CN100464631C - 一种薇菜组织培养的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种薇菜组织培养的方法，它通过薇菜的茎尖做为外植体，经诱导原球茎培养、扩繁培养、生根培养和炼苗移栽的步骤，对薇菜的茎尖进行组培，该方法简单实用，克服了薇菜孢子萌发组培受季节限制的缺点，实现了薇菜组培途径的多样化，能在短期内生产出大量薇菜组培苗，满足工厂化生产的需求。
Description
技术领域
本发明涉及一种蕨类植物组织培养的方法，特别是一种薇菜组织培养的方法。
背景技术
薇菜是一种生长在山林中的纯天然、无污染绿色保健食品，因富含蛋白质、铁、钙、硒等17种人体所需的营养成分，加上具有独特的清脆爽口的特点，深受日本、韩国及东南亚等国客户的喜爱，被誉为“林海山珍”。薇菜因常规分株繁殖较慢，故目前均采用组织培养的方法进行繁殖。韩敬、赵莉在其文章《蕨类植物繁殖研究进展》(安徽农业科学2005Vol.33No.7 P.1261-1263)中指出各种蕨类植物的组织培养主要是孢子无菌萌发，即将孢子表面消毒后均匀涂布于培养基上，于恒温恒湿条件下进行无菌培养，待其萌发后经常规组培扩繁得到大量生根苗，然后炼苗移栽。目前国内薇菜组培均采用孢子无菌萌发，也有直接在温室基质中播种孢子萌发成苗的，但通过孢子萌发组培受季切的限制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种薇菜组织培养的方法，它克服了现有技术中通过孢子萌发组培受季节限制的缺点，通过薇菜的茎尖做为外植体进行组培，实现了薇菜组培途径的多样化。
本发明的目的是这样实现的：一种薇菜组织培养的方法，它包括下列步骤：
a、外植体消毒：将薇菜展开叶片及根全部去掉，仅留幼嫩茎尖，用清水冲洗干净，在超净工作台上用0.1％升汞消毒液消毒5分钟—20分钟，然后用无菌水冲洗干净备用；
b、诱导原球茎培养：将a步骤消毒好的薇菜茎尖插于诱导培养基中，于20℃—27℃温度下避光培养3天—7天后光照培养，光照强度由弱渐强，培养20天—40天即可在嫩叶上形成大量原球茎，以一升培养基用量，诱导培养基配方为
MS 250毫升—4000毫升
激动素 0.5毫克—4毫克
3—吲哚丁酸 0.5毫克—4毫克
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克
活性炭 1000毫克—3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克；
以一升培养基用量，诱导培养基的配方还可为
MS 250毫升—4000毫升
6—苄氨基嘌呤 0.5毫克—4毫克
3—吲哚丁酸 0.5毫克—4毫克
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克
活性炭 1000毫克—3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克；
c、扩繁培养：b步骤生成的原球茎继续培养30天—40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基中继代培养25天—35天为一个周期，如此循环培养即可得大量组培苗，以一升培养基用量，继代培养基配方为
MS 250毫升—4000毫升
激动素 0.5毫克—4毫克
3—吲哚丁酸 0.1毫克—4毫克
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克
活性炭 1000毫克—3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克；
以一升培养基用量，继代培养基的配方还可为
MS 250毫升—4000毫升
6—苄氨基嘌呤 0.5毫克—4毫克
3—吲哚丁酸 0.1毫克—4毫克
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克
活性炭 1000毫克—3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克。
d、生根培养：c步骤扩繁培养所得的组培苗转入生根培养基中培养，30天后能形成孢子体，再继续培养30天即可形成羽状叶并长出数条根须，以一升培养基用量，生根培养基的配方为
MS 250毫升—4000毫升
激动素 0.5毫克—4毫克
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克
活性炭 1000毫克—3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克；
e、炼苗移栽：将d步骤已生根的组培苗瓶放到大棚中摆放3天—7天，然后取出组培苗，洗净培养基后栽入基质中，控制环境温度在20℃，湿度在90％，遮荫并逐步增加光照，15天后即可按常规种苗进行管理。
本发明是利用植物细胞的全能性采取适当的外植体，再配以合适的激素配比，即可于短期内扩繁出大量薇菜组培苗。与孢子无菌萌发组培相比，本发明优点在于：提供了一条全新的薇菜组培途径，同时对其它蕨类植物的组培具有借鉴参考价值；突破了孢子组培的季节性限制，可一年四季采集外植体进行组培。
具体实施方式
实施例一
薇菜组织培养的步骤如下：
1、将薇菜展开叶片及根全部去掉，仅留幼嫩茎尖，并用自来水冲洗干净。然后在超净工作台上用0.1％升汞消毒5-20分钟，最后用无菌水冲洗干净备用。
2、将消毒好的薇菜茎尖插于诱导培养基中，于20℃-27℃环境中避光培养3—7天后光照培养，强度由弱渐强。约20-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎。
以一升培养基用量，诱导培养基配方为：
MS 250毫升
激动素 0.5毫克
磷酸二氢钠 100毫克
活性炭 1000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
3、原球茎继续培养30天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基中进行继代培养，约25-35天一个周期。如此不断循环便可得到大量组培苗。
以一升培养基用量，继代培养基配方为
MS 250毫升
激动素 0.5毫克
3—吲哚丁酸 0.1毫克
磷酸二氢钠 100毫克
活性炭 1000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
4、获得所需数量的组培苗后转入生根培养基中培养，培养30天后就能形成孢子体，再经培养30天即可形成羽状叶并长出数条根须。以一升培养基用量，生根培养基配方为：
MS 250毫升
激动素 0.5毫克
磷酸二氢钠 100毫克
活性炭 1000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
5、将已生根的组培苗瓶搬到大棚中自然摆放3—7天，使组培苗逐渐适应环境的温差变化。然后自瓶中取出组培苗，洗净培养基后栽入基质中。移栽后的一周内应控制环境温度在20℃左右，湿度在90％左右，适当遮荫并逐步增强光照。15天后即可按常规种苗进行管理。
实施例二
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 2500毫升
激动素 2毫克
3—吲哚丁酸 2毫克
磷酸二氢钠 1000毫克
活性炭 2000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 2500毫升
激动素 2毫克
3—吲哚丁酸 2毫克
磷酸二氢钠 1000毫克
活性炭 2000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 2500毫升
激动素 2毫克
磷酸二氢钠 1000毫克
活性炭 2000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
实施例三
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 4000毫升
激动素 4毫克
3—吲哚丁酸 4毫克
磷酸二氢钠 2000毫克
活性炭 3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 4000毫升
激动素 4毫克
3—吲哚丁酸 4毫克
磷酸二氢钠 2000毫克
活性炭 3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 4000毫升
激动素 4毫克
磷酸二氢钠 2000毫克
活性炭 3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
实施例四
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 250毫升
6—苄氨基嘌呤 0.5毫克
3—吲哚丁酸 0.5毫克
磷酸二氢钠 100毫克
活性炭 1000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 250毫升
6—苄氨基嘌呤 0.5毫克
3—吲哚丁酸 0.1毫克
磷酸二氢钠 100毫克
活性炭 1000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 250毫升
激动素 0.5毫克
磷酸二氢钠 100毫克
活性炭 1000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
实施例五
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 2000毫升
6—苄氨基嘌呤 2毫克
3—吲哚丁酸 2毫克
磷酸二氢钠 1000毫克
活性炭 2000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 2000毫升
6—苄氨基嘌呤 2毫克
3—吲哚丁酸 1.5毫克
磷酸二氢钠 1000毫克
活性炭 2000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 2000毫升
激动素 2毫克
磷酸二氢钠 1000毫克
活性炭 2000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
实施例六
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 4000毫升
6—苄氨基嘌呤 4毫克
3—吲哚丁酸 4毫克
磷酸二氢钠 2000毫克
活性炭 3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 4000毫升
6—苄氨基嘌呤 4毫克
3—吲哚丁酸 4毫克
磷酸二氢钠 2000毫克
活性炭 3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS 4000毫升
激动素 4毫克
磷酸二氢钠 2000毫克
活性炭 3000毫克
蔗糖 30000毫克
琼脂 9000毫克
Claims (1)
1、一种薇菜组织培养的方法，其特征在于它包括下列步骤：
a、外植体消毒：将薇菜的展开叶片及根全部去掉，仅留幼嫩茎尖，用清水冲洗干净，在超净工作台上用0.1％升汞消毒液消毒5分钟—20分钟，然后用无菌水冲洗干净备用；
b、诱导原球茎培养：将a步骤消毒好的薇菜茎尖插于诱导培养基中，于20℃—27℃温度下避光培养3天—7天后光照培养，光照强度由弱渐强，培养20天—40天即在嫩叶上形成大量原球茎；
一升诱导培养基的配方为：
MS 250毫升—4000毫升、
激动素 0.5毫克—4毫克、
3—吲哚丁酸 0.5毫克—4毫克、
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克、
活性炭 1000毫克—3000毫克、
蔗糖 30000毫克和
琼脂 9000毫克；
或者一升诱导培养基的配方为：
MS 250毫升—4000毫升、
6—苄氨基嘌呤 0.5毫克—4毫克、
3—吲哚丁酸 0.5毫克—4毫克、
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克、
活性炭 1000毫克—3000毫克、
蔗糖 30000毫克和
琼脂 9000毫克；
c、扩繁培养：b步骤生成的原球茎继续培养30天—40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基中继代培养25天—35天为一个周期，如此循环培养即得大量组培苗；
一升继代培养基的配方为：
MS 250毫升—4000毫升、
激动素 0.5毫克—4毫克、
3—吲哚丁酸 0.1毫克—4毫克、
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克、
活性炭 1000毫克—3000毫克、
蔗糖 30000毫克和
琼脂 9000毫克；
或者一升继代培养基的配方为：
MS 250毫升—4000毫升、
6—苄氨基嘌呤 0.5毫克—4毫克、
3—吲哚丁酸 0.1毫克—4毫克、
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克、
活性炭 1000毫克—3000毫克、
蔗糖 30000毫克和
琼脂 9000毫克；
d、生根培养：c步骤扩繁培养所得的组培苗转入生根培养基中培养，30天后能形成孢子体，再继续培养30天即形成羽状叶并长出数条根须；
一升生根培养基的配方为：
MS 250毫升—4000毫升、
激动素 0.5毫克—4毫克、
磷酸二氢钠 100毫克—2000毫克、
活性炭 1000毫克—3000毫克、
蔗糖 30000毫克和
琼脂 9000毫克；
e、炼苗移栽：将d步骤已生根的组培苗瓶放到大棚中摆放3天—7天，然后取出组培苗，洗净培养基后栽入基质中，控制环境温度在20℃，湿度在90％，遮荫并逐步增加光照，15天后即按常规种苗进行管理。
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| 薇菜高产栽培技术. 何圣米，杨悦俭，李必元，徐明飞. 中国农学通报，第20卷第2期. 2004 * |
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