CN100528326C - 一种抗氧化剂生物微胶囊的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种抗氧化剂生物微胶囊的制备方法，涉及到酵母细胞的培养、处理和微胶囊制备的方法，更进一步涉及通过该方法所制备的抗氧化剂生物微胶囊。将在合适的条件下摇瓶培养的酵母细胞经过吐温-80或TritonX-100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钾及氯化钠等进行改性处理后，离心、洗涤，冻干。将酵母细胞壁材与水溶性的绿原酸或脂溶性的白藜芦醇高频度接触，离心，洗去细胞表面的抗氧化剂，冻干后磨细，即得大小均匀，不黏结，抗氧化性能更强且表面无抗氧化剂的酵母细胞微胶囊。实现了绿原酸的稳定化，有效降低了白藜芦醇的光降解速度，水溶性增加了2-3倍且具有缓释性能。

Description

一种抗氧化剂生物微胶囊的制备方法

技术领域

本发明提供一种抗氧化剂生物微胶囊的制备方法，涉及到酵母细胞的培养、处理和微胶囊制备的方法，更进一步涉及通过该方法所制备的抗氧化剂生物微胶囊。

技术背景

近年来，功能性食品的防病保健作用受到越来越广泛的重视。植物抗氧化剂特别是多酚化合物在心血管疾病的防治及防癌抑癌等方面的独特作用已使其成为了一个重要的研究领域。但是抗氧化剂本身不稳定，很容易氧化变质，有的还有苦涩等不良味道，这极大地限制了其广泛应用。用适宜的壁材将抗氧化剂微胶囊化，通过在其周围形成由壁材组成的保护层而与外界隔绝，可防止由于氧气、光照等造成的氧化变质，保持抗氧化剂的抗氧化活性；可以掩盖某些抗氧化剂的酚类气味，提高其可接受性及其稳定性；还可以通过不同壁材的组成及不同条件的调控，控制抗氧化剂的释放速度，延长其保质期；抗氧化剂的微胶囊化扩大了抗氧化剂的使用范围，减少了其使用量，从而也就减小了其毒性，降低了成本。

虽然微胶囊技术已在食品、化妆品、药品工业领域得到了广泛应用，但只用食品级的壁材来实现芯物质特别是水溶性物质的稳定化还存在许多困难，往往要用到聚合物或者价格昂贵的卵磷脂。解决制备成本过高和壁材及辅助料的安全性的问题是微胶囊研究中急需解决的问题之一，寻找原料易得、价廉、适用范围广、微囊化制备简单、对人类和生态环境安全的壁材将极大地促进微胶囊技术的发展。尤其是在食品、医药工业领域，只能使用蛋白质、碳水化合物和蜡等天然高分子壁材，所得的微胶囊脆弱，对芯物质适应性小，不耐压、不耐热，加工性能差，而且产品的颗粒大小不均匀，因此，能用于工业化生产的却并不多，有的微囊化的过程中还会用到有毒的溶剂或辅料等。生物微胶囊以其制备简单、损耗小、生物相容性好、后处理方便等特性占有重要地位，一直受到许多研究者的关注。酵母细胞安全无毒，易于培养，天然的细胞结构使其具有包埋物质的潜能，经过适当改性，完全能成为一种新型的、最为经济的微胶囊壁材，已成功用于精油和风味物质的包埋，而且近年来在药物输送体系中也已得到了应用。

自从上个世纪70年代，英国科学家发现霉菌、酵母等真菌微生物适于作微胶囊壁材以来，人们就在不断地进行改进。1973年，法国专利FR2179528报道了工业用酵母经过质壁分离剂处理后，包埋了氯化钕、氯化镁和洋葱提取物；1977年，美国的Shank等利用在低氮高碳源培养基上培养的脂肪含量高达40～60％的酵母细胞包埋了油溶性化合物(USA4001480)；1983年，英国的Dunlop公司利用一种既能溶于油又能溶于水的公共溶剂，找到了一种以脂肪含量高于10％的酵母菌制备微胶囊的方法(EP-0085805A1)；1987年，英国的AD2公司又作了进一步的改进，通过将酵母细胞放在含有囊心的浓溶液或分散液中溶胀，在室温条件下搅拌进行扩散渗透的方法，使脂肪含量低于10％的酵母细胞也能作为微胶囊的壁材使用而无需公共溶剂的参与(EP 0242135A2)。此外，漂白剂和纺织柔软剂中的芳香类物质也被成功地包埋于酵母细胞中(EP 0414282A1，0414283A1)。WO 93/11869则先用H₂O₂除臭后再制成了液体漂白催化剂的微胶囊。WO 94/22572描述了一种先将待包埋物质的溶液进入到细胞中，然后通过物理或化学方法使待包埋物残留其中的制备生物微胶囊的方法。2000年成立的Fluid Technologies Plc.公司专门生产风味物质的酵母微胶囊，日本也开发成功了油脂的酵母微胶囊产品。所有这些专利文献中至今还未见抗氧化剂生物微胶囊的制备方法。

绿原酸存在于多种植物当中，由于它能作用于活性氧，是有效的羟自由基清除剂，具有心血管防护，抗菌抗病毒、抗诱变抗癌，降脂降糖，抗白血病和免疫调节等广泛的药理作用。然而其邻二酚羟基结构使其易于氧化成高活性的醌，在储存及加工过程中还易发生酯基转移。Kono等报道，绿原酸的抗氧化功能源于其儿茶酚和共轭的双键结构。因此，绿原酸的稳定化是发挥其功能作用的前提保证。

此外，白藜芦醇作为一种植物抗毒素，具有广泛的生理和药理活性，包括抗氧化、心血管防护、抗炎、抗血小板凝集、抗癌和雌激素功能，但白藜芦醇易于氧化和极端的光敏性也使其应用受到了极大的限制。

所以，现在需要一种高效制备抗氧化剂绿原酸和白藜芦醇生物微胶囊的方法。

发明内容

本发明技术原理是采用将培养的酵母细胞经过化学方法处理后，与抗氧化剂溶液高频度接触，使抗氧化剂通过扩散或渗透进入到酵母细胞中，利用抗氧化剂的羟基、芳香环与酵母细胞壁或细胞膜之间的氢键作用、疏水相互作用以及范德华力等使抗氧化剂保留在酵母细胞中，从而制得生物微胶囊。

因此，本发明第一个目的是提供一种制备水溶性抗氧化剂生物胶囊的方法，包括：

(1)以酵母细胞为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养；

(2)将所得的细胞离心，洗涤后，重新悬浮在具有自溶促进功能的自溶促进剂中，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时后，离心、洗涤，冻干得到微胶囊化用壁材。其中所述的自溶促进剂任一选自吐温-80、TritonX-100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钾以及氯化钠；

(3)将酵母细胞壁材与水溶性抗氧化剂溶液高频度接触，离心，洗去细胞表面的抗氧化剂，冻干后磨细，即得抗氧化剂的酵母细胞微胶囊。

(4)如果需要，采用高效液相色谱法测定微胶囊中抗氧化剂的含量。

(5)包埋度定义：包埋度(％)＝实际包埋量/微胶囊重量×100％

高频度接触定义：以可实现溶液组分充分混和的转速进行振荡的频度。本领域公知的转速50rpm/min以上或加压2MPa以上，例如50-75rpm/min、75-200rpm/min、或200rpm/min以上的振荡频度。

在一个具体实施方案中，所述的抗氧化剂为1％的绿原酸，所述的溶液为水溶液。在另一个具体实施方案中，微胶囊的制备步骤如下：将1g酵母细胞与1-20mL 1％的绿原酸溶液高频度接触。24小时后取出，离心，用水洗涤除去表面未包埋的绿原酸，冷冻干燥。

在另一具体实施方案中，所述的吐温-80的加入重量为0.1～5％；或

所述的TritonX-100的加入重量为0.1～5％；或

所述的溴化十六烷基三甲基铵的加入重量为0.1～5％；或

所述的十二烷基硫酸钠的加入重量为0.1～5％；或

所述的乙酸乙酯的加入重量为0.5～10％；或

所述的乙醇的加入重量为0.5～10％；或

所述的盐酸的加入重量为0.5～10％；或

所述的氢氧化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钾的加入重量为1～20％。

在另一个具体实施方案中，摇瓶培养的步骤如下：斜面种子活化4小时后接入种子培养基，培养24小时后再按10％的接种量接入装有50mL发酵培养基的500mL摇瓶中进行发酵培养，发酵时间24小时，发酵温度28-32℃，转速180r/min。

还在另一个具体实施方案中，酵母细胞处理的步骤如下：培养的酵母细胞离心、洗涤后，直接冷冻干燥，或重新悬浮于0.1～20％的自溶促进剂溶液中，在40～60℃下处理24～48小时后，离心，冷冻干燥。

本发明第二个发明目的是提供一种脂溶性抗氧化剂生物微胶囊的制备方法。

(1)采用酵母细胞为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养；

(2)将所得的细胞离心，洗涤后，重新悬浮在具有自溶促进功能的自溶促进剂中，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时后，离心、洗涤，冻干得到微胶囊化用壁材。其中所述的自溶促进剂任一选自吐温-80、TritonX-100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钾以及氯化钠；

(3)将酵母细胞壁材与脂溶性抗氧化剂溶液高频度接触，离心，洗去细胞表面的抗氧化剂，冻干后磨细，即得抗氧化剂的酵母细胞微胶囊。

(4)如果需要，采用高效液相色谱法测定微胶囊中抗氧化剂的含量。

其中包埋度和高频度接触定义可参见前文。

在一个具体实施方案中，所述的抗氧化剂为1％的白藜芦醇，所述的溶液为乙醇溶液。

在另一具体实施方案中，所述的吐温-80的加入重量为0.1～5％；或

所述的TritonX-100的加入重量为0.1～5％；或

所述的溴化十六烷基三甲基铵的加入重量为0.1～5％；或

所述的十二烷基硫酸钠的加入重量为0.1～5％；或

所述的乙酸乙酯的加入重量为0.5～10％；或

所述的乙醇的加入重量为0.5～10％；或

所述的盐酸的加入重量为0.5～10％；或

所述的氢氧化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钾的加入重量为1～20％。

在另一个具体实施方案中，摇瓶培养的步骤如下：斜面种子活化4小时后接入种子培养基，培养24小时后再按10％的接种量接入装有50mL发酵培养基的500mL摇瓶中进行发酵培养，发酵时间24小时，发酵温度28-32℃，转速180r/min。

还在另一个具体实施方案中，酵母细胞处理的步骤如下：培养的酵母细胞离心、洗涤后，直接冷冻干燥，或重新悬浮于0.1～20％的自溶促进剂溶液中，在40～60℃下处理24～48小时后，离心，冷冻干燥。

还在另一个具体实施方案中，微胶囊的制备步骤如下：将1g酵母细胞与1-20mL 1％脂溶性抗氧化剂溶液高频度接触，24小时后取出，离心，用乙醇洗涤除去表面未包埋的抗氧化剂。冷冻干燥。

在一个具体实施方案中，所述的菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Han.)，斜面培养基为PDA培养基，种子培养基为高糖培养基，发酵培养基为高糖培养基。

在另一个具体实施方案中，所述的种子培养基和发酵培养基均为YPD培养基，组成如下：蛋白胨20.0g(单位(g/L)，下同)、酵母提取物10.0g、葡萄糖10.0g、添水至1000mL，pH4-5。

在另一个具体实施方案中，所述的种子培养基和发酵培养基均为产脂培养基，组成如下：蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g、添水至1000mL。

还在另一个具体实施方案中，种子培养基和发酵培养基都为豆芽汁蔗糖培养基，配制如下：取黄豆芽200.0g，洗净，放入水中煮沸30min，用纱布过滤，取豆芽汁加蔗糖30.0g，添水至1000mL，调节pH＝7.2。

本发明的第三个发明目的是提供根据前述方法所制备的抗氧化剂生物微胶囊，其中

在一个实施方案中，所制备的抗氧化剂生物微胶囊是水溶性抗氧化剂生物胶囊，其中涉及的抗氧化剂为绿原酸，优选1％的绿原酸，涉及的溶液为水溶液。

在另一个实施方案中，所制备的抗氧化剂生物微胶囊是脂溶性抗氧化剂生物胶囊，其中涉及的抗氧化剂为白藜芦醇，优选1％的白藜芦醇，涉及的溶液为乙醇溶液。

本发明的有益效果：近年来，随着人工合成抗氧化剂被严格限制使用，天然、廉价的抗氧化剂的开发和利用倍受人们的重视。但由于其本身的易氧化性或光敏性又给其应用带来了诸多困难。采用原料易得、价廉、适用范围广、微囊化制备简单、对人类和生态环境安全的酵母细胞作为壁材进行包埋后，不仅能防止由于氧气、光照等造成的氧化变质，保持抗氧化剂的抗氧化活性，还可以掩盖某些抗氧化剂的酚性气味，提高其可接受性及其稳定性。本专利技术对于实现微胶囊的国产化，改变我国微胶囊产品依赖进口的局面，同时为抗氧化剂作为食品添加剂得到大规模应用奠定基础。不仅能填补我国在这一领域的空白，对我国医药工业、临床医学和食品工业均具有重大的社会效益和经济效益。

具体实施方式

实施例1

如前所述，进行摇瓶培养酵母细胞，然后收集并洗涤酵母。

加入重量为0.5％-5％的吐温-80，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时，以使其充分自溶，然后离心、洗涤，冻干。

将1g酵母细胞与1-20mL 1％绿原酸水溶液，在30～60℃下进行高频度接触，24小时后取出，离心，用水洗去表面未包埋的绿原酸后，冷冻干燥。

最后通过高效液相色谱法测定微胶囊中抗氧化剂的含量。

应当指出：所加入的自溶促进剂的作用在于促进细胞自溶，如果加入高浓度的自溶促进剂则反应时间更短，如果加入低浓度的自溶促进剂则反应时间更长。因此在合适浓度范围内，加入不同浓度的自溶促进剂，本领域技术人员显然可以通过控制时间长短来达到预期效果。因此实施例中并不必要列出上述浓度范围内任何点的浓度数值。

实施例2

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为TritonX-100。

实施例3

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为溴化十六烷基三甲基铵。

实施例4

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为十二烷基硫酸钠。所得生物微胶囊中绿原酸包埋度比未经自溶处理者高3.75％。

实施例5

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为乙酸乙酯。所得生物微胶囊中绿原酸包埋度比未经自溶处理者高17.96％。

实施例6

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为乙醇。

实施例7

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为盐酸。

实施例8

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为氢氧化钠。所得生物微胶囊中绿原酸包埋度比未经自溶处理者高43.52％。

实施例9

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为氯化钠。

实施例10

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的自溶促进剂为氯化钾。

实施例11

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例1，除了加入的抗氧化剂为1-20mL 1％白藜芦醇乙醇溶液。

实施例12

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为TritonX-100。

实施例13

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为溴化十六烷基三甲基铵。

实施例14

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为十二烷基硫酸钠。

实施例15

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为乙酸乙酯。

实施例16

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为乙醇。

实施例17

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为盐酸。

所得生物微胶囊中白藜芦醇包埋度比未经自溶处理者高25.06％。

实施例18

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为氢氧化钠。所得生物微胶囊中白藜芦醇包埋度比未经自溶处理者高18.08％。

实施例19

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为氯化钠。

实施例20

培养、处理酵母及包埋步骤同实施例11，除了加入的自溶促进剂为氯化钾。所得生物微胶囊中白藜芦醇包埋度比未经自溶处理者高1.28％。

从上述实施例的结果中，经过分析我们发现：

1.所制备的酵母细胞壁材对绿原酸和白藜芦醇的包埋度分别为6.93％～8.76％和3.62％～4.81％。经过改性处理后，酵母细胞制备壁材对水溶性绿原酸和脂溶性白藜芦醇的包埋度都有不同程度的提高，对绿原酸的包埋度分别比改性前提高了3.75％～43.52％不等(参见实施例1-10)，白藜芦醇的包埋度则提高了1.28％～25.06％不等(参见实施例11-20)。

2.制得的绿原酸酵母微胶囊在25℃/75％RH，25℃/90％RH和60℃下能保持稳定，而且在模拟胃液中，绿原酸在2h内的释放率达95％以上，5h后，绿原酸已释放完全。

3.绿原酸酵母微胶囊化后，其对羟自由基和DPPH自由基的清除能力显著提升。当微胶囊乙醇提取液中绿原酸浓度为17.54mg/L时，其对羟自由基清除率预测值为39.56％，而实测值为63.52±1.59％；当绿原酸浓度为123.14mg/L时，预测值为50.19％，实测值为74.62±0.54％。当微胶囊乙醇提取液中绿原酸浓度为17.54mg/L时，对DPPH自由基的清除率为48.91±0.48％，高于预测值44.85％；当绿原酸浓度为23.14mg/L时，预测值为56.99％，实测值为64.66±0.74％；当绿原酸浓度为35.08mg/L时，预测值为75.44％，实测值为87.48±0.75％；当绿原酸浓度为46.28mg/L时，预测值为84.87％，实测值为91.75±0.15％；可见，绿原酸微囊化后，其抗氧化性能显著提高。

4.制得的白藜芦醇酵母微胶囊在60℃下能保持稳定。而且，在25℃/75％RH和25℃/90％RH光照下(ca.300lx)贮存10天后的白藜芦醇保有率分别为97.58±1.81％和93.13±1.81％，显著高于未微囊化的79.88±2.05％和77.77±1.50％。

5.微囊化后白藜芦醇的在水中的溶解度为6.67±0.03mg/100mL，比结晶型白藜芦醇的1.96±0.01mg/100mL高2倍以上，比无定形白藜芦醇的3.06±0.02mg/100mL也要高出1倍以上，表明白藜芦醇酵母微胶囊化以后，其生物利用度提高了1～2倍。

6.酵母微胶囊化的白藜芦醇对羟自由基和DPPH自由基的清除能力显著提高。当微胶囊乙醇提取液中白藜芦醇浓度为9.64mg/L时，其对羟自由基的清除能力预测值为20.00％，而实测值为30.11±1.69％；当白藜芦醇浓度为15.60mg/L时，预测值为29.78％，实测值为33.86±2.73％。当微胶囊乙醇提取液中白藜芦醇浓度为10.18mg/L时，对DPPH自由基的清除率为34.98±1.12％，高于预测值27.31％；当白藜芦醇浓度为19.28mg/L时，预测值为41.30％，实测值为50.68±1.36％；当白藜芦醇浓度为31.22mg/L时，预测值为53.72％，实测值为63.53±0.31％。可见，白藜芦醇微囊化后，其抗氧化性能显著提高。

7.酵母细胞微胶囊化的白藜芦醇在模拟胃液中90min内释放率达90％，这一释放特性对于提高白藜芦醇由于代谢和排泄过于迅速而引起的低生物利用度极为有利。由于白藜芦醇无法在血管外的组织中积累且血浆中白藜芦醇半衰期极短，因而微囊化白藜芦醇的缓释性能对于维持白藜芦醇的生物活性极为重要。

可见，对于制备水溶性抗氧化剂生物胶囊，绿原酸经过酵母细胞微胶囊化后，不仅达到了稳定化的目的，而且并未显著降低其释放速度，通过酵母细胞微胶囊化，绿原酸对DPPH自由基和羟自由基的清除能力得到了明显提升；

对于制备脂溶性抗氧化剂生物胶囊，白藜芦醇酵母微胶囊化后，能显著降低其极端的光敏性。通过酵母细胞微胶囊化，不仅其水溶性提高了2倍以上，对DPPH自由基和羟自由基的清除能力得到了明显提升，而且微胶囊的缓释性能对于提高白藜芦醇由于过于迅速的代谢和排泄导致的低生物利用度极为有利。

Claims (10)

1.一种制备抗氧化剂生物微胶囊的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)采用酵母细胞作为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养；

(2)将所得的细胞离心，洗涤后，重新悬浮在具有自溶促进功能的自溶促进剂中，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时后，离心、洗涤，冻干，得到用于微胶囊化的酵母细胞壁材，其中所述的自溶促进剂任一选自吐温-80或TritonX-100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钠或氯化钾；

(3)将酵母细胞壁材与1％抗氧化剂溶液，以可实现溶液组分充分混和的转速进行接触，离心，洗去细胞表面的抗氧化剂，冻干后磨细，即得抗氧化剂的酵母细胞微胶囊。

2.如权利要求1所述的方法，还包括步骤(4)：采用高效液相色谱法测定微胶囊中抗氧化剂的含量。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述的转速是50-75rpm/min、75-200rpm/min、或200rpm/min以上。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的抗氧化剂为绿原酸，所述的抗氧化剂溶液为水溶液；或者所述的抗氧化剂为白藜芦醇，所述的抗氧化剂溶液为乙醇溶液。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：

所述的吐温-80的加入重量为0.1～5％；或

所述的TritonX-100的加入重量为0.1～5％；或

所述的溴化十六烷基三甲基铵的加入重量为0.1～5％；或

所述的十二烷基硫酸钠的加入重量为0.1～5％；或

所述的乙酸乙酯的加入重量为0.5～10％；或

所述的乙醇的加入重量为0.5～10％；或

所述的盐酸的加入重量为0.5～10％；或

所述的氢氧化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钾的加入重量为1～20％。

6.如权利要求5中所述的方法，其特征在于所述的菌株为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae Han.)，斜面培养基为PDA培养基，种子培养基为高糖培养基，发酵培养基为高糖培养基。

7.如权利要求5中所述的方法，其特征在于：

种子培养基和发酵培养基均为YPD培养基，组成如下：蛋白胨20.0g、酵母提取物10.0g、葡萄糖10.0g、添水至1000mL，pH4-5。

8.如权利要求5中所述的方法，其特征在于：种子培养基和发酵培养基均为产脂培养基，组成如下：蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g、添水至1000mL。

9.如权利要求5中所述的方法，其特征在于：

种子培养基和发酵培养基都为豆芽汁蔗糖培养基，配制如下：取黄豆芽200.0g，洗净，放入水中煮沸30min，用纱布过滤，取豆芽汁加蔗糖30.0g，添水至1000mL，调节pH＝7.2。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法所制备的抗氧化剂生物微胶囊。