CN100531801C

CN100531801C - 聚乙二醇化藤黄酸类前药、其制备方法、制剂及制备药物的用途

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Publication number: CN100531801C
Application number: CNB2006100379047A
Authority: CN
Inventors: 平其能; 张灿; 叶海; 张鹏
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2006-01-20
Filing date: 2006-01-20
Publication date: 2009-08-26
Anticipated expiration: 2026-01-20
Also published as: CN1840201A

Abstract

本发明涉及天然药物及高分子材料领域，具体涉及一类聚乙二醇化藤黄酸类前药(I)，本发明还公开了其制备方法和以该前药为活性成分的药物组合物以及它们在治疗肿瘤中的应用。

Description

聚乙二醇化藤黄酸类前药、其制备方法、制剂及制备药物的用途

技术领域

本发明涉及天然药物及高分子材料领域，具体涉及一类聚乙二醇化藤黄酸类前药，还公开了其制备方法和以该前药为活性成分的药物组合物以及它们在治疗肿瘤中的应用。

背景技术

总藤黄酸包括藤黄酸、新藤黄酸、别藤黄酸，是从藤黄分泌的干燥树脂中提取出来的酸性有效成分。文献报道具有良好的抗肿瘤作用，但由于其水溶性差、毒性大的缺点，因此限制了它在临床的应用。

CN01108049.3公开了将藤黄酸类化合物与不同的碱基或离子形成水溶性的复合物，提高了藤黄酸类化合物有效性，并且降低了刺激性和毒性。总藤黄酸钠小鼠静脉注射的LD₅₀为28.56mg/kg。CN02124510.X公开了将藤黄酸类化合物与葡萄糖胺类化合物形成复合物，提高了水中的溶解度，藤黄酸-葡甲胺复合物的在水中的溶解度达到了0.05g/ml，同时药效也得到增强，对肝癌SMMC7721细胞生长的试验中藤黄酸葡甲胺、新藤黄酸氨基葡萄糖、新藤黄酸葡甲胺的IC50分别是3.21(ug/ml)、2.17(ug/ml)、2.00(ug/ml)。临床需要既具有良好水溶性且药效更好、毒性更小的药物。

发明内容

本发明公开了一类藤黄酸类化合物的聚乙二醇化前药，本发明所述的藤黄酸类化合物是指总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸或别藤黄酸等。总藤黄酸中包含了藤黄酸、新藤黄酸、别藤黄酸等。藤黄酸类化合物的结构如下：

藤黄酸别藤黄酸

新藤黄酸

聚乙二醇(PEG)以良好的水溶性，无毒，良好的生物相容性和无免疫源性等其他高分子无可比拟的优点，在前药的合成和制备中占有重要地位。美国FDA已经批准PEG在人体内使用，中国药典2005版也将聚乙二醇作为辅料收载。本发明将藤黄酸(包括总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸、别藤黄酸)制备成聚乙二醇化前药，所得到的前药水溶性好，药效提高，毒副作用降低，更适合临床使用。

本发明的聚乙二醇化藤黄酸前药可以用下式表示：

通式：

(m＝1或2)

其中：G为总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸或别藤黄酸；

P为聚乙二醇、聚乙二醇二胺、聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇胺单甲醚或其他聚乙二醇类衍生物；

A为连接键，或为氨基酸、寡肽、双取代的对氨基苯甲醇衍生物或双取代的对羟基苯甲酸衍生物，其中取代基为C1-4的烷基或C1-4的烷氧基。

当A为连接键时，结构式为II。

本发明除了上述前药外，还包括通式I或II的药学上可接受的盐。

PEG的结构式为HOCH₂CH₂(OCH₂CH₂O)_nCH₂CH₂OH或HOCH₂(CH₂OCH₂)_nCH₂OH。n为取代度，n≥1。本发明中PEG的平均分子量优选为400-40，000(40K)。更优选的是PEG2000(2K)、PEG4000(4K)，PEG6000(6K)、PEG10,000(10K)、PEG15,000(15K)、PEG20,000(20K)或PEG40,000(40K)。

A为连接臂，可以仅是键，即通式II结构，也可以是α-氨基酸、β-氨基酸、2-4个氨基酸的寡肽或其它一端羧基、一端氨基(或羟基)的化合物改为或经化学反应能够将P与G连接起来的化合物，其中一端羧基、一端氨基(或羟基)的化合物优选双取代的对氨基苯甲醇衍生物或双取代的对羟基苯甲酸衍生物，其中取代基为C1-4的烷基或C1-4的烷氧基。更优选的是3，5-二甲基-4-氨基-苯甲醇、3，5-二甲氧基-4-氨基-苯甲醇、3，5-二甲基-4-羟基-苯甲酸或3，5-二甲氧基-4-羟基-苯甲酸。

氨基酸优选甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸或精氨酸等。

进一步优选的氨基酸是：甘氨酸、亮氨酸、赖氨酸、色氨酸、缬氨酸。

本发明的聚乙二醇化藤黄酸前药制备工艺简单，藤黄酸类化合物的制备可以参考文献(陈葆仁：藤黄抗癌成分的研究江西医学院学报1980，37(2)：1—7；吕归宝：藤黄中新藤黄酸的分离及其结构.药学学报，1984，19(8)：636-639.)来制备。

前药的制备方法如下：

当A为连接键，即结构式为II时：

藤黄酸类化合物在脱水剂和催化剂对二甲氨基吡啶作用下，溶于溶剂a中搅拌0.5～5h，加入聚乙二醇，室温搅拌，过滤，滤液浓缩至干，用溶剂b重结晶，过葡聚糖凝胶柱纯化干燥，即得I。其中脱水剂是二环己基碳二酰亚胺DCC、EDC或DIPC，优选DCC；溶剂a是二氯甲烷、氯仿、DMF或二氧六环，优选二氯甲烷；溶剂b是异丙醇、氯仿—乙醚，二氯甲烷—乙醚或乙醇—乙醚，优选异丙醇。

更好的方法为：将藤黄酸类化合物(总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸或别藤黄酸)在脱水剂二环己基碳二酰亚胺DCC，和催化剂对二甲氨基吡啶(DMAP)作用下，溶于一定量的二氯甲烷，0℃搅拌0.5～5h，优选为2h，加入PEG(PEG或PEG的衍生物氨基或羟基与药物羧基的摩尔比为1:1-2.5)，升至室温(15～30℃)，优选为25℃搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干或真空浓缩后干燥，生成藤黄酸类聚乙二醇前药即通式II.

反应路线以藤黄酸为例：

当A为氨基酸或寡肽时，制备方法如下：

将聚乙二醇与N-叔丁氧羰基氨基酸(Boc-A)、脱水剂、催化剂对二甲氨基吡啶溶于溶剂a中，搅拌，过滤或离心，滤液浓缩至干，残余物溶于溶剂，滴加入冰乙醚中，静置，待固体析出后过滤，干燥后溶于二氯甲烷-三氟醋酸或乙酸乙酯-三氟醋酸中，浓缩至干，残余物倒入乙醚，过滤，粗品用乙醇-乙醚重结晶，得聚乙二醇—氨基酸三氟醋酸盐；将聚乙二醇—氨基酸三氟醋酸盐、藤黄酸类化合物、DCC、溶剂c溶于二氯甲烷中，室温搅拌，过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱纯化，干燥，即得I；其中脱水剂是二环己基碳二酰亚胺(DCC)、[1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺(EDC)或二异丙基碳二亚胺(DIPC)，优选DCC；溶剂a是二氯甲烷、氯仿、DMF或二氧六环，优选二氯甲烷；溶剂b是异丙醇、氯仿—乙醚，二氯甲烷—乙醚或乙醇—乙醚，优选异丙醇；溶剂c是吡啶、二乙胺、N-甲基吗啉或三乙胺，优选三乙胺。

更好的制备方法为：

将PEG的衍生物与N-叔丁氧羰基氨基酸在脱水剂(DCC或EDC，DIPC，优选为DCC)，和催化剂对二甲氨基吡啶(DMAP)溶于一定量的二氯甲烷(或氯仿、二氧六环、DMF优选为二氯甲烷)，25℃(10～30℃优选为25℃)搅拌过夜。过滤或离心，滤液浓缩至干，加入冷丙酮(或甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿，优选为丙酮)，再次过滤除去少量不溶物，滤液再次浓缩至干，残余物溶于一定量的二氯甲烷(或氯仿、二氧六环、DMF优选为二氯甲烷)，滴加入冰乙醚中，静置，待固体完全析出后过滤，真空干燥后溶于二氯甲烷-三氟醋酸(1：1)(或乙酸乙酯-三氟醋酸(1：1))溶液中，室温搅拌，浓缩至干，残余物倒入乙醚，过滤，粗品用乙醇-乙醚重结晶，得聚乙二醇—甘氨酸三氟醋酸盐。与藤黄酸类化合物以氨基与药物羧基1:1-8的比例(摩尔比)再与DCC，三乙胺(吡啶、二乙胺、N-甲基吗啉等，优选为三乙胺)2ml溶于一定量的二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，生成藤黄酸类化合物聚乙二醇前药即通式I。反应式如下：

A为寡肽时跟氨基酸一样，只不过是几个氨基酸以酰胺键连在一起，还是一端氨基一端羧基，同样可以用上式表示。

当A为氨基苯甲醇衍生物时，制备方法如下：

将PEG衍生物T-PEG(PEG-Thiazolidine-2-thione)(制备方法参考文献Green et al：PEGThiazolidine-2-thion，a Novel Reagent for Facile Protein Modification of Bovine Hemoglobin.Bioconjugate Chem.1996，7：638-641)、对氨基苄醇与催化剂对二甲氨基吡啶溶于溶剂a中，搅拌，浓缩，倒入冰乙醚中，过滤，固体用溶剂b重结晶，所得产物与藤黄酸类化合物、DCC、DMAP溶于溶剂a中，室温搅拌，过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱纯化，干燥，即得I；其中溶剂a是二氯甲烷、氯仿、DMF或二氧六环，优选二氯甲烷；溶剂b是异丙醇、氯仿—乙醚，二氯甲烷—乙醚或乙醇—乙醚，优选异丙醇。

更好的制备方法为：

将T-PEG、对氨基苄醇与催化剂对二甲氨基吡啶溶于一定量的二氯甲烷中(或氯仿、二氧六环、DMF优选为二氯甲烷)，10～30℃(优选25℃)搅拌过夜。浓缩反应液，残余物倒入冰乙醚中，过滤，静置，待固体完全析出后过滤，用异丙醇重结晶。将所得固体与藤黄酸类化合物以氨基与药物羧基1:1-8的比例(摩尔比)再与DCC，DMAP溶于一定量的二氯甲烷中(或氯仿、二氧六环、DMF优选为二氯甲烷)，10～30℃(优选25℃)搅拌过夜。过滤或离心，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，生成藤黄酸类化合物聚乙二醇前药即通式I。反应式如下：

发明人在研究中发现本发明中的藤黄酸(包括总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸和别藤黄酸)聚乙二醇类前药具有优良的水溶性，且毒性降低，与藤黄酸钠比较，藤黄酸钠小鼠静脉注射的LD₅₀为29.01mg/kg，而本发明的藤黄酸聚乙二醇类前药毒性都较藤黄酸钠低，部分前药的LD₅₀为：聚乙二醇10K-赖氨酸-藤黄酸、聚乙二醇20K-甘氨酸-藤黄酸和聚乙二醇6K-赖氨酸-藤黄酸的小鼠静脉注射的LD₅₀分别为48.31、42.15、50.12mg/kg(以藤黄酸计)。

本研究表明：藤黄酸(包括总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸和别藤黄酸)聚乙二醇类前药无血管刺激性(家兔耳静脉滴注，相当于1mg藤黄酸/20ml/kg)。以2％兔红细胞混悬液进行本发明藤黄酸聚乙二醇类前药溶血试验，表明0.5ml以下剂量(相当于藤黄酸25mg溶于0.9％氯化钠注射液500ml)在2h内未见红细胞溶血和聚集现象。

发明人对肿瘤细胞体外生长抑制作用进行的研究表明，使用四甲基偶氮唑盐比色法，用酶标仪570nm波长处测定不同前药浓度细胞培养液和对照组的吸光度值(A)，计算细胞抑制率。

IC₅₀根据改进寇氏法计算，本发明的藤黄酸聚乙二醇类前药对人肝癌细胞7721作用后，细胞生长明显被抑制，细胞的增殖率下降，细胞的抑制率增高，部分前药(聚乙二醇10K-赖氨酸-藤黄酸、聚乙二醇20K-甘氨酸-藤黄酸和聚乙二醇6K-赖氨酸-藤黄酸)的IC₅₀分别为1.78μg/ml，1.82μg/ml，1.90μg/ml(以藤黄酸计)。

本发明通过将藤黄酸类化合物制备成聚乙二醇类前药，使水溶性得到很大提高，约为100～800mg/ml，更有利于制备成各种注射制剂用于临床。而且，本发明的藤黄酸与聚乙二醇通过共价键结合，相对复合物来说，质量更稳定。

当前药进入人体后，在体内酶的作用下，首先酰胺键和酯键水解，释放出原药即藤黄酸类化合物，发挥药理作用。聚乙二醇进一步断裂为更小的聚乙二醇片断，经肾小球滤过，从肾脏排泄。作为连接臂的氨基酸本身就是组成人体的蛋白质的基本单位，对人体无毒副作用。PEG前药能够延长药物半衰期，使其能够较长时间的维持治疗水平。增加了药物的稳定性，提高细胞通过内吞作用对药物的摄取，利用肿瘤细胞的通透与存留增强效应(EPR)增强药物的被动靶向性。

本发明还公开了一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的通式(I)或(II)为活性成分的藤黄酸聚乙二醇前药或其药学上可接受的盐，还含有一种或多种药学上可接受的载体。

本发明所述的药学上可接受的盐可以是：藤黄酸、别藤黄酸或新藤黄酸化学结构上的酚羟基成钠盐、镁盐、钙盐或其他盐。

所述的药学上可接受的载体是指稀释剂和pH调节剂等药学上常用的辅料，包括各种单糖、双糖、多糖、各种电解质、各种溶剂等及其它们的混合物。例如甘露醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、右旋糖苷、羟乙基淀粉、氯化钠、盐酸、氢氧化钠、磷酸钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、碳酸钠、醋酸钠、枸椽酸钠、注射用水、丙二醇、乙醇、甘油、聚乙二醇、聚维酮等。最优组合物是活性成分、甘露醇、葡萄糖、乳糖或蔗糖、氯化钠、注射用水、盐酸。

本发明所指的药物组合物其剂型包括：注射液或粉针剂。按照药学领域常规方法制备，例如使用活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物可以含有重量比为0.1-100％的通式(I)或(II)的活性成分。

本发明的藤黄酸聚乙二醇前药施用量可根据用药途径、患者年龄、体重、体表面积、所治疗疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是(按藤黄酸计)0.05-100mg/m²体表面积，优选5-100mg/m²，可以用等渗葡萄糖注射液或氯化钠注射液稀释后一次或多次静脉滴注施用。

本发明的聚乙二醇化藤黄酸前药或其药学上可接受的盐可以用于治疗肿瘤疾病。

具体实施方式

实施例1

聚乙二醇4K—藤黄酸的制备

称取藤黄酸(0.346g，0.55mmol)，二环己基碳二酰亚胺(DCC)(1.23g，0.6mmol)，对二甲氨基吡啶(DMAP)(0.03g，0.25mmol)，溶于30ml二氯甲烷，0℃搅拌2h，投入PEG4K(1g，0.25mmol)，升温至25℃，搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇4K—藤黄酸1.0g，收率：76.1％。mp：52-54℃。藤黄酸含量：21.93％(理论：23.9％)。室温下水中溶解度约为：650mg/ml

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为藤黄酸上氢的峰，δ1.28-1.45(C24-H，C25-H，12H)，δ 1.55-2.06(C29-H，C34-H，C35-H，C39-H，C40-H，30H)，δ 2.31-2.62(C21-H，C22-H，6H)，δ 2.95(C26-H，4H)，δ 3.10(C31-H，4H)，δ 3.56-3.87(PEG-H，C11-H，1H，CO-O-CH₂-，4H)，δ 5.05-5.17(C32-H，C37-H，4H)，δ 5.41-5.45(C3-H(C4-H)，2H)，δ 6.30(C27-H，2H)，δ 6.64-6.67(C4-H(C3-H)，2H)，δ 7.50-7.55(C10-H，2H)。

IR：红外图谱中除PEG的特征峰外，增加了1745cm^-1的酯羰基峰，说明PEG上已经以酯键连接上了藤黄酸。

实施例2

聚乙二醇20K—甘氨酸—藤黄酸的制备

1.聚乙二醇20K—甘氨酸三氟醋酸盐(PEG20K-Gly-FA)的制备：

称取PEG20K(40g，2mmol)，N-叔丁氧羰基甘氨酸(Boc-Gly)(0.77g，4.4mmol)，对二甲氨基吡啶(DMAP)(0.12g，1mmol)，溶于100ml二氯甲烷，另称取二环己基碳二酰亚胺(DCC)(1.2g，4.8mmol)，溶于4ml二氯甲烷，滴加入反应液。室温搅拌过夜。离心，弃取沉淀，清液浓缩至干，加入冷丙酮40ml，再次过滤除去少量不溶物，滤液再次浓缩至干，残余物溶于20ml二氯甲烷，滴加入300ml剧烈搅拌的冰乙醚中，静置，待固体完全析出后过滤，真空干燥得白色固体36.4g。将此白色固体溶于60ml二氯甲烷-三氟醋酸(1：1)溶液中，室温搅拌30min，浓缩至干，残余物倒入300ml乙醚，过滤，得粗品，乙醇-乙醚重结晶，得白色固体聚乙二醇—甘氨酸三氟醋酸盐(PEG20K-Gly-FA)33.1g，收率：82.5％。

2.聚乙二醇20K—甘氨酸—藤黄酸的制备：

称取PEG20K-Gly-FA(2.5g，0.125mmol)，藤黄酸(0.189g，0.3mmol)，DCC(0.062g，0.3mmol)，三乙胺2ml溶于20ml二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇—甘氨酸—藤黄酸(PEG-Gly-GA)2.2g，收率：81％。藤黄酸含量：5.18％(理论：5.88％)。室温下水中溶解度约为：120mg/ml。

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为藤黄酸及甘氨酸上氢的峰，δ 1.26-1.45(C₂₄-H，C₂₅-H，12H)，δ 1.54-2.06(C₂₉-H，C₃₄-H，C₃₅-H，C₃₉-H，C₄₀-H，30H)，δ2.30-2.62(C₂₁-H，C₂₂-H，6H)，δ 2.88(C₂₆-H，4H)，δ 3.18-3.27(C₃₁-H，4H)，δ 3.56-3.77(PEG-H，C₁₁-H)，δ 3.89(CO-O-CH₂-，4H)，δ 4.32(CO-N-CH₂-CO，4H)，δ 5.05-5.17(C₃₂-H，C₃₇-H，4H)，δ 5.41-5.45(C₃-H(C₄-H)，2H)，δ 6.30(C₂₇-H，2H)，δ 6.64-6.67(C₄-H(C₃-H)，2H)，δ 7.50-7.55(C₁₀-H，2H)。

FTIR：红外图谱中除PEG的特征峰外，由于PEG分子量大，羰基峰较弱，但仍然能够看到同时增加了1745cm^-1的酯羰基峰，和1658cm^-1的酰胺羰基峰，说明PEG上已经以氨基酸为连接臂，一端成酯，一端成酰胺连接上了藤黄酸

实施例3

聚乙二醇10K—赖氨酸—藤黄酸的制备

1.聚乙二醇—赖氨酸三氟醋酸盐(PEG10K -Lys-FA)的制备：

操作方法同实施例2，收率：78.7％。

2.聚乙二醇10K—赖氨酸—藤黄酸的制备：

称取PEG-Lys-FA(1.25g，0.125mmol)，藤黄酸(0.47g，0.75mmol)，DCC(0.16g，0.8mmol)，三乙胺或2ml溶于20ml二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇20K—赖氨酸—藤黄酸(PEG-Lys-GA)1.2g，收率：68.3％。藤黄酸含量：16.46％(理论：19.79％)。室温下水中溶解度约为：440mg/ml。

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为藤黄酸及赖氨酸上氢的峰，δ 1.23-1.45(C24-H，C25-H，24H，赖氨酸上-CH₂-，8H)，δ 1.55-2.12(C29-H，C34-H，C35-H，C39-H，C40-H，60H，赖氨酸上-CH₂-，4H)，δ 2.31-2.62(C21-H，C22-H，12H)，δ 2.88-3.00(C26-H，8H，CO-N-CH₂，4H)，δ 3.10(C31-H，8H)，δ 3.56-3.77(PEG-H，C11-H)，δ3.91(CO-O-CH₂-，4H)，δ 4.36(赖氨酸上CO-CH-N，2H)，δ 5.05-5.17(C32-H，C37-H，8H)，δ5.41-5.45(C3-H(C4-H)，4H)，δ 6.30(C27-H，4H)，δ 6.64-6.67(C4-H(C3-H)，4H)，δ7.50-7.55(C10-H，4H)。

IR：红外图谱中除PEG的特征峰外，同时增加了1740cm^-1的酯羰基峰，和1651cm^-1的酰胺羰基峰，说明PEG上已经以氨基酸为连接臂，一端成酯，一端成酰胺连接上了藤黄酸.

实施例4

聚乙二醇6K—色氨酸—藤黄酸的制备

1.聚乙二醇—色氨酸三氟醋酸盐(PEG6K -Trp-FA)的制备：

操作方法同实施例2，收率：81.3％。

2.聚乙二醇6K—色氨酸—藤黄酸的制备：

称取PEG6K -Trp-FA(0.75g，0.125mmol)，藤黄酸(0.189g，0.3mmol)，DCC(0.062g，0.3mmol)，三乙胺或(吡啶、二乙胺、N-甲基吗啉等，优选为三乙胺)2ml溶于20ml二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇10K—色氨酸—藤黄酸0.68g，收率：75.8％。藤黄酸含量：18.91％(理论：20.97％)。室温下水中溶解度约为：500mg/ml。

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为藤黄酸及色氨酸上氢的峰，δ 1.26-1.45(C₂₄-H，C₂₅-H，12H)，δ 1.52-2.06(C₂₉-H，C₃₄-H，C₃₅-H，C₃₉-H，C₄₀-H，30H)，δ2.30-2.62(C₂₁-H，C₂₂-H，6H)，δ 2.88(C₂₆-H，4H)，δ 3.15-3.28(C₃₁-H，4H，色氨酸上-CH₂-，4H)，δ 3.56-3.77(PEG-H，C₁₁-H)，δ 3.92(CO-O-CH₂-，4H)，δ 4.36(CO-N-CH-CO，2H)，δ 5.05-5.17(C₃₂-H，C₃₇-H，4H)，δ 5.41-5.45(C₃-H(C₄-H)，2H)，δ 6.30(C₂₇-H，2H)，δ 6.64-6.67(C₄-H(C₃-H)，2H)，δ 6.78(色氨酸上吡咯H，2H)，δ 7.20(色氨酸上ArH，8H)δ 7.50-7.55(C₁₀-H，2H)。

IR：红外图谱中除PEG的特征峰外，同时增加了1741cm^-1的酯羰基峰，和1655cm^-1的酰胺羰基峰，说明PEG上已经以氨基酸为连接臂，一端成酯，一端成酰胺连接上了藤黄酸。

实施例5

聚乙二醇12K—亮氨酸—新藤黄酸的制备

1.聚乙二醇12K—亮氨酸三氟醋酸盐(PEG12K-Leu-FA)的制备：

操作方法同实施例2，收率：80.5％。

2.聚乙二醇12K—亮氨酸—新藤黄酸的制备

称取PEG12K-Leu -FA(1.5g，0.125mmol)，新藤黄酸(0.194g，0.3mmol)，DCC(0.062g，0.3mmol)，三乙胺2ml溶于20ml二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇12K—亮氨酸—新藤黄酸1.28g，收率：77.6％。新藤黄酸含量：8.44％(理论：9.34％)，室温下水中溶解度约为：350mg/ml。

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为新藤黄酸及亮氨酸上氢的峰，δ 1.05(亮氨酸上—CH₃，12H)，δ 1.29-1.45(C₂₄-H，C₂₅-H，12H)，δ 1.54-2.06(C₂₉-H，C₃₄-H，C₃₅-H，C₃₉-H，C₄₀-H，30H，亮氨酸上—CH—，—CH₂—，8H)，δ 2.30-2.62(C₂₁-H，C₂₂-H，6H)，δ 2.93(C₂₆-H，4H)，δ 3.20-3.38(C₃₁-H，4H，C₃₆-H，4H)，δ 3.56-3.77(PEG-H，C₁₁-H)，δ 3.89(CO-O-CH₂-，4H)，δ 4.32(CO-N-CH₂-CO，4H)，δ 5.11-5.24(C₃₂-H，C₃₇-H，4H)，δ 6.09(C₂₇-H，2H)，δ 7.58(C₁₀-H，2H)。

IR：红外图谱中除PEG的特征峰外，由于PEG分子量大，羰基峰较弱，但仍然能够看到同时增加了17421cm^-1的酯羰基峰，和1660cm^-1的酰胺羰基峰，说明PEG上已经以氨基酸为连接臂，一端成酯，一端成酰胺连接上了新藤黄酸。

实施例6

聚乙二醇8K—缬氨酸—别藤黄酸的制备

1.聚乙二醇8K—缬氨酸三氟醋酸盐(PEG8K-Val-FA)的制备：

操作方法同实施例2，收率：79.3％。

2.聚乙二醇8K—缬氨酸—别藤黄酸的制备

称取PEG8K-Val-FA(1.0g，0.125mmol)，别藤黄酸(0.189g，0.3mmol)，DCC(0.062g，0.3mmol)，三乙胺2ml溶于20ml二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇8K—缬氨酸—别藤黄酸1.25g，收率：76.8％。别藤黄酸含量：11.97％(理论：13.33％)，室温下水中溶解度约为：450mg/ml。

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为新藤黄酸及亮氨酸上氢的峰，δ 1.07(缬氨酸上—CH₃，12H)，δ 1.29-1.43(C₂₄-H，C₂₅-H，12H)，δ 1.53-2.09(C₂₉-H，C₃₄-H，C₃₅-H，C₃₉-H，C₄₀-H，30H)，δ 2.29-2.60(C₂₁-H，C₂₂-H，6H)，δ 2.88(C₂₆-H，4H)，δ 2.94-3.11(缬氨酸上-CH-)δ 3.19-3.30(C₃₁-H，4H，C₃₆-H，4H)，δ 3.56-3.79(PEG-H，C₁₁-H)，δ 3.91(CO-O-CH₂-，4H)，δ 4.41(CO-N-CH₂-CO，4H)，δ 5.08-5.19(C₃₂-H，C₃₇-H，4H)，δ 5.43(C₃-H(C₄-H)，2H)δ 6.28(C₂₇-H，2H)，δ 6.65(C₄-H(C₃-H)，2H)，δ 7.47-7.53(C₁₀-H，2H)。

IR：红外图谱中除PEG的特征峰外，由于PEG分子量大，羰基峰较弱，但仍然能够看到同时增加了1740cm^-1的酯羰基峰，和1657cm^-1的酰胺羰基峰，说明PEG上已经以氨基酸为连接臂，一端成酯，一端成酰胺连接上了别藤黄酸。

实施例7

聚乙二醇2K—甘氨酸—缬氨酸—藤黄酸的制备

1.聚乙二醇2K—甘氨酸—缬氨酸三氟醋酸盐(PEG2K-Gly-Val-FA)的制备：

操作方法同实施例2，收率：78.6％。

2.聚乙二醇2K—甘氨酸—缬氨酸—藤黄酸的制备

称取PEG2K-Gly-Val-FA(0.27g，0.125mmol)，藤黄酸(0.189g，0.3mmol)，DCC(0.062g，0.3mmol)，三乙胺2ml溶于20ml二氯甲烷中，室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩至干，异丙醇重结晶，Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱纯化，冻干，得黄色粉末聚乙二醇2K—甘氨酸—缬氨酸—藤黄酸0.34g，收率：78.2％。藤黄酸含量：33.74％(理论：36.83％)，室温下水中溶解度约为：800mg/ml。

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ 3.6左右为PEG上氢的强峰，其余峰为藤黄酸及寡肽(Gly-Ala)上氢的峰，δ 1.10(缬氨酸上—CH₃，12H)，δ 1.23-1.46(C₂₄-H，C₂₅-H，12H)，δ 1.56-2.09(C₂₉-H，C₃₄-H，C₃₅-H，C₃₉-H，C₄₀-H，30H)，δ 2.33-2.64(C₂₁-H，C₂₂-H，6H)，δ 2.91(C₂₆-H，4H)，δ 2.97-3.14(缬氨酸上-CH-)，δ 3.18-3.27(C₃₁-H，4H)，δ 3.56-3.77(PEG-H，C₁₁-H)，δ3.92(CO-O-CH₂-，4H)，δ 4.34(甘氨酸上-CH₂-，4H)，δ 5.05-5.17(C₃₂-H，C₃₇-H，4H)，δ5.41-5.45(C₃-H(C₄-H)，2H)，δ 6.30(C₂₇-H，2H)，δ 6.64-6.67(C₄-H(C₃-H)，2H)，δ7.50-7.55(C₁₀-H，2H)。

IR：红外图谱中除PEG的特征峰外，能够看到同时增加了1743cm^-1的酯羰基峰，和1665cm^-1的酰胺羰基峰，说明PEG上已经以寡肽(Gly-Ala)为连接臂，一端成酯，一端成酰胺连接上了藤黄酸。

实施例8

聚乙二醇化总藤黄酸冻干粉针的制备

取相当于总藤黄酸25g的聚乙二醇化总藤黄酸，加适量注射用水溶解，加入甘露醇20g搅拌均匀，以盐酸调节pH5，加0.5％针用活性炭，60℃保温20分钟，脱炭后，滤液加灭菌注射用水至1000ml，无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装于7ml西林瓶中，每瓶1ml冷冻干燥，出箱，轧盖即可。

实施例9

聚乙二醇化藤黄酸注射液的制备

取相当于藤黄酸25g的聚乙二醇化藤黄酸，加适量注射用水溶解，加入氯化钠4.5g搅拌均匀，以盐酸调节pH 5，加0.5％针用活性炭，60℃保温20分钟，脱炭后，滤液加注射用水至2000ml，0.22μm微孔滤膜过滤，分装于曲颈安瓿瓶中，每瓶2ml，熔封，100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

实施例10

聚乙二醇化新藤黄酸粉针的制备

取相当于新藤黄酸25g的聚乙二醇化新藤黄酸结晶粉末，加入注射用葡萄糖粉末20g，混合均匀，无菌分装于西林瓶中，每瓶相当于新藤黄酸50mg，密封轧盖。

Claims

1、通式(I)的聚乙二醇化藤黄酸前药或其药学上可接受的盐：

其中G是总藤黄酸、藤黄酸、新藤黄酸或别藤黄酸；

P为聚乙二醇；

A为赖氨酸；

m＝1或2；

其中聚乙二醇的平均分子量为2000-20,000。

2、权利要求1的聚乙二醇化藤黄酸前药，其中聚乙二醇为聚乙二醇2000、4000、6000、10,000、15,000或20,000。

3、权利要求1的通式(I)的聚乙二醇化藤黄酸前药或其药学上可接受的盐用于制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途。

4、药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1的通式(I)聚乙二醇化藤黄酸前药或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。