CN110607299B - 887s rna及其在抑制肿瘤中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了887S RNA及其在抑制肿瘤中的应用。本发明提供了一种RNA分子，获自人(Homo sapiens)，命名为887S RNA，为序列表的序列1所示的RNA分子。本发明还保护序列表的序列2所示的DNA分子。本发明还保护所述RNA分子或所述DNA分子在制备产品中的应用；产品功能：抑制癌细胞增殖；抑制癌细胞迁移；抑制肿瘤生长；抑制肿瘤转移；治疗癌症。本发明还保护用于降低所述RNA分子水平的物质或用于沉默所述DNA分子的物质在制备产品中的应用；产品功能：促进癌细胞增殖；促进癌细胞迁移；促进肿瘤生长；促进肿瘤转移；制备肿瘤动物模型。本发明对于舌癌动物模型的构建以及舌癌的治疗，具有重大的应用推广价值。

Description

887S RNA及其在抑制肿瘤中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及887S RNA及其在抑制肿瘤中的应用。
背景技术
舌癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，男性多于女性，多数为鳞状细胞癌，特别是在舌前2/3部位，腺癌比较少见，多位于舌根部；舌根部有时亦可发生淋巴上皮癌及未分化癌。
舌癌的发病部位具有丰富的局部血管淋巴，易发生早期转移，病人预后极差。例如，目前TCGA共收录舌癌病人数据125例，其中死亡病例85例，存活40例。整体五年存活率为3.2％，死亡病人中仅有1例确诊后生存时间超过5年。此外，在这125例样本中，仅有11例病人在诊断时TNM分期为T1期，说明大多数舌癌在确诊时已处于疾病发展的中后期阶段，另一方面也揭示了舌癌病人五年存活率低的原因。
目前对于舌癌的治疗方面，主要还是施行以手术为主的综合治疗，一般进行原发病切除及颈部淋巴结清扫术，手术前或手术后配合放疗或化疗。
发明内容
本发明的目的是提供887S RNA及其在抑制肿瘤中的应用。
本发明提供了一种RNA分子，获自人(Homo sapiens)，命名为887S RNA，为如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的RNA分子；
(a2)来自于人的与序列表的序列1所示的RNA具有98％以上同一性的RNA分子。
本发明还保护一种DNA分子，为如下(b1)或(b2)：
(b1)序列表的序列2所示的DNA分子；
(b2)来自于人的与序列表的序列2所示的DNA具有98％以上同一性的DNA分子。
本发明还保护具有所述DNA分子的重组表达载体。
本发明还保护用于提高所述RNA分子水平的物质或用于促进所述DNA分子表达的物质在制备产品中的应用；
所述产品的功能为如下(c1)和/或(c2)和/或(c3)和/或(c4)和/或(c5)：
(c1)抑制癌细胞增殖；
(c2)抑制癌细胞迁移；
(c3)抑制肿瘤生长；
(c4)抑制肿瘤转移；
(c5)治疗癌症。
所述用于提高所述RNA分子水平的物质具体可为所述RNA分子或所述DNA分子或所述重组表达载体。
本发明还保护用于降低所述RNA分子水平的物质或用于沉默所述DNA分子的物质在制备产品中的应用；
所述产品的功能为如下(d1)和/或(d2)和/或(d3)和/或(d4)和/或(d5)：
(d1)促进癌细胞增殖；
(d2)促进癌细胞迁移；
(d3)促进肿瘤生长；
(d4)促进肿瘤转移；
(d5)制备肿瘤动物模型。
本发明还保护一种产品，其活性成分为用于提高所述RNA分子水平的物质或用于促进所述DNA分子表达的物质；
所述产品的功能为如下(c1)和/或(c2)和/或(c3)和/或(c4)和/或(c5)：
(c1)抑制癌细胞增殖；
(c2)抑制癌细胞迁移；
(c3)抑制肿瘤生长；
(c4)抑制肿瘤转移；
(c5)治疗癌症。
所述用于提高所述RNA分子水平的物质具体可为所述RNA分子或所述DNA分子或所述重组表达载体。
本发明还保护一种产品，其活性成分为用于降低所述RNA分子水平的物质或用于沉默所述DNA分子的物质；
所述产品的功能为如下(d1)和/或(d2)和/或(d3)和/或(d4)和/或(d5)：
(d1)促进癌细胞增殖；
(d2)促进癌细胞迁移；
(d3)促进肿瘤生长；
(d4)促进肿瘤转移；
(d5)制备肿瘤动物模型。
本发明还保护用于提高所述RNA分子水平的物质或用于促进所述DNA分子表达的物质的应用，为如下(c1)和/或(c2)和/或(c3)和/或(c4)和/或(c5)：
(c1)抑制癌细胞增殖；
(c2)抑制癌细胞迁移；
(c3)抑制肿瘤生长；
(c4)抑制肿瘤转移；
(c5)治疗癌症。
所述用于提高所述RNA分子水平的物质具体可为所述RNA分子或所述DNA分子或所述重组表达载体。
本发明还保护用于降低所述RNA分子水平的物质或用于沉默所述DNA分子的物质的应用，为如下(d1)和/或(d2)和/或(d3)和/或(d4)和/或(d5)：
(d1)促进癌细胞增殖；
(d2)促进癌细胞迁移；
(d3)促进肿瘤生长；
(d4)促进肿瘤转移；
(d5)制备肿瘤动物模型。
以上任一所述癌细胞可为具有CA9基因的癌细胞。以上任一所述癌细胞可为与正常细胞相比CA9基因表达水平具有差异的癌细胞。以上任一所述癌细胞可为以CA9蛋白为标志物的癌细胞。
以上任一所述肿瘤可为由与正常细胞相比CA9基因表达水平升高的癌细胞引起的肿瘤。以上任一所述肿瘤可为由与正常细胞相比CA9蛋白水平升高的癌细胞引起的肿瘤。以上任一所述肿瘤可为由以CA9蛋白为标志物的癌细胞引起的肿瘤。以上任一所述肿瘤可为由以CA9蛋白高表达为标志物的癌细胞引起的肿瘤。
以上任一所述癌症可为由与正常细胞相比CA9基因表达水平升高的癌细胞引起的癌症。以上任一所述癌症可为由与正常细胞相比CA9蛋白水平升高的癌细胞引起的癌症。以上任一所述癌症可为由以CA9蛋白为标志物的癌细胞引起的癌症。以上任一所述癌症可为由以CA9蛋白高表达为标志物的癌细胞引起的癌症。
以上任一所述CA9蛋白如GenBank:CAA47315.1所示。
以上任一所述CA9基因如GenBank:X66839.1所示。
以上任一所述癌细胞具体可为舌癌细胞。
以上任一所述癌细胞具体可为SCC-15细胞。
以上任一所述肿瘤可为舌癌肿瘤。
以上任一所述癌症可为舌癌。
以上任一所述重组表达载体可为在pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点(例如XhoⅠ酶切位点和ApaⅠ酶切位点之间)插入序列表的序列2所示的DNA分子得到的重组质粒。
以上任一所述用于降低所述RNA分子水平的物质可为通过CRISPR/Cas9系统降低所述RNA分子水平的物质。CRISPR/Cas9系统中，sgRNA的靶序列如序列表的序列3或序列表的序列4所示。
以上任一所述用于沉默所述DNA分子的物质可为通过CRISPR/Cas9系统沉默所述DNA分子的物质。CRISPR/Cas9系统中，sgRNA的靶序列如序列表的序列3或序列表的序列4所示。
本发明还保护所述RNA分子的应用，即所述RNA分子作为舌癌标志物的应用。
本发明还保护用于检测所述RNA分子的物质的应用，即用于检测所述RNA分子的物质在制备诊断或辅助诊断舌癌的试剂盒中的应用。所述用于检测所述RNA分子的物质具体可为如下引物对：F1：5’-AGCCCTAAGCCTAGCCTCTT-3’；R1：5’-TGCCCGGTGCTATTCTGATT-3’。
本发明对于舌癌动物模型的构建以及舌癌的治疗，具有重大的应用推广价值。
附图说明
图1为实施例1中887S RNA的相对表达量的结果。
图2为实施例2的步骤四中887S RNA的相对表达量的结果。
图3为实施例2的步骤五中增殖能力检测的照片。
图4为实施例2的步骤五中克隆形成率结果。
图5为实施例2的步骤五中转移能力检测的照片。
图6为实施例2的步骤五中细胞迁移率结果。
图7为实施例3中CA9基因的相对表达量的结果。
图8为实施例3中CA2基因/CA5基因/CA12基因的相对表达量的结果。
图9为实施例4中裸鼠成瘤能力检测的照片。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
ATCC全称为美国美国模式培养物保藏所细胞库(网址：https://www.atcc.org/)。293T细胞：
Figure BDA0001695910000000041
CRL-3216TM。MCF10A细胞：
Figure BDA0001695910000000043
CRL-10317TM。MCF7细胞：
Figure BDA0001695910000000042
HTB-22TM。SK-BR-3细胞：
Figure BDA0001695910000000044
HTB-30TM。MDA-MB-435S细胞：
Figure BDA0001695910000000045
HTB-129TM。SH-SY5Y细胞：
Figure BDA0001695910000000047
CRL-2266TM。HCT116细胞：
Figure BDA0001695910000000046
CCL-247TM。SCC-15细胞：
Figure BDA0001695910000000049
CRL-1623TM。786-O细胞：
Figure BDA0001695910000000048
CRL-1932TM。
pcDNA3.1(+)载体：美国addgene公司。
887S RNA如序列表的序列1所示。基因组DNA中，与887S RNA对应的DNA如序列表的序列2所示。
实施例1、舌癌细胞株中887S RNA的表达量
供试细胞：293T细胞(人胚肾细胞)、MCF10A细胞(人乳腺上皮细胞)、MCF7细胞(人乳腺癌细胞)、SK-BR-3细胞(人乳腺癌细胞)、MDA-MB-435S细胞(人乳腺癌细胞)、SH-SY5Y细胞(人神经母细胞瘤)、HCT116细胞(人结直肠癌细胞)、SCC-15细胞(人舌鳞状细胞癌细胞)、786-O细胞(人肾透明癌细胞)。
1、提取供试细胞的总RNA。
2、以步骤1提取的总RNA为模板，进行逆转录，得到cDNA。
反应体系(20μl)：10μl 2×RT Mix、1μl Random Primers、1μl Oligo dT23VN、2μlHiScriptRⅡEnzyme Mix，1μg RNA模板，以无RNase水补至20μl。反应体系中，除了RNA模板和无RNase水以外，均为HiScript II One Step RT-PCR反转录试剂盒(中国Vazyme公司)中的组件。
反应程序：25℃5min，50℃15min，85℃10min。
3、以步骤2得到得到cDNA为模板，采用18s rRNA为内参基因，通过荧光定量PCR检测887S RNA的表达量。
反应体系(10μl)：2.5μl无RNase水、5μl 2×qPCR SYBR Green、0.25μl正向引物、0.25μl反向引物、2μL步骤2的反应产物(约含1μg cDNA)。反应体系中，F1的浓度为0.25μM，R1的浓度为0.25μM。
反应程序：95℃10min，1个循环；95℃15s、60℃60s，40个循环。
用于检测887S RNA的引物对由F1和R1组成。
用于检测内参基因的引物对由F2和R2组成。
F1(正向引物)：5’-AGCCCTAAGCCTAGCCTCTT-3’；
R1(反向引物)：5’-TGCCCGGTGCTATTCTGATT-3’。
F2(正向引物)：5’-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3’；
R2(反向引物)：5’-CCATCCAATCGGTAGTAGCG-3’。
887S RNA的相对表达量＝供试细胞中887S RNA的表达量/293T细胞中887S RNA的表达量。
结果见图1。SCC-15细胞、786-O细胞中887S RNA的表达量显著高于其它细胞。
实施例2、887S RNA表达量对舌癌细胞株增殖及迁移能力的影响
一、抑制887S RNA表达的重组细胞及其对照重组细胞的制备
通过CRISPR/Cas9慢病毒系统改变位于887S RNA启动子区的低氧调控元件序列，制备低氧诱导缺陷型887S细胞株。
1、病毒液的制备
在赛业(苏州)生物科技有限公司定制CRISPR慢病毒包装服务，获得Cas9病毒液、sgRNA1病毒液和sgRNA2病毒液。
https://www.cyagen.com/cn/zh-cn/service/CRISPR-lentivirus- packaging.html。
sgRNA1的靶序列为(序列表的序列3)：5’-gtgagctgcagaggtagccg-3’。sgRNA1病毒液具有G418抗性。sgRNA2的靶序列为(序列表的序列4)：5’-agcacgtgcgcttgctctgc-3’。sgRNA2病毒液具有嘌呤霉素抗性。Cas9病毒液具有潮霉素抗性。sgRNA1的靶序列和sgRNA2的靶序列均位于887S RNA启动子区的低氧调控元件中。
2、SCC-15细胞接种至6孔板(3×105细胞/孔)，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养12小时；然后采用MOI＝100的剂量感染Cas9病毒液，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养24小时；然后收集细胞，进行胰酶消化，然后采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基稀释，然后接种至96孔板(每孔1-2个细胞)，采用含100μg/ml潮霉素和10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养，取生长快的单克隆，扩大培养；将扩大培养的细胞进行低氧诱导(采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基，37℃、1％以下含氧量、静置培养24小时)，然后检测887S RNA的表达量(方法同实施例1)。与SCC-15细胞相比887S RNA的表达量差异在10％以内且无明显形态学差异的细胞，即为重组细胞Ⅰ。
3、重组细胞Ⅰ接种至6孔板(3×105细胞/孔)，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养12小时；然后采用MOI＝100的剂量感染sgRNA1病毒液，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养24小时；然后收集细胞，进行胰酶消化，然后采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基稀释，然后接种至96孔板(每孔1-2个细胞)，采用含100μg/ml G418和10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养，取生长快的单克隆，扩大培养；将扩大培养的细胞进行低氧诱导(采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基，37℃、1％以下含氧量、静置培养24小时)，然后检测887S RNA的表达量(方法同实施例1)。与重组细胞Ⅰ相比887S RNA的表达量降低幅度为40％以上细胞，即为重组细胞Ⅱ。24
4、重组细胞Ⅰ接种至6孔板(3×105细胞/孔)，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养12小时；然后采用MOI＝100的剂量感染sgRNA2病毒液，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养24小时；然后收集细胞，进行胰酶消化，然后采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基稀释，然后接种至96孔板(每孔1-2个细胞)，采用含100μg/ml嘌呤霉素和10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养，取生长快的单克隆，扩大培养；将扩大培养的细胞进行低氧诱导(采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基，37℃、1％以下含氧量、静置培养24小时)，然后检测887S RNA的表达量(方法同实施例1)。与重组细胞Ⅰ相比887S RNA的表达量降低幅度为40％以上细胞，即为重组细胞Ⅲ。
二、过表达887S RNA的重组细胞及其对照重组细胞的制备
借助lipofectamine 3000，将pcDNA3.1(+)载体导入SCC-15细胞，得到重组细胞，命名为重组细胞Ⅳ。
在pcDNA3.1(+)载体的XhoⅠ酶切位点和ApaⅠ酶切位点之间插入序列表的序列2所示的DNA分子，得到重组质粒pcDNA3.1-887S。
借助lipofectamine 3000，将重组质粒pcDNA3.1-887S导入SCC-15细胞，得到重组细胞，命名为重组细胞Ⅴ。
三、回补细胞的制备
借助lipofectamine 3000，将重组质粒pcDNA3.1-887S导入重组细胞Ⅱ，得到重组细胞，命名为重组细胞Ⅵ。
借助lipofectamine 3000，将重组质粒pcDNA3.1-887S导入重组细胞Ⅲ，得到重组细胞，命名为重组细胞Ⅶ。
四、检测887S RNA的表达量
供试细胞为步骤一至三得到的各个重组细胞。
方法同实施例1。
887S RNA的相对表达量＝供试细胞中887S RNA的表达量/重组细胞Ⅰ中887S RNA的表达量。
结果见图2。
五、检测细胞的增殖能力和迁移能力
供试细胞为步骤一至三得到的各个重组细胞。
以下各个步骤的细胞培养条件：37℃、1％以下含氧量、静置培养。
1、增殖能力
在6孔板中接种200个供试细胞，采用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养(隔3天换一次液)，然后用4％多聚甲醛溶液固定30min，然后用PBS缓冲液漂洗，然后用2.5％结晶紫溶液染色30min，然后拍照并统计克隆形成率。
重组细胞Ⅵ和重组细胞Ⅴ培养14天。其他重组细胞培养10天。
照片见图3。克隆形成率见图4。
2、转移能力(Transwell试验)
在transwell小室的上室中接种1×105个供试细胞，上室加入DMEM/F12培养基，下室加入含20％胎牛血清的DMEM/F12培养基，培养，然后取中间膜，对中间膜的下表面进行检测。检测方法：用4％多聚甲醛溶液固定30min，然后用PBS缓冲液漂洗，然后用2.5％结晶紫溶液染色30min，漂洗晾干后拍照并统计细胞迁移率。
重组细胞Ⅵ和重组细胞Ⅴ培养48小时。其他重组细胞培养24小时。
照片见图5。细胞迁移率见图6。
步骤五的结果表明：与重组细胞Ⅰ相比，重组细胞Ⅱ和重组细胞Ⅲ的增殖能力和迁移能力显著增加。与重组细胞Ⅳ相比，重组细胞Ⅴ的增殖能力和迁移能力显著降低。与重组细胞Ⅱ相比，其回补细胞(重组细胞Ⅵ)的增殖能力和迁移能力显著降低。与重组细胞Ⅲ相比，其回补细胞(重组细胞Ⅶ)的增殖能力和迁移能力显著降低。结果表明，过表达887S RNA可以抑制SCC-15细胞的增殖和迁移，抑制887S RNA表达可以促进SCC-15细胞的增殖和迁移。
实施例3、抑制或过表达887S RNA对CA9的影响
一、CA9基因的表达量
供试细胞为实施例2的步骤一至三得到的各个重组细胞。
1、提取供试细胞的总RNA。
2、以步骤1提取的总RNA为模板，进行逆转录，得到cDNA。
3、以步骤2得到得到cDNA为模板，采用18s rRNA为内参基因，通过荧光定量PCR检测CA9基因的表达量。
用于检测CA9基因(GenBank:X66839.1,linear PRI 07-OCT-2008)的引物对如下：
上游引物：AGAAATCGCTGAGGAAGGCT；
下游引物：TCAGCTGTAGCCGAGAGTCA。
CA9基因的相对表达量＝供试细胞中CA9基因的表达量/重组细胞Ⅰ中CA9基因的表达量。
结果见图7。过表达887S RNA可以抑制CA9基因表达，抑制887S RNA表达可以促进CA9基因表达。
二、其他基因的表达量
供试细胞为实施例2的步骤一得到的各个重组细胞。
1、提取供试细胞的总RNA。
2、以步骤1提取的总RNA为模板，进行逆转录，得到cDNA。
3、以步骤2得到得到cDNA为模板，采用18s rRNA为内参基因，通过荧光定量PCR检测CA2基因/CA5基因/CA12基因的表达量。
用于检测CA2基因(GenBank:J03037.1,linear PRI 31-OCT-1994)的引物对如下：
上游引物：ACTGGGGTTCACTTGATGGAC；
下游引物：GTTTAGCGCTGCCAACCTTC。
用于检测CA5基因(GenBank:L19297.1，linear PRI 01-OCT-1993)的引物对如下：
上游引物：GGATTACTGGACCTACGCGG；
下游引物：GGGTTGAAGTGGGCGATAGT。
用于检测CA12基因(GenBank:AF051882.1,linear PRI 25-JUN-1998)的引物对如下：
上游引物：CCAAGTGCAAGTCTGTACTGC；
下游引物：TGGGCCTCAGTCTCCATCTT。
某一基因的相对表达量＝供试细胞中该基因的表达量/重组细胞Ⅰ中该基因的表达量。
结果见图8。过表达887S RNA或抑制887S RNA表达，对于CA2基因/CA5基因/CA12基因的表达没有影响。
实施例4、裸鼠成瘤能力检测
四只4-6周龄BALB/c(nu/nu)雌性裸鼠，每只分别进行如下操作：在左后肢皮下注射重组细胞Ⅰ(体积为100μL，含3×106个重组细胞Ⅰ)，在右后肢皮下注射重组细胞Ⅱ(体积为100μL，含3×106个重组细胞Ⅱ)。
注射重组细胞6周后，观察裸鼠成瘤情况，称量瘤重。
照片见图9。瘤重见表1。抑制887S RNA表达对于舌癌细胞成瘤具有促进作用。
表1
左后肢瘤重 右后肢瘤重
小鼠1 0g 0.049g
小鼠2 0.021g 0.031g
小鼠3 0g 0.024g
小鼠四 0g 0.035g
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学技术大学
<120> 887S RNA及其在抑制肿瘤中的应用
<130> GNCYX181162
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1593
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
auucauuuuc ugcucagaca ccguugcuug caaaauucca cccagaagau aagggaggga 60
guaucgcugc agcguccugc ucugugccug guuauauuac uggauccuug uguugcagcc 120
cuaagauaga aggauugucu ccauuucaca gaugagagag aacugaugcg caggaggcug 180
aaauugucug aagucacaca gcagccuccu cuuaaacaug acaaagaauc caaggacuug 240
ugcuggggcu gucagcugcu auucuggugc ccuggggacg aagaagggau cuggagggaa 300
gacugucacc cucuugcgaa uguuuccaag aagcagcuca gcaugggaga gaaaagggga 360
gaucccaguu ccaggaacac cuggccagug uuucaccugu uuaucggagu ugacaggacc 420
agccagcccu uucccaccuc uccccaucau gauggauggg agccuggccu uugagguaag 480
aacagauggg guuacagaca cuggccuuug aagacaucug gagcgacugc uucucuggca 540
guucacuuuu aaaccggcac uucacccaga aguugaagga ccaucugaca gaugcauaag 600
ggguuuggug uugaagagag uugggcuaga gagugucgca gagccccggg acuccugcgg 660
guuuaggauu cuggcugagg gaaguguggc aggggcuccc cacucacagg cuccaggcug 720
ugugauccgu ggcugaggac ccagacccuu agacuucagg cacccugcag ggggucccau 780
uucaggcagg acuuugccuc cacagcccca cagcucugcc uuggaccaga agauuccaaa 840
caauuuaaac uacuagucau acugauagaa uacuaguagu uugcaaagaa aaauauuccc 900
ugggccuuga ggaagcaguu gaauugugau ggugccuaug aacauccuag ggccaugugu 960
ugucauuuuc aagcuucccc ucugccuaga ggugacaacc cuggucccgu ggugcccucc 1020
uuagugagcu uggcaacaaa uaugacaaca ugagggucac uaggaaagag aaaaagagca 1080
aagaauagau acaaauguga uaggguaccc uggucuucaa uuagagaaag cuggucauuu 1140
uacaagaagc ccuaagccua gccucuucua agcucgguga gagaggcaag agcaggaaag 1200
agacuggcca gaggucgccc agggacccaa ggaagcccug agauuugaug gcuauaaaua 1260
uaaguguaug aaucagaaua gcaccgggca ggcuaggcau gguggcucac gccuguaauc 1320
ccagcauuuu uggaggugga ggugggugga ucacuugagc acaggaauuc gauaacagcc 1380
ugggcaacau ggcaaagccc ugucucuaca aaaaguacaa aaauuagcug gguguggugg 1440
ugcacaccug uagucccagc ugcucaggaa gcugaggugg gaggauugcc ugaacccagg 1500
aagucgaggc ugcagugguu ggugauugcg ccacugcacu ccaggcugag caacagagug 1560
agaccacauc ucaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1593
<210> 2
<211> 1593
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
attcattttc tgctcagaca ccgttgcttg caaaattcca cccagaagat aagggaggga 60
gtatcgctgc agcgtcctgc tctgtgcctg gttatattac tggatccttg tgttgcagcc 120
ctaagataga aggattgtct ccatttcaca gatgagagag aactgatgcg caggaggctg 180
aaattgtctg aagtcacaca gcagcctcct cttaaacatg acaaagaatc caaggacttg 240
tgctggggct gtcagctgct attctggtgc cctggggacg aagaagggat ctggagggaa 300
gactgtcacc ctcttgcgaa tgtttccaag aagcagctca gcatgggaga gaaaagggga 360
gatcccagtt ccaggaacac ctggccagtg tttcacctgt ttatcggagt tgacaggacc 420
agccagccct ttcccacctc tccccatcat gatggatggg agcctggcct ttgaggtaag 480
aacagatggg gttacagaca ctggcctttg aagacatctg gagcgactgc ttctctggca 540
gttcactttt aaaccggcac ttcacccaga agttgaagga ccatctgaca gatgcataag 600
gggtttggtg ttgaagagag ttgggctaga gagtgtcgca gagccccggg actcctgcgg 660
gtttaggatt ctggctgagg gaagtgtggc aggggctccc cactcacagg ctccaggctg 720
tgtgatccgt ggctgaggac ccagaccctt agacttcagg caccctgcag ggggtcccat 780
ttcaggcagg actttgcctc cacagcccca cagctctgcc ttggaccaga agattccaaa 840
caatttaaac tactagtcat actgatagaa tactagtagt ttgcaaagaa aaatattccc 900
tgggccttga ggaagcagtt gaattgtgat ggtgcctatg aacatcctag ggccatgtgt 960
tgtcattttc aagcttcccc tctgcctaga ggtgacaacc ctggtcccgt ggtgccctcc 1020
ttagtgagct tggcaacaaa tatgacaaca tgagggtcac taggaaagag aaaaagagca 1080
aagaatagat acaaatgtga tagggtaccc tggtcttcaa ttagagaaag ctggtcattt 1140
tacaagaagc cctaagccta gcctcttcta agctcggtga gagaggcaag agcaggaaag 1200
agactggcca gaggtcgccc agggacccaa ggaagccctg agatttgatg gctataaata 1260
taagtgtatg aatcagaata gcaccgggca ggctaggcat ggtggctcac gcctgtaatc 1320
ccagcatttt tggaggtgga ggtgggtgga tcacttgagc acaggaattc gataacagcc 1380
tgggcaacat ggcaaagccc tgtctctaca aaaagtacaa aaattagctg ggtgtggtgg 1440
tgcacacctg tagtcccagc tgctcaggaa gctgaggtgg gaggattgcc tgaacccagg 1500
aagtcgaggc tgcagtggtt ggtgattgcg ccactgcact ccaggctgag caacagagtg 1560
agaccacatc tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1593
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
gtgagctgca gaggtagccg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
agcacgtgcg cttgctctgc 20

Claims (8)

1.一种RNA分子，其序列如序列表的序列1所示。
2.一种DNA分子，其序列如序列表的序列2所示。
3.具有权利要求2所述DNA分子的重组表达载体。
4.用于提高权利要求1所述RNA分子水平的物质或用于促进权利要求2所述DNA分子表达的物质在制备产品中的应用；
所述产品的功能为如下（c1）和/或（c2）和/或（c3）和/或（c4）和/或（c5）：
（c1）抑制癌细胞增殖；
（c2）抑制癌细胞迁移；
（c3）抑制肿瘤生长；
（c4）抑制肿瘤转移；
（c5）治疗癌症。
5.用于降低权利要求1所述RNA分子水平的物质或用于沉默权利要求2所述DNA分子的物质在制备产品中的应用；
所述产品的功能为如下（d1）和/或（d2）和/或（d3）和/或（d4）和/或（d5）：
（d1）促进癌细胞增殖；
（d2）促进癌细胞迁移；
（d3）促进肿瘤生长；
（d4）促进肿瘤转移；
（d5）制备肿瘤动物模型。
6.一种产品，其活性成分为用于提高权利要求1所述RNA分子水平的物质或用于促进权利要求2所述DNA分子表达的物质；
所述产品的功能为如下（c1）和/或（c2）和/或（c3）和/或（c4）和/或（c5）：
（c1）抑制癌细胞增殖；
（c2）抑制癌细胞迁移；
（c3）抑制肿瘤生长；
（c4）抑制肿瘤转移；
（c5）治疗癌症。
7.一种产品，其活性成分为用于降低权利要求1所述RNA分子水平的物质或用于沉默权利要求2所述DNA分子的物质；
所述产品的功能为如下（d1）和/或（d2）和/或（d3）和/或（d4）和/或（d5）：
（d1）促进癌细胞增殖；
（d2）促进癌细胞迁移；
（d3）促进肿瘤生长；
（d4）促进肿瘤转移；
（d5）制备肿瘤动物模型。
8.用于检测权利要求1所述RNA分子的物质在制备诊断或辅助诊断舌癌的试剂盒中的应用。
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