CN100494343C - 酿酒酵母cwy132及其在微生物发酵制备2-苯乙醇中的应用 - Google Patents
酿酒酵母cwy132及其在微生物发酵制备2-苯乙醇中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一株酿酒酵母诱变株——酿酒酵母CWY132,及其在微生物发酵制备2-苯乙醇中的应用。所述酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CWY132,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2006年12月15日,保藏编号CCTCC NO:M 206136。本发明的有益效果主要体现在:发酵周期短,正常发酵的温度范围较宽,该方法对发酵设备及条件没有特殊要求,一般的醇类发酵工厂的设备和条件均可生产,生产投资较少,收率高,利于工业化生产。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一株酿酒酵母诱变株——酿酒酵母CWY132,及其在微生物发酵制备2-苯乙醇中的应用。
(二)背景技术
2-苯乙醇是一种具有玫瑰花香的芳香醇,大量应用于日用化学和食品工业中玫瑰香型和其他类型的香精配方,也是所有花香型调和香料以及高级香水中不可或缺的成分。从上世纪末以来,消费者对“天然”产品的要求越来越高,国际市场上,对天然2-苯乙醇的需求量非常可观,价格高达1000$/kg;国内由于化工产品长期占据主导地位,故化学合成的2-苯乙醇仍占绝大部分,但化学合成2-苯乙醇使用苯和苯乙烯等致癌物质作为原料,对人体健康和环境都有巨大危害,此外,化学合成的2-苯乙醇中常含有一些难以除去的副产物,严重影响了产品质量。
近年来,随着生物技术的飞速发展和人民生活水平的不断提高,特别是我国加入世界贸易组织,人们越来越重视产品的安全性,追求有机、生态、绿色产品已成为一种时尚。天然2-苯乙醇也必将顺应此趋势,不断提高其在日常生活中所占的比例。微生物发酵生产天然2-苯乙醇,具有发酵周期短、发酵效率高、低成本、高收益、环境友好等优势,开发生产的潜力巨大。
(三)发明内容
本发明即是为了提供一株可发酵生产天然2-苯乙醇,且发酵周期短、发酵效率高、低成本、收率高的酿酒酵母诱变株——酿酒酵母CWY132,及其在微生物发酵制备2-苯乙醇中的应用。
为达到发明目的本发明采用的技术方案是:
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CWY132,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2006年12月15日,保藏编号CCTCC NO:M206136。
所述酿酒酵母CWY132由如下方法获得:对实验室保藏的多株不同种类的酵母(包括酿酒酵母、路德类酵母、毕赤酵母、红酵母等)进行发酵生产天然2-苯乙醇的试验,筛选得到2-苯乙醇产量最高的菌株酿酒酵母AS2.516(Saccharomyces cerevisiae AS 2.516,可以在中国普通微生物菌种保藏管理中心买到),上述菌种先后经过紫外线15W照射75秒,20KeV N+离子束注入1.2×1013ions/cm2和20KeV H+离子束注入0.8×1013ions/cm2处理,筛选高产2-苯乙醇的突变株,2-苯乙醇产量经过高效液相色谱验证,获得突变菌株CWY132。
所述酿酒酵母CWY132菌落特征和生化特性如下:该菌株在固体YEPD或YPAD培养基上形成乳白色圆形饱满菌落,具有酵母特有的酒香味,以芽殖方式进行无性繁殖,可以同化和发酵蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和果糖,不同化木糖,其最适生长温度为28~35℃,最适生长pH值为5.0~6.0。
所述的酿酒酵母CWY132主要用于微生物发酵制备2-苯乙醇。
所述应用具体为:将所述酿酒酵母CWY132接种于含有底物L-苯丙氨酸的发酵培养基中,进行发酵培养,发酵液经分离纯化得到所述的2-苯乙醇。通常,将发酵液过滤收集上清液,自上清液中蒸馏即可获得2-苯乙醇。当发酵培养基中的L-苯丙氨酸浓度高于6g/L时,为提高收率,可在培养基中添加聚丙二醇,发酵结束后分层,收集聚丙二醇相、自聚丙二醇相中蒸馏即可得到所述的2-苯乙醇。所添加的聚丙二醇对水相发酵体系中产生的2-苯乙醇具有高效抽提的作用,由于2-苯乙醇对多种细菌和真菌具有抑制作用,其对酵母细胞的致死浓度为3.8g/L;当培养基中添加的L-苯丙氨酸量高于6g/L时,所产生的2-苯乙醇量将达到细胞的致死浓度,非常不利于产量的进一步提高;本发明通过添加聚丙二醇,将发酵过程中产生的2-苯乙醇及时抽提到聚丙二醇相,使水相中的2-苯乙醇浓度在整个发酵过程中一直处于较低水平,不影响细胞正常的代谢活动,且2-苯乙醇在聚丙二醇相和水相中的分配系数大于30,保证了所产生的2-苯乙醇绝大部分都位于聚丙二醇相中,发酵结束后直接回收聚丙二醇即可。聚丙二醇的另一优势是它已被美国FDA列为可食用级别的溶媒,可直接作为食品添加剂使用,安全可靠。
所述发酵培养在28~35℃条件下搅拌培养36~72小时,发酵培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30~60g/L,L-苯丙氨酸3~26g/L,磷酸二氢钾2~10g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH4.5~7.0。
所述酿酒酵母CWY132接种量为5×106~2×107个细胞/mL培养基。优选为1×107个细胞/mL培养基。
特别的,当发酵培养基中的L-苯丙氨酸浓度高于6g/L时,发酵培养基中还可含有体积为发酵培养基体积0.1~1倍的聚丙二醇,发酵结束后离心或静置分层,收集聚丙二醇相、蒸馏得到所述的2-苯乙醇。所述聚丙二醇可在发酵之前添加,也可在发酵过程中添加。
所述聚丙二醇优选为聚丙二醇1000~2000,最优选为聚丙二醇1500。为使发酵的效果更好,所述酿酒酵母CWY132在接种至发酵培养基之前可先进行活化和扩大培养:先将酿酒酵母CWY132斜面培养活化,培养为固体平皿菌种,再将固体平皿中的单菌落培养为液体菌种,液体菌种经过至少二级液体种子培养后,再接种到发酵培养基中进行发酵培养。
具体的,所述的应用按如下顺序步骤进行:
(1)斜面培养:将酿酒酵母CWY132菌种接种于YEPD或YPAD固体斜面上,在28~35℃条件下培养36~60小时,得斜面活化种子,4℃下保存备用;
(2)固体平皿培养:将酿酒酵母CWY132的斜面活化种子划线接种于YEPD或YPAD固体平皿上,在28~35℃条件下培养36~48小时,长出单菌落,即为固体平皿菌种;
(3)液体培养:将酿酒酵母CWY132的固体平皿菌接种于YEPD或YPAD液体培养基中,在28~35℃条件下搅拌培养12~20小时,即为液体菌种;
(4)种子放大培养:将液体菌种按5~15%体积比的接种量接入YEPD或YPAD液体培养基中,在28~35℃条件下搅拌培养12~20小时,即为一级种子培养液;将一级种子培养液按5~30%体积比接种入种子培养基中,在28~35℃条件下搅拌培养20~30小时,即为二级种子培养液;所述种子培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30~60g/L、L-苯丙氨酸3~5g/L、磷酸二氢钾2~10g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.5;
(5)发酵培养:以5×106~2×107个细胞/mL培养基的接种量,将二级种子培养液接种至发酵培养基中,并加入体积为发酵培养基体积1/3的聚丙二醇1000~2000,28~35℃下搅拌培养36~72小时;所述发酵培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30~60g/L,L-苯丙氨酸6~26g/L,磷酸二氢钾2~10g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH4.5~7.0;
(6)分离纯化:发酵液离心或静置分层,取聚丙二醇相,蒸馏,得到所述2-苯乙醇。
优选的,所述的应用按如下顺序步骤进行:
(1)斜面培养:将酿酒酵母CWY132菌种接种于YEPD或YPAD固体斜面上,在28℃条件下培养60小时,得斜面活化种子,4℃下保存备用;
(2)固体平皿培养:将酿酒酵母CWY132的斜面活化种子划线接种于YEPD或YPAD固体平皿上,在28℃条件下培养48小时,长出单菌落,即为固体平皿菌种;
(3)液体培养:将酿酒酵母CWY132的固体平皿菌接种于YEPD或YPAD液体培养基中,接种量为1环/100mL培养基,在28℃条件下搅拌培养16小时,即为液体菌种;
(4)种子放大培养:将液体菌种按8%体积比的接种量接入YEPD或YPAD液体培养基中,在28℃条件下搅拌培养16小时,即为一级种子培养液;将一级种子培养液按10%体积比的接种入种子培养基中,在28℃条件下搅拌培养20小时,即为二级种子培养液;所述种子培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30g/L、L-苯丙氨酸3g/L、磷酸二氢钾6g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.5;
(5)发酵培养:以1×107个细胞/mL培养基的接种量,将二级种子培养液接种至发酵培养基中,并加入体积为发酵培养基体积1/3的聚丙二醇1500,32℃下搅拌培养60小时;所述发酵培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30g/L,L-苯丙氨酸15g/L,磷酸二氢钾6g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.0;
(6)分离纯化:发酵液离心或静置分层,取聚丙二醇相,蒸馏,得到所述2-苯乙醇。
本发明的诱变株——酿酒酵母CWY132,经过多次诱变,具有高效转化L-苯丙氨酸生产天然2-苯乙醇的特性。当所添加的L-苯丙氨酸量小于6g/L时,摩尔转化率可达90%以上;当所添加的L-苯丙氨酸量高于6g/L时,向培养基中加入聚丙二醇,最终的摩尔转化率达50%~90%,可以进行工业化生产。
本发明使用的发酵底物是葡萄糖和L-苯丙氨酸,适当添加磷酸二氢钾和硫酸镁,即可进行正常生产,所添加的聚丙二醇也价格低廉,方法简单,成本低廉。而天然2-苯乙醇国际市场的价格为1000$/kg,具有很好的市场前景。
本发明的有益效果主要体现在:发酵周期短,正常发酵的温度范围较宽,该方法对发酵设备及条件没有特殊要求,一般的醇类发酵工厂的设备和条件均可生产,生产投资较少,收率高,利于工业化生产。
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CWY132,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2006年12月15日,保藏编号CCTCC NO:M206136。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1:
利用酿酒酵母CWY132发酵生产天然2-苯乙醇,步骤如下:
1、斜面培养:将酿酒酵母CWY132接种于YPAD固体斜面上,在28℃条件下培养60小时后,放入4℃冰箱保存;
2、固体平皿培养:将斜面保存的酿酒酵母CWY132用接种环挑一环划线接种于YPAD固体平皿上,在28℃条件下培养48小时,形成成熟单菌落,即为固体平皿菌种;
3、液体培养:将固体平皿上的酿酒酵母CWY132,用接种环挑取一个单菌落接种于装有100毫升YPAD液体培养基的三角瓶中,在28℃条件下搅拌培养16小时,即为液体菌种;
4、一级液体种子培养:将液体菌种按8%的接种量接入装有500毫升YPAD液体培养基的三角瓶中,在28℃条件下搅拌培养16小时,得到一级种子培养液;
5、二级液体种子培养:一级种子培养液按10%的接种量接入装有3升种子培养基的种子培养罐,在28℃条件下搅拌培养20小时,得到二级种子培养液;所述种子培养基各组分终浓度为:葡萄糖30g/L、L-苯丙氨酸3g/L、磷酸二氢钾6g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH为5.5;
6、发酵培养:二级种子培养液按1×107个细胞/毫升的接种量接入装有8升发酵培养基的10升发酵罐中,在28℃条件下搅拌培养36小时;发酵培养基各组份终浓度:葡萄糖浓度30g/L,L-苯丙氨酸浓度5g/L,磷酸二氢钾浓度6g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱(武汉天源生物技术有限公司生产,下同)0.17g/L,培养基的pH为5.5;
7、分离纯化:将得到的发酵液进行过滤,收集上清液;上清液蒸馏获得2-苯乙醇,最终的摩尔转化率为95.3%。
实施例2:
利用酿酒酵母CWY132发酵生产天然2-苯乙醇,步骤如下:
1、斜面培养:将酿酒酵母CWY132接种于YEPD固体斜面上,在30℃条件下培养48小时后,放入4℃冰箱保存;
2、固体平皿培养:将斜面保存的酿酒酵母CWY132用接种环挑一环划线接种于YEPD固体平皿上,在30℃条件下培养36小时,形成成熟单菌落,即为固体平皿菌种;
3、液体培养:将固体平皿上的酿酒酵母CWY132,用接种环挑取一个单菌落接种于装有100毫升YEPD液体培养基的三角瓶中,在30℃条件下搅拌培养14小时,即为液体菌种;
4、一级液体种子培养:将液体菌种按10%体积比的接种量接入装有500毫升YEPD液体培养基的三角瓶中,在30℃条件下搅拌培养14小时,得到一级种子培养液;
5、二级液体种子培养:一级种子培养液按15%体积比的接种量接入装有3升种子培养基的种子培养罐,在30℃条件下搅拌培养20小时,得到二级种子培养液;所述种子培养基各组份终浓度为:葡萄糖40g/L、L-苯丙氨酸5g/L、磷酸二氢钾6g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH为5.5;
6、发酵培养:将二级种子培养液按5×106个细胞/毫升的接种量接入装有7升发酵培养基的10升发酵罐中,再向其中加入1.5升聚丙二醇1000;将上述发酵体系在30℃条件下搅拌培养50小时;发酵培养基各组份终浓度为:葡萄糖40g/L,L-苯丙氨酸浓度9g/L,磷酸二氢钾浓度6g/L,添加0.5g/L硫酸镁,0.17g/L去除了氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱,培养基的pH为6.0;
7、分离纯化:将发酵液离心,使水相和聚丙二醇相分层,收集聚丙二醇相,蒸馏获得2-苯乙醇,最终的摩尔转化率为72.3%。
实施例3:
利用酿酒酵母CWY132发酵生产天然2-苯乙醇,步骤如下:
1、斜面培养:将酿酒酵母CWY132接种于YPAD固体斜面上,在32℃条件下培养40小时后,放入4℃冰箱保存;
2、固体平皿培养:将斜面保存的酿酒酵母CWY132用接种环挑一环划线接种于YPAD固体平皿上,在32℃条件下培养30小时,形成成熟单菌落,即为固体平皿菌种;
3、液体培养:将固体平皿上的酿酒酵母CWY132,用接种环挑取一个单菌落接种于装有100毫升YPAD液体培养基的三角瓶中,在32℃条件下搅拌培养16小时,即为液体菌种;
4、一级液体种子培养:将液体菌种按12%体积比的接种量接入装有500毫升YEPD液体培养基的三角瓶中,在32℃条件下搅拌培养16小时,得到一级种子培养液;
5、二级液体种子培养:一级种子培养液按20%体积比的接种量接入装有3升种子培养基的种子培养罐,在32℃条件下搅拌培养25小时,得到二级液体种子培养物;所述种子培养基中各组分终浓度为:葡萄糖50g/L、L-苯丙氨酸5g/L、磷酸二氢钾8g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.5;
6、发酵培养:将二级液体种子培养物按1×107个细胞/毫升的接种量接入装有6升发酵培养基的10升发酵罐中,再向其中加入2升聚丙二醇2000;将上述发酵体系在32℃条件下搅拌培养60小时;发酵培养基各组份终浓度为:葡萄糖50g/L,L-苯丙氨酸浓度15g/L,磷酸二氢钾浓度8g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.0;
7、分离纯化:将发酵液静置24h,使水相和聚丙二醇相分层,收集聚丙二醇相,蒸馏,获得2-苯乙醇,最终的摩尔转化率为79.1%。
实施例4:
利用酿酒酵母CWY132发酵生产天然2-苯乙醇,步骤如下:
1、斜面培养:将酿酒酵母CWY132接种于YPAD固体斜面上,在35℃条件下培养48小时后,放入4℃冰箱保存;
2、固体平皿培养:将斜面保存的酿酒酵母CWY132用接种环挑一环划线接种于YPAD固体平皿上,在35℃条件下培养36小时,形成成熟单菌落,即为固体平皿菌种;
3、液体培养:将固体平皿上的酿酒酵母CWY132,用接种环挑取一个单菌落接种于装有100毫升YPAD液体培养基的三角瓶中,在35℃条件下搅拌培养20小时,即为液体菌种;
4、一级液体种子培养:将液体菌种按15%体积比的接种量接入装有500毫升YEPD液体培养基的三角瓶中,在35℃条件下搅拌培养20小时,得到一级液体种子培养液;
5、二级液体种子培养:一级种子培养液按30%体积比的接种量接入装有3升种子培养基的培养罐,在35℃条件下搅拌培养30小时,得到二级种子培养液;所述种子培养基各组份终浓度为:葡萄糖60g/L、L-苯丙氨酸5g/L、磷酸二氢钾10g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH为5.5;
6、发酵培养:将二级液体种子培养物按2×107个细胞/毫升的接种量接入装有5升发酵培养基的10升发酵罐中,再向其中加入3升聚丙二醇1500;将上述发酵体系在35℃条件下搅拌培养72小时;发酵培养基各组份终浓度为:葡萄糖60g/L,L-苯丙氨酸浓度20g/L,磷酸二氢钾浓度10g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH为6.5;
7、将发酵液离心,使水相和聚丙二醇相分层,收集聚丙二醇相蒸馏,获得2-苯乙醇,最终的摩尔转化率为82.4%。
Claims (10)
1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CWY132,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2006年12月15日,保藏编号CCTCCNO:M206136。
2.如权利要求1所述的酿酒酵母CWY132在微生物发酵制备2-苯乙醇中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述酿酒酵母CWY132接种于含有底物L-苯丙氨酸的发酵培养基中,进行发酵培养,发酵液经分离纯化得到所述的2-苯乙醇。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵培养在28~35℃条件下搅拌培养36~72小时,发酵培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30~60g/L,L-苯丙氨酸3~26g/L,磷酸二氢钾2~10g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH4.5~7.0。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述酿酒酵母CWY132接种量为5×106~2×107个细胞/mL培养基。
6.如权利要求4所述的应用,其特征在于:发酵培养基中还含有体积为发酵培养基体积0.1~1倍的聚丙二醇,发酵结束后离心或静置分层,收集聚丙二醇相、蒸馏得到所述的2-苯乙醇。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述聚丙二醇为聚丙二醇1000~2000。
8.如权利要求2~7之一所述的应用,其特征在于:先将酿酒酵母CWY132斜面培养活化,培养为固体平皿菌种,再将固体平皿中的单菌落培养为液体菌种,液体菌种经过至少二级液体种子培养后,再接种到发酵培养基中进行发酵培养。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述的应用按如下顺序步骤进行:
(1)斜面培养:将酿酒酵母CWY132菌种接种于YEPD或YPAD固体斜面上,在28~35℃条件下培养36~60小时,得斜面活化种子,4℃下保存备用;
(2)固体平皿培养:将酿酒酵母CWY132的斜面活化种子划线接种于YEPD或YPAD固体平皿上,在28~35℃条件下培养36~48小时,长出单菌落,即为固体平皿菌种;
(3)液体培养:将酿酒酵母CWY132的固体平皿菌接种于YEPD或YPAD液体培养基中,在28~35℃条件下搅拌培养12~20小时,即为液体菌种;
(4)种子放大培养:将液体菌种按5~15%体积比的接种量接入YEPD或YPAD液体培养基中,在28~35℃条件下搅拌培养12~20小时,即为一级种子培养液;将一级种子培养液按5~30%体积比接种入种子培养基中,在28~35℃条件下搅拌培养20~30小时,即为二级种子培养液;所述种子培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30~60g/L、L-苯丙氨酸3~5g/L、磷酸二氢钾2~10g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.5;
(5)发酵培养:以5×106~2×107个细胞/mL培养基的接种量,将二级种子培养液接种至发酵培养基中,并加入体积为发酵培养基体积1/3的聚丙二醇1000~2000,28~35℃下搅拌培养36~72小时;所述发酵培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30~60g/L,L-苯丙氨酸6~26g/L,磷酸二氢钾2~10g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH4.5~7.0;
(6)分离纯化:发酵液离心或静置分层,取聚丙二醇相,蒸馏,得到所述2-苯乙醇。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述的应用按如下顺序步骤进行:
(1)斜面培养:将酿酒酵母CWY132菌种接种于YEPD或YPAD固体斜面上,在28℃条件下培养60小时,得斜面活化种子,4℃下保存备用;
(2)固体平皿培养:将酿酒酵母CWY132的斜面活化种子划线接种于YEPD或YPAD固体平皿上,在28℃条件下培养48小时,长出单菌落,即为固体平皿菌种;
(3)液体培养:将酿酒酵母CWY132的固体平皿菌接种于YEPD或YPAD液体培养基中,接种量为1环/100mL培养基,在28℃条件下搅拌培养16小时,即为液体菌种;
(4)种子放大培养:将液体菌种按8%体积比的接种量接入YEPD或YPAD液体培养基中,在28℃条件下搅拌培养16小时,即为一级种子培养液;将一级种子培养液按10%体积比的接种入种子培养基中,在28℃条件下搅拌培养20小时,即为二级种子培养液;所述种子培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30g/L、L-苯丙氨酸3g/L、磷酸二氢钾6g/L、硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.5;
(5)发酵培养:以1×107个细胞/mL培养基的接种量,将二级种子培养液接种至发酵培养基中,并加入体积为发酵培养基体积1/3的聚丙二醇1500,32℃下搅拌培养60小时;所述发酵培养基中各组分终浓度为:葡萄糖30g/L,L-苯丙氨酸15g/L,磷酸二氢钾6g/L,硫酸镁0.5g/L,不含氨基酸和硫酸铵的酵母氮碱0.17g/L,pH5.0;
(6)分离纯化:发酵液离心或静置分层,取聚丙二醇相,蒸馏,得到所述2-苯乙醇。
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