CN101004387A - 被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1～2mol·L^－1的TiO⁺检测溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测，其中TiO⁺检测溶液的配制方法：将0.50g～1.00g二氧化钛和4.00g～10.00g硫酸铵混合然后再向其中加入100mL～200mL浓硫酸，加热至120～150℃，保温12～18h，冷却后加入400mL～1000mL水稀释即可。本发明被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，方便、快速、准确，检出限低，可以达到0.9μg/cm²，或者更低，既可进行定性检测，也可进行定量检测。

Description

被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法

技术领域

本发明涉及一种被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，用于检测被灭菌物体表面残留的过氧化氢含量。

背景技术

消毒灭菌是医院最重要的基础工作之一，随着医疗工作的需要和医疗器械产品的发展，医学界对消毒灭菌工作提出了更高的要求和期望，过氧化氢等离子灭菌成为一种新方法。

过氧化氢(hydrogen peroxide)又名双氧水，是一种过氧化物灭菌剂，在自然界中很少见，仅以微量存在于风雨中及某些植物针叶中，是自然界中某些还原性物质与氧化物的产物。过氧化氢是一种强氧化剂，弱酸性，其分子式为H₂O₂，分子量为34.015，结构中有一个过氧链-O-O-，每个氧原子上个连着一个氢原子。纯过氧化氢是一种无色无味的透明液体，很稳定，加热到153℃或更高时便会发生爆炸式分解。

过氧化氢在光化学、电离辐射、重金属和转换型金属离子的催化作用下分解，产生的各种化学基团，例如活性氧及沿生物、OH基等，对微生物有很强的杀灭作用。通过改变微生物的通透率屏障，破坏微生物的蛋白质酶、氨基酸和核酸，导致微生物的死亡。因此可以用来灭菌。

过氧化氢等离子体灭菌在低温(约45℃)、低湿(约10％RH)的条件下，短时间(少于60分钟)即可完成全部灭菌过程，并且灭菌对象范围广，如：金属制品、非耐热制品、非耐湿制品等90％以上的医用器械。由于过氧化氢是一种高氧化剂，所以对某些被灭菌物体表面会有一定的氧化作用，因此需要控制被灭菌物体表面残留的过氧化氢含量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，能够方便、快速、准确地检测被灭菌物体表面残留的过氧化氢含量。

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，是利用H₂O₂在1～2mol·L^-1的TiO⁺检测溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

其中：

TiO⁺检测溶液的配制方法：将0.50g～1.00g二氧化钛和4.00g～10.00g硫酸铵混合然后再向其中加入100mL～200mL浓硫酸，加热至120～150℃，保温12～18h，最好控制加热温度为150℃，保温15～16h，冷却后加入400mL～1000mL水稀释即可。冷却后加入400mL水稀释即可。

所用二氧化钛、硫酸铵和浓硫酸最好为化学纯，水为蒸馏水。

吸光光度法可以采用比色法，采用的比色管最好选择玻璃透光性能好的。

吸光光度法可以采用可见光分光光度法，可采用7230分光光度计。

本发明被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，方便、快速、准确，检出限低，可以达到0.9μg/cm²，或者更低，既可进行定性检测，也可进行定量检测。

附图说明

图1、本发明一实施例浓度、吸光度值曲线示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1.5mol·L^-1的TiO⁺检测溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.80g二氧化钛和6.00g硫酸铵混合然后再向其中加入150mL浓硫酸，加热至150℃，保温15h，冷却后加入600 mL水稀释即可。

H₂O₂标准溶液的配制：

H₂O₂标准溶液的标定(常规操作)：

取1.00mL60％H₂O₂稀释至250.00mL，取此溶液10.00mL，加入25mL的0.5mol/L硫酸溶液后，用0.1000±0.0002mol/L的高锰酸钾标准溶液标定，至溶液呈粉红色，并在30S内不消失，即为终点。并按下式计算其浓度(mg/mL)：

$C=\frac{C_1\×V_1\×5\×17.01}{V}$

式中C：H₂O₂溶液浓度(mg/mL)；

C₁：高锰酸钾标准溶液的浓度(mol/L)；

V₁：标定H₂O₂时所用高锰酸钾溶液的量(mL)；

V：吸取H₂O₂溶液滴定的量(mL)。

检测下限的测定

用已经标定好的过氧化氢标准溶液进行稀释，准确制成0.0008mg/mL、0.0010 mg/mL、0.0012mg/mL、0.0014mg/mL、0.0016mg/mL、0.0018mg/mL、0.0020mg/mL、0.0022mg/mL等系列标准溶液(见表1)，分别取25mL上述溶液于比色管中，加入4mL TiO⁺检测溶液，放置10分钟，以2cm比色杯，在430nm处比色。结果见表1。

表1浓度、吸光度值对应表

H2O2标准	0.0000	0.0008	0.0010	0.0012	0.0014	0.0016	0.0018	0.0020	0.0022
										吸光度值(A)	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.000	0.000	0.005	0.006	0.006
H2O2标准	0.0024	0.0026	0.0030	0.0040	0.0060	0.0080	0.0100	0.0150	0.020
										吸光度值(A)	0.006	0.006	0.006	0.007	0.008	0.010	0.012	0.016	0.020
H2O2标准	0.040	0.060	0.080	0.10	0.12	0.16	0.20	0.25	0.30
										吸光度值(A)	0.061	0.088	0.121	0.155	0.184	0.246	0.312	0.372	0.446
H2O2标准	0.40	0.60	0.80	1.00	1.50	2.00
										吸光度值(A)	0.595	0.863	1.149	1.398	1.845	2.064

由表1确定出最底检出下限为0.0018mg/mL。

样品处理：

将表面积20cm²的测试不锈钢片10个，经过一个完整的低温等离子体灭菌过程，取出样品后用适量的蒸馏水浸泡30min，冲洗。连同冲洗水，定容至100mL。取10mL滤液于25mL比色管中，加入4mL钛溶液，加水至刻度，放置10min，以2cm比色杯，在430mm处比色。

重复实验5次。

结果处理：

比色结果没有吸收光度值。此时，就只能进行定性检测。

以最低的检测限0.0018mg/ml计算如下：

$L=\frac{100C_{H_2{O}_2}}{{200\mathrm{cm}}^2}=\frac{100\mathrm{ml}\×0.0018\mathrm{mg}/\mathrm{ml}}{{200\mathrm{cm}}^2}={0.0009\mathrm{mg}/\mathrm{cm}}^2={0.9\mathrm{\μg}/\mathrm{cm}}^2$

根据以上计算，残留量应该低于0.9μg/cm²。

根据表1数据画出浓度、吸光度曲线，见图1。

根据图1确定出所有测试片表面的残留量，即可计算出单位面积上过氧化氢的残留量，完成定量检测。

实施例2

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将1.00g二氧化钛和5.00g硫酸铵混合然后再向其中加入120mL浓硫酸，加热至140～145℃，保温16h，冷却后加入800mL水稀释即可。

利用7230分光光度计进行分光光度法检测。

其它同实施例1。

实施例3

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在2mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.60g二氧化钛和8.00g硫酸铵混合然后再向其中加入180mL浓硫酸，加热至120～125℃，保温15h，冷却后加入500mL水稀释即可。

采用比色法检测。

其它同实施例1。

实施例4

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1.3mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.90g二氧化钛和7.00g硫酸铵混合然后再向其中加入140mL浓硫酸，加热至130～135℃，保温14h，冷却后加入700mL水稀释即可。

采用可见光分光光度法检测。

其它同实施例1。

实施例5

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1.7mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.80g二氧化钛和5.00g硫酸铵混合然后再向其中加入180mL浓硫酸，加热至140～145℃，保温17h，冷却后加入800mL水稀释即可。

采用比色法检测。

其它同实施例1。

实施例6

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1.2mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.80g二氧化钛和10.00g硫酸铵混合然后再向其中加入200mL浓硫酸，加热至120～125℃，保温16h，冷却后加入600mL水稀释即可。

采用可见光分光光度法检测。

其它同实施例1。

实施例7

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1.6mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.65g二氧化钛和8.00g硫酸铵混合然后再向其中加入150mL浓硫酸，加热至130～135℃，保温15h，冷却后加入700mL水稀释即可。

采用比色法检测。

其它同实施例1。

实施例8

本发明所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，利用H₂O₂在1.7mol·L^-1的TiO⁺溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

TiO⁺检测溶液的配制：

将0.80g二氧化钛和8.00g硫酸铵混合然后再向其中加入140mL浓硫酸，加热至125～130℃，保温15h，冷却后加入750mL水稀释即可。

采用可见光分光光度法检测。

其它同实施例1。

Claims (5)

1、一种被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，其特征在于利用H₂O₂在1～2mol·L^-1的TiO⁺检测溶液中与钛离子生成黄色络合物TiO(H₂O₂)²⁺，再借助吸光光度法来检测。

2、根据权利要求1所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，其特征在于TiO⁺检测溶液的配制方法：将0.50g～1.00g二氧化钛和4.00g～10.00g硫酸铵混合然后再向其中加入100mL～200mL浓硫酸，加热至120～150℃，保温12～18h，冷却后加入400mL～1000mL水稀释即可。

3、根据权利要求2所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，其特征在于TiO⁺检测溶液的配制加热温度为150℃，保温15～16h。

4、根据权利要求1所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，其特征在于吸光光度法采用比色法。

5、根据权利要求1所述的被灭菌物体表面残留过氧化氢的检测方法，其特征在于吸光光度法采用可见光分光光度法。