CN100393745C - 一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽。该肿瘤抗原蛋白质通过细胞内分解，能产生与主要组织相容性复合体(MHC)-I类分子相结合的、能被T细胞所识别的肽片段。编码该肿瘤抗原蛋白质的DNA序列具有在基因文库中登录号为AF497803的序列的核苷酸序列。该肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽可用于制备治疗肺癌的药物。

Description

一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽

技术领域

本发明涉及一种肿瘤特异性抗原蛋白质和肿瘤抗原肽，特别是涉及一种用于治疗肺癌的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽。

背景技术

肿瘤的生物治疗作为肿瘤治疗的新模式，已日渐成为肿瘤综合治疗中不可替代的重要组成部分，它主要包括了免疫治疗和基因治疗两方面。从目前国际研究的趋势分析，从实际应用的角度推测，肿瘤的免疫治疗将会有广泛的应用前景。传统的方法是以肿瘤细胞、肿瘤提取物或某一成分作抗原给患者接种，通过激发免疫反应达到控制肿瘤的目的。然而，在不能确定肿瘤特异性抗原的情况下，所引发的非特异性免疫活动在控制肿瘤生长方面十分有限。

在二十世纪五十年代，Foley等人把经化学诱变产生肿瘤的小鼠用灭活的自身肿瘤细胞免疫后，再给该小鼠接种活的肿瘤细胞，这些肿瘤细胞被排斥而不能生长成肿瘤，小鼠则存活；而没用灭活的自身肿瘤细胞免疫的小鼠接种活的肿瘤细胞后，肿瘤细胞不被排斥而生长成肿瘤，小鼠则死亡。此实验以令人信服的证据证明了化学诱变的肿瘤存在肿瘤特异性抗原，但是这种保护反应有着精确的特异性，即只针对相同类型的肿瘤而不针对不同类型的肿瘤，即使是对用同一致癌剂在同一小鼠上诱导的不同类型肿瘤也没有保护作用。因此，寻找肿瘤特异性抗原，从而进一步进行相关疫苗的研制工作是基础的、必需的。

肿瘤抗原种类较多，特性不一。其中重要一类是可被特异性CTL识别的肿瘤抗原。如类癌基因产物，其中最典型的是原癌基因HER-2/neu，该基因在正常组织中也有表达，但在肿瘤组织中表达要高100～200倍，其相应抗原肽占据着大多数MHC I类分子而激活特异性CTL。除此之外，更有应用价值的是肿瘤细胞表达抗原。这类抗原主要在肿瘤细胞表达，正常组织不表达，如肿瘤细胞表面的粘蛋白是一种较早认识的有CTL识别的肿瘤抗原。由于其在正常组织不表达，而只在肿瘤组织表达的特性，使得其副作用更小，靶向性更强，在抗肿瘤应用中具有更广阔的前景。

目前认为，肿瘤的发生，根本上可归结为一系列肿瘤相关基因结构和功能的异常，肿瘤抗原即是这些异常基因所表达的一些在质和量上异常的蛋白或多肽。机体的抗肿瘤免疫主要由细胞免疫完成。随着人们对免疫应答反应本质的认识，人们发现不管免疫应答的过程多么复杂，最终导致T细胞活化而产生杀伤效应的就是与主要组织相容性复合体MHC相结合形成抗原肽复合物和共刺激信号，即：细胞毒性T细胞(CTL)通过自身表面的T细胞受体(TCR)，识别表达于肿瘤细胞表面的肿瘤抗原蛋白质/肽与主要组织相容性复合体(MHC)I类抗原相结合形成的复合体，从而攻击杀伤肿瘤细胞。

肿瘤抗原蛋白质/肽的产生是由肿瘤细胞表达成肿瘤抗原，其在细胞内由各种蛋白酶分解成8～10个氨基酸大小的抗原肽，这些抗原肽与内质网中产生的MHC I类分子结合，通过高尔基复合体表达于细胞的表面，最终给肿瘤抗原特异的CTL，从而诱发免疫应答，杀伤清除肿瘤细胞。这种存在于肿瘤细胞中、能与MHC分子结合并诱发机体免疫反应的蛋白质抗原分子即为肿瘤抗原。可以用这些抗原诱导机体产生只针对肿瘤细胞的免疫应答反应，从而特异杀伤体内的肿瘤细胞而达到治疗或者防治肿瘤细胞转移的作用。

肺癌是人类肿瘤中最为常见的恶性肿瘤，尤其是近些年来，发病率逐渐增加。目前，对肺癌的治疗主要是传统的手术切除和放化疗等辅助治疗方法，但由于大部分患者确诊时都已进入了中晚期，发现时已经有转移，因此预后仍不理想。寻找肿瘤特异性抗原，进而进行免疫治疗无疑将会有助于肺癌的早期诊断，并改善病人的预后。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于肺癌治疗的肿瘤特异性抗原蛋白质和肿瘤抗原肽。

本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：

本发明提供一种肿瘤特异性抗原蛋白质，该蛋白质通过细胞内分解，能产生与主要组织相容性复合体(MHC)-I类分子相结合的、能被T细胞所识别的肽片段，其具有如下(a)或(b)所述的氨基酸序列：

(a)具有序列1所示的氨基酸序列；

(b)将(a)中的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代，缺失或添加突变所产生的衍生蛋白质，且该衍生蛋白质与(a)的蛋白质具有相同的功能。

本发明提供一种DNA序列，它编码所述的肿瘤抗原蛋白质。

本发明所述的DNA序列具有序列2所示的核苷酸序列，基因文库中登录号为：BJ-TSA-9AF497803。

本发明提供所述的蛋白质作为肿瘤特异性抗原的应用。

本发明提供所述的基因作为肿瘤特异性抗原基因的应用。

本发明提供一种与所述肿瘤特异性抗原蛋白质所产生的肽片段同等功能的肿瘤抗原肽，其具有序列1中氨基酸序列的第164位～第172位的氨基酸序列。

本发明所述的肿瘤抗原蛋白质在制备治疗肺癌药物中的应用。

本发明所述的肿瘤抗原肽在制备治疗肺癌药物中的应用。

本发明提供的肿瘤特异性抗原蛋白质和肿瘤抗原肽的优益之处在于：本发明首次发现并成功克隆BJ-TSA-9，并鉴定为肿瘤特异性抗原基因；在使用免疫方法治疗癌症时，可以用这些抗原诱导机体产生只针对肿瘤细胞的免疫应答反应，在不杀伤正常细胞的同时，特异杀伤体内的肿瘤细胞达到治疗或者防治肿瘤细胞转移的作用；同时，可以通过对该肿瘤抗原基因或抗体的检测，对肿瘤的发生、发展以及是否有转移进行诊断。

附图说明

图1是编码本发明抗原蛋白质的基因BJ-TSA-9在16种成人正常组织的RT-PCR检测结果；图中的1～16分别代表成人正常组织脾、前列腺、卵巢、小肠、大肠、白细胞、心脏、肺、肝、脑、肾、胎盘、睾丸、骨骼肌、胰腺、胸腺。P代表PCR的阳性对照，N代表阴性对照。

图2是编码本发明抗原蛋白质的基因BJ-TSA-9在肺癌的癌组织与配对的癌旁组织的RT-PCR结果；图中的Ca.代表癌组织，Adj.代表配对的癌旁组织。

图3是BJ-TSA-9在肺癌组织的Northern杂交结果，其中Ca.为癌组织，Adj.为癌旁组织。

图4是本发明抗原蛋白质在大肠杆菌种的重组蛋白表达结果，以及鉴定表达产物的Western blot结果。其中M为蛋白分子量标志物；1为诱导前的细菌裂解物，2为诱导后的细菌裂解物；3为超声裂解后的上清，4为超声裂解后的包涵体；4为纯化后目的蛋白的Western blot，5为阴性对照。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明提供的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽进行更为详尽的说明。

实施例1、肿瘤组织中BJ-TSA-9全长cDNA的发现

根据Genbank中的Unigene和EST数据库中的资料，使用SAGE和virtualNortherns等网上生物信息学工具，分析了8号染色体上的序列，发现八号染色体长臂24区可能编码一个肿瘤特异性基因。故根据其序列设计特异性PCR引物，从肺癌组织中成功克隆出BJ-TSA-9的全长mRNA序列。

首先以TRIzol试剂盒(Gibco公司)提取肺癌及癌旁组织总RNA，紫外分光光度检测mRNA的浓度和纯度。使用advantage reverse transcriptase试剂盒(Clontech公司)进行逆转录，以2μg总RNA合成cDNA。稀释至100ul后，取2.5ul作为模板，用高保真pfu DNA合成酶进行PCR，条件是94℃20秒；60℃30秒；72℃1分30秒，35个循环，72℃再延伸7分钟。引物序列为正向：5’-CAC TTC TTG GAG GTG CCC TGCACG-3’；反向：5’-CTC CCA AGC CCA GCT TTC CAA AGG-3’。PCR产物8μl用1％琼脂糖凝胶电泳进行分析，并使用Taq DNA聚合酶加polyA尾之后，按常规方法克隆入pGEM-T Easy vector，转化入感受态E.coli TOP10F’菌，送上海基康公司测序。所得结果用Blast软件与GenBank中的核酸序列进行同源比对，结果与八号染色体上的序列完全相同。至此，我们从肺癌组织中成功克隆了BJ-TSA-9全cDNA。

实施例2、用RT-PCR的方法来证明BJ-TSA-9基因在人16种正常组织和肺癌、肠癌、胃癌中的表达情况

生物技术公司CLONTECH的16种商品化的人正常组织的cDNA(脾、前列腺、睾丸、卵巢、小肠、大肠、白细胞、心脏、肺、肝、脑、肾、胰腺、胎盘、骨骼肌、胸腺)、来源于40例肺癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA、来源于12例结肠癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA、来源于10例胃癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA被用来检测BJ-TSA-9基因在正常组织与肿瘤组织的表达情况。

本发明中进行RT-PCR的条件：应用CLONTECH公司的advanced热启动DNA聚合酶，94℃20秒；64℃30秒；72℃1分30秒，35循环，之后72℃延伸7分钟。进行RT-PCR的引物序列，正向：5’-CAC TTC TTG GAG GTG CCC TGC ACG-3’；反向：5’-CTC CCA AGC CCA GCT TTC CAA AGG-3’结果发现：在16种成人重要正常组织中，BJ-TSA-9基因均无表达(如图1所示)；BJ-TSA-9基因在52％的肺癌、33％的肠癌和30％的胃癌中表达，而与之配对的癌旁组织都不表达(如图2所示)。本实施例证明肿瘤特异抗原基因BJ-TSA-9在很多种癌症组织表达，而在正常组织无表达，我们依据该基因现在已知的性质将其命名为肿瘤特异性基因BJ-TSA-9(基因文库中登录号为：AF497803)。

实施例3、Northern blot杂交来分析BJ-TSA-9基因在肺癌肿瘤组织中的表达

用TRIZOL试剂(PROMEGA)从肺癌病人的癌组织与配对的癌旁组织中提取总RNA，在甲酰胺、甲醛存在的条件下将20ug的总RNA变性，进行琼脂糖电泳后转到Hybond-N+尼龙膜(Amersham)上，用紫外交联的方法固定。用地高辛DNA探针标记试剂盒(ROCHE)标记实施例2中扩增出来的DNA片段，以制作DNA探针，按照常规的Northern杂交方法与膜上的t RNA进行杂交，之后进行放射自显影，检测出本发明中的肿瘤特异性抗原蛋白质基因BJ-TSA-9的mRNA。然后，将检测出该基因mRNA所用的膜在1％SDS溶液中煮沸，除掉地高辛标记的探针后，用标记的管家基因G3PDH作探针，用同样的方法进行Northern blot杂交，检测出的mRNA作阳性对照。结果表明，本发明的肿瘤抗原蛋白质基因的mRNA仅在肺癌的癌组织中表达，而配对的癌旁组织不表达(如图3所示)，这与肿瘤特异性抗原基因的特性一致。

实施例4、BJ-TSA-9基因重组蛋白质在大肠杆菌中的表达

应用pET32a原核表达载体(购于INVOTRIGEN公司)，构建表达特异性抗原BJ-TSA-9的质粒pET32a-BJ-TSA-9，该质粒在大肠杆菌菌株B121(转有大肠杆菌稀有密码子)(购于INVOTRIGEN公司)中，37℃生长条件下，1mM IPTG诱导重组蛋白质表达6小时。SDS-PAGE蛋白电泳对重组蛋白的表达进行鉴定。之后，应用镍离子亲和层析柱子(购于INVOTRIGEN公司)将重组蛋白质从大肠杆菌全蛋白中分离、纯化出来。用抗重组蛋白带有的6个组氨酸的单克隆抗体(购于INVOTRIGEN公司)，通过Western杂交方法，对重组蛋白进行鉴定(图4)。结果在预期大小的约60kD位置上有预期的蛋白，以抗六个组氨酸的单克隆抗体进行的Western杂交证实了表达的蛋白就是BJ-TSA-9基因的重组蛋白。

实施例5、应用肿瘤抗原肽体外诱导CTL的形成与CTL体外杀伤实验

参照中华普通外科杂志(17：218，2002)中的实验方法。将2×10⁶/ml浓度的PBMC(外周血单核细胞)2ml培养于24孔培养板中，作为效应淋巴细胞，同时，将另外一部分PBMC按2×10⁶/ml浓度稀释于RPMI 1640培养基中，加入肿瘤抗原肽40ug/ml，37℃孵育2小时后，经30GY ⁶⁰Coγ射线照射，离心，洗去剩余肽，作为抗原细胞，按效应细胞：APC为1.3∶1的APC细胞数，将抗原细胞加入上述效应细胞共同培养，于24小时后加入IL-2(澳大利亚Ludwig Institute for Cancer Research提供)25U/ml继续培养。以后每隔7天，按效应细胞：抗原细胞为1.3∶1的抗原细胞数量将抗原提呈细胞加入效应细胞中再刺激3次，于第28天检测CTL的杀伤效应。杀伤实验按下述进行：(1)采用非放射性细胞毒分析盒，测定CTL与靶细胞共培养后LDH释放值检测CTL的杀伤效应。按照试剂盒推荐程序操作。所用的培养基为含3％FCS的无酚红RPMI 1640，每种反应均设3个复孔，同时测定靶细胞自发释放值、靶细胞最大释放值、效应细胞自发释放值、体积校正值和培养基背景值。应用如下公式计算杀伤效应：杀伤效应(％)＝(实验值-效应细胞自发释放值-靶细胞自发释放值)/(靶细胞最大释放值-靶细胞自发释放值)×100。(2)混合淋巴细胞与靶细胞共培养4小时后，观察淋巴细胞与靶细胞的形态学变化。28天后，外周血单核细胞扩增了28倍，其中CD3阳性细胞的比例上升了15％(从48％到63％)，CTL比例上升了18％(从30％到48％)。当效应细胞∶靶细胞为10∶1时，CTL对肿瘤抗原肽(由上海吉尔生化有限公司合成)孵育的自体淋巴母细胞的杀伤效应为51.4％，对肿瘤抗原BJ-TSA-9阳性的肿瘤细胞的杀伤效应为35.5％，两者均明显高于对自体淋巴母细胞的杀伤效应(13.6％)和肿瘤抗原BJ-TSA-9阴性的肿瘤细胞的杀伤效应(1.84％)；当效应细胞∶靶细胞为3.3∶1时，CTL对肿瘤抗原肽孵育的的自体淋巴母细胞的杀伤效应为53.5％，明显高于对自体淋巴母细胞的杀伤效应(15.5％)。

这些结果说明肿瘤抗原BJ-TSA-9的肿瘤抗原肽能从肿瘤病人的PBMC中有效的诱导出具有特异杀伤肿瘤细胞的CTL，从而增强肿瘤病人清除肿瘤的能力。

实施例7、CTL细胞被肿瘤抗原肽刺激后分泌IFN γ能力的检测

参照中华医学杂志(81：1234，2001)中的实验方法。用酶联免疫斑点检测法(ELISPOT)进行IFN-γ的定量。96孔平底硝酸纤维素板(购自法国Millipore公司)，用抗人IFN γ单抗(溶于pH9.6碳酸盐缓冲液中，终浓度为2ug/ml)包被，4℃过夜；第2天用含0.05％Tween 20的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后，用含10％AB血清的RPMI 1640培养液室温避光封闭1小时，再以0.05％Tween PBS洗涤，加入经7天诱导的效应细胞(effector cells，E)5×10⁴个/孔。此后实验分两组进行，即效应细胞与T2细胞组(E+T2)、效应细胞与T2细胞加载肿瘤抗原肽组(E+T2肿瘤抗原肽)，每组各作两复孔。单纯T2细胞及加载了10ug/ml肿瘤抗原肽的T2细胞在无血清RPMI 1640中，37℃、5％CO₂条件下孵育2小时，经⁶⁰Coγ射线100GY照射，用无血清RPMI 1640洗去多余的抗原肽后作为刺激细胞，以1×10⁵个/孔加入各效应细胞孔；该反应体系在不含细胞因子及血清的RPMI 1640培养液中，37℃、5％CO₂条件下孵育18～20h后，用0.05％TweenPBS充分冲洗培养板以去除残留细胞；随后加入0.2ug/ml生物素标记的抗人IFNγ二抗，于37℃孵育2小时，洗板；再加入碱性磷酸酶标记的链霉亲和素1ug/ml，室温下避光孵育1小时；洗板，加入底物显色液，避光显色5分钟，自来水冲洗，终止反应。待反应板晾干后，于解剖显微镜下计数每孔呈黑紫色的斑点数，求出两复孔的平均值。E+T2肿瘤抗原肽组斑点数减去E+T2组斑点数即为肿瘤抗原特异的CTL细胞频数。ELISPOT检测中，以产生IFN γ的CD8⁺T细胞的频数为指标，分别在肿瘤组织表达BJ-TSA-9mRNA的患者中测出对肿瘤抗原BJ-TSA-9的应答者，而在癌组织无BJ-TSA-9mRNA表达的患者中均未检测到相应的特异免疫应答。本实验为进一步应用肿瘤抗原BJ-TSA-9及抗原肽治疗肿瘤的临床体内实验提供了依据。

应用本发明提供的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽可以提供活化抗肿瘤免疫的医药、可提供肿瘤的诊断方法。抗本发明中的肿瘤抗原蛋白质或肿瘤抗原肽的抗体可用于亲和层析、cDNA文库的筛选、免疫学诊断或医药的制备。

序列表

序列1为肿瘤特异性抗原蛋白质BJ-TSA-9的氨基酸序列

序列长度：367

拓扑学：线性

序列种类：肽

来源：

生物名：人(Homo sapiens)

组织种类：肺癌组织

序列特征：

特征的记号：肽

存在位置：164～172

序列1：

Met Ser Arg Ser Arg His Leu Gly Lys Ile Arg Lys Arg Leu Glu Asp

1               5                   10                   15

Val Lys Ser Gln Trp Val Arg Pro Ala Arg Ala Asp Phe Ser Asp Asn

            20                  25                  30

Glu Ser Ala Arg Leu Ala Thr Asp Ala Leu Leu Asp Gly Gly Ser Glu

        35                  40                  45

Ala Tyr Trp Arg Val Leu Ser Gln Glu Gly Glu Val Asp Phe Leu Ser

    50                  55                  60

Ser Val Glu Ala Gln Tyr Ile Gln Ala Gln Ala Arg Glu Pro Pro Cys

65                  70                  75                  80

Pro Pro Asp Thr Leu Gly Gly Ala Glu Ala Gly Pro Lys Gly Leu Asp

                85                  90                  95

Ser Ser Ser Leu Gln Ser Gly Thr Tyr Phe Pro Val Ala Ser Glu Gly

            100                 105                 110

Ser Glu Pro Ala Leu Leu His Ser Trp Ala Ser Ala Glu Lys Pro Tyr

        115                 120                 125

Leu Lys Glu Lys Ser Ser Ala Thr Val Tyr Phe Gln Thr Val Lys His

    130                 135                 140

Asn Asn Ile Arg Asp Leu Val Arg Arg Cys Ile Thr Arg Thr Ser Gln

145                 150                 155                 160

Val Leu Val Ile Leu Met Asp Val Phe Thr Asp Val Glu Ile Phe Cys

                165                 170                 175

Asp Ile Leu Glu Ala Ala Asn Lys Arg Gly Val Phe Val Cys Val Leu

            180                 185                 190

Leu Asp Gln Gly Gly Val Lys Leu Phe Gln Glu Met Cys Asp Lys Val

        195                 200                 205

Gln Ile Ser Asp Ser His Leu Lys Asn Ile Ser Ile Arg Ser Val Glu

    210                 215                 220

Gly Glu Ile Tyr Cys Ala Lys Ser Gly Arg Lys Phe Thr Gly Gln Ile

225                 230                 235                 240

Arg Glu Lys Phe Ile Ile Ser Asp Trp Arg Phe Val Leu Ser Gly Ser

                245                 250                 255

Tyr Ser Phe Thr Trp Leu Cys Gly His Val His Arg Asn Ile Leu Ser

            260                 265                 270

Lys Phe Thr Gly Gln Ala Val Glu Leu Phe Asp Glu Glu Phe Arg His

        275                 280                 285

Leu Tyr Ala Ser Ser Lys Pro Val Met Gly Leu Lys Ser Pro Arg Leu

    290                 295                 300

Val Ala Pro Val Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala Asn Gly Arg Leu Ser

305                 310                 315                 320

Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ser Asp Arg Thr Ser Ser Asn Pro Phe Ser

                325                 330                 335

Gly Arg Ser Ala Gly Ser His Pro Val Pro Glu Ser Lys Gln Asn Lys

340                             345                 350

Thr Lys Thr Lys Lys Gln Thr Thr Leu Trp Phe Leu Met Ala Phe

        355                 360                 365

序列2为肿瘤特异性抗原蛋白质基因BJ-TSA-9的核苷酸序列

序列长度：1936

链型：双链

拓扑学：线性

序列种类：cDNA至mRNA

假设序列：无

反义：无

起源：

生物名：人(Homo sapiens)

组织种类：肺癌组织

序列特征：

特征的表示记号：5’UTR

存在位置：1..254

特征的表示记号：CDS

存在位置：256..1358

特征的表示记号：3’UTR

存在位置：1359..1936

序列2：

ccagcgccac tgtgtacttc cagaccgtca agcacaacaa catcagagac ctcgtccgcc     60

gctgcatcac ccggactaat tgctcaggac agcggtaaat cacttcttgg aggtgccctg    120

cacgctggtc ctgggagcag gcggcctccc gggggtgcgg gagccccact cctccgtggt    180

gtgttccatt tgcttcccac atctggagga gctgacgtgc cagcctcccc cagcaccacc    240

cagggacggg aggcatgagc cggtcaaggc acctgggcaa aatccggaag cgtctggaag    300

atgtcaagag ccagtgggtc cggccagcca gggctgactt tagtgacaac gagagtgccc    360

ggctggccac ggacgccctc ttggatgggg gttctgaagc ctactggcgg gtgctcagcc    420

aggaaggcga ggtggacttc ttgtcctcgg tggaggccca gtacatccag gcccaggcca    480

gggagccccc gtgtccccca gacaccctgg gaggggcgga agcaggccct aagggactgg     540

actccagctc cctacagtcc ggcacctact tccctgtggc ctcagagggc agcgagccgg     600

ccctactgca cagctgggcc tcagctgaga agccctacct gaaggaaaaa tccagcgcca     660

ctgtgtactt ccagaccgtc aagcacaaca acatcagaga cctcgtccgc cgctgcatca     720

cccggactag ccaggtcctg gtcatcctga tggatgtgtt cacggatgtg gagatcttct     780

gtgacattct agaggcagcc aacaagcgtg gggtgttcgt ttgtgtgctc ctggaccagg     840

gaggtgtgaa gctcttccag gagatgtgtg acaaagtcca gatctctgac agtcacctca     900

agaacatttc catccggagt gtggaaggag agatatactg tgccaagtca ggcaggaaat     960

tcactggcca aatccgggag aagttcatca tctcggactg gagatttgtc ctgtctggat    1020

cttacagctt cacctggctc tgcggacacg tgcaccggaa catcctctcc aagttcacag    1080

gccaggcggt ggagctgttt gacgaggagt tccgccacct ctacgcctcc tccaagcctg    1140

tgatgggcct gaagtccccg cggctggtcg cccccgtccc gcccggagca gccccggcca    1200

atggccgcct tagcagcagc agtggctccg ccagtgaccg cacgtcctcc aaccccttca    1260

gcggccgctc ggcaggcagc caccccgttc ctgaaagtaa acaaaacaaa acaaaaacaa    1320

aaaaacaaac aacactttgg ttcctgatgg ctttctgaac ccagccctga ccttgttgtt    1380

tcacagctga cggctgagat gaggttagaa tgactgggcc cggctgaaca ttccaaattg    1440

gatttcacca tctgctgaga aagtttaagg aaggcaaagc ttgccaggtc acagaagctc    1500

ccaagcccag ctttccaaag gcctcagcct gtgcctgtgt cgagctcagt cctgggagat    1560

aggggagaac ctgcaggcag gaacaagccc ccctactcct gaccaccctc catcagcagt    1620

ctcccctccg tggtcgtctt tgttgacaaa ggtgcagttt ctcctctcct gggcacctgt    1680

aacatgtgat gcgctgcctg ctgggaggt taggtcggggc tgccccggcg agtggagcat    1740

gagcagaacc gccgagggtc acttctgggc agaagctttg agagcctggg tccaggttgc    1800

cacatagaag cagctctcca gttgaaaccc tcctctgcca gcctggggtc ctaagcgatg    1860

agcagaatcc cccactccca ccccaccaac ccacaatgga tatgtagtga gcaagaaata    1920

aacctttgtt gtttaa                                                    1936

               FPI05129sequence-listing.txt

        SEQUENCE LISTING

<110>北京大学

<120>一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽

<130>FPI05129

<160>2

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>367

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>1

Met Ser Arg Ser Arg His Leu Gly Lys Ile Arg Lys Arg Leu Glu Asp

1               5                   10                  15

Val Lys Ser Gln Trp Val Arg Pro Ala Arg Ala Asp Phe Ser Asp Asn

            20                  25                  30

Glu Ser Ala Arg Leu Ala Thr Asp Ala Leu Leu Asp Gly Gly Ser Glu

        35                  40                  45

Ala Tyr Trp Arg Val Leu Ser Gln Glu Gly Glu Val Asp Phe Leu Ser

    50                  55                  60

Ser Val Glu Ala Gln Tyr Ile Gln Ala Gln Ala Arg Glu Pro Pro Cys

65                  70                  75                  80

Pro Pro Asp Thr Leu Gly Gly Ala Glu Ala Gly Pro Lys Gly Leu Asp

                85                  90                  95

Ser Ser Ser Leu Gln Ser Gly Thr Tyr Phe Pro Val Ala Ser Glu Gly

            100                 105                 110

Ser Glu Pro Ala Leu Leu His Ser Trp Ala Ser Ala Glu Lys Pro Tyr

        115                 120                 125

Leu Lys Glu Lys Ser Ser Ala Thr Val Tyr Phe Gln Thr Val Lys His

    130                 135                 140

Asn Asn Ile Arg Asp Leu Val Arg Arg Cys Ile Thr Arg Thr Ser Gln

145                 150                 155                 160

Val Leu Val Ile Leu Met Asp Val Phe Thr Asp Val Glu Ile Phe Cys

                165                 170                 175

Asp Ile Leu Glu Ala Ala Asn Lys Arg Gly Val Phe Val Cys Val Leu

            180                 185                 190

Leu Asp Gln Gly Gly Val Lys Leu Phe Gln Glu Met Cys Asp Lys Val

        195                 200                 205

Gln Ile Ser Asp Ser His Leu Lys Asn Ile Ser Ile Arg Ser Val Glu

    210                 215                 220

Gly Glu Ile Tyr Cys Ala Lys Ser Gly Arg Lys Phe Thr Gly Gln Ile

225                 230                 235                 240

Arg Glu Lys Phe Ile Ile Ser Asp Trp Arg Phe Val Leu Ser Gly Ser

                245                 250                 255

Tyr Ser Phe Thr Trp Leu Cys Gly His Val His Arg Asn Ile Leu Ser

            260                 265                 270

Lys Phe Thr Gly Gln Ala Val Glu Leu Phe Asp Glu Glu Phe Arg His

        275                 280                 285

Leu Tyr Ala Ser Ser Lys Pro Val Met Gly Leu Lys Ser Pro Arg Leu

    290                 295                 300

Val Ala Pro Val Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala Asn Gly Arg Leu Ser

305                 310                 315                 320

Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ser Asp Arg Thr Ser Ser Asn Pro Phe Ser

                325                 330                 335

Gly Arg Ser Ala Gly Ser His Pro Val Pro Glu Ser Lys Gln Asn Lys

            340                 345                 350

Thr Lys Thr Lys Lys Gln Thr Thr Leu Trp Phe Leu Met Ala Phe

        355                 360                 365

<210>2

<211>1936

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>2

ccagcgccac tgtgtacttc cagaccgtca agcacaacaa catcagagac ctcgtccgcc   60

gctgcatcac ccggactaat tgctcaggac agcggtaaat cacttcttgg aggtgccctg  120

cacgctggtc ctgggagcag gcggcctccc gggggtgcgg gagccccact cctccgtggt  180

gtgttccatt tgcttcccac atctggagga gctgacgtgc cagcctcccc cagcaccacc  240

cagggacggg aggcatgagc cggtcaaggc acctgggcaa aatccggaag cgtctggaag  300

atgtcaagag ccagtgggtc cggccagcca gggctgactt tagtgacaac gagagtgccc  360

ggctggccac ggacgccctc ttggatgggg gttctgaagc ctactggcgg gtgctcagcc  420

aggaaggcga ggtggacttc ttgtcctcgg tggaggccca gtacatccag gcccaggcca  480

gggagccccc gtgtccccca gacaccctgg gaggggcgga agcaggccct aagggactgg  540

actccagctc cctacagtcc ggcacctact tccctgtggc ctcagagggc agcgagccgg  600

ccctactgca cagctgggcc tcagctgaga agccctacct gaaggaaaaa tccagcgcca  660

ctgtgtactt ccagaccgtc aagcacaaca acatcagaga cctcgtccgc cgctgcatca  720

cccggactag ccaggtcctg gtcatcctga tggatgtgtt cacggatgtg gagatcttct  780

gtgacattct agaggcagcc aacaagcgtg gggtgttcgt ttgtgtgctc ctggaccagg  840

gaggtgtgaa gctcttccag gagatgtgtg acaaagtcca gatctctgac agtcacctca  900

agaacatttc catccggagt gtggaaggag agatatactg tgccaagtca ggcaggaaat     960

tcactggcca aatccgggag aagttcatca tctcggactg gagatttgtc ctgtctggat    1020

cttacagctt cacctggctc tgcggacacg tgcaccggaa catcctctcc aagttcacag    1080

gccaggcggt ggagctgttt gacgaggagt tccgccacct ctacgcctcc tccaagcctg    1140

tgatgggcct gaagtccccg cggctggtcg cccccgtccc gcccggagca gccccggcca    1200

atggccgcct tagcagcagc agtggctccg ccagtgaccg cacgtcctcc aaccccttca    1260

gcggccgctc ggcaggcagc caccccgttc ctgaaagtaa acaaaacaaa acaaaaacaa    1320

aaaaacaaac aacactttgg ttcctgatgg ctttctgaac ccagccctga ccttgttgtt    1380

tcacagctga cggctgagat gaggttagaa tgactgggcc cggctgaaca ttccaaattg    1440

gatttcacca tctgctgaga aagtttaagg aaggcaaagc ttgccaggtc acagaagctc    1500

ccaagcccag ctttccaaag gcctcagcct gtgcctgtgt cgagctcagt cctgggagat    1560

aggggagaac ctgcaggcag gaacaagccc ccctactcct gaccaccctc catcagcagt    1620

ctcccctccg tggtcgtctt tgttgacaaa ggtgcagttt ctcctctcct gggcacctgt    1680

aacatgtgat gcgctgcctg ctgggaggtt aggtcggggc tgccccggcg agtggagcat    1740

gagcagaacc gccgagggtc acttctgggc agaagctttg agagcctggg tccaggttgc    1800

cacatagaag cagctctcca gttgaaaccc tcctctgcca gcctggggtc ctaagcgatg    1860

agcagaatcc cccactccca ccccaccaac ccacaatgga tatgtagtga gcaagaaata    1920

aacctttgtt gtttaa                                                    1936

Claims (8)

1.一种肿瘤抗原蛋白质在制备用作肿瘤特异性抗原的药物中的应用，其中，所述蛋白质通过细胞内分解，能产生与主要组织相容性复合体MHC-I类分子相结合的、能被T细胞所识别的肽片段，所述肿瘤抗原蛋白质的氨基酸序列为序列1所示的氨基酸序列。

2.权利要求1中所述的肿瘤抗原蛋白质在制备用于治疗肺癌的药物中的应用。

3.编码权利要求1中所述的肿瘤抗原蛋白质的DNA序列在制备用作肿瘤特异性抗原基因的药物中的应用。

4.一种肿瘤抗原肽，其特征在于，所述肿瘤抗原肽的氨基酸序列为序列1所示氨基酸序列中的第164位～第172位的氨基酸序列。

5.权利要求4所述的肿瘤抗原肽在制备用作肿瘤特异性抗原基因的药物中的应用。

6.权利要求4所述的肿瘤抗原肽在制备用于治疗肺癌的药物中的应用。

7.一种DNA序列，其特征在于，该DNA序列编码权利要求4所述的肿瘤抗原肽。

8.权利要求7所述的DNA序列在制备用作作为肿瘤特异性抗原基因的药物中的应用。

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