CN101020626A

CN101020626A - 高纯度光学活性(－)或(+)－棉酚的制备方法

Info

Publication number: CN101020626A
Application number: CN 200710037785
Authority: CN
Inventors: 黄浩; 姜海霞; 曹欣星; 姜标
Original assignee: Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
Priority date: 2007-03-02
Filing date: 2007-03-02
Publication date: 2007-08-22

Abstract

本发明提供了一种制备高纯度光学活性棉酚的简便方法。该方法包括：将消旋棉酚与旋光性氨基酸酯反应，所得(+)或(－)棉酚与旋光性氨基酸酯的缩合物在上述反应体系析出，再运用溶剂法和重结晶可以得到上述(+)或(－)棉酚与旋光性氨基酸酯的缩合物的对映体；或者将所得(+)或(－)棉酚与旋光性氨基酸酯的缩合物水解，在溶剂中使得生成的(+)或(－)棉酚沉淀，得到高纯度的光学活性棉酚。本发明提供了一种操作简便、不需要柱层析的分离过程、适用于工业化生产，具有经济价值的工艺路线。尤其值得一提的是不需要柱层析即可得到生理活性更强高纯度光学活性(－)－棉酚。

Description

高纯度光学活性(-)或(+)-棉酚的制备方法

技术领域

本发明涉及高纯度光学活性(+)或(-)-棉酚的简便制备方法，尤其适用于高纯度光学活性(-)-棉酚的制备。

背景技术

棉酚是锦葵科植物草棉、树棉或陆地棉及海岛棉(Gossypium)种籽、根皮所含的一种多酚羟基双萘醛类化合物，主要存在于棉籽中，约含0.5％。其虽不含手性碳原子，但其具有轴手性，在棉籽中为消旋体。消旋棉酚经8,800余例临床试用，证实有男性抗生育作用[男性节育药全国协作组，中华医学杂志，58，1978，455]，引起国内外广泛兴趣。此后的研究揭示出在几乎所有的哺乳类动物中，棉酚都显示抗生育作用。1979年，中国科学院上海药物所从天然植物杨叶肖槿中提取到(+)-棉酚并用于动物实验，表明与消旋棉酚不同，没有抗生育作用[王月娥等，药学学报14，1979，662]，由此推断(-)-棉酚应是抗生育光学活性异构体。这些发现引起了科研工作者对光学活性棉酚，以及其衍生物的兴趣，更多的科研小组运用各种方法拆分消旋棉酚，目的得到光学活性棉酚。

近几十年来，世界各国对棉酚及其衍生物的应用展开了广泛的研究，逐渐发现除了抗生育作用外，棉酚及其衍生物还具有更为广泛的药理作用，如抗炎症、抗病毒、抗寄生虫等作用。另外，棉酚及其衍生物还具有杀伤某些肿瘤细胞的作用，如对宫颈癌、子宫肌瘤、卵巢癌、肾上腺皮质癌、前列腺癌、睾丸癌、消化道癌症尤其是胃癌等。最近我国学者还发现棉酚能有效杀伤具有抗药性的白血病/骨髓瘤癌症细胞，而对正常细胞没有杀伤作用，特别适用于耐常规化疗的癌症病人和癌症复发病例。不仅如此，棉酚及其衍生物在化工、遗传工程、火箭燃料、石油钻探、橡胶塑料工业等领域也显示良好的应用前景，其良好的抗氧化性能和稳定剂作用预示着棉酚及其衍生物蕴藏着巨大的商业开发价值。在医药、农药、化工、遗传工程等领域均有着广阔的应用前景。但是光活棉酚及其衍生物的药理活性研究并不广泛，其中最主要的原因还是至今没有特别突出有效，能适用于工业化生产光学活性棉酚的制备方法。

自二十世纪八十年代各国科研工作者陆续报道用HPLC方法拆分消旋棉酚，他们首先将消旋棉酚与光学活性的伯胺类化合物缩合形成席夫碱的衍生物，再运用非手性C18反相柱，以合适的流动相条件进行分离，酸水解后，得到纯的光学异构体。其中光学胺类化合物包括氨基醇类(L-phenylalaninol[J.High Res.Chrom.Chrom.Commum.，7，1984，629；J.Chem.Soc.Chem.Commun.9，1986，649-650；Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP01132542A2 25May 1989 Heisei，3pp；药物分析杂志，11，1991，1-3；色谱，13，1995，264-266]和R-(-)-2-氨基-1-丙醇[J.Chromatogr.433，1988，141-148])和氨基酸酯类[J.High Res.Chrom.Chrom.Commum.10，1987，86-91；Contraception.37，1988，229-237]，该方法用材昂贵，条件不易掌握，在工业实践中一般不宜采用。北京药物所的黄量小组，花费近10年时间，将拆分消旋棉酚进行了较系统的研究，他主要利用棉酚分子中的醛基与光学活性的伯胺进行缩合反应，筛选15种光学活性胺，分析缩合物的两个非对映异构体在薄层色谱(石油醚/乙醚)上Rf值的差异和光学稳定性以及核磁共振谱进行考察。并得到规律性结论：以色谱法分离棉酚缩胺类非对映异构体时，与氨基相连的手性碳上连有-CH2OH的胺最有利光活。胺缩棉酚光学稳定性方面也得到初步结论，氨基β位的苯基取代使异构体易于互变，但若此苯基对位有硝基会有稳定作用，将不易于互变。随后他们依据自己的实验结论，摸索了一套操作简便，用材简单，有一定实用价值的制备光活棉酚方法[CN1033795A12 Jul1989]，为棉酚拆分研究迈出一大步。其特点是将消旋棉酚与其筛选的光学活性伯胺类化合物反应，依据石油醚(30-60℃)/乙醚＝1/1体系TLC分析，并通过柱层析分离缩合物的两个非对映异构体，再分别通过水解得到光活棉酚。其缺点是：1、只适用于石油醚(30-60℃)/乙醚＝1/1体系TLCΔRf≠0，且ΔRf值较大者，因此在筛选中他们也放弃了氨基酸酯类的研究；2、其制备条件仍需要通过柱层析或用晶种析晶法将胺缩棉酚化合物分离，这并不利于应用在工业化生产；3、水解得到光活棉酚时，产率不高，加入酸的量不固定，酸的种类也不固定，有时加冰醋酸和浓盐酸，有时只加浓盐酸等，反应时间，温度等条件上都不统一。所以，人们仍然期望一种简便易行，适用于工业化生产的拆分消旋棉酚以得到高纯度光学活性(+)或(-)-棉酚的方法，尤其是高纯度光学活性(-)-棉酚的工业化生产方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯度光学活性(+)或(-)-棉酚的简便制备方法，尤其是适用于工业化生产的拆分消旋棉酚以得到高纯度光学活性(-)-棉酚的方法，该方法具有原料价廉，反简便易行，得率高、操作简便、产品质量好的优点。

所述的(+)或(-)棉酚的结构式如下：

S-(+)-gossypol R-(-)-gossypol

S-(+)-棉酚 R-(-)-棉酚

本发明的方法是应用天然氨基酸酯盐酸盐或非天然氨基酸酯的盐酸拆分消旋棉酚，将所得光学活性棉酚与氨基酸酯的缩合物水解即可得到高纯度的光学活性棉酚，尤其是仅仅通过溶剂法和重结晶即可得到高纯度的光学活性(-)-棉酚。

所述的光学活性氨基酸酯可用下式表示：

其中，^*是所述的氨基酸酯的光学活性中心。通常天然氨基酸为L-型、非天然氨基酸则为L-型或者D-型。

其中，R₁可以是C₁～C₆烷基、C₁～C₆的烷氧基取代C₁～C₄烷基、羟基取代C₁～C₄烷基、C₂～C₆的酯基、R₃和R₄取代的芳基C₁～C₄烷基、五～六元环含氮杂芳基取代的C₁～C₄烷基。

所述的R₃、R₄为H、C₁～C₄烷基、OH、卤素或硝基；所述的芳基是苯基或萘基；所述的五～六元环含氮杂芳基可以是吡咯基、吡啶基或咪唑基；

上述的R₁典型的例子是：-CH₃、

CH₂OC₄H₉-t、-CH₂-OH、

或等。

所述的R₂是C₁～C₄的烷基或苄基；如CH₃、

或-CH₂CH₃、-CH₂-Ph等。

具体地说，本发明的方法采用如下的步骤：

(1).将消旋棉酚与光学活性天然氨基酸或者非天然氨基酸酯的盐酸盐缩合，分离首先析出的光活(-)、(+)、或者(+)和(-)-棉酚氨基酸酯非对映异构体，再进一步纯化母液中另一个光活(+)、(-)、或者(+)和(-)-棉酚氨基酸酯非对映异构体；纯化富集于析出的或母液中的单一的(+)或(-)的光活棉酚氨基酸酯缩合物；或将先行析出的或母液中的光活棉酚氨基酸酯非对映异构体的固体混合物进行纯化；分别获得另一(-)或(+)的光活棉酚氨基酸酯缩合物；

(2).分得的上述(-)或(+)的光活棉酚氨基酸酯缩合物经水解获得(+)和(-)棉酚。

本发明提供了一种操作简便、尤其是不需要柱层析的分离过程、适用于工业化生产，具有经济价值的工艺路线。尤其值得一提的是不需要柱层析即可得到生理活性更强、更显著的高纯度光学活性(-)-棉酚。

更具体地说，本发明提供的方法包括缩合和水解二步的步骤：

a)缩合

在极性有机溶剂中和室温～回流温度下，氨基酸酯盐酸盐、一价金属氢氧化物和消旋棉酚反应1-5小时，生成缩棉酚氨基酸酯非对映异构体，利用(-)-棉酚氨基酸酯缩合物和(+)-棉酚氨基酸酯缩合物在结晶溶剂中的溶解度差异使得两者分离，后处理，过滤，洗涤，得到缩合物两个非对映异构体的(-)-棉酚氨基酸酯缩合物和(+)-棉酚氨基酸酯缩合物，或分别获得单一的(-)-棉酚氨基酸酯缩合物和(+)-棉酚氨基酸酯缩合物。

所述的氨基酸酯盐酸盐如前所述，可以是天然L-氨基酸酯盐酸盐，也可以是非天然光学活性氨基酸酯的盐酸盐。其中优选L-色氨酸甲酯盐酸盐，是因为它可以仅仅运用溶剂法就能分别得到缩合物的两个非对映异构体的两者。

所述的消旋棉酚、一价金属氢氧化物与氨基酸酯盐酸盐的摩尔比是1∶1～2∶1～2。建议一价金属氢氧化物与氨基酸酯盐酸盐的摩尔比是等摩尔的，目的是中和盐酸，使其氨基游离。

所述的一价金属氢氧化物可以是LiOH、KOH或NaOH等，推荐使用固体的NaOH。

所述的缩合反应温度可在室温至溶剂的沸点之间选择。优选为30～60℃，更优选40～55℃。所述反应时间是根据TLC跟踪确定，反应时间通常为1-5小时。

所述的极性有机溶剂可以是包括甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇等醇类溶剂；丙酮或甲乙酮等酮类溶剂；也可以是氯仿或二氯甲烷等卤代烃类溶剂等。优选的溶剂是醇类溶剂。

所述的缩合物纯化是结晶方法，采用的溶剂可以是极性有机溶剂，包括醇类，如甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇等；醚类，如乙醚、四氢呋喃、二氧杂环己烷、甲基叔丁基醚或乙二醇二乙醚等；酮类，如丙酮或丁酮等；卤代烃类溶剂，如氯仿、二氯甲烷或1，2-二氯乙烷等。

所述的后处理是对于结晶溶剂与反应溶剂一致时，将溶剂浓缩，而对于结晶溶剂与反应溶剂不一致时，蒸除反应溶剂，加入结晶溶剂溶解。

所述的洗涤是使用结晶溶剂洗涤抽滤得到的固体。

所述的得到缩合物两个非对映异构体，其一是指得到析出固体或母液中仅含其中某一纯的异构体，而对应的母液或析出的固体则是含两者的混合物。这类缩合物可以是L-苯丙氨酸甲酯缩胺棉酚或L-酪氨酸甲酯缩胺棉酚。

所述的得到缩合物两个非对映异构体分别是指析出得到的固体为纯的异构体之一，从母液中获得的是另一异构体纯品。这类缩合物可以优先选择L-色氨酸甲酯缩胺棉酚。

b)水解

将以上得到的氨基酸甲酯缩(+)棉酚或氨基酸甲酯缩(-)棉酚溶于水解有机溶剂中，加入一定量的催化剂以促进水解反应在室温～回流下进行，待反应完全后，抽滤，洗涤，回收不溶物，母液反复水洗，无水硫酸钠干燥，加入适量石油醚(沸点30-60℃)重结晶，得到光学纯棉酚产物，其光学纯度由手性HPLC测试确定。

所述的水解有机溶剂是醚类溶剂，如乙醚等。

用作水解反应的催化剂可以是有机酸，如甲酸、乙酸或对甲苯磺酸等；也可以是无机酸，如盐酸、磷酸或硫酸等。可以采用单一的酸，也可以用以上酸的混合物。优选的酸有盐酸和盐酸-乙酸混合酸。

水解时加热温度推荐为室温～60℃，更优选45～55℃。所述反应完全是可以根据TLC跟踪确定，也可以根据瓶壁开始附着大量白色固体确定反应结束，通常反应1-2.5小时。所述的附着于瓶壁的白色固体是反应回收的不溶物氨基酸酯盐酸盐，该氨基酸酯盐酸盐可以回收利用。

所述的母液反复水洗是为了洗去催化剂酸。所述光活棉酚进一步重结晶溶剂为石油醚(30-60℃)和乙醚混合溶剂；推荐溶剂比例石油醚(30-60℃)∶乙醚为1∶1～2，更优选1∶2。

本发明具有以下特点：1、选择适用于反应底物的有机溶剂作为反应溶剂，将氨基酸酯盐酸盐中和，使其氨基游离，充分与消旋棉酚的醛基发生缩合反应，迅速生成两个非对映异构体的席夫碱产物；2、直接通过结晶法成功将氨基酸酯缩棉酚的两个非对映异构体有效分离，很利于应用在工业化生产；3、结晶法得到的胺缩棉酚的非对映异构体加入酸后，在溶剂中反应，可以直观通过瓶壁开始附着大量白色固体确定反应是否结束，操作更加直观。并且可以完全回收氨基酸酯盐酸盐，积累了拆分原料；4、本发明提供了一种简便易行，适用于工业化生产的拆分消旋棉酚的方法，该方法具有原料价廉，反应得率高、操作简便、产品质量好的优点。

本发明均使用工业常规溶剂，反应温度控制在低于60℃，工业操作安全，易于控制；反应时间迅速；反应产率高，副产物少；氨基酸酯缩棉酚的两个非对映异构体的分离极为简单、易于操作，直接可以通过在单一溶剂下结晶的方式分离，特别是L-色氨酸甲酯缩棉酚直接可以在溶剂中分离，一种异构体以固体析出，另一种异构体则溶于溶剂，存在于母液中。这种氨基酸酯盐酸盐拆分消旋棉酚的方法，简便易行，得到的光活棉酚缩氨基酸酯产物具有得率高、纯度好、质量优的优点。

此发明的优点还在于首次应用简单溶剂结晶的方法，得到一种或全部光活棉酚缩氨基酸酯产物，简化了很多繁复的步骤，可以避免使用柱层析，合适溶剂的选择，也增加了拆分得率，为工业化生产提出了一条新的制备工艺。此外，本发明从光活棉酚缩氨基酸酯水解得到光学纯棉酚，可以很直观的通过反应现象确定反应是否结束，并大大减少了过去文献中酸的用量，和不统一性，同时提高了产率。并且可以完全回收氨基酸酯盐酸盐，几乎定量回收了拆分原料。

具体实施方式

以下实施例将进一步说明本发明提供的方法，但本发明不受此限制。

实施例1：

将51mg L-色氨酸甲酯盐酸盐(0.2mmol)溶于10ml乙醇中，加入约8mgNaOH，溶解后，加入52mg(0.1mmol)消旋棉酚，加热40～50℃，搅拌反应约2小时后，反应完全(TLC跟踪)，得产物a和b(ΔRf＝0，多体系尝试)。反应体系浑浊，有黄色固体a析出，抽滤，乙醇洗涤，得黄色粉末(a)，NMR确定为L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚([α]_D ^19.7：-1091°(c 0.255，CHCl₃))，约52mg(可能未抽干)，¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：13.5(br s，-OH)，9.28(br s，2H)，7.54(s，2H)，6.97(d，J＝6.9Hz，4H)，6.64(d，J＝6.9Hz，4H)，5.46(br s，-OH)，4.21(m，2H)，3.77(s，6H)，3.70(m，2H)，3.26(dd，J＝13.7，3.5Hz，2H)，2.99(dd，J＝13.7，9.8Hz，2H)，2.04(s，6H)，1.51(d，J＝7.2Hz，12H)。母液成分为b和杂质62mg，浓缩溶剂乙醇，抽干后，CH₂Cl₂溶解过滤，滤除不溶性白色粉末，母液浓缩为b，NMR确定为L-色氨酸甲酯缩(+)-棉酚([α]_D ²⁰：+70.7°(c 0.275，CHCl₃))，¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：13.1(br s，-OH)，9.34(br s，2H)，7.56(s，2H)，6.98(d，J＝8.1Hz，4H)，6.67(d，J＝8.1Hz，4H)，4.23(m，2H)，3.73(s，6H)，3.67-3.78(m，2H)，3.22(dd，J＝13.8，4.8Hz，2H)，3.08(dd，J＝13.8，8.1Hz，2H)，2.06(s，6H)，1.51(t，J＝7.2Hz，12H)。a，b产率约100％。

实施例2：

L-色氨酸甲酯盐酸盐(2.56g)加入到50ml乙醇中，加入约0.4g NaOH，溶解后，加入2.59g消旋棉酚，加热40～50℃，搅拌。TLC跟踪至反应完全，约3小时，呈现黄色浆状混浊液，常温搅拌过夜后，抽滤，用乙醇洗涤，得黄色粉末L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚a，约2.08g，产率约90.6％。母液浓缩溶剂乙醇，抽干后，CH₂Cl₂溶解过滤，除去不溶性白色粉末，母液浓缩为L-色氨酸甲酯缩(+)-棉酚b，约2.28g，产率约99％。

取L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚92mg(0.1mmol)溶于6ml乙醚中，加入0.9ml冰醋酸和1滴浓盐酸，40℃下，搅拌，回流，1～1.5小时后，瓶壁开始附着大量白色固体，TLC确定反应完全，抽滤，乙醚洗涤，回收白色不溶物L-色氨酸甲酯盐酸盐33mg，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，加入一定量石油醚(30-60℃)，蒸除溶剂，得黄色粉末光学纯(-)-棉酚46mg(产率88.5％，ee值94.7％)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：11.13(br s，-OH)，7.78(s，2H)，6.43(s，2H)，5.87(s，2H)，3.89(m，2H)，2.15(s，6H)，1.55(d，J＝6.9Hz，12H)。

取L-色氨酸甲酯缩(+)-棉酚92mg(0.1mmol)溶于6ml乙醚中，加入0.9ml冰醋酸和1滴浓盐酸，40℃下，搅拌，回流，1小时后，瓶壁开始附着大量白色固体，TLC确定反应完全，抽滤，乙醚洗涤，回收白色不溶物L-色氨酸甲酯盐酸盐40mg，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，加入一定量石油醚(30-60℃)，蒸除溶剂，得黄色粉末光学纯(+)-棉酚45mg(产率86.5％，ee值95.7％)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：11.13(br s，-OH)，7.78(s，2H)，6.43(s，2H)，5.87(s，2H)，3.89(m，2H)，2.15(s，6H)，1.55(d，J＝6.9Hz，12H)。

实施例3：

L-色氨酸甲酯盐酸盐(21.45g，0.084mol)加入到300ml乙醇中，加入约3.35gNaOH(0.084mol)，溶解后，加入21.74g消旋棉酚(0.042mol)，加热搅拌。反应完全(TLC跟踪)时，体系呈黄色浆状混浊液，常温搅拌过夜后，抽滤，用大量乙醇洗涤，得黄色粉末L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚a，约20.5g，产率约100％。母液浓缩溶剂甲醇，抽干后，CH₂Cl₂溶解过滤，除去不溶性白色粉末，母液浓缩为浅褐色的L-色氨酸甲酯缩(+)-棉酚b，约21g，产率约99％，氯仿重结晶得到淡黄粉末b。

实施例4：

将43mg L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(0.2mmol)溶于10ml甲醇中，加入约8mgNaOH，溶解后，加入52mg(0.1mmol)消旋棉酚，加热搅拌。约2小时后，反应完全(TLC跟踪)，得产物a(Rf＝0.7)，b(Rf＝0.55)。此时反应体系浑浊，有黄色固体析出，常温搅拌过夜，或冰箱静置过夜，使固体充分析出，抽滤，不洗，得黄色粉末(多a+少b)，NMR确定为L-苯丙氨酸甲酯缩(-)-棉酚和L-苯丙氨酸甲酯缩(+)-棉酚的混合物，约66mg，¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：13.6(m，-OH)，9.36(d，J＝11.1Hz，2H，major)，9.24(d，J＝12.3Hz，1H，minor)，7.92(br s，-OH)，7.54(s，3H)，7.25-7.11(m，15H)，5.35(br s，-OH，major)，5.32(br s，-OH，minor)，4.27(m，3H)，3.77(s，9H)，3.69(m，3H)，3.33(dd，J＝13.3，4.9Hz，3H)，3.17(dd，J＝13.3，8.4Hz，3H)，2.05(s，6H，major)，2.04(s，3H，minor)，1.53(t，J＝6.2Hz，12H，minor)，1.51(d，J＝6.3Hz，6H，major)。母液成分为b，NMR确定为其中单一的(+)光活化合物，测旋光确定为L-苯丙氨酸甲酯缩(+)-棉酚，[α]_D ^20.4：+212.7°(c 0.335，CHCl₃)，b约30mg，产率约75％。(TLC体系：30-60石油醚/乙醚1/1)，¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：13.6(br s，-OH)，9.25(d，J＝6.3Hz，2H)，7.92(brs，-OH)，7.55(s，2H)，7.25-7.14(m，10H)，4.27(m，2H)，3.77(s，6H)，3.70(m，2H)，3.34(dd，J＝13.5，5.4Hz，2H)，3.13(dd，J＝13.5，8.7Hz，2H)，2.05(s，6H)，1.52(t，J＝6.8Hz，12H)。

实施例5：

将39mg L-酪氨酸甲酯(0.2mmol)溶于10ml异丙醇中，加入52mg(0.1mmol)消旋棉酚，搅拌。待反应完全(TLC跟踪)，得产物a(Rf＝0.40)，b(Rf＝0.35)。蒸除溶剂异丙醇，加入约3ml氯仿，放入冰箱，静置，过夜，有大量黄色粉末析出，抽滤，氯仿洗涤，得淡黄的粉末a，NMR，旋光，确定为L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚([α]_D ^26.4：-334.9°(c 0.125，CH₃COCH₃))，约35mg，产率约80％。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：13.5(m，-OH)，9.07(d，J＝12.6Hz，2H)，7.97(s，2H)，7.84(br s，-OH)，7.57(d，J＝8.1Hz，2H)，7.50(s，2H)，7.0(t，J＝8.1Hz，2H)，6.92(s，2H)，6.75-6.80(m，4H)，4.68(br s，-OH)，4.46(m，2H)，3.84(s，6H)，3.67-3.71(m，2H)，3.61(dd，J＝14.4，4.2Hz，2H)，3.23(dd，J＝14.4，9.6Hz，2H)，1.98(s，6H)，1.53(d，J＝7.2Hz，12H)。母液中为L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚a和L-酪氨酸甲酯缩(+)-棉酚b的混合物，后柱层析分别得L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚a和L-酪氨酸甲酯缩(+)-棉酚b([α]_D ^26.5：+386.3°(c 0.08，CH₃COCH₃))。(TLC体系：石油醚/丙酮3/1)，其中L-酪氨酸甲酯缩(+)-棉酚b的¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：13.5(m，-OH)，9.04(d，J＝10.5Hz，2H)，8.04(br s，2H)，7.50-7.56(m，4H)，7.22(d，J＝7.2Hz，2H)，6.94-7.03(m，6H)，4.01(m，2H)，3.77(s，6H)，3.69-3.72(m，2H)，3.53(dd，J＝14.7，4.2Hz，2H)，3.28(dd，J＝14.7，9.0Hz，2H)，2.03(s，6H)，1.53(t，J＝6.9Hz，12H)。

取L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚89mg(0.1mmol)溶于6ml乙醚中，加入0.9ml冰醋酸和1滴浓盐酸，40℃下，搅拌，回流，1小时后，瓶壁开始附着大量白色固体，TLC确定反应完全，抽滤，乙醚洗涤，回收白色不溶物L-酪氨酸甲酯盐酸盐38mg，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，加入一定量石油醚(30-60℃)，蒸除溶剂，得黄色粉末光学纯(-)-棉酚36mg(产率69％，ee值100％)。

取L-酪氨酸甲酯缩(+)-棉酚88mg(0.1mmol)溶于6ml乙醚中，加入0.9ml冰醋酸和1滴浓盐酸，40～44℃下，搅拌，回流，1～1.5小时后，瓶壁开始附着大量白色固体，TLC确定反应完全，抽滤，乙醚洗涤，回收白色不溶物L-酪氨酸甲酯盐酸盐36mg，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，加入二定量石油醚(30-60℃)，蒸除溶剂，得黄色粉末光学纯(+)-棉酚37mg(产率71％，ee值95％)。

实施例6：

将4.615g L-酪氨酸甲酯盐酸盐(0.02mol)溶于100ml异丙醇中，加入约0.785gNaOH，溶解后，加入5.163g(0.01mol)消旋棉酚，加热搅拌。约2小时后，反应完全(TLC跟踪)，得产物a(Rf＝0.40)，b(Rf＝0.35)。蒸除溶剂异丙醇，加入约30ml 1，2-二氯乙烷，溶解，放入冰箱静置，有大量黄色粉末析出，抽滤，大量1，2-二氯乙烷洗涤，得淡黄的粉末L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚a，约4.7g。母液中为L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚a和L-酪氨酸甲酯缩(+)-棉酚b的混合物。

实施例7

将10.183g L-酪氨酸甲酯盐酸盐(0.044mol)溶于150ml异丙醇中，加入约1.761g NaOH，溶解后，加入11.396g(0.022mol)消旋棉酚，加热搅拌。约2小时后，反应完全(TLC跟踪)，得产物a(Rf＝0.40)，b(Rf＝0.35)。蒸除溶剂异丙醇，加入约50ml 1，2-二氯乙烷溶解，放入冰箱，静置过夜，有大量黄色粉末析出，抽滤，大量1，2-二氯乙烷洗涤，得淡黄的粉末L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚，约10.6g。母液中为L-酪氨酸甲酯缩(-)-棉酚和L-酪氨酸甲酯缩(+)-棉酚的混合物。

Claims

1.一种光学活性棉酚的制备方法，其特征是采用下述步骤：

(1).将消旋棉酚与光学活性天然氨基酸或者非天然氨基酸酯的盐酸盐缩合，分离析出的光活(-)、(+)、或者(+)和(-)-棉酚氨基酸酯非对映异构体，再进一步纯化母液中另一个光活(+)、(-)、或者(+)和(-)-棉酚氨基酸酯非对映异构体；纯化富集于析出的或母液中的单一的(+)或(-)的光活棉酚氨基酸酯缩合物；或将先行析出的或母液中的光活棉酚氨基酸酯非对映异构体的固体混合物进行纯化；分别获得另一(-)或(+)的光活棉酚氨基酸酯缩合物；

(2).上述(-)或(+)的光活棉酚氨基酸酯缩合物经水解获得(-)或(+)棉酚或者再重结晶，得到高纯度的光学活性棉酚；

上述的纯化系采用溶剂法和重结晶方法；

上述的光学活性氨基酸酯为天然氨基酸或非天然氨基酸的C1～4的烷基酯；

所述的(+)或(-)棉酚的结构式如下：

S-(+)-棉酚 R-(-)-棉酚

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤(1)的方法中，所述的光学活性氨基酸酯具有如下的结构式：

其中，R₁可以是C₁～C₆烷基、C₁～C₆的烷氧基取代C₁～C₄烷基、羟基取代的C₁～C₄烷基、C₂～C₆的酯基、R₃和R₄取代的芳基C₁～C₄烷基、五～六元环含氮杂芳基取代的C₁～C₄烷基；

所述的R₃、R₄为H、C₁～C₄烷基、OH、卤素或硝基；所述的芳基是苯基或萘基；所述的五～六元环含氮杂芳基是吡咯基、吡啶基或咪唑基。

所述的R₂是C₁～C₄的烷基或苄基。

3.根据权利要求1所述的的方法，其特征是所述步骤(1)的缩合反应是在极性有机溶剂中和室温～回流温度下，氨基酸酯盐酸盐、一价金属氢氧化物和消旋棉酚反应1-5小时；所述的消旋棉酚、一价金属氢氧化物与氨基酸酯盐酸盐的摩尔比是1∶1～2∶1～2。

4.根据权利要求3所述的的方法，其特征是所述的缩合反应温度为30～60℃。

5.根据权利要求3所述的的方法，其特征是所述的极性有机溶剂是醇类溶剂、酮类溶剂或卤代烃类溶剂。

6.根据权利要求3所述的的方法，其特征是所述的缩合物是L-色氨酸甲酯缩胺棉酚。

7.根据权利要求3所述的的方法，其特征是步骤(2)中，所述的水解是在步骤(1)获得的氨基酸甲酯缩(+)棉酚或氨基酸甲酯缩(-)棉酚，在水解有机溶剂中和室温～60℃下反应1-2.5小时；所述的催化剂是有机酸、无机酸、或有机酸和无机酸的混合酸，所述的氨基酸甲酯缩(+)棉酚或氨基酸甲酯缩(-)棉酚和催化剂的摩尔比为1∶50～100；所述的水解有机溶剂是醚类溶剂。

8.根据权利要求7所述的的方法，其特征是步骤(2)中，所述的酸催化剂是盐酸或盐酸-乙酸混合酸；所述的水解温度为45～55℃。

9.根据权利要求1或7所述的的方法，其特征是步骤(2)中反应结束后，回收副产物不溶物氨基酸酯盐酸盐。

10.根据权利要求1或7所述的的方法，其特征是步骤(2)中，所述的光活棉酚进一步重结晶的溶剂是沸点为30-60℃的石油醚和乙醚的混合溶剂。

11.根据权利要求10所述的的方法，其特征是所述的重结晶溶剂体积比为沸点为30-60℃的石油醚∶乙醚＝1∶1～2。

12.根据权利要求1所述的的方法，其特征是步骤(1)或(2)的产物采用浓缩、溶剂分离法或重结晶方法纯化。