CN101003571A - 一种植物抗病相关蛋白sgt1及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物抗病相关蛋白及其编码基因与应用。该植物抗病相关蛋白，是具有下述氨基酸序列之一的蛋白质：1)序列表中的SEQ ID №：2的氨基酸残基序列；2)将序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病相关的蛋白质。本发明的基因可以转入单子叶或双子叶植物中提高植物的抗病性，为植物广谱抗病育种打下良好的工作基础。

Description

一种植物抗病相关蛋白SGT1及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及一种植物抗病相关蛋白SGT1及其编码基因与应用，特别涉及一种来源于中间偃麦草的植物抗病相关蛋白SGT1及其编码基因与应用。

背景技术

寄主抗病反应是寄主抗病基因直接或间接产物和病原无毒基因直接或间接产物相互识别、活化一系列信号基因表达、启动寄主防卫反应的结果。抗病反应最常见的方式是：通过植物抗病基因与病原的相互识别作用，激发活性氧爆发，产生活性氧中间物(reactive oxygen intermediates，ROI)及过敏反应(hypersensitivereaction，HR)，导致侵染部位周围细胞程序化死亡，激发一系列的防卫基因的表达，产生组织或全株抗病性，这种诱导产生的抗性称为系统获得性抗性(systemicacquired resistance，SAR)。

在双子叶和单子叶植物中，抗病(R)基因介导、激活防御反应时需要许多信号基因参与。近年在拟南芥、大麦、烟草、番茄中，鉴定出一个重要的抗病信号基因SGT1，位于R基因与活性氧激发之间。SGT1基因编码的蛋白具有以下结构域：1个重复结构域(tetratricopeptide repeat domain，TPR)，1个CS基元(CHORD和SGT1)及1个SGS(SGT1-specific motif)和2个可变区(VR1和VR2)。SGT1为SCF泛素溶解酶复合体的成分之一，在植物抗病防御反应中，可以在病原感染时调节寄主的程序化细胞死亡，激发一系列的防卫基因的表达，产生SAR，启动植物的全面防卫反应，使植物表现抗病性(Austin M J et al.Science.2002，295：2077，Azevedo C et al.Science.2002，295：2073，Holt BF，Belkhadir Y，Dangle Jl.Antagonistic control of disease resistance protein stability in plantimmune system.Science，2005，309：929-932)。它参与了大麦CC-NBS-LRR类抗病基因Mla6介导的抗病反应。在拟南芥中，SGT1对多个TIR-NBS-LRR抗病蛋白赋予的抗性是必需的。2002年Peart等人进一步研究了SGT1在烟草抗病反应中的功能，发现SGT1对于NBS-LRR类以及多个其它抗性蛋白所赋予的抗病反应都是必需的。研究还表明，SGT1在非寄主抗性中也扮演重要角色。与先前鉴定的一些重要的抗病信号分子相比，SGT1在植物抗病中可能是一个更广泛的重要的抗病信号分子。

目前各种真菌、病毒、细菌病害常会导致重要农作物产量与品质的降低，是制约重要农作物生产的重要因素。小麦纹枯病、赤霉病等土传真菌病害、小麦白粉病、条锈病等气传真菌病害和病毒病害在我国小麦主产区的为害日益严重，轻则造成小麦减产20-30％，重则减产40-50％，甚至绝收。培育抗病品种是防治上述病害的首推途径。由于病原菌生理小种的变异，常使寄主抗病基因丧失抗性。因此，从免疫或高抗多种病害的植物中克隆重要抗病信号传导基因SGT1，应用于广谱抗病基因工程，诱导植物产生SAR，使植物对多种病原产生抗性，将解决上述问题。该策略从理论上讲应该比导入单一抗病基因更有效。

小麦近缘植物中间偃麦草，具有许多对小麦改良有益的重要基因，如具有抗小麦锈病、白粉病、赤霉病、病毒病、纹枯病等特性。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物抗病相关蛋白及其编码基因与应用。

本发明所提供的植物抗病相关蛋白，名称为TiSGT1，来源于中间偃麦草(Thinopyrum intermedium)，是具有下述氨基酸序列之一的蛋白质：

1)序列表中的SEQ ID №：2的氨基酸残基序列；

2)将序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病相关的蛋白质。

其中，序列表中序列2是由373个氨基酸残基组成。自序列2的氨基端第1位至373位氨基酸残基为TiSGT1基因，具有植物SGT1蛋白的功能域：1个重复结构域(tetratricopeptide repeat domain，TPR)位于第21位至第98位氨基酸区，1个CS基元(CHORD和SGT1)位于第173-260位氨基酸区及1个SGS(SGT1-specificmotif)结构域位于第290-371位氨基酸区。

上述植物抗病相关蛋白的编码基因(TiSGT1)也属于本发明的保护范围。

上述植物抗病相关蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；

2)编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质序列的多核苷酸；

3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

上述高严谨条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。

其中序列表中序列1是由1449个脱氧核苷酸组成，自5′端的第16位到第1137位脱氧核苷酸为编码序列(ORF)。

含有本发明基因的表达载体、细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。

本发明的TiSGT1基因可用现有的方法构建到现有的植物表达载体中，可在其转录超始核苷酸前加上包括组成型启动子、增强启动子、诱导型启动子、组织特异性启动子、发育阶段特异性启动子在内的任何一种启动子。为了便于对转TiSGT1基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，如加入植物可选择性标记(Bar基因、GUS基因、萤光素酶基因等)或具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素，卡那霉素等)。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜宿等。携带有本发明的TiSGT1基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物经组织培育成植株，获得抗病性提高的植株。

实验结果表明，在白粉病菌和大麦黄矮病毒诱导下TiSGT1的表达增强。将TiSGT1基因的完整表达序列(ORF)取代单子叶组成性表达载体pAHC25中GUS基因序列，构建了单子叶植物高效表达的转基因载体pASGT1，使该基因能在载体的Ubi启动子驱动下表达；通过转基因载体pASGT1将TiSGT1导入小麦，检测转基因小麦的抗病性，表明TiSGT1可提高小麦对白粉病菌的抗性。本发明的基因还可以转入其他单子叶或双子叶植物中提高对其他植物病害的抗性，为植物广谱抗病育种打下良好的工作基础。

附图说明

图1为从白粉病菌诱导的中间偃麦草中扩增TiSGT1基因5′端片段的凝胶电泳图

图2为通过GenBank的BLASTP获得的TiSGT1蛋白示意图

图3为大麦黄矮病诱导的中间偃麦草TiSGT1表达分析结果

图4为白粉病菌诱导的中间偃麦草TiSGT1表达分析结果

图5为pASGT1载体构建示意图

图6部分转基因植株中筛选基因Bar的PCR检测凝胶电泳图

图7为转pASGT1的小麦植株和对照植株接种白粉病的发病情况照片

具体实施方式

下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1、TiSGT1全长cDNA的获得

将生长四周的中间偃麦草的叶片接种白粉病菌，24小时后，用TRIZOL的方法提取叶片的总RNA，按照大连宝生物公司提供的方法合成cDNA第1条链，并用其作为模板进行PCR扩增。根据大麦，水稻，拟南芥，烟草SGT1基因保守区段和小麦EST设计一对引物SGT1-F：5‘-CACCTCGACGCAGACATG-3’和SGT1-R：5‘-CTC(A/C)AGCTTATCCCAGTC-3’，PCR反应总体积为25μL，包括2μL cDNA(50ng)，100μmol/LdNTP，0.4μmol/L每条引物，1 U Hotstar Taq酶及1×Ex PCR缓冲液(均购自大连宝生物公司)。PCR反应程序为：先95℃预变性5min；然后95℃30s，56℃1min，72℃1min，35个循环；最后72℃，10min补平末端。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离，结果如图1所示，表明从接种白粉病菌的中间偃麦草cDNA中扩增出一条大约1.0kb带。图1中泳道1和2为扩增的条带；M为DNA分子量标准(购自华美生物工程公司)；图中箭头指的条带大小为1.0kb。将此条带回收，克隆到pMD18-T载体(大连宝生物公司)上，进行测序分析。序列分析表明该序列是SGT1基因5′端片段。根据获得SGT1基因片段序列设计3’-RACE的特异性引物，RACE程序按照introgen公司提供的3’-RACE试剂盒的说明书进行。3’-RACE特异性引物RP1：

5’-AGCAAGCCCAAATACAGG-3’，RP2：5’-GCGTGGTTGTTGACTTTG-3’；先用RP1上游引物和试剂盒中的AUAP引物(下游引物，序列：5′-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3′)，以3′-RACE试剂盒的AP引物从接种白粉病菌的中间偃麦草叶片RNA反转录合成的第一链cDNA作为模板进行第一轮扩增，然后再用稀释50倍的第一轮PCR产物作模板，以RP₂(上游引物)和AUAP下游引物进行第二轮PCR扩增，回收纯化PCR产物，连接克隆到pMD18-T载体上，通过菌落PCR，挑选3个阳性克隆测序，获得TiSGT1的3′端序列。

第一轮PCR反应条件：先94℃1min；然后94℃30s，58℃30S，72℃1min 30S共10个循环；再94℃ 30s，56℃30S，72℃1min30S共25个循环；最后72℃5min。第二轮PCR反应条件：先94℃预变性2min；然后94℃30S，63℃30S，72℃2min共10个循环；再94℃30S，61℃30S，72℃2min共25个循环；最后72℃ 5min。

将TiSGT1的5′端序列和3′端序列在体外拼接后，经测序表明，得到1449bp的cDNA序列，具有序列表中序列1的核苷酸序列。

为验证该拼接得到的cDNA为TiSGT1全长cDNA，再设计1对特异性引物TiF：5‘-CACCTCGACGCAGACATG-3’，TiR：5’-TTAATACTCCCACTTCTTGAG-3’，以接种白粉病菌的中间偃麦草的cDNA为模板，进行PCR扩增，以获得该基因的全长ORF。其中PCR的反应体系为：2μL cDNA(50ng)，100μmol/L dNTP，0.4μmol/L每条引物，1 U Hotstar Taq酶及1×Ex PCR缓冲液(均购自大连宝生物公司)。PCR反应程序为：先95℃预变性5min；然后95℃30s，56℃1min，72℃1min，35个循环；最后72℃，10min补平末端。扩增产物进行琼脂糖电泳分离，回收并克隆到pGEM-T载体上，进行测序分析，测序结果表明，该PCR扩增产物具有序列表中序列1的全长ORF的核苷酸序列，命名为TiSGT1。TiSGT1开放阅读框(编码序列)为自序列表中序列1的5′端的第16位至第1137位核苷酸序列，编码373个氨基酸残基序列(序列表中序列2)的TiSGT1，分子量为41KD，pI＝4.87。

将获得的TiSGT1基因全长ORF序列进行GenBank的BLASTP，进行比较，结果如图2所示，图2表明TiSGT1具有1个重复结构域(tetratricopeptide repeatdomain，TPR)是位于自序列2的氨基端第21-98位的氨基酸残基序列，有1个CS基元(CHORD和SGT1)是位于自序列2的氨基端第173-260位的氨基酸残基序列、自序列2的氨基端第175-297位氨基酸残基序列还构成1个p23结构域、及1个SGS(SGT1-specific motif)结构域是位于自序列2的氨基端第290-371位氨基酸残基序列。其中TPR参与蛋白间相互作用等多种功能，p23能结合分子伴侣热激蛋白hsp90、参与多种蛋白的折叠，CS domain的作用尚不清晰，可能与CHORD具相互作用，SGS domain是SGT1-like proteins所特有的结构域。

实施例2、TiSGT1的表达特性检测

将生长四周的中间偃麦草的叶片，分别接种白粉病菌、带大麦黄矮病蚜虫0，6、12，24，48小时后，用Trizol方法提取叶片的总RNA，用DNaseI酶解、纯化RNA，反转录成cDNA。先用组成性表达的Actin基因引物扩增各样品RNA，使扩增模板mRNA/cDNA的起始浓度一致(即均一化)，然后以TiSGT1的引物SG-F1：5′-CACCTCGACGCAGACATG-3′，SG-R2：5’-CTCCCACTTCTTGAGCTC-3’进行半定量RT-PCR扩增和凝胶电泳分析。分析结果如图3、图4所示，结果表明TiSGT1基因的转录表达受大麦黄矮病毒、白粉病菌的诱导后表达增强，在正常条件下，TiSGT1有微量表达，白粉病菌、带大麦黄矮病蚜虫侵染6小时后，TiSGT1基因的表达量开始增加，在侵染12小时达到最大值。说明在大麦黄矮病毒和白粉病菌诱导下TiSGT1的表达增强。

实施例3、转TiSGT1基因小麦植株的抗病性分析

以TiSGT1基因的cDNA为模板，用带有SmaI/SacI酶识别位点的引物：上游引物SGL-SF：5‘TT CCCGGGCACCTCGACGCAGACATG-3’(下划线标出的序列表示SmaI酶识别位点)，下游引物SGL-SR：5‘-CC TCATTAATACTCCCACTTC-3’(

标出的序列表示SacI酶识别位点)进行PCR扩增(PCR反应程序为：先95℃预变性5min；然后95℃30s，56℃1min，72℃1min，35个循环；最后72℃，10min补平末端)，获得加SmaI和SacI位点的TiSGT1基因全长ORF，回收扩增产物，连接到pMD18-T载体上，经测序表明该重组载体为含有TiSGT1基因的pMD18-T，将其命名为pTSGT1。pTSGT1用SmaI和SacI酶切，回收TiSGT1基因片段，将TiSGT1基因插入pAHC25的SmaI和SacI识别位点间，取代单子叶植物表达载体pAHC25中GUS基因，将TiSGT1基因构建到单子叶植物表达载体pAHC25(由pUC8改造而成，含有2个表达盒，第1个表达盒具有玉米UBIQUITIN启动子、Exon、Intron、GUS、Nos终止子，GUS两端具有SmaI和SacI酶切位点，第2个表达盒具有玉米UBIQUITIN启动子、Exon、Intron、Bar、Nos终止子)的SmaI和SacI识别位点之间，形成重组载体，把经过测序鉴定、含有TiSGT1基因的全长ORF、插入方向正确的载体命名为pASGT1(构建过程如图5所示)。该pASGT1载体受UBI启动子控制。该载体还在下游具有1个受Ubi启动子控制的Bar基因表达盒，可为后续工作中利用除草剂双丙氨膦(Bialaphos)筛选转化再生植株提供抗性。

用基因枪将pASGT1轰击到小麦品种杨麦12的愈伤组织3200个，轰击后的愈伤组织在渗透压培养基上后处理16h。将愈伤组织转移到SD2(MS培养基的无机盐成分中添加VB₁ 1mg/L，天冬门酰胺150mg/L，2，4-D2mg/L)，26℃，暗培养，恢复培养2周。将恢复培养后的愈伤组织转移到分化筛选培养基中(1/2 MS培养基附加：NAA1mg/L+KT1mg/L，Bialaphos2-5mg/L)，24-26光照培养14d，将愈伤组织分化小苗后转移到生长筛选培养基中(1/2MS培养基附加：Bialaphos 2-3mg/L)，24-26光照培养。经过2-3次Bialaphos筛选的转化小苗转移到壮苗培养基(1/2MS培养基附加：0.5mg/L NAA)上，将苗高7-8cm且根系发达的转化苗移栽到花盆，在温室生长发育。成活植株168株。在三叶期，每株取1叶片提取基因组DNA进行转入基因的PCR鉴定，并随后接种白粉病菌，菌种为温室采集的北京地区小麦白粉病菌(Erysiphe graminisf.sp.tritici)混合小种，采用活体摩擦结合抖落孢子的方法接种。接种2周后开始进行苗期和成株期的抗病鉴定。苗期以叶片上无孢子堆和坏死斑者定为高抗(0级)，叶片上有孢子堆者定为感病；成株期的抗病分级按照国际小麦玉米改良中心和国家标准(中华人民共和国国家标准农药田间药效试验标准(一)GB/T1798.22-200，杀菌剂防治禾谷类白粉病)分为9级。

对转pASGT1植株中转化载体上Bar基因进行PCR检测。

Bar基因PCR检测所用引物：

Bar-R：5’-CTTCAGCAGGTGGGTGTAGAGCGTG-3’

Bar-F：5’-CCTGCCTTCATACGCTATTTATTTGCC-3’

总体积25μl的扩增体系：10×PCR buffer 2.5μl，MgCl₂ 2mmol/L，dNTPs0.2mmol/L each，引物Bar-R/Bar-F各0.4μmol/L，Taq DNA聚合酶(天为时代公司)1U，模板DNA约400ng，补水至25μl.

扩增程序：94℃变性5min；94℃45sec，62℃45sec，72℃1min，45个循环；72℃10min。扩增产物1％琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外拍照。Bar基因PCR检测部分结果如图6所示，扩增得到450bp的Bar基因条带的植物为阳性的转基因植物。图6中M为100bp分子量标准(法特捷公司产品)；泳道1为质粒pASGT1中Bar基因片段；泳道2-9为转pASGT1植株中检测为阳性的植株；泳道10为转基因后检测为非阳性的植株；泳道11为ddH₂O；箭头所指片段大小为450bp。

结果表明，共有32株转pASGT1杨麦12植株PCR检测阳性，其中有20株转pASGT1基因、PCR检测阳性的T0代植株高抗白粉病(0级)，而未转基因的杨麦12高感白粉病(7-9级)(图7)，对部分转TiSGT1基因、PCR检测阳性的T0植株接种大麦黄矮病毒(张增艳，辛志勇，陈孝，王晓萍，刘景芳，杜丽璞.源于L1的小麦抗黄矮病基因的特异PCR标记及辅助育种的研究.作物学报，2000，28(4)：486-491)，从20株高抗白粉病的转pASGT1杨麦12植株鉴定出2株转pASGT1植株还抗黄矮病，说明TiSGT1基因在小麦中过量表达能够赋予小麦对白粉病混合菌株高度抗性和对黄矮病抗性。

序列表

<160>2

<210>1

<211>1449

<212>DNA

<213>中间偃麦草(Thinopyrum intermedium)

<400>1

cacctcgacg cagacatggc cgccgccgcc gcgtcggatc tggagagcaa ggccaaggag    60

gccttcgtcg acgacgactt cgagctggcc gccgagctct acacccaggc catcgaggct    120

ggcccagcca ccgccgaact ctacgccgac cgagcccagg cgcacatcaa gctgggcagt    180

tacactgagg ctgtagctga tgccaacaaa gcaattgaac ttgatccttc gatgcataaa    240

gcataccttc ggaagggctc tgcttgcatc aagctggagg aataccaaac tgcaaaggct    300

gctcttgaag tgggttcttc ttatgcatct ggcgactcga ggtttactcg tctgatgaag    360

gagtgtgatg atcgtattgc tgaggaggct agccaggttc cagtaaagaa tgccgctgca    420

gctgttgctc catctacatc ttccggggcc acaactgtgg ctactgaagc tgaggaccag    480

gatggtgcaa atatggagaa tgcacaacca acggtagaag tgccaagcaa gcccaaatac    540

aggcatgact actacaatac tcctacagaa gtggtactga ctatatttgc taagggtgtt    600

ccagctgaca gcgtggttgt tgactttggt gaacagatgc tgagtgtctc aattgaactt    660

cctggtgagg aaccatacca ttttcagcct cgtctgtttt caaagataat cccagataag    720

tgcaagtata ctgtgttgtc tacaaaggtc gaaatgcgcc ttgcaaaagc tgagccagta    780

acttggacat cattggatta tactggtaaa ccaaaggctc ctcagaagat caatgtacca    840

gctgaatcag cccagaggcc atcttatcca tcattaaaat ccaaaaagga ctgggataag    900

cttgaagctg aagtgaaaaa acaggagaag gacgaaaaac ttgatggtga tgctgcattg    960

aacaaatttt tccgtgaaat ttacagtgat gctgatgaag atatgcgtag agcaatgatg    1020

aagtcttttg tggagtctaa tggaaccgtt ctctcaacca actggaaaga tgtcgggaaa    1080

aagactgttg aaggcagccc tcctgatgga atggagctca agaagtggga gtattaatga    1140

gattcagatc atccatgttg taaatcctgg tgatgagtgt taacttggct gcagacttgc    1200

aaatcagtgt cggtcggatt atgtgtgttg ctcttcatta tgtttccgta tttgtaagct    1260

gtttgcgtgg caggttagct tttaagtact tatcctagtt ttgcgagcta cagctggtaa    1320

tagagtaagc catacctgtg catctgtggt atggaagtgc aaaacgtccg ttgtaactgg    1380

tgccaaaact atcatctgtg aaacggtgct attttttgtc tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa    1440

aaaaaaaaa                                                            1449

<210>2

<211>373

<212>PRT

<213>中间偃麦草(Thinopyrum intermedium)

<400>2

Met Ala Ala Ala Ala Ala Ser Asp Leu Glu Ser Lys Ala Lys Glu Ala

1               5                   10                  15

Phe Val Asp Asp Asp Phe Glu Leu Ala Ala Glu Leu Tyr Thr Gln Ala

            20                  25                  30

Ile Glu Ala Gly Pro Ala Thr Ala Glu Leu Tyr Ala Asp Arg Ala Gln

        35                  40                  45

Ala His Ile Lys Leu Gly Ser Tyr Thr Glu Ala Val Ala Asp Ala Asn

    50                  55                  60

Lys Ala Ile Glu Leu Asp Pro Ser Met His Lys Ala Tyr Leu Arg Lys

65                  70                  75                  80

Gly Ser Ala Cys Ile Lys Leu Glu Glu Tyr Gln Thr Ala Lys Ala Ala

                85                  90                  95

Leu Glu Val Gly Ser Ser Tyr Ala Ser Gly Asp Ser Arg Phe Thr Arg

            100                 105                 110

Leu Met Lys Glu Cys Asp Asp Arg Ile Ala Glu Glu Ala Ser Gln Val

        115                 120                 125

Pro Val Lys Asn Ala Ala Ala Ala Val Ala Pro Ser Thr Ser Ser Gly

    130                 135                 140

Ala Thr Thr Val Ala Thr Glu Ala Glu Asp Gln Asp Gly Ala Asn Met

145                 150                 155                 160

Glu Asn Ala Gln Pro Thr Val Glu Val Pro Ser Lys Pro Lys Tyr Arg

                165                 170                 175

His Asp Tyr Tyr Asn Thr Pro Thr Glu Val Val Leu Thr Ile Phe Ala

            180                 185                 190

Lys Gly Val Pro Ala Asp Ser Val Val Val Asp Phe Gly Glu Gln Met

        195                 200                 205

Leu Ser Val Ser Ile Glu Leu Pro Gly Glu Glu Pro Tyr His Phe Gln

    210                 215                 220

Pro Arg Leu Phe Ser Lys Ile Ile Pro Asp Lys Cys Lys Tyr Thr Val

225                 230                 235                 240

Leu Ser Thr Lys Val Glu Met Arg Leu Ala Lys Ala Glu Pro Val Thr

                245                 250                 255

Trp Thr Ser Leu Asp Tyr Thr Gly Lys Pro Lys Ala Pro Gln Lys Ile

            260                 265                 270

Asn Val Pro Ala Glu Ser Ala Gln Arg Pro Ser Tyr Pro Ser Leu Lys

        275                 280                 285

Ser Lys Lys Asp Trp Asp Lys Leu Glu Ala Glu Val Lys Lys Gln Glu

    290                 295                 300

Lys Asp Glu Lys Leu Asp Gly Asp Ala Ala Leu Asn Lys Phe Phe Arg

305                 310                 315                 320

Glu Ile Tyr Ser Asp Ala Asp Glu Asp Met Arg Arg Ala Met Met Lys

                325                 330                 335

Ser Phe Val Glu Ser Asn Gly Thr Val Leu Ser Thr Asn Trp Lys Asp

            340                 345                 350

Val Gly Lys Lys Thr Val Glu Gly Ser Pro Pro Asp Gly Met Glu Leu

        355                 360                 365

Lys Lys Trp Glu Tyr

    370

Claims (10)

1、一种植物抗病相关蛋白，是具有下述氨基酸序列之一的蛋白质：

1)序列表中的SEQ ID №：2的氨基酸残基序列；

2)将序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病相关的蛋白质。

2、权利要求1所述的植物抗病相关蛋白的编码基因。

3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：所述植物抗病相关蛋白的cDNA基因，具有下述核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；

2)编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质序列的多核苷酸序列；

3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

4、含有权利要求2或3所述基因的表达载体。

5、含有权利要求2或3所述基因的细胞系。

6、含有权利要求2或3所述基因的宿主菌。

7、权利要求1所述的植物抗病相关蛋白及其编码基因在提高植物抗病性中的应用。

8、根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述抗病性为白粉病抗性和黄矮病抗性。

9、根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于：所述提高植物抗病性为提高小麦的白粉病抗性。

10、根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于：所述提高植物抗病性为提高小麦的黄矮病抗性。

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