CN100393746C - 一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽。该肿瘤抗原蛋白质通过细胞内分解，能产生与主要组织相容性复合体(MHC)-I类分子相结合的、能被T细胞所识别的肽片段。编码该肿瘤抗原蛋白质的DNA序列具有在基因文库中登录号为TSPYNM 003308的序列的核苷酸序列。该肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽可用于制备治疗肝癌的药物。

Description

一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽

技术领域

本发明涉及一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽，特别是涉及一种用于治疗肝癌的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽。

背景技术

肿瘤的发生和机体的免疫状态有关，肿瘤病人往往伴有细胞免疫功能减退，而细胞免疫在清除肿瘤中起主要作用。肿瘤的免疫原性弱，不能诱发机体产生足以抵抗肿瘤的抗体。肿瘤的某些产物对宿主有免疫抑制作用，所以肿瘤患者的免疫系统难以对肿瘤发动有力的攻击。抗癌药一般均为免疫抑制剂，在治疗肿瘤的同时又降低了患者的免疫力，放化疗不仅难以治愈肿瘤而且还会导致第二种肿瘤的发生。所以在恶性肿瘤的治疗中，如何提高患者的免疫功能，就成为恶性肿瘤治疗成败的关键。

已知人体内的免疫系统，包括体液免疫与细胞免疫，尤其是T细胞免疫对肿瘤的杀伤抑制起着重要作用。随着人们对免疫应答反应本质的认识，人们发现不管免疫应答的过程多么复杂，最终导致T细胞活化而产生杀伤效应的就是与主要组织相容性复合体MHC相结合形成抗原肽复合物和共刺激信号，即：细胞毒性T细胞(CTL)通过自身表面的T细胞受体(TCR)，识别表达于肿瘤细胞表面的肿瘤抗原蛋白质/肽与主要组织相容性复合体(MHC)I类抗原相结合形成的复合体，从而攻击杀伤肿瘤细胞。

肿瘤抗原蛋白质/肽的产生是由肿瘤细胞先表达成肿瘤抗原，其在细胞内由各种蛋白酶分解成8～10个氨基酸大小的抗原肽，这些抗原肽与内质网中产生的MHC I类分子结合，通过高尔基复合体表达于细胞的表面，最终给肿瘤抗原特异的CTL，从而诱发免疫应答，杀伤清除肿瘤细胞。这种存在于肿瘤细胞中、能与MHC分子结合并诱发机体免疫反应的蛋白质抗原分子即为肿瘤抗原。可以用这些抗原诱导机体产生只针对肿瘤细胞的免疫应答反应，从而特异杀伤体内的肿瘤细胞而达到治疗或者防治肿瘤细胞转移的作用。近几十年来，人们把用免疫方法治疗肿瘤的重点放在寻找肿瘤特异和/或相关性抗原上。

在二十世纪五十年代，Foley等人把经化学诱变产生肿瘤的小鼠用灭活的自身肿瘤细胞免疫后，再给该小鼠接种活的肿瘤细胞，这些肿瘤细胞被排斥而不能生长成肿瘤，小鼠则存活；而没用灭活的自身肿瘤细胞免疫的小鼠接种活的肿瘤细胞后，肿瘤细胞不被排斥而生长成肿瘤，小鼠则死亡。此实验以令人信服的证据证明了化学诱变的肿瘤存在肿瘤特异性抗原，但是这种保护反应有着精确的特异性，即只针对相同类型的肿瘤而不针对不同类型的肿瘤，即使是对用同一致癌剂在同一小鼠上诱导的不同类型肿瘤也没有保护作用。

1991年，T.Boon等首次从人黑色素瘤细胞中鉴定出肿瘤抗原蛋白质，并命名为MAGE(科学，254：1643-1647，1991)。随后，人们又鉴定出来其它一些肿瘤抗原蛋白质，可以分为肿瘤-睾丸(CT)抗原蛋白质、分化抗原蛋白质、突变的肿瘤抗原蛋白质、过表达的肿瘤抗原蛋白质和病毒抗原蛋白质五类。其中，应用于临床上最为广泛的是肿瘤-睾丸(CT)抗原蛋白质。

肿瘤-睾丸(CT)抗原蛋白质是目前鉴定的肿瘤抗原中最多的一类，它们编码基因的特点是在很多类型的肿瘤中都有表达，如在黑色素瘤、肺癌、肉瘤和膀胱癌中都有表达，但在除睾丸外的正常组织都不表达，在胎盘、卵巢、胰腺中有一定量的表达。因为睾丸是免疫特许部位，所以这一类抗原在治疗上被认为是肿瘤特异性的抗原，是最有希望用作为肿瘤免疫治疗用途的一类抗原。目前试用于临床上的也主要就是这一类抗原，如MAGE-1和NY-ESO-1即是在一定类型的肿瘤中有高阳性率的表达，又有很好的免疫原性的抗原蛋白质，用于肿瘤的免疫治疗时有很好的前景。

到目前为止，最具代表性的鉴定肿瘤抗原蛋白质的方法为：基于特异性细胞免疫应答基础上的文库筛选法、基于体液免疫应答基础上的cDNA表达文库筛选法、组合肽文库筛选、酸洗脱法、生物信息学方法和cDNA microarray方法。

肝癌是人类肿瘤中最为常见与最为恶性的肿瘤，尤其是近些年来，发病率逐渐增加。肝癌由于恶性度高，生长迅速，一旦发现就已经是中晚期，目前，对肝癌的治疗主要是传统的手术切除和放疗等局部治疗方法，但由于大部分患者确诊时都已进入了中晚期，并且肝癌对放疗与化疗有相当的抵抗性。因此治疗的效果和预后往往较差，肝癌病人的一年与五年存活率与其它各类肿瘤病人的存活率相比是很低的。寻找治疗方法上的突破或者是新的治疗方法一直是临床肿瘤学家追求的目标，人们期待着有新的方法来提高肝癌的早期诊断与病人良好的预后，以及术后清除体内残留的肿瘤细胞和防止肿瘤细胞的转移。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于肝癌治疗的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽。

本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：

本发明提供一种肿瘤抗原蛋白质，该蛋白质通过细胞内分解，能产生与主要组织相容性复合体(MHC)-I类分子相结合的、能被T细胞所识别的肽片段，其具有如下(a)或(b)所述的氨基酸序列：

(a)具有序列1所示的氨基酸序列；

(b)将(a)中的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代，缺失或添加突变所产生的衍生蛋白质，且该衍生蛋白质与(a)的蛋白质具有相同的功能。

本发明提供一种DNA序列，它编码所述的肿瘤抗原蛋白质。

本发明所述的DNA序列具有序列2所示的核苷酸序列，基因文库中登录号为：TSPYNM 003308。

本发明提供所述的蛋白质作为肿瘤-睾丸抗原的应用。

本发明提供所述的基因作为肿瘤-睾丸抗原基因的应用。

本发明提供一种与所述肿瘤抗原蛋白质所产生的肽片段同等功能的肿瘤抗原肽，其具有序列1中氨基酸序列的第70位～第78位的氨基酸序列。

本发明所述的肿瘤抗原蛋白质在制备治疗肝癌药物中的应用。

本发明所述的肿瘤抗原肽在制备治疗肝癌药物中的应用。

本发明提供的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽的优益之处在于：本发明首次将TSPY基因鉴定为肿瘤-睾丸抗原基因；在使用免疫方法治疗癌症时，可以用这些抗原诱导机体产生只针对肿瘤细胞的免疫应答反应，在不杀伤正常细胞的同时，特异杀伤体内的肿瘤细胞达到治疗或者防治肿瘤细胞转移的作用；同时，可以通过对该肿瘤抗原基因或抗体的检测，对肿瘤的发生、发展以及是否有转移进行诊断。

附图说明

图1是编码本发明抗原蛋白质的基因TSPY在16种成人正常组织的RT-PCR检测结果；图中的1～16分别代表成人正常组织脾、前列腺、卵巢、小肠、大肠、白细胞、心脏、肺、肝、脑、肾、胎盘、睾丸、骨骼肌、胰腺、胸腺。

图2是编码本发明抗原蛋白质的基因TSPY在肝癌的癌组织与配对的癌旁组织的RT-PCR结果；图中的T代表癌组织，N代表配对的癌旁组织。

图3是TSPY在肝癌组织的原位杂交结果，其中A图为实验组，B图为正义探针的对照组。

图4是通过Western blot方法检测本发明抗原蛋白质在大肠杆菌中的重组蛋白与肝癌病人血清反应的代表性结果；图中的1代表蛋白质分子量标准参照，2-15代表表达有本发明中的肿瘤-睾丸抗原重组蛋白的大肠杆菌裂解物与肝癌病人血清反应的结果，16-17代表表达有本发明中的肿瘤-睾丸抗原重组蛋白的大肠杆菌裂解物与正常人血清反应的结果。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明提供的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽进行更为详尽的说明。

实施例1、cDNA microarray(cDNA微阵列)分析

为寻找肝癌组织与癌旁组织中差异表达的基因，我们利用市售的AFFYMETRIX的人基因组U-133A芯片分析了18,000多个基因在肝癌及癌旁组织中的差异表达。在数据分析中我们发现一睾丸特异基因TSPY在肝癌组织中高表达，所述的TSPY基因在基因文库中的登录号为TSPYNM 003308，其具有序列2所示的核苷酸序列。

实施例2、用RT-PCR的方法来分析TSPY基因的表达

生物技术公司CLONTECH的16种商品化的人正常组织的cDNA(脾、前列腺、睾丸、卵巢、小肠、大肠、自细胞、心脏、肺、肝、脑、肾、胰腺、胎盘、骨骼肌、胸腺)、来源于57例肝癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA、来源于19例肾癌癌组织与配对的癌旁组织的cDNA、来源于13例肺癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA、来源于10例胃癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA及来源于8例膀胱癌病人的癌组织与配对的癌旁组织的cDNA被用来检测TSPY基因在正常组织与肿瘤组织的表达情况。

本发明中进行RT-PCR的条件：应用申能博采公司的DNA聚合酶，94℃、20秒；58℃、20秒；72℃、20秒；32循环之后，72℃、7分钟。进行RT-PCR的引物序列，正向引物：CAGGGCTTCTCATTCCACTC；反向引物：CCATCATATTCAACTCAACAACTGG。结果发现：TSPY基因只在正常睾丸表达，在人的其他正常组织中均不表达(如图1所示)；TSPY基因在35％的肝癌标本、5％的肾癌中表达，而与之配对的癌旁组织均不表达(如图2所示)。

实施例3、原位杂交

为确定TSPY的细胞定位，进一步证明该基因与肝癌的相关性，以肝癌组织的石蜡切片为材料，进行了原位杂交。

以上游引物CAGGGCTTCTCATTCCACTC  和下游引物CCATCATATTCAACTCAACAACTGG扩增的PCR产物构建成质粒(Real time PCR中的标准品质粒)，测序证实序列正确。用DIG RNA labeling Kit(T7/SP6)(Roche)按试剂盒说明分别标记正义及反义RNA探针。

简要操作步骤如下：制备6μm厚的石蜡切片，经脱蜡、水化处理后，用0.2M的盐酸室温处理10min，PBS洗涤2×5秒，用20μg/ml的蛋白酶K在37℃消化30分钟。PBS洗涤2×5秒，用4％多聚甲醛固定10分钟。PBS洗涤3×5秒，70％，95％，100％梯度乙醇脱水。每个切片滴加30μl预杂交液(50％甲酰胺，10％dextran sulfate，1×Denhard’s溶液，20mM Tris-HCl(pH 8.0)，300mM NaCl，1mM EDTA，250μg/ml酵母tRNA)，50℃预杂交60分钟。然后用含0.5μg/ml的探针的杂交液，50℃杂交16小时。杂交后用2×SSC，50％甲酰胺37℃洗涤30分钟，然后用2×SSC37℃洗涤2×15分钟，0.1×SSC 37℃洗涤2×15分钟。以碱性磷酸酶偶连的地高辛标记的抗体(1∶500稀释)检测杂交信号。蓝紫色的信号为阳性信号。

结果在所检测的肝细胞癌的癌细胞检测到TSPY的表达，而在癌旁组织中未见表达。而用正义对照探针杂交未见到阳性杂交信号(如图3所示)。

实施例4、TSPY基因重组蛋白质在大肠杆菌中的表达

应用pQE30原核表达载体(INVOTRIGEN)，在大肠杆菌菌株M15(INVOTRIGEN)中，37℃生长条件下，IPTG诱导重组蛋白质表达6小时。SDS-PAGE蛋白电泳对重组蛋白的表达进行鉴定。之后，应用镍离子亲和层析柱子(INVOTRIGEN)将重组蛋白质从大肠杆菌全蛋白中分离、纯化出来。用抗重组蛋白带有的6个组氨酸的单克隆抗体，通过Western杂交方法，对重组蛋白进行鉴定。

实施例5、用Western杂交方法检测肝癌病人血清中的TSPY重组蛋白的抗体

参照实验医学杂志，187：1349，1998中的方法，筛选TSPY mRNA转录本阳性的肿瘤病人的血清，发现在肿瘤病人的血清中存在抗TSPY重组蛋白的抗体(图4)。因此，TSPY是一个新的肿瘤-睾丸抗原，具有诱导肿瘤病人产生免疫应答，杀伤肿瘤细胞的能力，有应用于肿瘤的临床免疫治疗的潜能。

实施例6、应用肿瘤抗原肽体外诱导CTL的形成与CTL体外杀伤实验

参照中华普通外科杂志(17：218，2002)中的实验方法。将2×10⁶/ml浓度的PBMC(外周血单核细胞)2ml培养于24孔培养板中，作为效应淋巴细胞，同时，将另外一部分PBMC按2×10⁶/ml浓度稀释于RPMI 1640培养基中，加入肿瘤抗原肽40ug/ml，37℃孵育2小时后，经30GY⁶⁰Coγ射线照射，离心，洗去剩余肽，作为抗原细胞，按效应细胞∶APC为1.3∶1的APC细胞数，将抗原细胞加入上述效应细胞共同培养，于24小时后加入IL-2(澳大利亚Ludwig Institute for Cancer Research提供)25U/ml继续培养。以后每隔7天，按效应细胞∶抗原细胞为1.3∶1的抗原细胞数量将抗原提呈细胞加入效应细胞中再刺激3次，于第28天检测CTL的杀伤效应。杀伤实验按下述进行：(1)采用非放射性细胞毒分析盒，测定CTL与靶细胞共培养后LDH释放值检测CTL的杀伤效应。按照试剂盒推荐程序操作。所用的培养基为含3％FCS的无酚红RPMI 1640，每种反应均设3个复孔，同时测定靶细胞自发释放值、靶细胞最大释放值、效应细胞自发释放值、体积校正值和培养基背景值。应用如下公式计算杀伤效应：杀伤效应(％)＝(实验值-效应细胞自发释放值-靶细胞自发释放值)/(靶细胞最大释放值-靶细胞自发释放值)×100。(2)混合淋巴细胞与靶细胞共培养4小时后，观察淋巴细胞与靶细胞的形态学变化。28天后，外周血单核细胞扩增了32倍，其中CD3阳性细胞的比例上升了18％(从50％到68％)，CTL比例上升了20％(从32％到52％)。当效应细胞∶靶细胞为10∶1时，CTL对肿瘤抗原肽(由上海吉尔生化有限公司合成)孵育的的自体淋巴母细胞的杀伤效应为52.5％，对肿瘤抗原TSPY阳性的肿瘤细胞的杀伤效应为36.2％，两者均明显高于对自体淋巴母细胞的杀伤效应(15.8％)和肿瘤抗原TSPY阴性的肿瘤细胞的杀伤效应(1.6％)；当效应细胞∶靶细胞为3.3∶1时，CTL对肿瘤抗原肽孵育的的自体淋巴母细胞的杀伤效应为52.3％，明显高于对自体淋巴母细胞的杀伤效应(14.3％)。这些结果说明肿瘤抗原TSPY的肿瘤抗原肽能从肿瘤病人的PBMC中有效的诱导出具有特异杀伤肿瘤细胞的CTL，从而增强肿瘤病人清除肿瘤的能力。

实施例7、CTL细胞被肿瘤抗原肽刺激后分泌IFNγ能力的检测

参照中华医学杂志(81：1234，2001)中的实验方法。用酶联免疫斑点检测法(ELISPOT)进行IFN-γ的定量。96孔平底硝酸纤维素板(购自法国Millipore公司)，用抗人IFNγ单抗(溶于pH9.6碳酸盐缓冲液中，终浓度为2ug/ml)包被，4℃过夜；第2天用含0.05％Tween 20的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后，用含10％AB血清的RPMI 1640培养液室温避光封闭1小时，再以0.05％Tween PBS洗涤，加入经7天诱导的效应细胞(effector cells，E)5×10⁴个/孔。此后实验分两组进行，即效应细胞与T2细胞组(E+T2)、效应细胞与T2细胞加载肿瘤抗原肽组(E+T2肿瘤抗原肽)，每组各作两复孔。单纯T2细胞及加载了10ug/ml肿瘤抗原肽的T2细胞在无血清RPMI 1640中，37℃、5％CO₂条件下孵育2小时，经⁶⁰Coγ射线100GY照射，用无血清RPMI 1640洗去多余的抗原肽后作为刺激细胞，以1×10⁵个/孔加入各效应细胞孔；该反应体系在不含细胞因子及血清的RPMI 1640培养液中，37℃、5％CO₂条件下孵育18～20h后，用0.05％TweenPBS充分冲洗培养板以去除残留细胞；随后加入0.2ug/ml生物素标记的抗人IFNγ二抗，于37℃孵育2小时，洗板；再加入碱性磷酸酶标记的链霉亲和素1ug/ml，室温下避光孵育1小时；洗板，加入底物显色液，避光显色5分钟，自来水冲洗，终止反应。待反应板晾干后，于解剖显微镜下计数每孔呈黑紫色的斑点数，求出两复孔的平均值。E+T2肿瘤抗原肽组斑点数减去E+T2组斑点数即为肿瘤抗原特异的CTL细胞频数。ELISPOT检测中，以产生IFNγ的CD8⁺T细胞的频数为指标，分别在肿瘤组织表达TSPY mRNA的患者中测出对肿瘤抗原TSPY的应答者，而在癌组织无TSPYmRNA表达的患者中均未检测到相应的特异免疫应答。在部分癌组织表达TSPY mRNA，但血清无TSPY抗体的肿瘤患者中，仍然可以检测到CD8+T细胞对肿瘤抗原TSPY与抗原肽的免疫应答。本实验为进一步应用肿瘤抗原TSPY及抗原肽治疗肿瘤的临床体内实验提供了依据。

应用本发明提供的肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽可以提供活化抗肿瘤免疫的医药、可提供肿瘤的诊断方法。抗本发明中的肿瘤抗原蛋白质或肿瘤抗原肽的抗体可用于亲和层析、cDNA文库的筛选、免疫学诊断或医药的制备。

序列表

序列1为肿瘤-睾丸抗原蛋白质TSPY的氨基酸序列

序列长度：308

拓扑学：线性

序列种类：肽

来源：

生物名：人(Homo sapiens)

组织种类：肝癌组织

序列特征：

特征的记号：肽

存在位置：1..183

序列1：

Met Arg Pro Glu Gly Ser Leu Thr Tyr Arg Val Pro Glu Arg Leu Arg

1               5                   10                  15

Gln Gly Phe Cys Gly Val Gly Arg Ala Ala Gln Ala Leu Val Cys Ala

            20                  25                  30

Ser Ala Lys Glu Gly Thr Ala Phe Arg Met Glu Ala Val Gln Glu Gly

        35                  40                  45

Ala Ala Gly Val Glu Ser Glu Gln Ala Ala Leu Gly Glu Glu Ala Val

    50                  55                  60

Leu Leu Leu Asp Asp Ile Met Ala Glu Val Glu Val Val Ala Glu Glu

65                  70                  75                  80

Glu Gly Leu Val Glu Arg Arg Glu Glu Ala Gln Pro Arg Gln Gln Ala

                85                  90                  95

Val Pro Gly Pro Gly Pro Met Thr Pro Glu Ser Ala Leu Glu Glu Leu

            100                 105                 110

Leu Ala Val Gln Val Glu Leu Glu Pro Val Asn Ala Gln Ala Arg Lys

        115                 120                 125

Ala Phe Ser Arg Gln Arg Glu Lys Met Glu Arg Arg Arg Lys Pro His

    130                 135                 140

Leu Asp Arg Arg Gly Ala Val Ile Gln Ser Val Pro Gly Phe Trp Ala

145                 150                 155                 160

Asn Val Ile Ala Asn His Pro Gln Met Ser Ala Leu Ile Thr Asp Glu

               165                  170                 175

Asp Glu Asp Met Leu Ser Tyr Met Val Ser Leu Glu Val Glu Glu Glu

            180                 185                 190

Lys His Pro Val His Leu Cys Lys Ile Met Leu Phe Phe Arg Ser Asn

        195                 200                 205

Pro Tyr Phe Gln Asn Lys Val Ile Thr Lys Glu Tyr Leu Val Asn Ile

    210                 215                  220

Thr Glu Tyr Arg Ala Ser His Ser Thr Pro Ile Glu Trp Tyr Pro Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Glu Val Glu Ala Tyr Arg Arg Arg His His Asn Ser Ser Leu Asn

                245                 250                 255

Phe Phe Asn Trp Phe Ser Asp His Asn Phe Ala Gly Ser Asn Lys Ile

            260                 265                 270

Ala Glu Ile Leu Cys Lys Asp Leu Trp Arg Asn Pro Leu Gln Tyr Tyr

        275                 280                 285

Lys Arg Met Lys Pro Pro Glu Glu Gly Thr Glu Thr Ser Gly Asp Ser

    290                 295                 300

Gln Leu Leu Ser

305

序列2为肿瘤-睾丸抗原蛋白质基因TSPY的核苷酸序列

序列长度：1159

链型：双链

拓扑学：线性

序列种类：cDNA至mRNA

假设序列：无

反义：无

起源：

生物名：人(Homo sapiens)

组织种类：肝癌组织

序列特征：

特征的表示记号：5’UTR

存在位置：1..45

特征的表示记号：CDS

存在位置：46..972

特征的表示记号：3’UTR

存在位置：973..1159

特征的表示记号：polyA位点

存在位置：1096..1137

序列2：

ggcccttcgc gcgcagtccc ttagggggcg cctggaagcc cgcgcatgcg ccctgagggc      60

tcgctgacct accgggtgcc agagaggctg cggcagggtt tctgtggcgt gggtcgggca     120

gcacaggcct tggtgtgtgc gagtgccaag gagggcaccg ccttcaggat ggaggctgtg     180

caggaggggg cggccggggt ggagagtgag caggcggctt tgggggagga ggcggtgctg     240

ctgttggatg acataatggc ggaggtggag gtggtggcgg aggaggaggg cctcgtggag     300

cggcgggagg aggcccagcc ccgacagcag gctgtgcctg gccctgggcc catgacccca     360

gagtctgcac tggaggagct gctggccgtt caggtggagc tggagccggt taatgcccaa     420

gccaggaagg ccttttctcg gcagcgggaa aagatggagc ggaggcgcaa gccccaccta     480

gaccgcagag gcgccgtcat ccagagcgtc cctggcttct gggccaatgt tattgcaaac     540

cacccccaga tgtcagccct gatcactgac gaagatgaag acatgctgag ctacatggtc     600

agcctggagg tggaagaaga gaagcatcct gttcatctct gcaagatcat gttgttcttt     660

cggagtaacc cctacttcca gaataaagtg attaccaagg aatatctggt gaacatcaca     720

gaatacaggg cttctcattc cactccaatt gagtggtatc cggattatga agtggaggcc     780

tatcgccgca gacaccacaa cagcagcctt aacttcttca actggttctc tgaccacaac     840

ttcgcaggat ctaacaagat tgctgagatc ctatgtaagg acctgtggcg caatcccctg     900

caatactaca agaggatgaa gccacctgaa gagggaacag agacgtcagg ggactcccag     960

ttgttgagtt gaatatgatg gagcatcaga ttttacctaa tacagcagaa ctcctaaaaa    1020

gttacagcca tatgcaggac ggcagtactc agcatggtct tatgcacagg aactaaagga    1080

aaaagagatc gagtcacaaa aattcaggaa gagggggtaa atgtggattg tatggaatga    1140

aaaataaaca ttctcaagg                                                 1159

FPI0511 sequence-listing.txt

SEQUENCE LISTING

<110>北京大学

<120>一种肿瘤抗原蛋白质和肿瘤抗原肽

<130>FPI05111

<160>2

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>308

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>1

Met Arg Pro Glu Gly Ser Leu Thr Tyr Arg Val Pro Glu Arg Leu Arg

1               5                   10                  15

Gln Gly Phe Cys Gly Val Gly Arg Ala Ala Gln Ala Leu Val Cys Ala

            20                  25                  30

Ser Ala Lys Glu Gly Thr Ala Phe Arg Met Glu Ala Val Gln Glu Gly

        35                  40                  45

Ala Ala Gly Val Glu Ser Glu Gln Ala Ala Leu Gly Glu Glu Ala Val

    50                  55                  60

Leu Leu Leu Asp Asp Ile Met Ala Glu Val Glu Val Val Ala Glu Glu

65                  70                  75                  80

Glu Gly Leu Val Glu Arg Arg Glu Glu Ala Gln Pro Arg Gln Gln Ala

                85                  90                  95

Val Pro Gly Pro Gly Pro Met Thr Pro Glu Ser Ala Leu Glu Glu Leu

            100                 105                 110

Leu Ala Val Gln Val Glu Leu Glu Pro Val Asn Ala Gln Ala Arg Lys

        115                 120                 125

Ala Phe Ser Arg Gln Arg Glu Lys Met Glu Arg Arg Arg Lys Pro His

    130                 135                 140

Leu Asp Arg Arg Gly Ala Val Ile Gln Ser Val Pro Gly Phe Trp Ala

145                 150                 155                 160

Asn Val Ile Ala Asn His Pro Gln Met Ser Ala Leu Ile Thr Asp Glu

                165                 170                 175

Asp Glu Asp Met Leu Ser Tyr Met Val Ser Leu Glu Val Glu Glu Glu

            180                 185                 190

Lys His Pro Val His Leu Cys Lys Ile Met Leu Phe Phe Arg Ser Asn

        195                 200                 205

Pro Tyr Phe Gln Asn Lys Val Ile Thr Lys Glu Tyr Leu Val Asn Ile

    210                 215                 220

FPI0511 sequence-listing.txt

Thr Glu Tyr Arg Ala Ser His Ser Thr Pro Ile Glu Trp Tyr Pro Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Glu Val Glu Ala Tyr Arg Arg Arg His His Asn Ser Ser Leu Asn

                245                 250                 255

Phe Phe Asn Trp Phe Ser Asp His Asn Phe Ala Gly Ser Asn Lys Ile

            260                 265                 270

Ala Glu Ile Leu Cys Lys Asp Leu Trp Arg Asn Pro Leu Gln Tyr Tyr

        275                 280                 285

Lys Arg Met Lys Pro Pro Glu Glu Gly Thr Glu Thr Ser Gly Asp Ser

    290                 295                 300

Gln Leu Leu Ser

305

<210>2

<211>1159

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>2

ggcccttcgc gcgcagtccc ttagggggcg cctggaagcc cgcgcatgcg ccctgagggc    60

tcgctgacct accgggtgcc agagaggctg cggcagggtt tctgtggcgt gggtcgggca   120

gcacaggcct tggtgtgtgc gagtgccaag gagggcaccg ccttcaggat ggaggctgtg   180

caggaggggg cggccggggt ggagagtgag caggcggctt tgggggagga ggcggtgctg   240

ctgttggatg acataatggc ggaggtggag gtggtggcgg aggaggaggg cctcgtggag   300

cggcgggagg aggcccagcc ccgacagcag gctgtgcctg gccctgggcc catgacccca   360

gagtctgcac tggaggagct gctggccgtt caggtggagc tggagccggt taatgcccaa   420

gccaggaagg ccttttctcg gcagcgggaa aagatggagc ggaggcgcaa gccccaccta   480

gaccgcagag gcgccgtcat ccagagcgtc cctggcttct gggccaatgt tattgcaaac   540

cacccccaga tgtcagccct gatcactgac gaagatgaag acatgctgag ctacatggtc   600

agcctggagg tggaagaaga gaagcatcct gttcatctct gcaagatcat gttgttcttt   660

cggagtaacc cctacttcca gaataaagtg attaccaagg aatatctggt gaacatcaca   720

gaatacaggg cttctcattc cactccaatt gagtggtatc cggattatga agtggaggcc   780

tatcgccgca gacaccacaa cagcagcctt aacttcttca actggttctc tgaccacaac   840

ttcgcaggat ctaacaagat tgctgagatc ctatgtaagg acctgtggcg caatcccctg   900

caatactaca agaggatgaa gccacctgaa gagggaacag agacgtcagg ggactcccag   960

ttgttgagtt gaatatgatg gagcatcaga ttttacctaa tacagcagaa ctcctaaaaa  1020

gttacagcca tatgcaggac ggcagtactc agcatggtct tatgcacagg aactaaagga  1080

aaaagagatc gagtcacaaa aattcaggaa gagggggtaa atgtggattg tatggaatga  1140

aaaataaaca ttctcaagg                                               1159

Claims (8)

1.一种肿瘤抗原蛋白质在制备用作肿瘤-睾丸抗原的药物中的应用，其中，所述肿瘤抗原蛋白质通过细胞内分解，能产生与主要组织相容性复合体MHC-I类分子相结合的、能被T细胞所识别的肽片段，所述肿瘤抗原蛋白质的氨基酸序列为序列1所示的氨基酸序列。

2.权利要求1中所述的肿瘤抗原蛋白质在制备治疗肝癌药物中的应用。

3.编码权利要求1中所述的肿瘤抗原蛋白质的DNA序列在制备用作肿瘤-睾丸抗原基因的药物中的应用。

4.一种肿瘤抗原肽，其特征在于，所述肿瘤抗原肽的氨基酸序列为序列1所示的氨基酸序列中的第70位～第78位的氨基酸序列。

5.权利要求4所述的肿瘤抗原肽在制备用作肿瘤-睾丸抗原的药物中的应用。

6.权利要求4所述的肿瘤抗原肽在制备治疗肝癌药物中的应用。

7.一种DNA序列，其特征在于，该DNA序列编码权利要求4所述的肿瘤抗原肽。

8.权利要求7所述的DNA序列在制备用作肿瘤-睾丸抗原基因的药物中的应用。

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