CN100588956C - 检测他达拉非及其衍生物的一种方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了检测他达拉非及其衍生物的方法。本发明所提供的检测他达拉非及其衍生物的方法，包括如下步骤：1)显色反应，向待测样品加入浓硫酸，进行显色反应；2)结果判断，当显色反应呈蓝紫色时，说明待测样品中含有他达拉非或其衍生物。本发明方法具有快速、简便、灵敏度高、专属性强等优点。
Description
技术领域
本发明涉及检测他达拉非及其衍生物的方法。
背景技术
他达拉非是美国礼来公司研制开发的第二代磷酸二酯酶抑制剂，临床上用于治疗男性勃起功能障碍(ED)，其结构式如式I所示，分子式为C22H19N3O4，商品名称为希爱力，属于处方药。他达拉非与其他两种治疗ED药物西地那非、伐地那非相比起效迅速、药效时间长，目前已多次在食品、壮阳类中药制剂或保健食品中检出，甚至检出其衍生物，对于不知情消费者的危害是不言而喻的，另外也造成了中药制剂和保健食品市场的混乱状况。
目前食品、药品检验行业尚无他达拉非快速检验方法的发布，对于药店和基层药检所，由于缺乏先进的检验设备，甄别食品、中药制剂和保健食品中是否含有违禁药物很困难，因此建立简单、准确、快速的鉴别方法具有特别的意义。此外，某些生产商为了规避执法部门的检查，不断制造上述化合物的衍生物，即使依靠HPLC方法也无法识别新衍生物。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测他达拉非及其衍生物的方法。
本发明所提供的检测他达拉非及其衍生物的方法，包括如下步骤：
1)显色反应
向待测样品加入浓硫酸，进行显色反应；
2)结果判断
当显色反应呈蓝紫色时，说明待测样品中含有他达拉非或其衍生物。
本发明方法不仅可以检测他达拉非，还可以检测他达拉非衍生物，其衍生物主要是含N杂环上的甲基被氨基(-NH2)取代，被乙基(-CH2CH3)、羟甲基(-CH2OH)取代的衍生物。检测他达拉非衍生物的过程以及阳性结果判断与他达拉非的检测过程相同。
为了能排除样品辅料对于显色反应结果判断的干扰，显色反应前还可将待测样品制备为供试品进行检测：
对于固体待测样品，供试品制备过程如下：在研细或剪碎的样品中加入氯仿，研磨使溶解，用预先以氯仿湿润的滤纸过滤，滤液置白瓷蒸发皿中，80℃水浴蒸干或用电吹风吹干，残渣即为供试品。
对于液体待测样品，供试品制备过程如下：量取待测样品置分液漏斗中，加氯仿振摇提取30秒，静置使分层，分取氯仿层，用预先以氯仿湿润的滤纸过滤，滤液置白瓷蒸发皿中，80℃水浴蒸干或用电吹风吹干，残渣即为供试品。
本发明方法以浓硫酸作为他达拉非及其衍生物的显色反应试剂，具有如下优点：
(1)快速、简便：通常情况下，1分钟之内即可知道结果；即使由于样品辅料有干扰使结果判断模糊，需要将样品用少量三氯甲烷溶解(2分钟)、过滤(2分钟)，滤液吹干或蒸干(10分钟)，然后加入显色剂，整个操作也可在30分钟内完成。相比于液相色谱、液质联用方法(至少5小时)简便快捷得多，并且无需对照品。
(2)反应灵敏：最小检出量可达到1μg，而一次服用剂量样品中(1～2片或粒、丸等)掺杂他达拉非的量至少为10mg(10000μg)以上，美国产他达拉非片有两种规格，25mg和50mg，因此用该方法检查食品、中药制剂或保健品中是否掺杂违禁成分具有足够的灵敏度。
(3)专属性强、准确率高：根据方法验证结果，片剂、胶囊、蜜丸、酒剂等剂型的常用辅料对他达拉非的检出均无干扰；同法检查了与他达拉非有某些相似结构的化学物质，未发现有与他达拉非产生相同的颜色反应。
(4)适用范围广：该方法可以用于液体、固体，无论是食品、中药制剂、保健食品均可使用该方法。
(5)显色试剂无需配制，可长期储存。
具体实施方式
实施例1、检测他达拉非及其衍生物的方法
本发明检测他达拉非及其衍生物的方法具体操作如下：
一、取样量
对于不同种类的待测样品，推荐取样量见下表1。
表1推荐取样表
| 剂型 | 取样量 |
| 片剂 | 1片 |
| 胶囊 | 1粒内容物 |
| 蜜丸 | 1/4丸 |
| 单剂量口服液 | 1/2支 |
| 其他固体 | 0.1-0.2g |
二、供试品制备
固体供试品制备 在研细或剪碎的样品中加入5～10ml氯仿，研磨使溶解，用预先以氯仿湿润的滤纸过滤，滤液置白瓷蒸发皿中，80℃水浴蒸干或用电吹风吹干，残渣即为供试品；
液体供试品制备 量取适量供试品，置分液漏斗中，加氯仿5～10ml，振摇提取30秒，静置使分层，分取氯仿，用预先以氯仿湿润的滤纸过滤，滤液置白瓷蒸发皿中，80℃水浴蒸干或用电吹风吹干，残渣即为供试品。
三、显色反应
上述残渣中加入浓硫酸1滴，进行显色反应。
四、阳性结果判断
当待测样品中含有他达拉非或其衍生物时，加入显色剂后应立即显蓝紫色；他达拉非浓度微量(μg级)时显紫红色，放置后渐显蓝紫色；浓度高时所呈现的溶液颜色很浓，表面看去呈黑色，只需旋转白瓷蒸发皿将溶液铺开，即可见蓝紫色。
如果显色后溶液渐渐显黄褐色甚至灰黑色，那是由于硫酸的腐蚀作用，不作为阳性反应的结果。
五、注意事项
由于本反应灵敏度高，凡是呈阳性反应试验用过的器具，如白瓷蒸发皿，再次使用前必须充分清洗，必要时加入浓硫酸1滴，如果不显色，冲洗干净，擦干使用；如果显蓝紫色，不能使用。
浓硫酸是一种通用型显色剂，通常浓硫酸所显颜色为黄色至褐色。生物碱能用浓硫酸显色的并多见，浓硫酸与他达拉非反应所显的蓝紫色非常少见；各种制剂辅料与浓硫酸接触，往往由于硫酸的强腐蚀作用而呈现黑色或黑褐色，不会出现蓝紫色。纵上所述，本发明以浓硫酸作为他达拉非的检测试剂，达到化学鉴别试验的专属性要求。
实施例2、本发明方法检测他达拉非的准确性试验
对市售39批样品采用本发明方法进行检测，同时，根据国家药品食品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件(2006009，2006年3月14日公布)，采用HPLC-MS-MS方法检查他达拉非、枸橼酸西地那非、盐酸伐地那非，结果见表3。
表3：多批样品试验结果
| 品名 | 剂型 | 取样量 | 显色结果 | 质谱结果 |
| 样品1 | 胶囊 | 1粒内容物 | 呈蓝紫色 | 含他达拉非 |
| 样品2 | 丸 | 1丸 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品3 | 丸 | 1丸 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品4 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品5 | 颗粒 | 5粒细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品6 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品7 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品8 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品9 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品10 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品11 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品12 | 口服液 | 1支 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品13 | 丸 | 1丸 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品14 | 丸 | 1丸 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品15 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品16 | 丸 | 1丸 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品17 | 丸 | 1丸 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品18 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品19 | 片 | 1片细粉 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品20 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品21 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品22 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 不含* |
| 样品23 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品24 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品25 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品26 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品27 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品28 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品29 | 胶囊 | 1粒内容物 | 蓝紫色 | 含他达拉非含西地那非 |
| 样品30 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品31 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品32 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品33 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品34 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品35 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品36 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品37 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品38 | 胶囊 | 1粒内容物 | 放置显黄褐色 | 含西地那非 |
| 样品39 | 胶囊 | 1粒内容物 | 蓝紫色 | 含他达拉非含西地那非 |
＊：“不含”表示不含他达拉非、枸橼酸西地那非和盐酸伐地那非。
结论：上述试验与二级质谱验证结果表明，本发明检测方法无一例假阳性报告，同时也未漏检任何含他达拉非及其衍生物的样品，结果准确可靠。
取上述他达拉非呈阴性反应的36批样品，掺入他达拉非对照品10mg，研磨，按本发明方法进行试验，试验均呈阳性反应，结果表明本发明方法具有良好的准确性，可排除样品中各种辅料的干扰，专属性强。
实施例3、本发明方法检测他达拉非衍生物
本发明方法不仅可以检测他达拉非，还可以检测他达拉非衍生物，其衍生物主要是含N杂环上的甲基被氨基(-NH2)取代，见式II(氨基他达拉非)；以及含N杂环上的甲基被乙基(-CH2CH3)、羟甲基(-CH2OH)取代的衍生物。检测他达拉非衍生物的过程与他达拉非的检测过程相同，阳性结果判断也与之相同。
对于HPLC-MS-MS方法检测含有如式II结构的他达拉非衍生物的胶囊样品，取1粒内容物进行检测，显色结果呈蓝紫色，阳性结果。
实施例4、本发明检测方法的灵敏度试验
一、样品、对照品来源
1、他达拉非对照品：礼来公司，批号：060904纯度：100％
2、他达拉非片：礼来公司，规格：20mg
二、方法灵敏度
1、对照品最小检出量：取他达拉非对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释制成每1ml中含lμg的溶液，摇匀，精密量取1ml，水浴蒸干后，加入1滴显色剂(浓硫酸)紫红色，放置渐变蓝紫色。
2、制剂最小检出量：取他打拉非片(规格：20mg)1片，研细，取细粉适量(约相当于他达拉非10mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取滤液1ml，置100ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml(1μg)，水浴蒸干后，加入1滴显色剂(浓硫酸)显紫红色，放置渐变蓝紫色。
3、他达拉非衍生物-氨基他达拉非最小检出量：取氨基他达拉非片(含量20mg/片)1片，研细，取细粉适量(约相当于氨基他达拉非10mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取滤液1ml，置100ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml(1μg)，水浴蒸干后，加入显色剂(浓硫酸)显紫红色，放置渐变蓝紫色。
根据上述试验结果，可判定本发明方法检测他达拉非及氨基他达拉非的灵敏度至少可达到1μg。
Claims (3)
1、检测他达拉非及其衍生物的方法，包括如下步骤：
1)显色反应
向待测样品加入浓硫酸，进行显色反应；
2)结果判断
当显色反应呈蓝紫色时，说明待测样品中含有他达拉非或其衍生物；
其中，所述他达拉非衍生物是在他达拉非的含N杂环上的甲基被氨基，乙基或羟甲基取代的化合物。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对于固体待测样品，进行显色反应前还进行如下过程处理：在研细或剪碎的样品中加入氯仿，研磨使溶解，用预先以氯仿湿润的滤纸过滤，滤液置白瓷蒸发皿中，80℃水浴蒸干或用电吹风吹干，残渣即为供试品。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对于液体待测样品，进行显色反应前还进行如下过程处理：量取待测样品置分液漏斗中，加氯仿振摇提取30秒，静置使分层，分取氯仿层，用预先以氯仿湿润的滤纸过滤，滤液置白瓷蒸发皿中，80℃水浴蒸干或用电吹风吹干，残渣即为供试品。
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| PDE5抑制剂治疗ED研究进展. 卢永宁，陈斌.中华男科学，第11卷第7期. 2005 |
| PDE5抑制剂治疗ED研究进展. 卢永宁，陈斌.中华男科学，第11卷第7期. 2005 * |
| 反相高效液相色谱法测定保健食品中他达那非. 沈志武，王珮，唐宏兵.中国卫生检验杂志，第17卷第1期. 2007 |
| 反相高效液相色谱法测定保健食品中他达那非. 沈志武，王珮，唐宏兵.中国卫生检验杂志，第17卷第1期. 2007 * |
| 常用中药化学鉴定. 张贵君，23，化学工业出版社. 2005 |
| 常用中药化学鉴定. 张贵君，23，化学工业出版社. 2005 * |
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