CN100453113C - 一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂，其主要包含莪术超临界提取物。本发明能有效抑制皮肤癌细胞增殖，具有显著的抗肿瘤效应，从而在治疗皮肤癌时疗效确切，使用方便，且无毒副作用。

Description

一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂

技术领域

本发明涉及一种中药外用透皮制剂，尤其涉及一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂。

背景技术

皮肤癌是指发生于皮肤的鳞状细胞癌和基底细胞癌，此外还有附件癌如汗腺癌，原位癌、黑色素瘤等。现代医学认为本病原因尚不清楚，可能与皮肤病和物理化学性刺激如紫外线、X射线等辐射有关。在中医临床中多属于“翻花”、石疔”、“黑疔”等范畴，为风毒燥热之邪久羁留恋，致肝血枯燥，皮生恶疮。治疗方法包括手术切除，放射以及激光和冷冻外科，化学药物静脉滴注、局部注射及局部敷贴等方法。

目前尚无治疗皮肤癌疗效确切、使用方便的中药外用透皮制剂。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂，该药物对治疗皮肤癌具有疗效确切，使用方便、无毒副作用的特点。

为解决上述技术问题，本发明一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂，主要包含莪术超临界提取物。

本发明选用符合中国2005版药典标准的莪术药材，莪术为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma Kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。后者习称“温莪术”。冬季茎叶枯萎后采挖，洗净，蒸或煮至透心，晒干或低温干燥后除去须根及杂质。具有行气破血，消积止痛之功效，用于徵瘕痞块，瘀血经闭，食积胀痛，早期宫颈癌。有文献报道：口服或腹腔注射莪术注射液对小鼠肉瘤-180有抑制作用，但口服对艾氏腹水癌则无效；莪术挥发油试管内抑制金黄色葡萄球菌，β-溶血性链球菌，大肠杆菌，伤寒杆菌，霍乱弧菌；对消化道的作用与生姜相似能直接兴奋胃肠道，偶有用于气脹性绞痛。莪术油对癌细胞有直接抑制、破坏作用，可增强机体对癌细胞的免疫性，诱发和促使宿主对肿瘤的免疫反应，从而促进肿瘤的消退。已有的药理研究提示莪术油具有抗肝癌作用，其机理可能与其抑制肝癌细胞DNA合成与增殖活动有关，还揭示莪术油抑制小鼠肝癌生长可能与抑制PCNA表达有关，可能是莪术油中多种抗癌成分复合作用的结果。

本发明的莪术超临界提取物由以下方法制得：将莪术药材粉碎成粗粉，经二氧化碳超临界萃取得到萃取物，其中萃取压力为19～25MPa，萃取温度35～50℃，萃取流速为1.2～4.8kg/m²·s，萃取时间为1～3小时。

本发明一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂可以由莪术超临界提取物直接与常规的基质制成，或者由所述莪术超临界提取物经过微囊化包裹后，形成纳囊，再与常规的基质一起制成。优选方案为将超临界提取物经过微囊化包裹后，再与常规的基质一起制成。

本发明一种治疗皮肤癌的中药外用透皮制剂可以是巴布剂、软膏剂、贴膏剂或凝胶剂。

本发明中药外用透皮制剂的用量和疗程可根据剂型、患者的年龄、疾病的轻重程度作适当调整，但一般为每日1次，每次1片或于患处均匀涂抹薄薄一层，以1个月为一个疗程，可连续使用2个疗程或更长时间。

本发明具有以下有益效果：经过药效学研究发现，本发明能有效抑制皮肤癌细胞增殖，具有显著的抗肿瘤效应，从而能有效治疗皮肤癌。本发明在治疗皮肤癌时疗效确切，使用方便，且无毒副作用。

具体实施方式

以下通过试验例对本发明的有益效果作进一步的阐述：

试验例：莪术超临界提取物(ZTO)及其纳囊抑制黑色素瘤B16BL细胞增殖作用

1材料

1.1试剂与药品

莪术超临界萃取物(ZTO)、ZTO纳囊乳液(Nanocap-ZTO-1-3)由上海中药制药技术有限公司提供，ZTO生药得率3.8％，批号：040707/040820。ZTO溶解于含有2％吐温80的生理盐水得ZTO乳液。

DMEM培养基(Dulbecco′s modified eagle medium)购自Gibco公司，含2.2mg/mLNaHCO₃、2.385mg/mL Hepes、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、100U/mL卡那霉素、5mg/L酚红，pH7.2；MTT[溴化-(4，5-二甲基-2-塞唑基)-2，5-二苯基四氮唑]购自Amresco公司，临用PBS液溶解；胰蛋白酶(trypsin)购自Serva公司，临用D-Hanks液溶解，含0.04％EDTA-2Na pH7.2；Hepes购自Sigma公司；新生牛血清(newborncalf serum，NCS)购自杭州四季青生物工程公司；二甲亚砜(dimethylsulphoxide，DMSO)，购自永华特种化学试剂厂；PBS液：8.00mg/mLNaCl、0.20mg/mL KCl、1.56mg/mL Na₂HPO4·H₂O、0.20mg/mLKH₂PO4；D-Hanks液：8.00mg/mL NaCl、0.40mg/mL KCl、0.06mg/mL Na₂HPO4·H₂O、0.06mg/mL KH₂PO4、0.35mg/mLNaHCO₃、Glucose 1.00mg/mL、20mg/L酚红。

1.2动物与细胞

雄性昆明小鼠，体重20±2g，由江苏省青龙山实验动物场提供，合格证号：SCXK苏-2002-0018。黑色素瘤B16BL细胞(属于皮肤癌)，由中国药科大学新药筛选中心提供。

1.3仪器

HERA细胞培养箱，美国Therma Elemental公司；XSZ-D倒置生物显微镜，重庆光学仪器厂；洁净工作台，苏净集团安泰公司；Z323K冷冻高速离心机，德国Hermle labor tecknik公司；Sunrise遥控酶标仪，奥地利Tecan GmbH公司。

1.4统计分析

应用EXCEL与NDST4.4统计软件进行统计，数据用x±s表示，比较组间差异行t或t’检验。

2试验方法

2.1ZTO与Nanocap-ZTO含药血清制备

雄性ICR小鼠，体重22±2g，随机分为五组：ZTO组与Nanocap-ZTO-1-3组，ZTO载药剂量均为30mg/kg，空白对照组。小鼠ig给予ZTO与Nanocap-ZTO-1-3乳液，给药量为20mL/kg体重，bid×3.5d，d4最后一次给药后1h，摘眼球取血，4℃下静置1-2h，4000rpm×10min离心二次，收集血清，0.22μm微孔滤膜正压过滤除菌，-20℃下冷冻备用。2.2ZTO与Nanocap-ZTO对B16BL细胞活力的影响

取对数生长期的B16BL细胞接种于96孔板中，用15％NCS DMEM培养液置37℃、5％CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后，换无血清DMEM培养液，设空白对照组6孔，ZTO与Nanocap-ZTO实验组均设1.0，10，100μg/mL 3个浓度，每浓度6孔。

培养44h后，在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中，加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔，继续培养4h后，小心吸取上清90μl，再加入DMSO50μl/孔，微型振荡器上振荡5min，波长570nm下Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值(A570)。抑制率(％)＝(1-A实/A对)×100％。NDST软件计算IC50。

表1ZTO与Nanocap-ZTO对B16BL细胞活力的影响(x±s，n＝6)

ap＜0.05 bp＜0.01 cp＜0.001相对于对照组；##p＜0.01相对于同浓度的ZTO

表1显示，100μg/mL ZTO与Nanocap-ZTO-1-3对B16BL细胞活力有显著抑制作用(p＜0.05-0.001)；与同浓度ZTO比较，Nanocap-ZTO-3抑制作用有显著性差异(p＜0.01)；IC50分别为Nanocap-ZTO-1342.67μg/mL、Nanocap-ZTO-2841.38μg/mL、Nanocap-ZTO-3149.86μg/mL与ZTO 342571.3μg/mL。

2.3ZTO与Nanocap-ZTO含药血清对B16BL细胞活力的影响

取对数生长期的B16BL细胞接种于96孔板中，用15％NCS DMEM培养液置37℃、5％CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后，换无血清DMEM培养液，设5％、10％与20％空白血清对照组，实验组设5％、10％与20％ZTO含药血清组和Nanocap-ZTO-1-3含药血清组。

培养48h后，在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中，加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔，继续培养4h后，小心吸取上清90μl，再加入DMSO50μl/孔，微型振荡器上振荡5min，Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值，波长570nm。

表2ZTO与Nanocap-ZTO含药血清对B16BL细胞活力的影响(x±s，n＝6)

ap＜0.05相对于对照组；#p＜0.05相对于ZTO

表2显示，与空白血清对照组比较，在5％、10％与20％实验浓度下，ZTO含药血清对B16BL细胞活力无抑制作用；而等载药剂量下，5％Nanocap-ZTO-1-3可不同程度抑制B16BL细胞活力，其中以Nanocap-ZTO-1作用显著(p＜0.05)；与ZTO含药血清组比较，Nanocap-ZTO-1-3含药血清可显著提高ZTO细胞毒性，其中以Nanocap-ZTO-1差异显著(p＜0.05)。

3结果

体外实验显示，ZTO及ZTO纳囊对黑色素瘤B16BL细胞均具有抗肿瘤效应，尤以Nanocap-ZTO-3效果明显。血清药理学研究发现，在ZTO含药血清不显示抗肿瘤作用实验浓度下，等ZTO剂量下的ZTO纳囊却显示出显著的抗肿瘤效应，其作用强度与纳囊尺寸可能有关。在抗黑色素瘤方面，ZTO纳囊更适宜于制成透皮给药系统直接给药。

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述：

实施例1：

莪术超临界萃取物的制备：

称取莪术粗粉8kg，置萃取器中，启动二氧化碳高压泵，通过背压阀和高压泵转速联合调节使萃取器的压力和二氧化碳的流量维持在设定参数，即萃取压力19MPa，萃取流速为4.8kg/m²·s根据压力和流量的波动，调节加热系统温度，维持萃取器温度为50℃，保持系统稳定，回流萃取3小时即得流动性好，颜色较深的莪术超临界萃取物。

实施例2：

莪术超临界萃取物的制备：

称取莪术粗粉8kg，置萃取器中，启动二氧化碳高压泵，通过背压阀和高压泵转速联合调节使萃取器的压力和二氧化碳的流量维持在设定参数，即萃取压力25MPa，萃取流速为1.2kg/m²·s；根据压力和流量的波动，调节加热系统温度，维持萃取器温度为35℃，保持系统稳定，回流萃取1小时即得流动性好，颜色较深的莪术超临界萃取物。

实施例3：

莪术超临界萃取物的制备：

称取莪术粗粉8kg，置萃取器中，启动二氧化碳高压泵，通过背压阀和高压泵转速联合调节使萃取器的压力和二氧化碳的流量维持在优化的参数，即萃取压力22MPa，萃取流速为1.8kg/m²·s；根据压力和流量的波动，调节加热系统温度，维持萃取器温度为45℃，保持系统稳定，回流萃取1.5小时即得流动性好，颜色较深的莪术超临界萃取物。

实施例4：

莪术超临界提取物微囊化

①处方：

油相：95％乙醇100ml   莪术超临界提取物(实施例3)8.0g

PBCA(聚氰基丙烯酸甲酯)1.0ml

水相：水400ml         葡聚糖4.0g    吐温202.0g

②制备工艺过程：取PBCA加入乙醇中分散均匀成白色乳浊液，加入莪术超临界提取物，分散均匀。冰箱中冷却至20℃以下。另取吐温20及葡聚糖加入水中溶解后，冰箱中冷却至20℃以下。取出后搅拌水相，使转速为600rpm，将油相注射入水相中。完毕后继续搅拌2小时后砂芯漏斗过滤，滤液呈乳状，测定粒径在300纳米左右，喷雾干燥固化即得。

实施例5：

巴布剂的制备

取丙烯酸钠5g，淀粉丙酸酯5g，二氧化钛0.25g，甘油40g，实施例4制得的莪术超临界提取物微囊4g，二氧化硅3g，尼泊金甲酯0.1g，尼泊金丙酯0.05g，乙醇1g，聚山梨醇酯-80 0.05g，乙酸乙烯酯3g，氢氧化铝干凝胶0.05g，水适量，混合均匀，涂布于无纺纤维织物上，盖上防粘层，即得。

实施例6：

软膏剂的制备

①处方：

莪术超临界提取物(实施例1)    240g

蜂蜡                         25g

单硬脂酸甘油酯               90g

凡士林                       100g

液状石蜡                     60g

十二烷基硫酸钠               10g

甘油                         50g

氮酮                         10g

蒸馏水加至                   1000g

②制备工艺过程：将油相蜂蜡、单硬脂酸甘油酯、凡士林、液状石蜡加热至80℃，莪术超临界提取物、氮酮、十二烷基硫酸钠、甘油、水加热略高于80℃，将水相缓缓加到油相，边加边搅拌，渐渐成乳。

实施例7：

贴膏剂的制备

①处方：

组成                        药库层    粘贴层

莪术超临界提取物(实施例2)   157g      46g

聚异丁烯MML-100             292g      318g

聚异丁烯LM-MS               365g      398g

矿物油                      584g      636g

氯仿                        8600g     3600g

②制备工艺过程：按药库层处方和粘附层处方量称取各成分，分别溶解，将药库层溶液涂布在65微米厚的铝塑膜上，烘干或自然干燥，形成约50微米厚的药库层；将粘附层溶液涂布在200微米厚的硅纸上，干燥，制成约50微米厚的粘附层。将粘附层复合到药库层，切成合适大小的小片即得。

实施例8：

凝胶剂的制备

①处方：

莪术超临界提取物的微囊(实施例4)    4g

卡波普                             2g

乙醇                               25g

甘油                               25g

聚山梨酯-80                        4g

尼泊金乙酯        0.5g

氢氧化钠          1g

蒸馏水加至        200g

②制备工艺过程：将卡波普与聚山梨酯-80、莪术超临界提取物的微囊及100ml水混合；氢氧化钠用水适量溶解后加入上液，搅匀；再将尼泊金乙酯溶于乙醇后逐渐加入搅匀，即得淡黄色透明凝胶。

Claims (1)

1、莪术超临界提取物在制备用于治疗皮肤癌的外用透皮制剂中的应用。