CN100532548C - 一种提高人乳头瘤病毒l1蛋白原核表达产率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高人乳头瘤病毒L1蛋白原核表达产率的方法。本发明还提供了由此方法得到的编码HPV L1蛋白的密码子优化核酸序列，包含该核酸序列的表达载体和宿主细胞，以及由密码子优化核酸序列表达得到的HPV L1蛋白多聚体，并公开了该HPV L1蛋白多聚体在制备疫苗、药物组合物和免疫诊断抗原或抗体中的应用。采用本发明所述方法得到的编码HPV L1蛋白的密码子优化核酸序列在原核系统中的L1蛋白表达量相对于未经密码子优化的核酸序列的表达量均有显著提高，有效降低了生产成本，具有重大的经济效益和社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及人乳头瘤病毒感染的预防和治疗领域。具体地，本发明涉及一种提高人乳头瘤病毒L1蛋白原核表达产率的方法，以及根据该方法得到的编码人乳头瘤病毒L1蛋白的密码子优化核酸序列，包含这些核酸序列的载体和宿主细胞，本发明还涉及由密码子优化的核酸序列在大肠杆菌中表达得到的HPV L1蛋白多聚体，以及该HPVL1蛋白多聚体在制备疫苗、药物组合物、诊断抗原或抗体中的应用。
背景技术
在生物工程及生物制药领域，使用大肠杆菌作为宿主细胞表达基因重组蛋白产品，比使用酵母、昆虫等真核宿主细胞更为经济和有效，因而是常规的理想的技术工艺方法。然而，大肠杆菌表达高等哺乳动物及人类的重组基因时，有时会因为真核与原核表达在蛋白翻译修饰微环境方面的差异而使得表达效率降低。其中，大肠杆菌与高等哺乳动物在基因转录、翻译方面对许多氨基酸密码子的不同偏好(Condonpreference)是阻止大肠杆菌表达效率提高的重要因素之一。
人乳头瘤病毒(Humanpa pilloma virus，HPV)作为人类的专性寄生病毒，其在寄主细胞内的复制繁殖几乎完全依赖人类细胞的翻译修饰体系，DNA序列中编码氨基酸的密码子相应地体现了人类基因密码子的偏好。为了提高HPV病毒的L1基因在大肠杆菌中的表达效率，在不改变表达产物氨基酸序列的前提下通过对病毒基因密码子按照大肠杆菌的密码子进行优化是一条有效的途径。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明的目的是提供一种提高人乳头瘤病毒L1蛋白原核表达产率的方法，本发明的又一目的是提供根据该方法得到的编码人乳头瘤病毒L1蛋白的密码子优化核酸序列、包含这些核酸序列的载体和宿主细胞，本发明另一目的是提供由密码子优化的核酸序列在大肠杆菌中表达得到的HPV L1蛋白多聚体，并公开该HPV L1蛋白多聚体在制备疫苗、药物组合物、诊断抗原或抗体中的应用。
(二)技术方案
本发明提供了一种提高人乳头瘤病毒L1蛋白原核表达产率的方法，该方法通过依据大肠杆菌的密码子偏好对编码人乳头瘤病毒L1蛋白的核酸序列的密码子进行优化来实现人乳头瘤病毒(Humanpapilloma virus；HPV)L1蛋白在原核细胞中的高水平表达。
其中，所述的编码人乳头瘤病毒L1蛋白的核酸序列在本发明的意义上是指编码HPV L1蛋白、HPV L1蛋白的生物学活性片段或HPV L1蛋白突变形式的核酸序列，所述突变形式的HPV L1蛋白包括但不限于：保守的氨基酸的取代、氨基末端截短、羧基末端截短、缺失或添加一个或几个氨基酸。所述的HPV L1蛋白、HPV L1蛋白的生物学活性片段或HPV L1蛋白突变形式的共同特征在于都具有与野生型HPV L1蛋白相同或相似的免疫特性。
由于编码不同型HPV L1蛋白的核酸序列均具有较高的保守性，所以本发明所述的方法适用于所有的HPV型。优选地，所述的HPV型选自HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV58、HPV 59、HPV 68中的一种或多种。
本发明还涉及包含采用上述方法得到的密码子优化核酸序列的核酸分子。该核酸分子包括但不限于以下形式：由一种以上的HPV型的编码L1蛋白的密码子优化核酸序列组成的融合序列，或编码HPV L1蛋白的密码子优化核酸序列与编码HPV前期蛋白(如：E6/E7)的核酸序列组成的融合序列。
上述优选的HPV型的野生型L1蛋白的核酸序列对应的Genebank登陆号分别为：HPV6-NC_000904，HPV11-NC_001525，HPV16-AF402678，HPV18-AY262282，HPV31-NC_001527，HPV33-NC_001528，HPV35-NC_001529，HPV39-NC_001535，HPV45-NC_001590，HPV51-NC_001533，HPV52-NC_001592，HPV56-NC_001594，HPV58-NC_001443，HPV59-NC_001635，HPV68-X67161。
采用本发明所述的方法，得到的上述优选HPV型的L1蛋白的密码子优化核酸序列分别为：HPV6对应的核酸序列如附图1所示，HPV11对应的核酸序列如附图2所示，HPV16对应的核酸序列如附图3所示，HPV18对应的核酸序列如附图4所示，HPV31对应的核酸序列如附图5所示，HPV33对应的核酸序列如附图6所示，HPV35对应的核酸序列如附图7所示，HPV39对应的核酸序列如附图8所示，HPV45对应的核酸序列如附图9所示，HPV 51对应的核酸序列如附图10所示，HPV 52对应的核酸序列如附图11所示，HPV 56对应的核酸序列如附图12所示，HPV 58对应的核酸序列如附图13所示，HPV 59对应的核酸序列如附图14所示，HPV68对应的核酸序列如附图15所示。
本发明也涉及包含上述编码人乳头瘤病毒L1蛋白的优化密码子核酸序列的表达载体，这些载体是通过将上述核酸序列克隆到包含合适启动子和其它合适转录表达调控原件的连接载体中得到的，其中用于连接的载体包括商业上可获得的质粒、细菌噬菌体和粘粒。优选地，用于连接的载体选自pGEX-4T-1、pGEX-4T-2、pGEX-4T-3、pET-28a、pcDNA3.1中的一种或几种。更优选地，用于连接的载体选自pGEX-4T-2。这里用到的分子克隆方法具体操作参见《分子克隆》(第三版，科学出版社，2002年8月出版)。
本发明还涉及包含上述表达载体的宿主细胞，这些宿主细胞可选自工业上常用的原核表达宿主。优选地，宿主细胞选自大肠杆菌。
本发明进一步涉及HPV L1蛋白多聚体，该多聚体的单体是上述包含编码HPV L1蛋白的优化密码子核酸序列的核酸分子在大肠杆菌中表达得到的重组HPV L1蛋白或重组HPV L1蛋白+L2蛋白，该单体可自动聚合成与野生病毒颗粒大小完全一样的类病毒颗粒(viruslike particle，VLP)，也可以只聚合成HPV L1蛋白的五聚体(例如由编码截短型HPV L1蛋白的优化密码子核酸序列在大肠杆菌中表达得到的单体，该单体自动聚合成五聚体后不再进一步聚合成VLP)，还可以是由12个前述单体聚合成的VLP形式。这些HPV L1蛋白多聚体均具有与野生病毒颗粒相同的抗原表位。
本发明还提供了生产上述HPV L1蛋白多聚体的方法，它包括如下步骤：
(1)将包含编码HPV L1蛋白的优化密码子核酸序列的核酸分子克隆到连接载体上，转化大肠杆菌；
(2)发酵培养上述大肠杆菌，并表达HPV L1蛋白；
(3)分离、纯化表达产物，得到HPV L1蛋白多聚体。
本发明进一步涉及包含上述重组HPV L1蛋白多聚体的疫苗，该疫苗可应用于制备预防HPV感染的疫苗。优选地，制备所述疫苗涉及的HPV型为HPV16，即该疫苗的组分包括由附图3所示序列在大肠杆菌中表达得到的HPV L1蛋白多聚体。更优选地，制备所述疫苗涉及五种HPV型，分别为HPV6、HPV11、HPV16、HPV18和HPV33，即该疫苗的组分包括五种HPV L1蛋白多聚体，它们分别由附图1、附图2、附图3、附图4和附图6所示序列在大肠杆菌中表达得到。
本发明所述的疫苗的免疫组分也包括一种生理上可接受的载体，包括但不限于能保持HPV L1蛋白多聚体完整性的简单低浓度盐溶液，例如10mM NaCl，0.1mM EDTA；或者更大范围上讲，载体包括代谢缓慢的大分子如蛋白质、多糖、聚乳糖酸、聚甘油酸、复合氨基酸、以及失活病毒粒子等。药理上适用的盐也可在HPV L1蛋白多聚体的复合物中使用。例如，矿物盐象盐酸盐，溴化盐、磷酸盐、硫酸盐等；有机盐类如乙酸盐、甘露糖、苯甲酸等。免疫组分还包括液体，如水、生理盐水、甘油、酒精，以及其他一些物质如可湿剂、乳化剂、和pH缓冲剂。
将上述重组HPV L1蛋白多聚体以免疫有效剂量接种给人体后，可引诱人体产生对这些重组蛋白的免疫反应。人体的这种特异免疫反应可帮助人体预防人乳头瘤病毒的入侵或中和清除已经入侵的人乳头瘤病毒。由上述重组HPV L1蛋白多聚体制备的疫苗可采用多种方法作用于人体，包括静脉、肌肉和皮下注射。本发明所述的疫苗在能引发对L1蛋白免疫反应的有效剂量的范围使用。用于增强免疫反应的复合物的特定剂量依照L1复合物不同而变化。一般而言，重组L1多聚体的用量大约在1-500μg/Kg体重之间。上述剂量范围并不排除更高或更低剂量的可能。例如，具体的剂量会根据是否环伴有其他药物剂量而定，或取决于个人的药代动力学、药物积累和代谢速率。
本发明还涉及包含上述重组HPV L1蛋白多聚体的药物组合物。该药物组合物包括但不限于下列形式：例如包含重组HPV L1蛋白多聚体、HPV E6/E7蛋白及其它药物上可接受的辅料的药物组合物。
本发明还进一步公开了上述重组HPV L1蛋白多聚体在制备HPV病毒免疫诊断抗原或抗体中的应用。上述重组HPV L1蛋白多聚体可以用来产生对HPV L1蛋白有特异亲和力的抗体。这些抗体可以被用来直接检测生物样品中是否存在或与特定病理阶段相联系的特定HPV型。HPV L1蛋白多聚体还能在免疫测定中用来检测生物样品中是否存在HPV病毒的抗体或抗原。包括特异结合到L1蛋白的单链抗体在内的多克隆或单克隆抗体能够被本领域技术人员用成熟的技术生产出来。这些由特异抗原例如HPV不同亚型引诱产生的抗体具有识别特定的HPV亚型的特异性，例如HPV16和HPV18型。
利用抗体反应的免疫测定来检测L1蛋白包括ELISAs、Westernblot、放射免疫测定、免疫组化测定、免疫沉淀或其他方法。抗体和L1多聚体都可作为检测标记，例如酶联免疫、放射标记、荧光或化学荧光。抗体或L1多聚体可以固定在某个固体支持物上，例如玻璃或塑料波片，组织培养板、多孔板、试管、交换拄、交换柱填充物、蛋白；或者颗粒上如微球体，包括但不限于乳胶、聚苯乙希或玻璃球；或者薄膜上如醋酸纤维或尼龙膜。偶联蛋白组分的方法为本领域技术人员所熟知。只要不防碍抗体原抗体特异结合的能力，任何偶联方式都可使用。生物样品可以是任何被怀疑含有HPV病毒的样品，例如组织活检、涂片、组织切样如皮肤、子宫、生殖上皮细胞、喉、上呼吸道、结膜或口腔内组织。
(三)有益效果
采用本发明所述方法得到的编码HPV L1蛋白的密码子优化核酸序列在原核系统中的L1蛋白表达量相对于未经密码子优化的核酸序列的表达量均有显著提高，有效降低了工业生产HPV L1蛋白的成本，具有重大的经济效益和社会效益。
附图说明
图1是编码HPV6 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV6 L1W表示编码HPV6 L1蛋白的野生型序列，HPV6L1M表示编码HPV6 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图2是编码HPV11 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV11 L1W表示编码HPV11 L1蛋白的野生型序列，HPV11 L1M表示编码HPV11 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图3是编码HPV16 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV16 L1W表示编码HPV16 L1蛋白的野生型序列，HPV16 L1M表示编码HPV16 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图4是编码HPV18 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV18 L1W表示编码HPV18 L1蛋白的野生型序列，HPV18 L1M表示编码HPV18 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图5是编码HPV31 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV31 L1W表示编码HPV31 L1蛋白的野生型序列，HPV31 L1M表示编码HPV31 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图6是编码HPV33 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV33L1W表示编码HPV33 L1蛋白的野生型序列，HPV33 L1M表示编码HPV33 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图7是编码HPV35 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV35L1W表示编码HPV35 L1蛋白的野生型序列，HPV35L1M表示编码HPV35 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图8是编码HPV39 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV39L1W表示编码HPV39 L1蛋白的野生型序列，HPV39 L1M表示编码HPV39 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图9是编码HPV45 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV45 L1W表示编码HPV45 L1蛋白的野生型序列，HPV45 L1M表示编码HPV45 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图10是编码HPV51 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV51 L1W表示编码HPV51 L1蛋白的野生型序列，HPV51 L1M表示编码HPV51 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图11是编码HPV52 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV52 L1W表示编码HPV52 L1蛋白的野生型序列，HPV52 L1M表示编码HPV52 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图12是编码HPV56 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV56 L1W表示编码HPV56 L1蛋白的野生型序列，HPV56 L1M表示编码HPV56 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图13是编码HPV58 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV58 L1W表示编码HPV58 L1蛋白的野生型序列，HPV58 L1M表示编码HPV58 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图14是编码HPV59 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV59 L1W表示编码HPV59 L1蛋白的野生型序列，HPV59 L1M表示编码HPV59 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图15是编码HPV68 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比图，图中HPV68 L1W表示编码HPV68 L1蛋白的野生型序列，HPV68 L1M表示编码HPV68 L1蛋白的优化密码子序列，用点表示两个序列中相同的核苷酸；
图16是经密码子优化的核酸序列与未经密码子优化的核酸序列表达得到的HPV16 L1蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图比较，图中泳道1表示marker，泳道2和3表示未经诱导表达的对照品，泳道4和5表示未经密码子优化的核酸序列表达得到的HPV16 L1蛋白，泳道6和7表示经密码子优化的核酸序列表达得到的HPV16 L1蛋白，箭头指示的位点是目的蛋白HPV16L1。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 对编码HPV16 L1蛋白的核酸序列进行密码子优化
在本发明的实施例中，所有的引物合成、DNA序列测定均由华美生物技术有限公司完成，替换碱基、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、亚克隆等常规操作参见《分子克隆》(第三版，科学出版社，2002年8月出版)。
具体方法如下：
1.依照野生HPV16 L1基因序列(Genebank登陆号AF402678)设计一组互相首尾相叠、且相叠部分按照双链DNA碱基互补原理配对、因而互为模板的寡核苷酸引物，直至全部覆盖HPV16L1 DNA序列的阅读框。每一个引物的碱基平均长度为60碱基。
2.对每一个HPV16 L1基因的DNA引物序列，参照大肠杆菌对基因转录密码子的偏好替换碱基，碱基替换后形成一组不改变L1基因氨基酸的、用于实际合成的突变引物群。
3.按照突变引物群的DNA序列合成全部引物。
4.利用突变引物的混合物为模板进行PCR扩增。PCR反应体系包含每一引物浓度为20ng的DNA模板、1 x PCR缓冲液、正向和反向特异引物(浓度均为0.2μM)、1.5mM镁离子、1.0单位的TAQDNA聚合酶。反应条件为：摄氏95度变性5分钟，经36个PCR循环放大(每一循环为94度30秒，65度90秒，72度2分钟)，反应产物在72度下温育10分钟，然后停止反应。
5.对PCR产物进行分离分子量符合HPV16 L1 DNA阅读框全长(1503bp)的条带。分离采用商业化DNA回收试剂盒(购自北京天为时代科技有限公司)，操作按照该试剂盒制造商推荐的条件。
6.将分离出的目标条带TA克隆到pMD19-T质粒上(购自北京天为时代科技有限公司)，TA克隆采用TaKaRa TA克隆试剂盒(购自宝生物工程大连有限公司)，操作按照该试剂盒制造商推荐的条件。
7.DNA序列测定验证，附图3给出了编码HPV16 L1蛋白的优化密码子序列与野生型序列的对比，从图中可以清楚的看到密码子替换的具体位点。
8.将经过验证的TA克隆L1突变基因(见附图3中的HPV16L1M)亚克隆到pGEX-4T-2表达质粒(购自北京天为时代科技有限公司)上，转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导表达L1蛋白。
附图16表示的是经密码子优化的核酸序列(即附图3中的HPV16L1M序列)与未经密码子优化的核酸序列(即附图3中的HPV16 L1W序列)表达得到的HPV16 L1蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图比较，从图中可以看到，密码子优化核酸序列的L1蛋白表达量是未经密码子优化的核酸序列表达量的2.93倍(以泳道4和泳道7的L1表达量为例来计算)，产率得到了显著的提高。
实施例2对其余HPV型的编码L1蛋白的核酸序列进行密码子优化
其余HPV型(包括HPV6、HPV11、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV58、HPV 59、HPV 68)的编码L1蛋白的核酸序列进行密码子优化的操作步骤与检测方法均与实施例1相同，不同之处在于步骤1中根据不同HPV型的野生基因序列(对应的Genebank登陆号见技术方案部分)设计的互相首尾相叠、且相叠部分互为模板的寡核苷酸引物不同，从而余下的操作根据寡核苷酸引物不同而作出相应的变化，这些变化的操作都是本领域技术人员所熟知的技术，所得的密码子优化序列分别如附图1-15所示。
通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，不同HPV型的密码子优化核酸序列的L1蛋白表达量相对于未经密码子优化的核酸序列表达量均得到了显著的提高，详见下表：
表1 不同HPV型编码L1蛋白的核酸序列进行密码子优化前后表达得到的L1蛋白占该工程菌发酵得到的总蛋白的百分比比较
| HPV型 | 密码子优化序列表达得到的L1蛋白占总蛋白的百分比(％) | 未经密码子优化的序列表达得到的L1蛋白占总蛋白的百分比(％) |
| HPV6 | 22.3 | 6.1 |
| HPV11 | 21.1 | 7.2 |
| HPV18 | 19.8 | 6.5 |
| HPV31 | 24.6 | 7.9 |
| HPV33 | 26.9 | 8.1 |
| HPV35 | 22.0 | 6.6 |
| HPV39 | 22.4 | 5.8 |
| HPV45 | 20.7 | 7.8 |
| HPV 51 | 26.6 | 8.5 |
| HPV 52 | 20.8 | 5.7 |
| HPV 56 | 23.7 | 6.3 |
| HPV58 | 24.5 | 6.7 |
| HPV 59 | 22.3 | 7.2 |
| HPV 68 | 22.5 | 6.9 |
可见采用本发明所述的方法对编码HPV L1蛋白的核酸序列进行密码子优化后，L1蛋白的产率均得到了明显的提高，这对HPV L1蛋白在制备疫苗、药物组合物、诊断抗原或抗体中的应用具有重要意义。
Claims (4)
1.一种核酸分子，其特征在于它是根据大肠杆菌的密码子偏好对编码人乳头瘤病毒L1蛋白的核酸序列的密码子进行优化得到的，所述的HPV型是HPV58，其对应的优化核酸序列如附图13所示。
2.一种表达载体，它包含权利要求1所述的核酸分子。
3.一种宿主细胞，它包含权利要求2所述的表达载体。
4.根据权利要求1所述的核酸分子在制备HPV L1蛋白多聚体中的应用，该蛋白多聚体可用于制备预防HPV感染的疫苗和免疫诊断抗原或抗体。
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Families Citing this family (14)
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|---|---|---|---|---|
| IT1398927B1 (it) * | 2009-06-25 | 2013-03-28 | Consorzio Interuniversitario Per Lo Sviluppo Dei Sistemi A Grande Interfase Csgi | Espressione batterica di un gene artificiale per la produzione di crm197 e derivati. |
| CN105177025B (zh) * | 2013-12-03 | 2022-11-01 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 18型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN104761623B (zh) * | 2013-12-17 | 2019-11-29 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 一种以α-螺旋5为靶标的抑制HPV L1五聚体形成的抑制剂 |
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| CN105713087B (zh) * | 2014-11-12 | 2020-05-08 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 人乳头瘤病毒58型单克隆抗体及其应用 |
| CN105585631B (zh) * | 2014-11-12 | 2020-08-18 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 人乳头瘤病毒16型单克隆抗体及其应用 |
| CN106701798B (zh) * | 2015-08-12 | 2021-09-17 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 45型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN106701796B (zh) * | 2015-08-12 | 2021-11-16 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 52型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN106701797B (zh) * | 2015-08-12 | 2021-06-15 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 31型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN106399329B (zh) * | 2015-08-12 | 2021-06-11 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 33型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN113073105B (zh) * | 2021-03-23 | 2023-06-13 | 重庆博唯佰泰生物制药有限公司 | 一种表达hpv 56l1的多核苷酸序列及其表达载体、宿主细胞和应用 |
| CN116023446A (zh) * | 2022-10-28 | 2023-04-28 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 人乳头瘤病毒hpv68 l1蛋白的表达和类病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN115960178B (zh) * | 2022-12-28 | 2023-09-08 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 人乳头瘤病毒hpv59 l1蛋白的表达和类病毒样颗粒及其制备方法 |
| CN117054647A (zh) * | 2023-07-17 | 2023-11-14 | 广东省一鼎生物技术有限公司 | 一种检测HPV IgG抗体试剂盒及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005123762A2 (en) * | 2004-06-18 | 2005-12-29 | Indian Immunologicals Ltd | Codon-optimized hpv16 li for salmonella vaccine strains against human papillomavirus type 16 |
-
2007
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005123762A2 (en) * | 2004-06-18 | 2005-12-29 | Indian Immunologicals Ltd | Codon-optimized hpv16 li for salmonella vaccine strains against human papillomavirus type 16 |
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