CN101003536A - 恩替卡韦盐及其制备 - Google Patents

Abstract

本发明公开了恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐、恩替卡韦钡盐及其制备方法。本发明的恩替卡韦酸加成盐为恩替卡韦与有机酸或无机酸反应所制得盐，优选恩替卡韦盐酸盐，恩替卡韦溴酸盐，恩替卡韦硫酸盐，恩替卡韦磷酸盐，恩替卡韦甲磺酸盐和恩替卡韦苯磺酸。本发明中的恩替卡韦盐是稳定的，具有比恩替卡韦本身有更大的水溶性，更适用于作为原料药和用于制备药物制剂。本发明中的恩替卡韦盐类化合物有抗乙肝病毒的用途。

Description

恩替卡韦盐及其制备

技术领域

本发明涉及恩替卡韦酸加成盐和恩替卡韦碱盐。本发明还涉及所述恩替卡韦盐的制备方法，药物制剂及其抗乙肝病毒的用途。

背景技术

恩替卡韦(entecavir or BMS-200475)，化学名为：[1S-(1α，3α，4β)]-2-氨基-1，9-二氢-9-[4-羟基-3-羟甲基]-2-亚甲基环戊基]-6H-嘌呤-6-酮，分子结构如下：

恩替卡韦是一种能有效抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的2’-戊环脱氧鸟嘌呤核苷类似物，用于治疗乙型(B)肝炎。恩替卡韦的耐受性好，且不良反应都是轻度和可逆的。该药在降低病人体内HBV病毒负荷和抑制病毒复制方面的作用都要比拉米夫定(lamuvidine)强100至1000倍。

美国专利(US5,206,244)公开了恩替卡韦和其制备治疗乙型肝炎的用途。改进后的合成恩替卡韦方法公开于文件WO98/09964、WO04/052310和WO05118585中。专利申请CN1310999(US6627224)公开了低剂量恩替卡韦的制剂及其应用。专利申请CN1566118公开了恩替卡韦碱盐，如恩替卡韦铵盐，钙盐，钠盐及其制备方法。

恩替卡韦为中性化合物，在水中的溶解性较低仅为微溶(约2mg/ml)。为增加其水溶性，专利申请CN1566118制备了的恩替卡韦碱盐，恩替卡韦碱盐不是有机酸与碱所形成的加成盐，而是恩替卡韦通过烯醇化作用之后，烯醇中的羟基具有微弱的酸性，可与强碱如氢氧化钠或氢氧化钾反应而形成一种烯醇盐，其中恩替卡韦的鸟嘌呤核苷结构部分已经发生了较大的改变，专利申请CN1566118的恩替卡韦碱盐的化学结构如下所示：

由于恩替卡韦碱盐是一种烯醇盐，不是很稳定，在中性溶液如pH＝7.5水溶液中，有约2％的盐存在，其余(98％)全部转化为恩替卡韦中性分子；在固体状态下，烯醇盐也有可能比恩替卡韦本身更易被氧化而降解。

所以，为增加恩替卡韦的水溶解度，从而提高恩替卡韦的生物利用度，同时克服恩替卡韦碱盐不够稳定的缺陷，有必须寻找和制备一种新的、更稳定或更合适于药物制剂制备的恩替卡韦盐，例如恩替卡韦酸加成盐。以上引用的文件及其它现有文件中没有教导恩替卡韦酸加成盐及其制备方法。

发明内容

我们现在意外地发现，用有机强酸如磺酸或无机强酸与恩替卡韦反应，在适当条件下，可以用简便的、成本的制备方法制得稳定的、溶解性比恩替卡韦大100倍以上的、结晶性的及物体流动性更好的恩替卡韦酸加成盐。

一方面，本发明提供了恩替卡韦酸加成盐。本发明中的酸是指有机酸和无机酸。本发明中的有机酸是指pKa小于2.6的任何有机酸，优选磺酸类有机酸，最优选甲磺酸和苯磺酸。本发明中的无机酸可以是任选的无机酸，优选盐酸(HCl)，氢溴盐(HBr)，硫酸(H₂SO₄)及磷酸(H₃PO₄)。

具体地说，本发明的恩替卡韦酸加成盐，优选盐酸恩替卡韦盐，溴酸恩替卡韦盐，硫酸恩替卡韦盐，磷酸恩替卡韦盐，甲磺酸恩替卡韦盐及苯磺酸恩替卡韦盐。

本发明中的恩替卡韦酸加成盐，是由强酸中的质子与恩替卡韦分子中的氮原子结合而形成HN+正离子，再与相应酸根负离子形成离子对后形成酸加成盐，其中恩替卡韦的结构并没有改变。这种盐不论是其在固体状态下，或溶解于水溶液中，均是稳定的，特别是比恩替卡韦碱盐更稳定，恩替卡韦酸加成的化学结构如下所示：

此外，本发明的恩替卡韦酸加成盐的水溶解性，与原中性分子恩替卡韦相比，要增加100倍以上，恩替卡韦酸加成盐在水中的溶解度实验结果见表一。

                  表一：恩替卡韦酸加成盐溶解度实验结果

化合物	恩替卡韦	盐酸盐	溴酸盐	硫酸盐	磷酸盐	甲磺酸盐	苯磺酸盐
								溶解度(mg/mL)	2.1	230	220	225	230	210	180

应该理解，本发明的恩替卡韦酸加成盐包括无水恩替卡韦酸加成盐和恩替卡韦酸加成盐水合物，恩替卡韦酸加成盐与水的摩尔比为1∶0.5-5.0，优选1∶1-2。本发明的恩替卡韦酸加成盐还包括任何物理形态如无定形、结晶形或两者的以任何比例组成的混合物的固体物质。

另一方面，本发明提供了制备恩替卡韦酸加成盐的方法，包括以下步骤：a)以恩替卡韦为初始原料，让其溶解于二甲基乙酰胺(DMA)溶剂中，b)加入0.1N-3N乙醇酸溶液，c)在室温下搅拌反应溶液，反应后得到产物，过滤反应物，d)用少许无水乙醚洗涤固体产物，并在真空度约为30-80mmHg，温度为35-65度(摄氏，下同)条件下干燥固体产物，e)从乙醇中重结晶即得到恩替卡韦酸加成盐。

本发明的制备恩替卡韦酸加成盐的方法中，初始原料恩替卡韦可按文件US,206,244或其它文件WO098/09964，WO04052310，WO05118585所描述的方法制备。初始原料恩替卡韦可以是粗的或纯的化合物，优选纯度为95％，更优选纯度为98％。初始原料恩替卡韦可以是无水恩替卡韦或恩替卡韦水合物，可以是任何物理形态如无定形、结晶形或两者以任何比例组成的混合物。

本发明的制备恩替卡韦酸加成盐的方法中，酸溶液的浓度为0.1N至3N，优选1N至2N。酸溶液包括盐酸溶液，氢溴酸溶液，硫酸溶液，磷酸溶液，甲磺酸溶液和苯磺酸溶液。乙醇酸溶液(0.1N-3N)的制备可通过相应的浓酸用乙醇溶剂稀释来配制。

根据本发明的再一方面，提供了一种恩替卡韦碱盐，优选恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐，其化学结构如下所示：

恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐不是恩替卡韦与碱反应所形成的简单的碱加成盐，而是由于恩替卡韦分子在一定条件如pH大于7水溶液中，会形成少量的烯醇，该烯醇是一种弱酸，其pKa为8.5左右，在强碱溶液中(如pH大于10.0)，可以定量地转化(去质子化)为烯醇阴离子，与正离子如Mg²⁺或Ba²⁺形成烯醇盐，恩替卡韦碱盐在水溶液中的存在形式取决水溶液的pH值，例如在pH小于7.0的水溶液中，98％的分子是中性分子恩替卡韦形式存在，在pH大于10的水溶液中，大于95％的分子是以烯醇盐的形式存在，如下所示：

本发明中的恩替卡韦镁盐，包括无水恩替卡韦镁盐，恩替卡韦镁盐水合物，其中恩替卡韦镁盐与水分子的摩尔比为0.5∶1-4，优选1∶1-2，还包括无定形、结晶形及两者的任何比例组成的混合物。

本发明中的恩替卡韦钡盐，包括无水恩替卡韦钡盐，恩替卡韦钡盐水合物，其中恩替卡韦钡盐与水分子的摩尔比为0.5∶1-4，优选1∶1-2，还包括无定形、结晶形及两者的任何比例组成的混合物。

恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐虽然不如恩替卡韦酸加盐稳定，但作为原料药，其水溶解性大大高于恩替卡韦(大100倍以上)，仍然有其优势。

另一方面，本发明还提供了恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐的制备方法，该方法包括下列步骤：将恩替卡韦初始原料溶解于合适的有机溶剂如乙醇中，慢慢加入0.1N-2N氢氧化镁或氢氧化钡溶液，调节溶液的至pH大于10，搅拌反应溶液，反应1-2小时后，浓缩反应溶液，用乙醇重结晶所得固体产物进一步真空干燥(35-65度，30-80mmHg)得到固态的恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐。

再另一方面，本发明提供了恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的药物制剂。由本发明中所制得的恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐，再加上其它的药用载体可以进一步加工成各种药物制剂，所以本发明进一步提供了一种含有效量的恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的药物制剂，其形式是单个如一片或一颗药物制剂，如粉剂、片剂和胶囊剂。这种单位药物制剂有多种，可以是口服或注射形式的药物制剂。

本发明中的含恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的药物制剂也可以通过吸入形式或皮肤外用的形式给药。本发明中的恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐可以通过静脉内的或肌肉内的等多种注射形式给药。

对于制备含恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的药物制剂，所选用的药学上可接受的载体是固体或液体。

固体型态的药物制剂包括粉剂、片剂、药丸、胶囊剂、栓剂和分散片。固态的载体可以是一种或者多种物质。这些物质可以是稀释剂、调味剂、溶解剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、用于制造片剂的崩解剂、或是一种封入式的胶囊材料。

对于粉剂，其载体是一种很精细地分散好的颗粒固体，并与精细地分散了的活性组分相混合。对于片剂，含活性组分与具有粘和性质的载体相混合，按照一定的比例混合以后压成相应形状和适当大小的片剂。

在药物制剂中，恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的含量为0.1％至50％的重量比。其它合适的载体包括碳酸镁，硬酯酸镁，滑石，糖或乳糖，果胶，糊精，淀粉，明胶，黄蓍糖，甲基纤维素，羧甲基纤维素纳，低溶点的蜡或可可牛油。片剂、粉剂、胶囊剂、分散片、药丸、和糖锭剂也可以用作以口服形式服用的固体药物制剂。

对于片剂的制备，可以通过用一种或多种载体由压缩和模制方法来制造。压缩片剂的制作方式是用合适的压片机来压缩以粉未或颗粒形式存在的活性组分和粘合剂。例如，凝胶、羟丙基甲基纤维素钠)，润滑剂、惰性辅料、防腐剂和崩解剂(如淀粉乙醇酸钠、交叉联结的聚乙烯吡略烷酮、羧甲基纤维素纳)或分散剂。模制片剂的制作方式是用合适的制模机来模制以粉未或颗粒形式存在的活性组分和其它惰性载体所组成的混合物。片剂还可以制成包衣片，也可配制为缓释或控释剂型。

对于胶囊剂的制备，可以通过用一种或多种载体与粉未或颗粒形式存在的活性组分均匀地混合后，装入适当规格的胶囊壳中。

本发明中所述的口服液可由制成均匀的溶液及混悬液，例如水或水和丙二醇溶液。对注射液也可做成水和聚丙二醇溶液。这种口服液可由常规方法用药学上可接受的载体如悬浮试剂：如山梨(糖)醇浆，纤维素衍生物或氢化后的可食用脂肪，乳化剂(如卵磷脂)，非水载体以及防腐剂(甲基或丙基乙苯酸酯)来制备。口服液制剂也可含有色素、甜味剂和缓冲盐。

用水混悬液制成的口服液可用以下方法制备：将活性组分溶于水中，再加入粘度较高的材料如天然或合成的胶，树脂，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素钠等常用的悬浮剂。

本发明中所述的口服液还包括制成均匀的干粉剂后在使用前再用水溶解。本发明中所述的药物制剂优选单个药物制剂，这种形式的制剂还可以进一步分折成有适当量的活性组分的单个制剂。单个药物制剂可以是包装的置于管瓶或安瓶中的形式，它含一定量的药物制剂如片剂，胶囊或粉剂等。另外，单位药物制剂可以是片剂，胶囊剂或粉剂或任何置于包装中的剂型。

恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的单位药物制剂如每片或每剂中活性组分的含量在0.1毫克至10毫克，优选0.2毫克至5毫克，最优选0,5毫克至2毫克，并根据活性组分的强度和具体用途而定，在这个范围内是可变或可调节的。另外，含恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐的药物制剂中还可含有另外一种相匹配的药用物质如阿德福韦酯、拉米夫定或含有另外两种相匹配的药用物质如阿德福韦酯和拉米夫定。

恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐与阿地福韦酯复方的单位药物制剂如每片或每剂中活性组分的含量在0.1毫克至100毫克范围内是可变或可调节的，优选0.5毫克至20毫克，最优选5毫克至10毫克，并根据活性组分的强度和具体用途而定。在复方制剂中，恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐与阿地福韦酯的重量比为0.1-1∶10，优选0.5-1∶10。另外，含恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐与阿地福韦酯复方药物制剂中还可含有其它的一种相匹配的药用物质如拉米夫定或emtricitabine。

如前所述，恩替卡韦是核苷类抗乙肝病毒(HBV)十分有效的药物。该药物在体内外有极强的抑制HBV复制的活性。体外抑制HBV复制的活性试验表明，恩替卡韦对抑制由拉米夫定耐药而产生的YMDD变异的乙型肝炎病毒(HBV)也有效。本发明的恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐抗乙型肝炎病毒的作用比恩替卡韦本身还略强，实验结果详见实施例9。所以，本发明提供了恩替卡韦酸加成盐、恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐及其药物制剂在制备抗乙肝病毒和/或并发感染病中作为药的用途.

虽然描述了本发明具体方案，但对本领域有经验的技术人员显而易见的某些修改或等同的情形也应包括在本发范围之内。

以下实施例用来说明本发明的具体方案，实施例不限制本发明的范围。

具体实施方式

实施例1：盐酸恩替卡韦盐的制备

将3g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升二甲基乙酰胺(DMA)中，慢慢加入10毫升2N的盐酸乙醇溶液，不断搅拌反应溶液，在室温下反应1小时后，过滤反应产物，用少许无水乙醚洗涤固体产物。真空干燥(40℃，30mmHg)产物，用无水乙醇溶剂重结晶，得到2.4g(产率80％)盐酸恩替卡韦盐白色结晶体(溶点大于250℃)。元素分析结果C₁₂H₁₆N₅O₃Cl，计算值：C，45.94；H，5.14；Cl，11.30；N，22.32；O，15.30。实验值：C，45.90，H5.11，Cl，11.35，N，22.30。

核磁共振图谱数据如下：¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz，ppm)，11.89(brs，1H)，7.46(s，2H)，8.86(s，1H)，5.22(t，J＝12Hz，2H)，5.17(br，1H)，4.98(br，1H)，4.21(m，2H)，3.68(m，1H)，3.99(t，H)，2.54(m，1H)，2.15(m，1H)，1.98(m，1H).¹³C NMR(DMSO-d₆，90MHz，ppm)：154.7，153.0，148.9，138.5，117.8，112.0，108.2，73.8，72.1，59.0，55.7，38.6。

重复上述反应，用乙醇与水溶剂(90∶10，体积比)重结晶，得到2.1g(产率70％)盐酸恩替卡韦盐水合物白色结晶体(溶点大于230℃)。元素分析结果C₁₂H₁₆N₅O₃Cl.H₂O，计算值：C，39.58；H，4.83；Cl，10.62；N，20.99；O，23.97；实验值：C，39.54；H，4.80；Cl，10.57；N，20.93。核磁共振图谱数据与盐酸恩替卡韦盐相同。

实施例2：溴酸恩替卡韦盐的制备

将2.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升二甲基乙酰胺(DMA)中，慢慢加入10毫升2N的氢溴酸乙醇溶液，不断搅拌反应溶液，在室温下反应1小时后，过滤反应产物，用少许无水乙醚洗涤固体产物。真空干燥(40℃，30mmHg)产物，用无水乙醇溶剂重结晶，得到1.7g(产率85％)溴酸恩替卡韦盐白色结晶体(溶点大于260℃)。元素分析结果C₁₂H₁₆N₅O₃Br，计算值：C，40.24；H，4.50；Br，22.31；N，19.55；O，13.40。实验值：C，40.30，H，4.52，Br，22.35，N，19.50。核磁共振图谱数据与实施例1相同。

实施例3：硫酸恩替卡韦盐的制备

将2.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升二甲基乙酰胺(DMA)中，慢慢加入10毫升1N的乙醇硫酸溶液，不断搅拌反应溶液，在室温下反应1小时后，过滤反应产物，用少许无水乙醚洗涤固体产物。真空干燥(40℃，30mmHg)产物，用无水乙醇溶剂重结晶，得到1.5g(产率75％)硫酸恩替卡韦盐白色结晶体(溶点大于280℃)。元素分析结果[C₁₂H₁₆N₅O₃]₂SO₄，计算值：C，44.17，H，4.94；N，21.46；O，24.52；S，4.91。实验值：C，44.13；H，4.91；N，21.41；S，4.87。核磁共振图谱数据与实施例1相同。

实施例4：磷酸恩替卡韦盐的制备

将2.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升二甲基乙酰胺(DMA)中，慢慢加入10毫升1N的磷酸乙醇溶液，不断搅拌反应溶液，在室温下反应1小时后，过滤反应产物，用少许无水乙醚洗涤固体产物。真空干燥(40℃，30mmHg)产物，用无水乙醇溶剂重结晶，得到1.7g(产率85％)恩替卡韦二氢磷酸盐白色结晶体(溶点大于250℃)。元素分析结果[C₁₂H₁₆N₅O₃].H₂PO₄，计算值：C，38.41；H，4.83；N，18.66；O，29.84；P，8.25。实验值：C，38.45；H，4.80；N，18.62；P，8.29。核磁共振图谱数据与实施例1相同。

实施例5：甲磺酸恩替卡韦盐的制备

将2.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升二甲基乙酰胺(DMA)中，慢慢加入10毫升2N的甲磺酸乙醇溶液，不断搅拌反应溶液，在室温下反应1小时后，过滤反应产物，用少许无水乙醚洗涤固体产物。真空干燥(40℃，30mmHg)产物，用无水乙醇溶剂重结晶，得到1.6g(产率80％)甲磺酸恩替卡韦盐白色结晶体(溶点大于250℃)。元素分析结果[C₁₂H₁₆N₅O₃].CH₃SO₃，计算值：C，41.82：H，5.13；N，18.76；O，25.71；S，8.59。实验值：C，41.76；H，5.10；N，18.79；S，8.56。

恩替卡韦甲磺酸盐核磁共振图谱数据如下：¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz，ppm)，12.0(brs，1H)，7.46(s，2H)，8.86(s，1H)，5.22(t，J＝12Hz，2H)，5.17(br，1H)，4.98(br，1H)，4.21(m，2H)，3.68(m，1H)，3.99(t，H)，2.89(s，3H)，2.54(m，1H)，2.15(m，1H)，1.98(m，1H).¹³C NMR(DMSO-d₆，90MHz，ppm)：154.7，153.0，148.9，138.5，117.8，112.0，108.2，73.8，72.1，59.0，55.7，42.5，38.6。

重复上述反应，用乙醇与水溶剂(90∶10，体积比)重结晶，得到1.8g(产率90％)甲磺酸恩替卡韦盐水合物白色结晶体。元素分析结果[C₁₂H₁₆N₅O₃].CH₃SO₃.H₂O，计算值：C，36.64；H，4.87；N，17.80；O，32.54；S，8.15。实验值：C，36.58；H，4.93；N，17.72；S，8.21。核磁共振图谱数据与恩替卡韦甲磺酸盐相同。

实施例6：苯磺酸恩替卡韦盐的制备

将2.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升二甲基乙酰胺(DMA)中，慢慢加入10毫升2N的苯磺酸乙醇溶液，不断搅拌反应溶液，在室温下反应1小时后，过滤反应产物，用少许无水乙醚洗涤固体产物。真空干燥(40℃，30mmHg)产物，用乙醇溶剂重结晶，得到1.6g(产率80％)苯磺酸恩替卡韦盐白色结晶体。元素分析结果[C₁₂H₁₆N₅O₃].PhSO₃，计算值：C，49.65；H，4.86；N，16.08；O，22.05；S，7.36。实验值：C，49.60；H，4.83；N，16.12；S，7.30。

核磁共振图谱数据如下：¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz，ppm)，11.92(brs，1H)，7，93(d，2H)，7.55(m，2H)，7.32(m，1H)，7.46(s，2H)，8.86(s，1H)，5.22(t，J＝12Hz，2H)，5.17(br，1H)，4.98(br，1H)，4.21(m，2H)，3.68(m，1H)，3.99(t，H)，2.54(m，1H)，2.15(m，1H)，1.98(m，1H).¹³CNMR(DMSO-d₆，90MHz，ppm)：154.7，153.0，148.9，138.5，145.6，128.5，129.8，133.8，117.8，112.0，108.2，73.8，72.1，59.0，55.7，38.6。

实施例7：恩替卡韦镁盐的制备

将1.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升乙醇中，慢慢加入20毫升0.2N氢氧化镁溶液中，混合搅拌至完全溶解，调节反应溶液的pH值至大于10，进一步搅拌反应溶液，反应1小时后，浓缩反应溶液，用乙醇重结晶所得固体产物进一步真空干燥(40度，30mmHg)得到固态的恩替卡韦镁盐(0.8g，产率80％)。元素分析结果[C₁₂H₁₄N₅O₃]₂Mg²⁺，计算值：C，49.97；H，4.89；Mg，4.21；N，24.28；O，16.64。实验值：C，49.91；H，4.83；Mg，4.25；N，24.23。

核磁共振图谱数据如下：¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz，ppm)，7.47(s，1H)，5.50(brs，1H)，5.32(t，1H))，5.19(br，2H)，5.08(s，1H)，4.97(br，1H)，4.59(s，1H)，4.24(s，1H)，3.59(t，2H)，2.56(s，1H)，2.28(m，1H)，2.05(m，1H)。¹³C NMR(DMSO-d₆，90MHz，ppm)：167.8，161.3，152.6，152.1，134.7，118.9，110.2，71.7，64.2，55.9，53.9，40.6.

实施例8：恩替卡韦钡盐的制备

将1.0g恩替卡韦(按文件US5,206244实例K的方法制备)溶解于20毫升乙醇中，慢慢加入20毫升0.2N氢氧化钡溶液中，混合搅拌至完全溶解，调节反应溶液的pH值至大于10，进一步，搅拌反应溶液，反应1-2小时后，浓缩反应溶液，用乙醇重结晶所得固体产物进一步真空干燥(40度，30mmHg)得到固态的恩替卡韦钡盐(0.75g，产率75％)。元素分析结果[C₁₂H₁₄N₅O₃]₂Ba²⁺，计算值：C，41.78；H，4.09；Ba，19.91；N，20.30；O，13.92。实验值：C，41.75；H，4.05；Ba，19.85；N，20.23。核磁共振图谱数据与实施例7相同。

实施例9：检测恩替卡韦盐在体外的抗乙型肝炎(HBV)病毒活性

测试化合物为恩替卡韦，盐酸恩替卡韦盐，溴酸恩替卡韦盐，硫酸恩替卡韦盐，磷酸恩替卡韦盐，甲磺酸恩替卡韦盐，苯磺酸恩替卡韦盐，恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐，这些化合物都以固体原料药形式存在。乙肝病毒HBV含量测定方法采用文件(Jansen R W等，Antimicrob Agents Chem 1993；37(3)：441-447)中所述的方法。所要测试的活性化合物溶解于二甲亚砜(DMSO)中，制成浓度为100mM的初始溶液。日常用的测试化合物溶液存放于负20度的冰箱内保存。

人体的和且有产生乙肝病毒的肝原细胞(Hep-G2.2.15)种入1ml小管瓶中，并用细胞培养液加以培养(200微升)，小管瓶中置入具有96井孔的微盘中。这些在小管瓶中的细胞分别用盐酸恩替卡韦，溴酸恩替卡韦，硫酸恩替卡韦，磷酸恩替卡韦，甲磺酸恩替卡韦，苯磺酸恩替卡韦，恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐加以处理。每个活性化合物分别加入微盘中的三个小管瓶中。加入微盘中小管瓶前，活性化合物的初始溶液用溶剂二甲亚砜进一步稀释后，其浓度为1.0nM(以恩替卡韦中性分子计算)。每次注入小管瓶中的活性化合物溶液的量为30微升。如此重复三个微盘。含有活性化合物的培养液每隔一天用新鲜配制的不含活性化合物的培养液补充一次(100微升)，直到第九天；同时取出相等量的上层清液(100微升)并进行处理和分折。以没有经活性化合物处理过的细胞中乙肝病毒数量为基数，来计算经活性化合物处理后细胞中所剩乙肝病毒数量的百分比(也称为抑制率)。实验结果见表二。

实验结果清楚地表明恩替卡韦酸加成盐和恩替卡韦碱盐在很低的浓度时(0.5nM)就具有强的抑制乙肝病毒的活性，与恩替卡韦活性相同或略强一些。

表二：恩替卡韦盐抗乙肝病毒的抑制率(P＜0.05，n＝9)

活性化合物	抗乙肝病毒抑制率的平均值(n＝6)
		恩替卡韦	56±4％
盐酸恩替卡韦盐	64±4％
		溴酸恩替卡韦盐	62±4％
硫酸恩替卡韦盐	60±4％
		磷酸恩替卡韦盐	62±4％
甲磺酸恩替卡韦盐	64±4％
		苯磺酸恩替卡韦盐	62±4％
恩替卡韦镁盐	64±4％
		恩替卡韦钡盐	62±4％

实施例10：制备含恩替卡韦盐药物制剂

用以制备含恩替卡韦盐，加上其它药学上可接受的辅料的药物片剂的配方见表三。用以制备含恩替卡韦盐，加上其它辅料的药物胶囊剂的配方见表四。

对于片剂的制备，表三列举了含恩替卡韦盐为活性组分的三种配方，其中配方A为含1.0毫克盐酸恩替卡韦盐的速释片，配方B为含1.0毫克溴酸恩替卡韦盐的速释片，配方C为含1.0毫克恩替卡韦镁盐的速释片。片剂的制备主要有两步：

(1)制备恩替卡韦镁盐为活性组分的片心层；(2)表面盖覆修饰片心层制得包衣片剂。具体步骤为：恩替卡韦盐用60目筛，其它辅料用80目筛。目筛的物料用鼓转混合机以100rpm速率混合15-25分钟，制得均匀的混合物料。用压片机压片制成片心层。片心层转入片剂表面盖覆机，机床用热空气加热至50-70摄氏度，在喷雾开始前，转盘速度调至5-9rpm，排气保持40-50摄氏度。表面盖覆后的包衣片剂干燥5-15分钟。片剂分装于含干燥剂的药瓶中，加封储存对于胶囊剂的制备，表

         表三：含恩替卡韦盐的片剂配方

组分	毫克/片
				配方A	配方B	配方C
	盐酸恩替卡韦盐	1.0	-				-
溴酸恩替卡韦盐				-	1.0	-
	恩替卡韦镁盐	-	-				1.0
纤维素(Avicel PH-101/102)				60	90	20
	干乳糖	29	-				67
淀粉甘醇酸酯钠				8	7	10
	硬酯酸镁	2	2				2
表面修饰(速释片)，白乳干(opadry white)，水*				5	5	5
	总量	100	100				100

*制备过程中蒸发掉

四列举了恩替卡韦盐为活性组分的三种胶囊剂的配方，其中配方A为含1.0毫克盐酸恩替卡韦盐速释胶囊剂，配方B为含1.0毫克溴酸恩替卡韦盐的速释胶囊剂，配方C为含1.0毫克恩替卡韦镁盐速释胶囊剂。胶囊剂的制备主要有以下步骤：恩替卡韦盐用60目筛，其它辅料用80目筛。目筛的物料用鼓转混合机以100rpm速率混合15分钟，得到均匀的混合物料。对速释胶囊剂，混合物料直接装入合适的胶囊壳中，胶囊分装于含干燥剂的药瓶中，加封储存。

          表四：含恩替卡韦盐的胶囊剂配方

组分	毫克/粒
				配方A	配方B	配方C
	恩替卡韦镁盐	1.0	-				-
溴酸恩替卡韦盐				-	1.0	-
	盐酸恩替卡韦盐	-	-				1.0
微晶纤维素(Avicel PH-101/102)				70	50	29
	干乳糖	59	89				100
淀粉甘醇酸酯钠				6	6	6
	滑石粉	4	4				4
总量				140	140	140

Claims (15)

1.一种恩替卡韦酸加成盐，其特征是酸为无机酸和有机酸，无机酸为盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，有机酸为甲磺酸和苯磺酸。

2.根据权利要求1所述的恩替卡韦酸加成盐，其特征是盐酸恩替卡韦盐。

3.根据权利要求1所述的恩替卡韦酸加成盐，其特征是溴酸恩替卡韦盐。

4.根据权利要求1所述的恩替卡韦酸加成盐，其特征是甲磺酸恩替卡韦盐。

5.根据权利要求1所述的恩替卡韦酸加成盐，其特征是苯磺酸恩替卡韦盐。

6.根据权利要求1所述的恩替卡韦酸加成盐，其特征是硫酸恩替卡韦盐。

7.根据权利要求1所述的恩替卡韦酸加成盐，其特征是磷酸恩替卡韦盐。

8.一种恩替卡韦碱盐，其特征是恩替卡韦镁盐和恩替卡韦钡盐。

9.根据权利要求8所述的恩替卡韦碱盐，其特征是恩替卡韦镁盐。

10.根据权利要求8所述的恩替卡韦碱盐，其特征是恩替卡韦钡盐。

11.权利要求1-10所述的化合物在制备抗乙肝病毒感染疾病中作为药的用途。

12.一种制备恩替卡韦酸加成盐的方法，其特征是包括以下步骤：a)将恩替卡韦初始原料溶解于二甲基乙酰胺(DMA)溶剂中，b)加入0.1N-3N乙醇酸溶液，c)在室温下搅拌反应溶液得到产物，过滤反应物，d)用少许无水乙醚洗涤固体产物，干燥固体产物，e)从乙醇中重结晶即得到恩替卡韦酸加成盐。

13.一种制备恩替卡韦碱盐的方法，其特征是包括以下步骤：将恩替卡韦初始原料溶解于合适的有机溶剂如乙醇中，慢慢加入0.1N-2N氢氧化镁或氢氧化钡溶液，调节溶液的至pH大于10，搅拌反应溶液，反应1-2小时后，浓缩反应溶液，用乙醇重结晶所得固体产物进一步真空干燥得到固态的恩替卡韦镁盐或恩替卡韦钡盐。

14.一种含权利要求1-10所述的化合物作为活性成分的药物制剂，加上药学上可接受的辅料或载体组成。

15.根据权利要求13所述的药物制剂，其特征是粉剂、片剂、栓剂，药丸、糖锭剂，胶囊剂，分散片，注射剂和口服液。