CN100471951C

CN100471951C - 检测核酸试样的基因型的方法

Info

Publication number: CN100471951C
Application number: CNB038145944A
Authority: CN
Inventors: 山田芳司; 横田充弘
Original assignee: Nagoya Industrial Science Research Institute
Current assignee: Nagoya Industrial Science Research Institute
Priority date: 2002-06-21
Filing date: 2003-03-20
Publication date: 2009-03-25
Anticipated expiration: 2023-03-20
Also published as: AU2003221195A1; KR20050024365A; EP1531180B1; AU2003221195A8; EP1531180A4; US7745137B2; CN1662651A; WO2004001037A1; US7521181B2; EP1531180A1; EP2256190A1; DE60333195D1; US20050260124A1; US20090239227A1; KR100992972B1; JP4143756B2; JP2004024036A

Abstract

本发明提供高精度、预测概率高的心肌梗塞风险的诊断方法。通过包括以下步骤的方法进行心肌梗塞风险的诊断。(i)由确认与心肌梗塞相关的10个基因多态或5个基因多态中对两个以上的多态进行分析的步骤、(ii)由上述步骤得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤、以及(iii)由确定的基因型求出心肌梗塞的遗传性风险的步骤。

Description

检测核酸试样的基因型的方法

技术领域

本发明涉及利用与心肌梗塞相关的基因的检测方法.具体地说，本发明涉及利用与心肌梗塞相关的多个基因的多态进行检测的方法以及该方法中使用的试剂盒。本发明例如可用于心肌梗塞风险的诊断。

背景技术

心肌梗塞是多因素疾病，其发病由每个人的遗传背景和各种环境因子的相互作用决定(Marenberg ME，Risch N，Berkman LF，FloderusB，de Faire U.Genetic susceptibility to death from coronary heartdisease in a study of twins.N Eng1 J Med 1994；330：1041-1046.、Nora JJ，Lortscher RH，Spangler RD，Nora AH，Kimberling WJ.Genetic-epidemiologic study of early-onset ischemic heartdisease.Circulation 1980；61：503-508.).通常心肌梗塞的发病率与高血压、糖尿病、高脂血症等传统的危险因子的数成比例增高(Nora JJ，Lortscher RH，Spangler RD，Nora AH，Kimberling WJ.Genetic-epidemiologic study of early-onset ischemic heartdisease.Circulation 1980；61：503-508.).这些危险因子本身也是部分受遗传因素控制，但家族史是独立的心肌梗塞的预测因子，这显示出除了传统的危险因子之外，还存在着心肌梗塞易感因子(Marenberg ME，Risch N，Berkman LF，Floderus B，de Faire U.Geneticsusceptibility to death from coronary heart disease in a studyof twins.N Eng1 J Med 1994；330：1041-1046.).并且也有完全不具传统的危险因子也发生心肌梗塞的例子，这也显示与遗传因子相关.

在欧美各国，心肌梗塞是死亡率最高的疾病，即使未致死，也会并发心衰、心绞痛、难治性心律不齐，使患者的生活质量显著降低，因此预防该疾病自然是非常重要的.预防心肌梗塞的方法之一是鉴定心肌梗塞易感基因。通过连锁分析(Broeckel U，Hengstenberg C，Mayer B等人.A comprehensivel inkage analysis for myocardialinfarction and its related risk factors.Nature genet 2002；30：210-214.)和候选基因的相关分析(Cambien F，PoirierO，LecerfL等人.Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardialinfarction.Nature 1992；359：641-644.、Weiss EJ，Bray PF，TaybackM等人.A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as aninherited risk factor for coronary thrombosis.N Eng1 J Med1996；334：1090-1094.、lacoviello L，Di Castelnuovo A，DeKnijffP等人.Polymorphisms in the coagulation factor VII gene and therisk of myocardial infarction.N Eng1 J Med 1998；338：79-85.、Kuivenhoven JA，Jukema JW，Zwinderman AH等人.The role of a commonvariant of the cholesterol ester transfer protein gene in theprogression of coronary atherosclerosis。N Eng1 J Med 1998；338：86-93.)，鉴定出了与心肌梗塞相关的染色体上的基因座和几个候选基因组.目前，通过基因组流行病学研究，已报道了血管紧张肽转化酶(Cambien F，Poirier O，Lecerf L等人.Deletion polymorphismin the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent riskfactor for myocardial infarction.Nature 1992；359：641-644.)、血小板糖蛋白IIIa(Weiss EJ，Bray PF，Tayback M等人.Apolymorphism of a platelet glycoproteinreceptor as an inheritedrisk factor for coronary thrombosis.N Eng1 J Med 1996；334：1090-1094.)、第七凝血因子、胆固醇酯转移蛋白(Kuivenhoven JA，Jukema JW，Zwinderman AH等人.The role of a common variant ofthe cholesterol ester transfer protein gene in the progressionof coronary atherosclerosis.N Eng1 J Med 1998；338：86-93.)等基因多态与心肌梗塞的相关性，但也有相反的报告，尚未得到定论。并且，不同人种具有不同的基因组多态，因此构建各人种的多态与心肌梗塞相关性的数据库是很重要的.

发明内容

如上所述，目前已进行了很多基因多态与冠状动脉疾病或心肌梗塞的相关分析.但是对于很多研究，从其意义上来讲并未得到一致的结论.主要原因是很多研究中的对象集团的规模不够、以及不只是基因多态，环境因素在人种间也不同而引起的。并且，即使认为与心肌梗塞相关，通常在大规模集团中的分析中，其相对危险度(让步比)也低.

本发明是鉴于上述背景而提出的，其目的在于提供高精度、预测概率高的心肌梗塞的遗传性风险的诊断方法，为心肌梗塞的初级预防做出贡献。

本发明人为了实现上述目的，采用多种公开数据库，筛选出推测与冠状动脉硬化、冠状动脉痉挛、高血压、糖尿病、高脂血症等相关的71种基因，以推测与基因机能变化相关的基因型等为中心，选择了112个多态.接着，对该71种基因112个多态进行了超过5000例的大规模相关分析。结果，成功地在男性中鉴定出10个、在女性中鉴定出5个与心肌梗塞相关的SNP(单核苷酸多态).并进一步将这些多态组合使用，通过多因素逻辑回归分析的逐步顺向选择(stepwiseforward selection)，验证在男性中最大让步比为11.26，女性中最大让步比为88.51。由该结果得到以下认识：从这些SNP中选择多个SNP，各SNP进行分析，将分析结果组合使用，则可进行可靠性高、预测概率高的心肌梗塞风险的诊断。而对于女性中证实与心肌梗塞相关的5个SNP中的一个，通过单独对其多态进行分析，也得到了极高的让步比。本发明基于以上认识完成，提供如下内容.

[1]检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(a)：

(a)对核酸试样中两个以上选自以下(1)-(10)的多态进行分析的步骤

(1)连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态、

(2)肿瘤坏死因子α基因中碱基编号-863位的多态、

(3)NADH/NADPH氧化酶p22phox基因中碱基编号242位的多态、

(4)血管紧张肽原基因中碱基编号-6位的多态、

(5)载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态、

(6)血小板活化因子乙酰水解酶基因中碱基编号994位的多态、

(7)载脂蛋白C-III基因中碱基编号-482位的多态、

(8)血小板反应蛋白4基因中碱基编号1186位的多态、

(9)白细胞介素10基因中碱基编号-819位的多态、和

(10)白细胞介素10基因中碱基编号-592位的多态.

[2]检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(b)：

(b)对核酸试样中两个以上选自以下(11)-(15)的多态进行分析的步骤

(11)溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态、

(12)纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中碱基编号-668位的多态、

(13)糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态、

(14)对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态、以及

(15)载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态。

[3]检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(c)：

(c)对核酸试样的载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态进行分析的步骤.

[4]心肌梗塞风险的诊断方法，该方法包括以下步骤(i)-

(iii)：

(i)对核酸试样中两个以上选自以下(1)-(10)的多态进行分析的步骤

(1)连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态、

(2)肿瘤坏死因子α基因中碱基编号-863位的多态、

(3)NADH/NADPH氧化酶p22phox基因中碱基编号242位的多态、

(4)血管紧张肽原基因中碱基编号-6位的多态、

(5)载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态、

(6)血小板活化因子乙酰水解酶基因中碱基编号994位的多态、

(7)载脂蛋白C-III基因中碱基编号-482位的多态、

(8)血小板反应蛋白4基因中碱基编号1186位的多态、

(9)白细胞介素10基因中碱基编号-819位的多态、和

(10)白细胞介素10基因中碱基编号-592位的多态；

(ii)由上述步骤得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤；和

(iii)由确定的基因型求出心肌梗塞的遗传性风险的步骤.

[5]心肌梗塞风险的诊断方法，该方法包括以下步骤(iv)-(vi)：

(iv)对核酸试样中两个以上选自以下(11)-(15)的多态进行分析的步骤

(11)溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态、

(12)纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中碱基编号-668位的多态、

(13)糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态、

(14)对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态、

(15)载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态；

(v)由上述步骤得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤；和

(vi)由确定的基因型求出心肌梗塞的遗传性风险的步骤.

[6]心肌梗塞风险的诊断方法，该方法包括以下步骤(vii)-(ix)：

(vii)对核酸试样的载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态进行分析的步骤；

(Viii)由上述步骤得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤；和

(ix)由确定的基因型求出心肌梗塞的遗传性风险的步骤.

[7]基因型检测用试剂盒，该试剂盒包含两种以上选自以下(1)-(10)的核酸：

(1)用于分析连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态的核酸、

(2)用于分析肿瘤坏死因子α基因中碱基编号-863位的多态的核酸、

(3)用于分析NADH/NADPH氧化酶p22phox基因中碱基编号242位的多态的核酸、

(4)用于分析血管紧张肽原基因中碱基编号-6位的多态的核酸、

(5)用于分析载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态的核酸、

(6)用于分析血小板活化因子乙酰水解酶基因中碱基编号994位的多态的核酸、

(7)用于分析载脂蛋白C-III基因中碱基编号-482位的多态的核酸、

(8)用于分析血小板反应蛋白4基因中碱基编号1186位的多态的核酸、

(9)用于分析白细胞介素10基因中碱基编号-819位的多态的核酸、和

(10)用于分析白细胞介素10基因中碱基编号-592位的多态的核酸.

[8]基因型检测用试剂盒，该试剂盒包含两种以上选自以下(11)-(15)的核酸：

(11)用于分析溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态的核酸、

(12)用于分析纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中碱基编号-668位的多态的核酸、

(13)用于分析糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态的核酸、

(14)用于分析对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态的核酸、和

(15)用于分析载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态的核酸.

[9]基因型检测用试剂盒，该试剂盒包含用于分析载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态的核酸.

[10]固定化核酸，该固定化核酸是将两种以上选自以下(1)-(10)的核酸固定于不溶性支持物上而成：

(1)用于分析连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态的核酸、

(5)用于分析载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态的核酸、

[11]固定化核酸，该固定化核酸是将两种以上选自以下(11)-(15)的核酸固定于不溶性支持物上而成：

(11)用于分析溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态的核酸、

(13)用于分析糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态的核酸、

(14)用于分析对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态的核酸、

(15)用于分析载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态的核酸.

[12]固定化核酸，该固定化核酸是将用于分析载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态的核酸固定于不溶性支持物上而成.

附图说明

图1是将实施例的筛选相关分析中所研究的112个基因多态进行汇总的表.

图2同样是将实施例的筛选相关分析中所研究的112个基因多态进行汇总的表.

图3是将实施例中为确定基因型而使用的引物(由上依次为SEQ IDNO.30、31、32、21、22、23、15、16、17、24、25、26、18、19、20、33、34、35、42、43、44)、探针(由上依次为SEQ ID NO.59、60)和其它条件汇总的表.图中，FITC表示异硫氰酸荧光素，TxR表示德克萨斯红.

图4同样是将实施例中为确定基因型而使用的引物(由上依次为SEQ ID NO.27、28、29、39、40、41、36、37、38、53、54、55、56、57、58、48、49、45、46、47、50、51、52)、探针(由上依次为SEQ IDNO.61、62、63、64)和其它条件汇总的表.图中，FITC表示异硫氰酸荧光素，TxR表示德克萨斯红.

图5是将实施例的筛选相关分析中909例对象的背景汇总的表。年龄和体重指数的数据以平均±标准偏差表示.表中，*1表示P＝0.0278，*2表示相对于对照P<0.0001。

图6是将实施例的筛选相关分析中认为与心肌梗塞相关的基因多态汇总的表.

图7是将实施例中进行相关分析的5061例全体对象的背景进行汇总的表.年龄和体重指数的数据以平均±标准偏差表示.表中，*1表示P＝0.022，*2表示P<0.001，*3表示P＝0.017.

图8是将实施例中进行相关分析的5061例全体对象中认为与心肌梗塞相关的基因多态的基因型分布汇总的表.

图9是表示实施例中进行相关分析的5061例全体对象的基因多态与心肌梗塞的多因素逻辑回归分析结果的表.表中，OR表示让步比，CI表示可信区间.

图10是表示对与心肌梗塞相关的基因多态进行多因素逻辑回归分析的逐步顺向选择法所得结果的表.表中，CI表示可信区间。

图11是表示使用男性的5种组合基因多态诊断心肌梗塞的遗传性风险(发病风险)的结果的表.

图12是表示使用女性的5种组合基因多态诊断心肌梗塞的遗传性风险(发病风险)的结果的表.

图13是表示组合的基因多态数目与罹患心肌梗塞的让步比的关系的图。(A)是以男性为对象的情形，(B)是以女性为对象的情形.

实施发明的最佳方式

本发明的第一方面涉及核酸试样的基因型的检测方法，其中一个实施方案的特征是包含对两种以上选自以下(1)-(10)的多态进行分析的步骤。作为另一实施方案，其特征是包含对两种以上选自以下(11)-(15)的多态进行分析的步骤.作为再一方案，其特征是至少包含对以下(15)的多态进行分析的步骤。另外，由以上步骤的结果得到的多态信息确定核酸试样的基因型，由此可求出心肌梗塞的遗传性风险.

(1)连接蛋白37(Connexin 37)基因中碱基编号1019位的多态：1019C→T(以下也称为“连接蛋白37(1019C→T)多态”)

(2)肿瘤坏死因子α基因(Tumor necrosis factor-α)中碱基编号-863位的多态：-863C→A(以下也称为“TNFα(-863C→A)多态”)

(3)NADH/NADPH氧化酶p22 phox(NADH/NADPH oxidase p22 phox)基因中碱基编号242位的多态：242C→T(以下也称为“NADH/NADPH氧化酶p22 phox(242C→T)多态”)

(4)血管紧张肽原(Angiotensinogen)基因中碱基编号-6位的多态：-6G→A(以下也称为“血管紧张肽原(-6G→A)多态”)

(5)载脂蛋白E(Apolipoprotein E)基因中碱基编号-219位的多态：-219G→T(以下也称为“ApoE-219(-219G→T)多态”)

(6)血小板活化因子乙酰水解酶(Platelet-activating factoracetylhydrolase)基因中碱基编号994位的多态：994G→T(以下也称为“PAF乙酰水解酶(994G→T)多态”)

(7)载脂蛋白C-III(Apolipoprotein C-III)基因中碱基编号-482位的多态：-482C→T(以下也称为“ApoC-III(-482C→T)多态”)

(8)血小板反应蛋白4(Thrombospondin 4)基因中碱基编号1186位的多态：1186G→C(以下也称为“TSP4(1186G→C)多态”)

(9)白细胞介素10(Interleukin-10)基因中碱基编号-819位的多态：-819T→C(以下也称为“IL-10(-819T→C)多态”)

(10)白细胞介素10(Interleukin-10)基因中碱基编号-592位的多态：-592A→C(以下也称为“IL-10(-592A→C)多态”)

(11)溶基质素1(Stromelysin-1)基因中碱基编号-1171位的多态：-1171/5A→6A(以下也称为“溶基质素1(-1171/5A→6A)多态”)

(12)纤溶酶原活化因子抑制剂1(Plasminogen activatorinhibitor-1)基因中碱基编号-668位的多态：-668/4G→5G(以下也称为“PA11(-668/4G→5G)多态”)

(13)糖蛋白Ibα(Glycoprotein Ibα)基因中碱基编号1018位的多态：1018C→T(以下也称为“糖蛋白Ibα(1018C→T)多态”)

(14)对氧磷酶(Paraoxonase)基因中碱基编号584位的多态：584G→A(以下也称为“对氧磷酶(584G→A)多态”)

(15)载脂蛋白E(Apolipoprotein B)基因中碱基编号4070位的多态：4070C→T(以下也称为“ApoE(4070C→T)多态”.

以上，诸如1019C→T的标记是指该碱基编号位置的多态包含箭头前或后的碱基两种基因型.不过，-1171/5A→6A是指包含由碱基编号-1171位沿3’方向A(腺嘌呤)连续存在5个的基因型和存在6个的基因型的多态.同样，-668/4G→5G是指包含由碱基编号-668位沿3’方向G(鸟嘌呤)连续存在4个的基因型和存在5个的基因型的多态。

各基因中的碱基编号是以登记于公共数据库GenBank(NCBI)的公知序列为基准表示的.另外，SEQ ID NO.1的碱基序列(登记号M96789：人类连接蛋白37(GJA4)mRNA，完全编码序列)中，第1019号碱基相当于连接蛋白37基因的1019位碱基。同样，SEQ ID NO.2的碱基序列(登记号L11698：人类肿瘤坏死因子α基因，启动子区)中，第197号碱基相当于肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基；SEQ IDNO.3的碱基序列(登记号M61107：人类细胞色素b轻链(CYBA)基因，外显子3和4)中，第684号碱基相当于NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基；SEQ ID NO.4的碱基序列(登记号X15323：人类血管紧张肽原基因5’区和外显子1)中，第463号碱基相当于血管紧张肽原基因的-6位碱基；SEQ ID NO.5的碱基序列(登记号AF055343：人类载脂蛋白E(APOE)基因，5’调节区，部分序列)中，第801号碱基相当于载脂蛋白E基因的-219位碱基；SEQ ID NO.6的碱基序列(登记号U20157：人血小板活化因子乙酰水解酶mRNA，完全编码序列)中，第996号碱基相当于血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基；SEQ ID NO.7的碱基序列(登记号X13367：人载脂蛋白C-IIIDNA5’-侧翼)中，第936号碱基相当于载脂蛋白C-III基因的-482位碱基；SEQ ID NO.8的碱基序列(登记号Z19585：人类血小板反应蛋白-4的mRNA)中，第1186号碱基相当于血小板反应蛋白4基因的1186位碱基；SEQ ID NO.9的碱基序列(登记号Z30175：人类白细胞介素10的IL-10基因(启动子))中，第455号碱基相当于白细胞介素10基因的-819位碱基、第682号碱基相当于-592位碱基；SEQ IDNO.10的碱基序列(登记号U43511：人类溶基质素-1基因，启动子区)中，第698号碱基相当于溶基质素1基因的-1171位碱基；SEQ ID NO.11的碱基序列(登记号X13323：人纤溶酶原活化因子抑制剂1基因(PAI-1)，5’侧翼和外显子1)中，第131号碱基相当于纤溶酶原活化因子抑制剂1基因的-668位碱基；SEQ ID NO.12的碱基序列(登记号J02940：人血小板糖蛋白Ibα链mRNA，完全编码序列)中，第524号碱基相当于糖蛋白Ibα基因的1018位碱基；SEQ ID NO.13的碱基序列(登记号M63012：人类血清对氧磷酶(PON)mRNA，完全编码序列)中，第584号碱基相当于对氧磷酶基因的584位碱基；SEQ ID NO.14的碱基序列(登记号M10065：人载脂蛋白E(ε-4等位基因)基因，完全编码序列)中，第4070号碱基相当于载脂蛋白E基因的4070位碱基。

本发明中，“对多态进行分析”是指对于分析对象的基因多态，研究核酸试样具有什么样的基因型，这与研究多态存在位置的碱基(碱基序列)是相同意思。典型的有，例如以对连接蛋白37(1019C→T)多态进行分析为例，是指研究核酸试样的连接蛋白37的基因型为TT(1019位碱基是两个等位基因均为T的同源接合体)、CT(1019位碱基是C等位基因与T等位基因的异源接合体)和CC(1019位碱基是两个等位基因均为C的同源接合体)中的哪一种。

如后述实施例所示，上述(1)-(10)的多态是在以日本男性为对象的分析中，被认为对用于判定心肌梗塞的遗传性风险特别有效的多态。因此，以这些多态作为分析对象，在受检者为男性、特别是日本男性时，可以进行高更精度、预测概率高的诊断.

同样，如后述实施例所示，上述(11)-(15)的多态是在以日本女性为对象的分析中，被认为对用于判定心肌梗塞的遗传性风险有效的多态.因此，以这些多态作为分析对象，在受检者为女性、特别是日本女性时，可以进行更高精度、预测概率高的诊断。如后述实施例所示，对于这些多态中(15)的多态，通过对其进行分析，确认可以以极高的让步比判别心肌梗塞的遗传性风险.因此，通过单独分析该多态，也可以高精度且预测概率高地判定心肌梗塞的遗传性风险.当然，除该(15)的多态分析之外，通过与选自(11)-(14)中任意一个或多个多态的分析组合实施，也可以进行基因型的检测或心肌梗塞遗传性风险的诊断.

这里，原则上，与所分析的多态数的增加成比例，可以将核酸试样的基因型更细地分类，由此可进行预测概率更高的心肌梗塞遗传性风险的诊断。由所述认识可知，优选在上述(1)-(10)的多态中对更多的多态进行分析并检测基因型.因此，最优选对(1)-(10)的所有多态进行分析.将九个以下的多态组合进行基因型的检测时，优选优先选择使用后述实施例所示的让步比高的多态.例如，如果将八个多态组合使用，则按照让步比高的顺序优选选择九个，即(1)、(3)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)和(10).同样，如果将七个多态组合使用，则优选选择(1)、(3)、(5)、(6)、(8)、(9)和(10)。同样，例如将六个多态组合使用，则优选选择(1)、(5)、(6)、(8)、(9)和(10)。同样，例如将五个多态组合使用，则优选选择(1)、(5)、(6)、(8)和(9).

对两个以上选自(11)-(15)的多态进行分析时也同样，最优选对它们的所有多态，即5个多态进行分析.将四个以下的多态组合进行基因型检测时，优选优先选择使用后述实施例所示的让步比高的多态。例如如果将四个多态组合使用，则按照让步比高的顺序优选选择四个，即(11)、(12)、(14)和(15).同样，例如如果将三个多态组合使用，则优选选择(11)、(12)和(15)。同样，例如将两个多态组合使用，则优选选择(11)和(15)。

对各基因多态进行分析的方法并没有特别限定，例如可以采用如下公知的方法：使用等位基因特异性引物(和探针)，通过PCR扩增，以及通过荧光或发光对扩增产物的多态进行分析的方法；利用PCR(聚合酶链反应)法的PCR-RFLP(restriction fragment lengthpolymorphism：限制性片段长度多态性)法、PCR-SSCP(single strandconformation polymorphism：单链构象多态性)法(Orita，M.等人.，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，86，2766-2770(1989)等)、PCR-SSO(specific sequence oligonucleotide：特异性序列寡核苷酸)法、PCR-SSO法与斑点杂交法组合的ASO(allele specificoligonucleotide：等位基因特异性寡核苷酸)杂交法(Saiki，Nature，324，163-166(1986)等)、或TaqMan-PCR法(Livak，KJ，Genet Anal，14，143(1999)，Morris，T.等人.，J.Clin.Microbiol.，34，2933(1996))；或侵染(invader)法(Lyamichev V等人.，Nat Biotechnol，17，292(1999))、使用引物延伸法的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF/MS(matrix))(Haff LA，Smirnov IP，GenomeRes7，378(1997))、RCA(rolling cycle amplification：滚环扩增)法(Lizardi PM等人.，Nat Genet 19，225(1998))、使用DNA芯片或微阵列的方法(Wang DG等人.，Science 280，1077(1998)等)、引物延伸法、DNA印迹杂交法、斑点杂交法(Southern.E.，J.Mol.Biol.98，503-517(1975))等.还可以通过对分析对象的多态部分直接测序进行分析.另外，还可以将这些方法任意组合进行多态分析。

核酸试样量少的情况下，从检测灵敏度和精度方面考虑，优选通过利用PCR法的方法(例如PCR-RFLP法)进行分析.另外也可以通过PCR法或应用PCR法的方法等基因扩增法，预先扩增核酸试样(包括扩增核酸试样的部分区)，然后使用上述任意的分析方法.

另一方面，对大量核酸试样进行分析时，特别优选使用等位基因特异性PCR法、等位基因特异性杂交法、TaqMan-PCR法、侵入法、使用引物延伸法的MALDI-TOF/MS(matrix)法、RCA(滚环扩增)法或使用DNA芯片或微阵列的方法等可用比较短的时间分析大量检体的分析方法。

以上的方法中，可使用适合各方法的引物、探针等核酸(本发明中也称为“用于多态分析的核酸”)。用于多态分析的核酸的例子包括：对于含有分析对象多态的基因，具有与包含该多态位点的一定区域(部分DNA区)互补的序列的核酸.另外还有：对于含有分析对象多态的基因，设计为具有与包含该多态位点的一定区域(部分DNA区)互补的序列、可特异性扩增含有该多态部分的DNA片段的核酸(引物).例如连接蛋白37基因的1019位的多态为分析对象时，具有与含有1019位碱基为C(胞嘧啶)的连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区互补的序列的核酸，或者具有与含有1019位碱基为T(胸腺嘧啶)的连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区互补的序列的核酸就属于这样的核酸。

用于多态分析的核酸的其它具体例子有：只在分析对象的多态位点为任意一种基因型时，设计为特异性扩增含有该多态位点的部分DNA区的核酸组(set)。更具体地说，例如，设计为特异性扩增包含分析对象多态位点的部分DNA区的核酸组，且包含有义引物和反义引物的核酸组，其中所述有义引物与多态位点为任意一种基因型的反义链中含有该多态位点的部分DNA区特异性杂交，所述反义引物与有义链的部分区域特异性杂交.作为这样的核酸组，当连接蛋白37基因的1019位的多态为分析对象时，有设计为特异性扩增包含连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区的核酸组，该核酸组：包含在1019位碱基为C(胞嘧啶)的连接蛋白37基因的反义链中，与含有1019位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和与有义链的部分区域特异性杂交的反义引物的核酸组；或包含在1019位碱基为T(胸腺嘧啶)的连接蛋白37基因的反义链中，与含有1019位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和与有义链的部分区域特异性杂交的反义引物的核酸组。这里，扩增的部分DNA区的长度可在适合其检测的范围内适当设定，例如50bp-200bp，优选80bp-150bp。更具体地说，可例举具有以下序列的引物作为用于分析连接蛋白37(1019C→T)多态的核酸组.以下序列的下划线部分表示与多态对应的部分。另外，序列中的N是指A、T、C和G的任意一个。

有义引物

CTCAGAATGGCCAAAANCC：SEQ ID NO.15或

CCTCAGAATGGCCAAAANTC：SEQ ID NO.16

反义引物

GCAGAGCTGCTGGGACGA：SEQ ID NO.17

同样，作为用于TNFα(-863C→A)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

反义引物

GGCCCTGTCTTCGTTAANGG：SEQ ID NO.18或

ATGGCCCTGTCTTCGTTAANTG：SEQ ID NO.19

有义引物

CCAGGGCTATGGAAGTCGAGTATC：SEQ ID NO.20

同样，作为用于NADH/NADPH氧化酶p22 phox(242C→T)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

反义引物

ACCACGGCGGTCATGNGC：SEQ ID NO.21或

ACCACGGCGGTCATGNAC：SEQ ID NO.22

有义引物

GCAGCAAAGGAGTCCCGAGT：SEQ ID NO.23

同样，作为用于血管紧张肽原(-6G→A)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物。

反义引物

CGGCAGCTTCTTCCCNCG：SEQ ID NO.24或

CGGCAGCTTCTTCCCNTG：SEQ ID NO.25

有义引物

CCACCCCTCAGCTATAAATAGG：SEQ ID NO.26

同样，作为用于ApoE(-219G→T)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物。

有义引物

GAATGGAGGAGGGTGTCTNGA：SEQ ID NO.27或

AGAATGGAGGAGGGTGTCTNTA：SEQ ID NO.28

反义引物

CCAGGAAGGGAGGACACCTC：SEQ ID NO.29

同样，作为用于PAF乙酰水解酶(994G→T)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

有义引物

TTCTTTTGGTGGAGCAACNGT：SEQ ID NO.30或

ATTCTTTTGGTGGAGCAACNTT：SEQ ID NO.31

反义引物

TCTTACCTGAATCTCTGATCTTCA：SEQ ID NO.32

同样，作为用于ApoC-III(-482C→T)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

有义引物

CGGAGCCACTGATGCNCG：SEQ ID NO.33或

CGGAGCCACTGATGCNTG：SEQ ID NO.34

反义引物

TGTTTGGAGTAAAGGCACAGAA：SEQ ID NO.35

同样，作为用于TSP4(1186G→C)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

有义引物

CGAGTTGGGAACGCACNCT：SEQ ID NO.36或

CGAGTTGGGAACGCACNGT：SEQ ID NO.37

反义引物

GGTCTGCACTGACATTGATGAG：SEQ ID NO.38

同样，作为用于IL-10(-819T→C)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物。

有义引物

TACCCTTGTACAGGTGATGTANTA：SEQ ID NO.39或

TACCCTTGTACAGGTGATGTANCA：SEQ ID NO.40

反义引物

ATAGTGAGCAAACTGAGGCACA：SEQ ID NO.41

同样，作为用于IL-10(-592A→C)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

反义引物

CAGAGACTGGCTTCCTACANGA：SEQ ID NO.42或

CCAGAGACTGGCTTCCTACANTA：SEQ ID NO.43

有义引物

GCCTGGAACACATCCTGTGA：SEQ ID NO.44

同样，作为用于溶基质素1(-1171/5A→6A)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

有义引物

TTTGATGGGGGGAAAANAC：SEQ ID NO.45或

TTGATGGGGGGAAAANCC：SEQ IDNO.46

反义引物

CCTCATATCAATGTGGCCAA：SEQ ID NO.47

同样，作为用于PA11(-668/4G→5G)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物。

有义引物

GGCACAGAGAGAGTCTGGACACG：SEQ ID NO.48

反义引物

GGCCGCCTCCGATGATACA：SEQ ID NO.49

同样，作为用于糖蛋白Ibα(1018C→T)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

有义引物

CCCAGGGCTCCTGNCG：SEQ ID NO.50或

CCCCAGGGCTCCTGNTG：SEQ ID NO.51

反义引物

TGAGCTTCTCCAGCTTGGGTG：SEQ ID NO.52

同样，作为用于对氧磷酶(584G→A)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物。

有义引物

ACCCAAATACATCTCCCAGGANCG：SEQ ID NO.53或

AACCCAAATACATCTCCCAGGNCT：SEQ ID NO.54

反义引物

GAATGATATTGTTGCTGTGGGAC：SEQ ID NO.55

同样，作为用于ApoE(4070C→T)多态分析的核酸引物，可以例举具有以下序列的引物.

有义引物

CCGATGACCTGCAGAANCG：SEQ ID NO.56或

GCCGATGACCTGCAGAANTG：SEQ ID NO.57

反义引物

CGGCCTGGTACACTGCCAG：SEQ ID NO.58

另一方面，探针的具体例子可以例举以下物质。

用于ApoC-III(-482C→T)多态分析的探针有

AGCCACTGATGCNCGGTCT：SEQ ID NO.59或

AGCCACTGATGCNTGGTCT：SEQ ID NO.60

用于IL-10(-819T→C)多态分析的探针有

GTACAGGTGATGTANTATCTCTGTG：SEQ ID NO.61或

GTACAGGTGATGTANCATCTCTGTG：SEQ ID NO.62

用于PA11(-668/4G→5G)多态分析的探针有

TGGACACGTGGGGGAGTCAG：SEQ ID NO.63或

TGGACACGTGGGGAGTCAGC：SEQ ID NO.64

以上的核酸引物、核酸探针只是一些例子，如果是核酸引物，则在不阻碍目标扩增反应进行的限度内，另一方面，如果是核酸探针，则在不阻碍目标杂交反应进行的限度内，可以对部分碱基序列实施改变.这里的“部分改变”是指部分碱基的缺失、置换、插入和/或添加。改变的碱基数例如为1-7个，优选1-5个，进一步优选1-3个。另外，这样的改变原则上在多态位点所对应的碱基以外的部分进行.不过，分析对象的多态为溶基质素1(-1171/5A→6A)多态或PA11(-668/4G→5G)多态时，也可以使用将多态位点所对应的碱基的一部分进行改变而得到的核酸作为引物或探针.

对于用于多态分析的核酸(探针、引物)，可以根据分析方法使用适当的DNA片段或RNA片段。用于多态分析的核酸的碱基长度只要是可发挥各自机能的长度即可，作为引物使用时的碱基长度例如为10-50bp左右，优选15-40bp左右，进一步优选15-30bp左右.

另外，作为引物使用时，只要可与扩增对象特异性杂交，扩增目标DNA片段，可以与作为模板的序列有一些错配.作为探针使用时也同样，只要可与检测对象的序列特异性杂交，可以与检测对象的序列有一些错配。错配的程度为1-数个，优选1-5个，进一步优选1-3个。

用于多态分析的核酸(引物、探针)可通过磷酸二酯法等公知的方法合成.另外，关于用于多态分析的核酸的设计、合成等，可以参考现有书籍(例如分子克隆第三版(Molecular Cloning，ThirdEdition)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York)。

可以预先用标记物对本发明的用于多态分析的核酸进行标记.通过使用这样的标记核酸，例如可以以扩增产物的标记量作为指标进行多态分析.另外，如果将设计为分别对构成多态的各基因型基因中的部分DNA区特异性扩增的2种引物用相互不同的标记物标记，则由扩增产物检测出的标记物和标记量，可判别核酸试样的基因型。作为使用这样的标记引物进行检测的方法的具体例子，可以例举下述方法：将与构成多态的各基因型的有义链分别特异性杂交的2种核酸引物(等位基因特异性有义引物)分别用异硫氰酸荧光素和德克萨斯红标记，使用这些标记引物和与反义链特异性杂交的反义引物，对包含多态位点的部分DNA区进行扩增，测定得到的扩增产物中各荧光物质的标记量，检测多态.另外，例如如果用生物素标记这里的反义引物，则利用生物素与抗生物素蛋白的特异性结合，可以进行扩增产物的分离.

作为标记用于多态分析的核酸时所用的标记物，例如有³²P等放射性同位素、异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明异硫氰酸酯、德克萨斯红等荧光物质，标记方法有使用碱性磷酸酶和T4多核苷酸激酶的5’末端标记法、使用T4 DNA聚合酶或克列诺(Klenow)片段的3’末端标记法、切口平移法、随机引物法(分子克隆第三版(MolecularCloning，ThirdEdition)，Chapter 9，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，New York)等。

可以将以上用于多态分析的核酸以固定于不溶性支持物上的状态使用.将用于固定的不溶性支持物加工成片状、珠状等的话，则可以使用这些固定核酸更简便地进行多态的分析.

核酸试样可以使用公知的提取方法、纯化方法，由受检者的血液、皮肤细胞、粘膜细胞、毛发等中制备.只要含有作为多态分析对象的基因，则可以使用任意长度的基因组DNA作为核酸试样。另外未必需要使用分析对象的全部基因存在于一个核酸上的核酸试样.即，作为本发明的核酸试样，可以使用作为分析对象的全部基因存在于一个核酸上的试样，也可以使用作为分析对象的基因分开存在于两个以上核酸上的试样.另外，核酸试样中，分析对象的基因可以不是完整的状态(即基因的全长均存在的状态)，只要至少存在要分析的多态位点，也可以是片段、部分的状态.

各基因多态的分析可以以每种基因多态进行或者多个或全部同时进行.当为前者时，例如将由受检者得到的核酸试样按照作为分析对象的多态数目分注，对各多态分别进行分析。当为后者时，例如可以通过DNA芯片或微阵列进行.另外，这里所述的同时不仅是指分析过程的所有操作同时进行，也包括部分操作(例如核酸扩增操作、探针的杂交、或检测)同时进行的情况.

利用分析对象基因的转录产物——mRNA，也可以对各基因的多态进行分析.例如可由受检者的血液、尿液等提取、纯化分析对象基因的mRNA，然后通过施行采用RNA印迹法(分子克隆第三版(MolecularCloning，Third Edition)，7.42，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，New York)、斑点印迹法(分子克隆第三版(Molecular Cloning，Third Edition)，7.46，Cold Spring Harbor Laboratory Press，NewYork)、RT-PCR法(分子克隆第三版(Molecular Cloning，ThirdEdition)，8.46，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York)、DNA芯片(DNA阵列)的方法等，以mRNA作为起始材料进行多态分析。

而且，对于在上述多态中伴随有氨基酸变化的，还可以使用分析对象基因的表达产物进行多态分析。此时，只要含有与多态位点对应的氨基酸，则即使是部分蛋白质、部分肽，也可以作为分析用试样使用。

作为使用这样的基因的表达产物进行分析的方法，可以例举直接对多态位点的氨基酸进行分析的方法、或利用立体结构的变化进行免疫学分析的方法等.前者可使用众所周知的氨基酸序列分析法(利用Edman法的方法).后者可以采用使用了具有与基因表达产物特异性结合活性的单克隆抗体或多克隆抗体的、ELISA法(酶联免疫吸附定量法)、放射免疫测定、免疫沉降法、免疫扩散法等，其中所述基因是具有构成多态的任意一种基因型的基因.

通过实施以上说明的本发明的检测方法而得到的多态信息可用于心肌梗塞的遗传性风险的诊断。即，本发明也提供心肌梗塞风险的诊断方法，该方法包括：从上述检测方法得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤，以及由确定的核酸试样的基因型求出遗传性风险的步骤.这里所述的基因型的确定，典型的是对于检测对象的多态，确定其核酸试样的两个等位基因分别具有哪一种基因型。以连接蛋白37(1019C→T)多态作为检测对象的情形为例，典型地是确定核酸试样的连接蛋白37的基因型为TT(1019位碱基是两个等位基因均为T的同源接合体)、CT(1019位碱基是C的等位基因与T的等位基因的异源接合体)和CC(1019位碱基是两个等位基因均为C的同源接合体)中的哪一种。

考虑到后述的实施例得到的结果，为了能够进行高精度且预测概率高的心肌梗塞遗传性风险的诊断，例如如果是连接蛋白37(1019C→T)多态，则要确定核酸试样的基因型是TT或CT中的一个还是CC.同样，如果是TNFα(-863C→A)多态，要确定是AA或CA中的一个还是CC；如果是NADH/NADPH氧化酶p22 phox(242C→T)多态，则要确定是TT或CT中的一个还是CC；如果是血管紧张肽原(-6G→A)多态，则要确定是AA还是GA或GG中的一个；如果是ApoE-219(-219G→T)多态，则要确定是TT还是GT或GG中的一个；如果是PAF乙酰水解酶(994G→T)多态，则要确定是TT或GT中的一个还是GG；如果是ApoC-III(-482C→T)多态，则要确定是TT还是CT或CC中的一个；如果是TSP4(1186G→C)多态，则要确定是CC或GC中的一个还是GG；如果是IL-10(-819T→C)多态，则要确定是CC还是CT或TT中的一个；如果是IL-10(-592A→C)多态，则要确定是CC还是CA或AA中的一个；如果是溶基质素1(-1171/5A→6A)多态，则要确定是6A/6A或5A/6A中的一个还是5A/5A；如果是PAI1(-668/4G→5G)多态，则要确定是5G/5G或4G/5G中的一个还是4G/4G；如果是糖蛋白Ibα(1018C→T)多态，则要确定是TT还是CT或CC中的一个；如果是对氧磷酶(584G→A)多态，则要确定是AA还是GA或GG中的一个；如果是ApoE(4070C→T)多态，则要确定是TT还是CT或CC中的一个.

通过对心肌梗塞的遗传性风险进行诊断，可以预测将来可能罹患心肌梗塞的程度(发病的容易程度)，即发病风险(发病脆弱性)，还可根据基因型这个客观指标来认定心肌梗塞、把握病状。换言之，可以根据本发明的诊断方法来评价心肌梗塞的发病风险、认定是否罹患心肌梗塞，或把握症状。其中，评价发病风险在临床上极有意义.这是因为预知发病风险性有利于心肌梗塞的初级预防，从而可以采取适当的预防措施.

由本发明的诊断方法得到的信息可用于选择适当的治疗方法、预后改善、患者的QOL(生活质量)的提高或发病危险性的降低等。

通过定期施行本发明的诊断方法，可以监控心肌梗塞的发病危险性.通过这样监控，如果发现某种外在因素(环境因素、给药等)与发病危险性等的增加之间存在相关关系，则可以将该外在因素认定为危险因子，可以根据该信息来实现发病危险性等的降低。

利用本发明得到的与心肌梗塞的发病相关的遗传信息，可以进行心肌梗塞的治疗(包括预防性措施).例如，施行本发明的诊断方法，结果作为分析对象的多态是使心肌梗塞发病危险性增高的基因型时，如果将具有发病危险性低的基因型的基因导入机体内并使其表达，则有望通过该基因的表达来减轻症状、抑制发病、减低发病危险性等.通过导入具有发病危险性高的基因型的基因的mRNA的反义链，抑制该mRNA表达的方法，也有望得到同样的治疗效果。

基因或反义链的导入例如可通过使用基因导入用质粒或病毒载体的方法、电穿孔(Potter，H.等人.，Proc.Natl.Acad.Soi.U.S.A.81，7161-7165(1984))、超声波微泡(Lawrie，A.等人.Gene Therapy7，2023-2027(2000))、脂转染(Felgner，P.L.等人.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84，7413-7417(1984))、显微注射(Graessmann，M.和Graessmann，A.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.73，366-370(1976))等方法进行.利用这些方法可以将希望的基因等直接导入(体内法)或间接导入(体外法)生物体.

本发明的第二方面提供在上述本发明的检测方法或诊断方法中使用的试剂盒(基因型检测用试剂盒或心肌梗塞诊断用试剂盒).所述试剂盒中包含用于分析两个以上选自上述(1)-(10)的多态的核酸(用于分析多态的核酸).或者包含用于分析两个以上选自上述(11)-(15)的多态的核酸(用于分析多态的核酸).作为其它方案，还有包含用于分析上述(15)的多态的核酸而构成试剂盒.

用于分析多态的核酸设计为：在其所适用的分析方法(利用使用上述等位基因特异性核酸等的PCR法的方法、PCR-RFLP法、PCR-SSCP法、TaqMan-PCR法、侵入法等)中，可特异性扩增(引物)或者可特异性检测(探针)包含分析对象多态部分的DNA区或者与其对应的mRNA的核酸.以下给出本发明中提供的试剂盒的具体例子.

含有两种以上选自以下(1)-(10)的核酸而成的基因型检测用试剂盒：

(1)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含1019位碱基为C的连接蛋白37基因的1019位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含1019位碱基为T的连接蛋白37基因的1019位碱基、

(2)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-863位碱基为C的肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-863位碱基为A的肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基、

(3)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含242位碱基为C的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含242位碱基为T的肿瘤坏死因子α基因的242位碱基、

(4)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-6位碱基为G的血管紧张肽原基因的-6位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-6位碱基为A的血管紧张肽原基因的-6位碱基、

(5)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-219位碱基为G的载脂蛋白E基因的-219位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-219位碱基为T的载脂蛋白E基因的-219位碱基、

(6)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含994位碱基为G的血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含994位碱基为T的血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基、

(7)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-482位碱基为C的载脂蛋白C-III基因的-482位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-482位碱基为T的载脂蛋白C-III基因的-482位碱基、

(8)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含1186位碱基为G的血小板反应蛋白4基因的1186位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含1186位碱基为C的血小板反应蛋白4基因的1186位碱基、

(9)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-819位碱基为T的白细胞介素10基因的-819位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-819位碱基为C的白细胞介素10基因的-819位碱基、

(10)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-592位碱基为A的白细胞介素10基因的-592位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-592位碱基为C的白细胞介素10基因的-592位碱基.

以上，可以从(1)-(10)中选择两种以上的核酸构成试剂盒，也可以任意选择(1)-(10)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸构成试剂盒.例如可以从(1)、(5)、(6)、(8)、(9)和(10)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸)中选择两种以上核酸构成试剂盒，也可以从(1)、(5)、(6)、(8)和(9)形成的组(后述的实施例中让步比为前5位的用于分析多态的核酸)中选择两种以上核酸构成试剂盒.

含有两种以上选自以下(11)-(15)的核酸而成的基因型检测用试剂盒：

(11)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含由-1171位沿3’方向A连续存在5个的溶基质素1基因的该序列部分；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含由-1171位沿3’方向A连续存在6个的溶基质素1基因的该序列部分、

(12)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含由-668位沿3’方向连续存在4个G的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因的该序列部分；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含由-668位沿3’方向连续存在5个G的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因的该序列部分、

(13)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含1018位碱基为C的糖蛋白Ibα基因的1018位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含1018位碱基为T的糖蛋白Ibα基因的1018位碱基、

(14)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含584位碱基为G的对氧磷酶基因的584位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含584位碱基为A的对氧磷酶基因的584位碱基、

(15)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的4070位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的4070位碱基.

以上，可以从(11)-(15)中选择两种以上的核酸构成试剂盒，也可以任意选择(11)-(15)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸构成试剂盒.例如可以从(11)、(12)、(14)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(11)、(12)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为前3位的用于分析多态的核酸)选择两种以上核酸构成试剂盒.

含有以下核酸制成的基因型检测用试剂盒：

具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的4070位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的4070位碱基.

含有两种以上选自以下(1)-(10)的核酸组而成的基因型检测用试剂盒：

(1)设计为只在核酸试样的连接蛋白37基因的1019位碱基为C时，对包含该连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的连接蛋白37基因的1019位碱基为T时，对包含该连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(2)设计为只在核酸试样的肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基为C时，对包含该肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基为A时，对包含该肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(3)设计为只在核酸试样的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基为C时，对包含该NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基为T时，对包含该NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(4)设计为只在核酸试样的血管紧张肽原基因的-6位碱基为G时，对包含该血管紧张肽原基因的-6位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的血管紧张肤原基因的-6位碱基为A时，对包含该血管紧张肽原基因的-6位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(5)设计为只在核酸试样的载脂蛋白E基因的-219位碱基为G时，对包含该载脂蛋白E基因的-219位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的载脂蛋白E基因的-219位碱基为T时，对包含该载脂蛋白E基因的-219位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(6)设计为只在核酸试样的血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基为G时，对包含该血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基为T时，对包含该血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(7)设计为只在核酸试样的载脂蛋白C-III基因的-482位碱基为C时，对包含该载脂蛋白C-III基因的-482位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的载脂蛋白C-III基因的-482位碱基为T时，对包含该载脂蛋白C-III基因的-482位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(8)设计为只在核酸试样的血小板反应蛋白4基因的1186位碱基为G时，对包含该血小板反应蛋白4基因的1186位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的血小板反应蛋白4基因的1186位碱基为C时，对包含该血小板反应蛋白4基因的1186位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(9)设计为只在核酸试样的白细胞介素10基因的-819位碱基为T时，对包含该白细胞介素10基因的-819位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的白细胞介素10基因的-819位碱基为C时，对包含该白细胞介素10基因的-819位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(10)设计为只在核酸试样的白细胞介素10基因的-592位碱基为A时，对包含该白细胞介素10基因的-592位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的白细胞介素10基因的-592位碱基为C时，对包含该白细胞介素10基因的-592位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组.

以上，可以从(1)-(10)中选择两种以上的核酸组构成试剂盒，也可以任意选择(1)-(10)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸组构成试剂盒。例如可以从(1)、(5)、(6)、(8)、(9)和(10)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(1)、(5)、(6)、(8)和(9)形成的组(后述的实施例中让步比为前5位的用于分析多态的核酸组)选择两种以上的核酸组构成试剂盒.

含有两种以上选自以下(11)-(15)的核酸组而成的基因型检测用试剂盒：

(11)设计为只在核酸试样的溶基质素1基因中由-1171位沿3’方向A连续存在5个时，对包含该溶基质素1基因的该序列部分的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的溶基质素1基因中由-1171位沿3’方向A连续存在6个时，对包含该溶基质素1基因的该序列部分的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(12)设计为只在核酸试样的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中由-668位沿3’方向G连续存在4个时，对包含该纤溶酶原活化因子抑制剂1基因的该序列部分的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中由-668位沿3’方向G连续存在5个时，对包含该纤溶酶原活化因子抑制剂1基因的该序列部分的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(13)设计为只在核酸试样的糖蛋白Ibα基因的1018位碱基为C时，对包含该糖蛋白Ibα基因的1018位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的糖蛋白Ibα基因的1018位碱基为T时，对包含该糖蛋白Ibα基因的1018位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(14)设计为只在核酸试样的对氧磷酶基因的584位碱基为G时，对包含该对氧磷酶基因的584位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的对氧磷酶基因的584位碱基为A时，对包含该对氧磷酶基因的584位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组、

(15)设计为只在核酸试样的载脂蛋白E基因的4070位碱基为C时，对包含该载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的载脂蛋白E基因的4070位碱基为T时，对包含该载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组。

以上，可以从(11)-(15)中选择两种以上的核酸组构成试剂盒，也可以任意选择(11)-(15)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸组构成试剂盒。例如可以从(11)、(12)、(14)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(11)、(12)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为前3位的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒.

含有以下核酸组制成的基因型检测用试剂盒：

设计为只在核酸试样的载脂蛋白E基因的4070位碱基为C时，对包含该载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组；或设计为只在核酸试样的载脂蛋白E基因的4070位碱基为T时，对包含该载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组.

(1)设计为对包含连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在1019位碱基为C的连接蛋白37基因上与包含1019位碱基的部分DNA区进行特异性杂交的有义引物和/或在1019位碱基为T的连接蛋白37基因上与包含1019位碱基的部分DNA区进行特异性杂交的有义引物、和与连接蛋白37基因的部分区进行特异性杂交的反义引物；

(2)设计为对包含肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在-863位碱基为C的肿瘤坏死因子α基因上与包含-863位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物和/或在-863位碱基为A的肿瘤坏死因子α基因上与包含-863位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物、和与肿瘤坏死因子α基因的部分区特异性杂交的有义引物；

(3)设计为对包含NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在242位碱基为C的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因上与包含-863位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物和/或在242位碱基为T的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因上与包含242位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物、和与NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的部分区特异性杂交的有义引物；

(4)设计为对包含血管紧张肽原基因的-6位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在-6位碱基为G的血管紧张肽原基因上与包含-6位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物和/或在-6位碱基为A的血管紧张肽原基因上与包含-6位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物、和与血管紧张肽原基因的部分区特异性杂交的有义引物；

(5)设计为对包含载脂蛋白E基因的-219位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在-219位碱基为G的载脂蛋白E基因上与包含-219位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在-219位碱基为T的载脂蛋白E基因上与包含-219位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与载脂蛋白E基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(6)设计为对包含血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在994位碱基为G的血小板活化因子乙酰水解酶基因上与包含994位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在994位碱基为T的血小板活化因子乙酰水解酶基因上与包含994位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与血小板活化因子乙酰水解酶基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(7)设计为对包含载脂蛋白C-III基因的-482位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在-482位碱基为C的载脂蛋白C-III基因上与包含-482位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在-482位碱基为T的载脂蛋白C-III基因上与包含-482位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与载脂蛋白C-III基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(8)设计为对包含血小板反应蛋白4基因的1186位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在1186位碱基为G的血小板反应蛋白4基因上与包含1186位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在1186位碱基为C的血小板反应蛋白4基因上与包含1186位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与血小板反应蛋白4基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(9)设计为对包含白细胞介素10基因的-819位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在-819位碱基为T的白细胞介素10基因上与包含-819位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在1186位碱基为C的白细胞介素10基因上与包含-819位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与白细胞介素10基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(10)设计为对包含白细胞介素10基因的-592位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在-592位碱基为A的白细胞介素10基因上与包含-592位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物和/或在-592位碱基为C的白细胞介素10基因上与包含-592位碱基的部分DNA区特异性杂交的反义引物、和与白细胞介素10基因的部分区特异性杂交的有义引物；

以上，可以从(1)-(10)中选择两种以上的核酸组构成试剂盒，也可以任意选择(1)-(10)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸组构成试剂盒。例如可以从(1)、(5)、(6)、(8)、(9)和(10)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(1)、(5)、(6)、(8)和(9)形成的组(后述的实施例中让步比为前5位的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒.

(11)设计为对包含溶基质素1基因-1171位的多态部分的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在由-1171位沿3’方向A连续存在5个的溶基质素1基因上与包含该序列部分的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在由-1171位沿3’方向A连续存在6个的溶基质素1基因上与包含该序列部分的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与溶基质素1基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(12)核酸组包括：设计为对包含纤溶酶原活化因子抑制剂1基因-668位的多态部分的部分DNA区进行特异性扩增的一组引物、以及在由-668位沿3’方向G连续存在4个的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因上与包含该序列部分的部分DNA区特异性杂交的探针和/或在由-668位沿3’方向G连续存在5个的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因上与包含该序列部分的部分DNA区特异性杂交的探针；

(13)设计为对包含糖蛋白Ibα基因的1018位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在1018位碱基为C的糖蛋白Ibα基因上与包含1018位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在1018位碱基为T的糖蛋白Ibα基因上与包含1018位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与糖蛋白Ibα基因的部分区特异性杂交的反义引物；

(14)设计为对包含对氧磷酶基因的584位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在584位碱基为G的对氧磷酶基因上与包含584位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在584位碱基为A的对氧磷酶基因上与包含584位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与对氧磷酶基因的部分区特异性杂交的反义引物；以及

(15)设计为对包含载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在4070位碱基为C的载脂蛋白E基因上与包含4070位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在4070位碱基为T的载脂蛋白E基因上与包含4070位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与载脂蛋白E基因的部分区特异性杂交的反义引物；

以上，可以从(11)-(15)中选择两种以上的核酸组构成试剂盒，也可以任意选择(11)-(15)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸组构成试剂盒.例如可以从(11)、(12)、(14)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(11)、(12)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为前3位的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒。

含有以下核酸组制成的基因型检测用试剂盒：

设计为对包含载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的核酸组，该核酸组包含：在4070位碱基为C的载脂蛋白E基因上与包含4070位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物和/或在4070位碱基为T的载脂蛋白E基因上与包含4070位碱基的部分DNA区特异性杂交的有义引物、和与载脂蛋白E基因的部分区特异性杂交的反义引物.

(1)该核酸组含有如下核酸：在1019位碱基为C的连接蛋白37基因的反义链上与包含1019位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在1019位碱基为T的连接蛋白37基因的反义链上与包含1019位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与连接蛋白37基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含连接蛋白37基因的1019位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(2)该核酸组含有如下核酸：在-863位碱基为C的肿瘤坏死因子α基因的有义链上与包含-863位碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在-863位碱基为A的肿瘤坏死因子α基因的有义链上与包含-863位碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与肿瘤坏死因子α基因的反义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含肿瘤坏死因子α基因的-863位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(3)该核酸组含有如下核酸：在242位碱基为C的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的有义链上与包含242位碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在242位碱基为T的NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的有义链上与包含242位碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与NADH/NADPH氧化酶p22phox基因的反义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因的242位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(4)该核酸组含有如下核酸：在-6位碱基为G的血管紧张肽原基因的有义链上与包含-6位碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在-6位碱基为A的血管紧张肽原基因的有义链上与包含-6位碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与血管紧张肽原基因的反义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含血管紧张肽原基因的-6位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(5)该核酸组含有如下核酸：在-219位碱基为G的载脂蛋白E基因的反义链上与包含-219位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在-219位碱基为T的载脂蛋白E基因的反义链上与包含-219位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与载脂蛋白E基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含载脂蛋白B基因的-219位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(6)该核酸组含有如下核酸：在994位碱基为G的血小板活化因子乙酰水解酶基因的反义链上与包含994位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在994位碱基为T的血小板活化因子乙酰水解酶基因的反义链上与包含994位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与血小板活化因子乙酰水解酶基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含血小板活化因子乙酰水解酶基因的994位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(7)该核酸组含有如下核酸：在-482位碱基为C的载脂蛋白C-III基因的反义链上与包含-482位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交的第1核酸、在-482位碱基为T的载脂蛋白C-III基因的反义链上，与包含-482位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交的第2核酸、以及与载脂蛋白C-III基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含载脂蛋白C-III基因的-482位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸、与使用上述第1核酸和上述第3核酸进行扩增得到的核酸特异性杂交的第4核酸、和与使用上述第2核酸和上述第3核酸进行扩增得到的核酸特异性杂交的第5核酸；

(8)该核酸组含有如下核酸：在1186位碱基为G的血小板反应蛋白4基因的反义链上与包含1186位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在1186位碱基为C的血小板反应蛋白4基因的反义链上与包含1186位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与血小板反应蛋白4基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含血小板反应蛋白4基因的1186位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(9)该核酸组含有如下核酸：在-819位碱基为T的白细胞介素10基因的反义链上与包含-819位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交的第1核酸、在-819位碱基为C的白细胞介素10基因的反义链上与包含-819位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交的第2核酸、以及与白细胞介素10基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含白细胞介素10基因的-819位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸、与使用上述第1核酸和上述第3核酸进行扩增得到的核酸特异性杂交的第4核酸、和与使用上述第2核酸和上述第3核酸进行扩增得到的核酸特异性杂交的第5核酸；

(10)该核酸组含有如下核酸：在-592位碱基为A的白细胞介素10基因的有义链上与包含-592位碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在-592位碱基为C的白细胞介素10基因的有义链上与包含-592位碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与白细胞介素10基因的反义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含白细胞介素10基因的-592位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸。

以上，可以从(1)-(10)中选择两种以上的核酸组构成试剂盒，也可以任意选择(1)-(10)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸组构成试剂盒.例如可以从(1)、(5)、(6)、(8)、(9)和(10)的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(1)、(5)、(6)、(8)和(9)的组(后述的实施例中让步比为前5位的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒.

(11)该核酸组含有如下核酸：在由-1171位沿3’方向A连续存在5个的溶基质素1基因的反义链上与包含该序列部分所对应的序列的部分区特异性杂交且用第1标记物标记的第1核酸、在由-1171位沿3’方向A连续存在6个的溶基质素1基因的反义链上与包含该序列部分所对应的序列的部分区特异性杂交且用第2标记物标记的第2核酸、以及与溶基质素1基因的有义链的部分区特异性杂交，且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含溶基质素1基因-1171位的多态部分的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(12)该核酸组含有如下核酸：设计为对包含纤溶酶原活化因子抑制剂1基因-668位的多态部分的部分DNA区进行特异性扩增的一组核酸(第1核酸和第2核酸)、以由-668位沿3’方向G连续存在4个的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因为模板，且使用上述一组核酸进行扩增，与扩增所得核酸特异性杂交的第3核酸、以及以由-668位沿3’方向G连续存在5个的纤溶酶原活化因子抑制剂1基因为模板，且使用上述一组核酸进行扩增，与扩增所得核酸特异性杂交的第4核酸；

(13)该核酸组含有如下核酸：在1018位碱基为C的糖蛋白Ibα基因的反义链上与包含1018位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在1018位碱基为T的糖蛋白Ibα基因的反义链上与包含1018位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与糖蛋白Ibα基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含糖蛋白Ibα基因的1018位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；

(14)该核酸组含有如下核酸：在584位碱基为G的对氧磷酶基因的反义链上与包含584位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在584位碱基为A的对氧磷酶基因的反义链上与包含584位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与对氧磷酶基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含对氧磷酶基因的584位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸；以及

(15)该核酸组含有如下核酸：在4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的反义链上与包含4070位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的反义链上与包含4070位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与载脂蛋白E基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸.

以上，可以从(11)-(15)中选择两种以上的核酸组构成试剂盒，也可以任意选择(11)-(15)的两种以上形成组，从所述组中选择两种以上的核酸组构成试剂盒.例如可以从(11)、(12)、(14)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为1以上的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒，也可以从(11)、(12)和(15)形成的组(后述的实施例中让步比为前3位的用于分析多态的核酸组)选择两种以上核酸组构成试剂盒.

含有以下核酸组制成的基因型检测用试剂盒：

核酸组包含下述核酸：在4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的反义链中与包含4070位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第1标记物标记的第1核酸、在4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的反义链上与包含4070位碱基所对应的碱基的部分区特异性杂交且由第2标记物标记的第2核酸、以及与载脂蛋白E基因的有义链的部分区特异性杂交且与上述第1核酸/或上述第2核酸同时使用，可对包含载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区进行特异性扩增的第3核酸。

在以上试剂盒中，可以将与试剂盒的使用方法相对应的一种或两种以上的试剂(缓冲液、反应用试剂、检测用试剂等)等组合。

以下通过实施例更具体地说明本发明.

<实施例1>基因多态的选择

使用PubMed[National Center for Biological Information(NCBI)]、Online Mend elian inheritance in Men(NCBI)、单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism(NCBI))等多种公开数据库，综合考虑血管生物学、血小板·白细胞生物学、凝血纤溶体系、脂质·糖·其他代谢因素等方面，从目前为止已报告的基因中筛选推断与冠状动脉硬化、冠状动脉痉挛、高血压、糖尿病、高血脂症等相关的71种基因.而且，在这些基因中存在的多态中，以存在于启动子区、外显子中的、或位于剪接供体位点或接受位点、推断与基因产物的机能变化相关的多态为中心，选择了112个多态(图1和图2).

<实施例2>基因多态的确定

对象为5061例日本男性女性(男性3309例、女性1752例)，是1994年7月至2001年12月期间15间实验机构的门诊或住院的病例.心肌梗塞为2819例(男性2003例、女性816例)，所有病例都进行了冠状动脉造影术和左心室造影术.通过典型的心电图变化和血清CK、GOT、LDH的升高来进行心肌梗塞的诊断.而且，通过左心室造影显示左心室壁运动异常以及与其对应的左主动脉或主要冠状动脉狭窄来对心肌梗塞进行确诊.

对照为2242例(男性1306例、女性936例)，是在实验机构受诊、具有传统的冠状动脉疾病的危险因子，即具有吸烟(每天10支以上)、肥胖(体重指数≥26kg/m²)、高血压(收缩压≥140mmHg或舒张压≥90mmHg或两者兼具)、糖尿病(空腹时血糖≥126mg/dL或血红蛋白Alc≥6.5％或两者兼具)、高脂血症(血清总胆固醇≥220mg/dL)、高尿酸血症(男性血清尿酸≥7.7mg/dL、女性血清尿酸≥5.5mg/dL)中至少一项但没有冠状动脉疾病的病例。这些对照的安静时心电图正常，在运动负荷试验中也未见心肌缺血性变化。

由每个对象采集7mL静脉血，装入含有50mmol/L EDTA-2Na的管中，用DNA提取试剂盒(Qiagen，Chatsworth，CA)提取基因组DNA.由根据荧光、发光法制造的等位基因特异性引物·探针测定系统(东洋纺ジ-ンアナリシス、敦贺、日本)进行71种候选基因的112个多态的确定(图3和图4).使用5’末端用异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate：FITC)或德克萨斯红(Texas red：TxR)标记的两种等位基因特异性有义引物(或反义引物)和用生物素标记5’末端的反义引物(或有义引物)，通过聚合酶链反应(PCR)对含有多态位点的DNA片段进行扩增.另外，作为其它方法，使用两种等位基因特异性有义引物和用生物素标记5’末端的反义引物，或使用有义引物和用生物素标记5’末端的反义引物，通过PCR对含有多态位点的DNA片段进行扩增.反应溶液(25μl)中含有20ng DNA、5pmol各引物、0.2mmol/L各脱氧核苷三磷酸(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)、1-4mmol/LMgCl₂、1U DNA聚合酶(rTaq或KODplus；东洋纺、大阪、日本)，以及使用各自DNA聚合酶缓冲液.扩增方法：预变性为95℃、5分钟，然后以35-45个循环进行95℃、30分钟的变性，退火为55-67.5℃、30秒，延伸为72℃、30秒，最终延伸为72℃、2分钟。

在通过荧光法确定基因型的过程中，将扩增的DNA铺于96孔板的各孔中，在含有结合了链霉菌抗生物素蛋白的磁珠的溶液中、在室温下孵育。将该板置于磁架上，由各孔收集上清液，移入含有0.01MNaOH的96孔板的各孔中，然后通过微量反应板读数器，FITC采用485和538nm的激发·荧光波长，TxR采用584和612nm的激发·荧光波长来测定荧光。另外，在通过发光法确定基因型的过程中，将扩增的DNA用0.3M NaOH进行变性，用固定于96孔板各孔底的任意一种等位基因特异性补足探针和含有35-40％甲酰胺的杂交缓冲液在37℃杂交30分钟.充分洗涤孔，然后向各孔中加入结合了碱性磷酸酶的链霉菌抗生物素蛋白，将板在37℃振荡15分钟.再次洗涤孔，加入含有0.8mM 2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二硫代苯基)-2H-四唑翁(一钠盐)和0.4mM 5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸对甲苯胺盐的溶液，然后测定450nm吸光度。

为了确认由以上方法确定基因型的精度，随机选取50人的DNA样品，进行PCR-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)法或PCR产物的碱基序列直接确定法.所有的样品中，由等位基因特异性引物·探针测定系统确定的基因型与由PCR-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)法或DNA碱基序列确定法确定的基因型相同.

以下的相关分析中的统计分析如下进行。首先，数据以平均±标准偏差表示.临床数据使用unpaired Student′s t test或Mann-Whitney U test在心肌梗塞患者和对照之间进行比较.3组之间的数据通过one-way analysis of variance或Kruskal-Wallis test以及Scheffe′s post-hoc test进行比较。定性数据通过chi-square test进行检定。等位基因频率通过gene counting method进行推断，通过chi-square test来检定是否脱离哈迪温伯格平衡(Hardy-Weinbergequilibrium).另外，还进行了补正危险因子的多因素逻辑回归分析.作为心肌梗塞的从属因子，以年龄、体重指数(BMI)、吸烟状况(0＝不吸烟、1＝吸烟)、代谢因素(0＝无高血压、糖尿病、高胆固醇血症、高尿酸血症病史、1＝有病史)、各多态的基因型作为独立因子.各基因型用显性(优势)、隐性(劣势)、加性(附加)遗传模型进行分析，计算P值、让步比、95％可信区间(CI).在组合基因型的分析中，通过逻辑回归分析的逐步顺向选择回归法计算各基因型的让步比.

<实施例3>心肌梗塞相关多态的选择和心肌梗塞诊断方法的开发

首先，对451例男性(心肌梗塞219例、对照232例)、458例女性(心肌梗塞226例、对照232例)进行关于71种基因112个多态的筛选相关分析.这些病例是从全部5061例中随机选出的.

通过以上方法进行筛选相关分析的909例(男性451例、女性458例)的背景数据如图5所示.男性中，对于年龄、BMI和传统冠状动脉疾病的危险因子——吸烟、高血压、糖尿病、高胆固醇血症、高尿酸血症等的频率，心肌梗塞组和对照组之间未见显著差异.女性中，对于年龄、BMI和高血压、高胆固醇血症、高尿酸血症等的频率，心肌梗塞组和对照组之间未见显著差异，但关于吸烟和糖尿病的频率，心肌梗塞组的值显著高于对照组。在对112个多态和心肌梗塞的筛选相关分析中，通过对年龄、BMI和吸烟、高血压、糖尿病、高胆固醇血症、高尿酸血症的频率进行补正的多因素逻辑回归分析，男性中19个、女性中18个的单碱基多态(SNP)显示了与心肌梗塞的相关性(图6)。另外，在筛选相关分析中，采用了逻辑回归分析中，P值<0.1时使用有相关性的类.这些SNP中，4个SNP与男女双方的心肌梗塞相关，其它SNP与男女其中一方的心肌梗塞相关.

接着，对余下的4152例(男性心肌梗塞1784例、男性对照1074例、女性心肌梗塞590例、女性对照704例)确定这些多态的基因型。然后在合计5061例(男性心肌梗塞2003例、男性对照1306例、女性心肌梗塞816例、女性对照936例)中进行关于这些多态与心肌梗塞的相关性的大规模相关性分析。

大规模相关性分析中的全部5061例(男性3309、女性1752例)的背景数据如图7所示。男性中，对于年龄、BMI和吸烟的频率，在心肌梗塞组与对照组之间未见显著差异，但关于高血压、高尿酸血症，心肌梗塞组显著低于对照组；关于糖尿病和高胆固醇血症的频率，心肌梗塞组显著高于对照组。女性中，关于年龄和高血压的频率，心肌梗塞组和对照组之间未见显著差异，但关于BMI和吸烟、糖尿病、高胆固醇血症、高尿酸血症的频率，心肌梗塞组显著高于对照组.在男性19SNP、女性18SNP与心肌梗塞的大规模相关性分析中，通过对年龄、BMI和吸烟、高血压、糖尿病、高胆固醇血症、高尿酸血症的频率进行补正的多因素逻辑回归分析，男性10个、女性5个SNP显示了与心肌梗塞的显著相关性(显性或隐性遗传模型均为P<0.05)(图8)。这些SNP的基因型的分布和逻辑回归分析的结果分别表示在图8和图9中.

本实施例中进行了多因素逻辑回归分析的逐步顺向选择回归法(图10)。该方法中，根据图9所示的各SNP与心肌梗塞的相关性中的P值，分别采用显性或隐性遗传模型。这些基因在染色体上的基因座如图10所示.白细胞介素10(interleukin-10)基因的-819T→C多态和-592A→C多态存在连锁不平衡[成对连锁不平衡系数(pairwiselinkage disequilibrium coefficient)，D’(D/Dmax)为0.406；标准连锁不平衡系数(standardized linkage disequilibriumcoefficient)，r，为0.396；P<0.0001，chi-square test].肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α)基因和血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-activating factor acetylhydrolase)基因的基因座接近，但两者的多态的基因型分布未见相关性.同样，纤溶酶原活化因子抑制剂1(plasminogen activator inhibitor-1)基因和对氧磷酶基因的基因座接近，但两者的多态的基因型分布未见相关性.

关于通过由逐步顺向选择回归法计算的组合基因型得出的罹患心肌梗塞的让步比，男性的如图11和图13(A)所示，女性如图12和图13(B)所示.男性中，通过5个SNP(TSP4(1186G→C)多态、连接蛋白37(1019C→T)多态、PAF乙酰水解酶(994G→T)多态、血管紧张肽原(-6G→A)多态、肿瘤坏死因子α(-863C→A)多态)的组合基因型，最大让步比为4.50(参照图11、图13(A)).再加上5个SNP(NADH/NADPH氧化酶p22 phox(242C→T)多态、ApoE(-219G→T)多态、ApoC-III(-482C→T)多态、IL-10(-819T→C)多态、IL-10(-592A→C)多态)全部为10个SNP时，最大让步比为11.26(参照图10和图13(A)).女性中，通过5个SNP(ApoE(4070C→T)多态、糖蛋白Ibα(1018C→T)多态、溶基质素1(-1171/5A→6A)多态、PAI1(-668/4G→5G)多态、对氧磷酶(584G→A)多态)的组合基因型，最大让步比为88.51(参照图12和图13(B))。

如上所述，本发明人对于由71种候选基因中选择的112个多态与心肌梗塞的相关性进行了研究，通过5061例的大规模相关性分析，在男性中鉴定了10个、在女性中鉴定出5个与心肌梗塞相关的SNP。而且，开发了心肌梗塞风险的诊断方法(心肌梗塞遗传性风险的诊断系统)，该方法通过多因素逻辑回归分析的逐步顺向选择回归法，在男性中显示11.26的最大让步比、女性中显示88.51的最大让步比.

心肌梗塞的主要原因是动脉硬化性冠状动脉疾病，由此产生动脉内径的血流力学性显著狭窄，招致血管收缩舒张调节的异常，容易引起动脉硬化灶的破裂、血栓形成.本发明人根据血管生物学、血小板和白细胞生物学、凝血和纤溶系、脂质、糖和其他代谢因素等综合角度的考虑，筛选了71种候选基因.实际上与心肌梗塞相关的基因组在其发病病态中起着各种作用。即，血管生物学(连接蛋白37、NADH/NADPH氧化酶p22 phox和血小板反应蛋白4)、血管炎症(肿瘤坏死因子-α、血小板活化因子乙酰水解酶和白细胞介素-10)、高血压(血管紧张肽原)、脂质代谢(载脂蛋白E、载脂蛋白C-III和对氧磷酶)、血小板机能(糖蛋白Ibα)、基质代谢(溶基质素1)、纤溶系(PAI-1)等(Boerma M，Forsberg L，van Zei j1 L，et al.A genetic polymorphismin connexin 37 as a prognostic marker for atherosclerotic plaquedevelopment.J Intern Med 1999；246：211-218.、Inoue N，KawashimaS，Kanazawa K，Yamada S，Akita H，Yokoyama M.Polymorphism ofthe NADH/NADPH oxidase p22 phox gene in patients with coronaryartery disease.Circulation 1998；97：135-137.、Topol EJ，McCarthyJ，Gabriel S，et al.Single nucleotide polymorphisms in multiplenovel thrombospondin genes may be associated with familialpremature myocardial infarction.Circulation 2001；104：2641-2644.、Skoog T，van′t Hooft FM，Kallin B，et al.A common functionalpolymorphism(C→A substitution at position-863)in the promoterregion of the tumor necrosis factor-α(TNF-α)gene associatedwith reduced circulating level of TNF-α.Hum Mol Genet 1999；8：1443-1449.、Yamada Y，Ichihara S，Fujimura T，Yokota M.Identification of the G⁹⁹⁴→T missense mutation in exon 9 of theplasma platelet-activating factor acetylhydrolase gene as anindependent risk factor for coronary artery disease in Japanesemen.Metabolism 1998；47：177-181.、Koch W，Kastrati A，BottigerC，Mehilli J，von Beckerath N，Schomig A.Interleukin-10 and tumornecrosis factor gene polymorphisms and risk of coronary arterydisease and myocardial infarction.Atherosclerosis 2001；159：137-144.、Inoue I，Nakajima T，Williams CS，et al.A nucleotidesubstitution in the promoter of human angiotensinogen isassociated with essential hypertension and affects basaltranscription in vitro.J Clin Invest 1997；99：1786-1797.、Lambert J-C，Brousseau T，Defosse V，et al.Independentassociation of an APOE gene promoter polymorphism with increasedrisk of myocardial infarction and decreased APOE plasmaconcentreations-the ECTIM study.Hum Mol Genet 2000；9：57-61.、Eto M，Watanabe K，Makino I.Increased frequency of apolipoproteinepsilon 2 and epsilon 4 alleles in patients with ischemic heartdisease.Clin Genet 1989；36：183-188.、Ruiz J，Blanche H，JamesRW，et al.Gln-Arg192 polymorphism of paraoxonase and coronaryheart disease in type 2 diabetes.Lancet 1995；346：869-72.、Murata M，Matsubara Y，Kawano K，et al.Coronary artery di seaseand polymorphisms in a receptor mediating shear stress-dependentplatelet activation.Circulation 1997；96：3281-3286.、ErikssonP，Kallin B，van′t Hooft FM，Bavenholm P，Hamsten A.Allele-specific increase in basal transcription of the plasminogen-activator inhibitor 1 gene is associated with myocardialinfarction.Proc Natl Acad Sci USA 1995；92：1851-1855.、Ye S，Watts GF，Mandalia S，Humphries SE，Henney AM.Preliminary report：genetic variation in the human stromelysin promoteri sassociated with progression of coronary atyherosclerosis.BrHeart J 1995；73：209-215.).本发明人在909例中对112个基因多态进行了研究，并在2858例男性中研究了19个SNP，在1294例女性中研究了18个SNP，结果共确定了179，402个基因型.该确定的基因型数目是目前为止所报告的基因多态相关性分析中最多的.以上实施例所示的心肌梗塞风险的诊断方法最大让步比男性显示11.26，女性显示88.51，是迄今为止所报告的大规模相关性分析中最大的让步比.

与心肌梗塞相关的15个SNP中，载脂蛋白E基因的4070T→C(Arg158Cys)多态作为女性心肌梗塞风险，显示了最大让步比.载脂蛋白E是乳糜微粒和超低密度脂蛋白(VLDL)残留的主要构成成分，通过肝脏中的受体摄取这些脂蛋白时，作为配体发挥作用(Mahley RW.Apolipoprotein E：cholesterol transport protein with expandingrole in cell biology.Science 1998；240：622-630.)。载脂蛋白E基因的158Cys(ε2)等位基因导致残留脂蛋白与肝脏受体的结合异常(Schneider WJ，Kovanen PT，Brown MS，等人.Familialdysbetalipoproteinemia.Abmormal binding of mutantapolipoprotein E to low density lipoprotein receptors of humanfibroblasts and membranes from liver and adrenal of rats，rabbits，and cows.J Clin invest 1981；68：1075-1085.)，延迟了由血浆的排出(Gregg RE，Zech LA，Schaefer EJ，Brewer HB Jr.Type III hyperlipoproteinemia：defective metabolism of anabnormal apolipoprotein E.Science 1981；211：584-586.).大多数家族性β脂蛋白障碍症(FD，或III型高脂蛋白血症)患者的Arg158Cys多态都为同源接合体(Breslow JL，Zannis VI，SanGiacomoTR，Third JL，Tracy T，Glueck CJ.Studies of familial type IIIhyperlipoproteinemia using as a genetic marker the apo Ephenotype E2/2.J Lipid Res 1982；23：1224-1235.).但是，158Cys/Cys同源接合体中，只有1-4％的家族性β脂蛋白障碍症发病，由此可认为其他遗传因素或环境因素对于本疾病的发病也是必需的.认为家族性β脂蛋白障碍症患者中，动脉硬化性残留脂蛋白(β-VLDL)在血浆中蓄积(Mahley RW.Apolipoprotein E：cholestero ltransportprotein with expandingrole in cell biology.Science 1998；240：622-630.)或过量表达人158Cys/Cys的小鼠(Sullivan PM，MezdourH，Quarfordt SH，Maeda N.Type III hyperlipoproteinmia andspontaneous atherosclerosis in mice resulting from genereplacement of mouse Apoe with human APOE*2.J Clin Invest 1998；102：130-135.)促进了动脉硬化的发展。Eto等人报告：ε2(158Cys)等位基因在日本男性(让步比为2.44，ε2等位基因对ε3/ε3型)和女性(让步比为3.03)中与冠状动脉疾病相关(Eto M，Watanabe K，MakinoI.Increased frequency of apolipoprotein epsilon 2 and epsilon4 alleles in patients with ischemic heart disease.Clin Genet1989；36：183-188.)。本发明人得到的结果是TT型(158Cy/Cys)是罹患心肌梗塞的危险因子，这与Eto等人的结果一致.

以上的实施例中研究的几个SNP有可能与存在于其附近的与心肌梗塞发病确实相关的基因的SNP存在连锁不平衡.不过仍然显示了男性的9个、女性的5个基因是日本人心肌梗塞易感基因座.并且通过组合基因型，可以进行可靠性和预测概率高的风险诊断.由此，本发明的诊断方法期待可以对心肌梗塞的初级预防和中老年人生活质量的改善以及医疗费的削减做出贡献.

本发明并不受上述发明的实施方案和实施例的说明的任何限制.只要不脱离权利要求的范围，在本领域人员容易联想到的范围内的各种变形方案也包括在本发明之内.

以下公开如下事项.

11.检测核酸试样的基因型的方法，该方法包含以下步骤(a1)：

(a1)对核酸试样的以下(1)-(10)的多态进行分析的步骤

(1)连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态、

(2)肿瘤坏死因子α基因中碱基编号-863位的多态、

(3)NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因中碱基编号242位的多态、

(4)血管紧张肽原基因中碱基编号-6位的多态、

(5)载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态、

(6)血小板活化因子乙酰水解酶基因中碱基编号994位的多态、

(7)载脂蛋白C-III基因中碱基编号-482位的多态、

(8)血小板反应蛋白4基因中碱基编号1186位的多态、

(9)白细胞介素10基因中碱基编号-819位的多态、和

(10)白细胞介素10基因中碱基编号-592位的多态.

12.检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(b1)：

(b1)对核酸试样的以下(11)-(15)的多态进行分析的步骤

(11)溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态、

(12)纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中碱基编号-668位的多态、

(13)糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态、

(14)对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态、以及

(15)载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态.

13.心肌梗塞风险的诊断方法，该方法包括以下步骤(I)-(III)：

(I)对核酸试样的以下(1)-(10)的多态进行分析的步骤

(1)连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态、

(2)肿瘤坏死因子α基因中碱基编号-863位的多态、

(3)NADH/NADPH氧化酶p22 phox基因中碱基编号242位的多态、

(4)血管紧张肽原基因中碱基编号-6位的多态、

(5)载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态、

(6)血小板活化因子乙酰水解酶基因中碱基编号994位的多态、

(7)载脂蛋白C-III基因中碱基编号-482位的多态、

(8)血小板反应蛋白4基因中碱基编号1186位的多态、

(9)白细胞介素10基因中碱基编号-819位的多态、和

(10)白细胞介素10基因中碱基编号-592位的多态；

(II)由上述步骤得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤；以及

(III)由确定的基因型求出心肌梗塞的遗传性风险的步骤。

14.心肌梗塞风险的诊断方法，该方法包括以下步骤(IV)-(VI)：

(IV)对核酸试样的以下(11)-(15)的多态进行分析的步骤

(11)溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态、

(12)纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中碱基编号-668位的多态、

(13)糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态、

(14)对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态、以及

(15)载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态；

(V)由上述步骤得到的多态信息确定核酸试样的基因型的步骤；以及

(VI)由确定的基因型求出心肌梗塞的遗传性风险的步骤.

工业实用性

根据本发明，可以对于心肌梗塞相关的基因多态进行分析，检测核酸试样的基因型.使用通过检测该基因型而得到的多态信息，可以进行高精度、预测概率高的心肌梗塞风险的诊断.因此，本发明是预先获知心肌梗塞发病危险的有效手段.另外，根据本发明，可以获得对这些疾病的诊断有用的辅助信息，可以采取更适当的治疗，实现预后的改善等。本发明还可提供对阐明心肌梗塞发病机理方面有效的信息，有望对心肌梗塞的预防、治疗做出贡献。

序列表

<110>财团法人名古屋产业科学研究所

财团法人岐阜县国际生物研究所

山田芳司

横田充弘

<120>心肌梗塞风险的诊断方法

<130>C0200201

<150>JP P2002-181580

<151>2002-06-21

<160>64

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

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<223>人工序列的描述：探针

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<223>人工序列的描述：探针

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列的描述：探针

<400>64

Claims

1.检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(a)：

(1)连接蛋白37基因中碱基编号1019位的多态、

(2)肿瘤坏死因子α基因中碱基编号-863位的多态、

(3)NADH/NADPH氧化酶p22phox基因中碱基编号242位的多态、

(4)血管紧张肽原基因中碱基编号-6位的多态、

(5)载脂蛋白E基因中碱基编号-219位的多态、

(6)血小板活化因子乙酰水解酶基因中碱基编号994位的多态、

(7)载脂蛋白C-III基因中碱基编号-482位的多态、

(8)血小板反应蛋白4基因中碱基编号1186位的多态、

(9)白细胞介素10基因中碱基编号-819位的多态、和

(10)白细胞介素10基因中碱基编号-592位的多态。

2.检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(b)：

(11)溶基质素1基因中碱基编号-1171位的多态、

(12)纤溶酶原活化因子抑制剂1基因中碱基编号-668位的多态、

(13)糖蛋白Ibα基因中碱基编号1018位的多态、

(14)对氧磷酶基因中碱基编号584位的多态、

(15)载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态。

3.检测核酸试样的基因型的方法，该方法包括以下步骤(c)：

(c)对核酸试样的载脂蛋白E基因中碱基编号4070位的多态进行分析的步骤。

4.基因型检测用试剂盒，该试剂盒包含两种以上选自以下(1)-(10)的核酸：

(3)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含242位碱基为C的NADH/NADPH氧化酶p22phox基因的242位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含242位碱基为T的肿瘤坏死因子α基因的242位碱基、

(9)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-819位碱基为T的白细胞介素10基因的-819位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-819位碱基为C的白细胞介素10基因的-819位碱基、和

(10)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-592位碱基为A的白细胞介素10基因的-592位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含-592位碱基为C的白细胞介素10基因的-592位碱基。

5.基因型检测用试剂盒，该试剂盒包含两种以上选自以下(11)-(15)的核酸：

(15)具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的4070位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的4070位碱基。

6.基因型检测用试剂盒，该试剂盒包含以下核酸：

具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的4070位碱基；或者具有与部分DNA区互补的序列的核酸，其中所述部分DNA区包含4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的4070位碱基。

7.固定化核酸，该固定化核酸是将两种以上选自以下(1)-(10)的核酸固定于不溶性支持物上而成：

8.固定化核酸，该固定化核酸是将两种以上选自以下(11)-(15)的核酸固定于不溶性支持物上而成：

9.固定化核酸，该固定化核酸是将具有与含4070位碱基为C的载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区互补的序列的核酸；或者将具有与含4070位碱基为T的载脂蛋白E基因的4070位碱基的部分DNA区互补的序列的核酸固定于不溶性支持物上而成。