CN100413958C

CN100413958C - 具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌及其用途

Info

Publication number: CN100413958C
Application number: CNB2004100992183A
Authority: CN
Inventors: 王敖喜; 任大宝
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-12-29
Filing date: 2004-12-29
Publication date: 2008-08-27
Anticipated expiration: 2024-12-29
Also published as: CN1796540A

Abstract

本发明公开了一种具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌，即长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BM358。该长双歧杆菌具有极高的安全性，具有突出的耐酸耐胆汁特性，对肠道上皮细胞具有粘附特性，具有优异的抗肠道致病菌，并且具有抗氧化特性。该长双岐杆菌可用于预防和治疗由幽门螺旋杆菌引起的胃炎、胃溃疡和十二指肠炎以及由大肠杆菌等其它肠道致病菌引起的肠炎、急性腹泻、肠胃不适等疾病。

Description

具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌及其用途

技术领域

本发明涉及微生物学。更具体地涉及一种具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌和含有该活菌株的食物组合物或药物组合物。

背景技术

双歧杆菌是人体肠道中最重要的生理菌之一，它粘附于肠道上皮细胞上，形成稳定的菌群，对于维持宿主肠道微生态平衡、增强免疫功能、抗肿瘤、抗感染、抗衰老等方面发挥了重要的作用。但是绝大多数双歧杆菌严格厌氧，对营养要求比较严格，且耐胃酸、胆汁质特性差，人体食用后绝大部分被胃酸及胆汁质杀死，难以抵达肠道发挥功效。

值得注意的是，即使是相同属和种的双歧杆菌，由于菌株间的差异，其特性和功能也存在明显的差异。例如，A菌株较不耐酸耐胆汁；B菌株能有效抑制或杀灭肠道致病菌；C菌株对肠道细胞的粘附性能优良；D菌株则具有抑制肿瘤的作用；E菌株则对安全性存在一定隐患等等。

然而，目前还没有既具备安全性，又同时具有耐酸、耐胆汁、抑菌等多重优点的双岐杆菌。因此，本领域迫切需要开发既具备安全性，又同时具有耐酸、耐胆汁、抑菌等多重优点的双岐杆菌

发明内容

本发明的目的在于提供一种安全性能高、对酸和胆汁具有良好抗性，对肠道上皮细胞具有良好粘附能力、具有抗肠道致病菌特性和/或抗氧化特性等多重优点的双歧杆菌株。

在本发明的第一方面，提供了一种耐酸或耐胆汁的长双歧杆菌。在另一优选例中，它是长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BM358，保藏号是CCTCC NO：M204053。

在另一优选例中，所述的长双岐杆菌对酸和胆汁具有抗性。

在另一优选例中，所述的长双岐杆菌对肠道上皮细胞具有粘附特性。

在本发明的第二方面，提供了一种本发明所述的长双歧杆菌的用途，它被用于制备组合物，所述的组合物用于杀死或抑制幽门螺旋杆菌和/或大肠杆菌。

在另一优选例中，所述的组合物是食品组合物或药物组合物。

在另一优选例中，所述的组合物用于治疗选自下组的疾病：

(a)幽门螺旋杆菌引起的胃炎、胃溃疡、或十二指肠炎；或

(b)由大肠杆菌引起的肠炎、急性腹泻、或肠胃不适。

在本发明的第三方面，提供了本发明所述的长双歧杆菌的用途，它被用于制备组合物，所述的组合物用于提高哺乳动物血液中超氧化岐化酶的活力。

在本发明的第四方面，提供了一种食品组合物，它含有作为有效成份本发明所述的长双歧杆菌和食品学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述组合物中所述长双歧杆菌的数量为组合物的0.001-99wt％，较佳地0.1-90wt％，或者绝对数量为1.0×10³-1.0×10⁷cfu，较佳地1.0×10⁴-1.0×10⁶cfu。

在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，它含有作为有效成份的权利要求1所述的长双歧杆菌和药学上可接受载体。

附图说明

图1显示了长双歧杆菌BM358在MRS培养基上的菌落形态。

图2显示了长双歧杆菌BM358的电子显微镜图像。

图3显示了长双歧杆菌BM358对结肠腺癌系Caco-2细胞株粘附

图4显示了长双歧杆菌BM358对大肠杆菌O157:H7的拮抗能力。

图5显示了长双歧杆菌BM358对幽门螺旋杆菌的拮抗能力。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，分离出了一种具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌。该长双歧杆菌株(Bifidobacterium longum)BM358是从世界五大长寿之乡之一的广西巴马瑶族自治县的一名健康长寿老人的粪便中分离出来。经动物试验证实具有极高的安全性，此外具有突出的耐酸耐胆汁特性，对肠道上皮细胞具有粘附特性，以及优异的抗肠道致病菌和抗氧化特性。该菌株具有预防和治疗由幽门螺旋杆菌引起的胃炎、胃溃疡和十二指肠炎以及由大肠杆菌等其它肠道致病菌引起的肠炎、急性腹泻等肠胃疾病，并具有抗氧化的特性。在此基础上完成了本发明。

长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BM358株，于2004年7月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉)，其保藏编号为CCTCC NO：M204053。长双歧杆菌BM358属于双歧杆菌属。

如本文所用，“本发明微生物”、“本发明的长双歧杆菌”或“本发明细菌”指长双歧杆菌BM358株CCTCC No.M204053。应理解，这些术语还包括衍生自长双歧杆菌BM358菌株，尤其是具有耐酸性、耐胆汁性、对肠道上皮细胞具有粘附特性、对肠道致病菌(如幽门螺旋杆菌、大肠杆菌)生长的抑制性等特性的衍生菌株。

如本文所用，“本发明的活性物质”指长双歧杆菌BM358株或其提取物。

如本文所用，“本发明的活性物质制剂”或“本发明的活性组合物”指含有长双歧杆菌BM358或其提取物的药物组合物和食品组合物(包括保健品组合物)。

长双歧杆菌BM358的基本生物学特性与已知的该种属的典型微生物基本相同，不同点在于具有出色的耐酸性、耐胆汁性、对肠道上皮细胞具有粘附特性、对肠道致病菌(如幽门螺旋杆菌、大肠杆菌)生长的抑制性等特性。

具体而言，动物试验已证明，本发明的长双歧杆菌BM358有很高的安全性。

耐酸试验已证明，本发明的长双歧杆菌BM358具有突出地耐酸性能，在pH2.0-4.0下可存活很长时间。即使在pH值2.0条件下，在5小时后仍能检测到大量BM358菌株活菌存在。

耐胆盐实验已证明，本发明的长双歧杆菌BM358具有突出地耐胆汁质性能，在2.0-5.0％胆盐浓度下可存活很长时间。即使在胆盐浓度5.0％条件下，在5小时后仍能检测到大量BM358菌株活菌存在。

粘附实验已证明，本发明的长双歧杆菌BM358对肠道上皮细胞具有良好粘附性能。对Caco-2细胞的平均粘附率在13.4。

抑菌实验已证明，本发明的长双歧杆菌BM358能有效抑制或杀死大肠杆菌O157:H7。长双歧杆菌BM358产生的抑菌圈平均直径达10.1mm。

抑菌实验还已证明，本发明的长双歧杆菌BM358能有效抑制或杀死幽门螺旋杆菌。长双歧杆菌BM358产生的抑菌圈平均直径达10.2mm。

抗氧化实验已证明，本发明的长双歧杆菌株BM358具有出色的抗氧化特性。实验中测定了血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量和血中超氧化歧化酶(SOD)活力两种生化指标，表明长双歧杆菌BM358具有抗氧化特性。

因此，本发明的长双歧杆菌株BM358具有极高的安全性，突出的耐酸和耐胆汁质的性能，人类食用后，大部分的活性菌株可通过胃酸和胆汁质抵达肠道，并且可粘附在人体的肠道细胞，进而能杀死或抑制幽门螺旋杆菌和大肠杆菌等肠道致病菌，并且具有抗氧化的特性。可作为功能性添加物(或添加剂)广泛的运用在食品和药品等产品中。

具体而言，本发明的长双歧杆菌BM358可作为有效成份，用于预防和治疗由幽门螺旋杆菌引起的胃炎、胃溃疡和十二指肠炎以及由大肠杆菌等其它肠道致病菌引起的肠炎、急性腹泻等肠胃疾病。

在本发明的另一方面，还提供了一种含有本发明的长双歧杆菌BM358作为有效成份的组合物(包括药物组合物和食品组合物)。这些组合物可用于预防、治疗或辅助治疗由幽门螺旋杆菌引起的胃炎、胃溃疡和十二指肠炎以及由大肠杆菌等其它肠道致病菌引起的肠炎、急性腹泻、肠胃不适等疾病。还可作为肠道调理剂用于调理肠胃。

在获得长双歧杆菌BM358后，可用常规方法将其与药学上或食品学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂相混合，形成本发明的药物组合物或食品组合物。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。

本发明药物组合物或食品组合物，可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其他合适的形状。本发明的活性成分(长双歧杆菌BM358或其提取物)的含量通常为组合物重量的1-99％，较佳地为2-95％，更佳地为5-90％，最佳地10-80％。

可以为单剂或多剂形式。按施用剂量计，通常含有1-1000mg/剂，较佳地约2-500mg/剂，更佳地5-100mg/剂。

本发明的药物组合物可以通过常规途径进行给药，优选方式是口服。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明药物的施用量，按活性物质计算，通常为每天约0.01-500mg/kg体重，较佳地约0.1-50mg/kg体重。此外，本发明的制剂还可与其他治疗剂一起使用，例如，其他治疗剂包括各种现有的幽门螺旋杆菌抑制剂等。

本发明的主要优点在于：

本发明的长双歧杆菌株BM358具有极高的安全性，突出的耐酸和耐胆汁质性能，对肠道上皮细胞具有粘附特性、对肠道致病菌(如幽门螺旋杆菌、大肠杆菌)生长的抑制性等特性。因此人们食用后，大部分的活性菌株可通过胃酸和胆汁质抵达肠道，并且可粘附在人体的肠道细胞，进而能杀死或抑制幽门螺旋杆菌和大肠杆菌等肠道致病菌，并且具有抗氧化的特性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

从世界五大长寿之乡的健康长寿老人分离获得长双歧杆菌BM358

广西巴马瑶族自治县是我国长寿老人较为密集的地区之一，1991年被国际自然医学会评为世界第五大长寿之乡，该地工业较少，污染程度极低，且当地人无基本不服用抗生素。本发明人于1999年，自广西巴马瑶族自治县挑选15名90岁以上的健康长寿老人，采集其粪便中后段，冷藏保存(0℃左右)，直至试验。

然后，以无菌玻棒将粪便捣碎，沉静片刻后，取出清液1mL，放入装有9mL的稀释液中，按照十倍稀释法依次稀释至10^-7，10^-8，10^-9。取不同稀释倍数的菌液各1mL于无菌培养皿中，分别倒入多种不同的选择性培养基，充分混合均匀后，冷却凝固。每个稀释度二次重复，37℃厌氧培养三天。经分离筛选获得一株性能优异的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BM358。

长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BM358于2004年7月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国，武汉)，其保藏编号为CCTCC NO：M204053。

长双岐杆菌BM358的生理生化特征如下：

1、形态和染色：革兰氏阳性，不规则杆状，顶端多膨大或分叉。

2、培养特性：接触酶为阴性，发酵葡萄糖产酸但不产气。气相色谱测定葡萄糖发酵产物有乳酸和乙酸产生，厌氧培养生长良好，好氧培养生长不好，在石蕊牛奶中产酸、凝固。

3、生化生化特征：

葡萄糖	甘露醇	乳糖	蔗糖	麦芽糖	柳醇	木糖
葡萄糖	甘露醇	乳糖	蔗糖	麦芽糖	柳醇	木糖	+	+	+	+	+	+	+
阿拉伯糖	明胶	七叶灵	甘油	纤维二糖	甘露糖	松三糖	+	+	+	+	+	+	+
阿拉伯糖	明胶	七叶灵	甘油	纤维二糖	甘露糖	松三糖	+	-	+	-	-	+	+
棉子糖	山梨醇	鼠李糖	海藻糖	尿酶	接触酶	吲哚产生	+	-	+	-	-	+	+
棉子糖	山梨醇	鼠李糖	海藻糖	尿酶	接触酶	吲哚产生	+	-	+	-	-	-	-
淀粉	硝酸盐还原	V-P试验	运动性	厌氧生长	有氧生长	革兰氏染色	+	-	+	-	-	-	-
淀粉	硝酸盐还原	V-P试验	运动性	厌氧生长	有氧生长	革兰氏染色	-	-	-	-	+	-	+

长双歧杆菌BM358可以在MRS液体培养基或PTYG液体培养基中生长良好，在MRS固体培养基37℃厌氧培养72小时，形成直径大致在1.0-2.5mm的菌落，形态为白色、光滑、中间隆起，菌落特征如图1。

长双歧杆菌BM358个体形态呈细小杆菌，成对或成长链，其电子显微镜下形态如图2。长双歧杆菌遗传性状稳定，经数代培养，未发现性状的变异。

实施例2

长双歧杆菌株BM358对昆明种小鼠连续灌胃的安全性

昆明种小鼠80只，雌雄各半，随机分成4组，双歧杆菌BM358接种至MRS培养基，置于36±1℃厌氧培养培养48小时，分别将培养物的原液和5倍浓缩液，经口以20mL/KgBW给小鼠连续灌胃3天，并观察7天。

结果如下表1所示。与对比组相比，未观察到受试小鼠有毒性反应及引起死亡。

表1长双歧杆菌BM358活菌对小鼠毒性作用死亡表

实施例3

长双歧杆菌株BM358对健康成年ICR小鼠腹腔注射的安全性

健康成年ICR小鼠40只，雌雄各半，雌性小鼠体重范围19.5-22.0g，雄性小鼠体重范围20.0-22.2g。随机分成4组，将长双歧杆菌BM358菌种转种到MRS固体培养基培养，36±1℃厌氧培养48h后，刮取平板上的菌苔，用MRS液体培养基制成菌悬液，将浓度调整为5×10⁹cfu/mL，每天小鼠一次性腹腔注射0.3mL菌悬液，连续观察反应7天。

结果如下表2所示，未见受性小鼠有毒性反应或死亡。

表2长双歧杆菌BM358对小鼠毒性作用结果

实施例4

长双歧杆菌BM358对酸的耐受性

以灭菌的1％HCl溶液将灭菌MRS肉汤培养基的pH调至2.0、3.0、4.0，将长双歧杆菌株BM358接种到MRS肉汤培养基内，37℃厌氧培养18h后，以无菌水调整活菌数至5×10⁸cfu/mL左右。以2％的接种量接种于pH分别为2.0、3.0、4.0的MRS肉汤培养基中，分别测定0、1、2、3、4、5小时的BM358活菌数。

结果如下表3所示，表明长双歧杆菌BM358在pH2-4的酸性条件下有极其优异的耐酸性。一般双岐杆菌(对照)在pH4下4.0小时后的活菌数就小于1.0×10⁵。

表3长双歧杆菌株BM358在不同pH值条件下的活菌数变化状况cfu/mL

实施例5

长双歧杆菌BM358对胆汁质的耐受性

将灭菌MRS肉汤培养基胆盐浓度调至2.0％、3.0％、4.0％、5.0％。将长双歧杆菌株BM358接种到MRS肉汤培养基内，37℃厌氧培养18h后，以无菌水调整活菌数至5×10⁸cfu/mL左右。以2％的接种量接种于胆盐浓度分别为2.0％、3.0％、4.0％、5.0％的MRS肉汤培养基中，分别测定0、1、2、3、4、5小时的BM358活菌数。

结果如下表4所示，表明长双歧杆菌BM358在2.0％-5.0％胆盐浓度下有极其优异的耐受性。一般双岐杆菌(对照)在2.0％胆盐下4.0小时后的活菌数就小于1.0×10⁵。

表4长双歧杆菌株BM358在不同胆盐浓度条件下的活菌数变化状况cfu/mL

实施例6

长双歧杆菌对肠道细胞的粘附能力

(a)试验材料

(1)人结肠腺癌细胞系Caco-2细胞：购于中国科学院上海生化所

(2)DMEM培养液：由78％DMEM，20％灭活(30min，56℃)小牛血清，1％青霉素、链霉素双抗溶液，1％谷氨酰胺组成。

(3)PBS缓冲液：由8g NaCl，0.20g KCl，1.14g Na₂HPO₄·7H₂O，0.24g KH₂PO₄加水定容至1000mL配置而成。

(b)实验方法

将长双歧杆菌株BM358接种于MRS肉汤培养基中，37℃厌氧培养18小时生长至最适后，取菌液离心获得耗尽培养上清，细菌浓度用耗尽培养上清稀释，调OD₆₀₀＝0.5±0.05，此时活菌数约为5×10⁸cfu/mL，制得细菌悬液。结肠腺癌系Caco-2细胞株。按常规传代培养于DMEM培养液中，10％CO₂和90％空气中37℃培养，每2天换一次液。

用于粘附实验的细胞需是1小时前刚换过培养液的细胞。将培养好的细胞制成细胞悬液(5×10⁴个/mL)，向已放置盖玻片的24孔板中加入2mL细胞悬液，10％CO₂和90％空气中37℃培养，待在盖玻片上形成单层细胞后，吸出旧的细胞培养液，经pH7.4无菌PBS清洗2次后，每孔加入1mL细菌悬液和1mL细胞培养液。37℃培养2小时。经pH7.4无菌PBS漂洗3次，甲醇固定，再经pH7.4无菌PBS漂洗3次，革兰氏染色，高倍镜下选取Caco-2细胞的视野，计数50个细胞粘附的细菌数。

结果表明，粘附率在13.4±2.8个/细胞。这说明长双歧杆菌株BM358对肠道细胞的粘附能力非常强。

实施例7

长双歧杆菌BM358对大肠杆菌O157:H7的抑制作用

(a)实验材料

(1)MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5.0g，葡萄糖20g，无水乙酸钠5.0g，柠檬酸二铵2g，Tween-80 1mL，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄.4H₂O0.25g，MgSO₄.7H₂O 0.58g，蒸馏水1000mL，各组分加热溶解，调pH6.2-6.4，于121℃下灭菌15min备用。

(2)营养肉汤培养基：牛肉膏2.5g，胰蛋白胨5.0g，NaCl 2.5g，K₂HPO₄.3H₂O 1.3g，蒸馏水500mL，各组分于中加热溶解，调pH7.4，于121℃下灭菌15min备用。

(3)营养琼脂培养基：牛肉膏3.0g，蛋白胨5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL，将各组分加热溶解，于121℃下灭菌15min备用。

(4)大肠杆菌O157:H7：购自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

(b)实验方法

将长双歧杆菌株BM358接种到MRS液体培养基内，培养18h后，测其OD₆₀₀值，以MRS液体作空白对照。当OD₆₀₀在0.5±0.05时，其活菌数约为5×10⁸cfu/mL。同时将大肠杆菌接种于营养肉汤中，37℃培养18h后，调整至活菌数至10⁶cfu/mL。将营养琼脂培养基冷却到40℃左右时倾注到无菌培养皿中，待凝固后，吸取大肠杆菌菌液1mL在平板表面均匀涂开，37℃固定培养菌落30min，在平板上打直径4mm的孔，孔深3mm，将菌液注至满孔，于37℃培养24h，测定抑菌圈大小。

结果：所有的抑菌圈直径都在9mm以上(表5)，这证实长双歧杆菌能有效抑制或杀死大肠杆菌O157:H7。

表5长双歧杆菌BM358对大肠杆菌的抑菌能力的比较单位：mm

实施例8

长双歧杆菌BM358对幽门螺旋杆菌的抑制作用

(a)实验材料

(1)MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5.0g，葡萄糖20g，无水乙酸钠5.0g，柠檬酸二铵2g，Tween-80 1mL，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄.4H₂O0.25g，MgSO₄.7H₂O 0.58g，蒸馏水1000mL，各组分加热溶解，调pH6.2-6.4，于121℃下灭菌15分钟备用。

(2)Skirrow氏培养基：蛋白胨15.0g，胰蛋白胨2.5g；酵母浸膏5.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000.0mL，甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim，TMP)5.0mg，万古霉素(vancomycin)10.0mg，多粘菌素B(polymyxin)2500.0国际单位，冻溶马血70.0mL。除甲氧苄氨嘧啶、抗生素和冻溶马血外，将其他成分混合溶解。校正pH7.4，装瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。此即血琼脂基础培养基。临用前，加热溶解基础培养基，冷至60℃。每100mL基础培养基中，加入冻溶两次的马血7mL及TMP、抗生素混合液0.5mL，摇匀，倾注无菌平板。

(3)幽门螺旋杆菌：购自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

(b)实验方法

将长双歧杆菌株BM358接种到MRS液体培养基内，培养18h后，测其OD₆₀₀值，以MRS液体作空白对照。当OD₆₀₀在0.50.5±0.05时，其活菌数约为5×10⁸cfu/mL。同时将幽门螺旋杆菌接种于Skirrow氏培养基上，微氧环境37℃培养72h后，调整至幽门螺旋杆菌活菌数至10⁶cfu/mL。吸取幽门螺旋杆菌菌液0.5mL于Skirrow氏培养基平板上，均匀涂开固定后在平板的表面后打直径为4mm的孔，孔深3mm。将调整好浓度的长双歧杆菌BM358菌液注至满孔，于37℃微需氧环境培养48h观察结果。

结果：所有的抑菌圈直径在9mm以上，平均10.2mm以上(表6)，这证实长双歧杆菌能有效地抑制或杀死幽门螺旋杆菌。

表6长双歧杆菌BM358对幽门螺旋杆菌的抑菌能力的比较单位：mm

实施例9

长双歧杆菌BM358具有抗氧化作用

采用SD大鼠，设老年动物和青年动物对照组，设置三个剂量组10⁵cfu/Kg、10⁶cfu/Kg、10⁷cfu/Kg，对照组以蒸馏水灌胃连续30天，第31天，5组动物摘眼球取血，离心，取血清。测定如下生化指标；血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量和血中超氧化歧化酶(SOD)活力，实验结果用Spss软件进行统计。

样品对动物体重的影响如表7所示。由表7可见，样品各剂量组与老年组对照相比，均无显著差异。

表7样品对动物体重的影响

组别	动物数	初始体重	中期体重	终期体重
组别	动物数	初始体重	中期体重	终期体重	老年对照	10	474±16	514±19	559±22
10<sup>5</sup>cfu/Kg	10	476±13	514±19	559±22	老年对照	10	474±16	514±19	559±22
10<sup>5</sup>cfu/Kg	10	476±13	514±19	559±22	10<sup>6</sup>cfu/Kg	10	473±14	514±19	559±22
10<sup>7</sup>cfu/Kg	10	471±15	514±19	559±22	10<sup>6</sup>cfu/Kg	10	473±14	514±19	559±22
10<sup>7</sup>cfu/Kg	10	471±15	514±19	559±22	青年对照	10	77±4<sup>*</sup>	117±7<sup>*</sup>	188±10<sup>*</sup>

血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量如表8所示。由表8可见，样品10⁷cfu/Kg剂量组与老年组对照相比，有显著差异。

表8血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量

组别	动物数	MDA含量(nmol/mL)
组别	动物数	MDA含量(nmol/mL)	老年对照	10	2.74±0.35
10<sup>5</sup>cfu/Kg	10	2.23±0.43	老年对照	10	2.74±0.35
10<sup>5</sup>cfu/Kg	10	2.23±0.43	10<sup>6</sup>cfu/Kg	10	1.95±0.44
10<sup>7</sup>cfu/Kg	10	1.70±0.45<sup>*</sup>	10<sup>6</sup>cfu/Kg	10	1.95±0.44
10<sup>7</sup>cfu/Kg	10	1.70±0.45<sup>*</sup>	青年对照	10	1.44±0.33<sup>*</sup>

^*P＜0.05与老年对照组相比(经方差分析)

血中超氧化歧化酶(SOD)活力如表8所示。由表8可见，样品10⁶cfu/Kg、10⁷cfu/Kg剂量组与老年组对照相比，均有显著差异。

表9血中超氧化歧化酶(SOD)活力

组别	动物数	超氧化歧化酶(SOD)活力(u/mL)
组别	动物数	超氧化歧化酶(SOD)活力(u/mL)	老年对照	10	126.8±13.1
10<sup>5</sup>cfu/Kg	10	143.6±13.9	老年对照	10	126.8±13.1
10<sup>5</sup>cfu/Kg	10	143.6±13.9	10<sup>6</sup>cfu/Kg	10	165.6±9.1<sup>*</sup>
10<sup>7</sup>cfu/Kg	10	184.5±15.6<sup>*</sup>	10<sup>6</sup>cfu/Kg	10	165.6±9.1<sup>*</sup>
10<sup>7</sup>cfu/Kg	10	184.5±15.6<sup>*</sup>	青年对照	10	197.5±14.6<sup>*</sup>

^*P＜0.05与老年对照组相比(经方差分析)

本实施例的实验结果提示，长双歧杆菌BM358具有抗氧化作用。

实施例10

含长双歧杆菌BM358的药物组合物

原料配比

原料	质量百分比(％)
原料	质量百分比(％)	水	83
脱脂奶粉(蛋白质含量约34％)	10	水	83
脱脂奶粉(蛋白质含量约34％)	10	乳清浓缩蛋白(蛋白质含量80％以上)	2
葡萄糖	3.5	乳清浓缩蛋白(蛋白质含量80％以上)	2
葡萄糖	3.5	酵母粉	1.5

按上述原料配比制成均匀的液体混合物，灭菌冷却至37℃，接入长双歧杆菌BM358发酵到活菌数达10⁹cfu/mL以上，离心，加入含1％甘油和20％脱脂奶粉混合物，冷冻干燥，磨粉，装入胶囊，即制成活菌数达10⁹cfu/mL的药物胶囊。

实施例11

含长双歧杆菌BM358的食物组合物

原料配比

原料	质量百分比(％)
原料	质量百分比(％)	鲜奶	93
白砂糖	7	鲜奶	93

按上述配比，将鲜奶加热到50℃以上，加入白砂糖搅拌至完全溶解，预热，均质，杀菌，冷却，接种(接种数量：嗜热链球菌(1-100×10⁶cfu/mL)、保加利亚乳杆菌(1-100×10⁶cfu/mL)、双歧杆菌(1-50×10⁶cfu/mL)、40-42℃发酵至pH值为4.2-4.5，搅拌，充填，冷藏，即制成含活性长双歧杆菌BM358的酸奶。

菌种保藏

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1. 一种长双歧杆菌，其特征在于，它是长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)BM358，保藏号是CCTCC NO：M204053，并且所述的长双歧杆菌能抑制或杀死幽门螺旋杆菌。

2. 如权利要求1所述的长双歧杆菌，其特征在于，所述的长双岐杆菌对酸和胆汁具有抗性。

3. 如权利要求1所述的长双歧杆菌，其特征在于，所述的长双岐杆菌对肠道上皮细胞具有粘附特性。

4. 如权利要求1所述的长双歧杆菌的用途，其特征在于，用于制备组合物，所述的组合物用于杀死或抑制幽门螺旋杆菌和/或大肠杆菌。

5. 如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的组合物是食品组合物或药物组合物。

6. 如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的组合物用于治疗选自下组的疾病：

(a)幽门螺旋杆菌引起的胃炎、胃溃疡、或十二指肠炎；或

(b)由大肠杆菌引起的肠炎、急性腹泻、或肠胃不适。

7. 如权利要求1所述的长双歧杆菌的用途，其特征在于，用于制备组合物，所述的组合物用于提高哺乳动物血液中超氧化岐化酶的活力。

8. 如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的组合物是食品组合物或药物组合物。

9. 一种食品组合物，其特征在于，它含有作为有效成份的权利要求1所述的长双歧杆菌和食品学上可接受的载体。

10. 一种药物组合物，其特征在于，它含有作为有效成份的权利要求1所述的长双歧杆菌和药学上可接受载体。