CN100537761C - 反义寡核苷酸,含它们的药物组合及其用于治疗癌症的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及靶向HER-2基因的反义寡核苷酸，含它们的药物组合物及其用于治疗癌症的用途。

Description

反义寡核苷酸，含它们的药物组合及其用于治疗癌症的用途
发明领域
本发明涉及靶向HER-2基因的反义寡核苷酸，含它们的药物组合物及其用于治疗癌症的用途。
背景技术
HER-2(c-erbB-2，neu)是一种与乳腺癌的发生、发展、预后等密切相关的原癌基因。约有高达30％的乳腺癌患者伴随有HER-2及其基因产物(p185HER-2/neu)的过表达，HER-2过表达的乳腺癌病人采用化疗、放疗、激素治疗或联合治疗等多种手段均无显著疗效(Menard S J Cell Physiol2000；182：150-161.Pegram MD Oncogene 1997；15：537-547.DepowskiPL Am J Clin Pathol 1999；112：459-469)。近年来，选择HER-2原癌基因或/和p185HER-2/neu作为治疗乳腺癌的靶点已经越来越引起人们的关注。其中p185HER-2/neu特异的人源化单克隆抗体Herceptin(赫赛汀)用于治疗HER-2高表达的乳腺癌病人已被批准用于临床，并取得令人鼓舞的疗效(Miles DW Breast Cancer Res 2001；3：380-384)。反义寡核苷酸类药物可直接作用于RNA水平，并可以克服蛋白药物的诸多缺点。本发明的主要目的就在于寻找靶向HER-2的反义寡核苷酸。
发明内容
本发明者经过广泛深入研究，现已发现下面对HER-2过表达的肿瘤细胞株如SK-BR-3乳腺癌、BT474乳腺癌细胞有良好抑制作用的反义寡核苷酸。
因此，本发明第一方面涉及的是具有下面序列1-3的反义寡核苷酸或含有它们的片段：
序列1：5’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；
序列2：5’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或
序列3：5’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。
本发明再一方面涉及的是序列1-3的反义核苷酸或含其的片段用于治疗癌症的用途。
本发明再一方面涉及的是至少一种序列1-3的反义寡核苷酸或含其的片段用于制备用于治疗癌症的药物的用途，
序列1：5’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；
序列2：5’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或
序列3：5’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。
本发明再一方面涉及一种药物组合物，其包括至少一个序列1-3的反义寡核苷酸或含其的片段及药用载体，
序列1：5’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；
序列2：5’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或
序列3：5’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。
具体实施方式
根据本发明，优选将本发明反义寡核苷酸用于制备用于治疗乳腺癌的药物。下面的实施例是对本发明的进一步说明，但不意味着对本发明任何限制。
实施例1：
1.人乳腺癌细胞系(SK-BR-3、BT-474等)的培养及反义寡核苷酸的处理：
接种细胞于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基中(补充青、链霉素各100ku·L-1)，培养器皿置于37℃含有5％ CO2的细胞培养箱中。培养细胞达到50～60％融合时，用无血清培养基冲洗2遍。按Gibcol BRL公司脂质体转染说明书的要求，将反义寡核苷酸导入到肿瘤细胞内。将脂质体lipofectamine 2000/无血清无抗生素培养基＝1/25的比例，配制成脂质体溶液，室温下静置30分钟。等体积混合用无血清培养基溶解的不同浓度的反义寡核苷酸，静置20分钟后，加入到培养器皿中，迅速补充等量的无血清培养基。置于37℃含5％ CO2的培养箱中6小时后，换正常培养基，培养24-48小时后MTT法测定细胞活度。对照组仅含等浓度的脂质体。
2.靶向HER-2mRNA的反义寡核苷酸对肿瘤细胞的抑制作用：
将对数生长期的SK-BR-3细胞或其它的细胞接种于96孔培养板中，20000个细胞/孔。培养18-24小时，按上述方法，加入不同浓度的反义寡核苷酸反应终体积均为200μl。换正常培养基继续培养48-72小时，弃上清。每孔加入200μl新鲜配制的含0.5mg/ml四氮唑盐(MTT)的无血清培养基，37℃培养4小时后弃上清。以200μl DMSO溶解甲臜。轻度振荡后，用酶标仪在检测波长为570nm、参比波长为450nm下测定光吸收值。
本发明反义寡核苷酸对乳腺癌SK-BR-3细胞系强抑制增殖作用。
表1～3显示本发明反义寡核苷酸对SK-BR-3乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用(N＝4，对照组为脂质体对照)。
表1 BCT-61
 
浓度(nM) 抑制率(％)
13 23.9±11.8
32 39.4±2.3
80 55.2±6.0
200 62.2±9.2
500 74.5±16.5
1250 88.9±10.8
表2 BCT-41
 
浓度(nM) 抑制率(％)
13 27.3±13.0
32 38.3±20.0
80 67.3±15.6
200 82.2±9.2
500 94.1±4.9
1250 98.9±0.8
表3 BCT-36
 
浓度(nM) 抑制率(％)
13 30.9±16.2
32 40.3±24.6
80 60.2±16.5
200 81.5±9.7
500 90.0±2.0
1250 97.3±4.0
实施例2：反义脱氧寡核苷酸的合成
合成方法：使用美国ABI公司生产的ABI 390Z核酸合成仪的25umol合成程序，用标准寡核苷酸固相合成亚磷酰胺法合成。试剂为四乙基秋兰姆化二硫(Tetraethylthiuram disulfide)。制备时，将固相支持物连接保护的、通过固相合成的含本发明核苷酸序列的寡核苷酸，用浓氨水在55℃条件下，作用15个小时脱保护，从固相支持物上切离。用HPLC法进行纯化。本发明具有序列1-3的反义寡核苷酸可按上述方法制备得到。
序列表
(1)一般资料：
I.序列数量：3
(2)序列BCT-61的资料：
I.序列特征：
a)核苷酸长度：20
b)类型：核酸
c)链型：单链
d)拓扑特征：链状
II.是否反义：反义
III.序列描述：BCT-61
(3)序列BCT-41的资料：
I.序列特征：
a)核苷酸长度：20
b)类型：核酸
c)链型：单链
d)拓扑特征：链状
II.是否反义：反义
III.序列描述：BCT-41
Figure C200310103185D00072
(4)序列BCT-36的资料：
I.序列特征：
a)核苷酸长度：20
b)类型：核酸
c)链型：单链
d)拓扑特征：链状
II.是否反义：反义
III.序列描述：BCT-36

Claims (3)

1.反义核苷酸，其由以下序列2表示：
序列2：5’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’。
2.一种药物组合物，其包括以下序列2的反义核苷酸及药用载体：
序列2：5’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’。
3.以下序列2的反义核苷酸在制备用于治疗乳腺癌的药物中的用途：
序列2：5’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1202900A (zh) * 1995-11-21 1998-12-23 Icn药品公司 用il－8和il－8受体的反义寡核苷酸抑制肿瘤生长
WO2002031142A2 (en) * 2000-10-12 2002-04-18 A3D Gmbh Antisense nucleic acid against alphav integrin

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1202900A (zh) * 1995-11-21 1998-12-23 Icn药品公司 用il－8和il－8受体的反义寡核苷酸抑制肿瘤生长
WO2002031142A2 (en) * 2000-10-12 2002-04-18 A3D Gmbh Antisense nucleic acid against alphav integrin

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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一个新的靶向HER-2mRNA的反义寡核苷酸,HA824,对HER-2表达的影响. 杨栓平，宋三泰，宋海峰，郑晓玲，汤仲明.中国药理学与毒理学杂志，第17卷第2期. 2003
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靶向HER-2mRNA反义寡核苷酸对SK-BR-3乳腺癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响. 杨栓平，宋海峰，宋三泰，郑晓玲，张凤霞.中国药理学通报，第19卷第5期. 2003
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