CN103977245A

CN103977245A - 一种治疗乙肝的药物及其制备方法

Info

Publication number: CN103977245A
Application number: CN201410157901.1A
Authority: CN
Inventors: 袁其朋; 李利明; 陈�光
Original assignee: Beijing University of Chemical Technology
Current assignee: Beijing University of Chemical Technology
Priority date: 2014-04-18
Filing date: 2014-04-18
Publication date: 2014-08-13

Abstract

本发明涉及一种治疗乙肝的药物及其制备方法。本发明的治疗乙肝的药物，由按重量份计的以下药材制成：蚂蚁150-450；黄芪20-60；黄精10-30；枸杞子10-30；人参10-30；白术10-30；丹参30-90；虎杖15-45；苍术10-30；秦艽10-30；陈皮10-30。本发明的制备治疗乙肝的药物的方法，包括以下步骤：（1）蚂蚁经水提，酶解，酶解液用超滤膜分离其1-10kDa多肽；（2）苍术、陈皮、白术提取挥发油，所述挥发油用β-环糊精包合；（3）所得药渣与其余药材经水提，用超滤膜分离其多糖和小分子化合物，（4）将所述1-10kDa多肽、用β-环糊精包合的挥发油与所述多糖和小分子化合物混合，以及（5）制成药剂学上可接受的口服制剂。本发明的药物在改善急、慢性肝损伤动物肝功能等方面，有非常显著的作用。

Description

一种治疗乙肝的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗乙型肝炎的药物及其制备方法。具体地说，是一种治疗乙型肝炎的中药及其制备方法。

背景技术

乙型病毒性肝炎（乙肝）由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的疾病，我国约有1亿2千万的慢性感染者，是我国最严重的公共卫生问题之一，每年消耗治疗费用高达300～500亿元人民币。中西医结合治疗乙肝具有较突出的特色，尤其是在调节免疫、改善患者症状、保肝降酶、利胆退黄疗效确切，在提高抗病毒药治疗效果方面展现出重要潜力。

发明内容

本发明是在同一发明人的发明专利ZL01130956.3的基础上改进的发明。其主要改进点为，药物组成由20味精简为11味，用超滤膜分离了蚂蚁的1－10kDa多肽，苍术、陈皮、白术的挥发油用β-环糊精包合，并用超滤膜分离了其余药物的多糖和小分子化合物。因此，本发明的目的是提供一种有效治疗乙型肝炎的药物，经药效学实验证实，本发明的药物具有对CCl₄、D-半乳糖胺等分别造成的急性或慢性肝损伤、免疫功能低下或氢化可的松造成的免疫功能低下的模型动物，在改善急、慢性肝损伤动物肝功能、调节非特异性免疫和特异性免疫功能等方面，有非常显著的作用。

本发明的目的是提供一种治疗乙肝的药物，其特征在于，所述药物由按重量份计的以下药材制成：蚂蚁150-450；黄芪20-60；黄精10-30；枸杞子10-30；人参10-30；白术10-30；丹参30-90；虎杖15-45；苍术10-30；秦艽10-30；和陈皮10-30。所述药物包括蚂蚁经水提、酶解、超滤膜分离出的1-10Kda的肽；用β-环糊精包合的苍术、陈皮、白术挥发油；以及苍术、陈皮、白术的药渣与其余药物经水提、超滤膜分离出的多糖和小分子化合物。

本发明的治疗乙肝的药物，其特征在于，所述药物由按重量份计的以下药材制成：蚂蚁300；黄芪40；黄精20；枸杞子20；人参20；白术20；丹参60；虎杖30；苍术20；秦艽20；和陈皮20。

根据本发明的药物，其特征在于所述药物由以下方法制备：蚂蚁经水提，酶解，酶解液用超滤膜分离其1－10kDa多肽；苍术、陈皮、白术提取挥发油，所述挥发油用β-环糊精包合；所得药渣与其余药材经水提，用超滤膜分离其多糖和小分子化合物，将所述蚂蚁的1-10Kda肽、所述用β-环糊精包合的挥发油与所述多糖和小分子化合物混合，并制成药剂学上可接受的口服制剂。

本发明的第二方面是提供一种制备治疗乙肝的药物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）蚂蚁经水提，酶解，酶解液用超滤膜分离其1－10kDa多肽；

（2）苍术、陈皮、白术提取挥发油，所述挥发油用β-环糊精包合；

（3）所得药渣与其余药材经水提，用超滤膜分离其多糖和小分子化合物，

（4）将所述1－10kDa多肽、所述用β-环糊精包合的挥发油与所述多糖和小分子化合物混合，以及

（5）制成药剂学上可接受的口服制剂。

本发明的制备方法中，所述蚂蚁经8倍量的水于37±2℃研磨提取2次，提取上清液，提取液加0.3-0.5％的复合蛋白酶于37±2℃酶解90min，酶解液用超滤膜分离其1－10kDa多肽。

本发明的制备方法中，苍术、陈皮、白术提取挥发油，所述挥发油采用饱和溶液法用β-环糊精包合。

本发明的制备方法中，药渣与其余药物用3-10倍量的水进行水提，水提液用1-5μm的陶瓷膜过滤，滤液用10kDa的超滤膜分离多糖，用1kDa的超滤膜分离小分子化合物。

本发明的制备方法在步骤（4）之后，还包括低温浓缩和干燥步骤。低温浓缩在60℃以下进行。

根据本发明，口服制剂包括胶囊、片剂、口服液。

具体实施方式

下面将以具体实施例的方式来更详细地描述本发明，但是应当理解，本发明可以以不同的方式实施，提供这些实施例仅是为了使本说明书充分和完整，以使本领域技术人员能够实施本发明，本发明的范围不应当限定为本文所列的具体实施例。

制备实施例

本发明的药物是由以下药材制成：蚂蚁300g；黄芪40g；黄精20g；枸杞子20g；人参20g；白术20g；丹参60g；虎杖30g；苍术20g；秦艽20g；陈皮20g。称取相应重量的药材。

本发明的制备方法为：蚂蚁经8倍量的水于37±2℃研磨提取2次，提取上清液，提取液加0.3-0.5％的复合蛋白酶（例如来自诺维信公司产品）于37±2℃酶解90min，酶解液用超滤膜分离1－10kDa的肽；苍术、陈皮、白术提取挥发油（水蒸气蒸馏法），挥发油采用饱和溶液法用β-环糊精包合（在60℃的条件下，挥发油用4倍量的乙醇溶解，缓慢加入β-环糊精的饱和水溶液中，150转/分钟搅拌4小时，冷却至10℃以下，静止8小时，离心，沉淀与60℃以下干燥）；苍术、陈皮、白术提取挥发油后的药渣与其余药物用按重量计3-10倍量的水进行水提，水提液用1-5μm的陶瓷膜过滤，滤液用10kDa的超滤膜分离多糖，用1kDa的超滤膜分离小分子化合物，将所得的1－10kDa的肽、用β-环糊精包合的挥发油和所得的多糖和小分子化合物混合，再经低温浓缩，干燥，并制成药剂学上可接受的口服制剂，包括胶囊、片剂、口服液等。

本发明的药效学试验

试验目的：通过本发明药物（即表格中的改进后药物）与改进前药物进行药效学实验对比观察，比较其对肝损伤动物肝脏功能以及免疫功能两方面的几个主要药效学实验指标的改善情况。

2.试验药物：1.本发明药物，每g相当于生药15g，溶剂为水，配置成8、16、32%及5、10、20%的浓度备用。2.改进前药物，每g相当于生药5g，溶剂为水，配置成32、40%的浓度备用。

3.试验动物：小鼠为昆明种，购自中国医学科学院药物所，体重20＋2g，每组10只，雌雄各半。大鼠为Wistar种，购自中国医学科学院药物所，体重120-200g，每组10只，雌雄各半。

4.试验内容：

（1）肝保护作用

1）对CCl₄急性肝损伤小鼠的影响：小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，三个剂量的给药组分别灌胃给予改进后药物4、2、1g/kg，给药浓度分别为32%、16%、8%，体积为0.25ml/20g，改进前药物组给药剂量为4g/kg，浓度为32%，正常对照组（即空白对照组）和模型组给同体积水，每日一次，连续给药7天（d），末次给药后1h，除正常对照组外，其余各组均腹腔内注入（ip）0.2%CCl₄溶液（指CCL₄抽提物用食用油配成0.2%的浓度）10ml/kg（0.2ml/20g），禁食不禁水20h后，眼眶采血，分别用CIBA-CORNING-550EXPRESS全自动生化分析仪测定动物血清ALT（谷氨酸氨基转移酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）、TB（总蛋白）、ALB（白蛋白）等。

2）对D-半乳糖胺盐酸盐（D-Gal）急性肝损伤小鼠的影响：分组与给药同上，末次给药后1h，除正常对照组外，其余各组均腹腔内注入（ip）D-Gal0.65g/kg生理盐水溶液，浓度为6.5%，体积为0.2ml/20g，然后测前述各项指标。

3）对CCl4慢性肝损伤大鼠的影响：大鼠60只，分组与给药方法同上，本发明药物（即改进后药物）剂量分别为2、1、0.5g/kg，浓度分别为20、10、5%，改进前药物（剂型水丸）试验动物组40%，给药体积为1ml/100g，改进前药物试验动物组剂量为2g/kg，模型组和正常对照组给同体积水，每日一次，共给药六周。除正常对照组外，其余各组首日于动物颈背部皮下注射（Sc）40%CCl₄溶液5ml/kg，其后改为每隔3日皮下注射（Sc）3ml/kg。末次给药后禁食不禁水20h，然后测前述各项指标。

（2）对免疫功能的调节作用

1）对氢化可的松（HCT）所致免疫功能低下小鼠碳粒廓清速率的影响：分组与给药同上，除正常对照组外，其余各组均于给药后20min腹腔内注入（ip）HCT5mg/kg×3d，不给CCl₄。末次给药次日，由尾部静脉注入（iv）20%印度墨汁0.1ml/10g，于其后2及20min分别眼眶取血20μl，溶于2ml NaHCO₃中，用SF-B型自动生化分析仪于650nm处测定其吸收度值，按下式计算吞噬指数K：K=（lgD1-lgD2）/（T2-T1），按下式计算吞噬系数α：α=K1/3×体重/（肝重＋脾重）。

2）对CCl₄急性肝损伤小鼠血清溶血素形成的影响：分组、给药同上，给药第5天每只动物腹腔内注入（ip）3：5（SRBC：空白溶剂，v/v）的SRBC（绵羊红细胞）悬液0.2ml致敏，末次给药后1h腹腔内注入（ip）CCl₄，次日眼眶取血分离血清，用空白溶剂(NS)1：50稀释后取1ml，加入10%SRBC0.5ml及1ml补体（1：10稀释的豚鼠血清）。另设计以空白溶剂代替豚鼠血清的空白管。空白溶剂为生理盐水（0.9%NaCl溶液）。温孵10min，冰浴后2000rpm离心10min，取上清液1ml，加入3ml都氏试剂，10min后用SF-B型自动生化分析仪于540nm波长处测定样品的吸收度。另外10%SRBC的NS悬液0.25ml，加都氏液至4ml，同法测出SRBC半数溶血的吸收度，按下式计算样品的半数溶血值（HC50：HC50=样品吸收度/半数溶血时的吸收度）×血清稀释倍数。

都氏试剂的配置：NaHCO₃1.0g，KCN0.05g，K₃Fe（CN）60.2g，加蒸馏水至1000ml。

SRBC的采集：取羊血后置于放有玻璃珠的三角瓶中摇动10min，以除去纤维蛋白，加入羊血体积2倍的Alsever’s血球保存液中，摇匀，4℃冰箱保存，3周内使用。

Alsever’s液的配置：枸橼酸三钠﹒2H2O8.0g，枸橼酸0.5g，无水葡萄糖18.7g，NaCl4.2g，蒸馏水加至1000ml。过滤，高压消毒，4℃冰箱保存备用。Alsever’s液是一种抗凝剂，是一种采血的常用试剂。

3）对SRBC诱发CCl₄急性肝损伤小鼠足垫迟发型变态反应的影响：分组与给药同上，于给药前2h，每鼠用10%SRBC的NS悬液0.05ml做足垫Sc免疫，再分别ip给药。于末次给药6h后，再以同法攻击小鼠右足垫。24h后分别测量左、右足垫厚度，计算其差值作为肿胀度。

5.试验结果：

（1）对肝损伤小鼠的影响：

1）对CCl₄急性肝损伤小鼠的影响：模型组动物ALT、AST均比空白对照组有非常显著的升高，改进前药物与改进后药物组ALT、AST均明显低于模型组，改进后药物组亦低于改进前药物组，各组TB、ALB均基本在正常范围内变化（见表1）。

表1。对CCl4急性肝损伤小鼠的影响（Х±SD）

与模型组比，*P＜0.05,**P＜0.01

2）对D-半乳糖胺盐酸盐（D-Gal）急性肝损伤小鼠的影响：模型组动物ALT、AST均比空白对照组有非常显著的升高，改进前药物与改进后药物组ALT、AST比模型组均有较显著的降低，改进后药物组亦低于改进前药物组，各组TB、ATB均基本在正常范围内变化（见表2）。

表2.对D-半乳糖胺盐酸盐（D-Gal）急性肝损伤的影响（Х±SD）

与模型组比，*P＜0.05,**P＜0.01

3）对CCl4慢性肝损伤大鼠的影响：模型动物ALT、AST均比空白对照组有非常显著的升高，改进前药物与改进后药物组ALT、AST均明显低于模型组，改进后药物组亦低于改进前药物组，各组TB、ALB均基本在正常范围内变化（见表3）。

表3.对CCl4慢性肝损伤大鼠的影响（Х±SD）

与模型组比，*P＜0.05,**P＜0.01

（2）对免疫功能的调节作用

1）对氢化可的松所致免疫功能低下小鼠碳粒廓清速率的影响：模型组K及α值显著低于空白对照组，改进前药物与改进后药物各剂量组K及α值比模型组均有显著的提高（见表4）。

表4.对CCl4急性肝损伤小鼠的影响（Х±SD）

与模型组比，*P＜0.05,**P＜0.01

2）对CCl4急性肝损伤小鼠血清溶血素形成的影响：模型组HC50值比空白对照组有非常显著的降低，改进前药物与改进后药物各剂量组HC50值比模型组均有较显著的提高，改进后药物组亦高于改进前药物组（见表5）。

表5.对CCl4急性肝损伤小鼠血清溶血素形成的影响（Х±SD）

3）对SRBC诱发CCl4急性肝损伤小鼠足垫迟发型变态反应的影响：模型组肿胀度比空白对照组有非常显著的降低，改进前药物与改进后药物各剂量组肿胀度均显著高于模型组（见表6）。

表6.对SRBC诱发CCl4急性肝损伤小鼠足垫迟发型变态反应的影响（Х±SD）

上述结果表明，药物组成及制备工艺改进后对CCl₄、D-半乳糖胺等分别造成的急性或慢性肝损伤、免疫功能低下或氢化可的松造成的免疫功能低下的模型动物，在改善急、慢性肝损伤动物肝功能、调节非特异性免疫和特异性免疫功能等方面，仍然有非常显著的药理作用，作用强度以及作用范围优于改进前。

虽然已经以具体实施例的方式描述了本发明，但是对于本领域技术人员来说明显的是，在不脱离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种变化和修改，这些变化和修改同样包括在本发明的范围内。

Claims

1.一种治疗乙肝的药物，其特征在于，所述药物由按重量份计的以下药材制成：

蚂蚁150-450；黄芪20-60；黄精10-30；枸杞子10-30；人参10-30；白术10-30；丹参30-90；虎杖15-45；苍术10-30；秦艽10-30；以及陈皮10-30。

2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物由按重量份计的以下药材制成：

蚂蚁300；黄芪40；黄精20；枸杞子20；人参20；白术20；丹参60；虎杖30；苍术20；秦艽20；以及陈皮20。

3.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物由以下方法制备：蚂蚁经水提，酶解，酶解液用超滤膜分离其1－10kDa多肽；苍术、陈皮、白术提取挥发油，所述挥发油用β-环糊精包合；所得药渣与其余药材经水提，用超滤膜分离其多糖和小分子化合物，将所述1－10kDa多肽、用β-环糊精包合的挥发油与所述多糖和小分子化合物混合，并制成药剂学上可接受的口服制剂。

4.一种制备权利要求1或2的药物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（4）将所述1－10kDa多肽、用β-环糊精包合的挥发油与所述多糖和小分子化合物混合，以及

（5）制成药剂学上可接受的口服制剂。

5.根据权利要求3所述的药物或者权利要求4所述的方法，其特征在于，所述蚂蚁经8倍量的水于37±2℃研磨提取2次，提取上清液，提取液加0.3-0.5％的复合蛋白酶于37±2℃酶解90min，酶解液用超滤膜分离其1－10kDa多肽。

6.根据权利要求3所述的药物或者权利要求4所述的方法，其特征在于，苍术、陈皮、白术提取挥发油，所述挥发油采用饱和溶液法用β-环糊精包合。

7.根据权利要求3所述的药物或者权利要求4所述的方法，其特征在于，苍术、陈皮、白术提取挥发油后的药渣与其余药物用3-10倍量的水进行水提，水提液用1-5μm的陶瓷膜过滤，滤液用10kDa的超滤膜分离多糖，用1kDa的超滤膜分离小分子化合物。

8.根据权利要求3所述的药物或者权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤（4）之后，包括低温浓缩和干燥步骤。

9.根据权利要求8所述的药物或者方法，其特征在于，低温浓缩在60℃以下进行。

10.根据权利要求3所述的药物以及权利要求4所述的方法，其特征在于，所述口服制剂包括胶囊、片剂、口服液。