CN100563682C - 一种由山楂叶与红景天制成的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种用于心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法，该组合物主要由山楂叶和红景天制成，两者的重量配比为：1∶0.05～10；还可以由山楂叶总黄酮和红景天提取物制成，两者的重量配比为：1∶0.05～10。该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。两药合用，可协同发挥抗心肌缺血、抗血小板聚集、抗血栓形成、改善脑及心脏微循环、降血脂的作用，可用于冠心病，心绞痛，脑动脉供血不足，高脂血症等。

Description

一种由山楂叶与红景天制成的药物组合物及其制备方法

[技术领域]

本发明属于医药技术领域，涉及一种用于治疗心脑血管疾病的山楂叶或其提取物与红景天或其提取物的药物组合物以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法。

[背景技术]

心脑血管疾病是一种严重威胁中老年人健康的常见疾病，被称为人类健康的“第一杀手”。根据我国流行病学调查，我国因心脑血管疾病死亡者占总死亡人口的百分比，已由1957年的12.07％上升到2001年的42.6％，每年死于心脑血管疾病者达200万。因此，揭示心脑血管疾病发生、发展的机制，开展有效的预防、治疗和康复，降低致残和死亡率，一直是医药界人士致力于发展的方向。

山楂叶为蔷薇科植物山里红(Crataegus Pinnatifida Bge.var.major N.E.Br)或山楂(CrataegusPinnatifida Bge.)的干燥叶，具有活血化瘀，宣通心脉，理气舒络的功效。山楂叶总黄酮能抑制血小板聚集，扩张冠状动脉改善心肌供血，降低心肌耗氧量，对缺血心脏产生明显的保护作用，并具有降血脂，降血压的功效。适用于冠心病，冠状动脉供血不足，心绞痛、高脂血症，脑动脉供血不足等。研究表明，山楂叶的主要有效成分为山楂叶黄酮、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷等。中国药典2005年版一部575～576页，益心酮片项下，有山楂叶提取物的标准。标准规定，山楂叶提取物按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于80.0％；含金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)，不得少于0.40％。

红景天为景天科Crassulaceae红景天属Rhodiola L.植物，具有益气活血、通脉平喘的功效，用于气虚血瘀、胸弊心痛、中风偏瘫、倦怠气喘。现代研究表明，红景天能够有效地扩张冠状动脉，抗心肌缺血，提高心脏功能，亦可改善脑组织的血液循环，加快脑梗塞病灶的恢复，对缓解头痛，解除疲劳，增强记忆力等也有显著功效。化学成分研究显示，红景天的主要有效成分是红景天苷和酪醇。红景天苷结构式如下：

红景天苷结构式

利用山楂叶和红景天的相互作用，配伍组方用于制备治疗心脑血管疾病的药物，还未见报道。

[发明内容]

本发明提供了一种新的治疗心脑血管疾病的药物组合物，它主要由山楂叶和红景天制成，两者的重量比为：1∶0.05～10，优选为1∶0.1～5，最佳为1∶0.5。或者可以由山楂叶总黄酮和红景天提取物制成，山楂叶总黄酮和红景天提取物的重量配比为1∶0.05～10，优选为1∶0.1～5，最佳为1∶0.5。

以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。

山楂叶和红景天可以用适宜的溶剂和方法分别或混合提取加工得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。总提取物中所含的主要有效成分为山楂叶总黄酮和红景天苷。总提取物中的主要有效成分的总含量不低于30％。

山楂叶总黄酮已经有生产上市，可以购买上市原料(国药准字Z14021005)，也可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利申请CN03129427.8、CN03133957.3、CN91111834.9、CN03119429.X、CN02116789.3、CN98107298.4的制备方法获得，还可自行摸索制备工艺获得。本发明还提供了一种山楂叶总黄酮的制备方法。

本发明提供的山楂叶的提取制备工艺(以山楂叶总黄酮为主要有效成分)为：

取山楂叶，加75％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味后，加等量水稀释，用1/2量的石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用乙酸乙酯萃取，萃取液减压回收乙酸乙酯并浓缩至干，得山楂叶粗提取物(供口服用)。

通过上述工艺制备的山楂叶总黄酮得率为4～6％，总黄酮的含量以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不少于60.0％；金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)的含量不少于0.20％。

山楂叶总黄酮精制工艺：

取上述山楂叶粗提取物，加入适量水使溶解，加于已处理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，然后用3倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度约1.02～1.08(60℃)的浓缩液，喷雾干燥，得山楂叶总黄酮(供注射或口服用)。

通过上述工艺制备的山楂叶总黄酮得率为2～3％；总黄酮含量以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不少于80.0％；含金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)，不少于0.40％。

红景天提取物可以由红景天药材通过水提醇沉、醇浸后醇沉、醇提乙酸铅沉淀分离、醇浸后微波破壁、醇浸后絮凝、醇提壳聚糖吸附等方法制备，也可利用中国专利申请CN200410040268.4、CN03116051.4、CN01128982.1，王威等(中草药，1999，30(11)：824～826)的方法获得，但不仅限于上述方法。本发明还提供了一种红景天提取物的制备方法。

本发明提供的一种红景天的提取工艺及精制工艺，具体过程如下：

取红景天药材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小时，第一次加醇10倍量，第二、三次分别为8、8倍量。滤过，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得红景天提取物(供口服用)。

通过本工艺制得的红景天粗提物的得率为10～20％，红景天苷含量不低于3％。

红景天精制工艺；

将上述得到的红景天提取物用适量水溶解后，加于已事先处理好的大孔树脂柱上，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脱。减压回收乙醇至相对密度为1.03～1.06(60℃)，喷雾干燥，得红景天提取物(供注射或口服用)。

通过本工艺制得的红景天提取物得率为2～3％，红景天苷的含量不低于10％。

该组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。优选的形式是注射剂、片剂和胶囊。

本发明的药物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

本发明在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。

本发明药物组合物可以扩张冠状动脉，增加冠脉流量，改善冠脉循环，降低冠状动脉阻力；可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善血液流变学和微循环；降低脑血管阻力，增加脑血管流量，改善脑微循环；降低血清胆固醇及甘油三酯水平。主要用于冠心病，心绞痛，脑动脉供血不足，高脂血症。

本发明的药物组合物具有以下优点：

(1)本发明提供了一种新的用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，满足了临床需要。

(2)本发明药物组合物中，山楂叶能抑制血小板聚集，扩张冠状动脉，改善心肌供血，降低心肌耗氧量，对缺血性心脏病产生明显的保护作用，并具有降血脂，降血压的功效；红景天能够有效地扩张冠状动脉，抗心肌缺血，提高心脏功能，亦可改善脑组织的血液循环，加快脑梗塞病灶的恢复，可缓解头痛，解除疲劳，增强记忆力。二者药理作用相似，配伍应用，可以协同发挥作用。

(3)首次通过药效学实验研究证明：本发明药物组合物，可以显著缩小大鼠实验性心肌梗塞范围，抗心肌缺血；显著抗血小板聚集，显著延长大鼠颈动脉内血栓形成的时间，抗血栓；对兔脑缺血再灌注损伤有保护作用，显著改善麻醉犬的血流动力学，改善脑组织和心脏的微循环；显著降低实验性高血脂症大鼠的血清胆固醇和甘油三酯水平，降血脂。二药配伍具有协同增效作用，疗效显著，产生了意想不到的效果，这是本技术领域的普通技术人员所意想不到的。

(4)对本发明的药物组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明药物组合物的最优配比。

(5)本发明药物组合物制剂制备工艺简单，不同批次药品间质量差异小，药品质量均匀稳定。

(6)通过稳定性实验证实，本发明的药物组合物注射剂稳定性好。

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。山楂叶总黄酮和红景天提取物的组合物以下简称SH组合物。实验例中所用山楂叶总黄酮取自实施例1，红景天提取物取自实施例2。

试验例1SH组合物合并用药药效学研究—对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响

受试动物：Wistar大鼠，雄性，体重204～228g，130只，每组10只，随机分为13组。

供试品：山楂叶总黄酮注射液，自制，5ml:50mg；

红景天提取物注射液，自制，2ml:25mg；

SH组合物注射液(山楂叶总黄酮+红景天提取物的不同配比，配比见表1)，10组，自制。

试验方法：将大鼠随机分为13组：生理盐水对照组；模型组；山楂叶总黄酮组；红景天提取物组；SH组合物注射液组：山楂叶总黄酮+红景天提取物(1∶0.05、1∶0.1、1∶0.2、1∶0.5、1∶0.75、1∶1、1∶2、1∶5、1∶7.5、1∶10)。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度，尾静脉注射给药。

大鼠实验性心肌梗死模型：动物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵切口，近胸骨侧剪断第3、第4肋软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机(通气量2ml/100g，50次/min)。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，静脉给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色，计算心肌梗死区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理(t检验)。结果见表1。

表1SH组合物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响(x±s)

注：与生理盐水对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与山楂叶总黄酮组相比，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与红景天提取物组相比，^△P＜0.05，^△△P＜0.01

结论：与生理盐水组相比较，各给药组都具有明显的抗心肌缺血作用(P＜0.05或P＜0.01)。与单用山楂叶总黄酮组和单用红景天提取物组相比较，SH组合物各配比组均能缩小大鼠实验性心肌梗塞范围(P＜0.05和P＜0.01)，其中SH组合物(1∶0.2、1∶0.5、1∶0.75、1∶1、1∶2)组疗效更为显著，提示两药配伍有协同增效作用；其中以SH组合物(1∶0.5)组，疗效最为显著。

试验例2SH组合物的抗血小板聚集作用

试验动物：Wistar大鼠，雄性，体重201～225g，80只，每组10只，随机分为8组。

供试品：山楂叶总黄酮注射液，自制，5ml:50mg；

红景天提取物注射液，自制，2ml:25mg；

SH组合物注射液(不同配比，配比见表2)，5组，自制。

试验方法：将大鼠随机分为8组，每组10只，分别为生理盐水对照组、红景天提取物注射液组、山楂叶总黄酮注射液组、SH组合物注射液不同配比组(1∶0.2、1∶0.5、1∶0.75、1∶1、1∶2)。各组动物腹腔注射给药，每日一次，连续给药7天，末次给药后1小时，动物麻醉后自腹主动脉取血，抗凝剂采用3.28％枸橼酸钠，与血液以1∶9比例混合。将抗凝全血在20℃条件下1500r.min^-1离心5min获得富血小板血浆(PRP)。留取定量PRP后，将剩余PRP再次以3000r.min^-1离心10min，获得自身对照贫血小板血浆(PPP)。以PPP调节PRP浓度，使各PRP浓度相同。将PRP在37℃的恒温孔中预热后，加入ADP(终浓度为3μmol.L^-1)引起血小板聚集，记录最大聚集率。结果见表2。

表2SH组合物抗血小板聚集作用(X±SD)

注：与生理盐水对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与山楂叶总黄酮组相比，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与红景天提取物组相比，^△P＜0.05，^△△P＜0.01

结论：与生理盐水对照组比较，红景天提取物注射液、山楂叶总黄酮注射液和SH组合物注射液均能使实验大鼠的血栓形成时间延长(P＜0.05或P＜0.01)，表明山楂叶总黄酮注射液、红景天提取物注射液和SH组合物注射液均有抗血栓作用。与单用山楂叶总黄酮组和单用红景天提取物组相比较，SH组合物各配比组均能使实验大鼠的血栓形成时间延长(P＜0.05或P＜0.01)，提示两药配伍有协同增效作用；其中以SH组合物注射液(山楂叶总黄酮+红景天提取物1∶0.5)组，疗效最为显著。

试验例3SH组合物对大鼠颈动脉内血栓形成的影响

试验动物：Wistar大鼠，雌雄兼用，体重207～227g，60只，每组10只，随机分为6组。

供试品：山楂叶总黄酮注射液，自制，5ml:50mg；

红景天提取物注射液，自制，2ml:25mg；

SH组合物注射液(5ml含山楂叶总黄酮50mg，红景天提取物25mg)，自制，制备方法参照实施例3。

试验方法：将大鼠随机分为6组，每组6只，分别为生理盐水对照组、红景天提取物组、山楂叶总黄酮组、SH组合物低、中、高剂量组。尾静脉注射给药。空白对照组给予等容积生理盐水，给药20分钟后开始试验。动物用2.5％戊巴比妥钠(25mg/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧位固定，分离右侧颈总动脉，采用电流损伤颈动脉内膜法，用BT87-3实验性体内血栓形成仪测定不同组别动物颈动脉血栓形成时间。将电极置放在颈动脉上对其进行电刺激(2mA，7min)，以感应电极连续测量动脉远端表面温度，观察动脉温度突降时间。记录电刺激开始至主动脉温度突降的时间，该时间定为颈动脉血栓形成时间(超过3000秒者以3000秒计)。实验结果见表3。

表3SH组合物对大鼠颈动脉内血栓形成的影响

注：与生理盐水对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与山楂叶总黄酮组相比，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与红景天提取物组相比，^△P＜0.05，^△△P＜0.01

结论：山楂叶总黄酮、红景天提取物和SH组合物均可使大鼠颈动脉内血栓形成的时间延长(P＜0.05或P＜0.01)。与单用山楂叶总黄酮组和单用红景天提取物组相比较，SH组合物各剂量组均能显著延长大鼠颈动脉内血栓形成时间(P＜0.05或P＜0.01)，其中以SH组合物中、高剂量组，疗效最为显著。

试验例4SH组合物对兔脑缺血再灌注损伤的保护作用

试验动物：家兔，78只，体重2.2～2.7kg，随机分为13组，每组6只。

供试品：山楂叶总黄酮注射液，自制，5ml:50mg；

红景天提取物注射液，自制，2ml:25mg；

SH组合物注射液(5ml含山楂叶总黄酮50mg，红景天提取物25mg)，自制，制备方法参照实施例3。

试验方法：将兔随机分为：缺血再灌注组(I/R组)、SH组合物治疗组、山楂叶总黄酮治疗组、红景天提取物治疗组和假手术对照组(SOC组)。(1)缺血再灌注组(I/R组)：18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg体重耳缘静脉麻醉，颈部正中切口分离气管插入气管套管，暴露两侧颈总动脉，以动脉夹两侧夹闭20min，造成脑缺血，松夹分别再灌注1h、6h和12h，三个时间点各6只。分别在松夹10min后，耳缘静脉推注生理盐水5ml/kg体重。(2)SH组合物治疗组：18只，手术方法同I/R组，三个时间点各6只，分别在松夹10min后，耳缘静脉推注SH组合物注射液10mg/kg。(3)山楂叶总黄酮治疗组：18只，手术方法同I/R组，三个时间点各6只，分别在松夹10min后，耳缘静脉推注山楂叶总黄酮注射液10mg/kg。(4)红景天提取物治疗组：18只，手术方法同I/R组，三个时间点各6只，分别在松夹10min后，耳缘静脉推注红景天提取物注射液10mg/kg。(5)假手术对照组(SOC组)：6只，动物仅行麻醉和动脉分离术而不夹闭，1h后处死。上述各组实验结束后即断头，在冰浴中剥出大脑，冰盘上解剖出双侧海马区组织，用锡纸包裹放在4℃冰箱中储存，备用。应用pH酸度计检测海马组织PLA₂的活性；采用干湿重法、TTC染色法测定皮层脑组织含水量、梗死面积；光镜下观察脑组织病理变化。

试验结果：(1)对海马组织PLA₂活性的影响：I/R组再灌注1h、6h和12h后，海马组织PLA₂活性较SOC明显增高(P＜0.01)，且随灌注时间延长，PLA₂活性呈递减趋势，但各时间点间比较差异不显著(P＞0.05)；SH组合物治疗组(1h、6h、12h)PLA₂活性明显降低，与SOC组和I/R各相应时间点比较具有显著性差异(P＜0.01，P＜0.001)，且随再灌时间延长，PLA₂活性逐渐向正常水平恢复；红景天提取物治疗组和山楂叶总黄酮治疗组(1h、6h、12h)PLA₂活性降低，与SOC组和I/R各相应时间点比较具有明显差异(P＜0.05，P＜0.01)，红景天提取物的作用低于山楂叶总黄酮。

(2)对皮层组织含水量(％)和梗死面积(％)的影响：I/R组各时间点脑含水量均增高；SH组合物治疗组各时间点脑水含量与I/R组相比明显减轻(P＜0.001)，脑梗死面积与I/R组相比明显缩小(P＜0.01)；红景天提取物治疗组和山楂叶总黄酮治疗组各时间点脑水含量与I/R组相比均减轻(P＜0.01)，脑梗死面积与I/R组相比均缩小(P＜0.05，P＜0.01)。

(3)脑组织病理改变：SOC组无梗死灶，神经元结构形态正常，无间质水肿；I/R组有梗死灶，梗死灶周神经元肿胀，细胞轮廓不清，间质水肿明显；SH组合物治疗组、红景天提取物治疗组、山楂叶总黄酮治疗组梗死灶面积均缩小，梗死灶周神经元肿胀不明显，间质水肿明显减轻；SH组合物治疗组作用更明显。

结论：上述试验结果表明，SH组合物、山楂叶总黄酮、红景天提取物均可通过降低PLA₂活性，改善脑循环，减轻脑缺血再灌注损伤，而发挥脑保护作用。SH组合物在各项指标中均高于山楂叶总黄酮和红景天提取物单独用药的效果，提示两药具有协同增效作用。

试验例5SH组合物对麻醉开胸犬血流动力学的影响

试验动物：杂种犬，20只，体重11.2～13.5kg。

供试品：山楂叶总黄酮注射液，自制，5ml:50mg；

红景天提取物注射液，自制，2ml:25mg；

SH组合物注射液(5ml含山楂叶总黄酮50mg，红景天提取物25mg)，自制，制备方法参照实施例3。

试验方法：将犬随机分为4组，每组5只，分别为生理盐水对照组、山楂叶总黄酮组、红景天提取物组、SH组合物组。犬用戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉注射麻醉后，采取右侧卧位正压人工呼吸下，于左4～5胁间开胸，于距迷走神经2cm处打开心包，壁层做悬床将其缝合于胸壁，使心脏充分暴露。分离主动脉，在主动脉根部套入电磁流量计探头(10～12mm)，测量心输出量(CO)；在冠状动脉左前降支根部，分离心外膜，分离出约1cm冠状动脉，套入电磁流量计探头(2～3mm)，测量冠脉流量(CBF)；将此二探头连于LMTC-621型电磁流量计上，分离一侧颈动脉，插管，连接压力换能器，记录动脉血压(AP)及平均动脉压(MAP)；将内径为1.5mm的心导管从心尖插入左心室，通过YZ-1型压力换能器经载波放大左室内压(LVP)，LVP电讯号经直流放大器放大10倍，记录左室舒张末期压(LVEDP)，以LVP电讯号再经BMI型微分器微分记录左室内压变化速率(dP/dt_max)，用针型电极插入受试动物四肢皮下，记录标II导联心电图(EGG-II)，以测量心率(HR)。上述指标变化均同步记录于RM-6300生理多导仪。

分离股动脉抽动脉血，经颈外动脉插管至冠状静脉窦抽取静脉血，根据CY-2测氧仪使用说明书，用新鲜配制的无氧溶液(0.01M)硼砂溶液加入无水亚硫酸钠结晶配制成2％的亚硫酸钠溶液调零，用与空气平衡温度恒定的蒸馏水作灵敏度调节。待仪器稳定后用测氧仪测定血氧含量。试验结束后计算心肌耗氧量。

手术结束后，观察上述各项指标，稳定后将记录值作为给药前的指标，静脉分别给药生理盐水、山楂叶总黄酮注射液、红景天提取物注射液和SH组合物注射液后于1、3、5、10、20、30min，采集上述各项指标，并以给药后各时间点的各项指标变化率(％)，与对照组各对应时间点的各项指标变化率(％)做组间显著性成对资料的t-test处理。

试验结果及结论：SH组合物、山楂叶总黄酮、红景天提取物对受试犬心率(HR)，平均动脉压(MBP)、左室内压(LVP)及心室肌收缩力(dp/dt_max)、心肌耗氧量均有降低作用。尤其是SH组合物，降低幅度均明显大于山楂叶总黄酮组和红景天提取物组，心肌耗氧量于给药后2分钟左右开始降低，最大值为26.2％，作用时间达30分钟以上，与对照组比较有非常显著的疗效P＜0.01。

试验例6SH组合物对大鼠实验性高血脂症的影响

试验动物：Wistar大鼠，雌雄各半，体重208～230g。

供试品：山楂叶总黄酮注射液，自制，5ml:50mg；

红景天提取物注射液，自制，2ml:25mg；

SH组合物注射液(5ml含山楂叶总黄酮50mg，红景天提取物25mg)，自制，制备方法参照实施例3。

试验方法：大鼠，测药前胆固醇及甘油三酯水平后，建高脂模型。除空白对照组给予普通饲料外，其余各组均给予高脂饲料(配方为普通饲料86.8％、胆固醇3％、猪油10％、丙硫氧嘧啶0.2％)，连续喂饲10天后，测血清胆固醇及甘油三酯水平，确定高脂模型建成。模型建成后继续饲高脂饲料，其中三组分别灌胃给药SH组合物、山楂叶总黄酮和红景天提取物，每日灌胃给药1次，连续给药20天后，再取血测胆固醇及甘油三酯水平。试验结果见表4和表5。

表4SH组合物对饮食性高血脂大鼠血清胆固醇的影响

注：与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001；与山楂叶总黄酮组相比，^#P＜0.05；与红景天提取物组相比，^△△P＜0.01。

表5SH组合物对饮食性高血脂大鼠血清甘油三酯的影响

注：与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与山楂叶总黄酮组相比，^#P＜0.05；与红景天提取物组相比，^△P＜0.05和^△△P＜0.01。

结论：结果表明，SH组合物、山楂叶总黄酮、红景天提取物均可显著降低饮食性高血脂大鼠的血清胆固醇和甘油三酯水平(P＜0.05或P＜0.01)。与单用山楂叶总黄酮组相比，SH组合物各剂量组均可显著降低血清胆固醇水平(P＜0.05)，SH组合物中高剂量组显著降低血清甘油三酯水平(P＜0.05)；与单用红景天提取物组相比较，SH组合物各剂量组均可显著降低血清胆固醇(P＜0.01)和血清甘油三酯水平(P＜0.05或P＜0.01)，提示山楂叶和红景天合并用药有协同增效作用。其中以SH组合物高剂量组疗效最为显著。

试验例7：SH组合物注射液稳定性试验

供试品：SH组合物注射液(5ml含山楂叶总黄酮50mg，红景天提取物25mg)，采用实施例3制得的SH组合物注射液。

考察项目：性状、pH值、澄明度

长期稳定性试验方法及结果：将本品置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明SH组合物注射液长期放置基本稳定。

[具体实施方式]

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例3～9中所用的山楂叶总黄酮均取自实施例1，所用的红景天提取物均取自实施例2。

实施例1山楂叶总黄酮的制备

取山楂叶，加75％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味后，加等量水稀释，用1/2量的石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用乙酸乙酯萃取，萃取液减压回收乙酸乙酯并浓缩至干，得山楂叶总黄酮(供口服制剂用)。取上述山楂叶总黄酮，加入适量水使溶解，加于已处理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，然后用3倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度约1.02～1.08(60℃)的浓缩液，喷雾干燥，得山楂叶总黄酮(供口服或注射用)。

鉴别

取本品50mg，加乙醇5ml，摇匀，超声处理5分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取芦丁对照品、金丝桃苷对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点子同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙酮-水(7∶5∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，吹干，放置1小时后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光。

含量测定

对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理(功率300W，频率50kHz)使溶解，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％硝酸铝溶液1ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(附录V A)，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液2ml，至25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸光度，同时精密量取供试品溶液2ml，置25ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为空白溶液。从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的量，计算，即得。

金丝桃苷含量测定照高效液相色谱法(附录VI D)

色谱条件与系统适用性以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-四氢呋喃-0.5％醋酸溶液(1∶1∶19.4∶78.6)为流动相；检测波长为363nm。理论塔板数按金丝桃苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品0.15g，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇40ml，超声处理(功率300W，频率50kHz)30分钟，放冷，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，离心(每分钟12000转)10分钟或用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取上清液或续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

分别精制三批山楂叶总黄酮，得率以及总黄酮和金丝桃苷含量测定结果见下表。

表6山楂叶总黄酮得率及含量测定结果

由结果可以看出，通过本工艺制备的山楂叶总黄酮得率为2～3％，总黄酮的含量不低于80％，金丝桃苷的含量不低于0.4％。

实施例2红景天提取物的制备

取红景天药材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小时，第一次加醇10倍量，第二三次分别为8、8倍量。滤过，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得红景天粗提取物。

将红景天粗提取物用适量水溶解后，加于已事先处理好的大孔树脂柱上，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脱。减压回收乙醇至相对密度为1.03～1.06(60℃)，喷雾干燥，得红景天精提取物。

鉴别

取本品0.1g，加甲醇10ml，超声处理30min，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红景天药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

红景天苷的含量测定

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15∶85)为流动相，检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备精密称取红景天苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密称取本品0.1g，研匀，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

按照上述精制工艺制得的三批红景天提取物，红景天苷含量和得率见表7。

表7红景天提取物的含量测定结果和得率

由结果可以看出，通过本工艺制备的红景天提取物得率为2～3％，红景天苷的含量不低于10％。

实施例3SH组合物水针剂的制备

处方：

山楂叶总黄酮    50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物    25.0g(相当于红景天1kg)

注射用水        加至5000ml

                                            

共制备          1000支

制备工艺：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量80％的注射用水，加入处方量的山楂叶总黄酮和红景天提取物，加热搅拌溶解完全。

3)补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。

9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。

11)灯检，成品全检，包装入库。

实施例4SH组合物粉针剂的制备

处方：

山楂叶总黄酮    50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物    25.0g(相当于红景天1kg)

甘露醇          400g

无菌注射用水    加至3000ml

                                          

共制备          1000支

制备工艺：

1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)取配液量80％的无菌注射用水，将山楂叶总黄酮和红景天提取物加入加热搅拌溶解完全。再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.22um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。于-40℃预冻4小时，于-40℃～0℃低温真空干燥30小时，然后升温，于30℃保温真空干燥2.5小时。

9)冻干结束，压塞，轧盖。

10)成品全检，包装入库。

实施例5SH组合物氯化钠输液的制备

处方：

山楂叶总黄酮    50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物    25.0g(相当于红景天1kg)

氯化钠          900g

注射用水        加至100000ml

                                         

共制备          1000瓶

制备工艺：

1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量20％的注射用水将山楂叶总黄酮和红景天提取物加入加热搅拌溶解完全。将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全。

3)合并两溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例6SH组合物葡萄糖输液的制备

处方：

山楂叶总黄酮    50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物    25.0g(相当于红景天1kg)

葡萄糖          5000g

注射用水        加至100000ml

                                             

共制备          1000瓶

制备工艺：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量20％的注射用水将山楂叶总黄酮和红景天提取物加入加热搅拌溶解完全。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。

3)合并两溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例7SH组合物片剂的制备

处方：

山楂叶总黄酮    50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物    25.0g(相当于红景天1kg)

淀粉            120.0g

预胶化淀粉      80g

微晶纤维素      40.0g

2％HPMC水溶液   适量

硬脂酸镁        2.0g

微粉硅胶        5.0g

羧甲淀粉钠      8.0g

                                         

共制备          1000片

制备工艺：

1)将山楂叶总黄酮和红景天提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将山楂叶总黄酮、红景天提取物、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁、羧甲淀粉钠和微粉硅胶，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的片重压片。

10)成品全检，包装入库。

实施例8SH组合物胶囊剂的制备

处方：

山楂叶总黄酮    50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物    25.0g(相当于红景天1kg)

淀粉            30g

预胶化淀粉      80g

微晶纤维素      20g

2％HPMC水溶液   适量

硬脂酸镁        1g

                                         

共制备          1000粒

制备工艺：

1)将山楂叶总黄酮和红景天提取物粉碎过80目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将山楂叶总黄酮、红景天提取物、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在55℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的装量装入胶囊。

10)成品全检，包装入库。

实施例9SH组合物颗粒剂的制备

处方：

山楂叶总黄酮            50.2g(相当于山楂叶2kg)

红景天提取物            25.0g(相当于红景天1kg)

甜菊素                  20g

糖粉                    3000g

2％HPMC50％乙醇溶液     适量

                                                       

共制备                  1000包

制备工艺：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将山楂叶总黄酮和红景天提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将山楂叶总黄酮、红景天提取物与甜菊素、糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)半成品检验

8)确定装量，分装。

9)成品全检，包装入库。

Claims (9)

1.一种用于心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于该药物组合物由山楂叶和红景天制成，两者的重量比为：1∶0.05～10。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的山楂叶和红景天的重量比为：1∶0.1～5。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的山楂叶和红景天的重量比为：1∶0.5。

4.如权利要求1～3任一权利要求所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，其中的山楂叶提取物的制备方法为：取山楂叶，加75％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味后，加等量水稀释，用1/2量的石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用乙酸乙酯萃取，萃取液减压回收乙酸乙酯并浓缩至干，即得山楂叶提取物；红景天提取物的制备方法为：取红景天药材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小时，第一次加醇10倍量，第二、三次分别为8、8倍量。滤过，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得红景天提取物；总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。

5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，总提取物中所含的主要有效成分为：山楂叶总黄酮和红景天苷，总提取物中的主要有效成分的总含量不低于30％。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物还可以由山楂叶总黄酮和红景天提取物制成，两者的重量配比为：1∶0.05～10，所述的山楂叶总黄酮中，总黄酮的含量以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计不少于60.0％，金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)的含量不少于0.20％；所述的红景天提取物中红景天苷的含量不低于3％。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的山楂叶总黄酮和红景天提取物的重量比为：1∶0.1～5，所述的山楂叶总黄酮中，总黄酮的含量以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计不少于60.0％，金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)的含量不少于0.20％；所述的红景天提取物中红景天苷的含量不低于3％。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的山楂叶总黄酮和红景天提取物的重量比为：1∶0.5，所述的山楂叶总黄酮中，总黄酮的含量以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计不少于60.0％，金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)的含量不少于0.20％；所述的红景天提取物中红景天苷的含量不低于3％。

9.如权利要求1～3、6～8任一权利要求所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物可以与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。