CN100413877C - 豆腐果苷修饰物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及下述结构式(I)的豆腐果苷新修饰物，其制备方法，以该类豆腐果苷修饰物为活性成分的药物组合物，以及它们在制备镇静催眠药物中和在制备抗炎镇痛药物中的应用。

Description

豆腐果苷修饰物及其制备方法与应用

技术领域：

本发明涉及新颖的豆腐果苷修饰物，其制备方法，以该类豆腐果苷修饰物为活性成分的药物组合物，以及它们在制备镇静催眠药物中和在制备抗炎镇痛药物中的应用。

背景技术：

豆腐果苷(Helicid)是从山龙眼科山龙眼属(HeliciaLour.)几种植物的果实中提取的有效成分单体糖苷(4-甲酰苯基-β-阿洛糖)，具有镇静安眠和抗炎镇痛的作用。现有技术中未有豆腐果甘修饰物的任何报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的豆腐果苷修饰物及其制备方法，进一步的目的是提供本发明化合物豆腐果苷修饰物在制备镇静催眠药物和抗炎镇痛药物中的应用。

本发明基于下述的原理，豆腐果苷的甲醛基活泼，如将豆腐果苷所连的阿洛糖羟基合成脂溶性衍生物，则容易通过血脑屏障，具有更好的镇静催眠和抗炎镇痛作用，为此本发明设计合成了豆腐果苷新修饰物(结构见式I)，由豆腐果苷合成豆腐果苷新修饰物，该新修饰物具有镇静催眠和抗炎镇痛等多种有价值的药用活性。并开发出了该新修饰物在制备镇静催眠药物和抗炎镇痛药物中的应用。

本发明豆腐果苷新修饰物用下述结构式(I)表示：

豆腐果苷新修饰物根据羟基所连基团不同主要有以下三种类型：

1.豆腐果苷烷酰化物：即豆腐果苷阿洛糖上羟基经酰基化合成，包括四乙酰化豆腐果苷、四丙酰化豆腐果苷、四丁酰化豆腐果苷和四琥珀酸半酯豆腐果苷。

2.豆腐果苷醚化物：即豆腐果苷阿洛糖上羟基连接烷基，包括四甲醚豆腐果苷、四乙醚豆腐果苷。

3.豆腐果苷芳酰化物：即豆腐果苷阿洛糖上羟基经芳酰基化合成，包括四苯甲酰豆腐果苷、四苄甲酰豆腐果苷。

本发明化合物豆腐果苷新修饰物是由以下方法合成而得：取豆腐果苷溶于吡啶中，加入一定酸酐ROR(R与式I中一致)或琥珀酸酐(采用DMAP作催化剂)，于60℃水浴加热3小时，反应产物经弱酸弱碱水溶液洗涤后结晶等纯化手段得到豆腐果苷新修饰物。

本发明的化合物豆腐果苷新修饰物可用于制备镇静催眠药物和抗炎镇痛药物。

本发明化合物用作药物时，可以加赋形剂以适当制剂直接使用，或与其他药物组成复方制剂使用。其余为药物学上可接受的对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。药用载体或赋形剂是药物学上可接受的对人和动物无毒和惰性的固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。使用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。对成人来说，给药量每天1～100mg比较合适。

具体实施方式：

下面的实施例可以使本专业人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：四乙酰化豆腐果苷的制备。

取200g豆腐果苷溶于200mL吡啶中，加入400mL乙酸酐，于60℃水浴加热3小时，反应物直接加入适量水析出固体，将析出固体捣碎，先后采用1000ml稀盐酸(2％)和1000ml碳酸钠(5％)水溶液于布氏漏斗抽滤各3次，再用水冲洗，将洗后固体加热溶于500ml 95％酒精溶液，经结晶和反复重结晶得到283g四乙酰化豆腐果苷，得率为88.9％。

四乙酰化豆腐果苷的结构鉴定数据：

紫外光谱(UV)用UV-210A仪测定。红外光谱(IR)用Bio-RadFTS-135型分光光度计测定，KBr压片。旋光用JASCO-20型旋光仪。熔点用X-4数字显示显微熔点测试仪。质谱(MS)用Auto SPEC 3000型质谱仪测定。核磁共振谱(¹H NMR和¹³C NMR)用BrukerDRX-400超导核磁共振仪测定，TMS作内标，CDCl₃作溶剂。

结构式如式(II)所示：

式(II)

分子式：C₂₁H₂₄O₁₁

分子量：452

性状：白色结晶

熔点：122-124℃

旋光：[α]_D ²¹-28.7°(c 0.61，CHCl₃)

UV(CHCl₃)：λ_max＝23l，235，266。

IR(KBr)：v_max＝2977，1748，1693，1606，1583，1513，1431，1370，1220，1172，1066，945，905，848，671，616cm^-1。

FAB-MS(+)：m/z＝453([M+H]⁺，3)，331(100)，393(17)，271(2)，169(23)，145(2)，109(103)，81(3)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ_H 9.88(1H，s，CHO)，7.83(2H，d，J＝8.6Hz，H-3，5)，7.11(2H，d，J＝8.6Hz，H-2，6)，5.72(1H，m，H-3′)，5.46(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，5.17(1H，dd，J＝8.0，2.9Hz，H-2′)，5.04(1H，dd，J＝9.6，2.6Hz，H-4′)，4.28-4.21(3H，m，H-5′，6′)，2.14，2.04，2.01，1.99(12H，s，4COCH₃)。

¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz)：δc 190.8(s，CHO)，170.6，169.7，169.0，169.0(s，4COCH₃)，161.4(C-1)，131.7(d，C-2，6)，131.6(s，C-4)，116.7(d，C-3，5)，962(d，C-1′)，70.6(d，C-5′)，68.5(d，C-2′)，68.2(d，C-3′)，65.9(d，C-4′)，62.1(t，C-6′)，20.7，20.6，20.5，20.5(q，4COCH₃)。

实施例2：四琥珀酸半酯豆腐果苷的制备。

取0.7g豆腐果苷溶于5mL吡啶中，加入1g丁二酸酐及1.14g 4-N，N-二甲基吡啶(DMAP)，于60℃水浴加热3小时，反应物加入适量水，用氯仿萃取三次，将氯仿部分经过凝胶(Sephadex LH-20)层析(流动相为氯仿∶甲醇=1∶1)，得到1.42g四琥珀酸半酯豆腐果苷，得率为84.2％。

四琥珀酸半酯豆腐果苷的结构鉴定数据：

旋光用JASCO-20型旋光仪。质谱(MS)用Auto SPEC 3000型质谱仪测定。核磁共振谱(¹H NMR和¹³C NMR)用Bruker DRX-400超导核磁共振仪测定，TMS作内标，CD₃OD作溶剂。

结构式如式(III)所示：

式(III)

分子式：C₂₉H₃₂O₁₉

分子量：684

性状：透明蜡状

旋光：[α]_D ²¹-6.2°(c 0.91，CH₃OH)

FAB-MS(+)：m/z＝123(苷元碎片峰，[C₇H₆O₂+H]⁺，100)，115(7)，，109(14)，101(36)，98(8)，81(13)，69(4)。

¹H-NMR(CD₃OD，400MHz)：δ_H 9.66(1H，s，CHO)，7.66(2H，d，J＝8.0Hz，H-3，5)，6.98(2H，d，J＝8.0Hz，H-2，6)，5.57(1H，m，H-3′)，5.37(1H，d，J＝7.9Hz，H-1′)，4.93(1H，dd，J＝7.6，2.6Hz，H-2′)，4.85(1H，m，H-4′)，4.15-4.07(3H，m，H-5′，6′)，2.53-2.37(16H，m，4COCH ₂ CH ₂ COOH)。

¹³C-NMR(CD₃OD，100MHz)：δ_C 192.2(s，CHO)，175.1，172.9，172.2，171.6(s，4COCH₃)，162.1(C-1)，132.4(d，C-2，6)，132.0(s，C-4)，117.3(d，C-3，5)，96.6(d，C-1′)，71.1(d，C-5′)，69.5(d，C-2′)，68.5(d，C-3′)，66.8(d，C-4′)，63.1(t，C-6′)，29.6-28.8(t，4COCH ₂ CH ₂ CH₃)。

下述的制剂实施例是按实施例1的方法先制得豆腐果苷新修饰物，按常规制成注射液、粉针剂、口服液以及加入赋形剂的粉剂、制粒压片、胶囊。

[制剂实施例1]片剂

按照本领域已知的方法制备片剂，每片含有下述成分：

式(I)化合物                50mg

乳糖                       70mg

硬脂酸镁                   3mg

聚乙烯吡咯烷酮             7mg

合计                       130mg

如果需要，片剂可用羟丙基甲基纤维素、滑石和着色剂进行膜包覆。

[制剂实施例2]胶囊

按照本领域已知的方法制备胶囊剂，每个胶囊中含有下述成分：

式(I)化合物          50mg

乳糖                 70mg

玉米淀粉             25mg

硬脂酸镁             1mg

聚乙烯吡咯烷酮       4mg

合计                 150mg

[制剂实施例3]注射剂

按实施例1的方法先制得本发明式(I)化合物，按本领域已知的方法制备注射剂，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

下述的试验例可进一步说明本发明所述豆腐果苷修饰物及其药物组合物的有益效果，这些试验例包括了本发明的药效学试验和急性毒性试验等。

试验例1：本发明化合物豆腐果苷新修饰物中四乙酰化豆腐果苷的药理作用。

四乙酰化豆腐果苷镇静催眠作用的实验

(1)实验方法

采用中药药理实验方法学中的小鼠自发活动次数测定、阈下剂量戊巴比妥钠协同催眠试验、阈剂量戊巴比妥钠睡眠时间测定试验的方法(这些方法见[1]李仪奎等.中药药理实验方法学.上海科学技术出版社，1991：330；[2]李仪奎等.中药药理实验方法学上海科学技术出版社，1991：334和[3]陈奇等.中药药理研究方法学.1993：113～114中的描述)进行试验，均采用多次灌胃和单次腹腔注射两种给药方式。实验设置溶媒对照，以安定片为阳性对照。

实验动物采用SPF级ICR小鼠，3～4周龄，雌雄各半，体重18～22g，由昆明医学院实验动物中心提供。受试物(四乙酰化豆腐果苷：DA55)由本发明提供。

(2)实验结果

实验结果见表1-6(与对照组相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01)。

表1多次灌胃给药对小鼠自发活动的影响

表2单次腹腔注射给药对小鼠自发活动的影响

表3多次灌胃给药对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠率的影响

表4单次腹腔注射对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠率的影响

表5多次灌胃给药对阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响

表6单次腹腔注射对阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响

DA55以400mg/kg的剂量连续灌胃给药3天或腹腔注射给药一次，能明显抑制小鼠的自发活动；DA55以400、200、100mg/kg的剂量连续灌胃3天或腹腔注射给药一次，能不同程度提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡率，以高剂量组作用为显著；DA55以400mg/kg的剂量连续灌胃给药3天或DA55以400、200、100mg/kg腹腔注射给药一次，均能明显延长阈剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠持续时间，DA55三剂量组腹腔注射给药还能明显缩短小鼠的睡眠潜伏期。以上结果显示DA55有明显的镇静催眠作用。

试验例2：四乙酰化豆腐果苷抗炎镇痛作用的实验

(1)实验方法

采用中药药理实验方法学中的醋酸致小鼠扭体性疼痛试验、热板致小鼠疼痛试验、二甲苯致小鼠耳廓钟胀试验的方法(与试验例1相同)进行试验，均采用多次灌胃和单次腹腔注射两种给药方式。

实验设置溶媒对照，以阿司匹林为阳性对照。

实验动物采用SPF级ICR小鼠，3～4周龄，雌雄各半，体重18～22g，由昆明医学院实验动物中心提供。受试物(四乙酰化豆腐果苷：DA55)由本发明提供。

(2)实验结果

实验结果见表7-11与对照组相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01)。

表7DA55连续给药7天对醋酸致小鼠扭体性疼痛的影响

表8DA55连续给药4天对醋酸所致小鼠扭体性疼痛的影响

表9DA55单次给药对热板致疼小鼠的影响

表10DA55对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响

表11DA55连续给药对致小鼠耳廓肿胀度的影响

DA55以200、50mg/kg的剂量连续灌胃给药7天，以50、10mg/kg连续给药4天，对醋酸所致小鼠扭体性疼痛有显著抑制作用；以100mg/kg的剂量一次灌胃给药，对热板致疼小鼠的痛阈值有一定延长趋势；5mg/kg的DA55连续灌胃给药3天，对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有显著抑制作用，以200、100、50、10mg/kg的剂量连续给药8天，对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有显著抑制作用。结果显示DA55有明确的镇痛及抗炎作用。

试验例3.四乙酰化豆腐果苷急性毒性实验

(1)实验方法

采用小鼠一次灌胃最大给药量测定。

实验动物采用SPF级ICR小鼠，3～4周龄，由昆明医学院实验动物中心提供。试验在IVC动物实验室进行。受试物(四乙酰化豆腐果苷：DA55)由本发明提供。称取样品15.0020g于乳钵中，加人少许0.5％CMC-Na研磨后移至量筒中，用少量溶媒清洗乳钵2次，调总容量至33ml，用不绣钢刀搅拌均匀即成浓度为0.45g/ml的乳白色糊状物为本试验的最大浓度。

小鼠禁食不禁水5小时后，选取体重为18～21g者40只，雌雄各半，按性别和体重随机分为2组：空白对照组；DA55组；每组20只。给药组小鼠按40ml/kg体重的容积一次灌胃给予四乙酰化豆腐果苷糊状物，空白对照组给予同体积的0.5％CMC-Na。

(2)实验结果

除四乙酰化豆腐果苷组雌性3只、雄性4只动物于给药后约20min活动量稍有减少外，其余动物外观、行为活动、精神状态、食欲、大小便、皮毛、肤色及呼吸等均未见明显毒性反应发生。连续观察14天，动物全部健康存活，体重明显增加，两组比较无显著差异，结果见表12观察期满处死解剖动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等内脏组织，亦未见明显异常。

表12四乙酰化豆腐果苷经小鼠灌胃途径急性毒性试验体重结果

毒性预试表明小鼠口服DA55因浓度和体积原因，无法测出LD₅₀，故以一次灌胃的最大给药量来反映该样品的急性毒性情况。小鼠以0.45g/ml的最大浓度、40ml/kg的最大容积一次灌胃给予DA-55，除近1/3动物活动量稍有减少外，未见其它明显毒性反应发生；小鼠一次口服DA-55的最大给药量为18.0g/kg，其最大耐受量必大于18.0g/kg。

Claims (6)

1. 下述结构式(I)豆腐果苷修饰物

其中R为COCH₃、COCH₂CH₃、COCH₂CH₂CH₃、COCH₂CH₂COOH、CH₃、CH₂CH₃、COC₆H₅或COCH₂C₆H₅。

2. 制备权利要求1豆腐果苷修饰物的方法，取豆腐果苷溶于吡啶中，加入酸酐ROR，其中R为COCH₃、COCH₂CH₃、COCH₂CH₂CH₃、CH₃、CH₂CH₃、COC₆H₅、COCH₂C₆H₅，于60℃水浴加热3小时，反应产物经弱酸、弱碱水溶液洗涤后结晶纯化得豆腐果苷修饰物；或加入琥珀酸酐，采用DMAP作催化剂，于60℃水浴加热3小时，反应产物经弱酸、弱碱水溶液洗涤后结晶纯化得豆腐果苷修饰物。

3. 用于镇静催眠的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1豆腐果苷修饰物和/或药学上可接受的载体。

4. 用于抗炎镇痛的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1豆腐果苷修饰物和/或药学上可接受的载体。

5. 权利要求1豆腐果苷修饰物在制备镇静催眠药物中的应用。

6. 权利要求1豆腐果苷修饰物在制备抗炎镇痛药物中的应用。