CN100386422C - 一种葛仙米藻种的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种葛仙米藻种的制备方法,该方法通过选取藻种、清洗杀菌、匀浆、接种培养,得到大量的葛仙米藻种。本发明与现有技术相比具有以下优点:操作简单、不需要抗生素进行无菌纯化、藻种制备周期短、效率高、因此形成的藻种数量多,适合大规模藻种制备的需要。
Description
技术领域:
本发明涉及微型藻类,更具体涉及葛仙米藻种的制备方法。
背景技术:
念珠藻是属于蓝藻门Cyanophyta蓝藻纲Cyanophyceae段殖藻目Hormogonales念珠藻科Nostocaceae的一类分布地域广、生态环境复杂、形态结构多样的藻类类群,其植物体胶状或革状,成熟植物体有球形、叶状、丝状、泡状等多种形状,中空或实心,营漂浮或着生生长。其原植体由许多直径数微米的纤细藻丝集结成群体,群体形状因“种”而异,如发菜(Nostoc flageliformeKütz.)、地木耳(Nostoc commune)、葛仙米(Nostoc sphaeroides)在新鲜状态下分别呈头发状、扁平耳状或小球状,干燥后程度不等地有所缩变,均具有丰富的营养价值,在《本草纲目》、《本草纲目拾遗》、《陕西中草药》、《梧州府志》、《全国中草药汇编》等医书中已有记载。念珠藻不仅在自然界普遍发生,而且自古以来都是我国民间的传统食物;其中葛仙米,学名:拟球状念珠藻,具有食疗、保健、滋补等功效,营养价值高,是典型的高蛋白、低脂肪、低热值的绿色保健食品;同时又具有药性,常食用能清热解毒,凉血明目,促进新陈代谢;葛仙米的天然生产状况已经衰落,需求和生产产量的矛盾不可回避。随着人类活动的加剧、旅游业的发展、以及过度的采集给生态和环境造成的破坏,使得自然资源日趋萎缩,葛仙米的现天然年产量不足一吨,由于其生长地逐渐缩小,产量在日趋减少。葛仙米在国内外市场很受欢迎,而现有的产量远远满足不了需求,有必要人工养殖葛仙米,以提高其产量,满足人们物质生活水平提高的需求。
中国专利文献:一种培养葛仙米的方法,申请号:99120005.5。该发明是一种培养葛仙米的方法,具体藻种制备中采用的方法是用氨苄青霉素除菌,然后纯培养并诱导藻殖段,最后对藻殖段进行培养,获得藻种。该方法操作复杂,需抗生素进行无菌纯化,藻种制备周期长,形成藻丝的数量相对较少,难以适应大规模培养藻种的需要。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种葛仙米藻种的制备方法,该方法通过选取藻种、清洗杀菌、匀浆、接种培养,得到大量的葛仙米藻种,本发明操作简单,效率高,周期短,适合葛仙米大规模培养藻种的需要。
为了达到上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种葛仙米藻种的制备方法按下列步骤顺序进行:
1、将葛仙米球形群体用水洗净,置于70%-95%乙醇溶液浸泡10-40秒,去杂藻,然后在无菌水或培养液中清洗1-3次;
2、将葛仙米球形群体放入匀浆器中,加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液,匀浆,成丝状藻浆;
3、培养液的配方为:
磷酸氢二钾20-60mg/L、
硫酸镁40-80mg/L、
氯化钙20-40mg/L、
柠檬酸4-8mg/L、
柠檬酸铁铵5-9mg/L、
乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、
碳酸钠5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、
余者为水;
其中微量元素为每1000毫升含:
硼酸1.5-3g、
氯化锰1-2g、
硫酸锌0.1-0.25g、
镍酸钠0.2-0.4g、
硫酸铜0.02-0.1g、
硝酸钴0.03-0.05g、
余者为水;
在培养液中加入其重量0.8-1.5%的琼脂,在灭菌锅灭菌10-20分钟,成固体培养基;
4、将丝状藻浆接种于固体培养基中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,培养8-20天;
5、然后再接种在培养液中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,经10-15天培养,藻丝便可形成微球体即成藻种;
6、制备大规格藻种时,将原培养液去掉,更换成新鲜的培养液,在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中,通气培养。
一种葛仙米藻种的制备方法按下列步骤顺序进行:
1、将葛仙米球形群体用水洗净,置于70%-95%乙醇溶液浸泡10-40秒,去杂藻,然后在无菌水或培养液中清洗1-3次;
2、将葛仙米球形群体放入匀浆器中,加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液,匀浆,成丝状藻浆;
3、培养液的配方为:
磷酸氢二钾20-60mg/L、
硫酸镁40-80mg/L、
氯化钙20-40mg/L、
柠檬酸4-8mg/L、
柠檬酸铁铵5-9mg/L、
乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、
碳酸钠5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、
余者为水;
其中微量元素为每1000毫升含:
硼酸1.5-3g、
氯化锰1-2g、
硫酸锌0.1-0.25g、
镍酸钠0.2-0.4g、
硫酸铜0.02-0.1g、
硝酸钴0.03-0.05g、
余者为水;
4、将接种在培养液中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,经15-25天培养,藻丝便可形成微球体即成藻种;
5、制备大规格藻种时,将原培养液去掉,更换成新鲜的培养液,在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中,通气培养。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
(1)操作过程简单,
(2)不需要抗生素进行无菌纯化,
(3)藻种制备周期短,
(4)种藻群体全部转化为藻丝,因此形成的藻种数量多,适合大规模藻种制备的需要。
具体实施方式:
一种葛仙米藻种的制备方法按下列步骤顺序进行:
1、采集种藻:种藻的获得有两种方式,(1)野生葛仙米群体,(2)人工培养的葛仙米群体;对于野生的葛仙米,如果采集时间距制种时间在2天以上,可先将其晾干,长期保存,在制种之前用培养液充分浸泡使其复水成球状;对于人工培养的葛仙米群体,可在制种前采集,采集时最好处于葛仙米群体生长的对数期,选用表面光泽好、颜色墨黑、生长速度快、群体韧性好的藻体。
2、将葛仙米球形群体用水洗净,置于70%-95%乙醇溶液浸泡10-40秒,去杂藻,然后在无菌水或培养液中清洗1-3次。
3、将葛仙米球形群体放入匀浆器中,加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液,匀浆,成丝状藻浆。
4、培养液的配方为:
磷酸氢二钾20-60mg/L、
硫酸镁40-80mg/L、
氯化钙20-40mg/L、
柠檬酸4-8mg/L、
柠檬酸铁铵5-9mg/L、
乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、
碳酸钠5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、
余者为水;
其中微量元素为每1000毫升含:
硼酸1.5-3g、
氯化锰1-2g、
硫酸锌0.1-0.25g、
镍酸钠0.2-0.4g、
硫酸铜0.02-0.1g、
硝酸钴0.03-0.05g、
余者为水;
在培养液中加入其重量0.8-1.5%的琼脂,在灭菌锅灭菌10-20分钟,成固体培养基。
5、将丝状藻浆接种于固体培养基中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,培养8-20天。
6、然后再接种在培养液中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,经10-15天培养,藻丝便可形成微球体即成藻种。
或者将步骤5和6合并为:将丝状藻浆直接接种在培养液中,培养条件条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,经15-25天培养,藻丝便可形成微球体即成藻种。
7、制备大规格藻种时,将原培养液去掉,更换成新鲜的培养液,在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中,通气培养。
Claims (2)
1.一种葛仙米藻种的制备方法,其特征在于,该方法按下列步骤顺序进行:
(1)、将葛仙米球形群体用水洗净,置于70%-95%乙醇溶液浸泡10-40秒,去杂藻,然后在无菌水或培养液中清洗1-3次;
(2)、将葛仙米球形群体放入匀浆器中,加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液,匀浆,成丝状藻浆;
(3)、培养液的配方为:
磷酸氢二钾20-60mg/L、
硫酸镁40-80 mg/L、
氯化钙20-40mg/L、
柠檬酸4-8mg/L、
柠檬酸铁铵5-9mg/L、
乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、
碳酸钠5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、
余者为水;
其中微量元素为每1000毫升含:
硼酸1.5-3g、
氯化锰1-2g、
硫酸锌0.1-0.25g、
镍酸钠0.2-0.4g、
硫酸铜0.02-0.1g、
硝酸钴0.03-0.05g、
余者为水;
在培养液中加入其重量0.8-1.5%的琼脂,在灭菌锅灭菌10-20分钟,成固体培养基;
(4)、将丝状藻浆接种于固体培养基中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,培养8-20天;
(5)、然后将步骤(4)获得的培养物再接种在培养液中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,经10-15天培养,藻丝便可形成微球体即成藻种;
(6)、将步骤(5)制备的藻种中的原培养液去掉,更换成新鲜的培养液,在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中,通气培养, 制备大规格藻种。
2.根据权利要求1所述的一种葛仙米藻种的制备方法,其特征在于,该方法按下列步骤顺序进行:
(1)、将葛仙米球形群体用水洗净,置于70%-95%乙醇溶液浸泡10-40秒,去杂藻,然后在无菌水或培养液中清洗1-3次;
(2)、将葛仙米球形群体放入匀浆器中,加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液,匀浆,成丝状藻浆;
(3)、培养液的配方为:
磷酸氢二钾20-60mg/L、
硫酸镁40-80mg/L、
氯化钙20-40mg/L、
柠檬酸4-8mg/L、
柠檬酸铁铵5-9mg/L、
乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、
碳酸钠5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、
余者为水;
其中微量元素为每1000毫升含:
硼酸1.5-3g、
氯化锰1-2g、
硫酸锌0.1-0.25g、
镍酸钠0.2-0.4g、
硫酸铜0.02-0.1g、
硝酸钴0.03-0.05g、
余者为水;
(4)、将步骤(2)获得的丝状藻浆接种在培养液中,培养条件为18-33℃,光照强度为10-200μE·m-2·s-1,经15-25天培养,藻丝便可形成微球体即成藻种;
(5)、将步骤(4)制备的藻种中的原培养液去掉,更换成新鲜的培养液,在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中,通气培养, 制备大规格藻种。
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