CN100589831C - 大川芎干粉制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种大川芎干粉制剂的制作方法，该制备方法通过乙醇煎煮和回收滤液中乙醇的方式将川芎滤液浓缩至浸膏1、天麻滤液浓缩至浸膏2，再利用柱层析法分别对浸膏1和浸膏2上柱洗脱，经合并柱洗脱液即为该大川芎干粉制剂的活性组分。该大川芎干粉制剂具有良好的活血化瘀、平肝熄风功能，将该制中加入常规辅料可配制成不同种剂型，这些剂型均可用于治疗或预防脑血管方面疾病。

Description

大川芎干粉制剂的制备方法

技术领域：

本发明涉及一种用于预防或治疗脑血管方面病症的大川芎干粉制剂，以及制备该制剂的方法和干粉制剂的用途。

背景技术：

脑血管病最常见的有脑缺血性中风，临床表现为头痛、头晕、耳鸣目眩，腰酸腿软，手足沉重麻木，口眼歪斜，半身不遂等症。脑缺血性中风的发病机理是由于脑部血液循行瘀滞，经脉阻痹不通而引起的，发病多在动脉粥样硬化基础上，造成动脉内膜损伤，血小板积聚形成血栓，阻塞脑内动脉，而致缺血性中风(即脑梗塞)。现用于治疗缺血性中风的中药针剂主要有德国由威玛舒培博士药厂生产的金纳多注射液(银杏叶注射液)，该药主要具有清除自由基，调正循环系统，改善血流变作用。另外，由牡丹江市友博制药厂生产的疏血通注射液也是用于治疗脑血管方面病症的药物。该注射剂由中药水蛭和地龙制成，具有活血化瘀，抗凝功能。但，上述两种注射剂在临床应用中，第一种无活血化瘀及抗凝，抗血小板聚集，促进纤溶功能；而第二种具有过敏和继发出血的副作用。

中国专利1634208号公告了一种名称为“注射用冠心宁及其制备方法”的技术。该专利是以丹参和川芎为原料药，并加赋形剂经冷冻制成冻干粉针剂或注射剂，且在提取丹参时，首先采用乙醇回流提取，然后再采用水煎煮提取上清液，以及经醇沉和浓缩等步骤制取浸膏；而在提取川芎时，先采用乙醇超声提取3-4次，将合并后的滤液浓缩制取浸膏，再以丹参和川芎提取液作为活性成份制成冻干粉针剂。由于该专利采用水煎后再醇沉提取的方式，且在提取后没有进一步分离的步骤，所以，其制备工艺相对粗糙，制剂的有效成分含量很难达到对中药注射剂已知活性成分含量的要求。

另外，中国专利1559417号还公告了一种名称为“天麻素静脉注射液及其制备方法”的技术。该专利以天麻为活性成份并加药用载体制成注射剂。在制取天麻素浓配液时，先将水和助溶剂搅拌使助溶剂溶解，然后再加入天麻素。可见，该专利采用人工化学合成的方式制取天麻素的单方制剂，并非中药制剂。

在现有技术中，还没有发现采用川芎提取物和天麻提取物的混合物治疗脑血管供血不足和脑血管梗塞等病症的静脉注射药物。

发明内容：

本发明的涉及一种用于预防或治疗脑血管方面疾病的大川芎干粉制剂。

本发明另一个任务是提供一种用于制备上述大川芎干粉制剂的方法。

本发明所提取的大川芎干粉制剂基本由重量份额为40％--80％的川芎提取物和20％--60％的天麻提取物的混合物构成。川芎味辛性温，有活血行气，祛风止痛的功效，能上行头痛、主中风入脑等症；天麻味甘性平，有息风止痉、平肝潜阳，祛风通络之功能，可治疗肝阳上亢，眩晕脑胀、头痛，肝风内动的肢体麻木，手足不遂，惊痫抽风等症。现化医学认为，脑血管供血不足和脑血管梗塞在通常情况下是因脑血管硬化痉挛、管腔狭窄及血液浓凝聚集，血脂升高等所致，川芎和天麻有扩张脑血管增加血流量，抗血小板凝聚，降低血粘度及纤溶等功能。

所述混合物中还添加有重量是川芎和天麻提取物的总重量的30％--50％的右旋糖酐。

所述混合物的PH值在5-9之间。

所述混合物中的川芎提取物和天麻提取物，以及右旋糖酐的重量份额分别为：30％--50％，10％--30％，30％--50％。

用于制备上述大川芎干粉制剂的方法，包括以下步骤：

(1)、称取川芎和天麻原料药备用；

(2)、将所述重量份额的川芎和天麻放入各自的容器中，并用总重量是川芎20-30倍或天麻13-20倍的乙醇煎煮，然后分别对煎液进行滤过，回收滤液中乙醇，并将川芎滤液浓缩至浸膏1，天麻滤液浓缩至浸膏2；

(3)、利用柱层析法分别对浸膏1和浸膏2进行柱层析，最后合并柱洗脱液，减压回收乙醇和水，并将川芎洗脱液和天麻洗脱液分别浓缩成浸膏3和浸膏4；

(4)、合并所述浸膏3和浸膏4即为该大川芎干粉制剂的活性组分。

在步骤(4)的活性组分中加入所述重量的右旋糖酐，经分装、冷冻、干燥即得成品大川芎冻干粉针剂。

在步骤(2)的煎煮步骤中，向川芎原料药内加入重量是其20-30倍的且浓度为70％--90％的乙醇，分2-3次煎煮，每次煎煮时间为1-2小时，并采用减压回收乙醇的方法将煎液浓缩成浸膏1；而向天麻原料药内共加入重量是其13-20倍的浓度为40％--70％的乙醇，分2-3次煎煮，每次煎煮时间为1-2小时，再采用减压回收乙醇的方法将煎液浓缩成浸膏2。

在步骤(3)的柱层析法中，对川芎采用NKA大孔树脂为吸附剂，并先采用水洗脱至清，然后采用重量是川芎重量5-10倍的且浓度为20％-50％的乙醇洗脱，对洗脱液利用减压回收的方式回收乙醇，并浓缩成浸膏3，对天麻采用AB-8大孔树脂为吸附剂，并采用重量是天麻重量5-50倍的水洗脱，其中前段5-10倍洗脱液弃去，其余洗脱液通过减压蒸发水的方法将其浓缩至浸膏4。

该干粉制剂用于预防或治疗脑血管病，特别是用于预防或治疗脑血管梗塞和缺血性脑血管供血不足病症。

本发明所提出的大川芎干粉制剂具有良好的活血化瘀、平肝熄火功能，将该制中加入常规辅料可配制成不同种剂型，这些剂型均可用于治疗或预防脑血管方面疾病；此外，用本发明的方法制作的大川芎干粉制剂中活性成分中的阿魏酸、天麻苷等含量高于总固体物的25％。

实验例1：用本发明所提出的大川芎干粉制剂制作的注射剂对20只体重为19.4±1.1g的雌雄各半的昆明小鼠做急毒性试验。

试验条件是在试验前12小时对小鼠禁食，不禁水，逐只小鼠静脉注射上述注射剂350g/Kg体重(给药量是人临床用药量的1521.7倍)，给药后，在实验室观察饲养14天，记录小鼠每日体重变化，并观察小鼠的行为、皮毛、摄食、饮水和粪便等变化，结果表明，小鼠在注射药后，其动作减弱，虽然有轻度的震颤，走路摇晃，但在5小时后开始恢复，7小时后恢复正常，小鼠的体重第六天开始时稍有下降，第11天恢复正常，雄性动物比较敏感。

实验例2：用本发明所提出的大川芎干粉制剂制成的注射剂进行药效学方面试验。

试验药品：

本发明所提出的大川芎注射剂：7.0g/支生药，临时用生理盐水稀释成所需浓度；

阳性对照药：血塞通氯化钠注射液，规格100mg/2ml/支，昆明兴中制药有限公司生产，批号：20051208；

工具药：胶原蛋白，sigma产品C-8886，Lot108C8015；盐酸肾上腺素，上海禾丰制药有限公司生产，批号19991017；生理盐水，沈阳志鹰制药厂，批号06012102。

试验动物：

1.昆明种小白鼠；2.大鼠(沙鼠)

给药途径：静脉注射(与临床给药途径一致)

剂量设计：1、根据予试验结果

          2、人与动物按体表面积折算

给药剂量：小鼠高剂量3.72g/kg生药

              中剂量1.86g/kg生药

              低剂量0.93g/kg生药

阳性对照药(血塞通注射液)1.86mg/kg

大鼠(沙鼠)高剂量1.4g/kg生药

          中剂量0.7g/kg生药

          低剂量0.35g/kg生药

阳性对照药(血塞通注射液)0.98mg/kg

试验方法与结果：

一、1.注射用大川芎对小鼠常压耐缺氧的影响

取小鼠50只，雌、雄各半，体重18.2±1.1kg，按体重随机分为五组，每组10只，第一组静脉注射等容积生理盐水；第二组小鼠经静脉注射血塞通1.86mg/kg；第三-五组小鼠分别静脉注射用大川芎液3.72g/kg、1.86g/kg和0.98g/kg，连续注射3天，末次给药后30分钟，将小鼠逐只放入250ml广口瓶中(瓶口涂凡士林，内装15g钠石灰和一张滤纸)盖紧瓶盖，立即记从放入小鼠盖紧瓶盖至小鼠死亡的时间，此时间为小鼠的常压耐缺氧时间，结果见表1。

表1注射用大川芎对小鼠常压耐缺氧的影响

组别	药物剂量	动物数(只)	耐缺氧时间(X±SD)分
				生理盐水	--	10	30.8±2.89
血塞通氯化钠注射液	1.86mg/kg	10	36.0±2.21***
				注射用大川芎	3.72g/kg	10	36.7±3.37***
注射用大川芎	1.86g/kg	10	40.4±9.59**
				注射用大川芎	0.93g/kg	10	40.2±9.47**

注：**与生理盐水组比较 P＜0.01

    ***与生理盐水组比较P＜0.001

由表1数据可以看出，注射用大川芎与血塞通注射液同样具有明显的抗缺氧作用，各剂量组与生理盐水组比较，差异均十分显著。等剂量注射用大川芎与血塞通注射液比较无明显差异。

2.注射用大川芎对断头小鼠喘息次数和喘息时间的影响

取小鼠50只，雌、雄各半，体重19.2±1.0g，随机分为五组，每组10只，第一组静脉注射等容积生理盐水；第二组静脉注射血塞通1.86mg/kg；第三组-五组静注注射用大川芎3.72g/kg、1.86g/kg和0.98g/kg，连续静注3天，末次给药后30分钟分别沿小鼠耳尖部用剪刀剪下小鼠头，记录小鼠张口喘息次数和喘息时间，结果见表2。

表2注射用大川芎对断头小鼠喘息次数和喘息时间的影响

组别	药物剂量	动物数(只)	喘息次数(X±SD)次	喘息时间(X±SD)秒
					生理盐水	--	10	6.9±4.7	12.0±6.3
血塞通氯化钠注射液	1.86mg/kg	10	14.1±2.5***	19.0±2.8**
					注射用大川芎	3.72g/kg	10	16.0±2.7***	19.1±2.6**
注射用大川芎	1.86g/kg	10	13.8±4.3**	20.1±4.1**
					注射用大川芎	0.93g/kg	10	14.3±2.3***	18.6±2.1**

注：**与生理盐水组比较 P＜0.01

    ***与生理盐水组比较P＜0.001

表2数据表明，注射用大川芎可明显的增加断头小鼠的喘息次数和喘息时间，血塞通注射液与等剂量注射用大川芎比较无明显差异。

二、1.注射用大川芎对血瘀大鼠凝血时间的影响

取大鼠58只，雌、雄各半，体重161.3±5.2g，随机分为六组，第一组大鼠每日静脉注射等容积生理盐水；第二组静注血塞通注射液0.98mg/kg；第三组大鼠亦静注等容积生理盐水；第四-六组大鼠分别静注注射用大川芎1.40g/kg、0.70g/kg和0.35g/kg，连续给药5天，除第一组生理盐水对照组外，其余五组在第5天皮下注射Adr0.08ml/100g体重，2小时后将大鼠放入冰水里5分钟，2小时后，再给大鼠皮下注射Adr0.08ml/100g体重，停食后次日取血，玻片法测定大鼠的凝血时间，结果见表3。

表3注射用大川芎对大鼠凝血时间的影响

组别	药物剂量	动物数(只)	凝血时间(X±SD)秒
				生理盐水	--	10	101.2±40.9
模型组	--	10	89.8±36.4
				血塞通注射液	0.98mg/kg	10	169.2±20.2***
注射用大川芎	1.40g/kg	9	173.3±20.0***
				注射用大川芎	0.70g/kg	10	174.7±9.93***
注射用大川芎	0.35g/kg	9	152.4±38.7**

注：**与模型组比较 P＜0.01

    ***与模型组比较P＜0.001

由表3数据可以看出，注射用大川芎对血瘀大鼠的凝血时间有非常明显的延长作用。

2.注射用大川芎在鼠凝血酶原(PT)时间的影响

取大鼠由眶静脉取血，以3.8％枸橼酸钠抗凝，血与抗凝剂比例为9∶1，充分混合后，1500rpm离心5分钟，分离出血浆，血浆混匀后立即记时放入37℃水浴中约10秒后取出试管缓慢倾斜，当试管内流体流动缓慢将停止流动时，立即记时，记录PT时间，结果见表4。

表4注射用大川芎对大鼠凝血酶原时间的影响

组别	药物剂量	动物数(只)	凝血酶原时间(X±SD)秒
				对照管	--	10	45.3±17.0
血塞通氯化钠注射液	0.98mg/kg	10	211.6±140.8**
				注射用大川芎	1.40g/kg	10	585.0±34.8***
注射用大川芎	0.70g/kg	10	359.3±173.6***
				注射用大川芎	0.35g/kg	10	113.1±50.2***

注：**与对照管比较 P＜0.01

    ***与对照管比较P＜0.001

由表4数据可以看出，注射用大川芎能明显的延长大鼠凝血酶原时间，大剂量组有支试管PT时间超过了600秒，中剂量组也有2支试管PT时间超过600秒。

3.注射用大川芎对急性血瘀模型大鼠血液流变性影响

取大鼠60只，体重183.1±1.9g，雌、雄各半，随机分为六组，每组10只。

空白对照组，每日静注生理盐水，连续5天。血瘀模型组，每日静注生理盐水，连续5天，于末次静注生理盐水后30分钟皮下注射Adr0.08ml/100g体重，2小时后浸入冰水中5分钟，再过2小时，再皮下注射Adr0.08ml/100g体重，停食后次晨取血。

阳性对照药组和试验组，共分四组，阳性对照药血塞通氯化钠注射液0.98mg/kg，试验组分别静注注射用大川芎1.40g/kg、0.70g/kg和0.35g/kg，连续给药5天，于第5天按上述方法复制血瘀模型，停食后次晨取血，测定大鼠血液流变学指标，结果见表5。

结论：

1、注射用大川芎给小鼠静注1.40g、0.70g、0.35g/kg，可明显提高密闭容器法，断头喘息法小鼠耐缺氧能力，耐缺氧时间明显延长。

2、注射用大川芎可明显减少大鼠因结扎两侧颈总动脉造成急性脑缺血而引起的脑水肿，降低脑指数。

3、注射用大川芎可增高大鼠凝血酶原(PT)时间，降低全血比粘度和血浆粘度及纤维蛋白元。

具体实施方式：

实施例1：

将80Kg的川芎和20Kg的天麻清净后放入各自的容器中，对川芎用总重量是其20-30倍的乙醇煎煮，所用浓度为70％--90％的乙醇，并分2-3次煎煮，每次煎煮时间为1-2小时，合并煎液，并采用减压回收乙醇的方法将煎液浓缩成浸膏1；对天麻用总重量是其13-20倍的乙醇煎煮，所用乙醇的浓度为40％--70％，分2-3次煎煮，每次煎煮时间为1-2小时，合并煎液，再采用减压回收乙醇的方法将煎液缩成浸膏2；

利用柱层析法分别对浸膏1和浸膏2进行柱层析，对川芎采用NKA大孔树脂为吸附剂，并先采用水洗脱，然后采用重量是川芎重量5-10倍的且浓度为20％--50％的乙醇洗脱，对洗脱液利用减压回收的方式回收乙醇，并浓缩成浸膏3；对天麻采用AB-8大孔树脂为吸附剂，并采用重量是天麻重量5-50倍的水洗脱，其中前段5-10倍洗脱液弃去，其余洗脱液通过减压蒸发水的方法将其浓缩至浸膏4；合并柱洗脱液，减压回收乙醇和水，并将川芎洗脱液和天麻洗脱液分别浓缩成浸膏3和浸膏4；合并所述浸膏3和浸膏4即为该大川芎干粉制剂的活性组分。

最后加入浸膏3和浸膏4中所含固体物50％的右旋糖酐，经冷冻后便制成大川芎冻干粉注射剂。

该干粉制剂用于预防或治疗脑血管病，特别是用于预防或治疗脑血管梗塞和缺血性脑血管供血不足病症。

实施例2：

将40Kg的川芎和60Kg的天麻清净后放入各自的容器中，按照实施例1的方法制成大川芎干粉制剂的活性组分；再向大川芎干粉制剂中加入浸膏总量50％的右旋糖酐，经冷冻后便制成大川芎冻干粉注射剂。

实施例3：

将50Kg的川芎和50Kg的天麻清净后放入各自的容器中，按照实施例1的方法制成大川芎干粉制剂的活性组分；再向大川芎干粉制剂中加入浸膏总量50％的右旋糖酐，经冷冻后便制成大川芎冻干粉注射剂。

实施例4：

将60Kg的川芎和40Kg的天麻清净后放入各自的容器中，按照实施例1的方法制成大川芎干粉制剂的活性组分；再向大川芎干粉制剂中加入浸膏总量50％的右旋糖酐，经冷冻后便制成大川芎冻干粉注射剂。

实施例5：

将70Kg的川芎和30Kg的天麻清净后放入各自的容器中，按照实施例1的方法制成大川芎干粉制剂的活性组分；再向大川芎干粉制剂中加入浸膏总量50％的右旋糖酐，经冷冻后便制成大川芎冻干粉注射剂。

实施例6：

将60Kg的川芎和60Kg的天麻清净后放入各自的容器中，按照实施例1的方法制成大川芎干粉制剂的活性组分；再向大川芎干粉制剂中加入浸膏总量50％的右旋糖酐，经冷冻后便制成大川芎冻干粉注射剂。

Claims (2)

1、大川芎干粉制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、称取川芎和天麻原料药备用；

(2)、将川芎和天麻放入各自的容器中，并用总重量为川芎20-30倍或天麻13-20倍的乙醇对其进行煎煮，然后分别对煎液进行滤过，回收滤液中乙醇，并将川芎滤液浓缩至浸膏1，天麻滤液浓缩至浸膏2；

(3)、利用柱层析法分别对浸膏1和浸膏2上柱洗脱，在柱洗脱中，对川芎采用大孔吸附树脂NKA型为吸附剂，并先采用水洗脱至清，然后采用重量是川芎重量5-10倍的且浓度为20％-50％的乙醇洗脱，对洗脱液利用减压的方式回收乙醇，并浓缩成浸膏3，对天麻采用大孔吸附树脂AB-8型为吸附剂，并采用重量是天麻重量的5-50倍的水洗脱，并对洗脱液通过减压蒸发水的方法将其浓缩至浸膏4；

(4)、合并所述浸膏3和浸膏4，即为该大川芎干粉制剂的活性组分，其中川芎提取物的重量份额为40％--80％，天麻提取物的重量份额为20％--60％；

在步骤(2)的煎煮步骤中，向川芎原料药内共加入重量是其20-30倍的且浓度为70％--90％的乙醇，分2-3次煎煮，每次煎煮时间为1-2小时，并采用减压回收乙醇的方法将煎液浓缩成浸膏1；而向天麻原料药内共加入重量是其13-20倍的浓度为40％--70％的乙醇，分2-3次煎煮，每次煎煮时间为1-2小时，再采用减压回收乙醇的方法将煎液浓缩成浸膏2；

在步骤(3)柱层析法中，采用重量是天麻重量的5-50倍的水洗脱，其中前段5-10倍的洗脱液弃去，其余洗脱液通过减压蒸发水的方法将其浓缩至浸膏4。

2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(4)中还包括向大川芎干粉制剂的活性组分中加入重量是川芎和天麻提取物的总重量的30％--50％的右旋糖酐经分装、冷冻、干燥步骤，以制成成品大川芎冻干粉针剂。