孵育1小时。转移预孵育后的T细胞至CD3抗体包被的细胞培养板,100μL/孔,细胞数1x105;加入抗CD28抗体,终浓度1μg/mL;细胞培养板置于二氧化碳细胞培养箱培养48小时。取细胞培养上清,进行适量稀释,采用ELISA的方法检测其中人IL-2的含量。根据标准品的量进行定量换算。IL-2产生的倍数计数:倍数=IL-2产生量/最小IL-2产生量,最小IL-2产生量即DMSO空白处理孔的IL-2产生量。最大效应指在药物处理下IL-2产生倍数最高值。
测试结果见表2。
表2、T细胞激活实验
Claims (16)
1.一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐:
其中,
环Q选自5-6元杂芳基或7-11元杂环基;
当环Q选自7-11元杂环基时,L1、R1均不存在;
R4、R5、R6、R7、R8独立地选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
R13不存在,或者R13相同或不同,每一个R13独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
R2、R3独立地选自H、卤素、CN、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基,所述C1-C6烷基或C1-C6烷氧基任选被F、Cl、Br、I、CN取代;
X1、X4独立地选自CR9或N;
X2、X3独立地选自C(R10)(R11)或NR12;
R9、R10、R11独立地选自H、卤素、CN或任选被Ra取代的以下基团:OH、NH2、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
R12选自H或任选被Ra取代的以下基团:C1-C6烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
m、n独立地选自0、1或2;
p选自1、2、3或4;
每一个Ra独立地选自卤素、CN、=O或任选被Rb取代的以下基团:OH、NH2、C1-C3烷基、C3-C6环烷基、4-7元杂环基;
每一个Rb独立地选自卤素、CN、=O、C1-C3烷基、OH、O(C1-C3烷基)、NH2、NH(C1-C3烷基)或N(C1-C3烷基)2;
3.根据权利要求1-2任一项所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,R4、R7独立地选自任选被Ra取代的以下基团:NH2、C1-C3烷基、C3-C6环烷基、4-5元杂环基。
5.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,R13不存在,或者R13相同或不同,每一个R13独立地选自H、卤素、CN、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基。
7.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,R2、R3独立地选自H。
8.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,R9、R10、R11独立地选自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基。
9.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,R12选自环丙基、C1-C3烷基或C1-C3烷基取代的哌啶基。
10.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,X1选自CH、CCH3、C-O-CH3或N。
11.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,X4选自CH或N。
13.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐,其特征在于,m、n独立地选自1。
15.一种药物组合物,所述组合物包含权利要求1至14任一项的化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的辅料。
16.权利要求1至14任一项的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求15所述的药物组合物在制备预防或者治疗HPK1相关疾病的药物中的用途。
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