CN100378455C - 农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法 - Google Patents
农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100378455C CN100378455C CNB2005100300280A CN200510030028A CN100378455C CN 100378455 C CN100378455 C CN 100378455C CN B2005100300280 A CNB2005100300280 A CN B2005100300280A CN 200510030028 A CN200510030028 A CN 200510030028A CN 100378455 C CN100378455 C CN 100378455C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acetonitrile
- avermectin
- sample
- toxic metabolite
- add
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法，以乙腈为提取剂，将残留在果蔬类农产品中的阿维菌素提取出来，并利用盐析作用使用有机相和水相分离，阿维菌素进入有机相，省略净化过程，直接将提取的阿维菌素在无水状态下用三氟乙酸酐(TFAA)-N-甲基咪唑(NMIM)-乙腈(ACN)法进行柱前荧光衍生化，在此过程中，阿维菌素反应生带有衍光基团的衍生物，最后样品在高效液相色谱-荧光检测器进行阿维菌素残留分析。本发明方法具有操作简便、快速、检测成本低、检测结果准确等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种农药残留的测定方法，尤其涉及农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法。
背景技术
由于杀虫活性强以及杀虫谱广的特点，阿维菌素作为甲胺磷、马拉硫磷等高毒有机磷类农药的替代品在全国各地农业生产上得到广泛地应用。虽然阿维菌素是属于微生物源农药，但它对大鼠的致死中量值为10mg·kg-1，与对硫磷的致死中量值(3.5-12.5mg·kg-1)相仿，属高毒农药。另外，阿维菌素对哺乳动物的繁殖生育能力具有潜在毒性作用[3]，有研究发现]，进食剂量为1.19～2.13mg/只/天的水后，雄性老鼠的输精管有明显的结合组织累积，并伴随有明显的血管出血，血清中的睾丸素含量水量显著下降，生殖实验也证明这些雄性老鼠的生育生殖能力显著下降，并且配偶发生死胎的机率明显提高。因此，人们对阿维菌素的最高残留限量(MRL值)标准要求非常严格，其中农业部规定它的MRL值在柑桔中为20μg·kg-1，叶菜为50μg·kg-1 [1]；欧盟详细规定了它在多种农产品中的MRL值，在果蔬产品、谷物等农产品MRL值多为10μg·kg-1；韩国规定它的MRL值在苹果中为20μg·kg-1，芹菜为50μg·kg-1；以色列规定的MRL值在黄瓜、茄子、桃子、草莓等果蔬农产品中为10μg·kg-1；澳大利亚规定的MRL值在苹果、梨、番茄等产品上为10μg·kg-1]。
阿维菌素分子量大，极难气化，而且尚无可行的GC衍生化方法，无法采用GC进行分析，目前阿维菌素及其有毒代谢物的残留检测研究大多数以HPLC为手段来进行。阿维菌素分子结构中具有共轭二烯结构，能在245nm处有强的紫外吸收，但紫外检测的灵敏度太低，无法满足目前农产品阿维菌素及其有毒代谢物的残留分析要求；荧光检测器(FD)由于其良好的检测灵敏度和选择性，成为目前阿维菌素及其代谢物的残留分析主要手段。尽管在果蔬等农产品生产上使用越来越多，但目前阿维菌素及其有毒代谢物的残留分析报道多见于畜产品上的残留分析，而关于果蔬产品上的残留分析报道较少，并且所报道的方法中样品前处理多为繁琐。专利检索发现，相关于阿维菌素的专利大多集中在产品开发应用及其衍生产品开发应用上，关于阿维菌素在果蔬类农产品上残留检测方法的专利尚未检索到。
发明内容
针对已有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速高效液相-荧光检测方法，该方法操作简单、成本低、快速、准确。
实现本发明发明目的的技术方案如下：
一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法，其步骤如下：
A、样品制备：采集果蔬样品先用刀具切碎，再用组织捣碎机匀浆，并冷冻保存；
B、样品前处理：取样品匀浆液置于容器中，加入乙腈，混合均匀后过滤，滤液收集到装有氯化钠的具塞量筒中，剧烈震荡后静止，使乙腈相和水相分层，然后将乙腈相中溶液移至试管并吹干，向试管中加入无水乙腈使附着在试管壁的阿维菌素溶解于乙腈溶液中。
C、柱前衍生化：在避光、室温条件下，在乙腈溶解的待衍生化样品中，先加入N-甲基咪唑∶乙腈(体积比3∶7～5∶5)组成的衍生试剂，再加入三氟乙酸酐∶乙腈(体积比3∶7～5∶5)组成的衍生试剂，振荡摇匀反应30-35min后，再加入甲醇摇匀反应60-70min，反应液过滤后进入高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FD)测定。
所述B步骤中样品匀浆液与乙腈的比例范围为1/2.5～1/3(体积比)。
所述C步骤中各组分的体积比为：乙腈溶解的待衍生化样品∶N-甲基咪唑∶乙腈(体积比3∶7～5∶5)组成的衍生试剂∶三氟乙酸酐∶乙腈(体积比3∶7～5∶5)组成的衍生试剂∶甲醇＝1∶0.5∶0.5∶1～1∶0.5∶0.5∶2。
所述B步骤中乙腈相样品提取溶液放在氮吹仪上吹干。
本发明以乙腈为提取剂，将残留在果蔬类农产品中的阿维菌素提取出来，并利用盐析作用使用有机相和水相分离，阿维菌素进入有机相，省略净化过程，直接将提取的阿维菌素在无水状态下用三氟乙酸酐(TFAA)-N-甲基咪唑(NMIM)-乙腈(ACN)法进行柱前荧光衍生化，在此过程中，阿维菌素反应生带有衍光基团的衍生物，最后样品在高效液相色谱-荧光检测器进行阿维菌素残留分析。
本发明方法具有如下优点：
1、本发明方法用乙腈对样品提取后直接进行柱前衍生化，省略了SPE柱净化的过程，该前处理方法操作更为简便、省时，同时节省了分析试剂和SPE柱的使用，极大降低了检测成本。
2、本发明方法能除了检测阿维菌素自身外，还能检测其有毒代谢物8，9-Z-B1(见图1)，8，9-Z-B1是阿维菌素B1光异构化产物，它经过NMIM-TFAA-CAN法荧光衍生反应后所得的产物与B1a的衍生产物是同一物质。
3、本发明方法的检测限低于现有的最大残留限量值一个数量级以上，准确度和精密度符合残留检测要求。
4、本发明方法在衍生反应完成后，再加入一定量甲醇并放置一定时间，使阿维菌素的酯式结构衍生产物全部转换为稳定的醇式结构，在数据处理时只需对醇式结构产物的峰值进行积分就能准确测定阿维菌素残留量，避免以前技术方法只对酯式结构产物积分而遗漏了醇式结构产物的问题，从而本发明方法更加有利于准确测定阿维菌素残留量。
说明书附图
图1为阿维菌素标样的液相色谱(HPLC-FD)图；
图2为空白对照甘蓝的液相色谱(HPLC-FD)图；
图3为添加阿维菌素标样的甘蓝样品液相色谱(HPLC-FD)图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例进一步说明本发明是如何实现的：
实施例1
1样品前处理
1.1样品制备：采集样品约200g，先用刀具切碎，再用组织捣碎机匀浆，放在-20℃冰箱中保存。
1.2样品前处理：准确称取样品匀浆液20g置于250mL平底玻璃瓶中，加入50mL乙腈，样品在14000r·min-1高速匀质器匀质2min后，用滤纸过滤，滤液收集到装有5g～7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液，盖上塞子，剧烈震荡2min，在室温下静止30min，使乙腈相和水相分层。从乙腈相中吸取10mL溶液转移至10mL刻度试管，将装有样品液的试管放在氮吹仪上吹近干，试管中加入0.5mL无水乙腈，然后在超声波清洗机上超声1min，使附着在试管壁的阿维菌素能完全溶解于乙腈溶液，待衍生化。
2柱前衍生化
衍生试剂A：N-甲基咪唑(NMIM)及乙腈(二者体积比3∶7)，现配现用；
衍生试剂B：三氟乙酸酐(TFAA)及乙腈(二者体积比3∶7)，现配现用；
具体操作步骤：在避光、室温环境条件下，在装有0.5mL乙腈溶解的待衍生化样品或标样的试管中，先后分别加入0.25mL衍生试剂A和0.25mL衍生试剂B，立即盖上试管塞振荡摇匀，反应30min后，试管中再加入1mL甲醇摇匀，再反应1h后，反应液过0.45μm滤膜后进行HPLC-FD测定。
3色谱条件
色谱柱：Waters-C18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：水∶乙腈＝5∶95，流速为1.0mL·min-1；检测波长：荧光激发波长365nm，发射波长475nm；柱温：40℃；进样量：10μl；定量方法：外标法(峰面积)。
实施例2
1样品前处理
1.1样品制备：采集样品约200g，先用刀具切碎，再用组织捣碎机匀浆，放在-20℃冰箱中保存。
1.2样品前处理：准确称取样品匀浆液25g置于250mL平底玻璃瓶中，加入60mL乙腈，样品在14000r·min-1高速匀质器匀质2min后，用滤纸过滤，滤液收集到装有5g～7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液，盖上塞子，剧烈震荡2min，在室温下静止35min，使乙腈相和水相分层。从乙腈相中吸取10mL溶液转移至10mL刻度试管，将装有样品液的试管放在氮吹仪上吹近干，试管中加入0.5mL无水乙腈，然后在超声波清洗机上超声1min，使附着在试管壁的阿维菌素能完全溶解于乙腈溶液，待衍生化。
2柱前衍生化
衍生试剂A：衍生试剂A：N-甲基咪唑(NMIM)及乙腈(二者体积比5∶5)，现配现用；
衍生试剂B：三氟乙酸酐(TFAA)及乙腈(二者体积比5∶5)，现配现用；
具体操作步骤：在避光、室温环境条件下，在装有0.5mL乙腈溶解的待衍生化样品或标样的试管中，先后分别加入0.25mL衍生试剂A和0.25mL衍生试剂B，立即盖上试管塞振荡摇匀，反应35min后，试管中再加入0.5mL甲醇摇匀，再反应70min后，反应液过0.45μm滤膜后进行HPLC-FD测定。
3色谱条件
色谱柱：Waters-C18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：水∶乙腈＝5∶95，流速为1.0mL·min-1；检测波长：荧光激发波长365nm，发射波长475nm；柱温：40℃；进样量：10μl；定量方法：外标法(峰面积)。
用本发明方法分别对甘蓝、黄瓜、西兰花、葱、菠菜、草莓、梨、苹果这8种果蔬产品在0.001mg·kg-1、0.01mg·kg-1、0.1mg·kg-1三个不同浓度水平进行了添加回收实验，结果表明，经过本前处理后的这8个样品色谱图都没有出现明显的杂质峰(如图1-图3所示)，这些样品的添加回收率范围在83.1％～110.8％(如表1所示)，完全达到了残留分析的要求。
表1 阿维菌素在果蔬产品中的添加回收率(n＝4)
| 果蔬产品名称Vegetable | 添加浓度(mg·kg<sup>-1</sup>)Fortified level | 平均回收率(％)Recovery | 相对标准偏差(％) |
| 甘蓝cabbage | 0.0010.010.1 | 106.3102.584.5 | 10.16.78.6 |
| 黄瓜、cucumber | 0.0010.010.1 | 97.592.383.1 | 9.08.912.8 |
| 西兰花cauliflower | 0.0010.010.1 | 86.9107.895.5 | 12.87.77.9 |
| 葱shallot | 0.0010.010.1 | 90.786.484.6 | 12.38.16.7 |
| 菠菜spinach | 0.0010.010.1 | 89.693.8104.8 | 9.38.78.9 |
| 草莓strawberry | 0.0010.010.1 | 86.894.791.8 | 9.51.93.5 |
| 梨pear | 0.0010.010.1 | 87.793.6110.8 | 8.26.65.5 |
| 苹果apple | 0.0010.010.1 | 84.2102.691.2 | 7.39.43.7 |
方法的线性范围、检出限和最低检测浓度：
在最佳实验条件下，本实验方法线性范围上限可达1.0×104μg·L-1，以4倍信噪比(S/N＝3)作为方法的检测下限，阿维菌素的检测下限为0.5μg·L-1，其线性系数达0.999以上；该方法的最低检测浓度能达到1μg·kg-1，低于最低的MRL值(10μg·kg-1)一个数量级，完全符合阿维菌素残留分析要求。
实验方法的精密度：
添加回收实验结果可见，实验中8种样品在三个不同浓度水平下的平行样品的相对标准偏差范围在1.9％～12.3％，符合阿维菌素残留分析要求。
Claims (4)
1.一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法，包括样品制备、样品前处理及液相色谱-荧光检测器测定，其中，A、样品制备中采集果蔬样品先用刀具切碎，再用组织捣碎机匀浆，并冷冻保存，其特征在于：
样品前处理：取样品匀浆液置于容器中，加入乙腈，混合均匀后过滤，滤液收集到装有氯化钠的具塞量筒中，剧烈震荡后静止，使乙腈相和水相分层，然后将乙腈相中溶液移至试管并吹干，向试管中加入无水乙腈使附着在试管壁的阿维菌素溶解于乙腈溶液中；
液相色谱-荧光检测器测定包括：样品柱前衍生化处理：在避光、室温条件下，在乙腈溶解的待衍生化样品中，先加入N-甲基咪唑与乙腈组成的衍生试剂，再加入三氟乙酸酐与乙腈组成的衍生试剂，振荡摇匀反应30-35min后，再加入甲醇摇匀反应60-70min，反应液过滤；反应液过滤后进入高效液相色谱-荧光检测器测定。
2.根据权利要求1所述的一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法，其特征在于：所述B步骤中样品匀浆液与乙腈的体积比为1∶2.5～1∶3。
3.根据权利要求1所述的一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法，其特征在于：所述C步骤中N-甲基咪唑与乙腈的体积经为3∶7～5∶5，三氟乙酸酐与乙腈的体积经为3∶7～5∶5。
4.根据权利要求1或3任意一项权利要求所述的一种农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法，其特征在于：所述C步骤中各组分的体积比为：乙腈溶解的待衍生化样品：N-甲基咪唑与乙腈组成的衍生试剂：三氟乙酸酐与乙腈组成的衍生试剂：甲醇＝1∶0.5∶0.5∶1～1∶0.5∶0.5∶2。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100300280A CN100378455C (zh) | 2005-09-27 | 2005-09-27 | 农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100300280A CN100378455C (zh) | 2005-09-27 | 2005-09-27 | 农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1766604A CN1766604A (zh) | 2006-05-03 |
| CN100378455C true CN100378455C (zh) | 2008-04-02 |
Family
ID=36742611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2005100300280A Expired - Fee Related CN100378455C (zh) | 2005-09-27 | 2005-09-27 | 农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100378455C (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101893570B (zh) * | 2010-03-24 | 2015-04-22 | 上海市农业技术推广服务中心 | 谷物类农产品中阿维菌素类农药多残留检测方法 |
| CN103543224B (zh) * | 2013-11-06 | 2014-08-13 | 吉林省水产科学研究院 | 一种阿维菌素和伊维菌素残留的检测方法 |
| CN106226444A (zh) * | 2016-10-14 | 2016-12-14 | 佛山海悦智达科技有限公司 | 一种食用植物油中阿维菌素含量的高效液相色谱检测方法 |
| CN106885853B (zh) * | 2017-02-14 | 2019-04-09 | 湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法及定量分析方法 |
| CN113030296B (zh) * | 2021-02-09 | 2023-03-21 | 上海市食品药品检验研究院 | 一种筛查金银花及其栽种土壤中阿维菌素及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐降解产物的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1281900A (zh) * | 2000-07-25 | 2001-01-31 | 高东卫 | 阿维菌素提取方法 |
| JP2002311010A (ja) * | 2001-04-11 | 2002-10-23 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | ジヒドロアベルメクチンの定量方法 |
-
2005
- 2005-09-27 CN CNB2005100300280A patent/CN100378455C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1281900A (zh) * | 2000-07-25 | 2001-01-31 | 高东卫 | 阿维菌素提取方法 |
| JP2002311010A (ja) * | 2001-04-11 | 2002-10-23 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | ジヒドロアベルメクチンの定量方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 兔组织中阿维菌素残留的高效液相色谱法测定研究. 莫云等.畜牧兽医学报，第30卷第5期. 1999 * |
| 绵羊血浆阿维菌素荧光高效液相色谱检测法的建立. 潘保良等.中国兽医科技，第32卷第11期. 2002 * |
| 阿维菌素在蚯蚓体内的残留检测研究，2004，37（10）. 孙英健等.中国农业科学，第33卷第10期. 2004 * |
| 高效液相色谱法测定蔬菜与水果中阿维菌素残留量. 梁振益等.现代农药，第4卷第4期. 2005 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1766604A (zh) | 2006-05-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Menezes Filho et al. | Development, validation and application of a methodology based on solid-phase micro extraction followed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (SPME/GC–MS) for the determination of pesticide residues in mangoes | |
| CN100378455C (zh) | 农药阿维菌素及其有毒代谢物残留的快速测定方法 | |
| CN102890130B (zh) | 一种烟草中阿维菌素残留量的检测方法 | |
| CN102735784A (zh) | 一种超高效液相色谱-串联四级杆质谱同时测定中药中100种农药残留的方法 | |
| CN104237414A (zh) | 液质联用仪同时检测柑橘中多种防腐保鲜剂残留的方法 | |
| CN104458948A (zh) | 一种秸秆酚酸类化合物的检测方法 | |
| CN101893570A (zh) | 谷物类农产品中阿维菌素类农药多残留检测方法 | |
| CN105372353A (zh) | 一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方法 | |
| Berrada et al. | Determination of urea pesticide residues in vegetable, soil, and water samples | |
| CN105974015B (zh) | 一种蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量测定的方法 | |
| CN106546683A (zh) | 一种lc‑ms/ms同时检测大米中肟菌酯和代谢物肟菌酸残留的方法 | |
| Ferreira et al. | Determination of pesticide residues in coconut tree trunks by modified QuEChERS method and ultra-high-performance liquid chromatography coupled to triple quadrupole tandem mass spectrometry | |
| CN101539547A (zh) | 一种环境中吡虫啉残留含量的检测方法 | |
| Singh et al. | Development and validation of an HPLC method for determination of spirotetramat and spirotetramat cis enol in various vegetables and soil | |
| Tapper et al. | Detection and measurement of the alkaloid peramine in endophyte-infected grasses | |
| CN103822994A (zh) | 一种食品中百草枯和敌草快残留量的测定方法 | |
| Didpinrum et al. | A cost-effective spectrophotometric method based on enzymatic analysis of jackfruit latex peroxidase for the determination of carbaryl and its metabolite 1-napthol residues in organic and chemical-free vegetables | |
| Niell et al. | Development of methods for multiresidue analysis of rice post-emergence herbicides in loam soil and their possible applications to soils of different composition | |
| CN106546675A (zh) | 一种茶叶中氯虫苯甲酰胺残留量的定量检测方法 | |
| CN104198642B (zh) | 一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法 | |
| CN101320023B (zh) | 一种矮壮素和缩节胺残留量的测定方法 | |
| Kaltsonoudis et al. | Analysis of carbendazim and thiabendazole in lemons by CE-DAD | |
| CN102788834B (zh) | 水果可溶性糖快速测定方法 | |
| CN102621254A (zh) | 一种干果蔬中啶虫脒检测的前处理方法 | |
| Duan | Study on analytical detection technology of pesticide residue in agricultural product food safety |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20080402 Termination date: 20091027 |